Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

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When paper is manufactured, deposits often form in the machines. These deposits are slimelike and can interfere with the papermaking process. The slimelike deposits are aggregates of micro-organisms, also known as biofilm. One single type of micro-organism can form a biofilm, but most biofilms consists of a mixture of several different kinds of micro-organisms and can form on about any conceivable surface. To control the aggregates of micro-organisms a slimecide is added, a so-called biocide. To examine what kind of bacteria that is included in the biofilm and also which bacteria that is killed or not killed by the biocide, Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism analysis (T-RFLP) can be used.   In this report we examine biocides impact on biofilm produced in the laboratory.The biocides were first tested for possible interference with the PCR-step of the T-RFLP analysis. None of the tested ten biocides inhibited the PCR process the biofilm was formed on metal plates when these were lowered in a beaker with white water. Three different beakers were set up, one with addition of a biocide with active component 4,5-DICHLORO-1,2-DITHIOLONE from the start, one with the addition of the same biocide after three days and one with no addition at all of biocide. Samples were taken from the beakers and analyzed with T-RFLP.   In this report, we show that biocides affect planktonic and biofilm micro-organisms differently. There are however some micro-organisms in the biofilm that does not get affected by the biocide.   The experimental in this report is a good way of investigate the influence that biocides have on planktonic and biofilm micro-organisms, but to get even greater result the experiment should be done over a longer period of time and repeatedly.

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It can be considered a disease of high complexity as to the nature of its etiology, different forms of classification, treatment and maintenance. The major bacteria found include Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, P. intermedia, C. rectus, E. corrodens, Fusobacterium. nucleatum, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, P. micros, Treponema and Eubacterium species. Antimicrobials, by the inhibition of pathogenic microorganisms growth, are a prophylactic and therapeutic alternative for multiple diseases, as well as Chronic Periodontitis. The high capacity of developing resistance to antibiotics has steadily increased and its control is still a major challenge. Nanotechnology provides a new platform for developing important metal properties in the form of nanoparticles (NPs) with promising applications as antimicrobial agents. Since the last decade, silver NPs (Ag-NP) have demonstrated antimicrobial properties against gram-negative bacteria and gram-positive bacteria. In this work, the NPs of Ag and zinc oxide decorated with silver (ZnO-Ag- NP) were synthesized and analyzed for: I the final quality of NPs by X-ray Diffraction (XRD) and Transmission Electron Microscopy MET); II by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), the antimicrobial potential on Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953) and Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), in vitro for a period of 24 to 96 hours. The antimicrobial activity of Amoxicillin (AMX) and Metronidazole (MTZ) on the strains were evaluated in the same experimental conditions. DRX confirmed the synthesis of Ag-NPs in the face-centered cubic crystallographic phase and ZnO-Ag-NP in the Wurtzite hexagonal phase. MET images showed aspherical shape with an average size of about 2 nm (Ag-NP) and 8 nm (ZnO-Ag-NP) indicating the efficiency of the synthesis method to obtain colloidal suspensions. The CIM for Ag-NP (in the range of 32.4 to 4.05 and> 150 to 37.5 μg / mL) and ZnO-Ag-NP (> 150 to 37.5 and 150 μg / mL) F. nucleatum and P. gingivalis, respectively, point to the concentration-time dependent activity; with higher Ag-NP antimicrobial activity for the same exposure times, 24, 48, 72 and 96 hours. Comparatively, greater sensitivity of F. nucleatum than P. gingivalis to NPs is clearly observed. AMX (0.047 to 0.023 μg / mL) and MTZ (5.0 to 0.625 μg / mL) presented lower MIC values than NPs under microdilution test conditions under anaerobic conditions. The development of new drugs or nanomaterials is promising in the face of the propagation of bacterial resistance, since they have a low propensity to induce microbial resistance when compared to conventional antibiotics. / A Doença Periodontal é uma doença inflamatória localizada e bastante comum, causada por infecção bacteriana associada ao biofilme dental e à diversas condições patológicas, como a inflamação da gengiva, degeneração do ligamento periodontal, cemento radicular e a perda de osso alveolar, caracterizando às periodontites. A Periodontite Crônica é uma das manifestações da Doença Periodontal, destaca-se pela alta prevalência e incidência em todo o mundo, afetando a qualidade de vida dessas pessoas. Pode-se considerar uma doença de elevada complexidade quanto à natureza da sua etiologia, formas de classificação, tratamento e à sua manutenção. As principais bactérias encontradas incluem Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, P. intermedia, C. rectus, E. corrodens, Fusobacterium nucleatum, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, P.micros e espécies de Treponema e Eubacterium. Os antimicrobianos, por inibirem o crescimento de microrganismos patogênicos, são uma alternativa profilática e terapêutica de múltiplas doenças, assim como da Periodontite Crônica. A alta capacidade de desenvolvimento de resistência contra antibióticos tem aumentado continuamente e seu controle é ainda um grande desafio. A nanotecnologia fornece uma nova plataforma de desenvolvimento das propriedades importantes do metal sob a forma de nanopartículas (NPs) com aplicações promissoras como agentes antimicrobianos. Desde a última década, as NPs de prata (Ag-NP) têm demonstrado propriedades antimicrobianas contra as bactérias gram-negativas e bactérias gram-positivas. Neste trabalho, as NPs, de Ag e de óxido de zinco decoradas com prata (ZnO-Ag-NP), foram sintetizadas e analisadas quanto: I a qualidade final das NPs por Difração de Raios X (DRX) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET); II através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), o potencial antimicrobiano sobre sobre Fusobacterium nucleatum (ATCC 10953) e Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), in vitro pelo período de 24 à 96h. Comparativamente foi avaliada a atividade antimicrobiana de Amoxicilina (AMX) e Metronidazole (MTZ) sobre as cepas nas mesmas condições experimentais. A DRX confirmou a síntese de Ag-NPs na fase cristalográfica cúbica de face centrada e de ZnO-Ag-NP na fase hexagonal do tipo Wurtzita. As imagens de MET revelaram formato esférico com tamanho médio de cerca de 2 nm (Ag-NP) e 8 nm (ZnO-Ag-NP) apontando a eficiência do método de síntese para a obtenção de suspensões coloidais. A CIM para as Ag-NP (na faixa de 32,4 a 4,05 e >150 a 37,5 μg/mL ) e de ZnO-Ag-NP (>150 a 37,5 e 150 μg/mL) sobre F. nucleatum e P. Gingivalis, respectivamente, apontam para a atividade tipo concentração-tempo dependente; com maior atividade antimicrobiana de Ag-NP para os mesmos tempos de exposição, 24, 48, 72 e 96h. Comparativamente, observa-se com clareza maior sensibilidade de F. nucleatum do que P. gingivalis às NPs. AMX (0,047 a 0,023 μg/mL) e MTZ (5,0 a 0,625 μg/mL) apresentaram valores de CIM menores do que as NPs, em condições de teste em microdiluição em condições anaeróbicas. O desenvolvimento de novos medicamentos ou nanomateriais é promissor diante a propagação da resistência bacteriana, por estes apresentarem baixa propensão de induzir resistência microbiana quando comparados aos antibióticos convencionais.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As sementes de Andira surinamensis (Bondt) Splitg. ex Amshoff, uma espÃcie pertencente à famÃlia Leguminosae, subfamÃlia Papilionoideae, tribo Dalbergieae, possuem uma lectina glicose/manose especÃfica, que aglutina eritrÃcitos de coelhos nativos ou tratados com enzimas proteolÃticas. A lectina de sementes de Andira surinamensis foi purificada atravÃs de cromatografia de afinidade em matriz de Sepharose-Manose seguida por cromatografia de troca iÃnica em matriz de DEAE-Sephacel. Esse procedimento resultou na lectina purificada, nomeada de ASL. O processo de purificaÃÃo da ASL foi monitorado pela atividade hemaglutinate especÃfica e SDS-PAGE, onde se observou que essa lectina à composta por seis bandas protÃicas, uma de maior peso molecular aparente de aproximadamente 20 kDa e outras cinco bandas de menor peso molecular aparente entre 15 e 12 kDa. A massa molecular intacta da lectina purificada foi determinada atravÃs da tÃcnica de espectrometria de massa com IonizaÃÃo por Eletrospray (ESI). A anÃlise do espectro de massa intacta mostrou a presenÃa de dois Ãons majoritÃrios de massa molecular de 12.220+ 2 e 13.258 + 2 Da. ASL tambÃm teve sua estrutura primÃria parcialmente sequenciada atravÃs de espectrometria de massa sequencial. Essa lectina à uma glicoproteÃna e demonstra elevada estabilidade, sendo capaz de manter sua atividade hemaglutinante em uma ampla faixa de pH e apÃs exposiÃÃo a temperaturas de atà 80 ÂC por 1hora. ApÃs diÃlise contra o agente quelante EDTA, ASL teve sua atividade hemaglutinante diminuÃda, porÃm recuperou sua atividade apÃs a adiÃÃo de metais, mostrando-se dependente de cÃtions metÃlicos divalentes. Foi avaliado tambÃm o efeito da ASL no crescimento planctÃnico bacteriano e na formaÃÃo de biofilmes e observou-se que ela interferiu no crescimento planctÃnico de duas diferentes cepas bacterianas gram-positivas (Streptococcus mitis e Streptococcus salivarius) e na formaÃÃo de biofilme por Staphylococcus aureus e Streptococcus salivarius. / Andira surinamensis (Bondt) Splitg. ex Amshoff seeds, a species belonging to the Leguminosae family, Papilionoideae subfamily, Dalbergieae tribe, have a glucose/mannose specific lectin rabbit erythrocytes that agglutinate native or treated with proteolytic enzymes. The lectin from Andira surinamensis seeds was purified by affinity chromatography on Mannose-Sepharose matrix followed by ion exchange chromatography on DEAE-Sephacel matrix. This procedure resulted in a purified lectin, named ASL. ASL purification process was monitored by specific hemagglutinating activity and SDS-PAGE, where it was observed that this lectin is composed of six protein bands, a higher molecular weight of approximately 20 kDa and five other bands of lower apparent molecular weight between 15 and 12 kDa.The intact molecular mass of the purified lectin was determined by mass spectrometry with electrospray ionization (ESI). The analysis of the intact mass spectrum showed the presence of two majority ions of molecular mass 12.220+ 2 and 13.258 + 2 Da. ASL also had its primary structure partially sequenced by mass spectrometry sequence. This lectin is a glycoprotein and shows high stability, being able to maintain their hemagglutinating activity in a wide pH range and after exposure to temperatures up to 80 ÂC for 1 hour. After dialysis against the chelating agent EDTA, ASL had its hemagglutinating activity decreased, but recovered its activity after the addition of metals, being dependent on divalent metal cations. We also evaluate the effect of ASL on planktonic bacterial growth and biofilm formation and found that it interfered with the growth of two different planktonic gram-positive bacterial strains (Streptococcus mitis and Streptococcus salivarius) and biofilm formation by Stafilococcus aureus e Streptococcus salivarius.

Este trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho de um reator anaeróbio de leito fluidificado na degradação da vinhaça de cana-de-açúcar, sob condições mesofílicas. Ensaios batelada foram realizados a diferentes concentrações, visando avaliar a degradação do substrato pela biomassa anaeróbia e obtenção de parâmetros cinéticos. Vinhaça diluída a valores de DQO de 1984 mg/L, 2827 mg/L, 3800 mg/L, 6354 mg/L, 7395 mg/L, 10705 mg/L e 15872 mg/L foi utilizada nos experimentos, mostrando reduções de 67% em 192 horas, 75% em 358 horas, 81% em 408 horas, 80% em 480, 72% em 504 horas, 76% em 840 horas e de 71% em 1080, para essas concentrações, respectivamente. A reação ocorrida nos reatores foi analisada como sendo de ordem zero, com valor médio da constante de reação de 10,4 mg/L.h. Testes com partículas de poliamida, poliestireno e nylon foram realizados, objetivando a escolha da melhor partícula em termos de formação e desenvolvimento de biofilme para posterior uso no reator. As três partículas mostraram-se favoráveis à adesão e colonização de microrganismos. O reator anaeróbio de leito fluidificado foi inoculado com lodo proveniente de reator UASB, que tratava água residuária de abatedouro de aves. O volume do reator era de 770 cm3, operando com tempo de detenção hidráulica de 24 h. A partícula utilizada como material suporte foi poliestireno. O tempo de operação do reator foi de 122 dias, sendo aplicada vinhaça diluída a valores de DQO que variaram de 1009 mg/L a 15874 mg/L e COVa de 1,0 Kg/m3.d a 15,9 Kg/m3.d, apresentando resultado de remoção de DQO médio de 51% a 70% e COVrv de 0,5 Kg/m3.d a 7,9 Kg/m3.d. Observações microscópicas em MEV, mostraram boa adesão microbiana nas partículas de poliestireno, em todas as fases do reator. / This work had as objective evaluates the efficiency of a anaerobic fluidized bed reactor for vinasse degradation under mesophilic conditions. Batch tests seeking to evaluate the degradation of the substratum for the anaerobic biomass and obtaining kinetic parameters were accomplished to different concentrations. Diluted vinasse to values of 1984 mg/L, 2827 mg/L, 3800 mg/L, 6354 mg/L, 7395 mg/L, 10705 mg/L and 15872 mg/L of COD was used in the experiments showing reductions of 67% in 192 hours, 75% in 358 hours, 81% in 408 hours, 80% in 480, 72% in 504 hours, 76% in 840 hours and of 71% in 1080, for those concentrations, respectively. The reaction happened in the batch reactors it was analyzed as being of order zero, with medium value of 10,4 mg/L.h for the constant of reaction. Tests with polyamide particles, polystyrene and nylon were accomplished, aiming at the choice of the best particle in formation terms and biofilme development for subsequent use in the reactor. The three particles were shown favorable to the adhesion and colonization of microorganisms. The fluidized bed reactor was inoculated with sludge from reactor UASB treating effluent frompoultry slaughterhouse. The volume of the reactor was of 770 cm3, operating with hydraulic detention time of 24 h. Polystyrene particles were used as material support. The reactor was operated for 122 days, being applied diluted vinasse to values of COD 1009 mg/L ranging to 15874 mg/L and organic loading rate (OLR) of 1,0 Kg/m3.d to 15,9 Kg/m3.d, presenting efficiency COD removal of 51% - 70% and OLR removal of 0,5 Kg/m3.d - 7,9 Kg/m3.d. Microscopic observations in MEV showed good microbial adhesion in the particles of polystyrene, in all the phases of the reactor.

O objetivo deste estudo foi avaliar se a variação da temperatura e pH do hipoclorito de sódio (NaOCl), incrementa sua capacidade antibacteriana e de dissolução. Foi avaliado também, se as nanopartículas de Quitosana (CNPs) inibem o crescimento bacteriano e removem a lama dentinária. Foram utilizados 260 blocos de dentina bovina infetados intra-oralmente. As soluções experimentais foram NaOCl a 1% e 2.5%, a temperatura ambiente e 37oC e acidificado a pH 5 e 7. Os tempos de exposição foram 5 e 20 min. Os espécimes foram analisados pré (controle) e pósirrigação. Após esta análise, as amostras foram incubadas em BHI por 24 horas e analisadas novamente quanto a reativação bacteriana. Estes procedimentos foram realizados em duplicado para poder determinar a porcentagem de limpeza dentinária. Para analisar o efeito quelante das CNPs sobre a dentina infetada in situ, as amostras receberam uma irrigação final com CNPs em solução e analisadas imediatamente ou infetadas intra-oralmente para avaliar o efeito antibacteriano. O NaOCl apresentou poder antibacteriano e foi capaz de dissolver significativamente o biofilme sem importar sua temperatura. O NaOCl em pHs ácidos apresentaram alto poder antibacteriano, contudo seu poder de dissolução decresceu. As CNPs foram capazes de significativamente remover a lama dentinária e interferir com o crescimento bacteriano sobre dentina. Portanto, a temperatura do NaOCl não é relevante quando é testada sobre biofilmes multi-espécies. O poder antibacteriano do NaOCl foi inversamente proporcional a seu pH, enquanto que a sua capacidade de dissolução foi diretamente proporcional. As CNPs podem ser uma alternativa para o uso de EDTA devido a suas propriedades quelantes e de interferir com a adesão inicial das bactérias sobre dentina. / The aim of this study was to evaluate if the variation of the sodium hypochlorite (NaOCl) temperature and pH increase its antibacterial and dissolution abilities. It was also evaluated if the chitosan nanoparticles (CNPs) inhibit the bacterial growth and remove smear layer. Two hundred-sixty bovine dentin blocks were infected intraorally. The experimental solutions were 1% and 2.5% NaOCl at room temperature and 37oC. the solution was acidified at pH 5 and 7. The exposure times were 5 and 20 min. The specimens were analyzed pre- (control) and postirrigation. After that, the samples were incubated in BHI and analyzed again to evaluate the bacterial recolonization. These procedures were performed in duplicate to access the percentage of dentinal cleaning. The samples were rinsed with a final irrigation of CNPs and analyzed immediately to determine the chelating effect, or infected intraorally to evaluate its antibacterial ability. NaOCl showed antibacterial power and was able to significantly dissolve the biofilm regardless its temperature. NaOCl at acid pHs showed great antibacterial properties, however its dissolution ability decreased. The CNPs were able to remove significantly the smear layer and interfere with the bacterial growth on dentin. Therefore, the NaOCl temperature is not relevant when the solution was tested on multi-specie biofilms. The antibacterial power of NaOCl was inversely proportional to its pH, while its dissolution capacity was directly proportional. CNPs could be an alternative instead of EDTA due to its chelating properties and ability to interfere with the earlier bacterial adhesion on dentin.

O processo de tratamento de esgoto por lodo ativado pode ser adaptado para o recebimento de maior carga orgânica ou para a remoção de nitrogênio por meio da introdução de suportes plásticos móveis, em um processo conhecido por IFAS Integrated Fixed-Film Activated Sludge. O objetivo do projeto é avaliar comparativamente os desempenhos dos sistemas de lodo ativado e IFAS na remoção de matéria orgânica e nitrogênio de esgoto doméstico, associados à variação da idade do lodo com referência na biomassa suspensa. O efeito da adição de suportes plásticos móveis em sistemas existentes de lodo ativado é avaliado como forma de subsidiar análises de viabilidade de emprego dessa solução para a ampliação e adaptação de estações de tratamento de esgotos domésticos. A pesquisa foi desenvolvida em escala piloto, mantendo dois sistemas em funcionamento em paralelo, um representando um sistema de lodo ativado com remoção de nitrogênio e outro idêntico, exceto para a introdução dos suportes plásticos móveis. Desta forma, foi possível atribuir a diferença nos resultados à presença de biomassa aderida. Foram utilizados elementos suporte com área superficial específica de 300 m²/m³ e fração de enchimento de 50%. Ambos os sistemas foram mantidos em operação estável e eficiente, considerando a remoção de matéria orgânica. No entanto, o sistema IFAS teve melhor desempenho na remoção de nitrogênio em todas as fases experimentais, confirmando as vantagens antecipadas. Os resultados foram verificados em termos de taxas de aplicação previstas para cada porção de biomassa, de acordo com as idades do lodo estudadas. / The activated sludge wastewater treatment process can be retrofitted to either receive larger organic loads or for nitrogen removal by introducing plastic media carriers, in a process known as IFAS Integrated Fixed-Film Activated Sludge. The project aims to comparatively assess the performances of activated sludge and IFAS systems in removing organic matter and nitrogen from domestic sewage, associated to the variation of the sludge age with reference to the suspended biomass. The effect of adding plastic media carriers on existing activated sludge systems is evaluated as a subsidy for prefeasibility analysis of using this solution for the upgrading and retrofitting of municipal wastewater treatment plants. The study was developed on a pilot scale, operating two systems in parallel, representing an activated sludge system with nitrogen removal and another identical system except for the introduction of plastic media carriers. Thus, it was possible to assign the difference in results to the presence of attached biomass. Carriers were used with 300 m²/m³ specific surface area and 50% filling fraction. Both systems were kept under stable and efficient operation considering the removal of organic matter. However, the IFAS system had better performance at removing nitrogen in all experimental phases, confirming the anticipated advantages. The results were verified in terms of application rates expected for each portion of biomass in accordance with the sludge ages studied.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A maioria dos micro-organismos encontra-se integrados em comunidades denominadas âbiofilmeâ. Dentre estes se destaca a Pseudomonas aeruginosa, um patÃgeno oportunista de vegetais, animais e humanos, frequentemente associado à infecÃÃes nosocomiais difÃceis de serem erradicadas devido à presenÃa de biofilme. Os antibiÃticos fluoroquinolonas, tais como a ciprofloxacina (CIP), sÃo utilizados contra esta bactÃria, entretanto, mecanismos de resistÃncia vem sendo desenvolvidos por este micro-organismo. Assim, novas formas de controle microbiano tÃm sido alvo de inÃmeras pesquisas a fim de substituir ou potencializar os mÃtodos convencionais. Para esse fim, peptÃdeos antimicrobianos (AMPs) obtidos de diversos seres vivos representam uma alternativa para o desenvolvimento de novas drogas. Formas sintÃticas anÃlogas ao AMP Hilina a1 (Hy-a1), isolado da espÃcie Hypsiboas albopunctatus, tem demonstrado excelente eficÃcia antimicrobiana, dentre os quais se destacam o peptÃdeo Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a influÃncia do peptÃdeo Lys-a1 na atividade antimicrobiana de CIP contra o micro-organismo patogÃnico Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM), a concentraÃÃo bactericida mÃnima (CBM) e a curva de morte foram determinadas para a CIP e a Lys-a1, separadamente. A influÃncia da Lys-a1 na atividade antimicrobiana da CIP foi verificada pela metodologia checkerboard com quantificaÃÃo da biomassa e do nÃmero de cÃlulas viÃveis do biofilme atravÃs da coloraÃÃo pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colÃnia (UFC), respectivamente. Os valores de CIM e CBM da Lys-a1 foi de 125 μg.mL-1, e para a CIP foi de 0,24 e 0,48 μg.mL-1, respectivamente. Os dados mostraram que tanto a CIP quanto a Lys-a1 sÃo potentes antimicrobianos contra P. aeruginosa, sendo capazes de inibir tanto o crescimento planctÃnico como o desenvolvimento do biofilme. A interaÃÃo das substÃncias foi interpretada pelo Ãndice de concentraÃÃo inibitÃria fracional (ICIF) e mostrou um efeito aditivo, estabelecendo uma diminuiÃÃo de 16 vezes da CIM e da CBM da CIP, quando combinada com a Lys-a1. Esta influÃncia foi observada tambÃm na cinÃtica de morte e na atividade antibiofilme. Em conclusÃo, o efeito aditivo entre a Lys-a1 e a CIP na atividade antimicrobiana sugere que o peptÃdeo tem potencial como um agente terapÃutico e adjuvante para o tratamento de doenÃas infecciosas causadas por P. aeruginosa, podendo habilitar o uso de concentraÃÃes menores do antibiÃtico. / Most microorganism lies embedded in communities called "biofilms". Among these stand out Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen of plants, animals and humans, frequently associated with nosocomial infections difficult to be eradicated due to the presence of biofilm. The fluoroquinolone antibiotics such as ciprofloxacin (CIP) against this bacterium are used, however, the mechanism of resistance has been developed for this microorganism. Thus, new forms of microbial control have been the subject of numerous studies in order to replace or enhance conventional methods. For this purpose, antimicrobial peptides (AMPs) obtained from various living beings represent an alternative to the development of new drugs. Synthetic forms analogous to Hylin a1 AMP (Hy-a1), isolated from species Hypsiboas albopunctatus, has shown excellent antimicrobial efficacy, among which stand out the peptide Lys-[Trp6]hy-a1 (Lys-a1). Thus, the aim of this work was to verify the influence of the peptide Lys-a1 in antimicrobial activity of CIP against pathogenic microorganism Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. Minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and the curve death were determined to CIP and Lys-a1 separately. The influence of Lys-a1 in the antimicrobial activity of the CIP has been verified by the checkerboard method to quantify the biomass and the number of viable cells in biofilms by crystal violet staining and counting of colony forming units (CFU), respectively. The MIC and MBC values of Lys-a1 was 125 μg.mL-1 and the CIP was 0.24 and 0.48 μg.mL-1, respectively. The data showed that both the CIP as Lys-a1 are potent antibiotics against P. aeruginosa is able to inhibit both the planktonic growth and biofilm development. The interaction of substances interpreted by the fractional inhibitory concentration index (FICI) and showed an additive effect, establishing a decrease of 16 times the MIC and MBC of the CIP, when combined with the Lys-a1. This effect was also observed in the kinetics of death and antibiofilm activity. In conclusion, the additive effect of the Lys-a1 and CIP in antimicrobial activity suggests that the peptide has potential as a therapeutic agent and an adjuvant for the treatment of infectious diseases caused by P. aeruginosa can enable the use of lower concentrations of the antibiotic.

Foram selecionados, aleatoriamente, 12 equipos em 7 clínicas da FOB/USP, dois foram preenchidos com água destilada (Ortodontia e Urgência), um com água de torneira (UBAs), em um o reservatório ficou seco por 30 dias (Odontopediatria) em outro por 60 dias (Pós-graduação), um equipo com a tecnologia B-Safe® (Multidisciplinar) e, em três, a limpeza com o detergente enzimático foi avaliado (Dentística). Amostras de 10 mL de água dos reservatórios e tubulações das canetas de alta rotação foram obtidas e diluições feitas até 10-4, semeadas nos meios de cultura R2A, Peptona Diluída - PD, Plate Count Agar - PCA e Sabouraund Dextrose Agar SDA. Alíquotas de 100 L das amostras foram semeadas nos meios de cultura R2A, PD, PCA e SDA pela técnica de esgotamento, alíquotas de 25 L foram semeadas (R2A, PD, PCA e SDA) pela técnica da gota e alíquotas de 100 L das amostras foram semeadas no meio PCA pela técnica de pour plate. As placas de R2A, PD, PCA foram incubadas por 72 horas a 24°C e as placas de SDA por 4 a 7 dias a 24°C. Foi feita a identificação bacteriana através do kit Bactray I, II ou III e a fúngica através do microcultivo. A média bacteriana obtida foi de 128.151 UFC/mL na Odontopediatria, 1.834.807 UFC/mL na Ortodontia, 60.422 UFC/mL na Pós-Graduação, 615,68 UFC/mL na UBAs, 899,64 UFC/mL na Urgência, 97.632 UFC/mL na Multidisciplinar e 417.619 UFC/mL na Dentística sem limpeza e 135.924 UFC/mL após a limpeza. A média dos fungos foram 205 UFC/mL na Odontopediatria, 702,50 UFC/mL na Ortodontia, 12,50 UFC/mL na Pós-Graduação, 41.475 UFC/mL UBAs, 117.500 UFC/mL Urgência, 4.469 UFC/mL na Multidisciplinar e 64.642 UFC/mL e de 23.627 UFC/mL, antes e após a limpeza na Dentística. A presença de micro-organismos foi detectada nos reservatórios e tubulações de água em todas as 7 clínicas; para quantificar as bactérias, o meio R2A seguido do PD foram melhores que o PCA e, para detectar diferentes espécies o meio PCA foi superior ao R2A e PD; a técnica da gota foi melhor do que a de esgotamento e pour plate para as bactérias, enquanto a de esgotamento foi superior para os fungos. O detergente enzimático foi eficaz em desestruturar o biofilme, atuando mais sobre os fungos do que para as bactérias, que não foram eliminadas após as limpezas. Foram identificadas 22 espécies de bactérias: Acinetobacter baumanni/calcoaceticus, Aeromonas hydrophila, Alcaligenes xylosoxidans denitrificans, Brevundimonas vesicularis, Burkholderia cepacia, Burkholderia pseudomallei, Chromobacterium violaceum, Hafnia alvei, Hafnia alvei (Biogrupo 1), Ochrobactrum anthropi, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas alcaligenes, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas luteola, Pseudomonas oryzihabitans, Pseudomonas pseudoalcaligenes, Pseudomonas putida, Pseudomonas stutzeri, Serratia liquefaciens, Serratia plymuthica, Sphingobacterium multivorum, Tatumella ptyseos. Foram identificados 12 gêneros de fungos: Acremonium sp, Alternaria sp, Aspergillus sp, Cladosporium sp, Curvularia sp, Exophiala sp, Fonsecaea sp, Fusarium sp, Paecylomices sp, Penicillium sp, Rhinocladiella sp, Verticillium sp. / Twelve dental units of 7 clinics of FOB/USP were randomly selected, two were filled with distilled water (Orthodontics and Urgency), one with tap water (UBAs), one reservoir was dry for 30 days (Odontopediatry) and another for 60 days (Postgraduate Clinic), one dental unit was filled with the B - Safe ® technology (Multidisciplinary Clinic). Three dental clinics were evaluated concerning the cleaning procedure with enzymatic detergent. Samples of 10 mL of water reservoirs and high-speed handpieces were collected and made up to 10-4 dilutions, plated on R2A media, Peptone Diluted culture - PD, Plate Count Agar - PCA and Sabouraund Dextrose Agar - SDA. Aliquots of 100 L of the samples were plated on R2A media, PD, PCA and SDA culture technique for spreading. Aliquots of 25 L were seeded (R2A, PD, PCA and SDA) in drops and aliquots of 100 L samples were seeded in PCA by the pour plate technique. R2A plates, PD, PCA were incubated for 72 hours at 24°C and SDA plates for 4 to 7 days at 24°C. Bacterial identification was performed using Bactray I, II or III kit and fungal identification by microculture. Bacterial average was 128.151 CFU/mL in Odontopediatry, 1.834.807 CFU/mL in Orthodontics, 60.422 CFU/mL in Postgraduate Clinic, 615.68 CFU/mL in UBAs, 899.64 CFU/mL in Urgency, 97.632 CFU/mL in Multidisciplinary Clinic and 417.619 CFU/mL in Dentistry without the cleaning procedure and 135.924 CFU/mL after it. The average of fungi was 205 CFU/mL in Odontopediatry, 702.50 CFU/mL in Orthodontics, 12.50 CFU/mL in Postgraduate Clinic, 41.475 CFU/mL in UBAs, 117.500 CFU/mL in Urgency, 4.469 CFU/mL in Multidisciplinary and 64.642 CFU/mL and 23.627 CFU/mL before and after cleaning procedure in Dentistry. The presence of micro - organisms occurred in reservoirs and waterlines in all of the 7 clinics evaluated. To quantify bacteria, R2A and PD medium provided more accurate results than PCA. To detect different species, PCA medium was better than R2A and PD. The drop technique was better than the spreading technique and pour plate for bacteria; however, the spreading technique provided better results for the yeasts. The enzymatic detergent was effective on disrupting the biofilm eliminating more yeasts than residual bacteria. Twenty-two species of bacteria were identified: Acinetobacter baumanni/calcoaceticus, Aeromonas hydrophila, Alcaligenes xylosoxidans denitrificans, Brevundimonas vesicularis, Burkholderia cepacia, Burkholderia pseudomallei, Chromobacterium violaceum, Hafnia alvei, Hafnia alvei (Biogroup 1), Ochrobactrum anthropi, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas alcaligenes, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas luteola, Pseudomonas oryzihabitans, Pseudomonas pseudoalcaligenes, Pseudomonas putida, Pseudomonas stutzeri, Serratia liquefaciens, Serratia plymuthica, Sphingobacterium multivorum, Tatumella ptyseos. Twelve genus of fungi were identified: Acremonium sp, Alternaria sp, Aspergillus sp, Cladosporium sp, Curvularia sp, Exophiala sp, Fonsecaea sp, Fusarium sp, Paecylomices sp, Penicillium sp, Rhinocladiella sp, Verticillium sp.