Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-10-09T14:46:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4569752 bytes, checksum: 7423d0749a49ab3a18033fe827e2181d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T14:46:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4569752 bytes, checksum: 7423d0749a49ab3a18033fe827e2181d (MD5) Previous issue date: 2017-07-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Em todas as aplicações, o teste de viabilidade e necessario para medir a taxa de protoplastos viáveis, possibiltando decidir os procedimentos de isolamento e purificação mais adequados e verificar se ha celulas suficientes para as etapas subsequentes. A microscopia de fluorescência geralmente é empregada para o teste de viabilidade. No entanto, alguns problemas têm sido apontados: longo tempo necessário para contar um número relativamente pequeno de protoplastos, aglomerados de células que impedem a observação dos protoplastos e percepção visual da fluorescência subjetiva ao observador. Este estudo teve como objetivo estabelecer procedimentos para teste de viabilidade adaptado para citometria de fluxo (FCM), MuseTM cell analyzer (Muse) e Ensaio cometa (CA). Para isso, Capsicum annuum foi escolhido devido a natureza morfogênica recalcitrante dos protoplastos. Após o isolamento e a purificação, as aplicações permitiram avaliar um grande número de protoplastos (FCM e MUSE) e núcleos dos protoplastos (CA) em um curto período de tempo. A partir das adaptações nos procedimentos, foram evidenciados diferentes tipos e níveis de danos citológicos (FCM e Muse) e genômicos (Muse e CA), possibilitando discriminar e mensurar os protoplastos viãveis. Considerando os resultados, este estudo introduz procedimentos quantitativos melhorados para o teste de viabilidade. Alem disso, visando a regeneração de plântulas, diferentes métodos podem ser aplicados para avaliar a viabilidade de protoplastos, definindo os procedimentos de isolamento e purificação mais adequados. Corraborando para este propósito, foram mostrados guias para FCM, Muse e CA visando a padronizaçao dos testes de viabilidade em protoplastos de plantas. / Plant protoplasts are valuable in biotechnology, enabling the plantlet regeneration until the gene function determination. In all applications, viability test is required to measure the rate of viable protoplasts, allowing to decide on the most adequate isolation and purification procedures and to verify whether there are sufficient cells for subsequent steps. Fluorescence microscopy is usually employed for viability test. However, some problems have been pointed out: long time required to count a relatively small number of protoplasts, cell clumps preventing their observation, and the subjective visual perception of the fluorescence by observer. This study aimed to establish procedures for viability test adapted for flow cytometry (FCM), MuseTM cell analyzer (Muse) and Comet Assay (CA). For this, Capsicum annuum was chosen due to recalcitrant morphogenic nature of its protoplasts. After isolation and purification, the applications allowed assessing large numbers of protoplasts (FCM and MUSE) and protoplasts nuclei (CA) in a short time period. From the adjusted procedures, different types and levels of cytological (FCM and Muse) and genomic damages (Muse and CA) were evidenced, allowing to discriminate and measure the viable protoplasts. Considering the results, this study introduces improved quantitative procedures for viability test. Besides of these and aiming the plantlet regeneration, different methods can be applied to assess the protoplast viability, defining the more adequate isolation and purification procedures. Contributing with this purpose, guides were showed for FCM, Muse and CA to standardization of viability tests in plant protoplasts

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-10-24T16:46:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3010478 bytes, checksum: c953b9a8602522d88d48e1e83ade32bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-24T16:46:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3010478 bytes, checksum: c953b9a8602522d88d48e1e83ade32bb (MD5) Previous issue date: 2017-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Melanoma é um câncer altamente agressivo e letal. Os tratamentos convencionais para esse câncer ainda são ineficazes e geram inúmeros efeitos colaterais. Portanto, tratamentos novos e mais específicos são necessários. As Serine Arginine Protein Kinases (SRPKs), que fazem parte da maquinaria de splicing da célula, têm expressão aumentada no melanona, o que é associado à agressividade desse tumor. SRPKs são interessantes alvos moleculares para compostos antitumorais. O composto SRVIC30 é um inibidor de SRPKs e já foram relatadas suas características antitumorais in vitro e em modelo de metástase pulmonar in vivo. Diante disso, o presente estudo avaliou o efeito da inibição de SRPKs em modelo de melanoma murino subcutâneo. O primeiro experimento buscou padronizar a concentração de células de melanoma murino B16-F10 a serem inoculadas pela via subcutânea em camundongos C57BL/6, a fim de utilizar esse modelo animal padronizado nos próximos experimentos. Células B16-F10 nas concentrações de 1x10 5 , 2x10 5 e 4x10 5 células foram inoculadas no dorso de camundongos, além de um grupo controle sem células inoculadas (n=13/grupo). Ensaios de sobrevivência animal e análise do volume tumoral, bem como análises biométricas e histológicas, permitiram concluir que a concentração de 2x10 5 células formou o tumor mais adequado para experimentos com compostos antitumorais. Posteriormente, estudos com a inibição de SRPKs foram prosseguidos. Vinte camundongos machos C57BL/6 foram inoculados com 2x10 5 células B16-F10. Após o estabelecimento do tumor, os animais foram divididos em quatro grupos experimentais (n=5/grupo). Os dois primeiros grupos foram tratados pela via tópica, onde o grupo controle recebeu 40 mg da pomada sem o SRVIC30, e o grupo tratado recebeu 40 mg da pomada acrescida do SRVIC30. Os dois últimos grupos foram tratados por via peritumoral, sendo o grupo controle o que recebeu 150 μl de DMSO 1% e o grupo tratado o que recebeu 150 μl de SRVIC30 diluído em DMSO 1%. O tratamento foi administrado cinco vezes por semana, no decorrer de 14 dias. Análises histológicas de tumor e fígado, assim como análises sorológicas, biométricas e imunomarcações foram feitas. Os resultados mostraram que, embora o SRVIC30 não tenha sido efetivo em reduzir o volume tumoral, houve aumento das áreas de morte celular nos tumores tratados com o SRVIC30, por ambas as vias de administração. Imunomarcações para peroxidase também foram feitas e animais tratados com SRVIC30, por via tópica, tiveram mais marcações para peroxidase que os animais do grupo controle. Além disso, houve presença de infiltrado inflamatório na pele dos animais tratados, indicando o possível recrutamento de células do sistema imune para combater o tumor localmente. Por fim, o composto não foi tóxico, na concentração e tempo testados. Assim, é possível concluir que a inibição farmacológica de SRPKs é capaz de influenciar processos cruciais da inibição tumoral como apoptose e recrutamento de células do sistema imune. / Melanoma is a highly aggressive and lethal cancer. Conventional treatments for this cancer are still ineffective and generate numerous side effects. Therefore, new and more specific treatments are needed. Serine Arginine Protein Kinases (SRPKs) that are part of the cell splicing machinery have increased expression in melanoma, which is associated with the aggressiveness of this tumor. SRPKs are interesting molecular targets for antitumor compounds. SRVIC30 is an inhibitor of SRPKs and its antitumor characteristics in vitro and in lung metastasis model in vivo have been reported. Therefore, the present study evaluated the effect of SRPKs inhibition in murine subcutaneous melanoma model. The first experiment sought to standardize a concentration of B16-F10 murine melanoma cells to be inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice, in order to use this standardized animal model in the next experiments. B16-F10 cells at concentrations of 1x10 5 , 2x10 5 and 4x10 5 cells were inoculated on the back of the mice, in addition to a control group without inoculated cells (n=13/group). Animal survival assays and tumor volume analysis, as well as biometric and histological analysis, led to the conclusion that a concentration of 2x10 5 cells formed the most suitable tumor for experiments with antitumor compounds. Subsequently, studies with the inhibition of SRPKs were pursued. Twenty male C57BL/6 mice were inoculated with 2x10 5 B16-F10 cells. After tumor establishment, the animals were divided into four experimental groups (n= 5/group). The first two groups were treated topically, where the control group received 40 mg of the ointment without SRVIC30 and the treated group received 40 mg of ointment with SRVIC30. The last two groups were treated by peritumoral route, being the control group the one that received 150 μl of DMSO 1% and the treated group the one that received 150 μl of SRVIC30 diluted in DMSO 1%. The treatment was administered five times a week, during 14 days. Histological analysis of tumor and liver, as well as serological, biometric and immunostaining analyses were performed. The results showed that although SRVIC30 was not effective reducing the tumor volume, there was an increase in cell death areas in animals treated with SRVIC30, by both routes of administration. Immunostaining for peroxidase was also made and animals treated with SRVIC30, by topical route, had more labelling for peroxidase than animals in control group. In addition, inflammatory infiltrate was present on the skin of treated animals, indicating the possible recruitment of immune system cells to fight the tumor locally. Finally, the compound was non-toxic at the concentration and time tested. Thus, it can be concluded that the pharmacological inhibition of SRPKs is able to influence the crucial processes of tumor inhibition such as apoptosis and recruitment of immune system cells.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:10:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327698.pdf: 3972802 bytes, checksum: 1da6e9808db92915061ccdf97179435c (MD5) Previous issue date: 2014 / Araucaria angustifolia é conhecida como pinheiro brasileiro. Faz parte da floresta ombrófila mista, e ocupou originalmente uma área coberta de 20 milhões de hectares no Brasil e atualmente restam apenas 2% da área inicial. Em função da exploração comercial, foi classificada como criticamente ameaçada pela União Internacional para a Conservação da Natureza (UICN) e aparece na Lista Oficial de Espécies Brasileiras Ameaçadas de Extinção. Para se estabelecer programas de recuperação das áreas degradadas, entre outras ações, seria necessário produzir mudas a partir de sementes de A. angustifólia. Mas as sementes perdem a viabilidade ao serem desidratadas, não sobrevivendo à conservação por longos períodos. Para se tentar resolver o problema da perda da viabilidade das sementes é necessário estabelecer tecnologias para a conservação da espécie, que utilizam conhecimentos básicos sobre o ciclo reprodutivo e a o desenvolvimento o embrião zigótico. No entanto, pouco se sabe sobre o desenvolvimento do embrião zigótico de araucária e sobre etapas que ocorrem entre a polinização e a formação da semente madura. Neste trabalho foram utilizadas análises morfológicas, ultraestruturais e histoquímicas para se conhecer a organização morfológica do desenvolvimento embrionário em A. angustifolia. O material vegetal para as análises foi obtido dos megaestróbilos coletados periodicamente a partir de plantas femininas selecionadas e dos microestróbilos, coletados aleatoriamente em uma propriedade rural na região de Curitibanos-SC. Os megaestróbilos foram mensalmente fotografados e das escamas férteis foram obtidos nucelos, megagametófitos, proembriões e embriões dominantes para retirada dos meristemas. Os grãos de pólen foram obtidos de microestróbilos. Os materiais vegetais foram processados para as técnicas de microscopias de luz, confocal e fluorescência, análises histoquímicas, além das microscopias eletrônicas de varredura e de transmissão. Observou-se que a polinização ocorreu em agosto e setembro e os grãos de pólen de A. angustifolia apresentaram superfície granulosa, parede espessa, com compostos de reserva como grãos de amido, vacúolos e núcleos. Nas escamas férteis coletadas a partir de janeiro do primeiro ano do ciclo reprodutivo, pode ser observada a formação de núcleos livres na região central dos nucelos em desenvolvimento, permanecendo esta formação até julho do primeiro ano do ciclo reprodutivo. Entre julho e setembro do mesmo ano, os núcleos livres dão lugar a células em arranjo elipsóide, evoluindo para a formação de um tecido protalial. A partir de setembro foram identificadas as primeiras arquegônias no tecido16protalial, já no segundo ano do ciclo reprodutivo. Em novembro os proembriões estavam formados, concluindo-se que a fertilização ocorreu em outubro. Como ocorre em outras coníferas, nos proembriões de A. angustifolia são identificados três tipos celulares: células da capa, embrionárias e do suspensor. Observou-se que as células da capa apresentaram núcleos compactados e muitos vacúolos no citoplasma. As células embrionárias apresentam formato poliédrico, núcleo grande, ativo e central, enquanto as células do suspensor apresentam formato alongado, raramente eram nucleadas e apresentaram grandes vacúolos. O embrião dominante foi identificado em fevereiro de 2012, no segundo ano do ciclo reprodutivo. Nos meristemas do embrião dominante de A. Angustifolia na fase cotiledonar, foi observado que as células exibem características pluripotentes, como mecanismos de comunicação intercelular e de diferenciação - parede celular fina e irregular com plasmodesmos. No interior das células, mitocôndrias, vacúolos, muitos corpos lipídicos, corpos de Golgi, muitos amiloplastos, retículo endoplasmático e grandes núcleos foram observados. Os resultados ampliam o conhecimento sobre o desenvolvimento reprodutivo de A. angustifolia, fornecendo informações científicas iniciais para o aprofundamento em estudos evolutivos, biotecnológicos, de melhoramento genético e programas de conservação da espécie.<br> / Abstract : Araucaria angustifolia is known as Brazilian pine. Part of the Araucaria forest, and originally occupied a covered area of 20 million hectares in Brazil and currently there are only 2 % of the initial area. Depending on the commercial exploitation has been classified as critically endangered by the International Union for Conservation of Nature (IUCN) and appears in the official list of Brazilian endangered species. To establish the recovery of degraded areas, among other actions, would be necessary to produce seedlings from seeds of A. angustifolia. But the seeds lose viability when they are dehydrated, not surviving the conservation for long periods. To solve the problem of the loss of seed viability is necessary to establish technologies for the conservation of the species , using basic knowledge about the reproductive cycle eao the zygotic embryo development. However, little is known about the development of zygotic embryos of Araucaria and on steps that occur between pollination and formation of the mature seed. In this work morphological, ultrastructural and immunohistochemical analyzes to know the morphological organization of embryonic development in A. angustifolia were used. The plant material for analysis was obtained from megastrobili collected periodically from selected female plants and microstrobili randomly collected from a farm in the region of Curitibanos - SC. The monthly megastrobili collected were photographed and from fertile scales nucellus, megagametophytes, proembryos and dominant embryos for withdrawal of meristems were obtained. The pollen grains were obtained from microstrobili. The plant materials were processed for light microscopy techniques, confocal and fluorescence histochemical analyzes, besides the electronic scanning microscopy and transmission. It was observed that pollination occurred from August to September and the pollen grains of A. angustifolia showed granular surface, thick-walled, with reserve compounds such as starch grains, vacuoles and nuclei. In the fertile scales collected from January of the first year of the reproductive cycle, the formation of free nuclei in the central region of the nucellus in development can be observed, remaining this training until July of the first year of the reproductive cycle. Between July and September of the same reproductive year, free nuclei give rise to cells ellipsoid arrangement, progressing to the formation of a protalial tissue. From September to October, the first arquegonia were identified, in the second year of the reproductive cycle in protalial tissue. In November the proembruos were already formed, concluding that fertilization occurred in October. Cap,18embryonic and suspensor cells: in coniferous proembryos these three cell types are identified. It was observed that the cells of the compressed nuclei and cover have vacuoles in the cytoplasm. Embryonic cells have polyhedral shape, large, active and central nucleus, while cells of the hanger feature elongated, nucleated and were rarely showed large vacuoles. The dominant embryo was identified in February 2012, the second year of the reproductive cycle. Meristems of dominant A. angustifolia embryo on cotyledon stage was observed that cells exhibit pluripotent characteristics, such as intercellular communication mechanisms and differentiation - irregular and thin cell wall with plasmodesmata. Inside the cells, mitochondria, vacuoles, many lipid bodies, Golgi bodies, many amyloplasts, endoplasmic reticulum and large nuclei were observed. The results extend the knowledge on the reproductive development of A. angustifolia, providing early scientific information to deepen in, biotechnology, evolutionary studies of breeding programs and conservation of the species.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Educação, Programa de Pós-Graduação em Educação, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:30:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331119.pdf: 784763 bytes, checksum: e3412dd3aaf0b9df0f336110c109bd95 (MD5) Previous issue date: 2014 / Com a presente dissertação, busca-se compreender de que forma discussão e abordagens sobre o tema da morte podem auxiliar no processo de formação humana para a vida. Primeiramente, é realizada uma reflexão sobre a diferença entre os conceitos de educação e formação, entendendo as diferenças existentes entre eles. Como respaldo inicial à discussão do tema sugerido, são apresentadas as concepções de dois filósofos: Michael de Montaigne e Friedrich Nietzsche, que apesar de viverem em tempos distintos e imersos em culturas diferentes, apresentam algumas aproximações em suas bases filosóficas. Posteriormente, são colocados em debate alguns trabalhos realizados ao longo da construção da presente dissertação, entendendo esse caminho como fundamental para a construção do trabalho. O tema da morte é introduzido no segundo capítulo, realizando um paralelo entre suas concepções e seus cinco estágios apresentados por Elisabeth Kübler-Ross: negação, raiva, barganha, depressão e aceitação. É realizado, através de reflexões pautadas em Friedrich Nietzsche, uma argumentação de como a discussão sobre o tema proposto pode ser uma forma de reinterpretação das fases descritas pela autora. Finalmente, no terceiro capítulo, é traçada uma concepção do que seria a infância, como ela deve ser vista, compreendendo que existem três possibilidades de interpretar o tempo ? khrónos, kairós e aión ?, sendo que a forma de percebê-lo auxilia nas possibilidades de interpretação da vida. Apresenta-se a morte como uma possibilidade de olhar a vida com novos olhos, favorecendo, portanto, o constante trabalho de Formação Humana, transformando o processo do mistério da finitude, como objeto de aprendizagem e não apenas como elemento indigesto e assustador, tanto para o educando quanto para o educador.<br> / Abstract : With this dissertation is sought to understand in which way the discussion and approach about the topic of death may help on the human formation for the life. First, is performed a reflection about the concept difference between the education and human formation, understanding the differences that exist between those two terms. As a initial support for the suggested topic, is presented the conceptions of two philosophers: Michael de Montaigne and Friedrich Nietzsche, which despite of living in such different times and immersed in different cultures, have a few approximated philosophical bases. Subsequently, some works done during the construction of the present dissertation are placed in debate, understanding this path as fundamental for the work construction. The subject of death is introduced in the second chapter, performing a parallel between the conceptions about the 5 stages of death presented by Elisabeth Kübler-Ross: denial, anger, bargaining, depression and acceptance. It is accomplished through reflections guided by Friedrich Nietzsche an argument of how the discussion on the theme can be a way of reinterpreting the phases described by the authoress. Finally, in the third chapter, is drawn a conception of what would be childhood, as it should be seen, by realizing that there are three possibilities to interpret the time ? khrónos, kairós and aión ? considering that the way we perceive time helps with the possibilities of interpretation of life. Introduce the death as a possibility to look at life with new eyes, favoring, therefore, the constant work of Human Formation, transforming the process of the mystery of finiteness, as learning object and not just as stodgy and scary element, both for the student and for the educator.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:44:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328472.pdf: 1883071 bytes, checksum: 10befa75212352f0756af0baf84fa962 (MD5) Previous issue date: 2014 / Em riachos de pequenas ordens a energia do ecossistema aquático é obtida pelos processos de decomposição de detritos. As taxas de decomposição de detritos vegetais são influenciadas por fatores extrínsecos e fatores intrínsecos que agem simultaneamente e podem ter efeitos positivos ou negativos, acelerando ou retardando o processo de decomposição. O objetivo deste estudo foi testar se fatores intrínsecos (qualidade do detrito e perda de nutrientes ao longo do tempo) e fatores extrínsecos (variáveis ambientais e colonização de invertebrados aquáticos) influenciam o processo de decomposição dos detritos foliares em um riacho subtropical de terceira ordem. Através de dois experimentos realizados no verão e no inverno, no Riacho Cachoeira Grande, Florianópolis, SC, foram avaliadas as taxas de decomposição de três espécies vegetais e a colonização por invertebrados aquáticos atuando como aceleradora do processo de decomposição. Os resultados indicam que tanto a qualidade do detrito quanto os fatores ambientais foram importantes para o processo de decomposição de detritos foliares alóctones. As maiores taxas de decomposição ocorreram em folhas mais macias, com menores quantidades de polifenóis. Os detritos foram decompostos mais rapidamente no verão devido a maior abrasão física da água, maior precipitação, maior temperatura e maior densidade de invertebrados. As características associadas à defesa das plantas como menor quantidade de compostos secundários e dureza pareceram mais importantes à fauna decompositora que propriamente a qualidade nutricional. As taxas de decomposição de todas as espécies vegetais foram relacionadas às variáveis ambientais. Isso comprova a importância da realização dos experimentos em diferentes momentos ao longo do ano, em que ocorrem variações nos parâmetros ambientais avaliados e que interferem nas taxas de decomposição e na colonização por invertebrados. Os resultados também possibilitaram inferir que as taxas de decomposição de detritos foliares incubados em conjunto com outros pareceram resultar das taxas de decomposição conjuntas de cada espécie vegetal e a diversidade e a comunidade de invertebrados aquáticos associados ao processo de decomposição foliar foi mais influenciada pelo tempo de exposição do detrito na água que a heterogeneidade dos recursos alimentares.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:10:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332938.pdf: 2859795 bytes, checksum: 523a3a9e18ae4c8eea7515a8ed33815a (MD5) Previous issue date: 2015 / A deficiência intelectual (DI) é caracterizada por limitações significativas no funcionamento intelectual e no comportamento adaptativo, origina-se antes dos 18 anos de idade e afeta cerca de 1 a 3% da população do Mundo e 1,37% da população brasileira. As causas etiológicas da DI são variadas e de difícil identificação, devido a sua heterogeneidade. Entre as causas genéticas, a variação no número de cópias (CNVs) de trechos do DNA no genoma vem sendo amplamente estudada em distúrbios do desenvolvimento, através da técnica de hibridização comparativa por arrays (CGH array). CNVs são comumente classificadas como benignas (CNVs comum), de significado clínico incerto (raras), potencialmente patogênicas (raras) e patogênicas (raras). O presente estudo teve como objetivo avaliar as CNVs encontradas em indivíduos com DI e distúrbios do desenvolvimento e interpretar a sua contribuição para o aparecimento do fenótipo. Foram analisados 109 resultados de exames de CGH array, realizados pelo Laboratório de Genética Humana Neurogene, em Santa Catarina, com as informações clínicas e fenotípicas fornecidas através do preenchimento de questionários pelos médicos responsáveis pela solicitação dos exames. Houve uma prevalência de dois terços do sexo masculino na população estudada, sendo que os principais fenótipos que levaram a solicitação da investigação foram ADNPM, dismorfias de cabeça e face e DI. Oesclarecimento diagnóstico foi maior para DI severa, DI leve e hiperatividade associada a outros distúrbios. Os indivíduos testados apresentaram um total de 276 CNVs (187 microduplicações e 89 microdeleções); 81,2% benignas, 7,2% de significado incerto, 9,4% patogênicas e 2,2% potencialmente patogênicas. Os cromossomos 18, 19 e 21 apresentaram o menor número de CNVs. Não foi encontrada nenhuma CNV rara nos cromossomos 5, 10, 12, 19, 21 e Y. Seis casos potencialmente patogênicos foram descritos em mais detalhe, um desses casos representa uma deleção em 3 p13-p14.1 de 1.9MB, que confirma que a haploinsuficiência do gene MITF é suficiente para causar surdez congênita. Este estudo vem destacar a importância do CGH array para o diagnóstico de distúrbios do desenvolvimento inclusive para que seja inserido nos programas de saúde pública como um primeiro teste diagnóstico a ser ofertado pelo SUS.<br> / Abstract : Intellectual disability (ID) is characterized by significant limitations in intellectual functioning and in adaptive behavior. It originates before the age of 18, and affects about 1-3% of the world population and about 1.37% of the Brazilian population (CENSO 2010). ID has different levels of severity: mild, moderate, severe or profound, depending on the degree of intellectual impairment combined with adaptive behaviour. The etiological causes of ID are varied and difficult to identify due to clinical and genetic heterogeneity. Among the genetic causes, copy number variation (CNV) of DNA stretches in the genome has been widely studied in developmental disorders. CNVs are commonly classified as benign (common CNVs), of uncertain clinical significance (rare), potentially pathogenic (rare), and pathogenic (rare). This study aims to evaluate the CNVs found in patients with ID and developmental disorders and classify them according to their contribution to the appearance of the phenotype. We analyzed 109 results for CGH array investigation to obtain the phenotype of each individual. We observed: (1) a higher prevalence of males in the population studied, (2) that the major phenotypes observed were developmental delay, dysmorphic face and head and ID, and (3) the higher diagnostic rates were obtained for individuals with severe ID, mild ID, and hyperactivity. An overall of 276 CNVs (187 microduplications and 89 microdeletions) were observed. Ofthese changes 81.2% were benign, 7.2% of uncertain significance, 2.2% potentially pathogenic and 9.4% pathogenic. Chromosomes 18, 19 and 21 had the lowest number of CNVs. Rare CNVs were not observed in chromosomes 5, 10, 12, 19, 21 and Y. Six cases of potentially pathogenic CNVS were studied in more detail, and in one of these cases a deletion of 1.9MB in 3p13-p14.1 was observed, confirming that the haploinsufficiency of the MITF gene is sufficient to cause congenital deafness. This study highlights the importance of the investigation of CNVs in the diagnosis of developmental disorders, underscoring the importance to include array CGH as first investigation for ID in the public health system (SUS).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-20T03:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334847.pdf: 1424472 bytes, checksum: d8774a2a6426a9f90a270a2cf7269e4c (MD5) Previous issue date: 2015 / O equilíbrio ecológico dos sistemas aquáticos depende da entrada de nutrientes disponibilizado pelos detritos vegetais alóctones que estão presentes na zona ripária circundante e que apresentam características nutricionais diferenciadas. Por isso, o presente estudo avaliou as mudanças temporais de C, N e P no aporte dos detritos foliares alóctones em uma mata ripária subtropical, correlacionando os resultados encontrados com os índices de precipitações e temperatura do ar. As hipóteses formuladas para este trabalho foram: (1) os dez táxons mais abundantes no local terão maior importância ecológica para o sistema aquático contribuindo nutricionalmente de forma mais representativa, entretanto, essa contribuição e importância podem se alterar temporalmente; (2) quanto menor a temperatura e maior o índice de precipitação, maiores serão as entradas de nutrientes no sistema aquático. Os procedimentos de coletas foram realizados mensalmente, durante dois anos, no riacho Cachoeira Grande, de Floresta Ombrófila Densa preservada, localizado em Florianópolis/SC. Foram demarcados em campo cinco pontos de coleta onde foram instalados os aportes verticais, laterais e terrestres. Os detritos vegetais coletados foram levados para o laboratório, secos em estufa, identificados, triados, pesados e triturados para as análises químicas. Os resultados deste trabalho mostraram que, conforme a hipótese 1, alguns táxons, como por exemplo T. rubrivenium e Sebastiania sp., apresentaram importância ecológica variável ao longo do tempo. Enquanto alguns detritos foliares continham concentrações nutricionais menores, outros táxons continham os nutrientes em maior quantidade, e vice-versa. Mas, contrariando a hipótese 2, os índices de precipitação e as variações de temperatura não proporcionaram maiores entradas de nutrientes no sistema aquático, sugerindo-se que as concentrações sejam influenciadas por outros fatores.<br> / Abstract : The ecological balance of aquatic system depends on the food supply available by allochtonous leaf litter that are present at riparian zone, and represent distinct nutritional features. That present study estimated the temporal variability of C, N and P in the contribution of allochtonous leaf litter of main taxon present in a subtropical riparian vegetation, correlating the found results with precipitation and temperature variations. The hypothesis were: (1) some taxon will have most ecological importance for the aquatic system than other contributing nutritionally of more representative way, however, this contribution and importance should changes temporally; (2) as smaller temperature and higher precipitation, higher the aquatic nutrients system input will be bigger. The sampling procedures were carried out monthly, over 2 years at Cachoeira Grande River located at Atlantic Rain Forest, Florianopolis/SC. Five sampling sites were selected, including vertical, lateral and ground contributions. The collected materials were taken to the lab, dry at greenhouse, identified, separate, weighed and crushed to chemistry analysis. The results of this work proved that, according to hypothesis 1, some taxon shown variable ecological importance over the time, while some leaf litter had lower nutritional concentrations, other taxons had the nutrients in bigger numbers. But, contradicting the hypothesis 2, the precipitation index and the temperature variations have not shown influence in the input of nutrients in the aquatic system.

BRITO, Daniel Azevedo de. A Produção de vídeos como estratégia pedagógica no ensino de biologia. 143 f. Dissertação (Mestrado Profissional em Ensino de Ciências e Matemática) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, 2010. / Submitted by Rocilda Sales (rocilda@ufc.br) on 2011-12-20T16:17:19Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_dabrito.pdf: 4188376 bytes, checksum: b91b30410747dfc51142ab16027cca00 (MD5) / Approved for entry into archive by Rocilda Sales(rocilda@ufc.br) on 2011-12-20T16:32:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_dabrito.pdf: 4188376 bytes, checksum: b91b30410747dfc51142ab16027cca00 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-12-20T16:32:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_dabrito.pdf: 4188376 bytes, checksum: b91b30410747dfc51142ab16027cca00 (MD5) Previous issue date: 2010 / The teaching of Science, particularly of Biological science, must be able of changing the student into a critical being, who pounders his reality and participates of it. An individual capable of questioning, understanding and solving problems in a global dimension, seeing beyond the old conception of a discipline that exists by its own, ignoring the other fields of knowledge. That being said, the act of teaching must be understood within the context of the school, in a appropriate manner, not only with the mere transmission of subjects, but also with an inquisitive direction, showing to the student how to comprehend and explain his own reality. However, it is no more time for the school to stand as the only source of knowledge, for today, also television, radio, internet, videos and other data work as agents in the act of spreading the knowledge in science as much for children as for adults. In this direction, the science taught in the school plays an essential role in the education of the students, through activities that make a high level of scientific education possible. It is necessary that the students may develop a contextualized and richer scientific vocabulary, in order to better understand the presented scientific concepts. This work aims to analyze the implications of making videos as a pedagogical resource in the act of teaching biological concepts. The applied methodology was a field research, made with 36 students from the last step of high school of a school located in Fortaleza/CE, from may to September of 2009. The students produced 2 videos: a documentary and a parody. Quizzes, interviews and the observation of the environment were used as source of data. The results show that the videos made inside the school and also, specially, outside of it have an expressive potential to influence the interest of the students in learning; the videos posted in the internet are often revisited by the students; making videos outside the school was even more productive; watching videos in the internet made easier the act of learning. The final comments show that digital technologies must definitely participate of the institution. This insertion must not forget about reflection or even result in a mere technological pile up of multimedia rooms. More important than the resources is to know how to properly use these technological media, making the act of learning actually less complicated. / O ensino de Ciências, em particular o da Biologia, precisa ainda metamorfosear o aluno em um ser crítico, reflexivo e participativo de sua realidade como indivíduo capaz de questionar, compreender e resolver problemas inerentes ao mundo em que vive, extrapolando a concepção de que uma disciplina existe por si só, independente das outras. Com isso, seu ensino deve ser trabalhado no contexto escolar de forma adequada, em que não basta apenas que sejam transmitidos os conteúdos, mas como uma disciplina de investigação, direcionada para ajudar o aluno a compreender e explicar a sua realidade. Porém, já não é mais o tempo em que a escola representa a única fonte de transmissão de conhecimentos, hoje tem também a televisão, o rádio, a internet, vídeo e outros que propiciam ciência, tanto em crianças como adultos. Nesse sentido, a ciência escolar tem um papel essencial junto aos alunos, por meio de atividades educativas que o possibilitem atingirem níveis elevados de alfabetização cientifica. É necessário que o refinamento e ampliação do vocabulário científico junto aos alunos sejam desenvolvidos de forma contextualizada, para que possam encontrar significado nos conceitos científicos apresentados. O trabalho tem como objetivo geral analisar as implicações da construção de vídeos como recurso pedagógico na apropriação de conceitos de Biologia. A metodologia aplicada foi uma pesquisa de campo com 36 alunos do 3º ano do ensino médio de uma escola pública da cidade de Fortaleza/CE, no período de maio a setembro de 2009. Os alunos produziram dois vídeos: um mini-documentário e a construção de uma paródia. Os instrumentos de coleta de dados foram questionários, observação participante e entrevista do grupo focal. Os resultados apontam que os vídeos feitos fora da sala de aula, em especial fora da escola, tendem a ser mais efetivos no incentivo à aprendizagem significativa; os alunos revisitam as produções e o conhecimento veiculado na internet; possuir apenas uma câmera não inviabiliza a atividade de produção de vídeo com os alunos; sair da escola se mostrou como um fator forte no engajamento dos alunos na atividade; assistir aos vídeos na internet auxiliou na aprendizagem. As considerações finais mostram que as tecnologias digitais devem definitivamente adentrar na sala de aula. Mas essa inserção não pode ser desprovida de reflexão ou resultar num mero empilhamento tecnológico das salas de multimeios. Mais do que ter recursos, é preciso saber usá-los de modo a facilitar a aprendizagem significativa.

SILVEIRA, Virgínia Régia Souza da. Detecção de leucotoxina de Aggregatibacter actinomycetemcomitans em portadores de periodontite agressiva e seus familiares. 2010. 61 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-19T13:50:31Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_vrssilveira.pdf: 1110307 bytes, checksum: 76e5d7512470953689ce41023e12a6fd (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:16:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_vrssilveira.pdf: 1110307 bytes, checksum: 76e5d7512470953689ce41023e12a6fd (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:16:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_vrssilveira.pdf: 1110307 bytes, checksum: 76e5d7512470953689ce41023e12a6fd (MD5) Previous issue date: 2010 / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is a pathogen strongly associated with the etiology of aggressive periodontitis. The purpose of this study was to evaluate by polymerase chain reaction (PCR) the presence of highly and minimally leukotoxic clones of A. actinomycetemcomitans in patients with aggressive periodontitis (AgP) and their family members (FM). Thirty five patients with AgP (33,9 ± 7,1 years), 33 FM (22,8 ± 11,4 years) and 41 patients with chronic periodontitis (CP) (44,1 ± 9,4 years) were clinical analyzed through plaque index (PI), gingival index (GI), probing depth (PD) and clinical attachment level (CAL). Subgingival biofilm samples were collected from the interproximal periodontal sites (> PD and > CAL) of each patient and their microbiological analysis were taken by PCR, concerning A. actinomycetemcomitans was observed and its leukotoxic clones. The PD and CAL average of this sites were: AgP – 9,8 mm e 10,7 mm, FM – 5,3 mm e 4,6 mm e CP – 8,2 mm e 9,4 mm. Statistically significant difference was observed among the groups. The presence of A. actinomycetemcomitans was observed in 23 (51,1%) patients with aggressive periodontitis and in others ones, 16 (30,1%) with chronic periodontitis. Among them 37 (94,8%) showed minimally leukotoxic clones and 2 (5,1%) highly leukotoxic clone, one was AgP group, the other was FM group, also with aggressive disease. Concerning to periodontal status of the FM group, 30,3% had aggressive periodontitis, 36,3% chronic periodontitis and 33,3% were periodontally normal or had gingivitis. Among them 12,2% were A. actinomycetemcomitans positive. The higher values of PD and CAL were observed in aggressive periodontitis patients that were A. actinomycetemcomitans positive when compared with A. actinomycetemcomitans negative patients (p<0.05). The presence of A. actinomycetemcomitans was correlated with aggressive periodontitis clinical status (Odds ratio=3,1; CI: 1,4-7,0; p=0,009). The majority of the patients with aggressive periodontitis exhibited a generalized form of disease and were positives to minimally leukotoxic A. actinomycetemcomitans clones. The family members had any type of chronic or aggressive periodontal disease. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans é um patógeno intensamente relacionado com a etiologia da periodontite agressiva. O objetivo deste estudo foi avaliar, via reação em cadeia da polimerase, a presença de clones de A. actinomycetemcomitans que exibem alta ou mínima leucotoxicidade em indivíduos portadores de periodontite agressiva (PAG) e em seus membros familiares (FAM). Trinta e cinco indivíduos com PAG (33,9 ± 7,1 anos), 33 FAM (22,8 ± 11,4 anos) e 41 portadores de periodontite crônica (PC) (44,1 ± 9,4 anos) foram analisados clinicamente pelo índice de placa (IP), índice gengival (IG), profundidade de sondagem (PS) e nível de inserção clínico (NIC). Amostras de biofilme subgengival foram coletadas de todos os indivíduos do sítio interproximal com maior PS e maior NIC e analisadas microbiologicamente por meio de PCR, quanto à presença de A. actinomycetemcomitans e de seus clones leucotóxicos. Médias de PS e NIC desses sítios foram: PAG – 9,8 mm e 10,7 mm, FAM – 5,3 mm e 4,6 mm e PC – 8,2 mm e 9,4 mm, tendo sido observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos. A presença de A. actinomycetemcomitans foi observada em 23 (51,1%) portadores de periodontite agressiva e em 16 (30,1%) portadores de periodontite crônica. Dentre eles, 37 (94,8%) exibiram clones de mínima leucotoxicidade e 2 (5,1%) clones de alta leucotoxicidade, um do grupo PAG e outro do grupo FAM, também com doença agressiva. Quanto à condição periodontal do grupo FAM, 30,3% apresentaram periodontite agressiva, 36,3% periodontite crônica e 33,3% estavam periodontalmente saudáveis ou mostravam gengivite. Dentre eles, 12,2% estavam positivos para a presença de A. actinomycetemcomitans. Maiores valores de PS e NIC foram observados nos pacientes com periodontite agressiva positivos para A. actinomycetemcomitans quando comparados àqueles pacientes negativos, com diferença estatisticamente significante. A presença de A. actinomycetemcomitans foi associada à condição clinica de periodontite agressiva (odds ratio=3,1; intervalo de confiança: 1,4-7,0; p=0,009). A maioria destes indivíduos exibiu uma forma generalizada de doença e estavam positivos para clones de mínima leucotoxicidade de A. actinomycetemcomitans. Os familiares externaram em sua maioria algum tipo de doença periodontal crônica ou agressiva.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-11-07T03:25:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347991.pdf: 3464947 bytes, checksum: 4b9adce4d95c51c30b0828be864fb06e (MD5) Previous issue date: 2017 / A crista neural (CN) é composta por células heterogêneas e multipotentes, e pode ser dividida em CN cefálica (CNC) e truncal (CNT). As células da CNC originam, in vivo, células neurais e mesenquimais, neste último caso, formando parte do esqueleto craniofacial (condrócitos, osteócitos e odontoblastos) e tecido conjuntivo da face (adipócitos e fibroblastos dermais). As células da CN truncal (CNT), por sua vez, originam in vivo, células gliais e neurônios do sistema nervoso periférico, além de células cromafins do sistema endócrino. Melanócitos são formados por células da CNC e CNT. In vivo, as células da CNT não apresentam a capacidade de se diferenciarem em fenótipos mesenquimais. Entretanto, in vitro, sob estímulo com fatores químicos e físicos, estas células podem se diferenciar em condrócitos, osteócitos e adipócitos. Frente a estas capacidades que as células da CNT apresentam in vitro, avaliamos a utilização de uma matriz sintética e pura chamada PuraMatrix , para cultivo e diferenciação de células da CNT. Inicialmente, testamos e padronizamos anticorpos para marcação de osteócitos (SB-1, SB-2, SB-3 e SB-5) em membros posteriores de embriões de codornas. Em seguida, realizamos culturas de células da CNT com embriões de 18-22 pares de somitos, com meio básico de cultivo e com adição de Fatores de Diferenciação Mesenquimais (FDM) para estimular as células a se diferenciarem em adipócitos e osteócitos. Foram testadas as concentrações de PuraMatrix 0,15%; 0,25%, 0,5% e 1%. Análises fenotípicas de frequência e quantitativas através da técnica de imunocitoquímica e colorações específicas foram realizadas nos 14º e 21º dias de cultivos para todos os fenótipos da CN. As quatro concentrações de PuraMatrix suportaram o cultivo de células da CNT. Entretanto, pelo baixo número de células observado, a concentração de PuraMatrix 1% foi descartada de nossas análises. As concentrações de PuraMatrix 0,15%; 0,25% e 0,5% possibilitaram a diferenciação de células da CNT para células gliais, neurônios, melanócitos, células musculares lisas e condrócitos, tanto em culturas controles quanto estimuladas com FDM. Adipócitos estiveram presentes nas três concentrações quando estimuladas com FDM, e também nas concentrações de PuraMatrix 0,15% e 0,25% na condição controle. Osteócitos foram analisados nas duas concentrações mais baixas de PuraMatrix , onde marcações para SB-3 ocorreram, mas em co-localização com cartilagem, assim como observado in vivo. SB-5 mostrou-se muito específico para osteoblastos/osteócitos e apresentou marcação tanto em cultivos controles quanto tratados. Apenas no 21º dia, houve marcação de alcalina fosfatase e de matriz mineralizada. PuraMatrix abre novas perspectivas para o desenvolvimento de estudos clonais de progenitores da CN e poderá permitir a identificação de novos progenitores com as potencialidades neurais-mesenquimais para CNT. / Abstract : The neural crest (NC) is composed of heterogenous and multipotent cells, and can be divided into cephalic (CNC) and trunkal (TNC) NC. CNC cells originate, in vivo, neural and mesenchymal cells, the last one forming part of the craniofacial skeleton (chondrocytes, osteocytes and odontoblasts) and connective tissue of the face (adipocytes and dermal fibroblasts). The TNC cells, in turn, originated in vivo, glial cells and neurons of the peripheral nervous system, in addition to chromaffin cells of the endocrine system. Melanocytes are formed by CNC and TNC cells. In vivo, TNC cells don?t have the ability to differentiate into mesenquimal phenotypes. However, in vitro, under stimulation with chemical and physical factors, these cells can differentiate into chondrocytes, osteocytes and adipocytes. Faced with these capabilities that TNC cells present in vitro, we evaluated the use of a pure synthetic matrix called PuraMatrix , for TNC cell culture and differentiation. Initially, we tested and standardized antibodies for marking osteocytes (SB-1, SB-2, SB-3 and SB-5) on hind limbs of quail embryos. Then, we performed cell cultures of TNC cells with embryos of 18-22 pairs of somites, with basic culture medium and with addition of Mesenchymal Differentiation Factors (MDF) to stimulate the cells to differentiate into adipocytes and osteocytes. The concentrations of PuraMatrix 0.15%; 0.25%, 0.5% and 1% were tested. Frequency and quantitative phenotypic analyzes using the immunocytochemistry technique and specific staining were performed on the 14th and 21st day of cultures for all NC phenotypes. The four concentrations of PuraMatrix supported the cultivation of CNT cells. However, due to the low number of cells observed, the concentration of PuraMatrix 1% was discarded from the analyzes. The concentrations of PuraMatrix 0.15%; 0.25% and 0.5% allowed the differentiation of TNC cells into glial cells, neurons, melanocytes, smooth muscle cells and chondrocytes in both control and MDF stimulated cultures. Adipocytes were present in the three concentrations when stimulated with MDF, and also in the concentrations of PuraMatrix 0.15% and 0.25% in the control condition. Osteocytes were analyzed for the two lowest concentrations of PuraMatrix , where SB-3 marker occurred with co-localization with cartilage as well as observed in vivo. SB-5 showed to be very specific for osteoblasts/osteocytes and showed labeling in both control and treated cultures. On day 21 only, there was marking of alkaline phosphatase and mineralized matrix. PuraMatrix opens new perspectives for the development of clonal studies of NC progenitors and may allow the identification of new progenitors with the neural-mesenchymal potentialities for TNC.