Submitted by Filipe dos Santos (fsantos@pucsp.br) on 2018-04-18T11:34:24Z No. of bitstreams: 1 Cassiano Tamura Vieira Gomes.pdf: 1441081 bytes, checksum: c7102b6f4f5dc3b087cd53e1eb7927c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T11:34:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cassiano Tamura Vieira Gomes.pdf: 1441081 bytes, checksum: c7102b6f4f5dc3b087cd53e1eb7927c0 (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Introduction: It is through the biopsy of skin that we can obtain material for the study histopathological of cutaneous lesions, which is an important subsidiary examination, sometimes fundamental, for conducting different dermatitis and clinical situations with dermatological involvement. However, we observe that even in necessary clinical situations, rarely physicians not experts indicate or perform this propaedeutic instrument. We believe that this occurs due to the fact that they do not feel empowered to indicate or perform such a procedure. Objective: We intend to evaluate how the residents of Medical Clinic (RCM) have previously been in relation to this situation, and then propose a theoretical and practical qualification and re-evaluate them afterwards. Methodology: Initial questionnaire addressed to the RCM, on how they feel about the theme, their experiences and knowledge about skin biopsy, followed by theoretical and practical training with simulation of procedure in anatomical pigs’ feet. Subsequent evaluation, two weeks from the initial intervention, through a questionnaire in which the resident is positioned in relation to the situations of indication and the realization of the biopsy, and revaluation of his performance. Quantitative analysis of the number of correct responses in the initial and final questionnaires. Individual analysis of the perception of residents in front of the inclusion of skin biopsy as a propaedeutic instrument of their future practice as clinical. Results/Conclusion: The intervention included nine residents of the Medical Clinic Residency program at the Faculty of Medical Sciences and Health of PUC/SP. Four RCM that participated in the study, felt fit to indicate a skin biopsy and none of them felt able to perform such a procedure alone. After training everyone responded to feel fit to indicate the procedure, claiming to find a procedure, useful, safe and easy to accomplish. A RCM consider himself unable to perform the procedure alone because it requires more training and eight consider theirselves able / Introdução: É através da biópsia de pele que podemos obter material para o estudo histopatológico de lesões cutâneas, a qual é um importante exame subsidiário, por vezes fundamental, para condução de diferentes dermatoses e situações clínicas com envolvimento dermatológico. Porém, observamos que mesmo em situações clínicas necessárias, raramente os médicos não especialistas indicam ou executam este instrumento propedêutico. Acreditamos que isto ocorra devido ao fato de que eles não se sentem habilitados a indicar ou realizar tal procedimento. Objetivo: Pretendemos avaliar como os residentes de clínica médica (RCM), previamente se encontram em relação a esta situação, para em seguida propor uma capacitação teórica e prática e reavaliá-los posteriormente. Metodologia: Questionário inicial dirigido aos RCM, sobre como se sentem em relação ao tema, suas experiências e conhecimentos sobre biópsia de pele, seguido de capacitação teórica e prática com simulação de procedimento em peça anatômica de pata de porco. Avaliação posterior, realizada duas semanas após a intervenção inicial, através de questionário em que se investiga como o residente se posiciona em relação às situações de indicação e para a realização da biópsia, e reavaliação de seus desempenhos. Análise quantitativa do número de respostas corretas nos questionários inicial e final. Análise individual da percepção dos residentes frente à inclusão da biópsia de pele como instrumento propedêutico de sua futura prática como clínico. Resultados/Conclusão: A intervenção incluiu nove residentes do Programa de Residência Médica de Clínica Médica da Faculdade de Ciências Médicas e da Saúde da PUC/SP. Quatro RCM que participaram do estudo, se sentiam aptos a indicar uma biópsia de pele e nenhum deles se sentia apto a realizar tal procedimento sozinho. Após o treinamento todos responderam se sentirem aptos à indicação do procedimento, alegando em sua maioria acharem um procedimento, útil, seguro e de fácil realização. Um RCM se considera inapto a realizar sozinho o procedimento por necessitar de mais treinamento e oito se consideram aptos

Os objetivos deste estudo são: 1) avaliar a capacidade de se demonstrar, através da ultra-sonografia, microcalcificações agrupadas, previamente identificadas pela mamografia. 2) identificar parâmetros mamográficos dos agrupamentos de microcalcificações e correlacionar com a positividade da ultra-sonografia na caracterização destas lesões. 3) avaliar a possibilidade de a ultra-sonografia mamária servir de guia de biópsias dirigidas, através de agulha grossa (biópsia percutânea de fragmento - \"core biopsy\"), nestas lesões. Entre dezembro de 2000 e abril de 2002, foram avaliadas através da ultra-sonografia, 68 pacientes com 70 focos de microcalcificações agrupadas na mamografia, suspeitas para neoplasia maligna, classificadas segundo critério de BI-RADSTM nas categorias 4 e 5, sem outras alterações mamográficas associadas, como distorções ou massas. Características das lesões na mamografia, como tamanho e profundidade do foco, foram avaliadas e os exames ultra-sonográficos foram classificados como positivos, quando as microcalcificações foram claramente identificadas e, negativos, quando não identificadas. Nas lesões positivas foram realizadas biópsias percutâneas de fragmento (\"core biopsy\"), através da ultra-sonografia e radiografia dos fragmentos. Nas negativas, os procedimentos foram guiados pela esterotaxia. Características ultra-sonográficas das lesões positivas foram analisadas e resultados anatomopatológicos foram correlacionados. Dos 70 focos de microcalcificações, 26 foram identificados através da ultra-sonografia (37,1%), sendo submetidas a biópsias guiadas pela ultra-sonografia e 44 não foram identificadas (62,9%). O tamanho médio dos focos de microcalcificações foi significativamente maior nos casos positivos ao ultra-som - 14,0 mm, em relação aos negativos - 7,6 mm (p< 0,001). Na avaliação da profundidade dos focos, a identificação positiva pela ultra-sonografia foi significativamente maior nos casos de lesões no terço anterior, mais superficiais (16/26 - 61,5%) em relação às intermediárias (8/26 - 30,8%) e nas posteriores, mais profundas (2/26 - 7,7%) - Chi Square (p< 0,002). Avaliando as características ultra-sonográficas dos achados, em 6 identificou-se massa associada (6/26 - 23,1%), Nas outras, foram identificados pontos hiperecogênicos em meio ao tecido adiposo em 13 (13/26 - 50%); na parede de cistos em 5 (5/26 - 19,2%) e no interior de ductos em 2 (2/26 - 7,7%). Foram diagnosticados 12 casos de câncer, sendo que 8 foram identificados através da ultra-sonografia (8/12 - 66,7%) e 4 não (4/12 - 33,3%). Das 26 biópsias orientadas pela ultra-sonografia, em 18 delas (18/26 - 69,2%) foram identificadas microcalcificações nas radiografias dos fragmentos e em 8 não (8/26 - 30,8%). Nos 8 casos positivos para câncer, o diagnóstico foi subestimado em 3 delas (37,5%) em comparação com resultado anatomopatológico final da cirurgia. A ultra-sonografia apresenta uma sensibilidade baixa na identificação de focos de microcalcificações, previamente vistos na mamografia. O diâmetro médio dos focos de microcalcificações identificados na ultra-sonografia é maior do que nos não identificados. A ultra-sonografia identifica melhor focos de microcalcificações situados no terço anterior da mama, mais superficiais, em números percentuais maiores que no intermediário e posterior. A identificação de focos de microcalcificações ao ultra-som permite que biópsias de fragmento sejam realizadas, orientadas por este método / The present study aims to (1) evaluate sonographic ability of demonstrating clustered microcalcifications previously detected on mammographic examination, (2) demonstrate mammographic patterns of clustered microcalcifications and its correlation to sonographic characterization of lesions, and (3) evaluate clinical feasibility of using ultrasound-guided core biopsy of suspicious microcalcifications. Sixty eight patients with 70 clusters of mammographically detected suspicious microcalcifications - classified as category 4 or 5 according to ACR BI-RADS(TM) - and without associated findings, such as architectural distortions or nodules, underwent sonographic examination between December/2000 and April/2002. Examinations were considered positive when microcalcifications were clearly demonstrated and negative otherwise. In the former, ultrasound-guided core biopsy was performed, including specimen radiograph, and sonographic findings were correlated to histopathological results. In the latter, patients underwent stereotactic biopsy. Among 70 clusters of microcalcifications, 26 were demonstrated on sonography (37,1%) and these patients underwent ultrasound-guided core biopsy, while 44 lesions were not detected on sonographic examination (62,9%). The median size of lesions seen on sonography was significantly greater - 14.0 mm -, in contrast to the median size of lesions not detected - 7.6 mm (p<0.001). Considering the location of microcalcifications, sonographic detection of lesions was significantly more frequent in patients with microcalcifications in the anterior third of breast parenchyma (16/26 - 61.5%), when compared to those in the mid third (8/26 - 30.8%) and posterior third (2/26 - 7.7%) (p<0.002). Cancer was demonstrated in 12 patients, 8 of them using ultrasound-guided biopsy (8/12 - 66.7%) and 4 using stereotactic biopsy (4/12 - 33.3%). Microcalcifications were demonstrated on specimen radiographs in 18 out of 26 ultrasound-guided core biopsies (18/26 - 69.2%), and it was not possible to detect them on specimen radiographs in 8 patients (8/26 - 30.8%). Between 8 patients with cancer demonstrated using ultrasound-guided core biopsy, diagnosis was underestimated in 3 (37.5%), in comparison to 1 patient out of 4 (25%) who underwent stereotactic biopsy. Sonographic examination has low sensitivity in detection of clustered microcalcifications previously seen on mammography. The median diameter of lesions demonstrated on sonography is greater than that of microcalcifications not detected. Clusters of microcalcifications in the anterior third of breast parenchyma were also detected more frequently than lesions situated more posteriorly. Sonographic detection of clustered microcalcifications allows performing ultrasound-guided core biopsy

TITLE: IN VIVO ANTRAL FOLLICLE WALL BIOPSY: A NEW RESEARCH TECHNIQUE TO STUDY OVARIAN FUNCTION USING THE HORSE AS A MODEL Abstract Understanding hormone and growth factor receptor expression in the follicular wall associated with the intrafollicular milieu and systemic endocrine aspects in vivo is crucial for a complete discovery of mechanisms behind folliculogenesis in different species. Furthermore, the comprehension of the interrelationships existent among the preovulatory follicle (POF) and corpus luteum (CL) diameter and blood flow, and progesterone (P4) production during different seasons of the year are warranted to optimize fertility in different species. In this dissertation, four studies in mares are presented with the following general objectives: (i) develop and validate a minimally invasive in vivo technique to obtain antral follicle wall biopsy (FWB) and follicular fluid (FF) samples simultaneously and repeatedly from the same individuals, during different stages of follicle development in different seasons of the year; (ii) use the FWB technique to elucidate and compare the expression pattern of different receptors and proteins involved in folliculogenesis and ovulatory mechanisms during different seasons of the year; and (iii) use B-mode and color Doppler ultrasonography techniques to characterize POF and CL diameter and blood flow during two transitional ovulatory seasons (spring and fall), and elucidate the interrelationships among these variables with systemic P4 concentration. In the first study (Chapter 2), two experiments were conducted; in Experiment 1 (ex vivo), a proof of concept study was developed to check the feasibility of using the biopsy forceps to harvest FWB samples. Ovaries of six slaughtered mares were used, and each follicle was sampled using two techniques: biopsy forceps and scalpel blade (control). In Experiment 2 (in vivo), FWB and FF samples from growing follicles during various developmental stages were harvested using a novel FWB transvaginal ultrasound-guided technique. In the second study (Chapter 3), antral follicle wall and FF samples were obtained from 10−, 20−, and 30−mm follicles during spring anovulatory (SAN) and spring ovulatory (SOV) seasons. Samples were collected in vivo from the same mares in both seasons, with the aims to study and compare the expression of proliferative, angiogenic, and pro-/anti-apoptotic receptors and proteins in the follicle wall among three follicle classes, and between the SAN and SOV seasons. In the third study (Chapter 4), FWB and FF samples were collected in vivo from dominant growing follicles during the SAN, SOV, summer (SU), and fall ovulatory (FOV) seasons, to study the expression patterns of different receptors and proteins involved in follicle development. In the fourth study (Chapter 5), the temporal relationships among diameter and blood flow of the POF and CL, and systemic P4 concentration during spring and fall transitional ovulatory seasons were studied. The main findings of the present studies were: (i) the histological appearance, organization, and thickness of the follicle wall layers (i.e. granulosa, theca interna, and theca externa) were not influenced by the harvesting techniques (biopsy forceps vs. scalpel blade); (ii) the overall recovery rates of FWB and FF samples were 97% and 100%, respectively. However, the success rate of obtaining samples with all layers of the follicle wall and clear FF varied according to follicle size; (iii) follicles of the SOV season had a higher expression of proliferative, angiogenesis, and anti-apoptotic proteins compared to the SAN season; (iv) follicles of the FOV season had lower expression of proliferative, angiogenesis, and luteinizing hormone receptors; and (v) positive correlations were observed among POF and CL parameters, and P4 concentration. In conclusion, results demonstrated that the novel in vivo FWB technique developed in this study can be repeatedly and simultaneously used to provide sufficient FWB and FF samples for various cellular and molecular studies without jeopardizing the ovarian function in mares. Furthermore, results presented herein showed that several proliferative, angiogenic, and pro-/anti-apoptotic proteins are differentially expressed within different layers of the antral follicle wall among different seasons of the year. Finally, results demonstrated that larger and well-vascularized POFs have the potential to produce larger CLs with greater blood flow, and subsequently greater P4 systemic levels.

Resumo: A técnica de biópsia hepática guiada por videolaparoscopia em caprinos foi realizada em 12 animais machos, castrados, hígidos, sem raça definida e com idades de seis a 12 meses. Os animais foram submetidos à anestesia intravenosa e a laparoscopia consistiu na introdução da agulha de Veress no flanco direito para provocar pneumoperitôneo com dióxido de carbono e permitir a inserção da cânula e trocarte para introdução do endoscópio na cavidade abdominal acoplado a uma microcâmera e ao monitor de vídeo por um cabo de fibra ótica. Após a visualização do fígado, foi introduzida a agulha de biópsia hepática tru-cut no décimo primeiro espaço intercostal, a aproximadamente 12cm ventral à coluna vertebral, para punção e remoção de fragmento do lobo hepático direito. Em seguida, o pneumoperitônio foi desfeito e as incisões cutâneas foram suturadas. Os fragmentos hepáticos colhidos foram fixados em solução de Bouin por 24 horas e processados de forma rotineira para inclusão em parafina. Foram feitas avaliações clínicas e exames hemáticos no pré-jejum e às 24, 48 e 72 horas após a intervenção cirúrgica. Houve leucocitose com neutrofilia e aumento do fibrinogênio plasmático nas primeiras 24 horas pós-operatórias, indicando a ocorrência de processo inflamatório intra-abdominal discreto e fugaz, não mais observado na 488 hora pós-cirúrgica. A biópsia hepática com agulha tru-cut guiada por videolaparoscopia foi considerada segura e eficaz para uso em caprinos, permitindo a obtenção de fragmentos hepáticos suficientes para exame histopatológico. / Abstract: The technique of videolaparoscopic guided hepatic biopsy was performed in 12 castrated male goats, healthy, without defined breed and aging from six to 12 months. Each animal received total intravenous anesthesia and was submitted to the laparoscopic procedure that consisted in the insertion of a Veress needle in the right flank in order to cause a pneumoperitoneum with carbon dioxide. This procedure was followed by cannulation and then by introduction of a rigid endoscope coupled with a microcamera. Afier visualization of the liver, a tru-cut hepatic biopsy needle was applied in the eleventh intercostal space about 12cm ventral to the spinal column for punch and removal of a fragment from the right hepatic lobe. Soon afier the drainage of the pneumoperitoneum, the small skin incisions were sutured. The biopsy fragments were fixed in Bouin's solution for 24 hours and then submitted to paraffin inclusion histologic routine. Clinical evaluation and hematologic exams were made during the pre-fasting period and again at 24, 48 and 72 hours afier the surgery. There was observed leucocytosis with increased neuthrophils and plasmatic fibrinogen levels at 24 hours afier the procedure, indicating the presence of a discrete intraabdominal inflammatory process that was no more observed at 48 hours. The videolaparoscopic guided hepatic biopsy with a tru-cut needle was considered efficacious and secure to be used in goats, allowing the obtention of hepatic tissue fragments suitable for histopathological examination. / Orientador: José Wanderley Cattelan / Coorientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Delphim da Graça Macoris / Banca: Claudia Acosta Duarte / Mestre

Base teórica: o tratamento do carcinoma endometrial é feito através do estadiamento cirúrgico, que envolve histerectomia com salpingo-oforectomia bilateral e linfadenectomia pélvica e para-aórtica. Questiona-se o benefício da linfadenectomia sistemática em todos os pacientes, já que o risco de disseminação linfática em tumores de baixo risco é pequeno e não há evidências de benefício terapêutico em sua realização. Desse modo, tentam-se encontrar modos de determinar, na avaliação pré-operatória, quais são os pacientes que poderão se beneficiar da linfadenectomia e aqueles que podem prescindir do procedimento. Objetivos: avaliar a concordância da avaliação anatomopatológica entre a amostra endometrial pré-operatória e a peça cirúrgica das pacientes submetidas a tratamento cirúrgico primário do carcinoma de endométrio, correlacionando com características das pacientes e das amostras da patologia. Métodos: foram incluídos pacientes submetidos a tratamento cirúrgico para carcinoma de endométrio que tinham diagnóstico pré-operatório através de amostragem endometrial. Os prontuários foram revisados e as amostras disponíveis na instituição foram procuradas para posterior releitura por dois patologistas cegados para as demais informações anatomopatológicas. Resultados: foram incluídos 166 pacientes, com uma idade média de 64,6 anos. Das biópsias, 118 eram tumores endometrioides, 38 não-endometrioides e as demais, hiperplasia. As taxas de concordância foram de 93,2% para tumores endometrioides e 68,9% para não-endometrioides, com um índice kappa (k) de 0,73 para o tipo histológico. O grau tumoral distribui-se na amostra como G1 em 37,1%, G2 em 35,7% e G3 em 27,1%, com uma taxa de concordância de 61,5%, 56% e 78,9%, respectivamente, e k=0,46. Dos tumores G1, somente 1,9% teve upgrade para G3, em comparação com 16% das lesões G2. Não houve diferença estatística na taxa de concordância do tipo histológico e grau tumoral em função do local de execução da biópsia, método de amostragem e intervalo biópsia-cirurgia. Biópsias com pés > 3g tiveram uma concordância do grau tumoral significativamente melhor (p=0,040). Amostras de 105 pacientes estavam disponíveis no HCPA e foram reavaliadas por dois patologistas, com uma taxa de concordância interobservador geral de 73,3% (k=0,58) para o tipo histológico e 57,9% (k=0,54) para o grau tumoral. Conclusão: a acurácia da biópsia pré-operatória em predizer as características da peça cirúrgica não é ideal. Deve-se ter cuidado ao utilizar essa informação para determinar a extensão da cirurgia a ser realizada, sob risco de ser realizado subestadiamento. Estas baixas taxas de concordância correlacionam-se também com as baixas taxas de concordância interobservador. Novos sistemas de graduação e equipes de especialistas são possibilidades para melhorar esta questão. / Background: endometrial carcinoma treatment is based on surgical staging, including hysterectomy with bilateral salpingo-oophorectomy and pelvic and paraortic lymphadenectomy. The benefits of systematic lymphadenectomy in all patients have been questioned, since the risk of dissemination in low risk tumors is small and there is no evidence of benefits in its execution. Thereby, researches are looking for ways to determine, by preoperative evaluation, which patient will benefit from full staging and those who can do without the procedure. Objectives: evaluate the agreement between the preoperative endometrial samples and the surgical specimens in endometrial carcinoma, correlating it with characteristics of the samples and patients included, and evaluate the interobserver agreement of the preoperative biopsy. Methods: patients submitted to surgery as primary treatment for endometrial carcinoma at HCPA with a preoperative endometrial sampling were included. Their medical charts were reviewed. The available samples of the preoperative biopsies were recollected for reanalyzes by two pathologists. Inadequate transcriptions of the biopsy report were excluded. Results: we included 166 patients, with a mean age of 64.6 years. Of the biopsies, 118 were endometrioid, 38 were non-endometrioid and the remaining, hyperplasia. The agreement rates were 93.2% for endometrioid tumors and 68.9% for non-endometrioid, with a kappa index of 0.73 for the tumor cell type. The tumor FIGO grade distributed as G1 in 37.1%, G2 in 35.7% and G3 in 27.1%, with an agreement rate of 61.5%, 56% and 78.9%, respectively. The general kappa index for FIGO grading was 0.46. Of the G1 tumors, only 1.9% upgraded to G3, while 16% of the G2 lesions upgraded. There was no statistical difference in the agreement rates of tumor cell type and FIGO grading in function of place of biopsy execution, method of endometrial sampling and biopsy-surgery interval. Biopsies weighing more than 3g had a significantly better agreement in FIGO grading (p=0.040). Samples of 105 were available at HCPA and were reevaluated by 2 pathologists, with a general interobserver agreement 73.3/% (k=0.58) for tumor cell type and 57.9% (k=0.54) for grading. Conclusion: the accuracy of the preoperative biopsy in predicting the definite surgical characteristics it is not ideal. Caution must be taken when using this information to determine the surgical extension, due to the risk of under staging. These low rates of agreement are correlated with the low interobserver agreement. New grading systems and specialists teams are possible ways of improving this issue.

A proposta do experimento baseia-se na análise uterina de éguas distribuídas em três graus de fibrose, conforme estabelecido em 1978 por Kenney (grupo I – endométrio saudável; grupo II, endométrio saudável ou com poucas alterações; grupo III – endométrio com alterações severas). Portanto, o estudo tem por objetivo determinar o perfil da expressão gênica de possíveis genes causadores da fibrose, conhecidos pelo o envolvimento em outros órgãos e espécies, no endométrio de éguas classificadas com diferentes graus de saúde uterina. Uma amostra de tecido endometrial foi colhida por meio de biopsia uterina e seccionada em dois fragmentos para posterior análise. Para os exames laboratoriais, a primeira amostra foi destinada à avaliação histopatológica e a segunda à validação de genes-alvo por reação polimerase em tempo real (qPCR). No exame histopatológico, o grau de fibrose e fase do ciclo estral foram estimados para distribuir as fêmeas nos grupos, além disso, o histórico reprodutivo foi analisado e a partir dos dados do exame histopatológico e histórico foram selecionadas 20 fêmeas para realização do qPCR (grupo I = 11; grupo II = 6; grupo III = 3). A segunda amostra de tecido foi armazenada em nitrogênio líquido imediatamente após a coleta, sendo posteriormente armazenada em freezer -80°C. Após o processamento das amostras, a quantificação relativa da abundância dos transcritos de Fator de Transformação do Crescimento-β1 (TGF-β1), Fator de Crescimento do Tecido Conjuntivo (CTGF), Colágeno tipo I (COL-I), α actina de músculo liso (αSMA), Molécula de Adesão Intercelular-1 (ICAM-1), e Cluster de Diferenciação 147 (CD147) foi comparada entre os grupos. A expressão de αSMA (P = 0,78), COL-I (P = 0,57) e ICAM-1 (P = 0,98) não resultou em diferença entre os grupos; e a de TGF-β1 e CTGF foi maior no grupo I (P = 0,04). Nos casos de fibrose severa, a transcrição de mRNA de CD147 foi maior em comparação com o grupo I (P = 0,04). Desta forma, acredita-se que a partir da avaliação de genes expressos do endométrio de éguas com diferentes graus de fibrose pode ser possível identificar genes marcadores que aumentam a precisão da classificação previamente proposta. / The purpose of the experiment was to analyze the uterus of mares distributed in three degrees of fibrosis, as established by Kenney in 1978 (group I - healthy endometrium; group II, healthy endometrium or with few alterations; group III - endometrium with severe changes). A sample of endometrial tissue was collected by biopsy which was sectioned into two fragments for further analysis. For the laboratory tests, the first sample was used for histopathological evaluation and the second for the validation of target genes by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). In the histopathological examination, the degree of fibrosis and phase of the estrous cycle were estimated to distribute the females into groups; in addition, the reproductive history was analyzed and from the obtained data of histopathological evaluation and history 20 mares were selected for qPCR (group I = 11; Group II = 6, group III = 3). The second tissue sample was stored in liquid nitrogen immediately after collection and stored in a freezer at -80 ° C. After the samples were processed, the relative abundance quantification of Transforming Growth Factor-β1 (TGF-β1), Connective Growth Factor (CTGF), α Smooth Muscle Actin (αSMA), Intercellular Adhesion Molecule-1 (ICAM-1), Type I Collagen (COL-I), and Differentiation Cluster 147 (CD147) was carried out. The expression of αSMA (P = 0.78), COL-I (P = 0.57) and ICAM-1 (P = 0.98) did not resulted in difference between the groups; and TGF-β1 and CTGF were higher in group I (P = 0.04). In severe cases of fibrosis, CD147 mRNA transcription was higher in comparison to the group I (P = 0.04). Thus, it is believed that from the evaluation of expressed endometrial genes in the mare with different degrees of fibrosis it may be possible to identify marker genes that increase the accuracy of the previously proposed classification.

Survival rates in cancers have improved vastly over the years. However, some survival rates remain extremely low, as is the case for ovarian and lung cancer. The lack of robust and reliable biomarkers is strongly reflected in the absence of pre-screening programs, and as such, most patients in these cancer types are diagnosed only in advanced stages, leaving few treatment options. Moreover, relapse and resistance to therapies adds to the complexities of treating these diseases, even in the era of targeted drug development. Research has shown the presence of cancer material, in the form of circulating cancer cells (CTCs) and genomic material in the blood of patients, opening the possibility of 'liquid biopsies'. Liquid biopsies allow sampling of the disease to provide phenotypic and genomic data on the cancer in real-time and on a routine basis. Moreover, they overcome obstacles currently faced by conventional tissue biopsies. In this work we evaluate the use of a novel CTC imaging flow-cytometry platform, and report the ability to characterise and quantify these cells in blood samples. Moreover, we report significantly higher levels of CTCs in cancer patients compared to controls, and found them to be associated with a poorer prognosis. In particular, in lung cancer we observe these findings even in the early stages, suggesting a potential diagnostic use for this assay. We detect a similar trend in when analysing the ctDNA and suggest the possibility of using this technique with a prognostic value in the advanced setting. We also report on the analysis of existing microarray data by use of unique gene regulatory networks to identify biomarkers of interest. RAD51AP1 was identified by this process. Clinical validation revealed an over-expression of this gene in both tissue and blood of ovarian and lung cancers. Moreover, the gene over-expression was associated with a poor overall survival. Functional analysis in vitro revealed silencing RAD51AP1 suppressed tumour growth, in addition, various tumorigenic proteins were down-regulated, whilst apoptotic and immune genes were up-regulated. These results suggest a role for RAD51AP1 as a potential therapeutic target. In this study, we also demonstrate the ability to further exploit tumour genomic material in the blood by means of RNAseq, cancer panels, and CNI scoring to identify novel markers, that play an important role in disease genesis and evolution. RNAseq analysis identified XIST as a gene up-regulated in the blood and tissue of lung cancers. The ovarian cancer panels revealed 2 unique gene signatures in the ovarian cancer patients. With the CNI analyses also highlighting chromosomal aberrations from plasma analysis of cancer patients. Collectively, the use of all these techniques and exploitation of available blood based biomarkers could see significant improvements to survival rates in these, currently devastating diseases.

O Exame de Medula Óssea (EMO) permite avaliação citológica da medula, sendo útil no diagnóstico e monitoramento de desordens hematológicas, quando exames mais simples não são suficientes para esclarecer o quadro clínico. Investigação clínica e laboratorial completa deve ser realizada para garantir que a indicação apropriada exista. São requeridas pelo menos duas colorações (Romanowsky e Azul da Prússia), onde devem ser avaliadas a qualidade da amostra, celularidade global da mesma, contagem diferencial de células nucleadas, relação Mielóide/Eritróide bem como cuidadosa avaliação quantitativa e qualitativa das três linhagens hematopoéticas (Granulocítica, Eritróide e Megacariocítica). O EMO fornece informações relevantes no diagnóstico e monitoramento de Leucemias/Linfomas, Mieloma Múltiplo (MM), Síndrome Mielodisplásica (SMD), Aplasia medular, doença metastática na Medula Óssea (MO), infecções em HIV positivos, febre de origem desconhecida e investigação de citopenias. Tendo em vista a classificação da OMS de 2008 para neoplasias mielóides e leucemias agudas cabe ressaltar a importância de unir achados citogenéticos, dentre os quais se destacam atualmente as mutações gênicas FLT3, KIT, NPM1 e CEBPA, aos achados morfológicos, imunofenotípicos, citoquímicos e clínicos, alcançando desta forma marcadores diagnósticos e prognósticos precisos que servem como guia para um tratamento eficaz. Este estudo tem por objetivo identificar as principais indicações para o EMO no HCPA bem como verificar a acurácia das mesmas. Foram analisados 400 pacientes submetidos ao EMO na Unidade de Hematologia do HCPA no período de Janeiro a Dezembro de 2009, tendo sido resgatados todos os resultados do Aspirado de Medula Óssea bem como dados clínicos e laboratoriais relevantes obtidos do prontuário médico. Verificou-se que cerca de metade dos pacientes submetidos ao EMO em nosso centro são para controle de tratamento, o que está de acordo com as características do mesmo, o qual é referência regional para tratamento de doenças malignas. Nos pacientes que realizam o exame com propósito diagnóstico as indicações principais são suspeita de Leucemia e MM. Nos 260 pacientes com suspeita de doença hematológica primária observou-se confirmação da mesma em 61% dos casos, nos 39% restantes foram encontradas alterações qualitativas e/ou quantitativas (29%), MO normal (7%) e amostra insuficiente/diluída (3%). Dos pacientes que fizeram o exame com propósito diagnóstico 20.5% não fizeram biópsia. Com relação à acurácia da indicação, encontrou-se que 7 pacientes (2%) provavelmente não deveriam ter sido submetidos a este procedimento. Ressaltamos a importância de realizar em todos os casos Aspirado e Biópsia de MO simultaneamente uma vez que seus achados devem ser correlacionados e se a Biópsia for omitida o patologista pode não obter a informação máxima requerida. / The Bone Marrow Examination (BME) permits cytological assessment of Marrow, being useful in the diagnosis and monitoring of hematological disorders, when simpler tests are not sufficient to clarify the clinical picture. Are required at least two colors (Romanowsky and Prussian blue), it should be evaluated the quality of the sample, the same overall cellularity, differential count of nucleated cells, myeloid:erythroid (M:E) ratio and carefull evaluation quantitative / qualitative from the three lineages of hematopoietic (granulocytic, erythrocytic and megakaryocytic). The BME provides information relevant to diagnosis and follow-up of leukemia/lymphoma, multiple myeloma (MM), myelodysplastic syndrome (MDS), marrow aplasia, bone marrow (BM) metastatic disease , infections in HIV positive, pyrexia of unknown origin and investigation of cytopenias. The 2008 classification of the World Health Organization (WHO) to the myeloid neoplasms and acute leukemia highlight the importance of join cytogenetic findings - bring out currently FLT3, KIT, NPM1 and CEBPA gene mutations - to the morphologic, immunophenotypic, cytochemical and clinical findings reaching this way accurate diagnostic and prognostic markers that serve as a guide to effective treatment. This study aims to identify the main indications for the BME at HCPA and to verify their accuracy. It were analyzed 400 patients submitted to BME in the Hematology Unit of HCPA in the period January to December 2009, having been rescued the bone marrow aspirate results as well as all relevant clinical and laboratory data obtained from the medical records. It was found that about half of patients submit BME in our center are to control treatment, which agrees with the characteristics of it, it is a regional referral center for treatment of malignancies. In patients who perform the test with diagnostic purpose the main indications were suspected leukemia and MM. In 260 patients with suspected primary hematological disease 61.2% turned out to be the case, the remaining 38.8% had quantitative and/or qualitative BM alterations (29.6%), normal MO (6.5%) and insufficient sample or diluted (2.7%). Of the patients who took the exam with diagnostic purpose 20.5% had no biopsy. With respect to accuracy of indication, it was found that 7 patients (2%) probably should not have undergone this procedure. We emphasize the importance of performing in all cases aspirate and biopsy since their findings must be correlated and furthermore if the biopsy is omitted the pathologist can not get the maximum information required.

Orientador: Athanase Billis / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-11-07T16:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Worschech_Adriana_M.pdf: 2136837 bytes, checksum: e169d43b81c649e3dde44c36f7a96278 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A atrofia parcial (AP) é uma lesão benigna que mais freqüentemente imita adenocarcinoma, particularmente a variante parcial. AP ocorre com maior freqüência no lobo posterior ou zona periférica e ganhou importância maior com o uso das biópsias por agulha na detecção do carcinoma prostático. A atrofia parcial e a hiperplasia pós-atrófica (atrofia hiperplásica) são as lesões benignas que mais freqüentemente são confundidas com adenocarcinoma. Uma das razões que contribuem para dificultar o diagnóstico da atrofia parcial está relacionada com a ausência de células basais em alguns ácinos. Mais recentemente a aplicação da molécula de AMACR (alfa-metilacil Co-enzima A racemase) como marcador de células neoplásicas através de imunoistoquímica tem auxiliado no diagnóstico diferencial com o adenocarcinoma. Entretanto, sua aplicação na rotina diagnóstica ainda não está estabelecida. A imunoexpressão da AMACR pode causar algumas dúvidas em sua interpretação. Na literatura existem poucos estudos que relatam a expressão da AMACR em atrofia parcial. Avaliamos através da imunoistoquímica a expressão da AMACR e do 34ßE12 (citoqueratina de alto peso molecular) através do coquetel P504S+34ßE12 em material proveniente de 74 biópsias por agulha de próstata correspondendo a 61 pacientes. Foram analisados um total de 1198 ácinos prostáticos (324 ácinos com adenocarcinoma, 213 ácinos normais, 190 ácinos com atrofia parcial, 298 ácinos com hiperplasia pós-atrófica, 139 ácinos com atrofia simples e 34 ácinos com atrofia esclerosante). Nos ácinos com adenocarcinoma a intensidade da marcação da AMACR foi forte em 251/324 (77.5%) e fraca 73/324 (22.5%). Não houveram casos negativos. Nos ácinos normais observou-se marcação para a AMACR forte em 13/213 (6.1%), fraca em 33/213 (15.5%) e negativa em 167/213 (78.4%). A atrofia parcial apresentou marcação para a AMACR fraca em 47/190 (24.7%) e negativa em 143/190 (75.3%). Não houve marcação forte em nenhum dos casos de atrofia parcial. Os ácinos normais mostraram expressão para AMACR negativo, fraco e forte onde os valores foram respectivamente 167/213 (78,4%), 33/213 (15,5%) e 13/213 (6,1%). A atrofia parcial mostrou-se negativa, e fraca para imunoexpressão da AMACR em 143/190 (75,3%) e 47/190 (24,7%) respectivamente. Não foi observada forte positividade em atrofia parcial, no entanto, a fraca positividade observada em cerca de 25% dos ácinos pode causar dificuldade para a interpretação correta no diagnóstico diferencial de câncer e atrofia parcial. A AMACR foi negativa em todos os ácinos da atrofia simples, hiperplásica (ou hiperplasia pós-atrófica) e esclerosante, por conseguinte, sem qualquer ajuda no diagnóstico diferencial de adenocar-cinoma. A distribuição das células basais, observadas na atrofia simples, hiperplásica e esclerosante foram descontínuas e as células do compartimento secretor mostraram imunoexpressão aberrante de 34ßE12 sugerindo um fenótipo intermédio. Analisando-se os estes resultados conclui-se que o diagnóstico diferencial do adenocarcinoma com atrofia parcial deve ser feito com cautela considerando-se que a expressão da AMACR, apesar de fraca em nosso estudo, pode ocorrer em cerca de 25% dos ácinos. Soma-se a este achado o fato de que em 23.2% dos ácinos de atrofia parcial as células basais estão ausentes. Estes dados impõem cautela no difícil diagnóstico diferencial de pequenos focos "suspeitos, mas não diagnósticos de adenocarcinoma da próstata", sendo que, em alguns casos, os critérios puramente morfológicos poderão ser os únicos na identificação da lesão. / Abstract: Prostatic atrophy (PA) is the benign lesion that most frequently mimicks adenocarcinoma particularly the partial variant. PA occurs more frequently in the peripheral zone and gained greater importance with the use of needle biopsies in detecting cancer of the prostate. Partial atrophy and post-atrophic hyperplasia (hyperplastic atrophy) are the benign lesions that most often are confused with adenocarcinoma. One of the reasons that contribute to make the diagnosis of partial atrophy difficult is related to the absence of basal cell in some acini. More recently the application of AMACR (alpha-metilacil Co-enzyme A racemase) as a marker of malignant cells through immunohistochemistry has helped in the differential diagnosis with prostate cancer. However, its application in routine diagnosis is not yet established. The immunoexpression of AMACR may cause some doubt in interpretation. In literature there are few studies that reported the expression of AMACR in partial atrophy. We evaluated by immunohistochemistry the expression of AMACR and 34ßE12 (cytokeratin high-molecular weight) using the cocktail P504S +34ßE12 in 74 needle prostatic biopsies corresponding to 61 patients. We analyzed a total of 1198 prostate acini (324 acini with adenocarcinoma, 213 normal acini, 190 acini with partial atrophy, 298 acini with post-atrophic hyperplasia, 139 acini with simple atrophy and 34 acini with sclerosing atrophy). In adenocarcinoma acini the staining of AMACR was strong in 251/324 (77.5%) and weak in 73/324 (22.5%). There were no negative acini. In normal acini AMACR was strong in 13/213 (6.1%), weak in 33/213 (15.5%) and negative in 167/213 (78.4%). In partial atrophy, acini showed weak AMACR in 47/190 (24.7%) and were negative in 143/190 (75.3%). There was no strong staining in partial atrophy. The immunoexpression of AMACR was negative in all variants of complete atrophy: simple atrophy, hyperplastic atrophy and sclerosing atrophy. Normal acini showed negative, weak, or strong expression in 167/213 (78.4%), 33/213 (15.5%), and 13/213 (6.1%) acini, respectively. Partial atrophy showed negative, and weak expression in 143/190 (75.3%), and 47/190(24.7%) acini, respectively. No strong positivity was seen in partial atrophy, however, the weak positivity seen in approximately 25% of the acini may be a pitfall for the correct interpretation in the differential diagnosis of cancer and partial atrophy. AMACR was negative in all acini of simple, postatrophic hyperplasia and sclerosing atrophy, therefore, with no help in the differential diagnosis of adenocarcinoma. The distribution of basal cells in simple, postatrophic hyperplasia and sclerotic atrophy was discontinuous and the cells of the secretory compartment showed aberrant expression of 34ßE12 suggesting an intermediate phenotype. Analyzing these results it is concluded that the differential diagnosis of prostate cancer with partial atrophy must be done carefully considering that the expression of AMACR, although weak in our study, can occur in about 25% of the acini. Furthermore, in 23.2% acini of partial atrophy the basal cells are absent. In some cases the microscopic identification of partial atrophy will rely only on morphologic criteria. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

In der Arbeit wurden die histopathologischen Untersuchungsbefunde von 15795 Uterusbiopsien, welche am Institut für Veterinär- Pathologie der Universität Leipzig von 1992 bis 2012 befundet wurden, aufgearbeitet und statistisch ausgewertet. Ziel der Arbeit war es, zu untersuchen, welche pathologischen Veränderungen des Endometriums im gesamten Untersuchungsgut vorkommen (Endometritis, Angiose, Lymphangiektasien, Endometrose, endometriale Differenzierungsstörungen) und welche Veränderungen in bestimmten, nach unterschiedlichen Gesichtspunkten festgelegten Untersuchungsgruppen dominieren. Weiterhin wurde geprüft, ob und inwiefern bestimmte pathologische Veränderungen miteinander korrelieren und ob sie von anderen Faktoren, wie etwa der Parität oder dem Alter der Stute abhängig sind. 11698 Datensätze von Erstbiopsien lagen nach der Aufarbeitung der Datei zur Untersuchung vor. Bei 9120 Bioptaten konnte auf das Stutenalter geschlossen werden, bei 6049 Bioptaten auf den Reproduktionsstatus der Stute. Bei 4719 Bioptaten liegen vorberichtliche Angaben zur Güstzeit der Stute vor. Die Auswertung der Befunde erfolgte deskriptiv nach Überarbeitung der Datensätze mit Microsoft Access. Mittels SPSS für Windows (Version 22.0) wurde auf Signifikanz geprüft. Die kategorisierten Daten wurden mit Hilfe des Chi-Quadrat-Tests bzw. des exakten Tests nach Fisher ausgewertet.