No presente estudo, foi avaliada a hidrólise dos nucleotídeos ATP, ADP e AMP em soro de ratos em presença dos seguintes flavonóides: resveratrol, quercitina e rutina in vitro. Também avaliamos os efeitos do resveratrol, administrado na forma de suco de uva sobre a hidrólise dos nucleotídeos em soro de ratos adultos. Por último foi avaliado o efeito do resveratrol sobre a hidrólise dos nucleotídeos, administrado na forma de suco de uva, antes dos ratos serem submetidos ao tratamento com arginina. A hidrólise dos nucleotídeos em soro de ratos in vitro, em presença do resveratrol, aumentou para o substrato ATP em aproximadamente 40% e para o substrato ADP em aproximadamente 60%, mas não mostrou qualquer efeito sobre a hidrólise do AMP, ou seja, a enzima NTPDase foi ativada, enquanto a 5’-nucleotidase não sofreu qualquer alteração. Para a quercitina e para a rutina, outros flavonóides testados in vitro nas mesmas condições, observamos que a hidrólise dos nucleotídeos ATP, ADP e AMP diminuiu. Foi avaliado também, o efeito do suco de uva sobre a hidrólise dos nucleotideos em soro de ratos submetidos a cinco, dez e quinze dias de tratamento. Após quinze dias de tratamento, observou-se aumento na hidrólises de ATP, ADP e AMP. Com esse resultado então, tentamos avaliar se animais recebendo injeções de arginina (tratamento que já mostrara redução na hidrólise dos nucleotídeos em trabalho anterior), tendo previamente acesso ao suco de uva durante quinze dias, poderiam recuperar as atividades de hidrólise dos nucleotídeos. Concluimos que o resveratrol pode aumentar a hidrólise destes nucleotídeos em soro de ratos e que o suco de uva se administrado no lugar da água, também leva a um aumento na hidrólise de ATP, ADP e AMP. Nos protocolos onde houve diminuição na atividade de hidrólise do nucleotídeos por tratamento com arginina, observamos que o tratamento prévio com suco de uva preveniu o decréscimo na atividade das enzimas NTPDase e 5’-nucleotidase.

O impacto da contaminação e/ou poluição do solo por metais pesados deve ser avaliado não somente pela concentração total dos metais, mas sobretudo pela sua biodisponibilidade, sendo esta uma propriedade relacionada com a mobilidade no solo e absorção pelas plantas. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar, mediante extrações químicas seqüenciais e atividade das espécies dos metais em solução, preditas pelo modelo MinteqA2, a biodisponibilidade dos metais cádmio, chumbo, cobre, níquel e zinco em seis solos do Estado do Rio Grande do Sul. Para isto, utilizaram-se amostras destes solos, nas quais foram adicionados, a 10 anos, diferentes níveis desses metais em experimento conduzido ao ar livre. As frações químicas em que os metais se encontravam no solo (solúvel, trocável, orgânicas e residual) e as espécies em solução (cátions livres e ligados a complexantes orgânicos e inorgânicos) foram relacionadas com a mobilidade dos metais no perfil do solo e com as quantidades absorvidas pelas plantas. As formas solúvel em água, trocável e ligadas a fração orgânica relacionaram-se com a absorção por plantas e apresentaram maior mobilidade no perfil do solo. O modelo de especiação MinteqA2 predisse que as formas livres dos metais cádmio, cobre, níquel e zinco bem como as formas destes metais unidas a ligantes orgânicos podem ser potencialmente biodisponíveis, pois se relacionaram com as quantidades de metais absorvidas pelas plantas. / The hazard environment impact and soil pollution by heavy metals should be evaluated not only by total concentration but mainly by its bioavailability. This indicator is better related with heavy metal movement trough the soil profile and plant uptake. Therefore, the main aim of this research was evaluate, trough sequential chemical extractions and concentration in soil solution of metal species, specify by the MinteqA2 model. In this research the bioavailability of the following metals: cadmium, lead, copper, nickel and zinc was investigated in six Rio Grande do Sul State soils. The soil samples investigated come from a long term experiment in which 10 years ago different levels of these metals were applied. The metal chemical fractions (soluble, exchangeable, organic and residual) and metal species in soil solution (free cations, cations bonded to organic and inorganic complexes) were related with metal mobility trough the soil profile and plant uptake. The metal water soluble, metal exchange and bonded to organic fraction were related with plant uptake and they show higher soil movement trough the soil profile. The speciation model MintequA2 indicate that the free fractions of cadmium, copper, nickel and zinc as well the bonded with organic fraction would be bioavailability, because they were related with the metal plant uptake.

As análises hematológicas e bioquímicas são de extrema, auxiliando no diagnóstico de doenças e estados nutricionais dos animais. O perfil hematológico e valores bioquímicos sanguíneos foram determinados em três populações de vida livre de Ctenomys lami (tuco-tuco), de três regiões distintas: Região A (Distrito de Itapuã), Região B (Município de Viamão) e Região C (Município de Viamão, Unidade de Conservação Refúgio de Vida Silvestre Banhado dos Pachecos, distrito de Águas Claras), sendo as áreas A e B, impactadas pela bovinocultura, e área C, sem impacto antrópico, ambas no sul do Brasil. Amostras de 62 animais foram coletadas ao total para as análises hematológicas. Os valores de hematócrito (Ht), hemoglobina (Hb) e eritrócitos apresentaram diferenças significativas entre machos (n=23) e fêmeas (n=39). O Ht e a Hb encontrados na espécie foram mais baixos em comparação com outras espécies de roedores subterrâneos, podendo estes valores estarem relacionados ao habitat de forrageio ou a características do solo. Diferenças significativas também foram detectadas na hemoglobina, CHCM e linfócitos das amostras coletadas de animais das regiões A e B em relação às da C. O valor da média dos hematócritos das amostras dos animais das regiões A e B foram mais elevados, porém diferenças significativas foram detectadas entre as amostras dos animais das regiões A e C. Algumas dessas alterações sugerem a relação dos valores encontrados com a compactação do solo e estresse dos animais em relação a áreas impactadas. Diferenças significativas no VCM foram encontradas nas amostras coletadas dos animais da região A em relação a C, e também nas plaquetas de animais da região A em relação a B. Não foram observados Corpúsculo de Kurloff nos animais analisados. Para análises bioquímicas foram coletados amostras de 45 animais, sendo 15 animais por região, agrupados em três pools. Foram realizadas determinações bioquímicas para as enzimas AST, ALT, GGT e enzima FA. Além desses, também foram avaliados creatinina, potássio, colesterol, triglicerídeos, uréia, albumina, proteínas totais, cálcio e fósforo. Diferenças significativas foram encontradas na atividade enzimática da fosfatase alcalina entre o pool de amostras dos animais da região A em relação a B (P<0,05). Também houve diferença significativa nos valores de colesterol, sendo que o pool de amostras dos animais da região B apresentou significância estatística em relação aos pools das regiões A e C (P<0,05). Dentre os minerais analisados, apenas o potássio teve alteração significativa, sendo esta encontrada entre o pool de amostras dos animais da região A em relação a C (P<0,05). Os valores hematológicos encontrados nesses espécimes de Ctenomys lami fornecem informações importantes sobre a espécie. O uso de pools demonstrou-se eficiente na avaliação bioquímica das populações, evidenciando uma diferença em alguns metabólitos. Os resultados encontrados sugerem possíveis alterações na dieta das populações e também diferença de habitat encontrado, devido ao impacto causado pelo homem. Desta maneira, este estudo poderá fundamentar pesquisas futuras, elucidando melhor as relações existentes entre a fisiologia dos animais e variações no habitat de vida destes. / Hematological profile and biochemical are very important to diagnosis of sickness and animal nutrition of animals in general. The hematological and biochemichal profile were determined in three populations of Ctenomys lami that inhabits three different areas nominated as A and B, affected by cattle production, and C, without human impact, all of them in south Brazil, under the same geologic formation. Sample of 62 individuals were collected. The packed cell volume (PCV), hemoglobin (Hb) and red blood cell (RBC) count presents statistic significant differences between males and females. PCV and Hb values founded were lower in comparison with other subterranean rodents, which could be related to the food searching behavior or soil characteristic of the species. Significant differences were found to for Hb, mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) and lymphocytes between A and C areas. The PCV values were more elevated in areas A and B, with significance only between A and C. Some of these alterations may suggest a modification on stress levels of the animals inhabiting areas A and B with anthropic alterations, or maybe just an inherited characteristic. Significant statistic differences were found either in mean corpuscular volume (MCV) between A and C areas, and plateletes between A and B areas. No Kurloff cells (Kurloff bodies) were observed in the blood smear from analyzed individuals. Biochemical parameters were determined from 45 animals, fifteen from each area (A, B and C), grouped in serum pools of five animals (one male and four females) for the analyses. The biochemical parameters analyzed were aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma glutamyl transferase (GGT), alkaline phosphatase (ALP),creatinine, potassium, cholesterol, triglicerides, urea, albumin, total proteins, calcium and phosphorus. Significant statistic difference was found in ALP activity between areas A and B. Also significant differences were found in cholesterol levels, area B presented higher values when compared to the others, and in potassium levels between areas A and C. The use of serum pools demonstrated to be useful in the biochemical population analyzes, showing differences for some metabolites. The hematological values founded for Ctenomys lami are an important information for this species, which can be used for future research and management. These results suggest possible alterations on the diet and physiology of the populations that inhabits the areas with the presence of exotic grasslands introduced by man. This data will be important in future research, as an additional information about animal health and conditions, aggregating information on the physiological differences, adaptation and habitat variations that are inherent to Ctenomys lami.

A hiperprolinemia tipo II é uma doença autossômica recessiva causada pela deficiência severa na atividade da enzima ∆1 – pirrolino-5-carboxilato desidrogenase, o que resulta em acúmulo tecidual de prolina. Muitos pacientes apresentam manifestações neurológicas como epilepsia e retardo mental. Embora as manifestações neurológicas sejam encontradas em um considerável número de pacientes hiperprolinêmicos, os mecanismos pelos quais estas ocorrem são pouco compreendidos. O estresse oxidativo é um importante processo que vem sendo relatado na patogênese de algumas condições que afetam o sistema nervoso central (SNC), como é o caso das doenças neurodegenerativas, epilepsia e demência. Este fato torna-se facilmente compreensível, visto que o SNC é altamente sensível ao estresse oxidativo, em face do alto consumo de oxigênio; do alto conteúdo lipídico, principalmente de ácidos graxos poliinsaturados, dos altos níveis de ferro e da baixa defesa antioxidante. Considerando que: a) pouco se sabe a respeito dos altos níveis de prolina no SNC, b) a prolina ativa receptores NMDA e é epileptogênica e c) o estresse oxidativo está associado com doenças que afetam o SNC, no presente estudo investigamos os efeitos in vivo e in vitro da prolina sobre alguns parâmetros de estresse oxidativo, como a quimiluminescência, o potencial antioxidante total (TRAP), e sobre as atividades das enzimas antioxidantes catalase (CAT), glutationa peroxidase (GSH-Px) e superóxido dismutase (SOD) em córtex cerebral de ratos Wistar. Os resultados mostraram que a administração aguda de prolina aumentou significativamente a quimiluminescência e reduziu o TRAP em córtex cerebral de ratos de 10 e 29 dias. Em contraste, a administração crônica de prolina não alterou estes parâmetros. Todavia, a presença de prolina no homogeneizado de córtex cerebral de ratos de 10 e 29 dias aumentou significativamente a quimiluminescência e reduziu o TRAP em concentrações de prolina semelhantes àquelas encontradas nos tecidos de pacientes hiperprolinêmicos (0,5 – 1,0 mM). Nossos resultados também mostraram que a administração aguda de prolina não alterou as atividades das enzimas GSH-Px e SOD em córtex cerebral de ratos de 10 e 29 dias, mas diminuiu significativamente a atividade da CAT em ratos de 29 dias. Por outro lado, a administração crônica de prolina não alterou a atividade da enzima SOD, mas significativamente aumentou a atividade da CAT e reduziu a atividade da GSH-Px. Em adição, a presença de prolina no homogeneizado de córtex cerebral reduziu significativamente a atividade da SOD em ratos de 10 dias, permanecendo as atividades da CAT e GSH-Px inalteradas. Todavia, as atividades das enzimas antioxidantes não foram alteradas na presença de prolina no homogeneizado de córtex cerebral de ratos de 29 dias. Os resultados obtidos em nosso trabalho sugerem que o estresse oxidativo induzido pela prolina pode estar envolvido na disfunção cerebral observada na hiperprolinemia tipo II.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Devido Ãs suas diferentes propriedades quÃmicas tais como capacidade de formar soluÃÃes viscosas ou gÃis em meio aquoso o isolamento e caracterizaÃÃo de galactomananas tÃm sido de grande importÃncia Nesse trabalho a galactomanana do endosperma da semente de Bauhinia pentandra foi isolada e caracterizada, apresentando-se homogÃnea por GPC Este polissacarideo foi demonstrado ser uma galactomanana clÃssica formada por uma cadeia linear de manose unidas por ligaÃÃes &#946;(1-4) com substituiÃÃes de galactose em ligaÃÃo &#945;(1-6) com uma proporÃÃo Man:Gal de 2 5.1 e viscosidade intrÃnseca em Ãgua de 10 1 dL/g A galactomanana foi avaliada quanto à capacidade de interagir com lectinas galactose ligante O polissacarÃdeo foi tratado com epicloridrina e o material obtido foi utilizado para a montagem de coluna cromatogrÃfica de afinidade Extratos ricos em lectinas de Artocarpus incisa Artocarpus integrifÃlia e Bauhinia pentandra foram aplicados e fraÃÃes lectinicas purificadas foram obtidas A capacidade da galactomanana de B. pentandra em reter a lectina (LBp) da mesma semente foi comparada com a matriz de galactomanana de Adenantera pavonina Caesalpinea pulcherrima Sophora japonica e com a matriz comercial Sepharose 4B Apesar da galactomanana de B. pentandra ter apresentado a menor capacidade de retenÃÃo frente Ãs demais, ela mostrou-se semelhante à matriz comercial sendo viÃvel a sua utilizaÃÃo / Due the chemicals properties diferences, such as the ability to make viscous solution or aqueous gels, the study of the galactomanans has been too important. In this study, the endospermic galactomannans from seeds of Bauhinia pentandra was isolated and partially characterized. This polysaccharide is a classical galalactomannan constituted by a linear chain of mannose linked by &#946;(1-4) linkages with galactose substituintions linked by &#945;(1-6) linkages, resulting in a Man:Gal ratio of 2.5:1, and water intrinsic viscosity equal to 10.1 dL/g. Galactomannan was evaluated in ability to interact with galactose-binding lectins. The polysaccharide was treated with epichlorohidrine and the material obtained was utilized to make the affinity chromatography matrix. Lectin-rich extracts from Artocarpus incisa, Artocarpus integrifolia and Bauhinia pentandra were applied and lectin fractions were obtained, thus, the affinity matrix showed to be efficient to isolate them. The retention capacity of the galactomannan from B. pentandra was compared with galactomannan matrix from Adenantera pavonina, Caesalpinea pulcherrima, Sophora japonica and commercial matrix of Sepharose 4B in regards to the isolation of the lectin from B. pentandra (LBp). Although the galactomannan matrix had been showed the smallest retention capacity in comparision with the others, it is equivalent to the commercial matrix, enabling your utilization

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O objetivo do presente trabalho foi avaliar o perfil fitoquÃmico, o potencial antioxidante in vitro, o efeito toxicolÃgico e a atividade imunomoduladora in vivo dos extratos etanÃlico e hexÃnico de folhas da gravioleira (Annona muricata L.). Para tanto, foram utilizadas folhas de A. muricata L. colhidas no mÃs de agosto de 2009, no municÃpio de Trairi, CearÃ. A identificaÃÃo botÃnica da folha foi realizada no HerbÃrio Prisco Bezerra da Universidade Federal do Cearà - UFC (voucher n 49002). Para os testes in vivo, foram utilizados camundongos Swiss e ratos albinos Wistar, todos oriundos de colÃnias do BiotÃrio Central/UFC. O protocolo experimental foi submetido e aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa com Animal da UFC (N 16/10). Os extratos etanÃlico (EE) e hexÃnico (EH) foram avaliados quanto a composiÃÃo fitoquÃmica e suas atividades antioxidantes in vitro. O EE apresentou taninos, catequinas, saponinas e esterÃides, enquanto o EH apresentou apenas esterÃides. Quanto à capacidade antioxidante, o EE apresentou maior Ãndice de varredura do radical DPPH que o EH. Para avaliaÃÃo do efeito toxicolÃgico, os EE e EH foram administrados por via oral em camundongos, diariamente nas concentraÃÃes de 10, 100 e 1000 mg kg-1 durante 30 dias consecutivos e parÃmetros clÃnicos e comportamentais foram observados. Os extratos nÃo provocaram sintomas tÃxicos, nem alteraram os parÃmetros bioquÃmicos nem o peso relativo dos ÃrgÃos. Para o estudo da atividade imunomoduladora, os animais foram imunizados com ovalbumina (OVA; 10 Âg; via s.c.) nos dias 0, 14 e 28 dias antes dos tratamentos com ou sem adjuvante de Freund e tratados ou nÃo por via oral com Levamisol (10 mg kg-1) e os EE e EH (10 e 100 mg kg-1) por 42 dias consecutivos. Os tÃtulos de anticorpos totais e IgE especÃficos anti-OVA foram quantificados por ELISA e PCA respectivamente. EE e EH revelaram uma cinÃtica de sÃntese de anticorpos anti-OVA distinta. EE e EH estimularam a produÃÃo de anticorpos totais anti-OVA, contudo nÃo modularam a sÃntese de IgE anti-OVA. Neste sentido, os extratos da folha da gravioleira sÃo imunoestimulantes e nÃo induziram toxicidade. / The aim of this work was to evaluate the phytochemical profile, the ant ioxidant potential in vitro , the toxicological effect and immunomodulatory activity in vivo from ethanolic and hexane soursop ( Annona muricata L.) leaves extracts . To this end, we used leaves of A . muricata L. harvested in August 2009 in the mu nicipality from Trairi, CearÃ. The botanical identification of the leaf was held in the Herbarium Prisco Bezerra of the Universidade Federal do Cearà - UFC (voucher number 49002). For in vivo tests were used Swiss mice and Wistar rats all from the Central Biotery of th e Federal University of Ceara - UFC . The experimental protocol was approved by the Animal Ethics Committee of UFC (No. 16/10). The ethanolic (EE) and hexane (HE) extract s were evaluated for their phytochemical composition and antioxidant activities in vitro . The EE presented tannins, catechins, sap onins and steroids, while the HE presented only steroids. As for antioxidant capacity, the EE h ad greater index scan free radical DPPH than the HE . To evaluate the toxicological effect, the EE and HE were administered orally to mice, daily concentrations of 10, 100 and 1000 mg kg - 1 for 30 consecutive days and clinical and behavioral parameters were observed. The extracts did not cause toxic symptoms, nor altered the biochemical parameters and organ w eights. To study the immunomodulatory activity, the animals were immunized with ovalbumin (OVA; 10 &#956;g ; route s.c.) on days 0 , 14 and 28 days before the treatments with or without Freund's adjuvant and treated or not with oral levamisole (10 mg kg - 1) and EE and HE (10 and 100 mg kg - 1) for 42 consecutive days . The total antibody titers and specific IgE anti - OVA were quantified by ELISA and PCA respectively. EE and HE revealed different kinetics for antibodies anti - OVA synthesis . EE and HE stimulated the production of total antibodies anti - OVA, but didnât modulate the synthesis of anti - OVA IgE . In this sense, th e soursop leaves extracts are immunostimulants and didnât induce toxicity

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O lÃtex da planta lactÃfera Calotropis procera (Ait.) R. Br. à um composto biologicamente ativo importante que apresenta propriedades relevantes como as atividades antiinflamatÃria e antidiarrÃica, embora jà tenha sido previamente mostrado que esse lÃtex produz efeitos tÃxicos considerÃveis em animais. Um outro fato à que nÃo à sabido, ainda, se as proteÃnas do lÃtex de C. procera produzem efeitos alergÃnicos, assim como as proteÃnas do lÃtex de Hevea brasiliensis. O potencial do lÃtex como um fÃrmaco, por essa razÃo, depende da separaÃÃo das propriedades curativas das propriedades tÃxicas e alergÃnicas, mas nÃo existe investigaÃÃo cientÃfica nessa Ãrea. O presente estudo teve como objetivo investigar aspectos bioquÃmicos, toxicolÃgicos e alergÃnicos do lÃtex da planta C. procera, atravÃs do estudo da digestibilidade in vitro e in vivo, avaliaÃÃo da toxicidade subcrÃnica e aguda por via oral e anÃlise da induÃÃo de resposta imune pelas vias subcutÃnea e oral das suas fraÃÃes. O lÃtex foi fracionado em trÃs fraÃÃes distintas de acordo com a sua solubilidade em Ãgua e tamanho molecular. As fraÃÃes foram assim denominadas: proteÃnas do lÃtex (PL), correspondendo Ãs principais proteÃnas do lÃtex; proteÃnas da diÃlise (PD), representando as substÃncias de baixa massa molecular; e borracha do lÃtex (BL) que à altamente insolÃvel em Ãgua. A fraÃÃo PL foi investigada, com relaÃÃo a alguns aspectos bioquÃmicos, como seu perfil protÃico por PAGE-SDS e anÃlise da composiÃÃo de seus aminoÃcidos. As proteÃnas do lÃtex tambÃm foram submetidas à digestÃo in vitro com as enzimas proteolÃticas pepsina, tripsina, quimiotripsina e protease de Streptomyces griseus e a digestibilidade in vitro foi avaliada por cromatografia de filtraÃÃo em gel ou PAGE-SDS. A digestibilidade in vivo de PL foi analisada quando animais experimentais ingeriram essa fraÃÃo por 35 dias. O volume de PL consumido foi registrado diariamente e amostras das fezes dos animais coletadas, tratadas e submetidas à PAGE-SDS e ensaios de imunodifusÃo radial dupla de Ouchterlony, com anticorpos policlonais contra PL. Com relaÃÃo aos aspectos toxicolÃgicos, a fraÃÃo PL foi oralmente administrada a animais experimentais por 35 dias, para a avaliaÃÃo da toxicidade subcrÃnica. Aumentos na massa corpÃrea foram registrados e amostras sangÃÃneas foram analisadas semanalmente. ApÃs o perÃodo experimental, os animais foram sacrificados e um nÃmero de parÃmetros bioquÃmicos e fisiolÃgicos foram determinados. Esses incluÃram determinaÃÃes sÃricas de glicose sangÃÃnea, colesterol total, HDL-colesterol, triglicerÃdeos, testes da funÃÃo hepÃtica (proteÃnas totais, albumina, alanina aminotransferase â ALT e aspartato aminotransferase â AST), testes da funÃÃo renal (urÃia e creatinina), contagens total e diferencial de leucÃcitos sangÃÃneos e do fluido peritonial e anÃlise das proteÃnas sÃricas por PAGE-SDS. Os animais tiveram seus ÃrgÃos vitais (fÃgado, rins, baÃo, intestino delgado, intestino grosso, pÃncreas e estÃmago) dissecados e as massas frescas relativas foram determinadas. Na avaliaÃÃo da toxicidade aguda, a fraÃÃo PL foi administrada por via oral a animais experimentais e a monitoraÃÃo de alteraÃÃes comportamentais desses animais tambÃm foi realizada. Quanto aos aspectos alergÃnicos, respostas imunolÃgicas do lÃtex de C. procera foram investigadas pelas vias oral e subcutÃnea em camundongos. Anti-soros contra as fraÃÃes PL, PD e BL foram analisados quanto a IgG e IgA por ELISA, enquanto IgE e IgG1 foram monitoradas por anafilaxia cutÃnea passiva (PCA) em ratos e camundongos, respectivamente. Os perfis protÃicos das fraÃÃes PL e BL foram analisados por PAGE-SDS. Com relaÃÃo aos resultados dos aspectos bioquÃmicos, a fraÃÃo PL possui uma quantidade apreciÃvel de proteÃnas, baixo conteÃdo de aminoÃcidos sulfurados (metionina e cisteÃna) e um nÃmero considerÃvel de aminoÃcidos (arginina, lisina, fenilalanina e tirosina) que representam sÃtios de clivagem para as enzimas proteolÃticas animais usadas. A fraÃÃo PL foi digerida pela aÃÃo da pepsina, tripsina e quimiotripsina como revelado por anÃlises de filtraÃÃo em gel e PAGE-SDS. A digestÃo completa das proteÃnas do lÃtex foi facilmente obtida pelo tratamento com a protease de S. griseus. Anticorpos policlonais de coelho produzidos contra PL nÃo apresentaram reaÃÃo cruzada com as molÃculas presentes nas fezes dos ratos experimentais. PadrÃes semelhantes de eletroforese foram observados para as quantidades desprezÃveis de proteÃna observadas nos materiais fecais dos animais controle e experimentais. Quanto aos resultados da avaliaÃÃo da toxicidade subcrÃnica, nenhuma morte foi observada durante o experimento. Animais controle e experimentais apresentaram taxa de crescimento semelhante e os ÃrgÃos vitais exibiram massas frescas relativas similares. As funÃÃes hepÃtica e renal, parÃmetros glicÃmicos e lipidÃmicos sÃricos situaram-se em nÃveis normais. Os padrÃes protÃicos eletroforÃticos dos soros dos animais controle e experimental exibiram perfis muito similares. A fraÃÃo PL nÃo induziu inflamaÃÃo aguda na cavidade peritonial dos ratos, como determinado pelas contagens total e diferencial de leucÃcitos. O resultado mais relevante detectado foi um aparente efeito proliferativo das proteÃnas do lÃtex sobre os linfÃcitos sangÃÃneos que tenderam a aumentar, enquanto os neutrÃfilos permaneceram em nÃvel normal. Deve ser enfatizado que os animais experimentais exibiram comportamento, aspectos morfolÃgicos e bioquÃmicos normais, indicando ser improvÃvel que os mesmos estivessem sob qualquer condiÃÃo patolÃgica ou infecciosa. Portanto, o incremento da populaÃÃo de linfÃcitos no soro sangÃÃneo deve ser atribuÃdo a um efeito notÃvel das proteÃnas do lÃtex e nÃo a qualquer evento prejudicial. A fraÃÃo PL foi incapaz de induzir toxicidade aguda, pois nenhuma mudanÃa comportamental foi observada nos animais experimentais. Com relaÃÃo aos resultados dos aspectos alergÃnicos, nenhuma das fraÃÃes induziu aumentos nos nÃveis de anticorpos, quando os camundongos receberam as fraÃÃes do lÃtex por via oral e, portanto, nÃo desenvolveram alergia. Entretanto, anti-soros de camundongos sensibilizados com PL e BL por administraÃÃo subcutÃnea apresentaram resposta imunolÃgica considerÃvel, e PD nÃo induziu sÃntese de anticorpos. O nÃvel de IgG aumentou consistentemente contra PL e BL, enquanto a resposta de IgA foi detectada unicamente contra PL. PL e BL induziram reaÃÃes de PCA muito fortes, sugerindo que ambas as fraÃÃes contÃm substÃncias do lÃtex envolvidas na alergenicidade. AlÃm disso, a anÃlise protÃica de PL e BL sugere que BL ainda retÃm proteÃnas residuais, co-precipitadas com a borracha, abundantemente encontradas na fraÃÃo PL, que poderiam explicar as alergenicidades semelhantes. Nenhuma reaÃÃo de IgG1 foi detectada em quaisquer dos anti-soros testados. Conclui-se que as proteÃnas do lÃtex foram parcialmente susceptÃveis à proteÃlise em ensaios in vitro e, ou foram digeridas e absorvidas, ou foram absorvidas Ãntegras, quando ingeridas em ensaios in vivo. Eventos tÃxicos ou letalidade associados ao lÃtex, como descritos na literatura, nÃo estÃo relacionados com a fraÃÃo PL. A fraÃÃo PL produziu efeito proliferativo parcial sobre as cÃlulas mononucleadas, principalmente linfÃcitos e nÃo induziu resposta inflamatÃria aguda, quando administrada pela via oral. Efeitos alergÃnicos puderam ser detectados, por via subcutÃnea, com as fraÃÃes PL e BL, e nÃo foram observados por via oral. EvidÃncias para uma possÃvel tolerÃncia sistÃmica Ãs proteÃnas do lÃtex por via oral foram fornecidas. As proteÃnas do lÃtex podem atuar como imunoestimulantes. As proteÃnas do lÃtex permanecem uma fonte interessante de molÃculas biologicamente ativas que devem ser estudadas em detalhe quanto Ãs suas propriedades estruturais, funcionais e aplicativas. / The latex of the lactiferous plant Calotropis procera (Ait.) R. Br. is an important biologically active compound that displays relevant properties like antiinflammatory and antidiarrhea activities, altho ugh the latex has previously been shown to produce considerable toxic effects on animals. Another question is that it is not known yet whether the latex proteins from C. procera induce allergenic effects, just like the latex proteins from Hevea brasiliensis. The potential of the latex as a pharmaceutical, therefore, depends on separating the curative properties from the toxic and allergenic properties, but there has been a lack of scientific investigation in this area. The objectiv e of the present study was to investigate biochemical, toxicological and allergenic aspects of the latex from the plant C. procera, through the study of in vitro and in vivo digestibility, evaluation of acute and subchronic toxicity by oral route, and analysis of immune response induction by subcutaneous and oral route of its fractions. The latex was fractionated into three distinct fractions according to their water solubility and molecular size. The fractions were named as: latex proteins (LP), corresponding to the major latex proteins; dialysis proteins (DP), r epresenting low molecular size substances; and rubber latex (RL), which was highly insoluble in water. LP fraction was investigated in some biochemical aspects, like its protein profile by SDS- PAGE analysis and its amino acid composition determ ination. Latex proteins were also subjected to in vitro digestion with trypsin, chemotrypsin, pepsin and Streptomyces griseus protease and in vitro digestibility was evaluated by gel filtration and SDS-PAGE analysis. The in vivo digestibility of LP was analyzed when experimental animals ingested this fraction for 35 days. The volume uptake of LP was recorded daily and samples of fecal material from animals were collected, treated and submitted to SDS-PAGE analysis and radial double immunodifusion assays, with polyclonal antibodies raised against LP. In relation to toxicological aspects, LP fraction was orally administered to experimental animals for 35 days, to allow subchronic toxicity evaluation. Increases in body mass were recorded and blood samples were analyzed weekly. After the test period, the animals were sacrificed and a number of biochemical and physiological parameters determined. These included sera determin ations of blood glucose, total cholesterol, HDL-cholesterol, triglycerides, hepatic function tests (total proteins, albumin, alanine aminotransferase â ALT and aspartate aminotransferase â AST), renal function tests (urea and creatinin), total and differential leukocyte counts in blood and peritoneal fluid and analysis of sera proteins by SDS-PAGE. Animals had internal key orga ns (liver, kidneys, spleen, small intestine, large intestine, pancreas and stomach) dissected and the relative fresh masses were determined. In the acute toxicity evaluation, LP fraction was administered by oral route to experimental animals and behavioral changes in animals were also monitored. With reference to allergenic aspects, immunological responses of latex from C. procera were investigated by oral and subcutaneous routes in mice. Anti-sera against LP, DP and RL fractions were assayed for IgG and IgA titration by ELISA, while IgE and IgG 1 were accessed by passive cutaneous anaphylaxis (PCA) in rats and mice, respectively. Protein profiles of LP and RL fractions were analyzed by SDS-PAGE. Concerning biochemical aspects results, LP fraction possesses appreciable amount o f protein, low content of sulphurated amino acids (methionine and cysteine) a nd a considerable number of amino acids (arginine, lysine, phenylalanine and ty rosine) that represent cleavage sites to animal proteolytic enzymes studied. LP fraction was digested by the action of pepsin, trypsin and chemotrypsin as revealed by gel filtration and SDS-PAGE analyses. The full LP digestion was easily achieved by S. griseus protease treatment. Rabbit polyclonal antibodies raised against LP failed to detect cross-reactive molecules in faeces of experimental rats. Similar patterns of electrophoresis were observed for the negligible amounts of protein observed in the fecal materials of control and test animals. With relation to subchronic toxicity evaluation results, no death was observed during the experiment. Experimental and control animals presented similar growth rate and key organs exhibited similar relative fresh masses. Hepatic and renal functions, sera glycemic and lipidemic parameters were determined to be at normal levels. Likewise, the electrophoretic protein patterns of sera from untreated and treated animals exhibited quite similar profiles. Uptake of latex proteins did not induce acute inflammation into peritoneal cavity of rats as determined by the total and differential leukocytes counts. The most relevant result discovered was an apparent proliferative effect of the latex proteins upon blood lymphocytes that tended to increase, whilst neutrophils remained at normal level. It should be emphasized that the experimental rats were normal in their behavior, morphological and biochem ical aspects, indicating that it is unlikely that they were under any pathological or infectious condition. Therefore, the increment of lymphocytes population in the blood serum should be attributed to the staking effect of the latex proteins rather than any harmful event. LP fraction was unable of presenting acute toxicity in experimental animals, because no behavioral changes in animals were observed. Concerning allergenic aspects results, none of the fractions induced antibodies level increases when mice received latex fractions by oral route and thus, did not develop allergy. Nonetheless, anti-sera of mice sensitized with LP and RL by subcutaneous administration displayed considerable immunological response, while DP did not induce antibodies synthesis. IgG level augmented consistently against LP and RL, while IgA response was detected to LP solely. LP and RL induced very strong PCA reactions suggesting that both fractions would contain latex substances involved in allergenicity. Furthermore, protein analysis of LP and RL suggests that RL still retain residual proteins, co-precipitated with rubber, abundantly found in LP, that could explain its similar allergenicity. No IgG 1 reaction was detected in any of the anti-sera tested. It can be concluded that latex proteins were partially susceptible to digestive proteolysis when accessed by in vitro assays, and were digested and absorbed, or were absorbed in its intact form, when ingested and analyzed by in vivo tests. Toxic events or lethality associated with latex, as described in the literature, are not related to LP fraction. Latex proteins produced partial proliferative effect upon mononuclear cells, mainly lymphocytes and did not induce an acute inflammatory response, when adminis tered by oral route. Allergenic effects could be detected, by subcutaneous route, with LP and RL fractions, and were not observed by oral route. Evidences for an inducible tolerance acquired to latex proteins by oral route were provided. Latex proteins may act as immune stimulants. The proteins from the latex remain an interesting source of biologically active molecules that should be studied in detail for their structural, functional and applicative properties.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Cowpea [ Vigna unguiculata (L.) Walpers] is a crop of great importance for the Northeastern Brazil, where it represents one of the basic diet constituents of its population. Although cowpea yield has been crescent every year, the crop suffers from several biotic and abiotic stresses. Under stress conditions, excess reactive oxygen species (ROS) are produced as a result of the plant metabolism alterations. ROS accumulation in various tissues is harmful for nucleic acids, proteins and lipids. Thus, the search for mechanisms that act in the removal of ROS is of fundamental importance. The objectives of this present work were to purify a 2-Cys peroxiredoxins from cowpea leaves, named Vu-2-cys-prx, and characterize some of its biochemical, physiological and molecular properties. Vu-2-cys-prx is an antioxidant enzyme which acts by reducing H 2 O 2 and alkyl hydroperoxides producing water and alcohol, respectively. Vu-2-cys-prx was purified by ammonium sulfate fractionation (30-60%) followed by affinity and ion exchange chromatography on chitin and Resource Q, in that order. Purified Vu-2-cys- prx was able to reduce hydroperoxides using NADPH and DTT reducing power with the aid of thioredoxin. Vu-2-cys-prx presented as a 44 kDa/46 kDa protein as determined by SDS-PAGE and size exclusion chromatography on Superose 12 column, respectively. Under reducing conditions, Vu-2-cys-prx appeared as a 22 kDa protein, indicating that the 44/46 kDa protein is a homodimer linked intermolecularly by disulfide bonds. Vu-2- cys-prx has a pI of 4.7, but by two-dimensional electrophoresis, with and without DTT, it focused as several protein spots indicating different oxidation states. The NH 2 -terminal sequence of Vu-2-cys-prx showed 96% similarity with the peroxiredoxins of Phaseolus vulgaris and Populus tricocarpa and 94% similarity with those of Vigna radiata , Pisum sativum , Ricinus cummunis and Nicitiana tabacum . In addition, Vu-2-cys-prx has a highly conserved cystein residue at position 52 (Cys 52 ). Analysis by ESI-Q-TOF MS/MS showed a molecular mass of 28.622 kDa and pI of 5.18. The circular dichroism spectrum and deconvolution at pH 7.0 showed that the secondary structure of Vu-2-cys-prx is composed of 7.6% &#945; -helix, 39% &#946; -sheet, 22.1% &#946; -turn and 31% random coil. Vu-2-cis- prx was heat stable, with a protein melting point (Tm) of 74 ÂC, optimal activity at pH 7.0, and structural and functional changes under pH 3.0 and 9.0. Vu-2-cis-prx did not inhibit the spore germination of the phytopathogenic fungus Colletrotrichum gloeosporioides , but prevented DNA plamidial degradation by reactive oxygen species (H 2 O 2 ).The transcripts of Vu-2-cys-prx were highly expressed in roots, stems and leaves and the sequence of its corresponding gene showed 100% homology with the cowpea ESTs FG931548.1 and FG883990.1. The predicted amino acid sequence showed 2 conserved cystein residues, and several peptide domains typical of the 2-cys-prx subfamily members. Molecular modeling showed that the redox-active cystein, named peroxidatic cystein, is in a narrow solvent-accessible pocket formed by a loop-helix motif. Cys 52 was located in the first turn of the helix surrounded by Pro 45 , Thr 49 and Arg 128 that are conserved in all 2-cys-peroxiredoxins. Moreover, modeling showed that Vu-2-cys-prx could form oligomers under different oxidative states. In summary, this study describes, for the first time, the purification and characterization of a 2-cys- peroxiredoxin (Vu-2-cys-prx) from cowpea leaves that, similarly to other members of this family, may play a pivotal role in the protection of plant chloroplasts from photo- oxidative stress and thus damage to the photosynthetic apparatus. / O feijÃo-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walpers] à uma das culturas de grande importÃncia para a regiÃo Nordeste, pois representa um dos constituintes bÃsicos da dieta de sua populaÃÃo. Embora a produÃÃo venha aumentando anualmente no paÃs, a cultura enfrenta diversos tipos de estresses de natureza biÃtica e abiÃtica. Durante condiÃÃes de estresses, espÃcies reativas de oxigÃnio (ROS) sÃo produzidas acima da condiÃÃo fisiolÃgica, como consequÃncia de alteraÃÃes do metabolismo. O acÃmulo de ROS, em vÃrios tecidos, à nocivo para Ãcidos nuclÃicos, proteÃnas e lipÃdeos. Sendo assim, a busca de mecanismos que atuem na remoÃÃo e controle da produÃÃo dessas espÃcies reativas à de fundamental importÃncia. O presente trabalho teve como objetivos purificar e caracterizar, nos seus aspectos bioquÃmicos, fisiolÃgicos e moleculares, uma enzima antioxidante de folhas de feijÃo-de-corda, denominada de 2-cis-peroxirredoxina, que atua reduzindo o perÃxido de hidrogÃnio (H2O2) e hidroperÃxidos de alquil, produzindo Ãgua ou Ãlcool, respectivamente. A 2-cis-peroxirredoxina purificada de folha de V. unguiculata, nomeada de Vu-2-cis-prx, foi obtida por fracionamento com sulfato de amÃnio (30-60%), cromatografia de afinidade em matriz de quitina e cromatografia de troca iÃnica em Resource Q. A Vu-2-cis-prx foi capaz de reduzir hidroperÃxidos usando o poder redutor do NADPH e do DTT com auxÃlio do sistema tioredoxina. Apresentou massa molecular de, aproximadamente, 44 kDa/46 kDa, determinada por SDS-PAGE e cromatografia de exclusÃo molecular em coluna Superose 12, respectivamente. Jà em condiÃÃes redutoras, apresentou massa molecular de 22 kDa, indicativo de se tratar de uma proteÃna homodimÃrica, formada pelo estabelecimento de pontes dissulfeto intermoleculares. A Vu-2-cis-Prx apresentou pI de cerca de 4,7 e a anÃlise por eletroforese bidimensional, com e sem DTT, revelou que a Vu-2-cis-Prx foi focalizada em vÃrios spots protÃicos, indicando diferentes estados de oxidaÃÃo. Sua sequÃncia N-terminal revelou haver similaridade de 96% com a peroxirredoxina de Phaseolus vulgaris e de Populus tricocarpa, e de 94% com aquelas de Vigna radiata, Pisum sativum, Ricinus cummunis e Nicitiana tabacum, alÃm de um resÃduo de cisteÃna altamente conservado na posiÃÃo 52 (Cys52). AnÃlises por ESI-Q-TOF MS/MS demonstrou massa molecular e pI de 28,622 kDa/5,18, respectivamente. O espectro de dicroÃsmo circular e desconvoluÃÃo em pH 7,0 revelaram que a estrutura secundÃria à composta de 7,6% de ?-hÃlice, 39% de folha-?, 22,1% de volta-?, e 31% de padrÃo nÃo ordenado. A Vu-2-cis-Prx se comportou estÃvel ao calor e apresentou temperatura de desnaturaÃÃo (Tm) de 74 ÂC. Apresentou, ainda, Ãtimo de atividade em pH 7.0 e mudanÃas estruturais e funcionais em pH 3 e 9. Vu-2-cis-Prx nÃo foi capaz de apresentar atividade antifÃngica contra Colletrotrichum gloeosporioides, contudo foi capaz de prevenir a degradaÃÃo de DNA plamidial por ROS (H2O2). Os transcritos de Vu-2-cis-Prx foram altamente expressos em raÃzes, caules e folhas e a sequÃncia de seu gene demonstrou 100% de homologia com os ESTs FG931548.1 e FG883990.1 de feijÃo-de-corda, depositados no NCBI. A sequÃncia putativa de aminoÃcidos revelou 2 resÃduos de cisteÃna conservados e diversos domÃnios tÃpicos de membros da subfamÃlia de 2-cis-peroxirredoxinas. Modelagem molecular da Vu-2-cis-Prx revelou que o resÃduo de cisteÃna que participa do sÃtio-redox, denominada de cisteÃna peroxidÃsica, està em um bolso no qual o solvente tem acesso, sendo formado por um motivo âloop-hÃliceâ. A Cys52 foi localizada na primeira volta da hÃlice rodeada pelos aminoÃcidos Pro45, Thr49 e Arg128, que sÃo conservados em todas as 2-cis-peroxirredoxinas. AlÃm disso, a Vu-2-cis-Prx se mostrou capaz de formar oligÃmeros com diferentes estados de oxidaÃÃo. Em suma, foi descrito aqui, pela primeira vez, a purificaÃÃo e caracterizaÃÃo de uma 2-cis-peroxirredoxina de feijÃo-de-corda que, semelhantemente a outros membros desta famÃlia, deve desempenhar papel crucial na protecÃÃo dos cloroplastos de plantas contra o estresse foto-oxidativo prevenindo, assim, danos ao aparato fotossÃntÃtico.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Biofilmes sÃo comunidades de cÃlulas microbianas incluÃdas em uma matriz de material polimÃrico constituÃdo principalmente por polissacarÃdeos que se formam sobre uma superfÃcie biÃtica ou abiÃtica. A busca de agentes fitoquÃmicos com potencial anti-biofilme tornou-se uma Ãrea ativa na pesquisa cientifica. Lectinas sÃo proteÃnas que se ligam a carboidratos de forma especÃfica e reversÃvel, sendo capazes de aglutinar cÃlulas e/ou precipitar glicoconjugados. Devido à sua capacidade de ligar e reconhecer carboidratos especÃficos, as lectinas podem ser uma potente ferramenta para estudos de biofilmes. Estas proteÃnas podem se ligar Ãs bactÃrias ou impedir a interaÃÃo com a superfÃcie e, conseqÃentemente, diminuir a formaÃÃo de biofilme. Outras classes de biomolÃculas com grande aplicabilidade nesse tipo de comunidades bacterianas sÃo os metabÃlitos secundÃrios isolados de tecidos vegetais. A classe dos diterpenos, substancias bastante comuns em plantas, corresponde a uma classe de molÃculas naturais com propriedades antimicrobianas bem estabelecidas. Com isso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antibacteriana âin vitroâ de lectinas vegetais e do diterpeno casbano (DC), um metabÃlito secundÃrio isolado de Croton nepetaefolius, uma planta nativa do Nordeste brasileiro, contra diferentes microrganismos patogÃnicos. A concentraÃÃo mÃnima inibitÃria do crescimento planctÃnico foi realizado pela tÃcnica padrÃo de microdiluiÃÃo determinada atravÃs da densidade Ãptica a 640nm. Os ensaios de adesÃo inicial e formaÃÃo de biofilme foram realizados utilizando placas de microtitulaÃÃo de poliestireno com quantificaÃÃo da biomassa pelo mÃtodo de coloraÃÃo com cristal de violeta. Os ensaios foram realizados com diferentes concentraÃÃes dos produtos testados. Os resultados demonstraram que a lectina de Canavalia ensiformis apresentou um efeito antibacteriano, inibindo o crescimento planctÃnico de bactÃrias Gram- positivas. Outras lectinas apresentaram uma inibiÃÃo da adesÃo inicial, assim como na inibiÃÃo da formaÃÃo do biofilme de alguns microrganismos. O DC teve uma atividade biocida e bioestÃtica para a maioria das espÃcies testadas, sendo capaz de prejudicar tambÃm a formaÃÃo do biofilme. Em conclusÃo, estes resultados mostraram que as lectinas e diterpeno casbano, importantes classes de produtos naturais, podem desempenhar atividade antibacteriana promissora, sugerindo um possÃvel potencial terapÃutico para o tratamento farmacolÃgico de infecÃÃes associadas a diferentes agentes infecciosos. / Biofilms are communities of microbial cells embedded in a matrix of polymeric material consists mainly of polysaccharides that form on biotic or abiotic surface. The search for phytochemicals agents with potential anti-biofilm became an active area in scientific research. Lectins are proteins that bind carbohydrates of form specifically and reversibly, being able to agglutinate and precipitate cells and/or glycoconjugates. Due to their capacity to bind and recognize specific carbohydrates, lectins can be a potent toolin biofilm studies. These proteins can bind to the bacteria or prevent the interaction with the surface and consequently decrease biofilm formation. Other classes of biomolecules with applicability in this type of bacterial communities are the secondary metabolites isolated from plant tissues. The class of diterpenes, substances very common in plants, corresponds to a class of natural molecules with antimicrobial properties well established. T hus, the present study was to evaluate the antibacterial activity "in vitro" of plant lectins and diterpene casbano(CD), a secondary metabolite isolated from Croton nepetaefolius, aplant native to northeastern Brazil, against different pathogens microorganisms. The minimum inhibitory concentration, MIC, of planktonic growth was made by the standard techinique of microdilution determined by optical density at 640nm. Analisys of initial adhesion and biofilm formation were performed using polystyrene microtiter plates with quantification of biomass by the method of staining with crystal violet. The tests were performed with different concentrations of the products tested. The results showed that the lectin from Canavalia ensiformis had an antibacterial effect, inhibiting the planktonic growth of gram-positive bacteria. Other lectins showed an inhibition of initial adhesion and an inhibition of biofilm formation of some microorganisms. The CD had a biocidal activity and biostatic for most species tested, being able to affect also the formation of biofilm. In conclusion, these results showed that the lectins and casbane diterpene have a promising antibacterial activity, suggesting a possible application therapeutic for pharmacological treatment of infections associated with different infectious agents.

nÃo hà / EvidÃncias foram acumuladas sustentando o papel de lÃtex em proteger as plantas contra diferentes agressores, porÃm à sabido que plantas laticÃferas sÃo fortemente atacados pela lagarta monarca, incluindo Calotropis procera. O presente estudo descreve a atividade proteolÃtica relacionada com a herbivoria do quinto estÃgio da monarca, Dannaus plexippus L. (Lepidoptera: Danaidae). Extratos intestinais da monarca digeriram azocaseÃna, BANA e BApNA. A atividade proteolÃtica sobre azocaseÃna foi inibida pro E-64 e IAA, mas foi fortemente inibida por PMSF e Leupeptina inibidores de proteases serÃnicas. Extrato intestinal digeriu rapidamente as proteÃnas do lÃtex C. procera. No entanto, nÃo digeriu proteÃnas do lÃtex de Cryptostegia grandiflora e apenas uma banda protÃica do lÃtex de Plumeria rubra foi digerida, duas espÃcies livres de herbivoria monarca. Larvas alimentadas com dieta artificial contendo proteÃnas do lÃtex de C. procera nÃo foram afetadas e a taxa de crescimento foi ligeiramente melhor em relaÃÃo ao controle. Os perfis protÃicos dos fluidos laticÃferos extraÃdos de plantas saudÃveis e atacadas apresentaram diferenÃas visÃveis, com o aumento da detecÃÃo de uma proteÃna identificada como glicosÃdeo hidrolase. Danos mecÃnicos nas plantas nÃo foram suficientes para causar esta resposta. As atividades proteolÃtica, quitinolÃtica, de inibiÃÃo de protease e de enzimas antioxidantes nÃo foram alteradas em plantas atacadas pela monarca ou submetidas a danos mecÃnicos. Resultados obtidos neste trabalho fornecem informaÃÃes interessantes sobre a resistÃncia de monarca alimentadas com Calotropis procera e sugerem que a capacidade enzimas proteolÃticas da monarca de prontamente digerir proteÃnas do lÃtex pode, pelo menos em parte, explicar como os insetos superam as proteÃnas de defesa do lÃtex. / Evidence has been accumulated supporting the role of latex in protecting plants against different aggressors; however it is known that milkweeds are heavily attacked by monarch butterfly, including Calotropis procera. The present study describes the proteolytic activity related to the herbivory of 5th instars of the monarch butterfly, Dannaus plexippus L. (Lepidoptera: Danaidae) fed on diets containing latex proteins, and the proteolytic activity of larvae gut extract on latex proteins. Gut extracts of monarch digested azocasein, BANA and BApNA. The proteolytic activity on azocasein was inhibited by cysteine protease inhibitors such as E-64 and iodoacetamide but it was stronger inhibited by PMSF and leupeptin, serine proteases inhibitors. Gut extracts of monarch digested latex proteins promptly. However, gut extracts did not digest latex proteins from Cryptostegia grandiflora and only barely digested laticifer proteins from Plumeria rubra, two species free of monarch herbivory. Larvae fed on artificial diets containing latex proteins were not affected and growth rate was slightly better compared to control. The protein profile of latex proteins extracted of healthy and attacked plants exhibited visible differences with increasing detection of a protein identified as glycoside hydrolase in latex of attacked plants. The proteolytic, chitinolytc, inhibition protease and anti-oxidative activities not were altered in attacked or injured plants. Results present here give interesting information on resistance of monarch fed on Calotropis procera and suggest that the ability of monarch proteolytic enzymes to promptly digest latex proteins can at least in part explain how the insect overcomes defensive proteins of latex.