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Efeito do LPS sobre as nucleotidases : uma abordagem sobre a hidrólise de nucleotídeos

Vuaden, Fernanda Cenci January 2006 (has links)
Os nucleotídeos extracelulares são importantes moléculas sinalizadoras, sendo essenciais para o início e manutenção de reações inflamatórias. Estão envolvidos no recrutamento de leucócitos e mastócitos ao sítio inflamatório, na ativação da vasculatura e no prolongamento da ativação inflamatória. Durante o processo inflamatório, o ATP exerce uma série de efeitos. Está envolvido no desenvolvimento da inflamação por um conjunto de ações combinadas: liberação de histaminas de mastócitos, provocando produção de prostaglandinas e produção e liberação de citocinas de células do sistema imune. A adenosina é um potente mensageiro extracelular e tem sido demonstrado que sua produção é aumentada em condições metabólicas desfavoráveis. Os nucleotídeos extracelulares podem ser hidrolisados por uma variedade de enzimas localizadas nas membranas celulares ou presentes na forma solúvel no meio intracelular e/ou extracelular. Assim, as ectonucleotidases desempenham um importante papel no controle da homeostasia dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. Estas enzimas estão ancoradas na membrana plasmática e possuem seu sítio catalítico voltado para o meio extracelular. Entre elas, pode-se destacar a família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPases), a família das ecto-pirofosfatase/fosfodiesterase (E-NPP) e a ecto-5´- nucleotidase. Considerando-se o papel pró-inflamatório do ATP e que a adenosina pode atuar como um imunomodulador, neste estudo foi avaliado o efeito in vitro e in vivo do lipopolissacarídeo sobre as ectonucleotidases de linfócitos e plaquetas e as formas solúveis presentes em soro. Nos resultados in vitro, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e na hidrólise de ADP e AMP em plaquetas. Em soro, ocorreu uma diminuição da atividade da NPP. In vivo, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e um decréscimo na hidrólise de todos os nucleotídeos testados em soro. Esses resultados nos permitem observar que as ectonucleotidases apresentam suas atividades diferentemente alteradas in vitro e após a indução de endotoxemia pela administração de LPS. As alterações observadas sugerem que estas enzimas podem atuar na regulação dos níveis extracelulares de nucleotídeos e nucleosídeos em um modelo capaz de desencadear processos inflamatórios. / Extracellular nucleotides are important signalling molecules, which are essential for the beginning and maintenance of inflammatory reactions. They are involved on leukocytes and mastocytes recruitment to the inflammatory site, vascular activation and in the maintenance of inflammatory activation. During the inflammatory process, ATP exerts a number of actions. It has been involved in the inflammation development by a conjunct of actions: release of histamines from mastocytes, triggering prostraglandine production and release of cytokines from immune cells. Adenosine is a potent extracellular messenger and it has been shown that its production is increased under adverse metabolic conditions. Extracellular nucleotides can be hydrolyzed by a variety of extracellular enzymes located on cell membranes or present in soluble forms on the extra and/or intracellular milieu. Thus, ectonucleotidases play an important role in the control of homeostasis on nucleotide and nucleoside levels. These enzymes are anchored in the plasmatic membrane and their catalytic site is faced to the extracellular milieu. These enzymes comprise the ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolyse family (NTPDases), the ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family (ENPP) and the ecto-5´- nucleotidase. Considering the proinflammatory role of ATP and that adenosine can exert immunomodulatory actions, here we evaluate the in vitro and in vivo effect of lipopolysaccharyde on the ectonucleotidases from lymphocytes, platelets and blood serum of rats. In vitro results have shown an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and on ADP and AMP hydrolysis in platelets. In serum, it has been demonstrated a decrease on NPP activity. In vivo, we observed an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and a decrease in the hydrolysis of all nucleotides tested in serum. These results suggest that the ectonucleotidases present their activities differentially altered in vitro and after the induction of endotoxemia by LPS administration. The changes observed suggest that these enzymes can act in the regulation of extracellular nucleosides and nucleotides in a model able to trigger inflammatory process.
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Estudo da ação de um indutor peroxissomal em fibroblastos de pacientes com doença de Niemann-Pick tipo C

Beheregaray, Ana Paula Costa January 2002 (has links)
Resumo não disponível.
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Acido fosforico diluido associado a temperatura e pressão no pre-tratamento dobagaço de cana destinado a alimentação de ruminantes

Deschamps, Francisco Carlos January 1995 (has links)
Tese (doutorado)-Universidade Federal do Parana / Made available in DSpace on 2012-10-16T08:57:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0
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Estudos do processo de obtenção de proteinas celulares a partir de gas natural

Furigo Junior, Agenor January 1995 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal do Rio de Janeiro, Coordenação dos programas de Pos-Graduação em Engenharia / Made available in DSpace on 2012-10-16T09:27:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T19:43:29Z : No. of bitstreams: 1 100037.pdf: 2475809 bytes, checksum: 0c6e306d463478fbd53a6e6a607e0163 (MD5)
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Chalconas, imidas e derivados como moléculas bioativas

Corrêa, Rogério January 2009 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T22:16:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 267263.pdf: 2460883 bytes, checksum: de925adc7ffd8300f1031855c1454407 (MD5) / O presente trabalho descreve a síntese e atividade antinociceptiva de seis séries de chalconas, derivados imídicos e adutos de Diels-Alder, além da atividade antiparasitária de uma dessas séries. Todos os compostos foram testados em um modelo de nocicepção (os adutos foram avaliados, ainda, quanto à atividade antifúngica). A série inicial foi, também, avaliada quanto ao perfil antiprotozoário e apresentou excelentes resultados. Os adutos imídicos obtidos das reações de Diels-Alder mostraram fraca ação antinociceptiva, e razoável ação antifúngica. As chalconas e derivados apresentaram bom perfil analgésico, o que motivou a busca pela quantificação da relação estrutura-atividade. O primeiro método, para a quantificação da relação-estrutura atividade (QSAR), considerou os compostos pertencentes à primeira série de chalconas. Obtendo, para esta série, uma equação de QSAR com capacidade de predição de 72,2%,. Na segunda abordagem, foram comparadas as estruturas de seis séries de chalconas com relação aos resultados de atividade antinociceptiva para avaliação da QSAR. Essas séries foram divididas em dois grupos estruturais que possibilitaram a obtenção de mais duas equações de QSAR. Ambas apresentaram graus de predição muito bons, acima dos 70% (76,4% e 70,4%, respectivamente). Tais resultados revelam grande potencialidade de aplicação biológica dos compostos sintetizados.
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Investigação sobre a adaptação do inseto praga de cereais Tenebrio molitor a inibidores de proteinases digestivas

Alexandre, Daniel 25 October 2012 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T04:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 285029.pdf: 700907 bytes, checksum: 0b15ab2a05efe94828d644e1103f043c (MD5) / Nas larvas de Tenebrio molitor (verme do trigo) são encontrados variados tipos de proteinases digestivas serínicas e cisteínicas, quando alimentados com uma dieta controle de farinha de trigo. Quando alimentados com farinha do feijão comum (Phaseolus vulgaris), pelo menos cinco proteinases apresentam atividade mais elevadas, enquanto a expressão de três enzimas pré-existentes foi reprimida. A indução dessas proteinases ocorreu entre 30 min e 1 h após a alimentação. Aqui nós relatamos o fracionamento das proteinases envolvidas na adaptação de T. molitor a inibidores de proteinases em sementes de leguminosas incorporadas em uma dieta controle usando cromatografia de troca iônica e filtração em gel, seguida pela caracterização das enzimas com substratos e inibidores naturais e sintéticos. Os inibidores utilizados neste estudo (todos incorporados na concentração de 0,4% no farelo de trigo) foram: inibidor de tripsina de soja (STI), inibidor de tripsina e quimotripsina de soja (SBI), inibidor de tripsina de Adenanttera pavonina (ApTI) e o inibidor de tripsina de P. vulgaris (BTI). As atividades proteolíticas foram ensaiadas para azoalbumina, para os substratos fluorogênicos z-PR-MCA, z-RR-MCA e succinil-GGR-MCA e os substratos cromogênicos suc-AAPF-pNA e benzoil-R-pNA. As atividades também foram monitoradas através de zimogramas e de fracionamento em géis bidimensionais. Dos quatro inibidores testados, o ApTI foi capaz de inibir as enzimas proteolíticas majoritárias sem induzir enzimas insensíveis a este inibidor, enquanto os outros inibidores além de inibir as proteinases constitutivas causaram indução de um conjunto diferente de proteinases serínicas. Entre as proteinases induzidas, uma era de interesse particular, pois foi induzida após sessenta minutos após a ingestão de SBI, STI e BTI. Esta proteinase teve sua atividade caracterizada como uma quimotripsina através de análise eletroforética bidimensional seguida de sequenciamento por espectrometria de massas.
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Caracterização dos efeitos da Ilex paraguariensis e de compostos naturais e análogos na atividade anti-diabética

Pereira, Danielle Fontana January 2011 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Bioquímica / Made available in DSpace on 2012-10-25T20:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O uso de plantas medicinais representa uma alternativa aos tratamentos clássicos realizados com fármacos industrializados. Os compostos fenólicos, principalmente os flavonóides, têm apresentado propriedades farmacológicas importantes, representando um alvo terapêutico promissor. Precursores de flavonóides, como as chalconas, também tem despertado interesse dos pesquisadores quanto a possíveis efeitos na diabetes. O objetivo do presente trabalho foi estudar a atividade anti-hiperglicêmica de frações e compostos isolados e/ou sintetizados a partir das fontes naturais. Os flavonóides isolados foram avaliados na atividade das ?-glicosidases. A espécie Ilex paraguariensis foi estudada quanto às propriedades fitoquímicas e biológicas na curva de tolerância à glicose e em modelos de diabetes induzidos experimentalmente, conteúdo de glicogênio hepático e muscular, inibição das enzimas ?-glicosidases e propriedades anti glicação. O estudo dos análogos de chalconas compreende a avaliação da glicemia de animais normais hiperglicêmicos e diabéticos submetidos ao tratamento com estes compostos, conteúdo de glicogênio, efeito nas dissacaridases intestinais, além do estudo do mecanismo de ação dessas estruturas na captação de glicose pelo músculo sóleo, comparando com o efeito da insulina e secreção de insulina. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar machos entre 50-55 dias de idade. Para a realização da curva de tolerância à glicose as coletas de sangue foram realizadas nos tempos 0, 15, 30, 60 e 180 min. Nos ensaios para determinação do conteúdo de glicogênio os tecidos foram retirados dos ratos após 3 h do tratamento. As atividades das dissacaridases intestinais foram realizadas a partir de homogenatos da porção duodeno do intestino delgado. Os flavonóides rutina, quercetina, canferol e canferitrina reduziram a atividade das dissacaridases similarmente à acarbose, adicionando o intestino como alvo destes compostos na regulação da homeostasia da glicose. As infusões e frações da Ilex paraguariensis reduziram a glicemia de ratos hiperglicêmicos, sendo que a fração acetato de etila garantiu índices glicêmicos semelhantes aos verificados em ratos normoglicêmicos. A fração n-butanol aumentou o conteúdo de glicogênio do fígado de ratos tratados, inibiu as enzimas maltase, sacarase e lactase e a fração acetato de etila reduziu a atividade da enzima maltase. As frações da Ilex paraguariensis preveniram o processo de glicação em 7, 14 e 28 dias de incubação, sendo verificado em 28 dias conteúdo glicado quase inexistente para as frações e infusões. Finalmente, as frações promoveram a secreção de insulina em diferentes tempos. Sendo assim, é sugerido que a espécie Ilex paraguariensis atue de forma secretagoga de insulina e, alternativamente, reduz a elevação da glicemia através da diminuição da absorção de glicose intestinal. As chalconas quinolínicas foram estudadas na curva de dose apresentando efeito dose-dependente, onde a dose de 20 mg/ kg dos análogos atingiram níveis glicêmicos próximos aos valores basais. Adicionalmente, QC4 e QC11 promoveram a redução da glicemia de animais diabéticos, aumentaram a captação de glicose pelo músculo sóleo, além do conteúdo de glicogênio muscular e hepático, sugerindo múltiplos alvos de ação para estas quinolonas. QC10 reduz a atividade da enzima maltase. Com exceção da QC2, as demais quinolonas promoveram a secreção de insulina em diferentes tempos. Sendo assim, além da ação secretagoga de insulina, estes compostos também possuem potencial efeito insulinomimético.
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Efeito estimulatório da tiroxina no transporte de aminoácidos, captação de 45Ca2+ e na exocitose em células de sertoli de testículos de ratos imaturos

Zanatta, Ana Paula January 2011 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T23:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295248.pdf: 1309608 bytes, checksum: 877fe2be839c033011ce5cf1e14a4f2b (MD5) / A atividade secretória das células de Sertoli é dependente das funções dos canais iônicos e da síntese de proteínas e é essencial para a espermatogênese. Além das ações genômicas dos hormônios tireóideos (HT), ações não-genômicas da tiroxina (T4) e do 3,5,3'-L-triiodotironina (T3) são relatados em testículos de ratos imaturos. O objetivo deste trabalho foi estudar o mecanismo de ação do T4 no transporte de aminoácidos e investigar a função do receptor de integrina neste evento. Também, esclarecer se o efeito estimulatório do T4 no transporte de aminoácidos e a captação de Ca2+ culminam em secreção celular. Descrevemos que o efeito estimulatório do T4 no transporte de aminoácidos parece ser mediado por um receptor de integrina presente na membrana plasmática, já que o tetrac (inibidor da ação do T4 na integrina), assim como o peptídio RGD (bloqueador da ligação do T4 ao receptor ?v?3) foram capazes de anular o efeito do hormônio. Além disso, o T4 aumenta a captação de Ca2+ e o Ca2+ intracelular aumenta a atividade nuclear, mas esta ação genômica parece não influenciar na função secretória das células de Sertoli iniciada pela interação do T4 ao receptor de integrina. Além do mais, o citoesqueleto e os canais de cloreto do tipo ClC-3, envolvidos na secreção celular, contribuem para as respostas rápidas das células de Sertoli que culminam na exocitose. Uma importante conclusão deste trabalho é que as vias de sinalização ativadas pela interação do T4 ao receptor de integrina convergem para determinar respostas rápidas das células de Sertoli, como a exocitose. A compreensão do mecanismo pelo qual o T4 promove o evento rápido de secreção celular, e independe da atividade nuclear, é um campo de investigação e pode levar à identificação de novos alvos terapêuticos.
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Estudo dos efeitos do ATP extracelular e das ecto-nucleotidases no crescimento de gliomas

Marrone, Fernanda Bueno January 2005 (has links)
Glioblastomas são a forma mais comum de tumores cerebrais primários e, apesar do tratamento, os pacientes com estes tumores têm um prognóstico muito ruim. Os nucleotídeos da adenina (ATP, ADP e AMP) e também a adenosina possuem muitas funções importantes em condições fisiológicas e patológicas em vários organismos. O ATP é uma importante molécula sinalizadora no SNC, e os nucleotídeos e nucleosídeos podem induzir a proliferação de linhagens celulares de gliomas. Na invasão dos gliomas dois mecanismos podem liberar ATP: a morte excitotóxica do tecido adjacente e a lesão causada pela ressecção do tumor, que é o tratamento de primeira linha nestes casos. Neste estudo foram observados os efeitos do ATP extracelular na citotoxicidade em linhagens celulares de glioma humano U138 e na linhagem C6 de ratos, comparado com culturas organotícias de hipocampo. A citotoxicidade do ATP (0.1mM, 0.5mM, 5mM) foi medida usando os ensaios de incorporação de iodeto de propídeo e ensaio da lactato desidrogenase. O ensaio de caspases foi realizado para identificar à morte apoptótica. Os resultados mostraram que as células de gliomas apresentam resistência a morte induzida pelo ATP quando comparados com o tecido normal. Altas concentrações de ATP (5mM) induziram à morte celular após 24 h de tratamento em culturas organotípicas, mas não nas linhagens de gliomas estudados. Os nucleotídeos são hidrolisados muito lentamente pelas linhagens de gliomas, o que foi confirmado pela baixa expressão das enzimas NTPDases quando comparado com astrócitos. Portanto, para testar o papel do ATP extracelular no mecanismo de implante e crescimento dos gliomas, um milhão destas células de gliomas foram injetadas em 3µl de DMEM no estriado direito de ratos Wistar, e foi testada a co-injeção da enzima apirase no tratamento dos gliomas implantados. Após 20 dias, os ratos foram mortos e o cérebro foi seccionado e corado com hematoxilina e eosina. Nossos resultados mostraram que os ratos que sofreram co-injeção de apirase tiveram uma redução significativa no tamanho do tumor e menor índice mitótico (p<0,05), bem como menor imunodetecção para Ki67, VEGF e CD31 quando comparado com os grupos controle e controle apirase. A medida da hidrólise enzimática dos nucleotídeos no soro pode contribuir no diagnóstico de lesão celular em muitas condições patológicas. Com o objetivo de avaliar a atividade enzimática da ATPase, ADPase e AMPase in vivo, amostras de soro foram coletadas vinte dias após o implante dos gliomas em ratos. Os ratos com indução de gliomas mostraram um aumento significativo na hidrólise de ATP, ADP e AMP quando comparado com os respectivos controles. O tratamento com o fármaco temozolomida e com 10% dimetil sulfoxida diminuiu a hidrólise dos nucleotídeos. Nenhum dos animais incluídos neste trabalho apresentaram alterações significativas na atividade das enzimas alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase e fosfatase alcalina. Nossos dados indicam que o ATP pode ter uma função importante no crescimento do glioma, pois quando liberado pode induzir a morte celular do tecido normal ao redor do tumor, abrindo espaço para o rápido crescimento e invasão do tumor. As avaliações da hidrólise dos nucleotídeos da adenina no soro podem ajudar no acompanhamento da progressão dos tumores cerebrais.
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Efeito do LPS sobre as nucleotidases : uma abordagem sobre a hidrólise de nucleotídeos

Vuaden, Fernanda Cenci January 2006 (has links)
Os nucleotídeos extracelulares são importantes moléculas sinalizadoras, sendo essenciais para o início e manutenção de reações inflamatórias. Estão envolvidos no recrutamento de leucócitos e mastócitos ao sítio inflamatório, na ativação da vasculatura e no prolongamento da ativação inflamatória. Durante o processo inflamatório, o ATP exerce uma série de efeitos. Está envolvido no desenvolvimento da inflamação por um conjunto de ações combinadas: liberação de histaminas de mastócitos, provocando produção de prostaglandinas e produção e liberação de citocinas de células do sistema imune. A adenosina é um potente mensageiro extracelular e tem sido demonstrado que sua produção é aumentada em condições metabólicas desfavoráveis. Os nucleotídeos extracelulares podem ser hidrolisados por uma variedade de enzimas localizadas nas membranas celulares ou presentes na forma solúvel no meio intracelular e/ou extracelular. Assim, as ectonucleotidases desempenham um importante papel no controle da homeostasia dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. Estas enzimas estão ancoradas na membrana plasmática e possuem seu sítio catalítico voltado para o meio extracelular. Entre elas, pode-se destacar a família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPases), a família das ecto-pirofosfatase/fosfodiesterase (E-NPP) e a ecto-5´- nucleotidase. Considerando-se o papel pró-inflamatório do ATP e que a adenosina pode atuar como um imunomodulador, neste estudo foi avaliado o efeito in vitro e in vivo do lipopolissacarídeo sobre as ectonucleotidases de linfócitos e plaquetas e as formas solúveis presentes em soro. Nos resultados in vitro, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e na hidrólise de ADP e AMP em plaquetas. Em soro, ocorreu uma diminuição da atividade da NPP. In vivo, observamos um aumento na hidrólise dos nucleotídeos em linfócitos e um decréscimo na hidrólise de todos os nucleotídeos testados em soro. Esses resultados nos permitem observar que as ectonucleotidases apresentam suas atividades diferentemente alteradas in vitro e após a indução de endotoxemia pela administração de LPS. As alterações observadas sugerem que estas enzimas podem atuar na regulação dos níveis extracelulares de nucleotídeos e nucleosídeos em um modelo capaz de desencadear processos inflamatórios. / Extracellular nucleotides are important signalling molecules, which are essential for the beginning and maintenance of inflammatory reactions. They are involved on leukocytes and mastocytes recruitment to the inflammatory site, vascular activation and in the maintenance of inflammatory activation. During the inflammatory process, ATP exerts a number of actions. It has been involved in the inflammation development by a conjunct of actions: release of histamines from mastocytes, triggering prostraglandine production and release of cytokines from immune cells. Adenosine is a potent extracellular messenger and it has been shown that its production is increased under adverse metabolic conditions. Extracellular nucleotides can be hydrolyzed by a variety of extracellular enzymes located on cell membranes or present in soluble forms on the extra and/or intracellular milieu. Thus, ectonucleotidases play an important role in the control of homeostasis on nucleotide and nucleoside levels. These enzymes are anchored in the plasmatic membrane and their catalytic site is faced to the extracellular milieu. These enzymes comprise the ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolyse family (NTPDases), the ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family (ENPP) and the ecto-5´- nucleotidase. Considering the proinflammatory role of ATP and that adenosine can exert immunomodulatory actions, here we evaluate the in vitro and in vivo effect of lipopolysaccharyde on the ectonucleotidases from lymphocytes, platelets and blood serum of rats. In vitro results have shown an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and on ADP and AMP hydrolysis in platelets. In serum, it has been demonstrated a decrease on NPP activity. In vivo, we observed an increase on nucleotide hydrolysis in lymphocytes and a decrease in the hydrolysis of all nucleotides tested in serum. These results suggest that the ectonucleotidases present their activities differentially altered in vitro and after the induction of endotoxemia by LPS administration. The changes observed suggest that these enzymes can act in the regulation of extracellular nucleosides and nucleotides in a model able to trigger inflammatory process.

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