CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O resveratrol à um polifenol antioxidante natural encontrado especialmente na epicarpo da uva, em nozes e na romà o qual pode inibir a ativaÃÃo de mediadores prÃ-inflamatÃrio e citocinas na fase precoce de expressÃo do gene. Jà à bem conhecido que as lectinas sÃo proteÃnas de ligaÃÃo de aÃÃcares que atuam tanto como molÃculas prÃ- e anti-inflamatÃrias. Assim, o objetivo do presente trabalho foi o de verificar a ligaÃÃo de um composto de polifenol com uma lectina de Canavalia maritima (ConM) com base na sua capacidade para inibir processos prÃ-inflamatÃrios. Para alcanÃar este objetivo, a ConM foi purificada e cristalizada, uma soluÃÃo de 5 mM de resveratrol 5 mM foi utilizada para soaking durante 2 horas de incubaÃÃo. Os cristais obtidos pertencem ao grupo espacial monoclÃnico C2, o refinamento final resultou em um Rfactor de 16,0% e uma Rfree de 25,5%. Resveratrol se liga na rÃgida atravÃs de pontes de hidrogÃnio e interaÃÃo hidrofÃbica com aminoÃcidos que compÃem a quinta e sexta fita-β da folha-β rÃgida da ConM. A ConM complexada com o resveratrol inibiu a oxidaÃÃo do DPPH, mostrando atividade sinÃrgica entre a proteÃna e o ligante com a relaÃÃo mais eficaz de 2:3. Foi verificado ainda que o sÃtio de ligaÃÃo a carboidratos nÃo està diretamente relacionado à atividade antioxidante. à a interaÃÃo entre ConM e resveratrol, que indica o sinergismo destas duas molÃculas em agir como agentes sequestrantes de radicais livres que podem estarem relacionados a capacidade de reduÃÃo do processo inflamatÃrio atravÃs da inibiÃÃo de muitos mediadores prÃ-inflamatÃrios por lecitinas. / Resveratrol is a natural antioxidant polyphenol found especially in grape epicarp, walnuts, and pomegranates, which can inhibit the activation of proinflammatory mediators and cytokines at the early gene expression stage. It is well known that lectins are sugar-binding proteins that act as both pro- and anti-inflammatory molecules. Thus, the objective of this work was to verify the binding of a polyphenol compound with a lectin of Canavalia maritima (ConM) based on their ability to inhibit pro-inflammatory processes. To accomplish this, ConM was purified and crystallized, and resveratrol was soaked at 5 mM for 2 hours of incubation. The crystal belongs to the monoclinic space group C2, the final refinement resulted in an Rfactor of 16.0% and an Rfree of 25.5%. Resveratrol binds in the rigid β-sheet through H-bonds and hydrophobic interaction with amino acids that compose the fifth and sixth β-strands of the rigid β-sheet of ConM. The ConM and resveratrol inhibited DPPH oxidation, showing synergic activity with the most effective ratio of 2:3 and carbohydrate binding site is not directly related to antioxidant activity. It is the interaction between ConM and resveratrol that indicates the synergism of these two molecules in acting as free radicals scavengers and in reducing the inflammatory process through the inhibition of many pro-inflammatory events.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-03T12:52:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Breseghelo do Nascimento - 2010.pdf: 1202324 bytes, checksum: 56c8aee88b007b5162aa73419f965d0d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-04T11:34:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Breseghelo do Nascimento - 2010.pdf: 1202324 bytes, checksum: 56c8aee88b007b5162aa73419f965d0d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T11:34:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Breseghelo do Nascimento - 2010.pdf: 1202324 bytes, checksum: 56c8aee88b007b5162aa73419f965d0d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2010-08-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The fungus Sclerotinia sclerotiorum is among the most successful pathogens, omnivores, and without specific hosts, is considered one of the most important fungal pathogens in the world. Is distributed in all producing regions, temperate, subtropical or tropical. The fungus produces resistant structures called sclerotia on the surface and within tissues colonized, they returned to the soil with crop residues and are responsible for the survival of the fungus in the same area for up to eight years. The objectives of this study were to quantify the variability within and between populations of the fungus S. sclerotiorum in bean and soybean crops in different producing places of those varieties. 46 isolates were collected of S. sclerotiorum in six locals of grain production in different regions of Brazil. The sites chosen were Monte Carmelo-MG, Formosa-GO, Lucas do Rio Verde-MT, Montividiu-GO, Londrina, PR and Santo Antonio de Goiás-GO. All areas of the original host of the gathering was the bean with the exception of Londrina-PR in which the host was soybeans. A population study of the fungus through RAPD markers using 13 primers was carried out for the analysis of genetic variability of the fungus. In parallel, tests were also made for the the Mycelial compatibility groups among isolates and test production of hydrolytic enzymes. The statistical analysis was performed using the Arlequin software, which indicated variability among populations of 16.94% and 83.06% within populations. Were found 10 mycelial compatibility groups without specific populations .Enzyme activities performed indicated significant differences within the populations of all enzymes, a comparison between populations also showed significant differences among populations in polygalacturonases, 1,3-β-glucanase and xylanase. The results indicate a high level of variability within populations and low variability among populations. / O fungo Sclerotinia sclerotiorum está entre os fitopatógenos mais bem sucedidos, onívoros e sem hospedeiros definido, é considerado um dos patógenos fúngicos mais importantes no mundo. Está distribuído em todas as regiões produtoras, sejam elas temperadas, subtropicais ou tropicais. O fungo produz estruturas de resistência denominadas escleródios, na superfície e no interior dos tecidos colonizados. Estes retornam ao solo com os resíduos da cultura e são responsáveis pela sobrevivência do fungo na mesma área por até 8 anos. Os objetivos desse trabalho foram quantificar a variabilidade intra e inter populacional do fungo S. sclerotiorum em culturas de feijão e soja de diferentes localidades produtoras dessas espécies. Para isso foram coletados 46 isolados de S. sclerotiorum de seis locais de produção de grãos em diferentes regiões do Brasil. Os locais escolhidos foram Monte Carmelo-MG, Formosa-GO, Lucas do Rio Verde-MT, Montividiu-GO, Londrina-PR e Santo Antonio de Goiás-GO em todas as áreas o hospedeiro de origem da coleta foi o feijoeiro, com exceção de Londrina-PR, na qual o hospedeiro foi soja. Foi feito um estudo populacional do fungo através de marcadores do tipo RAPD com a utilização de 13 primers para a análise da variabilidade genética do fungo. Paralelamente também foram feitos testes para a formação de grupo de compatibilidade micelial entre os isolados e testes de produção de enzimas hidrolíticas. A análise estatística dos dados se deu através do programa Arlequin, o qual indicou variabilidade de 16,94% entre populações e 83,06% dentro de populações. Foram formados 10 grupos de compatibilidade micelial sem especificidade de populações. As atividades enzimáticas realizadas indicaram diferenças significativas dentro de populações de todas as enzimas. A comparação entre populações também indicou diferenças significativas entre populações nas enzimas poligalacturonases, 1,3-β-glucanase e xilanase. Os resultados indicaram baixo nível de variabilidade entre populações e alta variabilidade dentre as populações.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-26T11:14:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-26T11:15:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T11:15:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-03-20 / Paracoccidioides spp. are pathogens of Paracoccidioidomycosis a systemic mycosis that affects about 10 million people in endemic regions. The incidence of the disease is restricted to Latin America and most cases are found in Brazil. The disease is characterized by chronic granulomatous inflammation, and patients may present with a wide spectrum of clinical manifestations. After inhalation of conidia, the installation of fungus in the lungs, which subsequently through hematogenous route may cause an infection spreads. Hematogenous fungal infections represent a serious health problem, involving hospitalized patients with predisposing conditions that lead to a high mortality rate. Fungemia corresponds to isolation of fungi in the bloodstream and occurs mainly in immunocompromised patients. Yeasts have been increasingly present as etiological agents fungemia including Candida albicans and other species such as Candida non- albicans. In this study, Paracoccidioides spp. was isolated from a case of fungemia. So far this is the first molecular study of a case of fungemia caused by this fungus. In order to identify the molecular factors associated with this specific phenotype, a comparative proteomic analysis was performed. The samples were analyzed by nanoscale liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (nanoUPLC - EPM), where the soluble proteins of fungemia were compared with strain Pb01 -like proteins. 206 proteins regulated positively and negatively regulated 183 were identified. Among the positively regulated protein, 22 % were related to cellular metabolism, 15 % related to protein synthesis and 12% energy. Of phenotypic characterization tests, which showed a better adaptation of isolated Pb9840 blood were also conducted. With this work we propose that the isolated Pb9840 developed mechanisms to better installing the bloodstream and causing the fungemia. The study of the proteomic profile of this isolate may elucidate the virulence mechanisms used by this fungus during fungemia and / or hematogenous spread. / Paracoccidioides spp. são agentes etiológicos da Paracoccidioidomicose uma micose sistêmica que afeta cerca de 10 milhões de pessoas nas regiões endêmicas. A incidência da doença é restrita à América Latina e a maioria dos casos são encontrados no Brasil. A doença é caracterizada por uma inflamação granulomatosa crônica, e os pacientes podem apresentar um amplo espectro de manifestações clínicas. Após a inalação de conídios, ocorre a instalação do fungo nos pulmões, que posteriormente através de rota hematogenica pode causar uma infecção disseminada. Infecções fúngicas hematogênicas representam um grave problema de saúde, envolvendo pacientes hospitalizados com condições predisponentes que levam a uma alta taxa de mortalidade. Fungemia corresponde ao isolamento de fungos na corrente sanguínea e ocorre principalmente em pacientes imunossuprimidos. As leveduras têm sido cada vez mais presente como agentes etiológicos de fungemia, incluindo Candida albicans e outras espécies, como Candida não-albicans. No presente estudo, Paracoccidioides spp. foi isolado de um caso de fungemia. Até o momento esse é o primeiro estudo molecular de um caso de fungemia causado por este fungo. A fim de identificar os fatores moleculares associados a este fenótipo específico, uma análise proteômica comparativa foi realizada. As amostras foram analisadas por cromatografia líquida de nanoescala acoplada a espectrometria de massa em tandem (nanoUPLC - EPM), onde as proteínas solúveis da estirpe fungemia foram comparadas com proteínas do Pb01. Foram identificadas 206 proteinas reguladas positivamente e 183 reguladas negativamente. Dentre as proteínas reguladas positivamente 22% estavam relacionadas com o metabolismo celular, 15% relacionadas com síntese proteica e 12% produção de energia. Foram realizados também testes de caracterização fenotípica, que demonstraram uma melhor adaptação do isolado Pb9840 ao sangue. Com o presente trabalho podemos propor que o isolado Pb9840 desenvolveu mecanismos para melhor de instalar na corrente sanguínea e assim causar o quadro de fungemia. O estudo do perfil proteômico deste isolado poderá elucidar os mecanismos de virulência utilizados por este fungo durante fungemia e / ou disseminação hematogênica.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Atualmente à crescente a busca por uma alimentaÃÃo mais saudÃvel e com isso surge a possibilidade da inclusÃo de frutos e hortaliÃas nos hÃbitos alimentares. A manga à um fruto bastante consumido e produzido no Brasil e os minimamente processados (MP) representam praticidade porque sÃo produtos que jà vem prontos para consumo, sem perda de tempo com operaÃÃes de descasque, corte, etc. Durante as etapas de processamento hà um estresse dos tecidos, que leva à geraÃÃo de radicais livres que podem causar a degradaÃÃo do fruto, por isso, se faz necessÃrio a utilizaÃÃo de tratamentos capazes de minimizar as perdas de qualidade. Nesse contexto surge o ultrassom (US) que à uma tecnologia emergente com potencial de exploraÃÃo e utilizaÃÃo. As ondas ultrassÃnicas provocam principalmente a compressÃo e expansÃo dos tecidos, cujos resultados vÃo depender da matriz alimentar. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do US na qualidade de mangas âTommy Atkinsâ MP, analisando o sistema de defesa antioxidante, componentes do metabolismo oxidativo e a atividade de enzimas hidrolÃticas da parede celular. Para tanto, as amostras foram expostas à sonicaÃÃo na frequÃncia de 25 kHz por 30 minutos em banho de US. Observouâse que o tratamento causou uma reduÃÃo na acidez titulÃvel (AT) e nos sÃlidos solÃveis (SS), porÃm apÃs sete dias de armazenamento a 4 oC, manteve elevada a relaÃÃo SS/AT (46,54). Os teores de aÃÃcares tambÃm foram reduzidos (15%), bem como Ãgua foi incorporada (4,6%), o que mostra uma modificaÃÃo na estrutura celular, que pode ser comprovada pelo decrÃscimo na firmeza apÃs sete dias (de 241,73 para 139,38 N) e aumento na atividade da pectinametilesterase. A cor foi degradada apÃs sete dias (∆L = 3,24 e ∆C = 4,42), resultando em escurecimento, contudo as amostras controle tambÃm escureceram. Em relaÃÃo ao sistema antioxidante, nÃo houve grandes modificaÃÃes, tendo em vista ser um fator benÃfico se comparado a outros mÃtodos de conservaÃÃo, com destaque apenas para a perda de vitamina C (de 328,10 para 190,18 mg Ãcido ascÃrbico/kg matÃria fresca (MF)). Houve ainda reduÃÃo na peroxidaÃÃo de lipÃdios de membrana com o tratamento (de 23,58 para 18 ηmol MDA/g MF). Concluiâse com base neste estudo, que a aplicaÃÃo de US em mangas âTommy Atkinsâ MP tem seus pontos negativos na firmeza e na cor, contudo, nÃo afetou drasticamente os sistemas antioxidante enzimÃtico e nÃo enzimÃtico, alÃm de levar a uma reduÃÃo no teor de aÃÃcar. Todavia, fica claro a necessidade de explorar esta tecnologia na fisiologia pÃsâcolheita de frutos, assim como, otimizar e combinar a tÃcnica com outros processos que diminuam seus efeitos negativos e favoreÃam os positivos. / Currently is growing to search for healthier eating with that comes the possibility for inclusion of fruits and vegetables in the diet. Mango fruit is widely consumed and produced in Brazil and fresh â cut (FC) represents convenience because them are products that comes ready for consumption without loss of time with operations peeling, cutting, etc., and these steps there is a stress tissue leading to generation of free radicals that can lead to a degradation fruit, so it is necessary a type of processing that minimize the loss of quality and yet ensures the safety of the final product. In this context arises the ultrasound (US) that is an emerging technology that has potential for exploitation and utilization. The ultrasonic waves cause primarily tissue compression and expansion, whose the results will depend on the food matrix. This study aimed to evaluate the effect of US in quality of FC 'Tommy Atkins' mangoes, analyzing the antioxidant defense system, metabolism oxidative compounds and the activity of cell wall hydrolytic enzymes. The samples were exposed to 25 kHz frequency sonication for 30 minutes in US bath. It was observed tha t the treatment caused a reduction in titratable acidity (TA) and soluble solids (SS), but after seven days of storage at 4 o C, maintaining the high SS/TA ratio (46.54). The sugars was also reduced (15%) and water incorporated (4.6%), which indicates a change in cell structure, that can be evidenced by decreased in firmness after seven days (from 241.73 to 139.38 N) and increased activity of pectinmethylesterase. The color wa s degraded after seven days (ΔL = 3.24 and ΔC = 4.42), resulting in darkening, but the control samples also darkened. In relation to the antioxidant system, there were no significant changes in order to be a beneficial factor compared to other preservation methods, particularly only to the loss of vitamin C (328.10 to 190.18 mg ascorbic acid/kg weight fresh (WF), still there was a reduction in lipid peroxidation of membrane (from 23.58 to 18 η mol MDA/g WF). It concluded to base on this study, FC 'Tommy Atkins' mango has its drawbacks on firmness and color, however, did not affect severely the enzymatic and non â enzymatic antioxidant x systems, and lead to a reduction in sugar content. However, it is clear the necessitate to explore the application of this technology in post harvest fruits physiology as well as to optimize and to combine the technique with other processes that reduce their negative effects and promote the positives.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Malpighia emarginata DC. conhecida como acerola à um fruto bastante consumido no Brasil por seu alto teor de antioxidante. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade das enzimas antioxidantes (SOD e GPx) nos eritrÃcitos e a peroxidaÃÃo lipÃdica em fÃgado de camundongos alimentados com suco de acerola (clone BRS 238-frutacor) e submetidos a uma sessÃo exaustiva de nataÃÃo. Determinou-se no suco e na polpa de acerola teores de antioxidantes. Ãgua, suco de acerola, ou Ãcido ascÃrbico foram administrados (via intragÃstrica) aos camundongos por 30 dias consecutivos. Os animais foram distribuÃdos em 4 diferentes grupos (n=10): Ãgua, Ãgua+exercÃcio, suco+exercÃcio e Ãcido ascÃrbico+exercÃcio. ApÃs 30 os dias, os camundongos foram submetidos a uma sessÃo exaustiva de nataÃÃo e uma hora depois retirou-se uma alÃquota de sangue para a anÃlise da atividade das enzimas SOD e GPx nos eritrÃcitos e em seguida foram eutanasiados e retirados os fÃgados para anÃlise da peroxidaÃÃo lipÃdica. Os valores dos antioxidantes: antocianinas, flavonÃis, vitamina C, polifenÃis e atividade antioxidante total para suco e polpa que foram respectivamente: 18,9  0,004 mg/ 100 g e 34,6  0,002 mg/ 100 g; 11,3  0,003 mg/ 100 g e 22,3  0,00 mg/ 100 g; 718  0,033 mg/ 100 g e 1.453  0,088 mg/100 g; 659  4 mg/100 g e 1.153,34  0 mg/100 g; e 18,5  1,5 ÂM Trolox/ mL e 36,24  0,65 ÂM Trolox/ mL. A atividade das enzimas SOD e GPx nos grupos Ãgua, Ãgua+exe, suco+exe e AA+exe variaram em U/g Hb respectivamente de 875,7, a 873,7; 920 a 447,4; 52,5 a 55,78 e 54,34 a 68,32. Os resultados mostram que tais atividades nÃo foram alteradas mostrando que o exercÃcio nÃo gerou danos oxidativos e que o suco de acerola nÃo influenciou na atividade dessas enzimas. O estresse oxidativo basal foi atenuado pelo Ãcido ascÃrbico quando determinou-se a atividade da SOD. A peroxidaÃÃo lipÃdica hepÃtica, nos grupos Ãgua, Ãgua+exe, suco+exe e AA+exe em nmol/g de tecido foi respectivamente de 179,5, 227,2, 158,8 e 188,7 revelando estresse em resposta ao exercÃcio e o tratamento com suco de acerola induziu maior proteÃÃo que o grupo controle. Conclui-se que os danos oxidativos gerado pelo exercÃcio parecem depender do tecido alvo, das enzimas avaliadas e do animal objeto de estudo. / Malpighia emarginata DC. known as âAcerolaâ, is a widely consumed fruit in Brazil for its high antioxidant content. The objective of this study was to evaluate the activity of antioxidant enzymes (SOD and GPx) in erythrocytes and lipid peroxidation in livers of mice fed with acerola juice (BRS 238-frutacor) and subjected to exhaustive swimming session. The levels of antioxidants were determined in the juice and in the pulp. Water, acerola juice or ascorbic acid were administered (intragastrically) to mice for 30 consecutive days. The animals were divided into 4 groups (n = 10): water, water + exercise, exercise and juice ascorbic acid + exercising. After 30 days, the mice were subjected to an exhaustive session of swimming and an hour later an aliquot of blood was withdrawn for analysis of the enzymes SOD and GPx in erythrocytes. Then, the mice were euthanized and had their livers removed for analysis of lipid peroxidation. The values of antioxidant: anthocyanins, flavonols, vitamin C, polyphenols and total antioxidant activity for juice and pulp were respectively: 18.9  0.004 mg / 100 g, 34.6  0.002 mg / 100 g, 11.3  0.003 mg / 100 g and 22.3  0.00 mg / 100 g, 718  0.033 mg / 100 g and 1453  0.088 mg/100 g, 659  4 mg/100 g and 1153.34  0 mg/100 g, and 18, 5  1.5 mM Trolox / ml and 36.24  0.65 mM Trolox / mL. The activity of the enzymes SOD and GPx groups in water, exe + juice + and AA + exe exe ranged in U / g Hb, respectively, 875.7, 873.7, 920, 447.4 and 52.5, 55, 78, 54.34 and 68.32. The results show that such activities were not changed showing that exercise did not cause oxidative damage and that the acerola juice did not influence the activity of these enzymes. The basal oxidative stress was attenuated by ascorbic acid when it was determined the activity of SOD. The hepatic lipid peroxidation in groups water, exe + juice + and AA + exe in nmol / g tissue were respectively 179.5, 227.2, 158.8 and 188.7, revealing stress in response to exercise and treatment with acerola juice induced greater protection than the control group. It is concluded that oxidative damage generated by the exercise seems to depend on the target tissue, enzymes evaluated and the animal under study.

As células estreladas hepáticas (HSCs) são a principal fonte de componentes de matriz extracelular em doenças crônicas do fígado e, por esta razão, exercem um papel fundamental no desenvolvimento e na manutenção da fibrose hepática. Os nucleotídeos e nucleosídeos são moléculas sinalizadoras que regulam diversos processos no fígado e têm um importante papel na patogênese da fibrose hepática. As ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase fosfodiesterases (E-NPPs), ecto-5’-nucleotidase (eNT/CD73) e a fosfatase alcalina tecido inespecífica (TNALP) são enzimas localizadas na superfície celular que regulam a concentração dos nucleotídeos no meio extracelular e, desse modo, modulam os efeitos biológicos mediados por eles via ativação dos receptores P1 e P2. Assim, neste estudo nós comparamos o metabolismo extracelular de nucleotídeos e o nível transcricional das ectoenzimas em HSCs quiescentes e ativadas usando uma linhagem de células estreladas hepáticas murina GRX. Estas células expressam o fenótipo miofibroblástico em meio basal e o tratamento com retinol ou indometacina induz a mudança das células GRX para o fenótipo quiescente das HSCs. Os dois fenótipos das células GRX expressam as NTPDase3 e 5, NPP1, 2 e 3, ecto-5’- nucleotidase e TNALP. Entretanto, apenas as HSCs ativadas expressam a NTPDase6. Nas HSCs quiescentes, a hidrólise de nucleosídeos trifosfatados foi significativamente mais alta e foi correlacionada com o aumento na expressão do mRNA da Entpd3 e ENPP3. Os nucleosídeos difosfatados foram hidrolisados de maneira similar pelos dois fenótipos das células GRX e esta atividade foi associada com o aumento da expressão do mRNA da Entpd5 nas células quiescentes e com a expressão da Entpd6 apenas nas HSCs ativadas. A atividade AMPásica foi maior nas células quiescentes do que nas células ativadas e foi relacionada com o aumento da atividade e da expressão do mRNA da ecto-5’-nucleotidase. O tratamento com retinol também envolve a ativação transcricional da TNALP. Para analisar o papel fisiológico da eNT/CD73 nas HSCs, o mRNA e a expressão desta proteína foram reduzidos nas células GRX utilizando a técnica de RNAi. O knockdown da eNT/CD73 aumentou a expressão do mRNA da TNALP e do colágeno I e alterou a adesão e a migração celular através de um mecanismo independente da hidrólise de nucleotídeos. Nós também avaliamos o efeito da adenosina na regulação de marcadores de ativação das HSCs. Este nucleosídeo diminuiu a proliferação, a migração, a transcrição de colágeno I e das metaloproteinases 2 e 9 e diminuiu a transcrição da eNT/CD73. As diferenças na atividade e expressão das ectonucleotidases entre os dois fenótipos das células GRX sugerem que estas enzimas modulam a concentração de nucleotídeos/nucleosídeos e geram efeitos distintos na sinalização purinérgica nos dois fenótipos e podem ser importantes alvos na regulação das funções das HSCs. / Hepatic stellate cells (HSC) are recognized as a primary cellular source of matrix components in chronic liver disease and, therefore, play a critical role in the development and maintenance of liver fibrosis. Nucleotides and nucleosides are signaling molecules that regulate a variety of activities within the liver and play a role in the pathogenesis of hepatic fibrosis. Ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases (E-NPPs), ecto- 5’-nucleotidase (eNT/CD73) and tissue non-specific alkaline phosphatase (TNALP) are enzymes that are located at the cell surface and regulate the concentration of extracellular nucleotides, thereby modulating their biological effects by the activation of P1 and P2 receptors. Thus, in the study we compared the extracellular metabolism of nucleotides and transcriptional levels of ectoenzymes in activated and quiescent HSC of the mouse hepatic stellate cell line GRX. This cell line expresses a myofibroblast phenotype in basal medium and both retinol and indomethacin treatment induced a phenotypic change of GRX cells to quiescent HSC. Two phenotypes of GRX cells expressed NTPDase3 and 5, NPP1, 2 and 3, ecto-5’-nucleotidase/CD73 and TNALP. However, only activated HSC expressed NTPDase6. In quiescent HSC, the hydrolysis of triphosphonucleosides was significantly higher and was related to an increase in Entpd3 and ENPP3 mRNA expression. The diphosphonucleosides were hydrolyzed at a similar rate by two phenotypes of GRX cells and this hydrolysis was associated with an up-regulation of Entpd5 mRNA expression in quiescent-like HSC, whilst Entpd6 mRNA expression was observed only in activated HSC. The AMPase activity in quiescent HSC was higher than myofibroblasts and was related to an increase in ecto-5’-nucleotidase activity and its mRNA expression. The treatment with retinol also involves transcriptional activation of TNALP. To analyze the biological significance of eNT/CD73 in HSC, the expression of eNT/CD73 mRNA and protein was reduced in GRX cell line using the technique of RNAi. ENTCD73 knockdown leads to an increase in mRNA expression of TNALP and collagen I, and a clear alteration of cell adhesion and migration by a mechanism not dependent of changes in nucleotide metabolism. We also tested the effect of adenosine on the regulation of activation markers of in HSCs. This nucleotide decreased proliferation, migration, transcription of collagen I and matrix metalloproteinases 2 e 9 and increased transcription of eNT/CD73. The differential ectonucleotidases activities and expressions in two phenotypes of GRX cells suggest that these enzymes modulate the concentration of nucleotides/nucleosides and affect purinergic signaling differently in the two phenotypes and may play a role in the regulation of HSC functions.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389155.pdf: 120483 bytes, checksum: 667f3c4666244e3dd47637233492ec4f (MD5) Previous issue date: 2007-01-19 / Diferentes estudos t?m demonstrado que a Hsp70 de Mycobacterium tuberculosis (TBHsp70) pode induzir a remiss?o de modelos de doen?as auto-imunes. Entretanto, o mecanismo pelo qual esta prote?na exibe propriedades imunorregulat?rias necessita ser elucidado. Neste estudo, nos perguntamos se a TBHsp70 poderia suprimir a rejei??o em um sistema de transplante alogeneico de tumor. N?s observamos que enquanto camundongos BALB/c (H-2d) rejeitam melan?citos B16F10 (H-2b) implantados de forma subcut?nea, animais BALB/c tratados com TBHsp70 n?o rejeitam o enxerto de forma similar aos tratados com Dexametasona (DEXA). O tratamento com TBHsp70 inibiu a prolifera??o de c?lulas T induzidas por mit?geno no linfonodo drenante e, finalmente, c?lulas T CD4, CD25 e Foxp3 foram observadas no s?tio de enxertia e nos linfonodos drenantes de animais tratados com esta prote?na. Nossos resultados apontam para um papel imunossupressor da TBHsp70, e sugerem que a indu??o de c?lulas T regulat?rias poderia ser o mecanismo pelo qual esta prote?na suprime a rejei??o ao enxerto

Orientador: Ana Maria Rodrigues Cassiolato / Banca: Katia Luciene Maltoni / Banca: Marcelo Andreotti / Banca: Edson Luiz Souchie / Banca: Márcia Helena Scabora / Resumo: Processos como a construção da Usina Hidrelétrica de Ilha Solteira resultaram em um conjunto de problemas ambientais, como a extinção de espécies da fauna e flora, além de contribuir para mudanças climáticas, erosão intensa do subsolo/solo e com consequente assoreamento de cursos d'água. Condições como esta exigem alternativas para uma melhor ocupação e possível recuperação para minimização dos impactos negativos gerados. Para reverter um processo como este, são necessárias intervenções por meio de estratégias como a revegetação e uso de fontes alternativas de matéria orgânica e micro-organismos simbiontes. Assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a avaliar a implantação do pinhão-manso em solo degradado inoculado e acrescido de macrófitas, cinza derivada da queima do bagaço da cana-de-açucar e hidrogel. O experimento foi conduzido na Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão (FEPE) da UNESP - Universidade Estadual Paulista, Campus de Ilha Solteira, no município de Selvíria-MS, em uma área com solo degradado, oriunda da construção da Usina Hidroelétrica de Ilha Solteira. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, ocupando cada um deles uma área de 960 m2 (30 x 32m), composto por 16 linhas com 10 plantas por linha e como área útil foram utilizadas as 14 linhas internas e 8 plantas por linha. O esquema utilizado foi de um fatorial 2 x 2 x 4, ou seja, 2 tratamentos de inoculação (com e sem solo de Cerrado preservado contendo micro-organismos do solo, incluindo fungos micorrízicos arbusculares (FMA), 2 tratamentos de hidrogel (com e sem) e 4 tratamentos de cova (macrófitas, cinza, macrófitas + cinza e controle sem resíduo), com 4 repetições (blocos), sendo avaliadas 5 plantas por tratamento, por bloco. Solo de Cerrado preservado foi utilizando como fonte de micro-organismos, incluindo FMA. O plantio do pinhão-manso foi realizado em dezembro de 2010 e, ao longo de 12 meses, o ... / Abstract: Processes such as the construction of the Ilha Solteira Hydroelectric Plant resulted in several environmental problems, such as the fauna and flora species extinction, as well as contributed to climate change, subsoil / soil severe erosion and consequent water siltation. Conditions such as this requires a better alternative to occupation and, possible, to recovery, and then, to minimize negative impacts. To reverse such a process, interventions are needed through strategies such as revegetation and use of alternative sources of organic matter and symbiotic micro-organisms. Thus the aim of this study was to evaluate the deployment of jatropha on degraded soil and inoculated, that received macrophytes, ash (derived from burning bagasse from sugar cane) and hydrogel. The experiment was conducted at the Farm for Teaching, Research and Extension (FEPE), UNESP - Universidade Estadual Paulista, Ilha Solteira Campus, in Selvíria - MS, in an area with degraded soil, arising from construction of the Ilha Solteira Hydroelectric Plant. The experimental design was randomized blocks, each one occupying an area of 960 m2 (30 x 32m), comprising 16 rows with 10 plants per row, which on with 14 internal rows 8 plants per row. The design was a 2 x 2 x 4 factorial, ie 2 inoculation treatments (with and without preserved Cerrado soil containing soil microorganisms, including mycorrhizal fungi (AMF), 2 hydrogel treatments (with and without) and 4 residues treatments (macrophytes, ash, macrophytes+ash and control without residue), with 4 replications (blocks), and 5 evaluated plants per treatment, per replicates. Preserved Cerrado soil was used as source of micro- organisms, including FMA. The planting of Jatropha was held in December 2010 and, over 12 months. The subsoil were collected at a depth of 0-0.10 m. Evaluations were performed at 30, 120, 240 and 360 days after planting (DAP) for soil chemical properties, spore numbers, percentage of root ... / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-12-04T21:15:19Z No. of bitstreams: 1 AnaCarolinaPereiraRocha_DISSERT.pdf: 5861142 bytes, checksum: 39f089afa48682089f4ef1bb8949e060 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-12-08T22:36:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AnaCarolinaPereiraRocha_DISSERT.pdf: 5861142 bytes, checksum: 39f089afa48682089f4ef1bb8949e060 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T22:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaCarolinaPereiraRocha_DISSERT.pdf: 5861142 bytes, checksum: 39f089afa48682089f4ef1bb8949e060 (MD5) Previous issue date: 2017-09-01 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A diferencia??o das c?lulas-tronco mesenquimais humanas (CTMh) em osteoblasto segue um programa espec?fico de express?o g?nica, comprometendo-se inicalmente sob a influ?ncia das vias Wnt (Wingless pathway) e das BMPs (bone morphogenetic protein) que direcionam a c?lula a sua transforma??o em osteoblasto. Entretanto, as vias ativadas especificamente durante a fase inicial da diferencia??o s?o ainda pouco exploradas. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o perfil transcricional do in?cio do processo de diferencia??o de CTMh, obtidas da veia do cord?o umbilical, em osteoblasto, a partir da t?cnica de RNA-Seq. A partir dos dados de transcriptoma, foi produzida uma lista ordenada de genes funcionalmente associados, obtida pela me?dia da expressa?o ge?nica tomada sobre genes vizinhos nesta lista, facilitando, assim, a sua interpretac?a?o biolo?gica. Para o estudo de ontologia g?nica e delineamento do perfil de express?o durante a osteog?nese, os processos metab?licos e fun??es moleculares significativamente alterados durante o decorrer do processo de diferencia??o foram analisados em diversas ferramentas (REVIGO, GOrila, PANTHER, LNCipedia e NONCODE) e descritos. Durante a indu??o ? diferencia??o das CTMh em osteoblasto, foi observado o aumento da express?o de genes caracter?sticos do fen?tipo osteobl?stico j? a partir do primeiro dia de diferencia??o. Foram identificados RNAs n?o codificantes, consoante a evolu??o da diferencia??o, bem como genes envolvidos na forma??o de rafts de membrana, j? a partir do terceiro dia de diferencia??o. Durante o terceiro dia de indu??o, genes envolvidos na regula??o da diferencia??o celular e em outros processos biol?gicos que precedem a diferencia??o, como ades?o celular, sinaliza??o e resposta ? fatores qu?micos externos j? apresentaram aumento em sua express?o. O estudo da express?o g?nica durante estes tr?s primeiros dias revelou ainda a diminui??o na express?o de genes envolvidos em processos biol?gicos de manuten??o de metabolismo basal, degrada??o de RNA e organiza??o do citoesqueleto, indicando assim que as mudan?as celulares que levam a c?lula a entrar em diferencia??o podem ter origem durante os tr?s primeiros dias de tratamento osteog?nico. / Human mesenchymal stem cells (hMSC) differentiation into osteoblast follows a specific gene expression program, committing itself initially under Wnt and BMPs pathways influence then differentiating into osteoblasts. However, specifically activated pathways during the first three days of differentiation are still poorly understood. Considering next generation sequencing technologies efficiency, and the lack of characterization in early hMSC differentiation process, in this work we used Illumina RNA-Seq to investigate the changes in these cells transcriptome. We used ex-vivo cultures of two human umbilical cord veins. Data from the complete transcriptome were analyzed in Transcriptogramer for the production of an ordered list of functionally associated genes, obtained by the mean of the gene expression taken on neighboring genes in this list, thus facilitating their biological interpretation. To study gene ontology and gene expression profile during osteogenesis, the metabolic processes and molecular functions significantly altered during the course of the differentiation process were analyzed in several tools (REVIGO, GOrila, PANTHER, LNCipedia and NONCODE) and properly described. During hMSC differentiation, an increase in expression of osteoblastic phenotype genes was observed as soon as the first day of differentiation started. Noncoding RNAs were also identified, depending on the evolution of the differentiation process, as well as genes involved in the formation of membrane rafts, on the third day of differentiation. During the third day of induction, cell differentiation regulation genes and other important genes on biological processes that precede differentiation, such as cell adhesion, signaling and external chemical factors response, have already increased expression. The study of gene expression during these first three days also revealed the decrease in the expression of groups of genes crucial to basal metabolism maintenance, RNA degradation and cytoskeleton organization, thus indicating that the cellular changes that lead the cell into differentiation may originate during the first three days of osteogenic treatment.

Orientador: Paulo Roberto Bueno / Coorientador: Gustavo Troiano Feliciano / Banca: Herida Regina Nunes Salgado / Banca: Ariela Veloso de Paula / Banca: Frank Nelson Crespilho / Banca: Paula Homem de Mello / Resumo: Esta tese de doutoramento apresentou o entendimento de processos redox enzimáticos, detalhando o mecanismo envolvido na troca eletrônica, a qual resulta na formação de um produto, por catálise enzimática. Observou-se a influência de um eletrodo sob a ação de um potencial estacionário aplicado (E) na reação enzima/substrato. Realizou-se eletroanálises, como: Voltametria Cíclica (VC) e Espectroscopia de Impedância Eletroquímica (EIE), para a penicilinase. Os resultados obtidos dão indícios de que a reação enzimática se beneficia de determinados potenciais, pois o parâmetro utilizado, Rct, resistência à transferência de cargas, sugere que ocorre maior troca eletrônica em alguns potenciais ótimos (faixa de -0,3 a -0,5 V). A Simulação Molecular serviu para estudar o comportamento atomístico por métodos clássicos (Dinâmica Molecular - DM) para as condições impostas experimentalmente, esclarecendo o mecanismo de reação enzimática por métodos quânticos (DFT - Teoria do Funcional de Densidade) e híbridos (QM/MM), cabendo salientar que a penicilinase não pertence à classe das enzimas oxirredutivas. / Abstract: This doctoral thesis presented the understanding of enzymatic redox processes, detailing the mechanism involved in the electronic exchange, which results in the formation of a product by enzymatic catalysis. The influence of an electrode under the action of an applied stationary potential (E) on the enzyme/substrate reaction was observed. Electroanalysis was performed, such as: Cyclic Voltammetry (VC) and Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS), for the penicilinase. The results obtained indicate that the enzymatic reaction benefits from certain potentials, since the parameter used, Rct, resistance to the transfer of charges, suggests that there is greater electronic exchange in some optimal potentials (range the -0.3 to -0.5 V). The Molecular Simulation was used to study the atomistic behavior by classical methods (Molecular Dynamics - DM) for experimentally imposed conditions, clarifying the mechanism of enzymatic reaction by quantum methods (DFT) and hybrids (QM/MM). That penicillinase does not belong to the class of oxidoreductive enzymes. / Doutor