A concentração de ferro heme é um parâmetro de qualidade da carne, daí a importância de ser avaliado em carnes processadas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a preservação do heme na cocção e no congelamento. Foram realizados dois experimentos com cortes de coxão mole (m. semi membranosus) moído, de origem bovina e em formato de hambúrgueres. Experimento1: a carne foi preparada em forno combinado a 150, 240 e 300ºC por 3, 5 e 10 minutos com umidade no forno de 10, 60 e 100%; em forno elétrico, a 150, 200 e 280ºC, por 6, 12 e 24 minutos e em chapa elétrica (200ºC) por 45, 120 e 240 segundos. Experimento 2: a carne foi congelada de forma lenta e rápida e armazenada por três meses. Foram determinadas as concentrações de ferro heme (FeH) pelo método de Hornsey, (1956) e modificado por Carpenter e Clark (1995), e avaliados parâmetros cinéticos da ruptura do heme. Esse efeito na carne cozida em todos os equipamentos mostrou ser bastante dependente da concentração. A redução da concentração de ferro heme durante a cocção seguiu cinética de segunda ordem. A partir da concentração de ferro heme inicial e das condições de cocção, as equações obtidas permitiram calcular as concentrações finais de ferro heme após preparação do coxão mole em forno combinado, chapa elétrica e forno elétrico com erros de 3,9; 5,7 e 17,9%, respectivamente. O congelamento, tanto rápido, como lento, não alterou a concentração do FeH. Com este estudo foi possível identificar as condições de preparo mais indicadas para a preservação do FeH em coxão mole, e os resultados poderão conferir um refinamento aos dados de tabelas de composição de alimentos, bem como servir como ferramenta de trabalho para profissionais que estão à frente de Unidades de Alimentação e Nutrição. / Heme iron concentration is a meat quality parameter, hence its importance when evaluating processed meat. The aim of this work was to evaluate the preservation of heme iron during cooking and freezing. Two experiments with semi membranosus muscle hamburgers were carried out. Experiment 1 - the meat was cooked in a combined oven (with humidity levels of 10, 60 and 100%) at 150, 240 and 300ºC for 3, 5 and 10 minutes; in an electric oven at 150, 200 and 280ºC for 6, 12 and 24 minutes and on an electric fryer (200ºC) for 45, 120 and 240 seconds. Experiment 2- two meat groups (one slowly frozen and another rapidly frozen) were stored for 3 months. The concentrations of heme iron were determined by the Hornsey method (1956) and modified by Carpenter and Clark (1995), and the kinetic parameters regarding heme breakage were evaluated. This effect on meat in all equipment depended largely on the concentration. The decrease in iron concentration during cooking followed a second-order kinetics. From the initial concentrations of heme iron and cooking conditions, the equations that were obtained allowed to calculate the final concentration of heme iron, after cooking the meat in combined oven, on electric fryer and in electric oven, with an error of 3.9, 5.7 and 17.9%, respectively. Both rapid and slow freezing did not alter the concentration of heme iron. This study allowed identifying the most appropriate cooking conditions to preserve heme iron in meat, and the results may contribute to the quality of data in food composition tables and also serve as a tool for professionals in charge of Food and Nutrition Units.

No presente trabalho foi avaliada a técnica de ultra-sonografia em tempo real como ferramenta para predição da área de olho-de-lombo (AOL) e espessura da camada de gordura subcutânea (ECG) a partir de imagens tomadas em animais vivos. Foram utilizados 115 bovinos jovens (30 ½ Angus x Nelore; 30 ½ Canchim x Nelore; 30 ½ Simental x Nelore e 25 Nelores), peso inicial médio de 329 kg, de dois tamanhos à maturidade (pequeno e grande) no sistema de produção do novilho superprecoce. As medidas de ultra-sonografia foram realizadas a cada 28 dias totalizando quatro medições até o final do confinamento. Os resultados obtidos demonstraram que a precisão da predição aumentou em função da proximidade com a data do abate, sendo máxima na quarta medida (R 2 de 0,68 para AOL e 0,82 para ECG com as mesmas medidas na carcaça). O efeito de grupo genético e as medidas ultra-sonográficas foram significativos (P<0,05) para ECG, enquanto que na carcaça ambas medidas foram significativas. A AOL da ultra-sonografia por 100 kilogramas (kg) de peso vivo (AOL4PKG) foi significativamente (P<0,05) influenciada pelo grupo genético, mas não pelo tamanho corporal. Em relação à AOL da carcaça por 100 kg de carcaça (AOLPCAR), todos os grupos genéticos alcançaram o valor ideal apontado pela literatura como indicativo de bom rendimento de cortes cárneos. Não foi observada diferença significativa (P<0,05) na composição entre os dois grupos de tamanho corporal provavelmente devido à pequena variação existente entre eles. Os mestiços Simental apresentaram a maior porcentagem de músculo na carcaça, e os animais Nelore o menor valor (P<0,05). Os animais Nelore, mestiços Canchim e Angus tenderam a acumular maior porcentagem de gordura na carcaça quando comparados aos mestiços Simental (P<0,05). A AOL por ultra-sonografia apresentou correlações positivas com a quantidade de músculo (0,49), de cortes cárneos (0,42) e porcentagem de tecido muscular estimada da carcaça (0,30). A ECG por ultra-som foi positivamente correlacionada com a porcentagem (0,49) e a quantidade de tecido adiposo estimada na carcaça (0,52), e negativamente correlacionada com a porcentagem de traseiro (-0,49). O rendimento de cortes cárneos só apresentou correlações significativas com a medida de AOLPCAR (0,26), o peso vivo dos animais (-0,45) e o peso da carcaça quente (-0,44). As medidas ultra-sonográficas nos animais vivos não mostraram alta precisão na predição da AOL na carcaça. Em geral os coeficientes de determinação das equações regressão para predição das características da composição da carcaça pelas medidas ultra-sonográficas são similares ou superiores àqueles obtidos nas equações que utilizaram as mesmas medidas após o abate. Este fato indica que o erro na predição da AOL não necessariamente se deve a uma falha na técnica de ultra-sonografia, mas também pode ser causada por diferenças naturais entre as medidas tomadas na carcaça e no animal vivo. / In the present study real time ultrasonography was used to predict the ribeye area (AOL) and the subcutaneous fat thickness (ECG) in live animals. A total of 115 yearling steers from four genetic groups (30 ½ Angus x Nelore; 30 ½ Canchim x Nelore; 30 ½ Simental x Nelore e 25 Nelores), with 329 kg initial average weight, and two different finishing frame sizes (small and large) were used. Animals were kept in a feedlot during the whole study. Four ultrasonographic measurements were taken every 28 days until slaughter. AOL and ECG were measured in the carcasses and compared to the measurements made in the live animals. Predictive accuracy of the ultrasonographic measurements increased as the animals approached slaughter date, reaching the maximum value at the last one (R 2 = 0.68 and 0.82 for AOL and ECG, respectively). Genetic group influenced (P<0.05) AOL and ECG measurements in the carcass but only the ECG was significant with the ultrasound (P<0.05). AOL ultrasonographic measurements showed a significant difference (P<0.05) among the genetic groups when body weight (per 100 Kg of carcass) was taken into account (AOL4PKG). AOL per 100 kg of carcass (AOLPCAR) for all genetic groups showed higher values than those suggested by the literature. Frame size did not influence AOL or ECG probably due to the small, but distinctive differences between the two groups. The Simental crossed animals had higher (P<0.05) carcass muscle percentage, and the Nelore steers had the lowest. The Nelore, Canchim and Angus crossed animals showed higher carcass fattissue percentage (P<0.05) as compared to the Simental crosses. The ultrasound AOL showed a positive correlation (0.49) with muscle weight, carcass cutability (0.42) and muscle carcass percentage (0.30). The ultrasound ECG was positively correlated with fattissue percentage (0.49) and carcass total fat tissue amount (0.52) and negatively correlated with the hind cut yield (-0.49). Carcass meat yield was correlated only with AOLPCAR (0,26), live weight (-0.45) and hot carcass weight (0.44). The ultrasound AOL had a low prediction accuracy for the carcass AOL. Overall, the accuracy of the carcass composition’s predictive equations by ultrasound were similar or greater than the one obtained by direct carcass measurements. This suggests that the difference in AOL measurements by ultrasonography and in the carcass does not necessarily mean a faulty ultrasonographic measurement for differences can be expected when measurements are made in the carcass or in the live animal.

No presente trabalho estudou-se o perfil bioquímico do plasma seminal bem como o perfil metabólico de touros Nelore com degeneração testicular. O estudo está apresentado em dois artigos. No Artigo 1, o objetivo foi investigar alguns metabólitos do plasma seminal de touros da raça Nelore para caracterizar valores e avaliar sua relação com as características espermáticas. Foram realizadas 14 colheitas seminais, com intervalos semanais, de 11 touros (n=154). O sêmen foi avaliado para motilidade, vigor, concentração, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, morfologia e pH. O plasma seminal foi submetido às avaliações metabólicas de proteína total, albumina, gama glutamil transferase (GGT), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Os dados foram analisados no programa do Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004), sendo realizadas estatística descritiva e análise de correlação de Pearson, o nível de significância considerado foi de 5%. Os valores dos metabólitos encontrados no plasma seminal foram descritos e podem ser utilizados como referência para touros Nelore. Também se pode concluir que há relação entre o perfil metabólico do plasma seminal e as características espermáticas. No Artigo 2, o objetivo foi investigar a bioquímica séria e do plasma seminal de touros Nelore com degeneração testicular. Para isso, foram utilizados 22 touros, que foram distribuídos em dois grupos: Grupo Controle (CON; n=11) e Grupo Degeneração (DEG; n=11). Foram realizadas 14 colheitas de sêmen, e 21 colheitas de sangue com intervalos semanais. As avaliações seminais e do plasma seminal foram as mesmas realizadas no estudo do artigo 1 e o sangue foi avaliado quanto às concentrações de proteína total, albumina, fibrinogênio, GGT, AST, creatina-quinase (CK), glicose, lipoproteína de alta densidade (HDL), colesterol, triglicérides, beta-hidroxibutirato (BHB) e ácidos graxos não esterificados (NEFA). Os dados foram submetidos à Análise de Variância, sendo adicionado o fator medidas repetidas no tempo, utilizando-se o comando REPEATED gerado pelo PROC MIXED do SAS, com nível de significância de 5%. Pode-se afirmar que a degeneração testicular em touros Nelore causa elevação de pH do sêmen, bem como elevação da concentração de ALT e diminuição nas concentrações de GGT e FA no plasma seminal. Em relação às proteínas de fase aguda, a degeneração testicular causa diminuição na concentração de albumina. Em adição, este insulto local não altera os metabólitos séricos em touros Nelore. / In the present work the biochemical profile of the seminal plasma and the metabolic profile of Nelore bulls with testicular degeneration were studied. The study was presented in two articles. First in article 1, the objective was to investigate some seminal plasma metabolites of Nellore bulls to characterize values and evaluate their relation with sperm characteristics. Fourteen seed samples were taken, with weekly intervals, of 11 bulls (n = 154). Semen was evaluated for motility, vigor, concentration, plasmatic and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, morphology and pH. Seminal plasma was submitted to metabolic assessments of total protein, albumin, gamma glutamyl transferase (GGT), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (AP). Data were analyzed by the Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004), with descriptive statistics and Pearson\'s correlation analysis performed, the level of significance considered was 5%. The values of the seminal plasma metabolites found have been described and can be used as reference for Nellore bulls. It can also be concluded that there is a relation between the metabolic profile of seminal plasma and sperm characteristics. In Article 2, the objective was to investigate the seric biochemistry and seminal plasma of Nellore bulls with testicular degeneration. For this, 22 bulls were used, which were distributed in two groups: Control Group (CON; n = 11) and Degeneration Group (DEG; n = 11). There were 14 semen crops and 21 weekly blood sampling. Seminal and seminal plasma evaluations were the same as those performed in the study of article 1 and blood was evaluated for total protein, albumin, fibrinogen, GGT, AST, creatine-kinase (CK), glucose, high density lipoprotein (HDL), cholesterol, triglycerides, beta-hydroxybutyrate (BHB) and non-esterified fatty acids (NEFA). The data were submitted to Variance Analysis, adding the factor measures repeated in time, using the REPEATED command generated by PROC MIXED of the SAS, with significance level of 5%. It can be affirmed that testicular degeneration in Nellore bulls causes elevation of semen pH, as well as elevation of ALT concentration and decrease in GGT and AF concentrations in seminal plasma. In relation to acute phase proteins, testicular degeneration causes a decrease in albumin concentration. In addition, this local insult does not alter serum metabolites in Nellore bulls.

A presente investigação científica visou estudar o desenvolvimento do Aparelho Respiratório de bovinos, durante o período embrionário, através de técnicas empregadas em microscopias de luz transmitida e eletrônica de transmissão. Em nossos resultados pudemos observar a formação do tubo laringotraqueal em embriões apresentando idade gestacional estimada de 20 / 21 dias (CR 9,0 mm), sendo sua parede formada por epitélio constituído de várias camadas de células apoiado em mesênquima. No interior do pulmão, as áreas subjacentes ao epitélio apresentam mesênquima condensado e áreas mais afastadas mesênquima frouxo, sendo que neste último já estão presentes os vasos sanguíneos, contendo células próprias em seu interior. As células mesenquimais apresentaram formas irregulares, com aspecto estrelado ou fusiforme estando unidas por desmossomos, locais onde o citoesqueleto se prende a membrana celular, formando um elo de ligação. A bifurcação da porção caudal da traquéia nos brônquios principais é simultânea ao surgimento do brônquio traqueal, ocorrendo em embriões com idade gestacional de 28 dias (CR 12,0 mm). / The present study aims at investigating the development of the respiratory system in bovines during embryonic phase, using techniques of transmitted light microscopy and electronic transmissions. The results show the development of the laryngotracheal tube in embryos at approximately 20 / 21 days of gestation (CR 9.0 mm), being the walls of the tube made of epithelium with several layers of cells supported by mesenchyme. Inside the lung, the areas next to the epithelium show a condensed mesenchyme and further, there is a loose mesenchyme where blood vessels containing cells of their own kind can be observed. The mesenchymal cell displays irregular shapes, stellate or fusiform, being united by desmosomes, where the cytoskeleton is attached to the cell membrane creating a link. The bifurcation of the tail end of the trachea in the main bronchi is concomitant to the arising of the tracheal bronchus, occurring in embryos at 28 days of gestation (CR 12.0 mm).

Bovine Neonatal Pancytopenia (BNP) is a disease of calves, characterised by peripheral blood and bone marrow depletion, which emerged in Europe in 2007. A strong epidemiological association between BNP and the administration of a particular inactivated Bovine Viral Diarrhoea (BVD) vaccine (Pregsure BVD, Pfizer Animal Health) to the dams of affected calves has been reported. Early studies suggested that BNP is mediated by the transfer of alloantibodies in colostrum and that these alloantibodies recognise major histocompatibility complex (MHC) class I molecules. This led to the hypothesis that Pregsure contains bovine MHC I molecules, originating from the MDBK line cell used in vaccine production, and that this is responsible for the generation of alloantibodies in particular cows injected with the vaccine. This project aimed to investigate the mechanisms by which BNP arises and develops. In particular to gain an understanding of the molecular basis of the syndrome and how this influences the number of cows and calves affected and the specificity of the pathology for the haematopoietic system. Haematological analysis of clinically normal calves born on a BNP-affected farm demonstrated that 15% of calves had profoundly abnormal haematology and could be described as affected by subclinical BNP. BNP was reproduced experimentally by feeding pooled colostrum to neonatal calves, confirming the role of colostrum in mediating the condition. Detailed analysis of serial haematology and bone marrow pathology from these calves demonstrated variable alloantibody damages to different haematopoietic lineages. In vitro cellular assays using a panel of MHC I-defined bovine leukocyte cell lines and mouse cells individually transfected with the MDBK-MHC I alleles demonstrated that Pregsure vaccinated cows have significantly higher titres of functionally active MHC I alloantibodies than BVDV unvaccinated cows or cows vaccinated with alternative BVDV vaccines. The alloantibody response was found to be heterogeneous in individual Pregsure vaccinated cows. MHC I expression levels on peripheral blood and bone marrow cells, assessed by flow cytometry, was shown to correlate with levels of in vitro and in vivo alloantibody damage. Overall, the results of this project demonstrate that the pathogenesis of BNP is mediated by the transfer of MHC I-specific alloantibodies via colostrum that cause rapid destruction of peripheral blood and bone marrow cells, and which is dependent on the titre of alloantibody produced by an individual cow, its specificity for the MHC I alleles present, and density of MHC I expression on the specific cells.

Shiga toxin (Stx) is a bacteriophage (phage)-encoded virulence factor of the Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 implicated in the pathogenesis of renal tissue damage and bloody diarrhoea in human. Cattle are the main asymptomatic reservoir for EHEC O157:H7 with the lymphoid-follicle rich areas of the terminal rectum identified as the primary colonisation site. However, the significance of Stx during bovine intestinal colonisation by EHEC O157:H7 remains unclear with mixed findings described in published studies. The objective of this study was to investigate if Stx and the Stx-encoding phage significantly contribute to EHEC O157:H7 colonisation particularly at the bovine terminal rectum. The expression of Stx receptor, Globotrioasylceramide (Gb3) at the bovine terminal rectum was analysed by fluorescence microscopy, revealing a similar pattern of Gb3 detection in the bovine colon with scattered positive detections limited to sub-epithelial, mesenchymal-associated cells. Purified Stx2 treatment of Gb3+ and Gb3- epithelial cell lines for 6 to 18 hours produced no effect on the cell cycle and proliferation. CD3+/CD8+, CD3+/γδ+ and CD21+ cells were significantly different between calves infected with EHEC O157:H7 Strain 9000 (Stx2a+/Stx2c+) and the uninfected calves, but not in calves with Strain 10671 (Stx2c+). Stx did not interfere with IFN-gamma (IFN-γ)-activation of the JAK/STAT1 pathway in epithelial cells. Bovine EHEC O157:H7 strains isolated from Scottish cattle farms in the IPRAVE study (Phage type 21/28 and 32) were used for a series of bacterial phenotypic characterisation assays. Total Stx production, Verocytotoxicity, growth in a competitive environment, epithelial cell adherence and Galleria mellonella virulence assay were performed to compare the IPRAVE EHEC O157:H7 strains (PT21/28 and PT32) and the isogenic Stx-phage mutants. Stx levels produced by the bovine-originated EHEC O157:H7 strains were significantly lower than that of the human isolated strains. The absence of Gb3 on the bovine terminal rectal epithelium, the non-significant changes in the cell cycle along with the uninterrupted IFN-γ activation of the JAK/STAT1 pathway in intestinal epithelial cells and the minute quantities of Stx generated by EHEC O157:H7 bovine strains suggest that the toxin is not involved in colonisation directly, at least at the intestinal epithelial level. Although future work is required to explain the mechanisms underlying the observed EHEC O157:H7 phenotypic changes particularly in the Stx-phage mutant strains, the work done has proven that the Stx-encoding phage indeed has the ability to exert changes in the bacterial cell leading to changes in bacterial phenotypes, which in turn, might affect the colonisation of the bovine intestine.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:19:56Z : No. of bitstreams: 1 marques_dp_dr_arafcf.pdf: 1011746 bytes, checksum: 390ce3f3fe90df8ee33232cb2c868a7d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Os hidrolisados de proteínas do soro de queijo vêm sendo amplamente utilizados para diversos fins. Dependendo das enzimas utilizadas e meio de reação, podemos obter hidrolisados com diferentes características. O intuito do presente trabalho foi hidrolisar as proteínas do soro de queijo bovino de diferentes maneiras, variando-se a temperatura de reação e modo de adição das enzimas, a fim de se obter hidrolisados com diferentes graus de hidrólise para posterior aplicação em ensaios animais. Os hidrolisados escolhidos para aplicação nos ensaios biológicos foram obtidos pela ação das enzimas pepsina, tripsina, quimotripsina e carboxipeptidase a 50ºC. Dois hidrolisados diferentes foram preparados: um com maior quantidade de pequenos peptídeos (oligo, di e tripeptídeos) e outro com maior quantidade de aminoácidos livres. O soro sem hidrólise também foi utilizado como suplementação para um outro grupo de animais. A intenção foi testar os dois diferentes hidrolisados e o soro sem hidrólise como suplemento para ratos idosos, visando a minimização da sarcopenia. Diversos estudos apontam que fórmulas contendo oligopeptídeos, especialmente di- e tripeptídeos, possuem maior valor nutricional do que uma mistura equivalente de aminoácidos livres ou proteínas intactas. Tomando-se como base essa informação, delineou-se a pesquisa esperando-se que, o grupo suplementado com as proteínas parcialmente hidrolisadas obtivesse um melhor desempenho na minimização da sarcopenia. Todos os 3 grupos suplementados obtiveram aumento na massa muscular e óssea diferindo significativamente em relação ao controle (não suplementado) porem, o que apresentou efeitos mais positivos na minimização da sarcopenia foi realmente o grupo suplementado por proteínas parcialmente hidrolisadas. Paralelamente a esse estudo... / The cheese whey hydrolysates have been widely used for various purposes. Depending on the enzymes used and the reaction medium, we can obtain hydrolysates with different characteristics. The purpose of this study was to hydrolyze bovine cheese whey proteins in different ways, varying the temperature of reaction and enzyme addition, in order to obtain hydrolysates with different degrees of hydrolysis for application in animal tests. The hydrolysates chosen for application in biological assays were obtained by the action of enzymes pepsin, trypsin, chymotrypsin and carboxypeptidase at 50°C. Two different hydrolysates were prepared: one with a larger amount of small peptides (oligo-, di-and tripeptides) and another with larger amount of free amino acids. Serum without hydrolysis was also used as a supplement to another group of animals. The intention was to test the two different hydrolysates and whey without hydrolysis as a supplement to old age rats in order to minimize the sarcopenia. Several studies indicate that formulas containing oligopeptides, especially di-and tripeptides, have higher nutritional value than an equivalent mixture of free amino acids or intact proteins. Taking this information as a basis, the research was then outlined expecting that the group supplemented with partially hydrolyzed protein could obtain a better performance in reducing the sarcopenia. The all 3 supplemented groups showed increase in muscle mass and bone and differ significantly from control (not supplemented). However, the group who presented the most positive effects in reducing the sarcopenia was actually the group supplemented with partially hydrolyzed protein. In parallel with this study, in sandwich PhD, the attainment of immobilized pepsin and trypsin (derivatives) in solid support, stable was studied, for further application to obtain... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: César Roberto Esper / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: Este estudo objetivou avaliar a influência do fluido folicular (FF) e da proteína recombinante humana GDF9 adicionados ao meio de maturação sobre a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados três experimentos utilizando o meio TCM199 como meio básico de maturação. No primeiro experimento, os oócitos foram maturados em cinco diferentes meios (0%, 25%, 50%, 75% ou 100% de FF) em quatro tempos de maturação (22, 24, 26 ou 28 h). No segundo experimento, os oócitos foram maturados nos mesmos meios utilizados no primeiro experimento e fecundados em três diferentes tempos (24, 26 ou 28 h). No terceiro experimento, foram utilizados dois meios: controle (sem FF) ou com 25% de FF e quatro níveis de suplementação (0, 25, 100 ou 200 ng/mL) com GDF9. O FF promoveu retardo da progressão meiótica, afetando a maturação nuclear e a migração de grânulos corticais para a periferia dos oócitos. O FF em altas concentrações influenciou negativamente as taxas de clivagem e de blastocisto. O GDF9, com (25%) ou sem FF, não influenciou as taxas de clivagem e de blastocisto, no entanto, interferiu positivamente sobre o percentual de embriões considerados superiores. O percentual mais elevado (82,22%) de embriões classificados como superiores foi obtido com o uso de 200 ng de GDF9 em meio de maturação acrescido de 25% de FF. Em conclusão, a adição do fluido folicular (75% e 100%) ao meio de maturação in vitro retarda a progressão meiótica, sincronizando a maturação nuclear com a citoplasmática e a suplementação do meio de maturação com proteína recombinante humana GDF9 melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro, baseando-se na avaliação da proporção do número de células da massa celular interna (MCI) em relação ao número total de células / Abstract: This study aimed to evaluate the effects of follicular fluid (FF) and recombinant human GDF9 added to the maturation media on the quality of in vitro produced bovine embryos. Three experiments using TCM199 medium as basic maturation media were performed. In the first experiment oocytes were matured in five different media (0%, 25%, 50%, 75% or 100% of FF) during four maturation times (22, 24, 26 or 28 h). In the second experiment, the oocytes were matured in the same five media used in the first experiment and fertilized at three different times (24, 26 or 28 h). In the third experiment were used two media: control (without FF) or with 25% FF combined with four levels of supplementation (0, 25, 100 or 200ng/mL) with GDF9. The FF promoted delay of the meiotic progression, affecting nuclear maturation and cortical granules migration to the oocyte periphery. In addition FF influenced the cleavage and blastocyst rates. GDF9, without or added to FF did not affect the cleavage and blastocyst rates, however, a positive influence on the percentage of embryos considered superior was observed. The highest percentage (82.22%) of embryos considered superior was obtained with maturation media added with 25% of FF and supplemented with 200 ng of GDF9. In conclusion, addition follicular fluid (75% and 100%) to the in vitro maturation media delays meiotic progression, synchronizing nuclear to cytoplasmic maturation, and supplementation of maturation media with recombinant human GDF9 improves the quality of bovine embryos in vitro produced, based on inner cell mass cells (ICM) proportion, relative to the total cell number / Mestre

Orientador: Luís Antonio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Edvirges Maristela Pituco / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da brucelose, leptospirose, rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), diarreia viral bovina (BVD) e neosporose no indicador de reprodução mais comumente utilizado por pecuaristas brasileiros, a taxa de concepção (ou taxa de prenhez) após a estação de monta. Dois estudos epidemiológicos analíticos foram feitos: um estudo caso-controle, utilizando uma amostra das matrizes do rebanho que foram submetidas à estação de monta durante o período chuvoso, e um estudo de coortes retrospectivo, utilizando todas as novilhas submetidas à estação de monta durante a estação de "inverno". A determinação do estado gestacional foi realizada por palpação retal entre 60 e 90 dias após o término da estação de monta. A pesquisa de anticorpos foi realizada pelos seguintes métodos: antígeno acidificado tamponado (AAT) e reação de fixação de complemento (RFC) para brucelose; soroaglutinação microscópica (SAM) para leptospirose; virusneutralização (VN) para IBR e BVD; e reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para neosporose. A significância estatística da associação entre a doença e o fracasso na concepção foi avaliada pelos métodos de qui-quadrado ou teste exato de Fisher (p < 0,05) e pelo intervalo de confiança a 95% para o risco relativo (RR) ou a odds ratio (OR). Associações com relação causal possível foram encontradas entre falha na concepção e: infecção considerando qualquer sorovariedade de Leptospira spp. (Título ≥ 400) em primíparas (OR = 7,3636, IC 95%: 1,3373-40,5479; significativo), todas as quais foram infecções causadas por L. Wollfi; e infecção por L. Autmumnalis (título de ≥ 200), considerando todos os animais da estação de monta de "verão" (OR = 8,4058; IC95%: 1,0377 - 68,0882; significativo). Brucelose, neosporose IBR, BVD... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aims to evaluate the influence of brucellosis, leptospirosis, infectious bovine rhinotracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD) and neosporosis in the reproductive indicator most commonly used among Brazilian ranchers, the conception rate (or pregnancy rate) after breeding season. Two analytical epidemiological studies were made: a case control study using a sample of matrices of the herd that were submitted to the breeding season during the rainy season, and a retrospective cohort study using all heifers submitted to the breeding season during the dry season. The determination of pregnancy status was performed by rectal palpation between 60 and 90 days after the end of the breeding season. The antibody search was performed by the following methods: rose bengal test and complement fixation test for brucellosis; microscopic agglutination test for leptospirosis, virus neutralization for IBR and BVD, and indirect immunofluorescence assay for neosporosis. The statistical significance of association between the disease and failure in the conception was held by the methods of chi-square or Fisher's exact test (p < 0,05) and by the 95% confidence interval for the relative risk (RR) or odds ratio (OR). Associations with possible causal relationship were found between conception failure and: Infection considering any serovar of Leptospira spp. (titer ≥ 400) in primiparous (OR = 7.3636, 95% CI: 1.3373 to 40.5479; significant), all of which were infections caused by L. Wollfi; and infection by L. Autmumnalis (titer of ≥ 200) considering all the animals of the rainy breeding season (OR = 8.4058; IC95%: 1.0377 - 68.0882; significative). Brucellosis, IBR, BVD, neosporosis and leptospirosis caused by other serovars did not influence the rate of conception in the breeding season... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A brucelose bovina é uma zoonose que apresenta importância econômica por ocasionar perdas reprodutivas nas espécies animais acometidas. Em 2001, no Brasil, foi criado o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e da Tuberculose Animal. Uma das principais medidas instituídas pelo programa é a vacinação de fêmeas entre três e oito meses de idade pela cepa B19. Posteriormente, em 2007, ficaram definidas as normas para a utilização da cepa RB51 em fêmeas maiores que oito meses de idade, e em propriedades que apresentem foco da doença. Sabe-se que esta medida, se utilizada, abreviaria o período de tempo necessário para que a redução da prevalência da brucelose bovina fosse atingida. A fim de estimar a magnitude desta redução, bem como aferir o acumulado de animais a serem protegidos para que a diminuição na prevalência ocorra, foi realizado um modelo matemático associando a proteção de 80% das bezerras por B19, à proteção de 10, 40 e 80% das demais fêmeas por RB51. Para as simulações, foram consideradas as Unidades Federativas que apresentam prevalência da brucelose bovina acima de 2%. Comparando os cenários analisados, pôde-se concluir que a redução do período de tempo necessário para que se atingisse 2% de prevalência pouco diferiu quanto à cobertura vacinal de 40 ou 80% das fêmeas vacináveis. Isto faz com que a primeira alternativa possa, economicamente, ser tida como mais interessante, uma vez que abrangeria um acumulado menor de animais protegidos. Considerando o Estado de Goiás, que apresenta prevalência de 3,01% e um efetivo de 8.336.632 fêmeas bovinas, a proteção das fêmeas jovens por B19 juntamente à proteção de 40% das demais por RB51, faria com que a redução da prevalência alcançasse 2% em quatro anos, com um acumulado de 1.302.130 animais protegidos. Em relação ao Estado de Mato Grosso, que apresenta a maior prevalência, 10,25%, e 8.377.433 fêmeas com mais de 24 meses de idade, foi observado que a frequência da brucelose chegaria a 2% em quinze anos caso a proporção de fêmeas protegidas por RB51 fosse 40%, resultando em um acumulado de 1.656.098 animais. Em comparação à utilização da B19 como única medida preventiva, utilizando a RB51 em 40% das fêmeas vacináveis, se reduziria o período de tempo para se atingir 2% de prevalência de sete para quatro anos no Estado de Goiás, e de 22 para 15 anos no Mato Grosso. Além disso, a determinação dos acumulados a serem vacinados permite que se avalie economicamente a viabilidade ao uso da RB51 / Bovine brucellosis is a zoonosis that play important economic role for causing reproductive losses on animal species that are affected. In 2001, in Brazil, Brazilian National Program for the Control and Eradication of Bovine Brucellosis and Tuberculosis was created. One of the main action proposed by the program is vaccination of female between three to eight months of age by B19 strain. Later, in 2007, were defined the roles for RB51 strain use in females older than eight months, and in herds that are in outbreak situation. It is known that this measure, if used, would short the time needed for bovine brucellosis reduction. In order to estimate the magnitude of this reduction, as well as to measure the accumulated of protected animals for brucellosis prevalence decrease, a mathematical model was done associating protection by B19 in 80% of heifers, to protection by RB51 in 10, 40 and 80% of other females. For simulations, states that presented brucellosis prevalence superior than 2% were considered. Comparing these scenarios was possible to conclude that the time needed to reduce prevalence to 2% were similar between 40 and 80%. This turns the former alternative economically more interesting, once it will cover lower number of protected animals. Considering Goiás State, that presents prevalence of 3.01% and a amount of 8336,632 female bovine, protection of 80% of heifers by B19, along protection of 40% of other females by RB51, would make prevalence reach 2% in four years, with a total of 1302,130 protected animals. Relative to Mato Grosso State, that has the major prevalence, 10.25%, and 8377,433 female older than 24 months of age, were observed that brucellosis frequency would reduce to 2% in 15 years in case of 40% of female protected by RB51, resulting in an amount of 1656,098 animals. In comparison with the use of B19 as single preventive measure, time to reduce prevalence to 2% will reduce from seven to four years in Goiás, and from 22 to 15 years in Mato Grosso. Moreover, determination of accumulated of protected animals allows that RB51 use would be economically evaluated