Para comparar indicadores no diagnostico laboratorial da carência energética e avaliar sua influencia no quadro clínico, 12 garrotes foram aleatoriamente distribuídos em três grupos iguais e receberam , por 140 dias, as seguintes dietas: (G1) adequada, para ganho de peso de 900g/dia (13% de PB e 17,7 Mcal/d de ED); (G2) 80% dos requerimentos de mantença (7% de PB e 5,8 Mcal/d de ED); e (G3) 60% desses requerimentos (5% de PB e 4,7 Mcal/d de ED). Dois animais do G3 sucumbiram ao término do experimento. A carência provocou menor consumo de alimentos, diminui9ao do escore de condição corporal, sem alterar o peso vivo. Embora o volume ruminal tenha sido semelhante entre todos os grupos, as taxa de passagem e de renovação de líquidos foram menores nos grupos carentes. O déficit energético reduziu a produção ruminal de ácidos graxos voláteis totais e de suas frações, o tempo de redução de azul de metileno no suco ruminal foi maior, enquanto que os índices de excreção urinaria de alantoína e de ácido úrico foram menores nos grupos carentes. Os melhores indicadores do status energético foram a glicemia e os teores de β-hidroxibutirato plasmáticos, que reduziram durante a carência: os AGLs não foram eficientes devido a alta variabilidade dos resultados. Não foram detectados corpos cetônicos na urina. O hematócrito e os teores séricos de ureia, albumina, globulinas e creatinina não se mostraram úteis no diagnóstico, porem o índice de excreção urinaria de ureia se reduziu, indicando maior conservação de nitrogênio pelo organismo carente. O déficit energético provocou diminui980 nos batimentos cardíacos, atingindo em quadros avançados 30 bat/min; na frequência respiratória; nos movimentos e tonicidade ruminal. Quanto menor foi a glicemia menores foram os batimentos cardíacos (r= 0,55), a frequência respiratória (r = 0,49) e a tonicidade ruminal (r= 0,81). A temperatura retal permaneceu dentro dos valores de normalidade, mas hipotermia foi detectada precedendo a morte. Levando-se em conta a facilidade, praticidade e custo dos exames, sugere-se o diagnóstico de carência requisitando analise de glicose, β-hidroxibutirato plasmáticos, tempo de redução do azul de metileno no suco ruminal e índice de excreção urinária de ácido úrico. / In order to compare laboratory diagnosis indicators of energetic deficit and evaluate their influence in the clinical picture, 12 steers were randomly distributed in 3 groups of 4 animals, which received the following diets for 140 days : (G1) adequate diet for weight gain of 900g/day (CP: 13% and DE: 17,7 Mcal/d); (G2) 80% of the maintenance requirements (CP: 7% and DE: 5,8 Mcal/d); (G3) 60% of the same requirements (CP: 5% and DE: 4,7 Mcal/d). Two animals from G3 died by the end of the experiment. The nutritional deficit led to lower feed intake and a decrease in the body condition score; without changing body weight. Although the rumen volume was similar in all three groups, the rates of liquid passage and ruminal turnover were lower in G2 and G3. The energetic deficit led to a reduced rumen production of total and fractions of volatile fatty acids. The time of blue methylene reduction in the rumen juice was longer, whereas the index of urinary excretion of allantoin and uric acid was lower in G2 and G3. The best indicators of the energetic status were glycemia and the plasma level of β-hydroxybutirate, which were both reduced during the deficit energetic. NEFA levels were not effective, due to the high variability of the results. Ketone bodies were not detected in the urine. Hematocrit and serum levels of urea, albumin, globulin and creatinin were not useful for malnutrition diagnosis, but the index of urinary excretion of urea was decreased, indicating that malnourished bodies were keeping Nitrogen. The energetic deficit caused a gradual decrease in cardiac rates , falling to 30 beats/min in advanced deficit of energy. Reduced respiratory frequency and rumen tonus was also altered in this condition. Low glycemia was related to decreased heart beat frequency (r=0.55), to respiratory frequency (r=0.49) and to rumen tonus (r=0.81). The rectal temperature remained within normal values; however hypothermia was detected preceding death. Taking into account costs and friendly usage of assays, we suggest the analysis of glucose, plasma β-hydroxybutirate, time of reduction of methylene blue in the rumen juice, and index of urinary excretion of uric acid for the diagnosis of energetic deficit.

A utilização de resinas compostas para restaurações em dentes anteriores e posteriores é bastante frequente na odontologia atual, pois suas propriedades mecânicas e estéticas são compatíveis a estrutura dental. O objetivo deste trabalho foi confeccionar e caracterizar uma resina composta para uso odontológico utilizando esmalte bovino como carga de reforço. Para confeccionar a resina composta a mesma matriz orgânica comumente utilizada nas resinas comerciais foi empregada. A carga de reforço foi obtida através da moagem de fragmentos de esmalte bovino, e posteriormente submetida a um tratamento superficial para que tornasse possível a união das partículas com a matriz orgânica. Foram confeccionadas resinas compostas nas concentrações de 60, 70 e 85% em peso de carga. Para fotopolimerização um dispositivo a base de LED com banda de emissão centrada em 470 nm com intensidade e 1000 mW/cm2 foi usado. Duas resinas comerciais Filtek Z-250 e Supreme XT (3M ESPE) ambas na cor A2 foram empregadas para comparação. A caracterização das resinas experimentais e comerciais foi realizada através de ensaios de compressão axial e diametral, grau de conversão, teste de dureza Vickers e fluorescência. No teste de fluorescência realizado em dentes humanos, a resina experimental com 85% de partícula de carga em peso apresentou valores de intensidade de fluorescência em escala de cinza ao redor de 34 (unid. arb.) sendo mais semelhante ao dente (41 unid. arb.) quando comparada com as resinas comerciais que obtiveram valores ao redor de 17 (unid. arb.). Baseado nos testes realizados, a resina experimental apresenta propriedades promissoras para utilização em restaurações. / The use of composite resins for restorative procedure at anterior and posterior cavities is highly common in the modern Dentistry because its mechanical and aesthetic properties are compatible with the remanescent dental structure. The aim of this study was the manipulation and characterization of a dental composite resin using bovine enamel as reinforcing filler. The same organic matrix of the commercially available resins was used for this experimental resin. The reinforcing filler was obtained after the gridding of bovine enamel fragments and a superficial treatment was performed to allow the adhesion of the filler particles with the organic matrix. The experimental resin was manipulated at the weight filler concentrations of 60%, 70%, and 85%. A LED-based light source with 1000 mW/cm2 centered at 470 nm was used for photopolimerization. Two commercial resins, Filtek Z-250 and Supreme XT at A2 shade, were used for comparison. The resin characterization was performed with tensile strength and diametral tensile strength tests, conversion degree, Vickers hardness, and fluorescence. In the fluorescent test performed at human teeth, the experimental resin with 85% particle weight showed fluorescence intensity values at gray scale, around 34 (arbitrary units), being more similar to the tooth (41 arb. units) when compared with commercial resins (17 arb. units). Based on the investigated tests, the present experimental resin shows promising properties to its use on dental restorations.

O período embrionário se estende do 15º ao 45º dia de gestação na vaca, onde ocorre um rápido crescimento e diferenciação, durante o qual os principais órgãos, tecidos e sistemas são estabelecidos e as principais características são reconhecidas. Nos bovinos, a maioria dos órgãos e partes do corpo é formada entre a 2ª e a 6ª semana de gestação. Durante este período, o trato digestivo, os pulmões, o fígado e o pâncreas se desenvolvem do intestino primitivo, sendo estabelecidos os primórdios do sistema muscular, esquelético, nervoso e urogenital. Aproximadamente 25 a 45% dos embriões bovinos são perdidos até o processo final de implantação, no entanto, a literatura relacionada a sua organogênese é escassa, uma vez que crescem as inovações tecnológicas ligadas a reprodução bovina. Assim, julgamos oportuno e necessário um estudo sobre a biologia do desenvolvimento do aparelho digestório de embriões bovinos oriundos de monta natural, utilizando microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Nossos resultados revelam que em embriões com idade gestacional estimada de 20 dias (CR 9,0 mm) ocorreu a formação do septo traqueoesofágico dividindo o intestino anterior no tubo laringotraqueal e esôfago, separando-se totalmente aos 28/29 dias de gestação. Ao redor do 60º de gestação (CR 70,0 mm) um estômago pluricavitário característico dos ruminantes é evidente e apresentam epitélio endodérmico em diferenciação, tecido conjuntivo mesodérmico e tecido muscular liso. Os núcleos das células epiteliais acompanham o formato da célula e a lâmina basal delimita área de epitélio e mesênquima, estando as células unidas umas às outras através dos desmossomos, que promovem sustentação celular. / The embryonary period extends itself from 15th to 45th day of gestation in cows, when a fast growing and differentiation occurs, during which the main organs, tissues and systems are established and the main characteristics are recognized. In bovines, most of the organs and parts of body are formed between 2th and 6th week of gestation. During this period, the digestive tract, the lungs, the liver and the pancreas are developed from the primitive intestine; being established the origins of the muscle, skeletal, nervous and urogenital systems. Approximately 25 to 45% of bovine embryos are lost until the final process of implantation; however, the literature related to their organogenesis is scant, since the technologic innovations related to bovine reproduction are growing. Thus, we think it is opportune and necessary a study about the biology of development of digestive tract of bovine embryos derived from natural coition, using optic microscopy and transmission electronic microscopy. Our results disclose that in embryos having a estimated gestational age of 20 days (CR 9,0 mm), it occurred a formation of tracheoesophagic septum, dividing the anterior intestine in laringotracheal tube and esophagus, separating itself totally on 28/29 days of gestation. At about 60th day of gestation (CR 70,0 mm), a multicavity stomach, characteristic of ruminants, is evident and presents endodermic epithelium on differentiation, mesodermic connective tissue and smooth muscle tissue. The epithelial cells nuclei go along the cell shape and the basal lamina delimits the area of epithelium and mesenchyme, being the cells bound each other through desmosoms, which promote the cellular sustentation.

A papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa de ocorrência mundial, que assola o rebanho brasileiro, sem qualquer atitude efetiva de controle, e que tem como enfermidades associadas a tumores de bexiga hematúria enzoótica e tumores de trato digestório superior caraguatá, responsáveis por sensíveis perdas para a pecuária. Várias tentativas vacinais têm sido empreendidas com finalidades profiláticas ou terapêuticas, porém sem resultados eficazes. Esta situação se deve a aspectos relacionados à estrutura viral que dificultam uma manipulação eficiente para produção de produtos vacinais. Para que tais dados possam ser obtidos, faz-se necessário uma melhor compreensão da ação das proteínas recombinantes. A clonagem em vetores bacterianos para a expressão e purificação dessas proteínas serve a diferentes propósitos. Entre eles, a produção de insumos imunológicos, como testes diagnósticos ou mesmo vacinas. O presente projeto visou à expressão e purificação da proteína de capsídeo recombinante L2 de BPV-2. A proteína foi expressa em bactéria e tentou-se a purificação por coluna de afinidade; entretanto, problemas na purificação não possibilitaram a conclusão deste objetivo. Todas as abordagens e protocolos utilizados nesse trabalho são discutidos para contribuição ao conhecimento do processo. / The bovine papillomatosis is an infectious disease of worldwide occurrence, plaguing the Brazilian herd, without any effective attitude control, and whose illnesses associated with bladder tumors \"enzootic hematuria\" and upper digestive tract tumors \"caraguatá\" sensitive responsible for losses to livestock. Several attempts have been undertaken vaccine with prophylactic or therapeutic purposes, but without effective results. This is due to issues related to viral structure that hinder efficient manipulation for production of vaccine products. In order to obtain such information, it is necessary better understanding of the action of recombinant proteins. The bacterial cloning vectors for the expression and purification of such proteins serve different purposes. Among them, the production of immune inputs, such as diagnostic tests or vaccines. This project aimed the expression and purification of recombinant L2 capsid protein of BPV-2. The protein was expressed in bacteria and purification was carried out by affinity column. However, difficulties in the purification process, impaired the full completion of this objective. All the attempted approaches and protocols were discussed and potential solutions proposed.

A raiva bovina continua sendo uma importante zoonose. A ocorrência de casos confirmados da doença no meio rural é um problema atual de saúde pública, sendo mais relevante quando se consideram os casos de raiva huma na que ocorreram nos últimos anos no país. Este projeto teve por objetivo estudar a situação da raiva bovina no município de Guaxupé - MG, consideran do: a presença do morcego hematófago no município; o nível de conhecimento dos produtores/empregados rurais sobre a raiva; a vacinação contra a raiva bovina; a notificação de casos da doença junto ao Instituto Mineiro Agro pecuário (IMA); os casos confirmados de raiva animal. Quanto à metodologia, fo ram realizados: um levantamento de dados secundários junto ao IMA e junto à Vigilância Epidemiológica da Gerência Regional de Alfenas - MG, da qual faz parte o município de Guaxupé; a apli cação de um questionário sobre a raiva bovina junto a uma amostra de produtores/empregados rurais do município. Foi feita uma estratificação da amostra em dois grupos, sendo o questionário aplicado em 35 pequenas e médias propriedades e em cinco grandes propriedades. De acordo com os dados do IMA, durante o período de 1999 a 2003, foram realizados 34 exames laboratoriais para diagnóstico da raiva, entre eles, 10 foram conside rados positivos, sendo oito da espécie bovina e dois da espécie eqüina. Com relação ao conhecimento de produto res/empregados rurais sobre a raiva, constatou-se que 74,3% consideram o veterinário como uma importante fonte de informação; 85% procuram o veterinário se houver um animal doente; 97,5% conhecem a importância da vacinação; 72,5% indicaram a salivação aumentada do animal como sintoma característico da doença; 58,3% indicaram o carbúnculo como doença que se confunde com a raiva; 90,0% afirmaram ser o morcego hematófago o transmissor da doença; 57,1% afirma ram aplicar algum tipo de produto em mordeduras por morcegos; 92,5% afirmaram ter conhecimento da presen ça do morcego em sua propriedade; 17,5% afirmaram ter tido caso confirmado de raiva na propriedade; 53% apontaram galpões de secador de café como abrigo para os morcegos; 90% afirmaram vacinar o rebanho durante as campanhas de vacinação. Com relação aos dados da Vigilância Epidemiológica, entre os anos de 2000 e 2006, ocorreram 587 casos de agressão por animais no município de Guaxupé. Desses casos, 24,3% ocorreram com crianças de até nove anos de idade; 91,5% ocorreram na zona urbana; 82,9% dos ferimentos foram por mordedura; 49,0% foram nas mãos; em 78,2% dos casos a espécie agressora era a canina; ocorreu apenas um caso de raiva canina com diagnós tico laboratorial e quatro casos de raiva animal com diagnóstico clínico. Esses estudos permitiram concluir que ainda é atual a necessidade de manter todas as ações que visam o controle da raiva, especialmente a vacinação; é importante a realização de um trabalho de consci entização com relação aos casos de agressão por animais, especialmente os cães. / Bovine rabies continues to be an important zoonosis. The occurrence of confirmed cases of the disease in the rural environment is a current public health problem, which is even more relevant when the cases of human rabies that occurred in the last few years are considered. The objective of the present project was to study the situation of bovine rabies in the municipality of Guaxupé - MG, on the basis of the presence of blood-sucking bats in the municipality, the level of knowledge of rural producers/employe es about rabies, the vaccination against bovine rabies, the notification of cases of the disease to the \"Instituto Mineiro Agropecuário\" (IMA), and the confirmed cases of animal rabies. The methodology consisted of a survey of secondary data at IMA and at the Epidemiological Surveillance of the Regional Management of Alfenas - MG, to which the municipality of Guaxupé belongs, and the application of a questionnaire about bovine rabies to a sample of rural producers/employees of the municipality. The sample was stratified into two groups, with the questionnaire being applied to 35 small and medium-sized properties and to 05 large properties. According to IMA data, 34 laboratory exams for the diagnosis of rabies were performed during the period from 1999 to 2003. Of these, 10 were considered to be positive, 08 of them involving cattle and 02 involving horses. Regarding the knowledge of rural producers/employe es about rabies, 74.3% were found to consider the veterinary to be an impor tant source of information; 85% called a veterinary when an animal was sick, 97.5% were aware of the importance of vaccination, 72.5% indicated that incre ased animal salivation is a characteristic symptom of the disease, 58.3% indica ted that carbuncle is a disease often confused with rabies, 90.0% stated that blood-sucking bats are the transmitters of the disease, 57.1% stated that they applied some type of product to bat bites, 92.5% stated that they were aware of the presence of bats on their property, 17.5% stated that they had a confirmed case of rabies on their property, 53% pointed out that coffee-drying barns are a shelter for bats, and 90% stated that they vaccinated the herd during vaccination campaigns. Regarding the data of Epidemiological Surveillance, 587 cases of aggression by animals occurred between 2000 and 2006 in the municipality of Guaxupé. Of these, 24.3% involved children up to 09 years of age, 91.5% occurred in the urban zone, 82.9% of the wounds were bites, 49.0% were in the hands, in 78.2% of cases the aggressing species was the canine one, and there was only one case of canine rabies with a laboratory diagnosis, plus 04 cases of animal rabies with a clinical diagnosis. These studies led to the conclusion that there still is the need to maintain all actions aiming at the control of rabies, especially vaccination, and that it is important to conduct awareness-raising work regarding cases of aggression by animals, especially dogs.

No presente trabalho estudou-se o perfil bioquímico do plasma seminal bem como o perfil metabólico de touros Nelore com degeneração testicular. O estudo está apresentado em dois artigos. No Artigo 1, o objetivo foi investigar alguns metabólitos do plasma seminal de touros da raça Nelore para caracterizar valores e avaliar sua relação com as características espermáticas. Foram realizadas 14 colheitas seminais, com intervalos semanais, de 11 touros (n=154). O sêmen foi avaliado para motilidade, vigor, concentração, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, morfologia e pH. O plasma seminal foi submetido às avaliações metabólicas de proteína total, albumina, gama glutamil transferase (GGT), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Os dados foram analisados no programa do Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004), sendo realizadas estatística descritiva e análise de correlação de Pearson, o nível de significância considerado foi de 5%. Os valores dos metabólitos encontrados no plasma seminal foram descritos e podem ser utilizados como referência para touros Nelore. Também se pode concluir que há relação entre o perfil metabólico do plasma seminal e as características espermáticas. No Artigo 2, o objetivo foi investigar a bioquímica séria e do plasma seminal de touros Nelore com degeneração testicular. Para isso, foram utilizados 22 touros, que foram distribuídos em dois grupos: Grupo Controle (CON; n=11) e Grupo Degeneração (DEG; n=11). Foram realizadas 14 colheitas de sêmen, e 21 colheitas de sangue com intervalos semanais. As avaliações seminais e do plasma seminal foram as mesmas realizadas no estudo do artigo 1 e o sangue foi avaliado quanto às concentrações de proteína total, albumina, fibrinogênio, GGT, AST, creatina-quinase (CK), glicose, lipoproteína de alta densidade (HDL), colesterol, triglicérides, beta-hidroxibutirato (BHB) e ácidos graxos não esterificados (NEFA). Os dados foram submetidos à Análise de Variância, sendo adicionado o fator medidas repetidas no tempo, utilizando-se o comando REPEATED gerado pelo PROC MIXED do SAS, com nível de significância de 5%. Pode-se afirmar que a degeneração testicular em touros Nelore causa elevação de pH do sêmen, bem como elevação da concentração de ALT e diminuição nas concentrações de GGT e FA no plasma seminal. Em relação às proteínas de fase aguda, a degeneração testicular causa diminuição na concentração de albumina. Em adição, este insulto local não altera os metabólitos séricos em touros Nelore. / In the present work the biochemical profile of the seminal plasma and the metabolic profile of Nelore bulls with testicular degeneration were studied. The study was presented in two articles. First in article 1, the objective was to investigate some seminal plasma metabolites of Nellore bulls to characterize values and evaluate their relation with sperm characteristics. Fourteen seed samples were taken, with weekly intervals, of 11 bulls (n = 154). Semen was evaluated for motility, vigor, concentration, plasmatic and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, morphology and pH. Seminal plasma was submitted to metabolic assessments of total protein, albumin, gamma glutamyl transferase (GGT), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (AP). Data were analyzed by the Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004), with descriptive statistics and Pearson\'s correlation analysis performed, the level of significance considered was 5%. The values of the seminal plasma metabolites found have been described and can be used as reference for Nellore bulls. It can also be concluded that there is a relation between the metabolic profile of seminal plasma and sperm characteristics. In Article 2, the objective was to investigate the seric biochemistry and seminal plasma of Nellore bulls with testicular degeneration. For this, 22 bulls were used, which were distributed in two groups: Control Group (CON; n = 11) and Degeneration Group (DEG; n = 11). There were 14 semen crops and 21 weekly blood sampling. Seminal and seminal plasma evaluations were the same as those performed in the study of article 1 and blood was evaluated for total protein, albumin, fibrinogen, GGT, AST, creatine-kinase (CK), glucose, high density lipoprotein (HDL), cholesterol, triglycerides, beta-hydroxybutyrate (BHB) and non-esterified fatty acids (NEFA). The data were submitted to Variance Analysis, adding the factor measures repeated in time, using the REPEATED command generated by PROC MIXED of the SAS, with significance level of 5%. It can be affirmed that testicular degeneration in Nellore bulls causes elevation of semen pH, as well as elevation of ALT concentration and decrease in GGT and AF concentrations in seminal plasma. In relation to acute phase proteins, testicular degeneration causes a decrease in albumin concentration. In addition, this local insult does not alter serum metabolites in Nellore bulls.

O coronavírus bovino (BCoV) e rotavírus (RV) são importantes agentes da diarréia neonatal bovina, causando grandes perdas econômicas. O BCoV é também responsável pela disenteria de inverno em vacas adultas e por desordens respiratórias e o RV possui um aspecto zoonótico de importância na saúde pública. Este estudo teve o objetivo de desenvolver uma multiplex hemi-nested RT-PCR para detecção simultânea de BCoV e RV do grupo A com a utilização de um controle interno. Para tanto, foram desenhados três primers dirigidos ao gene N de BCoV (306pb) e três primers dirigidos ao gene VP1 do RV do grupo A (228pb); para o controle interno, foram utilizados dois primers dirigidos ao mRNA do gene mitocondrial bovino ND5 (191pb). Foram utilizados como controles positivos a amostra Kakegawa de BCoV (título HA de 256), a amostra 8209 de rotavírus do grupo A (título viral de 101.66TCID50%/200µL) e suspensão de células MDBK para o controle interno. A extração de RNA foi realizada com o reagente comercial TRIzol, de acordo com as recomendações do fabricante. Foram realizados gradientes de temperatura para a determinação da temperatura ótima de hibridação para cada par de primers, resultando em 50ºC para PCR e 55ºC para a hemi-nested. Doze protocolos com diferentes concentrações de Taq DNA polymerase, MgCl2, primers e DNA-alvo foram testados. Para determinação do limiar de detecção, o protocolo final foi utilizado em diluições dos dois vírus em suspensão de amostras fecais negativas para BCoV e RV adicionadas de 10% de suspensão de células MDBK, obtendo o limiar de detecção de 10-8 para os dois vírus e aplicado em amostras fecais de bezerros (53) e vacas adultas (22). Todas as amostras foram previamente testadas para BCoV por uma nested RT-PCR dirigida ao gene RdPd, sendo 15 positivas, e para rotavírus pela PAGE, sendo 3 positivas. Para a multiplex, 15 amostras foram positivas para BCoV e 6 para rotavírus. O seqüenciamento de DNA das amostras positivas para multiplex demonstrou a especificidade do teste. Uma concordância ótima foi encontrada para BCoV (0,833) e substancial para rotavírus (0,648) calculada pela estatística kappa, comparando-se com os testes de referência. Estes resultados demonstram que a padronização da multiplex foi eficiente para a detecção de BCoV e RV, com elevadas sensibilidade e especificidade. Além disso, o diagnóstico simultâneo dos dois agentes permite um diagnóstico rápido e a um menor custo devido à utilização de reduzidas quantidades de reagentes e mão de obra, fornecendo uma importante ferramenta para o diagnóstico e estudo da etiologia da diarréia em bovinos. / Bovine coronavirus (BCoV) and rotavirus (RV) are important agents of neonatal diarrhea in cattle, causing large economic losses. BCoV is also responsible for winter dysentery in adult cattle and respiratory disorders and RV has a zoonotic aspect of importance in public health. This study aimed to develop a multiplex hemi-nested RT-PCR for simultaneous detection of BCoV and RV of group A with an internal control. For this purpose, three primers were designed targeting the N gene of BCoV (306pb) and three primers targeting to the VP1 gene of group A RV (228pb); for internal control, two primers targeting to the mRNA of ND5 bovine mitochondrial gene (191pb) were used. Positive controls were BCoV Kakegawa strain (HA titer 256), group A bovine rotavirus strain 8209 (viral titer of 101.66TCID50%/200µL), and MDBK cells suspension for internal control. The RNA extraction was performed with the commercial reagent TRIzol. Temperature gradients were carried out for each primers pair for the determination of the optimal hybridization temperatures, resulting in 50°C for PCR and 55°C for the hemi-nested. Twelve protocols were tested with different concentrations of Taq DNA polymerase, MgCl2, primers and target DNA. The final protocol was used in 10-fold dilutions of the two viruses in suspension of fecal sample negative for BCoV and RV added to 10% of MDBK cells suspension, obtaining the detection limit of 10-8 for the two viruses, and applied to 75 fecal samples from calves (53) and cows (22). All samples were previously tested for BCoV by a nested RT-PCR to RdPd gene, being 15 positive; and for rotavirus by PAGE, being 3 positive. For multiplex, 15 samples were positive for BCoV and 6 for RV. The DNA sequencing of multiplex-positive samples substantiates the specificity of the test. A great agreement was found for BCoV (0.833) and substantial for RV (0.648) by calculating the kappa statistic in comparison to the reference tests. These results demonstrate that the multiplex standard was effective in the detection of BCoV and RV, with high sensitivity and specificity. In addition, simultaneous diagnosis of both agents allows a faster and at lower cost diagnosis due to use of smaller quantities of reagents and labor, providing an important tool for the diagnosis and study on the etiology of diarrhea in cattle.

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Neste contexto trabalhos que busquem maximizar os resultados de OPU/PIV são essenciais. Uma das alternativas é manipular farmacologicamente o desenvolvimento folicular para obter oócitos mais competentes para a fecundação in vitro e desenvolvimento embrionário. Por isso, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes doses de gonadotrofina coriônica equina (eCG) em um protocolo prévio à OPU, sobre o desenvolvimento folicular, número e qualidade dos oócitos recuperados assim como potencial de fecundação e desenvolvimento embrionário in vitro. Dezesseis vacas doadoras Braford foram submetidas a 4 sessões de OPU com intervalo de 15 dias entre cada aspiração (n=16 por tratamento; cross over), para avaliar o efeito da dose de eCG as doadoras foram dividas de acordo com os respectivos tratamentos (Controle = zero, eCG200 = 200UI de eCG, eCG400 = 400UI de eCG e eCG800 = 800UI de eCG). No início do protocolo de sincronização (D0), as doadoras receberam 2 mg de benzoato de estradiol IM, 12,5 mg de dinoprost trometamina IM e um dispositivo de liberação lenta de P4 intravaginal. No dia 3, as doadoras receberam uma dose de eCG de acordo com cada tratamento e no dia 6, o dispositivo de P4 foi removido e as doadoras submetidas a OPU. Antes da OPU, os vii folículos ovarianos foram visualizados, mensurados e classificados de acordo com o diâmetro em pequenos (<6mm), médios (6-10mm) e grandes (>10mm). Após a OPU, os oócitos viáveis de cada vaca foram levados a MIV e FIV em grupos de acordo com os tratamentos. A MIV foi realizada durante 24h à 39°C em TCM 199 modificado. Para a fecundação in vitro, os espermatozoides de um touro Bos taurus de fertilidade comprovada foram selecionados por gradientes de Percoll e co-incubados com os oócitos por 18h. Após a FIV, 50% dos prováveis zigotos foram avaliados quanto à taxa de fecundação por epifluorescência. O restante dos oócitos foram transferidos para gotas de SOFaaci e cultivados in vitro para avaliação da taxa de clivagem, momento da primeira clivagem e número de células às 48 horas em um sistema de monitoramento embrionário. As análises estatísticas foram realizadas com ANOVA e as médias comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). Não houve diferença no número de folículos, quantidade e qualidade morfológica dos oócitos obtidos entre os tratamentos (P <0,05). A taxa de recuperação de oócitos foi semelhante entre os grupos tratados com eCG, porém, inferior ao grupo Controle (p<0,0001). No entanto, o grupo eCG800 apresentou maior número de folículos médios e grandes (>6mm e >10mm; P <0,00001). Adicionalmente o grupo eCG800 apresentou maior taxa de fecundação normal (54,3±8,5) e menor taxa de polispermia (5.7±4.0) que os demais grupos (P < 0,05). Os grupos eCG800 e Controle tiveram maior taxa de clivagem que os demais tratamentos, 68,6±7,9 e 75,6±6,8, respectivamente. Não houve diferença no momento da primeira clivagem e no número médio de células às 48 h entre os tratamentos. Com base nestes dados, pode-se concluir que a dose de 800UI de eCG aumentou a proporção de folículos >6mm, proporcionando a maior taxa de fecundação normal e uma redução na taxa de polispermia em relação ao Controle e as demais doses de eCG, sem prejuízos a cinética de desenvolvimento embrionário até 48 horas. / Due to the great need to increase the genetic material in cattle, the OPU / PIV techniques have been applied in a large scale in order to obtain a larger number of products born per year of selected females. However, some animals have a low number of follicles available for OPU, while others have a low rate of oocyte conversion in embryos. In this context, works that seek to maximize OPU / PIV results are essential. One of the alternatives is to pharmacologically manipulate follicular development to obtain more competent oocytes for in vitro fertilization and embryonic development. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of different doses of equine Chorionic Gonadotrophin (eCG) on a protocol prior to OPU, on the follicular development, number and quality of oocytes recovered as well as potential for fertilization and in vitro embryo development. Sixteen Braford donor cows were submitted to 4 OPU sessions with a 15 day interval between each aspiration (n = 16 per treatment, cross over), to evaluate the effect of the eCG dose the donors were divided according to the respective treatments (Control = zero, eCG200 = 200UI of eCG, eCG400 = 400UI of eCG, and eCG800 = 800UI of eCG). At the beginning of the synchronization protocol (D0), the donors received 2 mg of estradiol IM benzoate, 12.5 mg of dinoprost tromethamine IM and a slow intravaginal P4 release device. On day 3, the donors were given a dose of eCG according to each treatment and on day 6, the P4 device was removed and the donors were subjected to OPU. Before OPU, ovarian follicles were visualized, measured and classified according to the diameter in small (< 6 mm), medium (6-10 mm) and large (> 10 mm). After OPU, viable ix oocytes from each cow were taken to IVM and IVF in groups according to treatments. IVM was performed for 24 hours at 39°C in modified TCM 199. For in vitro fertilization, the sperm of a Bos taurus bull of proven fertility were selected by Percoll gradients and co-incubated with the oocytes for 18 h. After IVF, 50% of probable zygotes were evaluated for fertilization rate by epifluorescence. The remaining oocytes were transferred to drops of SOFaaci and cultured in vitro for evaluation of the cleavage rate, time of the first cleavage and cell number at 48 hours in an embryonic monitoring system. Statistical analyzes were performed using ANOVA and the means were compared by the Tukey test (P < 0.05). There was no difference in the number of follicles, quantity and morphological quality of the oocytes obtained between the treatments (P < 0.05). The oocyte recovery rate was similar between the eCG treated groups, but lower than the Control (p < 0.001). However, the eCG800 had a greater number of medium and large follicles (> 6 mm and > 10 mm, P <0.00001). In addition, the eCG800 had a higher normal fertilization rate (54.3 ± 8.5) and a lower rate of polyspermy (5.7 ± 4.0) than the other groups (P < 0.05). The eCG800 and Control had a higher cleavage rate than the other treatments (68.6 ± 7.9 and 75.6 ± 6.8), respectively. There was no difference at the time of the first cleavage and in the average number of cells at 48 h between treatments. Based on these data, it can be concluded that the dose of 800UI of eCG increased the proportion of follicles > 6mm, providing the highest rate of normal fertilization and a reduction in the rate of polyspermia in relation to Control and the other doses of eCG, without impairing the kinetics of embryonic development until at 48 hours.

Foi conduzido um inquérito soroepidemiológico da brucelose bovina no Estado do Espírito Santo através de parceria firmada entre o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), o Instituto de Defesa Agropecuária e Florestal do Estado do Espírito Santo (IDAF-ES) e o Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). O Estado foi dividido em dois estratos amostrais, conforme o tipo de exploração predominante e a capacidade operacional do IDAF-ES para a condução do trabalho de campo. A amostragem foi delineada para a determinação da prevalência de propriedades positivas (focos) e de animais soropositivos para a brucelose bovina por estrato amostral. Foi realizada uma seleção aleatória de 300 propriedades (unidades primárias) por estrato amostral, e dentro das unidades primárias, foram amostradas, aleatoriamente, 10 fêmeas bovinas com idade igual ou superior a 24 meses (unidades secundárias) quando o rebanho foi constituído por até 99 fêmeas da mesma faixa etária, ou todas as fêmeas existentes nessa faixa etária se não totalizassem 10 animais; quando o rebanho foi constituído por mais de 99 fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses, foram amostradas 15 fêmeas da mesma faixa etária. Ao todo foi colhido sangue de 5370 fêmeas bovinas provenientes de 636 propriedades distribuídas nos dois estratos amostrais. Na ocasião da colheita, foi aplicado um questionário epidemiológico por propriedade e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho de GPS. Para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, foi utilizado o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) como prova de triagem e o teste do 2-mercaptoetanol como prova confirmatória. Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. As análises realizadas foram: (a) determinação das prevalências de focos e de animais soropositivos; (b) identificação de fatores de risco para a brucelose bovina; e (c) análise de agrupamentos espaciais de focos. As prevalências de focos de brucelose bovina e de animais soropositivos no Estado do Espírito Santo foram de 9,00% [6,97% - 11,55%] e 3,53% [1,93% - 6,37%], respectivamente. No estrato amostral 1, as prevalências de focos e de animais soropositivos foram de 6,80% [4,47% - 10,21%] e 3,43% [1,33% - 8,57%], respectivamente. No estrato amostral 2, a prevalência de focos foi de 10,86% [7,86% - 14,84%] e a prevalência de animais soropositivos foi de 3,69% [2,13% - 6,33%]. Os fatores de risco para a brucelose bovina no Estado foram utilização de inseminação artificial (OR = 7,05) e confinamento/semi-confinamento dos animais (OR = 2,98). No estrato amostral 1, as propriedades com mais de 15 fêmeas com idade &ge; 24 meses (OR = 5,18), que alugam pasto (OR = 2,85) e que utilizam inseminação artificial (OR = 6,76) possuíram maior chance de serem focos. No estrato amostral 2, a existência de mais de 42 bovinos no rebanho (OR = 5,31), utilização de inseminação artificial (OR = 11,72), compra de reprodutores em exposição (OR = 16,7) e confinamento/semi-confinamento dos animais (OR = 2,99) foram os fatores mais associados com a presença da doença. A vacinação de fêmeas entre três e oito meses de idade foi um fator protetor contra a doença nos dois estratos amostrais e em todo o Estado. Não houve tendência de formação de agrupamentos espaciais de focos em relação às propriedades livres. / As result of a partnership joining the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the Animal and Plant Health Institute of the State of Espírito Santo (IDAF-ES) and the Department of Preventive Veterinary Medicine and Animal Health (VPS) of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny (FMVZ) of the University of São Paulo (USP), a seroepidemiological survey of bovine brucellosis was conducted in State of Espírito Santo, Southeast region of Brazil. The State was stratified in two sampling strata according to the predominant farm enterprise and the operational capacity of the IDAF-ES to conducting the field work. The sampling was delineated for the determination of the prevalence of positive herds and seropositive animals for bovine brucellosis per sampling stratum. It was made a random selection of 300 herds (primary units) per sampling stratum, and inside the primary units, if the herd was constituted by up to 99 cows over 24 months of age, 10 cows of the same age (secondary units) were randomly sampled, or all existing cows if they did not totalize 10 cows; if the herd was constituted by more than 99 cows over 24 months of age, 15 cows of the same age were randomly sampled. A total of 5370 blood samples of cows from 636 herds distributed in the sampling strata were collected. On the occasion of the blood collection, an epidemiological questionnaire was applied in each herd and the geographical coordinates were obtained with a GPS. For the serological diagnosis, the Rose Bengal Test was applied as a screening method and the 2-mercaptoetanol test as a confirmatory method. Herds with at least one test-positive animal were considered positive. The following analyses were carried out: (a) determination of the prevalence of positive herds and eropositive animals; (b) identification of risk factors for bovine brucellosis; and (c) spatial clustering analysis of positive herds. The prevalence of positive herds and seropositive animals in the State of Espírito Santo were 9.00% [6.97% - 11.55%] and 3.53% [1.93% - 6.37%], respectively. In sampling stratum 1, the prevalence of positive herds and seropositive animals were 6.80% [4.47% - 10.21%] and 3.43% [1.33% - 8.57%], respectively. In sampling stratum 2, the prevalence of positive herds was 10.86% [7.86% - 14.84%] and the prevalence of seropositive animals was 3.69% [2.13% - 6.33%]. The risk factors for bovine brucellosis in State were utilization of artificial insemination (OR = 7.05) and intensive/semi-intensive management systems (OR = 2.98). In sampling stratum 1, herds with more than 15 cows over 24 months of age (OR = 5.18), which rent pasturage (OR = 2.85) and that use artificial insemination (OR = 6.76) presented larger chance of being positive. The risk factors for bovine brucellosis in sampling stratum 2 were: existence of more than 42 bovine in the herd (OR = 5.31), utilization of artificial insemination (OR = 11.72), purchase of bovine reproducers in exhibitions (OR = 16.7) and intensive/semi-intensive management systems (OR = 2.99). The vaccination of heifers between three and eight months of age was a protective factor against the disease in the sampling strata and in State. There was no tendency for spatial clustering of positive herds.

O coronavírus bovino (BCoV) é classificado no Grupo 2 do gênero Coronavirus da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, causando disenteria (disenteria de inverno) em bovinos adultos, diarréia em bezerros neonatos e processos respiratórios em bovinos adultos e jovens. No presente estudo, 21 amostras fecais de vacas leiteiras colhidas durante um surto de disenteria em uma propriedade de Paranapanema no Estado de São Paulo positivas para BCoV foram submetidas a reações de PCR para amplificação parcial dos genes codificadores das proteínas S (448pb) e HE (441pb) do BCoV. Destas amostras, 14 foram positivas para cada PCR (não simultaneamente), sendo os fragmentos amplificados submetidos a seqüenciamento de DNA para reconstrução genealógica por máxima parcimônia através de algoritmo heurístico em conjunto com seqüências homólogas recuperadas do GenBank. Considerando-se o gene S, a identidade de nucleotídeos entre as 14 amostras aqui estudadas foi de 100%, tendo as mesmas segregado em um grupo exclusivo; além disso, demais amostras brasileiras incluídas no estudo segregam em outros dois grupos. Em relação ao gene HE, as 14 amostras estudadas apresentaram identidade de nucleotídeos de 100%, mas a árvore genealógica apresentou topologia pouco resolvida, tendo estas amostras, segregado em grupo politômico com as seqüências homólogas incluídas. Comparações entre os diversos grupos nas árvores do gene S em termos de aminoácidos revelaram marcadores grupo-específicos, com substituições exclusivas para as amostras de BCoV aqui estudadas. Com base nestes resultados, conclui-se que, durante o transcorrer do surto de disenteria de inverno, uma única linhagem de BCoV estava presente, baseado no seqüenciamento parcial dos genes S e HE e que há pelo menos três genótipos de BCoV presentes no Brasil em relação ao gene S e ao menos um em relação ao gene HE, considerando-se as regiões gênicas e as seqüências incluídas no presente estudo. / Bovine coronavirus (BCoV) is classified in group 2 of the genus Coronavirus, family Coronaviridae, order Nidovirales, and causes winter dysentery in adult bovine, neonatal calf diarrhea, and respiratory disorders in both adult and young bovine. In this investigation, 21 fecal samples from dairy cows collected during an outbreak of dysentery in a farm located at Paranapanema, São Paulo State, all positive to BCoV, were submitted to PCRs to partial amplification of genes S (448bp) and HE (441bp ) of BCoV. Fourteen out of these samples were positive for each PCR (not simultaneously) and the amplicons were submitted to DNA sequencing for genealogic reconstruction with maximum parsimony and heuristic algorithm with homologous sequences retrieved from the GenBank. Regarding S gene, the nucleotide identity among the 14 strains was 100% and these segregated in an exclusive cluster; furthermore, the other Brazilian strains included in the analysis segregated in other two clusters. Taking into account the HE gene, the 14 strains analyzed presented a nucleotide identity of 100%, but the genealogic tree showed a low-resolved topology, having these samples segregated in a polytomic cluster with the homologous sequences included. Amino acid comparisons among the different clusters in the trees of gene S revealed cluster-specific markers, with exclusive substitutions for the BCoV strains studied herein. Based on these results, one can conclude that, during the winter dysentery outbreak, a single BCoV lineage was involved based on partial S and HE genes sequences and that there are at least three genotypes of BCoV in Brazil regarding S gene and at least one regarding HE gene, taking into account the gene regions and the sequences included in this investigation.