El cáncer de pulmón es una de las neoplasias más frecuentes a escala mundial, representa el 15-20% de todas las neoplasias. La radioterapia forma parte del tratamiento radical del cáncer de pulmón, la forma de administración más frecuente, es combinada con la quimioterapia en los estadios de enfermedad localmente avanzada (IIIA-IIIB), lo que supone un 35-40% de los casos en el momento del diagnóstico. La mayor limitación para este tratamiento es la toxicidad aguda esofágica. Los objetivos del presente trabajo son: 1-Detectar los pacientes con cáncer de pulmón tratados con esquemas que combinan la quimio y la radioterapia que presentan un mayor riesgo de desarrollar esofagitis aguda.2-Analizar el papel de la glutamina como agente preventivo de la toxicidad esofágica aguda secundaria a la radioterapia.3-Determinar los factores predictivos de la esofagitis aguda radioinducida.4-Evaluar la capacidad predictiva del parámetro resultante.El análisis de estos objetivos se concretó en la publicación de dos artículos en el Int J Radiat Oncol Biol. Phys; así, para tratar de responder a los dos primeros objetivos, se realizó un primer estudio piloto, en el que se incluyeron 75 pacientes tratados con radio y quimioterapia (secuencial en 26 casos y concomitante en 49 casos) a los que se administró suplementos de glutamina oral a dosis de 30 gr/día.Para evaluar los dos últimos objetivos, se han analizado prospectivamente los datos de 100 pacientes tratados con radio-quimioterapia concomitante. En ambos estudios, la toxicidad esofágica se ha valorado según la escala de la RTOG, se han recogido las necesidades analgésicas de los pacientes y se han analizado los siguientes parámetros dosimétricos: longitud y volumen de esófago en el campo irradiado, porcentaje de volumen esofágico tratado con una dosis ≥10, ≥20, ≥30, ≥35, ≥40, ≥45, ≥50, ≥55 y ≥60 Gy, las dosis máxima y media administradas al esófago. Además se ha creado un índice de esofagitis propio, para valorar la toxicidad a lo largo del tiempo. Se ha empleado el análisis mediante curvas ROC para evaluar el parámetro predictivo resultante. Las conclusiones objetivadas fueron:1-La administración concomitante de la radio y la quimioterapia produce un aumento de los efectos secundarios a nivel esofágico respecto a su administración secuencial.2-Los suplementos nutricionales de Glutamina oral administrados de forma precoz y mantenida a los pacientes tratados con esquemas de quimio y radioterapia concomitante podrían tener un papel protector sobre la mucosa esofágica, disminuyendo y retrasando la aparición de la esofagitis aguda.3-El V50 (% de volumen esofágico que recibe una dosis superior o igual a 50 Gy) es el factor dosimétrico que muestra una mejor correlación con los parámetros de esofagitis aguda analizados: duración de la esofagitis (p= 0,01); duración de la esofagitis grado 1 (p= 0,01); analgesia máxima requerida (p= 0,01); índice de esofagitis (p= 0,02) y esofagitis de grado superior o igual a 1 (p= 0,05).4-El 30 % del volumen de esófago que recibe una dosis superior o igual a 50 Gy, es el factor predictivo asociado de forma significativa con la esofagitis aguda de grado superior o igual a 1 y con la analgesia máxima requerida. Existe una asociación no significativa con la esofagitis aguda de grado superior o igual a 2. / Lung cancer is the most frequent cause of cancer death worldwide and its global incidence has been steadily increasing during recent decades. Radiotherapy constitutes one of the main treatment modalities in lung cancer and is indicated, combined with chemotherapy, in around three-quarters of all lung cancer patients. As a result of increasing use of multimodality treatment approaches, esophagitis has emerged as a significant dose-limiting toxicity. The objectives of this work are:1-Detect lung cancer patients treated with chemo-radiotherapy with higher risk of esophagitis.2-Asses the role of Glutamine in the prevention of acute esophageal toxicity (AET) caused by radiation.3- Determine the dose volumetric parameter predictive of acute esophagitis.4- Test the predictive ability of this parameter to foresee the development of acute esophagitis.The analysis of these objectives were summarised in two original articles published in Int J Radiat Oncol Biol Phys; so, to answer the first two objectives, seventy-five patients were enrolled; 34.7% received sequential radio-chemotherapy, and 65.3% received concomitant radio-chemotherapy. Every patient received prophylactic glutamine powder in doses of 30 g/24 h.To asses the latest objectives, the data of 100 patients with lung cancer ,treated with concurrent chemoradiotherapy were prospectively analyzed for possible predictors of acute esophagitis. Esophageal toxicity was graded according to the RTOG criteria. The following dosimetric parameters were analyzed: length and volume of esophagus in treatment field, percentage of esophagus volume treated to ≥10, ≥20, ≥30, ≥35, ≥40, ≥45, ≥50, ≥55 and ≥60 Gy and the maximum and mean doses delivered to the esophagus. Also, I developed an esophagitis index ( EI) in order to account the esophagitis grades over treatment time . The predictive abilities of models (sensitivity and specificity) were calculated by ROC curves.What follow are the conclusions;1- Whit regard to secuential treatment, the addition of concurrent chemotherapy to radiation appears to lower esophageal radiation tolerance, resulting in markedly higher incidences of esophagitis.2- The results of this study suggested a clinically beneficial effect of oral glutamine supplementation on the prevention of esophagitis in patients treated with concomitant thoracic radio-chemotherapy.3- The V50 (% of esophageal volume receiving ≥ 50 Gy) was the dosimetric parameter best correlated with acute esophagitis parameters evaluated: AET duration (p= 0.01); AET grade 1 duration (p=0.01); maximum analgesia employed (p=0.01); esophagitis index (p=0.02); and AET grade 1 or worse (p=0.05).4- The 30% of esophageal volume receiving ≥ 50 Gy was the most statistically significant factor associated with AET grade 1 or worse and maximum analgesia required by these patients. There was an association with AET grade 2 or worse but it did not achieve statistical significance (p 0.076).

El cáncer de endometrio es actualmente la neoplasia más frecuente del tracto genital inferior en los países desarrollados. La estadificación es quirúrgico-patológica y se basa en el estudio de la pieza operatoria. El tratamiento estándar se realiza mediante laparotomía, si bien hay estudios que sugieren puede ser llevado a cabo mediante abordaje laparoscópico-vaginal, con igual radicalidad oncológica y sin mayor número de complicaciones.El propósito de este estudio fue describir la factibilidad y los resultados del abordaje quirúrgico laparoscópico en el tratamiento del cáncer de endometrio estadio I clínico, y compararlos con los obtenidos mediante laparotomía. El objetivo principal fue comparar los resultados en cuanto a supervivencia global, periodo libre de enfermedad y complicaciones. Otros objetivos fueron comparar los datos quirúrgicos, los ganglios retroperitoneales obtenidos y la estancia hospitalaria.La estadificación quirúrgica mediante ambos procedimientos incluyó la realización de citologías peritoneales, histerectomía extrafascial con salpingooforectomía bilateral, linfadenectomía pélvica bilateral ± paraaórtica y omentectomía y biopsias aleatorias en tipos histológicos de alto riesgo. La mayoría de datos se recogieron de forma prospectiva. Se incluyeron en el estudio todas las pacientes diagnosticadas de un cáncer primario de endometrio estadio I en el Hospital Materno-infantil Vall d'Hebron, en las cuales el primer tratamiento pretendió ser la cirugía. El análisis estadístico se realizó mediante el paquete SPSS 11.0. Se utilizaron pruebas de normalidad, pruebas no paramétricas, test de Kaplan y Meier para las estimaciones de supervivencia global y tiempo libre de enfermedad, log-rank test para la comparación univariante de las curvas de supervivencia y modelo de los riesgos proporcionales de Cox para el análisis multivariable. Entre enero/1995 y junio/2001 se incluyeron 371 pacientes con cáncer endometrial estadio I clínico. La estadificación se realizó mediante abordaje laparoscópico-vaginal en 55 pacientes (14,8%) y mediante laparotomía en 315 (84,9%). La edad media fue de 64,3 años y el índice de masa corporal medio de 30 (r, 18-57). Se realizó la cirugía de estadificación óptima en 367 pacientes (98,9%), sin diferencias significativas al comparar las dos vías de abordaje. La linfadenectomía (LND) pélvica se realizó en el 91,1% de las pacientes y la LND aórtica en el 50%. Hubo afectación ganglionar en 41 casos (11,1%) y 32 recurrencias a lo largo del seguimiento (8,6%). El tipo histológico más frecuente fue el endometrioide (74%), seguido del grupo de alto riesgo (seroso-papilar, célula clara y adenoescamoso) con un 16%. El 27,5% de los cánceres fueron mal diferenciados (G3). La distribución por estadios FIGO fue: estadio I (58%), II (24%), III (16%) y IV (2%). Con un seguimiento medio de 40,7 meses, la supervivencia global para el total de las pacientes fue del 92,2% (supervivencia media de 93 meses), siendo del 90,8% para las pacientes del grupo laparotómico y del 100% para las del laparoscópico. La comparación de las curvas de supervivencia entre las dos vías mostró un resultado estadísticamente no significativo (p=0,06). El tiempo libre de enfermedad para el total de pacientes fue del 91,4% (tiempo medio de 93,2 meses), siendo del 90,2% para el abordaje laparotómico y del 98,2% para el laparoscópico. Las curvas de tiempo libre de enfermedad tampoco difirieron (p=0,09).Diferenciando entre ambas vías de abordaje, se hallaron diferencias estadísticamente significativas (p<0,001) en cuanto a datos operatorios: el sangrado intraoperatorio medio, el número de transfusiones y la estancia hospitalaria media fueron menores en el grupo de laparoscopia. En cambio, el tiempo quirúrgico medio fue mayor en este grupo. El promedio de ganglios pélvicos y aórticos obtenidos fue superior en el grupo laparoscópico (p<0,001). El número de complicaciones fue similar con ambas vías (p=0,26). En el grupo laparoscópico no hubo ningún caso de conversión a laparotomía. Las dos poblaciones estudiadas fueron similares en características basales y en variables histopatológicas. En el análisis multivariable, ajustado para diferentes variables clínicas y morfológicas, las únicas variables con valor pronóstico independiente para supervivencia global fueron el grado mal diferenciado, la edad y el estadio IVa. Para tiempo libre de enfermedad lo fueron el tipo histológico de alto riesgo, la edad y el estadio IVa.Se concluye que la estadificación quirúrgica del cáncer de endometrio mediante abordaje laparoscópico-vaginal es factible y segura, con menor morbilidad y estancia hospitalaria. No obstante, se requiere un ensayo clínico que pueda confirmar estos resultados. / Endometrial cancer is currently the most frequent malignancy of the female lower genital tract in developed countries. Stratification of tumor extension is based on surgical findings and pathological examination of the resected specimen. Routine treatment is carried out through a standard laparotomy, although some studies have suggested that the operation can be performed by laparoscopic-vaginal approach with the same level of oncological radicality and without increasing the rate of complications.The purpose of this study was to assess the feasibility of laparoscopy in the surgical treatment of clinical stage I endometrical carcinoma and to compare and the results obtained with those of laparotomy. The primary objective of the study was the comparison between both procedures in terms of overall survival, disease-free survival, and rate of complications. Secondary objectives included a comparison of surgical data, retrieved retroperitoneal lymph nodes, and length of hospital stay.Surgical stratification in both procedures included peritoneal cytology, extrafascial hysterectomy with bilateral salpingoophorectomy, bilateral pelvic lymphadenectomy ± para-aortic lymphadenectomy and omentectomy, and random biopsies in high-risk histological types. Most data were recorded prospectively. All patients with a diagnosis of primary endometrical carcinoma, stage I, attended at the Hospital Materno-infantil Vall d'Hebron in whom surgery was indicated as the primary treatment modality were included. The SPSS, version 11.0, software computer progarm was used for the analysis of data. Tests of normality, non-parametric tests, the Kaplan-Meier test for the analysis of overall survival and disease-free survival with the long-rank test for the comparison of survival curves, and a Cox proportional regression analysis were used.Between January 1995 and June 2001, a total of 371 patients with clinical stage I endometrial cancer were included. Stratification of the disease was made by the laparoscopic-vaginal approach in 55 patients (14.88%) and by laparotomy in 315 (84.9%). The mean age of the patients was 64.3 years and the body mass index 30 kg/m2 (range 18-57). Optimal stratification surgery was achieved in 367 patients (98.9%), without significant differences between both surgical routes. A total of 91.1% of patients underwent pelvic lymphadenectomy and 50% para-aortic lymphadenectomy. Positive lymph nodes were found in 41 cases (11.1%) and a total of 32 relapses (8.6%) were documented at follow-up. Edometrioid carcinoma was the most frequent (74%) histological type followed by the high-risk group (serous papillary, clear cell, and adenosquamous) (16%). In 27.3% of cases, the tumor was poorly differentiated (G3). Distribution of cases according to FIGO stage included stage I in 58% of cases, stage II in 24%, stage III in 16%, and stage IV in 2%. After a mean follow-up of 40.7 months, the overall survival rate was 92.2% (mean survival 93 months), with 90% for the laparotomy group and 100% for the laposcopic group. Differences in survival between both groups were not statistically significant (P=0.06). Disease-free survival for all patients was 91.4% (mean 93.2 months), with 92% for the laparotomy approach and 98.2% for the laparoscopic group. Differences in disease-free survival between both procedures were not statistically significant (P=0.09).However, there were significant differences (P<0.001) between both surgical routes with regard to operative data: mean blood loss, number of blood transfusions required, and mean length of hospital stay, which were lower in the laparoscopic group. In contrast, the mean surgical time was significantly longer in this group. The mean number of pelvic and aortic nodes recovered was higher in the laparoscopic group (P<0.001). The number of complications was similar for both routes (P=0.26). In patients undergoing surgery through the laparoscopic approach, no case of conversion to laparotomy was necessary.The two study populations were similar in baseline characteristics and histopathological variables. In the multivariate analysis and after adjusting for different clinical and morphological parameters, independent variables significantly associated with survival were poorly differentiated histological grade, age, and stage IVa, whereas independent predictors of disease-free survival were high-risk histological type, age, and stage IVa.It is concluded that surgical stratification of endometrial cancer by means of laparoscopic-vaginal approach is feasible and safe, with lower morbidity and shorter length of hospital stay. However, these results should be confirmed in the framework of a clinical trial.

Hipótesis de trabajo. Una historia de biopsia con resultado de patología mamaria benigna, presentan un riesgo de cáncer de mama posterior. Page y Dupont encontraron que las lesiones proliferativas con atipias tienen un RR de 4-5 para cáncer de mama, las lesiones proliferativas sin atipias tienen un RR de 1,5-2 y lesiones benignas de tipo no proliferativo no están asociadas con riesgo de cáncer de mama subsecuente. Sin embargo existen estudios contradictorios para cada una de las lesiones. Material y métodos Es un estudio de cohortes de pacientes a las que se le ha realizado una exéresis quirúrgica en el período comprendido entre enero de 1990 y junio de 1999 en la Unidad de Patología Mamaria del Hospital Vall d´Hebrón. En total se han realizado 1028 exéresis quirúrgica por patología benigna . Se ha realizado un control evolutivo mediante mamografía y exploración clínica. Resultados La edad media de las pacientes al diagnóstico de la lesión es de 40,31 años (rango 11-86, DS 14,9) La mayoría de las pacientes no presentan antecedente de cáncer familiar (88,7%), Un 26,8% de las pacientes son menopausicas, siendo la edad media de aparición de 47,63 años. El 64,5% de las pacientes ha tenido algún hijo. La edad media del primer hijo es de 25,11 años. Se realizaron 479 exéresis quirúrgicas en la mama derecha (46,6%) y 494 exéresis quirúrgicas en la mama izquierda (48,1%). La localización más frecuente fue C.S.E. en 305 pacientes (29,7%), seguido de C.S.I. en 114 pacientes (11,1%). Las lesiones benignas de la mama se dividen en las 3 categorías según la clasificación de Paget y Dupont: Lesiones no proliferativas en 700 pacientes (68,1%), seguido de las lesiones proliferativas sin atipias en 301 pacientes (29,3%) y de las lesiones proliferativas con atipias en 27 pacientes (2,6%). El tiempo medio de seguimiento es de 56,9 meses (IC 95% : 54,9-58,8), con un tiempo máximo de seguimiento de 143 meses. Durante el seguimiento se diagnosticó de cáncer de mama a 10 pacientes. En la curva de supervivencia de Kaplan-Meier, la probabilidad de neoplasia a los 5 años es de 1% y a los 10 años de 4,8%.Las lesiones no proliferativas son la población control con RR de 1. Las lesiones proliferativas sin atipias tienen un RR elevado de 5,6 con respecto a las lesiones no proliferativas, con intervalos de confianza que son significativos, 26. Las lesiones proliferativas con atipias presentan un RR de 25,6 con respecto a las lesiones no proliferativas, con intervalo de confianza significativo. Las lesiones proliferativas con atipias presentan RR de 3,7 con respecto a las lesiones prolifertivas sin atipias, aunque el intervalo de confianza no es significativo. En el análisis multivariante de riesgos proporcionales de Cox, se han analizado los factores de riesgo de cáncer de mama. Los factores independientemente relacionados con riesgo de cáncer son tipo de lesión (RR:4,2; IC 95%:1,5-11,13) , de manera que hay una tendencia progresiva de riesgo según mayor grado de lesión y biopsia previa (RR:4,2; IC 95%:1,04-17,1).Conclusión El hecho de tener lesión proliferativa con atipias aumenta el riesgo de forma significativa en nuestra población, el cual es significativamente más alto que en las lesiones no proliferativas. / Background. A history of biopsy that reveals benign breast lesion is a risk factor for breast cancer. Dupont and Page found that women with atypical hyperplasia had a four to fivefold increase en breast cancer risk, that women with proliferative disease without atypia had a twofold increase in breast cancer risk, and that women without proliferative disease had no elevation in breast cancer risk. However, we found contradictory studies for everyone of the lesions. Methods It is a cohort study of pacients who underdgo surgery that reveals benign breast lesion between January of 1990 and June of 1999 in The Breast Patology Unity at the Vall d´Hebron Hospital. We make 1028 surgeries with result of benign breast lesion in this period. The follow-up is made with mammography and clinic exploration. Results The average age of the pacients at the diagnosis of the lesion is 40,31 years (range between 11-86, SD 14,9). Most of pacients do not have family history of breast cancer (88,7%). The 26,8% of pacients are premenopausal women, with an average age of apparition of this status of 47,63 years. The 64,5% of pacients have had one or more children. The average age of the first child is 25,11 years. The surgeries are made in the right breast in 479 cases (46,6%) and in the left breast in 494 (48,1%). The location more frecuent is the quadrant upper and external in 305 pacients (29,7%), follow of quadrant upper and internal in 114 pacients (11,1%). The benign breast lesions are classified in three categories according to the Paget and Dupont classification: No proliferative lesions in 700 pacients (68,1%), proliferative without atypias lesions in 301 pacients (29,3%) and proliferative with atypias lesions in 27 pacients (2,6%). The average time of follow-up is 56,9 months (CI 95% : 54,9-58,8), with a maximun follow-up of 143 months. Breast cancer was diagnosed in 10 pacients during the follow-up. In the Kaplan-Meier survival, the probability of cancer in 5 years is 1% and in 10 years 4,8%. Pacients with no proliferative lesions are control group with RR 1. Proliferative without atypias lesions have a RR of 5,6 compared with no proliferative lesions, with statistically significant association. Proliferative with atypias lesions have a RR of 25,6 compared with no proliferative lesions, with statistically significant association. Proliferative with atypias lesions have a RR of 3,7 compared with proliferative without atypias, althoug the association is not significant.In the Cox multivariant analysis, we have analysed the risks factors of breast cancer.The independent factors that increase the breast cancer risk are type of lesion (RR:4,2; IC 95%:1,5-11,13) , so there is a progresive increase of risk depending on the type of lesion, and the existence of previous biopsy (RR:4,2; IC 95%:1,04-17,1).Conclusion Benign proliferative with atypias lesions is associated with an increased risk of future breast cancer in our population, witch is significantly higher than no proliferative lesions.

El osteosarcoma es el tumor óseo más frecuente que afecta al perro. En veterinaria, las opciones para su manejo terapéutico son limitadas y el pronóstico para estos pacientes es pobre. Los adenovirus oncolíticos son una atractiva herramienta de tratamiento experimental ya que se pueden replicar y extender dentro del tumor para inducir directamente la destrucción del tejido tumoral. Sin embargo, el mayor impedimento de la administración sistémica de los adenovirus oncolíticos es la presencia de anticuerpos neutralizantes preformados. Éste obstáculo puede ser resuelto administrando el adenovirus oncolítico dentro de una célula transportadora capaz de ocultar los antígenos virales durante el transporte sistémico. Las células tumorales tienen tropismo tumoral, lo que permite su utilización como potenciales vehículos de transporte. En este trabajo, se estudió la capacidad de las células tumorales caninas infectadas con adenovirus oncolítico in vitro y administradas sistémicamente para escapar de las defensas antivirales, alcanzar el sitio tumoral y, subsecuentemente, de liberar la progenie viral para infectar a la célula tumoral diana en un modelo xenoinjertado de osteosarcoma canino. Los estudios in vivo utilizando células tumorales transportadoras demostraron el eficiente transporte sistémico de adenovirus oncolítico al tumor, incluso en presencia de anticuerpos anti-adenovirus. Al contrario, la presencia de anticuerpos anti-adenovirus reducieron el transporte del virus desnudo al tumor. La administración intratumoral y sistémica de las células transportadoras infectadas con un adenovirus canino de replicación selectiva (OCCAV) mostró una disminución significativa en el crecimiento del tumor comparado con la inyección del virus desnudo en presencia de altos títulos de anticuerpos neutralizantes. La inmunosupresión con ciclofosfamida no afectó la actividad terapéutica de las células tumorales infectadas con OCCAV, pero resultó en un beneficio terapéutico respecto al virus desnudo. Por otro lado, la administración intratumoral y sistémica de células tumorales infectadas con OCCAV en dos perros con osteosarcoma fue bien tolerada. En conjunto, estos hallazgos soportan la idea de la administración por vía sistémica del sistema celular infectado con virus oncolítico para el tratamiento del osteosarcoma canino. / Osteosarcoma is the most frequent bone tumor affecting dogs. Veterinary options for its therapeutic management are limited and the prognosis for patients is poor. Oncolytic adenoviruses constitute an attractive experimental treatment tool since they are able to replicate and extend within the tumor to directly induce tumoral tissue destruction. However, the greatest hindrance for the systemic administration of oncolytic adenoviruses is the presence of preformed neutralizing antibodies. This obstacle can be surmounted by administering the virus inside a transporter cell which can hide the viral antigens during systemic transport. Malignant cells display tumor tropism, which allows for their use as potential transport vehicles. In this work, we studied the ability of canine malignant cells infected in vitro with oncolytic adenoviruses and systemically administered to escape from antiviral defences, reach the site of the tumor and subsequently release the viral progeny to infect target tumor cells in a xenografted canine osteosarcoma model. In vivo studies using transporter malignant cells showed efficient systemic transport of oncolytic adenovirus to the tumor, even in the presence of anti-adenovirus antibodies. On the contrary, the presence of anti-adenoviral antibodies reduced the transport of naked viral particles to the tumor. Intratumoral and systemic administration of transporter cells infected with a selective replication canine adenovirus (OCCAV) showed a significant decrease in tumor growth as compared to the injection of naked viral particles in the presence of high titers of neutralizing antibodies. Immunosuppression with cyclophosphamide did not affect the therapeutic activity of malignant cells infected with OCCAV, but resulted in therapeutic benefit in the case of naked viral particles. Furthermore, intratumoral and systemic administration of malignant cells infected with OCCAV in two dogs with osteosarcoma was well tolerated. Altogether, these findings support the concept of systemic administration of oncolytic virus-infected cells for the treatment of canine osteosarcoma.

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El objetivo general de esta tesis se enmarca en un proyecto más amplio de ingeniería de proteínas que trata de analizar y rediseñar la estructura, camino de plegamiento, función natural y aplicaciones biotecnológicas de una proteína, el PCI (Potato Carboxypeptidase Inhibitor). Las características estructurales de esta proteína, esencialmente sus puentes de azufre, nos invitaron a realizar un estudio general en proteínas ricas en puentes de azufre. / This tesis is included in a bigger protein engineering project which analices the structure, the folding pathways, the natural functions and biotechnological applications of PCI (Potato Carboxypeptidase Inhibitor). The estructural characteristics in this protein, and essentially its disulphide bridges, are the common factor in the studied proteins in this work.

El cáncer de próstata es una de las enfermedades con mayor índice de mortalidad en la población masculina. En los últimos años, hemos comprendido que para combatir esta enfermedad, es necesaria una complementación entre los conocimientos clínicos y moleculares de esta. El objetivo de esta tesis ha sido la búsqueda de nuevos genes cuya expresión estuviera asociada al fenotipo tumoral de la próstata. Para ello, se ha aplicado la técnica del differential display. A través de esta hemos encontrado dos genes sobreexpresados en cáncer de próstata respecto a la próstata normal, resultado que hemos corroborado mediante RT-PCR semicuantitativa, inmunohistoquímica y Western blot. Uno de ellos, corresponde a un gen de identidad desconocida, al que hemos denominado PTOV1 (Prostate Tumor Overexpressed 1), constituído por un nuevo módulo proteico, repetido en tándem que se encuentra también en otra proteína (PTOV2). PTOV1 se localiza en el cromosoma 19q13 y su expresión está regualada por andrógenos. La localización nuclear de PTOV1, así como su expresión, están relacionadas con el ciclo celular. Mediante la técnica del doble híbrido hemos encontrado varias proteínas que posiblemente interaccionan con PTOV1. En cuanto al segundo gen, corresponde a EMT (Extraneurona Monoamine Transporter). La expresión de EMT en determinados tumores de próstata es interesante como herramienta terapéutica, desde que se conoce que EMT actúa como transportador del análogo de la cloroetilnitrosourea SarcNU, que es una citotoxina selectiva que se internaliza en la célula específicamente a través de EMT y que actualmente se encuentra en fase clínica 1. / Prostate cancer is one of the most common cancer and the second cause of mortality in the male population. In the last few years we have understand the necessity of an interaction between the molecular and clinical research to study this pathology.Our goal has been the issolation of new genes with an expression associated to the tumoral phenotype of the prostate. To achieve this objective we have use the differential display technic. We have found two genes which are overexpressed in prostate cancer and we have check this result by semiquantitative RT-PCR, inmunohistochemistry and Western blot. One of these genes is a new gene that we have called PTOV1 (Prostate Tumor Overexpressed 1). PTOV1 protein consists in a block (PTOV) tamdenly repeat which is also present in another new protein, PTOV2. PTOV1 is located in the long arm of chromosome 19 (19q13) and his expression is regulated by androgens. The nuclear localization as well as the high levels of expression of PTOV1 are related with cell cycle. To know the function of PTOV1, we have performed the yeast two hybrid system.The second gene that we have found by differential display is the Extraneuronal Monoamine Transporter (EMT). EMT is a transporter of the cytotoxin SarcNU. The overexpression of EMT in several prostate cancers could provide a new possible antitumoral therapeutic treatment.

El desarrollo y la progresión de los cánceres de mama, y especialmente de aquellos que son hormono-dependientes están ampliamente influenciados y determinados por los receptores de estrógenos y progesterona (ER y PR respectivamente). Aproximadamente un 70% de todos los cánceres mamarios son ER+ y más de la mitad también son PR+. Está aceptado ampliamente que el estado del ER es un importante factor predictivo de buena respuesta a las terapias endocrinas (TEs), sin embargo la positividad del ER no es una garantía de la sensibilidad al tratamiento ya que algunos tumores ER+ no presentan una buena respuesta. Las observaciones clínicas indican que los tumores ER+PR- presentan una pobre respuesta a la TE y un fenotipo más agresivo que los ER+PR+. El objetivo de este estudio es identificar diferencias genéticas entre los subtipos de tumores ER+PR+ y ER+PR-. La técnica de CGH-array fue aplicada a 25 tumores ER+PR+ y 23 tumores ER+PR-. Los genes de interés obtenidos a partir del análisis de los resultados de dicha técnica fueron analizados por la técnica de hibridación in situ fluorescente (FISH) en una serie de validación formada por 50 tumores ER+PR+ y 50 tumores ER+PR- localizados en varios arrays de tejidos (TMAs). Como resultado se observó que los tumores ER+PR- tienen un ligero pero diferente perfil genético respecto a los tumores ER+PR+. Los tumores ER+PR- presentaban un mayor perfil genómico aberrante, con los cromosomas 17 y 20 como los más diferentemente alterados con ganancias solapadas, y los cromosomas 3, 8, 9, 14, 17, 21 y 22 como los más diferentemente alterados con pérdidas solapadas respecto al grupo ER+PR+. Las regiones ganadas solapadas 17q23.2-q23.3 y 20q13.12, y las regiones perdidas solapadas 3p21.32-p12.3, 9pter-p13.2, 17pter-p12 y 21tel-q21.1 estaban alteradas de forma estadísticamente significativa en los tumores ER+PR-. Las regiones de pérdida incluyen genes (RASSF1A, FHIT, CDKN2A, TP53 y BTG3) con funciones supresoras de tumores y están involucrados en apoptosis, mitosis, angiogénesis y dispersión celular. Mientras que las regiones de ganancia incluyen genes (MAP3K3, RPS6KB1 y ZNF217) involucrados en el control del ciclo celular, angiogénesis, resistencia a la apoptosis, metástasis y dispersión celular y en la activación de las vías de señalización de la PI3K/Akt/mTOR. Todas estas alteraciones podrían contribuir, al menos en algunos casos, a explicar la mayor inestabilidad genómica, la pérdida de la expresión del PR, el fenotipo más agresivo y la mayor resistencia a las ETs, todo ello tradicionalmente observado en los tumores ER+PR-. / Development and progression of all types of breast cancer, and especially the hormone-dependent ones are widely influenced and determined by estrogen and progesterone receptors (ER and PR, respectively). Approximately 70% of all breast cancers are ER+ and more than half of them are also PR+. It is widely accepted that ER status is a strong predictive factor of good response to endocrine therapy (ET), but ER positivity is not a guarantee of sensitivity to the treatment and some tumors fail to respond. Clinical observations indicate that ER+PR- breast cancers present a poorer response to ET and more aggressive phenotype than ER+PR+ ones. The aim of this study was to identify genetic differences between ER+PR+ and ER+PR- subgroups. An array CGH technique was applied to 25 ER+PR+ breast tumors and 23 ER+PR- ones. Genes of interest were analyzed by Fluorescence in situ hybridization (FISH) in a validation series composed by 50 ER+PR+ tumors and 50 ER+PR- ones on TMAs. As a result, it was observed that ER+PR- breast tumors have a smaller but different genetic profile. ER+PR- group presented a higher genomic aberrant profile with chromosomes 17 and 20 as the most differently altered with overlapped gains, and chromosomes 3, 8, 9, 14, 17, 21 and 22 as the most differently altered with overlapped losses respect to ER+PR+ group. The overlapped gained regions 17q23.2-q23.3 and 20q13.12, and the overlapped lost regions 3p21.32-p12.3, 9pter-p13.2, 17pter-p12 and 21tel-q21.1 were found in a significant way in ER+PR- breast tumors. Significant lost regions included genes (RASSF1A, FHIT, CDKN2A, TP53 and BTG3) with tumor suppressor functions and involved in apoptosis, mitosis, angiogenesis and cell spreading. Significant gained regions included genes (MAP3K3, RPS6KB1 and ZNF217) involved in cell cycle control, angiogenesis, resistance to apoptosis, metastasis and cellular spread, and activation of PI3K/Akt/mTOR pathways. All these alterations could contribute, at least in some cases, to explain the higher genomic instability, loss of PR expression, more aggressive phenotype and higher resistance to ETs, traditionally observed in ER+/PR- tumors.

El objetivo principal de esta tesis doctoral ha sido la caracterización de un principio activo de origen bacteriano con actividad apoptótica. Por un lado, este trabajo aborda la purificación y la identificación de la prodigiosina (PG) a partir de un extracto de "Serrata marcescens" 2170, mientras que por otro lado se estudia su acvitidad citotóxica y del tipo de muerte (apoptosis), en varias líneas celulares (cancerosas y no cancerosas).

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