Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-06T18:52:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-CarolinaAmaral.pdf: 1292331 bytes, checksum: dd6bdfd9f0916002036086fe27d37cbf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T18:52:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-CarolinaAmaral.pdf: 1292331 bytes, checksum: dd6bdfd9f0916002036086fe27d37cbf (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / Pequenos vírus de DNA, os Papilomavírus humano (HPV), são transmitidos por via sexual e infectam mucosas e epitélios levando ao desenvolvimento de tumores benignos, os quais podem evoluir para um processo carcinogênico. Este vírus apresenta seu genoma dividido em regiões de expressão precoce e tardia. Dentre as de expressão precoce, estão as regiões E6 e E7 as quais codificam para proteínas que interferem no ciclo celular do hospedeiro. A proteína viral E6 interage com a proteína celular p53 inibindo sua função supressora de tumor. Enquanto isso, a proteína E7 interage com a proteína pRb, também supressora de tumor, possibilitando a passagem do ciclo celular da fase G1 para a fase S. Dessa forma, o HPV é responsável pela transformação celular. Considerada o principal agente etiológico do câncer cervical, a infecção por HPV é necessária, porém não suficiente nesse processo. Fatores ambientais e genéticos têm sido apontados como co-fatores, sendo esse último responsável por 37% do risco total. Polimorfismos no gene TP53 bem como naqueles envolvidos na via da p53 têm sido relacionados com a susceptibilidade a lesões e câncer cervicais. Este trabalho teve como objetivo avaliar, em mulheres infectadas com HPV, a possível associação de polimorfismos em dois genes envolvidos na via da p53, MDM2(SNPT309G) e WAF-1(SNPC590T) com o aumento da susceptibilidade a lesões e câncer cervicais. Para tanto, foi utilizada a técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). Os dados foram analisados através de testes estatísticos qui-quadrado de Pearson, teste G de aderência, equilibro de Hardy-Weinberg e teste exato de Fisher. Não se observou diferenças significativas entre as freqüências alélicas e genotípicas entre grupos de casos e de controles nos dois genes analisados. Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que os polimorfismos MDM2(SNPT309G) e WAF-1(SNPC590T) não estão associados com lesões e câncer cervicais em pacientes da região nordeste do Brasil. / Small DNA viruses, the human papillomavirus (HPV) are sexually transmitted and infect mucosal and epithelia tissue leading to the development of benign tumors, wich can progress to a carcinogenic process. Its genome is divided into regions with early and late expression. Among the early expression, E6 and E7 encoded proteins that interfere in host cellular cycle. The viral E6 protein interacts with the cellular protein p53 and inhibits its tumor suppressor function. The E7 protein interacts with the pRb protein, also tumor suppressor, allowing the passage of the cell cycle form G1 phase to S phase. Thus, HPV is responsible for cell transformation. Considered the main etiological agent of cervical cancer, HPV infection is necessary but not sufficient in this process. Environmental and genetic factors have been implicated as cofactors, the latter being responsible for 37% of total risk. Polymorphisms in TP53 gene as well as those involved in the p53 pathway have been linked with susceptibility to cervical lesions and cancer. The aim of thisworkwas analysewomen infected with HPV to evaluate the possible association of polymorphisms in two genes involved in the p53 pathway, MDM2(SNPT309G) and WAF1(SNPC590T) with increasing susceptibility to cervical lesions and cancer. To this, technique Restriction Fragment Length Polymorphism(RFLP) was used. The dada was analyse by Pearson chi-square test, G adhesiontest, Hardy-Weinberg equilibriumand Fisher’s exact test. No significant differences were observed between the allelic and genotypic frequencies between groups of cases and controls in the two genes analyzed. The results of this study suggest that the MDM2polymorphism (SNPT309G) and WAF1(SNPC590T) are not associated with cervical lesions and cancer in patients from the Northeasternof Brazil.

OBJECTIVES: To determine the association of epithelial lesions and penile Human Papillomavirus infection among women with Human Papillomavirus induced cervical epithelial lesions and their partners.METHODS: To obtain the answer to the objectives were developed two studies. The first cross- sectional with 82 partners of women with cervical lesions Human Papillomavirus induced, examined by peniscopy, cytology and genotyping. The second study a systematic review with meta-analysis. The authors collected published information in databases about the prevalence of penile epithelial lesions and explored potential associations in partners of women with HPV-induced lesions. For the analysis we used methodological standards STROBE Initiative. Additionally meta-analyzes were conducted involving the selected studies.RESULTS: Observed positive peniscopy in 100% of patients. Koilocytosis in76.8%, and viral DNA positive in 14%, Human Papillomavirus types found were 16, 31 and 33. There was a significant association between the presence of penile injury and the time of contact with the partner p = 0.02. The authors included 29 studies in systematic review with a total of 8033 patients. Studies of case-control showed better methodological quality assessment in STROBE (Strengthening the Reporting of Observational Studies in Epidemiology). All patients were included in the meta-analyzes. There was a positive association between the detection methods for HPV and peniscopy among partners of women with cervical lesions and HPV infection in cross-sectional studies with Relative Risk (RR) of 0.87 and 0.34, and case-control (RR 0.13 and 0.58). The association was negative among cohort studies (RR 2.41 and 1.40).CONCLUSION: Positive peniscopy prevalence was higher than those found in the literature. There was significant association between penile lesion and time for socializing, in detriment of other risk variables A significant positive association in the meta-analysis of cross-sectional studies and case-control seems to demonstrate that there is a positive risk to partner of the woman s cervical lesion also acquires viral infection. The relative risk observed in the search for associations between HPV infection and peniscopy with both, positive and negative results appeared as a protective factor for acquiring HPV induced lesions in man. These tests could represent preventive methods for acquiring viral infection. / OBJETIVOS: Determinar a prevalência e associação de lesões epiteliais penianas e infecção por HPV entre mulheres com lesões epiteliais cervicais induzidas pelo HPV, e seus parceiros. MÉTODOS: Para obtenção da resposta aos objetivos foram elaborados dois estudos. O primeiro do tipo transversal prospectivo em 82 parceiros de mulheres com lesões cervicais HPV induzidas examinados através de peniscopia, citologia e genotipagem. O segundo uma revisão sistemática com metanálise onde os autores coletaram informações publicadas em bases de dados sobre a prevalência das lesões epiteliais penianas e exploraram as potenciais associações com as lesões HPV induzidas das parceiras. Para a análise metodológica utilizou-se os padrões da iniciativa STROBE (Strengthening the Reporting of Observational Studies in Epidemiology). Adicionalmente foram realizadas metanálises envolvendo os estudos selecionados. RESULTADOS: Observou-se peniscopia positiva em 100% dos pacientes, coilocitose em 76,8% , o DNA viral positivo em 14% , os tipos de HPVs encontrados foram 16, 31 e 33. Houve significativa associação entre a presença de lesão peniana e o tempo de convívio com a parceira p=0,02. Os autores incluíram 29 artigos na revisão sistemática, com um total de 8033 pacientes. Os estudos do tipo caso-controle apresentaram melhor qualidade metodológica na avaliação STROBE. Todos os pacientes foram incluídos nas metanálises. Houve associação positiva entre os métodos de detecção para o HPV e a peniscopia entre os parceiros de mulheres com lesão cervical ou infecção por HPV nos estudos transversais com Riscos Relativos (RR) de 0,87 e 0,34 e de caso- controle (RR de 0,13 e 0,58). A associação foi negativa entre os estudos de coorte (RR de 2,41 e 1,40). CONCLUSÃO: A prevalência de peniscopias positivas foi acima do encontrado na literatura. A associação entre a lesão peniana e o tempo de convívio, se mostrou significativo em detrimento de outras variáveis de risco. A associação significativa positiva na metanálise dos estudos transversais parece demonstrar que existe um risco positivo para o parceiro da mulher com lesão cervical também adquirir a infecção. O risco relativo observado nas associações entre a pesquisa para o HPV e peniscopias tanto com resultados positivos quanto negativos, apareceu como fator protetor para a infecção pelo Papilomavírus Humano no homem. Estes exames poderiam representar métodos preventivos para a aquisição da infecção viral.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-25T14:56:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Josiane M. Marino.pdf: 3282386 bytes, checksum: 552733e028f61ecd83d9fb5a32097a01 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-25T14:57:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Josiane M. Marino.pdf: 3282386 bytes, checksum: 552733e028f61ecd83d9fb5a32097a01 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T14:57:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Josiane M. Marino.pdf: 3282386 bytes, checksum: 552733e028f61ecd83d9fb5a32097a01 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-09-23 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / According to the International Agency for Research on Cancer (IARC), cervical cancer is the fourth most common cause of cancer among women worldwide. The relation of HPV with cervical cancer is already well established. The Amazon region is the world's region with the highest proportion of cervical cancer rate. Prevention of cervical cancer (CC) in Brazil, as in many other countries, is based on cytological examinations using the Papanicolaou method. However, screening for cervical cancer is a critical health service, which is often unavailable to women in resource-poor countries. The ability to collect samples by self-collection would be a welcome alternative, allowing part of the population to be covered, who does not have access to prevention programs or tends to avoid them due to fear of embarrassing exams, thus increasing coverage rates in the state of Amazonas.This study aims to analyze the screening strategy for cervical cancer by self-collection and a rapid test for HPV, among women living in riverfront populations in Coari / Amazonas (Brazil). This is a cross-sectional study of 412 women from such populations from Coari from August 2014 to February 2015, whose sample was obtained in their homes by using self-collection devices (brush Rovers® Evalyn®). The samples were processed using the rapid test Onco ™ E6 (Arbor Vita Corporation, stroke), followed by the test for DNA of HPV by PCR in house, targeting the L1 region of the virus and genotyping by PapilloCheck® (Greiner Bio-One, Germany). Women who screened positive for one of the test were submitted to a colposcopic evaluation, and to a histopathological exam when necessary. Informed consent was requested and a confidential and anonymous questionnaire was distributed with questions regarding socio-economic issues, clinical and behavioral questions, as well as concerning the acceptance of self-collection. For the analysis of categorical variables, we used the absolute and relative frequency and for numerical variables we used the mean ± ds, for the association of variables with HPV infections, we used the chi-square test de Pearson ( ᵡ2) and/or Fisher's exact test, using Epi info, version 7.0 software. All 412 women provided independent samples. The self-collection with Rovers® Evalyn® brush was a tool accepted by 97.8 % of the women interviewed and was considered easy by 95.4 % of the participants. The possibility of using self-collection together with the Onco E6 ™ rapid test in remote areas of difficult access would be a good alternative to increasing screening coverage in the state of Amazonas. The prevalence of the HPV infection was 18.7 %, and most common genotypes found by the technique of Papillocheck® were HPV 51 (1.94 % ), HPV 16 (1.7%) , HPV 53 (1.2%) and HPV 18 (1%). There were also detected 9 histopathological changes (5 cases of CIN I, 2 CINIII, 2 invasive carcinomas). / Segundo a International Agency for Research on Cancer (IARC), o câncer do colo do útero é a quarta causa de câncer mais comum entre as mulheres em todo o mundo. A relação do HPV com o câncer cervical já está bem estabelecida. A Amazônia é a região do mundo com maior taxa de câncer cervical proporcional. A prevenção do Câncer cervical (CC) é pautada em muitos países e no Brasil em ações de rastreio através de exame citológico pelo método de Papanicolaou. No entanto, o rastreio do câncer cervical é um serviço de saúde crítico, que é muitas vezes indisponível para as mulheres nos países com poucos recursos. A possibilidade de se coletar amostra através da autocoleta seria uma alternativa bem-vinda, possibilitando que parte da população que não tem acesso aos programas de prevenção ou até foge deles pelo temor ou constrangimento viesse a ele se incorporar, aumentando assim os índices de cobertura no Amazonas. O presente estudo objetivou analisar a estratégia de rastreio do câncer do colo do útero por autocoleta e teste rápido para HPV, em mulheres ribeirinhas do município de Coari/AM. Trata-se de um estudo transversal realizado com 412 mulheres ribeirinhas do município de Coari/Brasil no período de agosto de 2014 a fevereiro de 2015, cuja amostra foi obtida nas suas casas por autocoleta utilizando dispositivo próprio (escova Rovers® Evalyn®). As amostras foram processadas utilizando teste rápido Onco E6™ (Arbor Vita Corporation-AVC), seguido do teste para DNA do HPV através de PCR in house tendo como alvo a região L1 do vírus e genotipagem pelo PapilloCheck® (Greiner Bio-One, Germany). Mulheres com triagem positiva para um dos teste foram submetidas a avaliação colposcópica, e exame histopatológico quando necessário. O consentimento informado foi solicitado e um questionário de caráter anónimo e confidencial foi aplicado com questões sócio-econômicas, clínicas, comportamentais e sobre a aceitação da autocoleta. Para a análise das variáveis categóricas, foi utilizada a frequência absoluta e relativa e para as variáveis numéricas utilizou-se a média ± ds, para a associação das variáveis com a infecção por HPV, utilizou-se o teste do Qui-quadrado de Pearson (ᵡ2) e/ou o teste exato de Fisher, através do programa Epi Info versão 7.0. Todas as 412 mulheres forneceram amostras independentes. A autocoleta com a escova Rovers® Evalyn® foi uma ferramenta aceita em 97,8% das mulheres entrevistadas e considerada fácil por 95,4% das participantes. A possibilidade do uso da autocoleta em conjunto com o teste rápido Onco E6™, em áreas remotas e de difícil acesso seria uma boa alternativa para o aumento da cobertura de rastreio no estado do Amazonas. A prevalência da infecção pelo HPV foi de 18,7%, e os genótipos mais encontrados pela técnica do Papillocheck® foram o 51(1,94%), HPV 16 (1,7%), HPV 53 (1,2%) e HPV 18 (1%). Foram detectados 9 alterações histopatológicas (5 casos de NIC I, 2 NIC III, 2 Carcinoma invasor).

Câncer cervical é a terceira causa de morte em mulheres no mundo, e a quarta causa de morte em mulheres no Brasil. Seu principal agente etiológico é o vírus do papiloma humano (HPV), e diversos estudos estão sendo feitos na tentativa de desenvolver abordagens terapêuticas que combatam tumores induzidos por HPV. Nesse contexto, surgem às vacinas de DNA, capazes de induzir resposta imune específica contra esse tipo de tumores em camundongos. Entretanto essas vacinas apresentam baixa imunogenicidade em humanos, sendo necessária estudar abordagens que aumentem a potência dessas vacinas. Eletroporação in vivo (EP) é um método de entrega de vacinas de DNA, capaz de elevar potência das mesmas. Nosso grupo desenvolveu uma imunoterapia baseada em DNA (pgDE7h), e quando associamos a EP em nossa imunização pela via intramuscular, observamos aumento do efeito antitumoral e da frequência T CD8+E7-específicas e citotóxicas, migração de células para o sítio de inoculação do DNA, indução de células T polifuncionais e de memória, além de maior avidez de células T ativadas. / Cervical cancer is the third leading cause of death in women worldwide, and the fourth leading cause of death in women in Brazil. Its main etiological agent is human papilloma virus (HPV), and several studies are being done in trying to develop therapeutic approaches that fight tumors induced by HPV. In this context, there are the DNA vaccines are capable of inducing specific immune response against this type of tumors in mice. However, these vaccines have a low immunogenicity in humans, it is required to study approaches to increase the potency of these vaccines. In vivo electroporation (EP) is a method of delivering DNA vaccines, capable of raising power of the same. Our group has developed a DNA-based immunotherapy (pgDE7h), and when associate EP in our immunization by intramuscularly observed increase antitumor effect and frequency CD8+E7-specific and cytotoxic, cell migration for the inoculation site of the DNA polyfunctional T cell induction and memory, and higher avidity for activated T cells.

Cancer of the cervix is the second most frequent type of tumor in the female population, with a worldwide incidence in 2008, according to the World Health Organization of 530,000 cases. In Brazil, according to the Health Department, the disease had an average incidence in 2010 of 18.43 new cases per 100,000 women. This condition can be prevented by early detection and treatment. The main and most widely used method for screening cancer of the cervix is the cytopathology cervix exam. However, the diagnosis of cervical cancer is based in cytology, colposcopy and histology, whereas the latter is the gold standard for diagnosis. In patients with HIV infection the whole screening for cervical cancer is a very special situation due to the reduced immune defense and greater vulnerability to lesions that may be precursors of the cancer of the cervix. Objective: To study the cytopathological, colposcopic and histopathological findings of women with HIV infection, attended at the Infectology Service of Hospital Universitário de Santa Maria, Brasil. Methods: crosssectional study conducted in Gynecology Service of the Hospital Universitário de Santa Maria, from March 2012 to July of 2013. The sample consisted of 80 HIV prior infection women by. Results: The rate of cytology exams altered was 3.4% for intraepithelial lesion low-grade and 1% for ASCUS. Among 12 women submitted to cervical biopsy, 16,6% had diagnosis of NIC I or II and 16.6% of NIC III. There was a statistically significant association between time of infection by HIV and histological changes. Discussion: The proportions of alterations found in cytology exams differ from those reported abroad; however, they were similar to those described in Brazil. Final considerations: The screening for cancer precursor lesions of the cervix, in women with HIV infection, should be prioritized in public health services. / O câncer de colo de útero é o segundo tipo de tumor mais frequente na população feminina. Em 2008, segundo a Organização Mundial de Saúde, apresentou incidência mundial de 530 mil casos. No Brasil, segundo o Ministério da Saúde, a doença apresentou uma incidência média, no ano de 2010, de 18,43 novos casos para cada 100.000 mulheres. Essa afecção pode ser prevenida através da detecção e do tratamento precoce. O método principal e mais amplamente utilizado para rastreamento do câncer do colo do útero é o exame citopatológico do colo do útero. Contudo, o diagnóstico do câncer cervical pode ser realizado com base na citologia, na colposcopia e na histologia, sendo essa última o padrão-ouro para o diagnóstico. Em pacientes com infecção pelo vírus do HIV, o rastreamento do câncer de colo de útero é uma situação muito especial em função da defesa imunológica reduzida e da maior vulnerabilidade às lesões precursoras do câncer do colo do útero. Objetivo: Estudar os resultados dos exames citopatológicos, colposcópicos e histopatológicos em mulheres com diagnóstico de infecção pelo HIV, atendidas no serviço de Infectologia do Hospital Universitário de Santa Maria, Brasil. Métodos: Estudo transversal, realizado no serviço de ginecologia do Hospital Universitário Santa Maria, no período de abril de 2012 a julho de 2013. A amostra foi constituída de 80 mulheres com infecção prévia pelo HIV. Resultados: A taxa de exames de citologia alterados foi de 3,4% para lesão intraepitelial de baixo grau e 1% para ASCUS. Dentre as 12 mulheres submetidas à biópsia do colo do útero, 16,6% tiveram diagnóstico de NIC I ou II e 16,6% de NIC III. Houve uma associação estatisticamente significativa entre o tempo de infecção pelo HIV e as alterações histológicas. Discussão: As proporções de alterações encontradas nos exames de citologia destoam das registradas por outras pesquisas mundiais; todavia, foram semelhantes às descritas no Brasil. Considerações finais: O rastreio das lesões precursoras do câncer do colo do útero em mulheres com infecção pelo HIV deve ser priorizado nos serviços públicos de saúde.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-12T15:56:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Anna_Jessica_PPGG.pdf: 2035458 bytes, checksum: 6a4bc578c9eaea104302f33af03c3f21 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T15:56:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Anna_Jessica_PPGG.pdf: 2035458 bytes, checksum: 6a4bc578c9eaea104302f33af03c3f21 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / CNPQ / A infecção pelo Papilomavírus Humano, além de representar uma doença sexualmente transmissível altamente disseminada, é responsável por 5% dos cânceres em humanos, destacando o câncer cervical com altos índices de incidência e mortalidade. Embora comprovadamente eficazes, as vacinas vigentes não combatem infecções já estabelecidas e apresentam um elevado custo de produção. Esse cenário revela a necessidade de estratégias vacinais alternativas. O presente trabalho propõe a expressão de diferentes genes recombinantes em Escherichia coli, uma plataforma biotecnológica econômica, de fácil manipulação e de alto rendimento. Os genes recombinantes utilizados foram: L1 de HPV16 e construções quiméricas basedas na substituição de epítopos da oncoproteína E5 na alça h4 e na região C-terminal de L1, com potencial para geração de antígenos profiláticoterapêuticos e na substituição de epítopos da proteína L2 na região da alça h4 para avaliação de possível neutralização cruzada. Após subclonagem em pGEM-T, esses genes foram clonados em vetor de expressão pAE e linhagens de Escherichia coli BL21 e Rosetta foram transformadas com os vetores de expressão gerados. A confirmação da produção das proteínas se deu por Western blot, a partir de extratos de culturas induzidas com IPTG. Otimizações nos protocolos de indução, lise e preparo das amostras foram realizadas ao longo dos experimentos. Os resultados obtidos demonstraram a produção dos antígenos recombinantes, e deverão ser validados em futuros ensaios imunológicos quanto à capacidade de induzir respostas imunes em animais desafiados. / Human papillomavirus infection, besides to represent a widespread sexually transmitted disease, is responsible for 5% of cancers in humans, highlighting cervical cancer with high rates of incidence and mortality. Although proven effective, the existing vaccines do not eliminate infections already established and have a high cost of production. This scenario shows the need for alternative vaccine strategies. This study proposes the expression of different recombinant genes in Escherichia coli, an economic, easy handling and high performance biotechnology platform. Recombinant genes used were: L1 of HPV16 and chimeric basedas constructions in replacement E5 oncoprotein epitopes on h4 loop and L1 C-terminal region, with the potential to generate prophylactic-therapeutic antigens and replacing L2 protein epitopes in loop region h4 for evaluation of possible cross-neutralization. After subcloning in pGEM-T, these genes were cloned into vector pAE expression and Escherichia coli BL21 and Rosetta were transformed with the expression vectors generated. Confirmation of protein production was performed by Western blot from extracts of cultures induced with IPTG. Optimizations in the induction protocols, lysis and preparation of the samples were carried out throughout the experiments. The results demonstrated the production of recombinant antigens and should be validated in future immunological assays for the ability to induce immune responses in challenged animals.

O câncer cervical é o segundo câncer mais comum entre as mulheres em todo o mundo. A infecção por Papilomavirus (HPV) do tipo oncogênico é causa necessária. Estudos internacionais sugerem importante papel de carotenóides e tocoferóis séricos e dietéticos na redução do risco para lesões precursoras, mas os resultados dos estudos prévios são inconsistentes. Indivíduos e métodos: O presente estudo de casos e controles de base hospitalar conduzido na cidade de São Paulo analisou a associação entre concentrações séricas de carotenóides (licopeno, β-caroteno), tocoferóis (α- e γ-), consumo alimentar e casos incidentes, com confirmação histopatológica, de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) graus 1,2,3 e câncer cervical. O estudo incluiu 453 mulheres do grupo controle (sem lesões de colo uterino) e 4 grupos de casos (NIC1, n=140; NIC2, n=126; NIC3, n=231; câncer cervical, n=108) recrutadas em dois hospitais públicos de referência entre 2003 e 2005. Resultados. A concentração sérica de licopeno foi inversamente associada à NIC1, NIC3 e câncer cervical com os seguintes Odds Ratio (OR) (intervalo de confiança de 95%), respectivamente: 0,53 (0,27-1,00; p de tendência=0,05); 0,48 (0,22-1,04; p de tendência=0,05) e 0,18 (0,06-0,52; p de tendência=0,002) quando comparado o maior com o menor tercil após ajuste por variáveis de confusão e grupos de HPV. O maior tercil de β-caroteno sérico foi inversamente associado ao câncer quando comparado ao menor: OR ajustado = 0,36 (0,13-1,03: p de tendência=0,04). Maiores concentrações de α- e γ-tocoferóis foram inversamente associadas a NIC3 com redução do risco em 50%, após ajuste por covariáveis e HPV. Maior tercil de consumo do grupo de folhas verde-escuras, legumes e frutas de cor alaranjada ou amarela escura foi inversamente associado ao risco para NIC3: OR ajustado comparado ao menor foi 0,52 (0,27-1,00; p de tendência=0,05). Conclusão: Os resultados do presente estudo sugerem que maiores concentrações séricas de antioxidantes e o consumo de alimentos ricos em carotenóides podem reduzir o risco para NIC3 e câncer cervical em mulheres brasileiras. / Cervical cancer is the second most common cancer in women worldwide. Human papillomavirus (HPV) infection has been recognized to be a necessary cause for cervical cancer. Serum concentrations and dietary carotenoids and tocopherols have been associated with the risk for cervical dysplasia, but results from previous studies were not consistent. Subjects and methods: In this hospital-based case-control study conducted in São Paulo city, Brazil, we evaluated the association of serum carotenoids (β-carotene, lycopene), tocopherols (α- and γ-), and dietary intakes with the risk of incident histologically confirmed cervical intraepithelial neoplasia (CIN) grades 1, 2, 3, and cervical cancer. The sample included 453 controls and four groups of cases (CIN1, n= 140; CIN2, n= 126; CIN3, n= 231; invasive cancer, n=108) recruited from two major public hospital-based clinics between 2003 and 2005. Results. Concentrations of serum lycopene were negatively associated with CIN1, CIN3 and cancer, with odds ratio (OR) (95% confidence interval) for the highest compared with the lowest tertile of 0.53 (0.27-1.00, p trend=0.05) for CIN1, 0.48 (0.22-1.04, p trend=0.05) for CIN2 and 0.18 (0.06-0.52, p trend= 0.002) for cervical cancer adjusted for confounding variables and HPV status. The adjusted OR for cancer of the highest versus the lowest tertile of serum β-carotene was 0.36 (0.13-1.03, p trend= 0.04). Increasing concentrations of serum α- and γ-tocopherols were associated with 50% decreasing risk of CIN3, for the women in the highest compared with the lowest quartile after adjusting for confounding variables and HPV. Increased dietary intakes of dark green and deep yellow vegetables and fruits were inversely associated with CIN3 among women in the highest compared to the lowest tertile (adjusted OR= 0.52, 95%CI = 0.27-1.00; p trend=0.05). Conclusion: These results support the evidence that high serum levels of antioxidants as well as dietary intakes may reduce the risk for CIN3 and invasive cancer in Brazilian women.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-27T18:18:34Z No. of bitstreams: 1 SÉRGIO MENEZES AMARO FILHO.pdf: 3118907 bytes, checksum: 5ace372e7cf9ac4518a96c77052798ac (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-27T18:18:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SÉRGIO MENEZES AMARO FILHO.pdf: 3118907 bytes, checksum: 5ace372e7cf9ac4518a96c77052798ac (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O câncer cervical é o terceiro tipo de câncer mais comum entre mulheres no mundo. Dentre outros cofatores, a infecção pelo HPV de alto risco, tem sido bem documentada como fator necessário ao desenvolvimento desse tipo de câncer. A principal ação do HPV envolve a expressão massiva das oncoproteínas virais E6 e E7 que podem formar complexos específicos com proteínas supressoras de tumor, sendo capazes de alterar mecanismos do ciclo celular, modificando a expressão de proteínas celulares. Um dos principais avanços na medicina clínico patológica é o uso dessas proteínas como marcadores de forma a aumentar a acurácia do prognóstico e do próprio estadiamento do câncer cervical. Assim, a fim de reforçar a hipótese de que as proteínas associadas ao ciclo celular Ki-67, MCM-2, p53 e p16INK4a se encontram superexpressas no câncer cervical, foram analisadas em 87 amostras cervicais de pacientes com câncer invasivo (CCI) e 43 cérvix normais. Verificamos também se há uma expressão diferencial que pode ajudar a avaliação do estadiamento clínico da FIGO e quais tipos virais podem induzir a uma expressão diferencial dessas proteínas. Além disso, características sociodemográficas, comportamentais e clínicas das pacientes foram obtidas dos prontuários e analisadas. Para isso, a detecção de DNA de HPV foi realizada pela técnica da PCR e hibridização in situ. A expressão das proteínas foi observada por imunohistoquímica, seguida por quantificação manual e através do software ImagePro Plus. A análise estatística foi feita utilizando o software STATA/SE 10.1 aplicando os testes: Kruskall-Wallis, Student, Fisher e Qui-Quadrado. Nossos resultados mostraram forte associação (p<0,05) do CCI e dos estágios tumorais mais avançados (III e IV) com mulheres superiores a 55 anos, com mais de quatro gestações e sem escolaridade. A prevalência de DNA de HPV por PCR na população total foi de 73,4%. Nos grupos de CCI e controle foram, respectivamente, 94,3% e 29,3%. O tipo mais prevalente foi o HPV16 (70,8%), acompanhado pelo HPV33 (11,2%) e 35 (4,5%). Como esperado, foi observado aumento (p<0,05) na expressão de Ki-67, MCM-2, p53 e p16INK4a no CCI, quando comparados ao controle. A proteína p16INK4a com expressão difusa, citoplasmática e nuclear esteve associada ao câncer. Ki-67 apresentou forte expressão (>50%) conforme o agravamento da doença. Não foi observada associação entre a expressão de MCM-2, p53 e p16, e o estadiamento do tumor. Como conclusões, foram observadas maiores chances no desenvolvimento do CCI em mulheres com idades superiores a 55 anos, com mais de quatro gestações e sem escolaridades, estando esses fatores associados, também, à progressão tumoral. Apenas o marcador Ki-67 associouse ao estágio do CCI. Os tipos mais prevalentes encontrados, HPV16, 33, 35, 67 e 58, sugerem que novos estudos devam ser considerados para implementação de vacinação contra o HPV no Brasil. / Cervical cancer is the thrid most common cancer among women worldwide. Beside others cofactors, infection with high risk HPV has been well documented as a necessary cause for cancer development. The main action involves the expression of massive HPV E6 and E7 viral oncoproteins that can form specific complexes with tumor suppressor proteins that are able of changing mechanisms of the cell cycle, modifying the expression of cellular proteins. One of the major advances in medicine clinical pathology is the use of these proteins as markers in order to improve the accuracy of prognosis and the cervical cancer stages. Thus, in order to reinforce strengthen the hypothesis that the proteins involved in cell cycle Ki-67, MCM-2, p53 and p16INK4a are over expressed in the uterine cervix of patients with cervical cancer, we analyzed 87 samples from patients with invasive cervical cancer (ICC) that were compared with 43 normal cervices (controls). Was verified also whether there is a differential expression that can help to assess the FIGO staging for ICC and which HPV viral types can induce a differential expression of these proteins. Moreover sociodemographic, behavioral and clinical characteristics of patients were obtained from medical records and analyzed. Therefore, the detection of HPV DNA was performed by PCR and in situ hybridization. By means of immunohistochemistry the expression of Ki-67, MCM2, p53 and p16 were analyzed. Statistical analysis was performed using STATA / SE 1.10 by applying the Kruskal-Wallis test, T-Student, chi-square and Fisher. Our results showed a strong correlation (p<0.05) of the CCI and the later stages of the cancer in women over 55 years, more than four pregnancies and no school education. The overall HPV DNA prevalence was 73.4%. On the ICC group and control group the prevalence was, respectively, 94.3% and 29.3%. The most prevalent HPV types were HPV16 (70.8%), HPV33 (11.2%) followed by HPV 35 (4.5%). Women with HPV16 were associated with advanced age (50.8 years) compared to women with other types (58.2 years). As expected, was observed an increase in Ki-67, MCM-2, p53 and p16 expression in CCI (p<0.05), compared to control. The expression of p16 protein with diffuse cytoplasmic and nuclear staining was associated with cancer. The Ki-67 showed a strong expression (> 50%) as the later stage of the disease. There was no association between the expression of MCM-2, p53 and p16 and tumor staging. In conclusion, we observed higher risks of ICC development in older ages, multiple pregancies and no school education. Only the Ki-67 marker was associated with the stage of the ICC. The most prevalent HPV types found, HPV 16, 33, 35, 67 and 58, suggest that new studies should be evaluated and considered on implementation of HPV vaccination in Brazil.

There are more than 500,000 new cases of uterine cervical cancer (CCU) worldwide, which is the second most common cancer among women, and the second leading cause of death among women aged between 14 and 44 years. There is a known relationship between the CCU and the presence of human papillomavirus (HPV). In Brazil, one in four sexually active women are infected with HPV (in the Northeast, one in three), resulting in 19 cases of uterine cancer per 100,000 inhabitants. Laboratory evidence shows that, at present, preventive molecular test HPV-linked cancer through the detection and typing of viral DNA, may be associated with reduced mortality between men and women infected with HPV. It is known that there is a discrepancy between the histological and cytomorphological detection of HPV lesions in routine tests, so the molecular test is very important in this scenario. Thus, this study aimed to determine the HPV prevalence and the socio-demographic profile of infected women in State of Alagoas, hence propose a low cost kit for the more prevalent high risk HPV detection. Cervical samples from women living in the state of Alagoas - Brazil were assessed; these patients were submitted to a questionnaire and signed the free and informed consent form, through which we could collect information relating to the main co-factors commonly associated with the development of cervical lesions. Genomic DNA extraction was performed according to Illustra kit methodology (Asmersham Biosciences), while the DNA concentration in each sample was estimated using spectrophotometry. Viral evidence was obtained by PCR amplification of a 450bp viral DNA region (L1 gene) using the degenerate primers MY09 and MY11 We used the co-amplification of human β- globin gene (268 bp) as positive control, through GH20 and PC04 primers, and human DNA without HPV as negative control. The expected size PCR products were sequenced automatically. To identify the virus type, the sequences were aligned and compared with others using the Blastn tool in NCBI (National Center for Biotechnology Information). From the 757 samples analyzed, 123 (16.3%) were positive for HPV. There was a prevalence of high-risk HPV types (58,5%), with 12,3% HPV 16 positive samples. Individually, the most frequent type was the HPV 6 (21.5%), considered low risk. Regarding the co-factors, it was observed significant difference in the age of the patients; number of partners; number of children; and being pregnant at the time of data collection. The proposed kit will enable detection of the main oncogenic types present in the state by multiplex PCR analysis. The primers used responded well to the established analysis. Further steps are being taken towards the implementation of a commercial test kit. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mundialmente ocorrem mais de 500 mil novos casos de câncer cervical uterino (CCU) por ano, sendo a terceira neoplasia mais comum entre mulheres, e a segunda causa de morte na faixa etária entre 14 e 44 anos. Há uma conhecida associação entre CCU e a presença do papilomavírus humano (HPV). No Brasil, uma em cada quatro mulheres sexualmente ativas está infectada pelo HPV (no Nordeste, uma em três), resultando em 19 casos de câncer uterino por 100 mil habitantes. Evidências laboratoriais revelam que a detecção e tipagem do DNA viral para prevenção do câncer causado por HPV, pode estar associado à redução da mortalidade entre pacientes infectados. Sabe-se que há discrepância entre os resultados citomorfológicos e histológicos na detecção de lesões por HPV nos exames rotineiros, por isso o teste molecular assume grande importância. O presente trabalho teve como objetivos definir a prevalência do HPV no Estado de Alagoas e o perfil sociodemográfico das mulheres infectadas, com o intuito de propor um “kit” de baixo custo para detecção dos HPV de alto risco mais prevalentes. Amostras cervicais de mulheres residentes no Estado foram analisadas; as pacientes foram submetidas a um questionário, para a coleta de informações referentes aos principais cofatores comumente associados ao desenvolvimento de lesões cervicais. A extração do DNA genômico foi realizada conforme metodologia do kit Illustra (Asmersham Biosciences), enquanto a concentração de DNA em cada amostra foi estimada através de espectrofotometria. A comprovação da presença viral foi feita por PCR, através da amplificação de uma região de 450pb do DNA viral (gene L1), com iniciadores degenerados MY09 e MY11. Como controle positivo utilizou-se a co-amplificação do gene humano β-globina (268 pb) com os iniciadores GH20 e PC04, além de um controle negativo, DNA humano sem HPV. Os produtos de PCR foram sequenciados automaticamente. Para identificar o tipo viral, as sequências foram alinhadas e comparadas a outras utilizando-se a ferramenta Blastn no NCBI (National Center for Biotechnology Information). Foi possível estabelecer que das 757 amostras analisadas 123 (16,3%) foram positivas para HPV. Houve prevalência dos tipos de HPV de alto risco (58,5%), sendo o HPV16 observado em 12,3% das amostras positivas. O HPV de maior frequência foi o HPV 6 (21,5%), considerado de baixo risco. Sobre os cofatores, pôde-se observar diferença significativa em relação à idade das pacientes; número de parceiros; número de filhos; e ser gestante no momento da coleta de dados. O kit de detecção proposto possibilitará a determinação dos principais tipos oncogênicos presentes no Estado por PCR multiplex. Os iniciadores utilizados responderam bem às análises estabelecidas. Novas etapas se fazem necessárias para implementação do “kit”.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:22Z : No. of bitstreams: 1 Publico-224a.pdf: 1423351 bytes, checksum: 776c88bdbe992943ce07741453832774 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:22Z : No. of bitstreams: 2 Publico-224a.pdf: 1423351 bytes, checksum: 776c88bdbe992943ce07741453832774 (MD5) Publico-224b.pdf: 1664287 bytes, checksum: dd243856557fd4866c208141ed92a2b1 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:22Z : No. of bitstreams: 3 Publico-224a.pdf: 1423351 bytes, checksum: 776c88bdbe992943ce07741453832774 (MD5) Publico-224b.pdf: 1664287 bytes, checksum: dd243856557fd4866c208141ed92a2b1 (MD5) Publico-224c.pdf: 1095897 bytes, checksum: 97d738e50d367a15302560070af3514a (MD5) / Estudos demonstram que polimorfismos em genes relacionados ao reparo do DNA estão envolvidos na patogênese de diversas doenças neoplásicas, como o câncer ginecológico, particularmente o câncer do colo do útero. O presente estudo, caso-controle, compara os polimorfismos dos genes XPC, ERCC1 e XRCC7 em 77 mulheres com câncer cervical (70 casos de carcinoma espinocelular e 7 casos de adenocarcinoma do colo do útero) e 73 mulheres saudáveis atendidas no Hospital do Câncer Alfredo Abrão, entre Junho de 2007 e Maio de 2009. No Laboratório de Ginecologia Molecular da EPM-UNIFESP, os polimorfismos desses genes foram detectados pela técnica de reação em cadeia da polimerase seguida da análise do polimorfismo do fragmento de restrição (PCR-RFLP). As distribuições genotípicas dos polimorfismos no grupo de casos e controle estavam em Equilíbrio de Hardy-Weinberg (p>0,05). Pelo teste exato de Fisher as distribuições genotípicas dos polimorfismos (XRCC7 (G-C): GG (11,7%), GC (41,6%) e CC (46,8%) no grupo de casos e GG (20,5%), GC (41,1%) e CC (38,4%) no grupo controle (p=0,31); ERCC1 (C-T): CC (39,0%), CT (51,9%) e TT (9,1%) no grupo de casos e CC (53,4%), CT (38,4%) e TT (8,2%) no grupo controle (p=0,20); XPC (A-C): AA (50,6%), AC (41,6%) e AA (7,8%) no grupo de casos e AA (45,2%), AC (37,0%) e CC (17,8%) no grupo controle, p=0,19) não apresentaram diferença estatística significante. Nossos resultados mostram que os polimorfismos XPC, ERCC1 e XRCC7 não são correlacionados ao risco para desenvolvimento do câncer do colo do útero na população estudada. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações