O gênero Paepalanthus (Eriocaulaceae) conta atualmente com cerca de 400 espécies, distribuídas principalmente nas Américas Central e do Sul, com centro de diversidade localizado na Cadeia do Espinhaço, em Minas Gerais e Bahia. É o gênero de Eriocaulaceae mais complexo do ponto de vista taxonômico e a carência de estudos floristicos dificulta o aprimoramento de sua circunscrição. Nesse contexto, foi efetuado o levantamento de Paepalanthus do Parque Estadual do Biribiri, que está inserido no Planalto de Diamantina, Minas Gerais, (18°00\' - 18°15\'S, 43°30\' - 43°40\'W). O gênero está representado no Parque por 33 espécies. São apresentadas chaves de identificação para os gêneros de Eriocaulaceae e para as espécies de Paepalanthus ocorrentes na área de estudo, descrições e ilustrações, bem como comentários sobre morfologia, habitat, distribuição geográfica e fenologia / The genus Paepalanthus Mart. comprises ca. 400 species, mainly distributed in South and Central America, with center of diversity located in the Espinaço Range, in Minas Gerais and Bahia. In a taxonomic view, Paepalanthus is the most complex genus of Eriocaulaceae and the lack of floristic studies hinders the improvement of its species circumscription. In this context, it was carried out the Paepalanthus flora of Biribiri State Park, which is located in Diamantina Plateau, in Minas Gerais, (18°00\' - 18°15\'S; 43°30\' - 43°40\'W). In the area, the genus is represented by 33 species. Identification keys to Eriocaulaceae genera and Paepalanthus species ocurring in the study area, descriptions and illustrations, as well as comments about morphology, habitat, geographic distribution and phenology are provided

Apresentada atualmente como fundamental para a vantagem competitiva das empresas, a desintegração vertical de processos é uma ação geral que, uma vez adotada, leva a novas formas de relacionamento com fornecedores. Estas novas formas de relacionamento de empresas com fornecedores fazem com que cadeias de suprimento passem a ser estruturadas por meio de vínculos de cooperação contratual, em contraposição à estruturação vertical por meio de vínculos de cooperação hegemônica. Nesta dissertação estabelecem-se primeiramente os conceitos de cadeia de suprimento e de desintegração vertical de processos; analisam-se em seguida as várias formas de relacionamento contratual que uma empresa pode estabelecer com fornecedores e daí deduzem-se critérios de escolha de fornecedores em coerência com o relacionamento que a empresa irá estabelecer com os fornecedores escolhidos. Para submeter a teste esta dedução, realizou-se uma pesquisa em duas empresas do ramo químico, por meio da qual se identificaram os critérios que estas empresas adotam para escolher fornecedores e estabelecer com eles vínculos de relacionamento contratual. Os resultados da pesquisa levam à conclusão de que as empresas pesquisadas estabelecem com seus fornecedores os relacionamentos mais adequados conforme as circunstâncias, mas não ‘o relacionamento ideal’. A dissertação se encerra com proposta de um programa de estudos transdisciplinares sobre a gestão de suprimentos em geral e os relacionamentos cliente-fornecedor em especial. / Put nowadays as basic for the competitive advantage of companies, vertical disintegration of processes is a wide action that, once adopted, gives rise to new forms of relationships with suppliers. These new forms of relationships between firms and their suppliers draw to the structuring of supply chains according to links of contractual co-operation, in contrast to their vertical structuring according to links of hegemonic co-operation. In this dissertation the concepts of supply chain and of vertical disintegration of processes are settled first; following it the various forms of contractual relationship that a firm can set up with its suppliers are scrutinized and then criteria for supplier selection are inferred, consistently with the relationship the firm will set in agreement with the chosen suppliers. In order to submit this inference to a trial, a research was undertaken at two companies that carry business in the chemical branch undertaken, identifying the criteria these companies adopt for supplier selection and for setting up with the chosen ones links of contractual co-operation. The results of the research draw to the conclusion that the researched companies set up with their suppliers the most suitable relationships according to circumstances, but not ‘the ideal relationship’. The dissertation ends with the proposal of a program for transdisciplinary studies concerning supply management broadly and customer-supplier relationships in special.

Asclepiadoideae está entre os táxons mais promissores para o desenvolvimento de estudos em sistemática vegetal. Pensando nisso, foi elaborado o projeto "Asclepiadoideae (Apocynaceae) da Cadeia do Espinhaço de Minas Gerais". A tese conta com seis capítulos-satélites independentes (capítulos I-IV e VI-VII) relacionados ao tema central (capítulo V). Os capítulos são manuscritos submetidos para publicação e estão de acordo com os padrões de cada revista. I. O Paradoxo da Sistemática II. Apocynaceae III. Asclepiadaceae ou Asclepiadoideae? Conceitos Distintos de Agrupamento Taxonômico IV. Estudos Taxonômicos em Asclepiadoideae (Apocynaceae) do Novo Mundo V. Asclepiadoideae (Apocynaceae) da Cadeia do Espinhaço de Minas Gerais, Brasil VI. Cadeia do Espinhaço, Minas Gerais, Brasil. Asclepiadoideae (Apocynaceae) VII. Riqueza e Endemismo de Asclepiadoideae (Apocynaceae) na Cadeia do Espinhaço de Minas Gerais, Brasil – Uma Visão Conservacioniosta O capítulo I aborda a equivalência entre unidades evolutivas e taxonômicas, apresentando algumas colocações sobre conceitos básicos em sistemática. O capítulo II sintetiza em um trabalho de divulgação o conhecimento atual sobre Apocynaceae, com ênfase para as plantas americanas. O capítulo III explica a inclusão de Asclepiadaceae como subfamília (Asclepiadoideae) de Apocynaceae, procurando desmistificar a importância dos resultados cladísticos e moleculares nessa classificação. O capítulo IV discute a artificialidade dos gêneros americanos de Asclepiadoideae (em especial aqueles representados no Espinhaço), justificando algumas novidades taxonômicas propostas. O tratamento das Asclepiadoideae da Cadeia do Espinhaço de Minas Gerais (99 espécies e 20 gêneros) é apresentado no capítulo V e vem acompanhado de um guia de campo (capítulo VI). O capítulo VII demonstra a disparidade no esforço de coleta ao longo do Espinhaço de Minas Gerais, fornecendo uma avaliação preliminar sobre o conhecimento da flora do Espinhaço e sua possível influência na conservação da biodiversidade dessa região.

Orientador: Semíramis Guimarães Ferraz Viana / Coorientador: Teresa Cristina Goulart de Oliveira-Sequeira / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Rodrigo Martins Soares / Banca: Pedro Luís Silva Pinto / Banca: Simone Baldini Lucheis / Resumo: Muitas espécies de protozoários podem causar gastroenterite aguda ou crônica em seres humanos e são altamente prevalentes nas populações residentes nos países em desenvolvimento, onde a transmissão é favorecida devido a condições precárias de higiene e escassa disponibilidade de água potável. No entanto, a infecção assintomática e o poliparasitismo também são comumente observados nessas populações. Neste trabalho, investigou-se a prevalência de protozoários intestinais em duas colônias de pescadores, Porto Said (PS) e Santa Maria da Serra (SM), situadas ao longo do rio Tietê, no Estado de São Paulo. As colônias não dispõem de serviços públicos básicos como: vias públicas, fornecimento de água e luz e saneamento básico. Todos os colonos (n = 88 em PS, e n = 38 em SM) coletaram três amostras de fezes, e todos eram assintomáticos no momento da coleta. Para obter informações sobre as possíveis vias de transmissão, amostras fecais de 49 cães (38 de PS e 11 de SM) e 28 amostras de água do rio foram coletadas (16 de PS e 12 de SM). As amostras fecais humanas e caninas foram analisadas por microscopia e PCR para detectar e caracterizar os protozoários Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis e Cryptosporidium spp. Diante dos resultados obtidos, Blastocystis spp. foi o parasita mais prevalente nas amostras humanas (45,4% em PS e 71% em SM), seguido por D. fragilis (13,6% em PS e 18,4% em SM) e G. duodenalis (18,2% em PS e 7,9% em SM), já Cryptosporidium spp. não foi detectado na população humana. Além disso, G. duodenalis foi detectado em quatro cães (10,5%) em PS e dois cães (18,2%) em SM, enquanto que um único cão foi detectado com Cryptosporidium canis. Nas 28 amostras de água previamente processadas pelos métodos de filtração e separação imunomagnética e examinadas por microscopia de fluorescência, oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia não foram... / Abstract: Several species of protozoa cause acute or chronic gastroenteritis in humans, worldwide. The burden of disease is particularly high among children living in developing areas of the world, where transmission is favored by lower hygienic standards and scarce availability of safe water. However, asymptomatic infection and polyparasitism are also commonly observed in poor settings. Here, we investigated the prevalence of intestinal protozoa in two small fishermen villages, Porto Said (PS) and Santa Maria da Serra (SM), situated along the river Tietê in the State of São Paulo, Brazil. The villages lack basic public infrastructures and services, such as roads, public water supply, electricity and public health services. Multiple fecal samples were collected from 88 individuals in PS and from 38 individuals in SM, who were asymptomatic at the time of sampling and had no recent history of diarrheal disease. To gain insights into potential transmission routes, 49 dog fecal samples (38 from PS and 11 from SM) and 28 river water samples were also collected. All samples were tested by microscopy and PCR was used to genotype isolates of Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis and Cryptosporidium spp. By molecular methods, the most common human parasite was Blastocystis spp. (prevalence, 45% in PS and 71% in SM), followed by D. fragilis (13.6% in PS, and 18.4% in SM) and G. duodenalis (18.2% in PS and 7.9% in SM); Cryptosporidium spp. were not detected. Further, G. duodenalis was found in 4 dogs (10.5%) in PS and 2 dogs (18.2%) in SM, whereas a single dog was found infected with Cryptosporidium canis. River water samples processed by filtration and immunomagnetic separation and examined by fluorescent microscopy, were negative for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts. Sequencing of the barcoding region of the small subunit ribosomal gene revealed large genetic variation among Blastocystis isolates, with subtypes (STs) that ... / Doutor

O Brasil é um dos três maiores produtores mundiais de frutas tropicais, com uma produção que supera os 31 milhões de toneladas. Porém, apesar dessa potencialidade, as transações de comércio exterior de frutas frescas são deficitárias. Inicialmente esta pesquisa identificou os fatores relevantes para exportação de frutas relacionados às áreas de produção, processamento, distribuição, comercialização e consumo, a fim de se compreender melhor o gerenciamento da cadeia de suprimento da fruticultura destinada ao mercado externo. Alguns dos fatores efetivamente abordados foram as etapas operacionais da cadeia de suprimento internacional da manga brasileira (comércio exterior e logística), as peculiaridades operacionais, a garantia da segurança e da qualidade da manga, as melhores práticas dos fornecedores de frutas no mercado internacional e os fatores limitantes da exportação de manga brasileira nos principais mercados internacionais. Após identificação e análise dos fatores relevantes, focou-se a cadeia da manga especificamente e, com base nas teorias sobre estratégias e gestão de cadeia de suprimento, foi proposto um modelo para orientar a escolha de estratégias de gestão da cadeia de suprimento da manga brasileira destinada ao mercado externo. O modelo proposto leva em consideração a estratégia competitiva da empresa e a estratégia de cadeia de suprimento, a fim de obter o melhor alinhamento entre as duas, para atender coerentemente as expectativas do mercado-alvo. / Brazil is one of the largest producers of tropical fruit in the world, with a production of more than 31 million tones. However, in spite of its large capacity, Brazil runs a trade deficit in fresh fruit. First, this research identifies the factors relevant to the exportation of fruit in the areas of production, processing, distribution, commercialization and consumption with the objective of understanding better the supply chain management of fruit growing for the foreign market. Some of the factors which considered are the operational stages of the international supply chain of Brazilian mango (foreign trade and logistics), operational peculiarities, the safety and quality of the mango, the best practices of fruit suppliers of the international market and the factors limiting the export of Brazilian mango to the principal international markets. After identification and analysis of the relevant factors, the focus becomes specifically the mango chain and, based on strategy and supply chain management theory, a model is proposed to guide the choice of management strategy of the supply chain of Brazilian mango for the foreign market. The model which is proposed takes into account the competitive strategy of the firm and the supply chain strategy to obtain the best alignment of the two for serving coherently the expectations of the target-market.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ELI BRAZ DA SILVA JUNIOR.pdf: 2495116 bytes, checksum: 28b5857f7d5330b10777eea3846e006a (MD5) Previous issue date: 2009-08-07 / This essay appeared to reveal how to fit the functioning of the House and goyanna province chain in the 19th century. And, to know the nuances of its operation, which were submitted by the conditions (as) sentenced (as) who were prisoners in enxovia of our chain. To achieve this goal was a survey of major sources, such as regulation goyanna dated chain 1847. Through its reading are clear the strict obligations were subordinated employees. Another important objective that seeks to fulfil is to reveal, or rather give voice to excluded until now, our history. And how women among those excluded are time and voice, is conducting a search the record of your stories, recorded in the middle of the processes stored in the file of the judiciary/escrivania of the crime of the city of Goiás. Analysis of the offending procedures involving women, can identify them and i heard them, even if documents produced by third parties. Thus they are mothers, workers and black bags. All passive to engage in small offences on grounds of the most commonplace even the most serious leading to the occurrence of murder. / A presente dissertação surgiu com o intuito de revelar como se dava o funcionamento da Casa de Câmara e Cadeia da província goiana no século XIX. E mais que isso, ao conhecer as nuances de seu funcionamento revelar, a que condições estavam submetidos os(as) condenados(as) que estiveram trancafiados na enxovia de nossa cadeia. Para se chegar a tal objetivo fez-se um levantamento de fontes importantes, como o regulamento da cadeia goiana datado de 1847. Através de sua leitura ficam claras as rígidas obrigações a que estavam subordinados os funcionários daquela instituição. Outro importante objetivo que se busca cumprir é o de revelar, ou melhor, dar voz aos excluídos, até então, de nossa história. E como as mulheres dentre os excluídos, tem menos vez e voz, optou-se por conduzir uma pesquisa voltada ao registro de suas histórias, registradas em meio a processos armazenados no arquivo do poder judiciário/escrivania do crime da cidade de Goiás. Da análise dos processos envolvendo as mulheres transgressoras, consegue-se identificá-las e ouvi-las, mesmo que por documentos produzidos por terceiros. Assim se revelam mães, trabalhadoras e negras forras. Todas passivas de se envolver em pequenos delitos, por motivos dos mais banais até os mais graves que levavam ao cometimento de homicídio.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:40:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ADRIENNE MELO DE OLIVEIRA BRITO.pdf: 38153896 bytes, checksum: 2fc94f7c3d1a54b64d8cb4bcf34d5676 (MD5) Previous issue date: 2012-03-08 / The chain of ethanol production is faced with various problems in its dynamic operation due to its high complexity. This justifies the concern about the management of the supply chain of the ethanol. To address this problem, one employs the Theory of Constraints in the supply chain management, as the conceptual basis necessary to identify factors of the production system involved in the production of ethanol. The research method used was a multiple case study, exploratory in nature. The sample data was collected on the harvest of 2010-2011, with the three objects of ethanol production chains, located in the center of the state of Goias The results demonstrated confirmation of the model of the ethanol production chain, already proposed by other authors, which was synthesized in four links: production of cane sugar, ethanol production, distribution and sale of ethanol fuels. It was identified in the supply chain of the ethanol that the link is the limiting ethanol producer (plant) and the link in the chain internal grinding was restrictive. / A cadeia de produção do etanol se depara com distintos problemas em sua dinâmica de funcionamento, devido à sua elevada complexidade. Isto justifica a preocupação quanto ao gerenciamento da cadeia de suprimentos do etanol. Para tratar deste problema, emprega-se a Teoria das Restrições na gestão da cadeia produtiva, como base conceitual necessária à identificação de fatores do sistema produtivo envolvidos na produção do etanol. O método de pesquisa utilizado foi o estudo de caso múltiplo, de natureza exploratória. A amostra de dados colhida foi referente à safra de 2010-2011, tendo como objetos três cadeias produtivas de etanol, localizadas no centro do Estado de Goiás. Os resultados demonstraram a confirmação do modelo da cadeia produtiva do etanol, já proposto por outros autores, que foi sintetizada em quatro elos: produção de cana-de-açúcar, fabricação de etanol, distribuição de etanol e revenda de combustíveis. E foi identificado na cadeia de suprimento do etanol que o elo restritivo é o produtor de etanol (usina) e na cadeia interna o elo restritivo foi a moagem.

Modificações epigenéticas tais como metilação do DNA, constituem um mecanismo especial de regulação da expressão gênica envolvido em muitas situações patológicas. Padrões alterados de metilação do DNA são comuns em cânceres e infecções virais. A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção fúngica sistêmica, causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. O Brasil é detentor do maior número de casos na América do Sul. A doença apresenta envolvimento pulmonar primário com disseminação para mucosa oral, pele, sistema retículo-endotelial e glândulas suprarrenais. As lesões orais são caracterizadas por hiperplasia eritematosa finamente granular, salpicadas com hemorragias pontuais chamadas de estomatite moriforme. A finalidade deste estudo foi identificar perfis diferenciais de metilação do DNA em pacientes com e sem lesão oral na PCM. A identificação destes perfis foi baseada na estratégia de MS-AP-PCR (Amplificação arbitrária sensível a metilação). O DNA, extraído do sangue total de pacientes com e sem lesão oral, foi digerido com as enzimas de restrição Hpa II e Msp I. Os produtos da digestão foram amplificados pela técnica de PCR, utilizando iniciadores arbitrários. Foi obtido um perfil diferencial de metilação após a amplificação do DNA de pacientes sem lesão de boca, comparado ao perfil de pacientes com lesão de boca. A banda diferencialmente expressa foi purificada, clonada e os plasmídeos obtidos P5, P6 e P7 foram analisados pelo software PhredPhrap e na ferramenta BLASTN para a obtenção de dados de mapeamento e identidade com as sequências presentes no genoma humano. O fragmento clonado no plasmídeo P5 apresentou similaridade com uma sequência de DNA presente no cromossomo 20, próxima ao gene YTHDF1. Os fragmentos clonados nos plasmídeos P6 e P7 apresentaram similaridade com sequências de DNA presentes no cromossomo 15, sendo que o fragmento P6 apresentou similaridade com uma sequência intrônica do gene RNA binding protein with multiple splicing 2” (RBPMS2) e o fragmento P7 com uma sequência intrônica do gene “diphthamine biosynthesis 6” (DPH6)”. A expressão do gene YTHDF1 em leucócitos foi testada por PCR em tempo real e não houve diferença significativa nos dois grupos de pacientes. Ainda não há descrição na literatura da correlação do gene YTHDF1 com a PCM tornando este estudo inédito e mostrando a importância da análise epigenética para conhecimento dos mecanismos celulares nas condições normais e também patológicas. / Epigenetic changes such as DNA methylation is a specific mechanism for the regulation of gene expression involved in many pathological situations. Altered patterns of DNA methylation are common in cancers and viral infections. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic fungal infection caused by a thermo-dimorphic fungus, Paracoccidioides brasiliensis. Brazil is having the largest number of cases in South America. The disease presents primary pulmonary involvement that spreads to oral mucus, skin, reticuloendothelial system, and adrenals. Oral lesions are characterized by erythematous fine granular hyperplasia, and speckled with occasional bleeding called moriform stomatitis. The purpose of this study was to identify profiles of different DNA methylation in patients with and without oral lesions in PCM. The identification of these profiles was based on the strategy of MS-AP-PCR (Methylation-Sensitive arbitrarily Primed PCR). The DNA extracted from whole blood of patients with and without oral lesions was digested with restriction enzymes: Hpa II and Msp I. The digestion products were amplified by PCR (polymerase chain reaction) using arbitrary primers. We obtained a differing profile after amplifying the DNA from patients without mouth lesions compared to the profile of patients with mouth lesions from agarose gel electrophoresis. The differently expressed band was purified and cloned, and the obtained plasmids, P5, P6 and P7, were analyzed by the softwares PhredPhrap and BLASTN tool to obtain mapping data and identify the sequences present in the human genome. The cloned fragment in the plasmid P5 showed similarity with a DNA sequence present in chromosome 20, next to the gene YTHDF1. The fragments cloned in plasmids P6 and P7 showed similarity with the DNA sequences present on chromosome 15, the P6 fragment showed similarity with an intronic sequence from the gene, “RNA binding protein with multiple splicing 2 "(RBPMS2), and the P7 fragment showed similarity with the intronic sequence of the gene "diphthamine biosynthesis 6" (DPH6) ".biosynthesis 6" (DPH6)". The YTHDF1 gene expression in leukocytes was tested by real-time PCR and no significant difference were found in both groups of patients. There is no description in the literature relating the YTHDF1 gene with PCM which has shown the importance of study epigenetic for understanding the cellular mechanisms under normal and pathological conditions.

Com a ampla disseminação da AIDS, uma grande gama de microrganismos tem aparecido como patógenos emergentes, causando importantes infecções em pacientes imunocomprometidos. Por exemplo, Rhodococcus equi, um agente incomum de infecções em humanos, tem sido isolado em pacientes imunocomprometidos. A presença deste microrganismo oportunista em produtos farmacêuticos não tem tido considerável atenção. No presente trabalho, o método de reação em cadeia da polimerase (PCR) foi comparado com métodos convencionais para rápida detecção de três espécies bacterianas em amostras de cremes tópicos contaminadas artificialmente. As amostras foram incubadas por 24 horas a 37ºC. Depois da incubação em caldo com 10% de tween 20, amostras foram semeadas em meio para crescimento seletivo. Identificação bioquímica de Bacillus cereus e Rhodococus equi foram feitas utilizando o sistemas de identificação API 20E® e API Coryne®, respectivamente. Para identificação de Micrococcus luteus foram utilizados os testes de catalase, oxidase, morfologias das colônias e o sistema Gram. O DNA foi extraído usando o método do fenol-clorofórmio. Os iniciadores utilizados contendo a seqüência específica foram para B. cereus (BC1 e BC2), R. equi (COX-F e COX-R) e para M. luteus (ML-ISR-R e ML-ISR-F) foram utilizados na reação de PCR. Para validação da metodologia molecular, as seqüências dos produtos de PCR foram determinadas e analizadas utilizando-se os programas Blastn e Blastx. Foi observado uma alta similaridade (E .value 0,0) e uma alta identidade ( > 99%) para as bactérias utilizadas neste estudo. Os métodos convencional e de PCR detectaram B. cereus, R. equi e M. luteus em todas as amostras contaminadas artificialmente. O tempo para completar o método de PCR incluindo o preparo de amostras e a amplificação específica do DNA bacteriano foi de 27 horas. Para o método convencional foi necessário de 72 a 96 horas para o isolamento e identificação bioquímica dos microrganismos pesquisados. A rápida detecção de PCR para B. cereus, R. equi e M. luteus mostrada neste trabalho sugerem o uso desta metodologia em controle de qualidade microbiológica de produtos tópicos não estéreis, especialmente utilizados por pacientes imunocomprometidos. / With the ample dissemination of the AIDS, a wide range microorganisms has blunted as emergent pathogens, causing important infection in immunocompromised patients. For example, Rhodococcus equi, an unusual cause of infection in humans, has been isolated from HIV-infected patients. The presence of these opportunistic microorganisms in pharmaceutical products has not receiv considerable attention. In the present work PCR assay were compared with standard microbiological methods for rapid detection of three bacterial species from artificially contaminated sample of topical creams. Artificially contaminated samples were incubated for 24 horas at 37º C. After incubation in broth with 10% tween 20, samples were streaked on seletive growth media. Biochemical identification of Bacillus cereus and R. equi was performed using API 20E® and API Coryne® identification systems, respectivelly. For Micrococcus luteus identification, colony an Gram-stained morphology of the bacterium and the biochemical tests of catalase and oxidase were used.DNA was extracted using phenol-chloroform method. DNA primers containing the specific sequences of the BC1 and BC2 for B. cereus, COX-R and COX-F for R. equi and ML-ISR-F and ML-ISR-F for M. luteus were used for detection in the PCR reaction. In order to validate this methodology, DNA sequences of the products were determined. The sequences of the cloned PCR products were analysed using Blastn and Blastx programs. It was observed a marked similarity (E.value 0,0) and a high identity (> 99%) to the bacteria used in the study. Both the PCR and the standard enrichment tests method detected B. cereus, R. equi and M. luteus in all of the deliberately contaminated samples. The time to complete the PCR assay including sample preparation and PCR amplification of the specific DNA bacterial targets was 27 h. Standard plating methods required 72-96 h for the bacteria to be isolated, purified and biochemecally identified. Rapid PCR detection of B. cereus, R. equi and M. luteus showed in this work suggests the use of this methodology in the microbiology control of non-sterile topical products, specially intended for use with immunocompromised patients.

Nos últimos anos o aumento na incidência de candidose superficial e invasiva causada por espécies emergentes resistentes tem sido atribuído a disseminação do uso de antibióticos e agentes imunossupressores. O aumento de Candida não-albicans deve-se ao incremento de pacientes imunodeprimidos, neutropênicos, recém nascidos de baixo peso, procedimentos invasivos e iatrogenia. Todos esses fatores permitem que agentes pouco virulentos, causem doenças. Vários estudos bioquímicos e moleculares foram realizados no sentido de elucidar as causas da resistência a antifúngicos em leveduras. Os objetivos do presente estudo foram: estudar leveduras do gênero Candida isoladas da cavidade bucal de pacientes com e sem HIV; comparação de métodos de identificação dos isolados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B e fluconazol pelas metodologias de microdiluição CLSI, AFSTEUCAST e difusão em agar Etest e obter amostras heterorresistentes à anfotericina B e ao fluconazol por indução e seleção. Foram identificados 22 isolados de C. albicans, 3 de C. tropicalis, 3 de C. parapsilosis e 2 de C. glabrata segundo o método clássico. A identificação por métodos morfológicos e bioquímicos foi 100% concordante com o método molecular (PCR), tanto pela amplificação dos primers espécies-específicos (C. albicans e C. dubliniensis) quanto pela comparação do tamanho do fragmento amplificado pelos primers da região ITS2. A correlação entre a metodologia Etest e os dois métodos de microdiluição foi alta. Todas as amostras selvagens foram sensíveis a anfotericina B (CIM£2,0μg/mL) e apenas um isolado (3,33%) de C. tropicalis foi resistente ao fluconazol (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Foram selecionadas amostras heteroresistentes através da pressão seletiva utilizando meio adicionado de fluconazol (8μg/mL) e em seguida com anfotericina B (1,0μg/mL). A pressão seletiva também foi feita iniciando-se com anfotericina B e em seguida fluconazol. Paralelamente, as amostras selvagens foram submetidas à indução de resistência através do cultivo primeiro em concentrações crescentes de fluconazol (16,0; 32,0; 64,0; 128 e 256mg/mL) e em seguida com anfotericina B (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0mg/mL). Os testes também foram feitos invertendo-se os antifúngicos, iniciando com anfotericina B e depois fluconazol. Foram obtidas três amostras heterorresistentes a fluconazol, das quais duas foram por indução (C. glabrata e C. tropicalis) e uma por seleção (C. tropicalis.). Ambas amostras de C. tropicalis foram originadas de um mesmo isolado selvagem. Nenhuma amostra mudou seu perfil de sensibilidade para anfotericina B, apesar de alguns isolados apresentarem capacidade de crescimento em várias concentrações deste antifúngico (1,0 a 3,0μg/mL). Após cultivos sucessivos em meio livre de droga, somente a cepa obtida por seleção manteve seu fenótipo de resistência. As cepas selvagens e suas mutantes apresentaram o mesmo perfil quando comparadas pela amplificação da região ITS2. Conclui-se que, embora a maior parte das espécies estudadas seja C. albicans (73,33%) todas as amostras heteroresistentes ao fluconazol obtidas foram Candida nãoalbicans (10%). As duas cepas mutantes obtidas pelo mesmo isolado inicial possuem, possivelmente, mecanismos múltiplos e distintos de resistência que, associado ao isolado, conferem resistência e/ou adaptabilidade à levedura frente ao antifúngico. / In the last years the increase in the incidence of superficial and invasive candidosis caused by resistant species has been attributed to the use of antibiotics and immunosuppression drugs. The increase do Candida non-albicans isolate due to the increment of patient immunocompromised, immunodeficiency virus infection, neutropenic, newly born of low weight, procedures invasives and iatrogenic. All those factors allow that agents a little virulent, caused diseases. Several biochemical and molecular studies have been accomplished for elucidating the causes of resistance in yeasts. The aims of the present research were: to study yeasts of the gender Candida isolated of the buccal cavity patients with and without HIV; comparison of methods of identification of isolates ; to determine the sensibility profile to the amphotericin B and fluconazole antifungals by microdilution methodologies CLSI, AFST-EUCAST and Etest difusion agar and acquisition of heteroresistent samples to amphotericin B and to fluconazole by induction and selection experiments. Were identifications 22 C. albicans, 3 C. tropicalis, 3 C. parapsilosis and 2 C. glabrata through the classic methods. The identification by morphologic and biochemisth was 100% agreement with the results obtained by the molecular method (PCR), them by the amplification of the species with specific primers (C. albicans and C. dubliniensis) as for the comparison of the size of the fragment amplified by the primers of region ITS2. The correlation among the methodology Etest and the two microdilution methods (CLSI and AFST-EUCAST) was higth. All samples wilds were suscetibility to amphotericin B (CIM£2,0μg/mL) and just one isolate (3,33%) of C. tropicalis was resistent to fluconazole (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³ 64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Resistant strains were obtained by selective pressure using a medium amended with Fluconazole (8 μg/mL) and after that a medium with Amphothericin B (1.0 μg/mL). The selective pressure was also performed using Amphothericin B at first followed by Fluconazole. Similarly, wild samples were submitted to the induction of resistance by culturing in increasing concentrations of Fluconazole (16.0; 32.0; 64.0; 128 e 256mg/mL) followed by culturing in increasing concentrations of Amphotericin B (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 e 3.0mg/mL) and, after that, inverting the antifungal agents: Amphotericin B at first, followed by Fluconazole. Three samples heteroresistant to Fluconazole were obtained, two of which obtained by induction (C. glabrata and C. tropicalis) and one by selection (C. tropicalis.). Both C. tropicalis samples were originated from te same wild strain.None sample chamged its susceptibility profile to amphotericin B, in spite of some isolates that presented capacity of growth in several concentrations of this antifungals (1,0 a 3,0μg/mL). After successive cultivations in medium free of drugs, only the sample obtained by selection maintained your resistance phenotype. The wild samples and their mutants presented the same profile when compared by the amplification of the region ITS2. In conclusion, although most of the studied species were C. albicans (73,33%), all the fluconazol-heteroresistant samples obtained were Candida no-albicans (10%). The two mutant samples obtained from the same initial isolate possibly possess multiple and different mechanisms of resistance that, associated to the isolate, confer resistance and/or adaptability to the yeast in front to antifungal. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES