Resumo: Foi proposto avaliar diferentes vernizes experimentais, que apresentam em sua formulação monômeros hidrofílicos ou zwiteriônicos, como método para modificar a superfície de resina acrílica para base de prótese, com o objetivo de prevenir a adesão de C. albicans. Foram confeccionados corpos-de-prova com características superficiais que simulavam a parte polida das próteses (superfície lisa) e com características superficiais que simulavam a parte interna das próteses (superfície rugosa) utilizando-se uma resina para base de prótese específica para micro-ondas (Vipi Wave). Matrizes metálicas com 10 cavidades (13,8 mm de diâmetro e 2 mm de altura) foram incluídas em mufla, entre 2 placas de vidro, para simular a superfície lisa, ou em contato com gesso para obter amostras que simulassem a superfície rugosa da prótese. Todos os corpos-de-prova foram submetidos à mensuração da rugosidade utilizando-se um rugosímetro (Mitutoyo SJ 400) com cutoff de 2,5 mm. A rugosidade superficial foi determinada (Ra-µm) pela média de três mensurações realizadas em cada amostra. Após a leitura da rugosidade, os corpos-de-prova foram divididos em grupo controle (n=72; 36 lisos e 36 rugosos), não recebendo nenhum tratamento superficial, e 12 grupos experimentais (n=72; 36 lisos e 36 rugosos) que receberam uma camada do verniz experimental sendo polimerizado em forno EDG. Os vernizes experimentais apresentaram em sua composição o monômero metil metacrilato (MMA), dois agentes de ligação cruzada (TEGDMA e Bis-GMA) e o foto iniciador MBP (4- metil benzofenona). Além desses componentes, os vernizes identificados pelos códigos P, E e T apresentaram monômeros hidrofílicos em 3 concentrações (25, 30 e 35%). O verniz identificado pelo código M apresentou um monômero zwiteriônico (MZ), nas mesmas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the use of different experimental varnishes containing zwitterion or hydrophilic monomers as a manner to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion of C. albicans. For such purpose, specimens with surface characteristics that simulated the polished side of the dentures and the inner side of the dentures were fabricated using a microwave-polymerized denture base acrylic resin (Vipi Wave). Hollow metallic matrices with 10 cavities (13.8 mm diameter x 2 mm high) were flasked either between two glass plates, in order to produce specimens with smooth surfaces that simulated the polished side of the dentures, or in direct contact with the stone, in order to obtain specimens with rough surfaces that simulated the inner side of the dentures. All specimens were subjected to surface roughness readings in a roughness meter (Mitutoyo SJ 400) with cutoff length of 2.5 mm. Surface roughness (Ra, µm) was determined as the average of three random measurements made on each specimen. After the roughness readings, the specimens were randomly assigned to one control group (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens), in which the specimens received no surface treatment, and 12 experimental groups (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens) in which the specimens were coated with one of the experimental varnishes followed by polymerization in an EDG oven. The 12 experimental varnishes presented in their composition the monomer methyl methacrylate (MMA), two crosslinking agents (TEGDMA and Bis-GMA) and a photoinitiator agent (4-methyl benzophenone . MPB). In addition to these components, the experimental varnishes labeled as P, E and T presented hydrophilic monomers at three concentrations (25, 30 and 35%). The experimental varnish labeled as M presented a zwitterion... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ana Lucia Machado / Coorientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Dalva Cruz Laganá / Banca: Cláudia Helena Lovato da Silva / Doutor

O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

Leucotrienos (LTs) são mediadores lipídicos derivados do ácido araquidônico. Existem evidências que receptores da imunidade inata interagem com receptores para LTs amplificando funções efetoras de macrófagos. Investigamos se LTs modulam a fagocitose e a atividade microbicida via receptores Manose, Dectina -1 e PTX3 em macrófagos alveolares (AMs) e os mecanismos moleculares envolvidos. Nossos resultados mostram que: 1) AMs sintetizam LTs quando fagocitam C. albicans, Zy e Zy-PTX3; 2) LTs potencializam a fagocitose de C. albicans e Zy, mas não de Zy-PTX3. Este efeito dos LTs depende: do reconhecimento via receptor manose (LTB4) e Dectina-1 (LTD4); da integridade de lipid rafts; da ação em mecanismos de polimerização de actina; do aumento dos níveis de F-actina por inativação da Cofilina-1; da ativação das LIMKs, que regulam Cofilina-1; da ativação de PKC<font face=\"Symbol\">d e PI3K3) LTs aumentam a capacidade de AMs em matar C. albicans por ativação de NADPH oxidase. Em conjunto, mostramos que LTs potencializam programas de sinalização específicos para determinados PRRs. / Leukotrienes (LTs) are lipid mediators derived from arachidonic acid. There is evidence that innate immunity receptors and leukotrienes receptors interact and amplify macrophage effector functions. We investigated if LTs receptors modulate phagocytosis and microbicidal activity mediated by Mannose receptor, Dectin-1 and PTX3 in alveolar macrophages (AMs) and the molecular mechanisms involved. Our results showed that: 1) AMs produce LTs when stimulated with C.albicans, Zy, Zy-PTX3; 2) LTs enhance phagocytosis of C.albicans and Zymosan, but not Zy-PTX3. This is dependent on: recognition via mannose receptor (LTB4) and Dectin-1 (LTD4); integrity of lipid rafts; its action on actin polimerization mechanisms; enhancement of F-actin levels by induction of Cofilin-1 inactivation; activation of LIMKs that regulate Cofilin-1; activation of PKC<font face=\"Symbol\">d and PI3K3) LTs enhance killing of C.albicans by activation of NADPH oxidase. Taken together, our results showed that LTs specifically influence signaling programs of keys PRRs.

Objetivos: definir os dados demográficos, as doenças de base e os fatores de risco associados aos episódios de candidemia ocorridos na Santa Casa Complexo Hospitalar entre 17/02/1995 e 31/12/2003; identificar as espécies envolvidas nestes episódios de candidemia e determinar a mortalidade global entre estes pacientes. Métodos: estudo de coorte retrospectivo não-controlado com inclusão de todos os casos consecutivos de candidemia diagnosticados na instituição entre 17/02/1995 e 31/12/2003. Como critério de inclusão no estudo, foi exigida a presença de sinais ou sintomas temporalmente relacionados ao isolamento de Candida em hemocultivo coletado de veia periférica. Resultados: 210 pacientes com candidemia foram incluídos (infecção nosocomial em 91,0%). O sexo feminino foi mais prevalente (51,4%) e a idade mediana foi de 41,0 anos. A doença de base mais prevalente foi câncer (neoplasias sólidas 30,5% e hematológicas 9,0%). Candida albicans foi a espécie mais freqüente (38,1%), seguida de Candida parapsilosis (27,6%) e Candida tropicalis (15,7%); candidemia por Candida glabrata ocorreu em 3,8%, e por Candida krusei, em 2,4%. Procedimentos cirúrgicos foram realizados em 43,8%, cateter venoso central estava presente em 74,8%, cateter urinário em 57,1%, ventilação mecânica em 48,6% e nutrição parenteral em 33,8%; o número mediano de antimicrobianos foi 4,0 por paciente (glicopeptídeos 54,3%, carbapenêmicos 25,7%). A maioria dos pacientes com candidemia comunitária (52,6%) havia sido hospitalizada nos 60 dias anteriores à candidemia; em 21,1%, Candida foi isolada de cateter; insuficiência renal crônica (p<0,001) e hemodiálise (p=0,027) foram mais freqüentes no grupo de candidemia comunitária do que no nosocomial; a distribuição das espécies de Candida foi semelhante entre os grupos. Comparadas aos adultos, as crianças com candidemia nosocomial foram mais expostas a antimicrobianos de amplo espectro (p<0,001), ventilação mecânica invasiva (p=0,002) e nutrição parenteral (p<0,001). Candidemia nosocomial por Candida parapsilosis foi mais freqüente em crianças (p=0,002), bem como o isolamento de Candida de cateteres (p=0,019); crianças foram mais freqüentemente tratadas com anfotericina B do que adultos (p<0,001), os quais receberam mais fluconazol (p=0,013). Entre os pacientes com câncer e candidemia nosocomial, tratamento prévio com corticosteróides (p=0,004), quimioterapia (p<0,001) e cefepima (p=0,004) foram mais comuns naqueles com malignidades hematológicas; cirurgias foram mais comuns em pacientes com tumores sólidos (p<0,001), principalmente do trato gastrointestinal (p=0,016); a distribuição das espécies de Candida foi semelhante entre os grupos. Candidemia breakthrough (“de escape”) ocorreu em 10,5% dos pacientes com candidemia nosocomial; a maioria destes vinha em uso de anfotericina B em doses terapêuticas, por período mediano de 6,5 dias; o isolamento de Candida de sítios outros que o sangue foi mais freqüente nestes pacientes (p=0,028). A mortalidade dos pacientes com candidemia foi 50,5%, sem diferenças estatisticamente significativas entre pacientes com candidemia comunitária ou nosocomial, com câncer ou outros diagnósticos e com infecção breakthrough ou não-breakthrough; a mortalidade foi maior em adultos do que em crianças (p=0,005). Conclusões: espécies não-Candida albicans foram os principais agentes de candidemia; assim como em outros estudos brasileiros, a prevalência de espécies como Candida glabrata e Candida krusei foi baixa. Fatores de risco já descritos na literatura foram freqüentemente encontrados, e a distribuição dos mesmos variou de acordo com as diferentes características dos pacientes estudados. A mortalidade em pacientes com candidemia foi semelhante \à descrita na literatura.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-03-16T11:11:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Almeida Andrade - 2017.pdf: 8476311 bytes, checksum: 7b482a52ab904b738a33195974b7ec65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-03-20T12:58:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Almeida Andrade - 2017.pdf: 8476311 bytes, checksum: 7b482a52ab904b738a33195974b7ec65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T12:58:05Z (GMT). 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Laboratory-synthesized compounds have been to interest in medical biotechnology, among which the hydrazone derivatives are associated with antimicrobial including antifungal, antioxidant, antiparasitic, anticonvulsive, analgesic, anti-inflammatory and antitumor activity. The objectives were to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) of curcumin and n-acylhydrazone compounds, and also to verify the time-kill curve of Candida, to quantify ergosterol and to evaluate hemolysis of red blood cells after action of both compounds. Twenty isolates Candida spp. in the broth microdilution test for evaluation of the MIC and MFC of the compounds. The time-kill curve and ergosterol assay were checked after treatment of C. albicans ATCC 28367 with the compounds. To evaluate the cytotoxicity of these compounds sheep red blood cells were used. The compound curcumin showed MIC values between 16 and 256 μg/mL and MFC between 128 and values greater than 512 μg/mL. For the n-acylhydrazone derivative the MIC values ranged from 2 to 128 μg/mL and the MFC variation ranged from 256 to values greater than 512 μg/mL. The compounds showed fungistatic action on the growth kinetics of Candida over 48 hours. The determination of ergosterol after contact with the agents in MIC of 64 μg/mL of curcumin and 16 μg/mL of nacylhydrazone was reduced by 29.56 and 53.57%, respectively. The compounds showed hemolytic activity at concentrations of 512 μg/mL. The results observed in this work show that the curcumin and the n- acylhydrazone derivative have promising antifungal properties. / As infecções causadas por leveduras do gênero Candida são denominadas candidíase e são consideradas doenças oportunísticas com características superficiais e sistêmicas. Espécies de Candida podem desenvolver mecanismos de defesa aos principais antifúngicos disponíveis para uso clínico contra infecções, dificultando e limitando o tratamento. Produtos naturais podem ser fonte de compostos bioativos contra doenças infecciosas, como por exemplo a planta Curcuma longa Linn ou açafrão como é popularmente conhecida que apresenta em sua constituição o composto curcumina. Esse vegetal é utilizado em grande escala pela população como condimento alimentar e como medicamento natural contra doenças inflamatórias e doenças infecciosas. Os compostos sintetizados laboratorialmente têm sido de interesse em biotecnologia médica, entre esses, os derivados hidrazonas estão associados com atividade antimicrobiana incluindo antifúngica, antioxidante, antiparasitária, anticonvulsiva, analgésica, anti-inflamatória e antitumoral. Os objetivos deste trabalho foram determinar a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM) dos compostos curcumina e N-acilhidrazona, e ainda verificar a curva de morte de Candida, quantificar o ergosterol e avaliar a hemólise de hemácias após ação de ambos compostos. Foram utilizados 20 isolados Candida spp. no teste de microdiluição em caldo para avaliação da CIM e CFM dos compostos. A curva de morte e doseamento de ergosterol foram verificados após tratamento de C. albicans ATCC 28367 com os compostos. Para avaliação da citotoxicidade destes compostos utilizou-se hemácias de carneiro. O composto curcumina apresentou valores de CIM entre 16 e 256 μg/mL e CFM entre 128 a valores maiores que 512 μg/mL. Para o derivado Nacilhidrazona os valores de CIM variaram de 2 a 128 μg/mL e a variação de CFM foi entre 256 a valores maiores que 512 μg/mL. Os compostos mostraram ação fungistática sobre a cinética de crescimento de Candida ao longo de 48 horas. O doseamento de ergosterol após contato com os agentes na CIM de 64 μg/mL da curcumina e 16 μg/mL de N-acilhidrazona mostrou-se reduzido em 29,56 e 53,57%, respectivamente. Os compostos apresentaram atividade hemolítica em concentrações a partir de 512 μg/mL. Os resultados observados neste trabalho evidenciam que curcumina e o derivado N-acilhidrazona apresentam propriedades antifúngicas promissoras.

A terapia fotodinâmica, do inglês photodynamic therapy (PDT) é uma fototerapia baseada na utilização de um fotossensibilizador (FS) na presença da luz em baixa intensidade em comprimento de onda ressonante à absorção do FS e que podem sensibilizar sistemas biológicos, gerando espécies reativas de oxigênio. Estudos mostram que a PDT apresenta um efeito letal em Candida albicans. O biofilme formado por C. albicans é a causa mais freqüente de infecções associadas a cateteres, possuindo uma comprovada resistência a antifúngicos, sendo que a remoção do cateter colonizado é quase sempre necessária. No entanto, poucos trabalhos na literatura relatam o comportamento e a resposta de C. albicans organizado em biofilme frente à PDT. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver uma metodologia para formação in vitro de biofilme de C. albicans, verificar a sensibilidade do biofilme de C. albicans frente à terapia fotodinâmica antimicrobiana utilizando como FS o azul de metileno (AM) e a hipocrelina B:La+3 e analisar o biofilme através da Tomografia de Coerência Óptica (OCT) antes e depois da PDT. Para a formação do biofilme, foram confeccionados discos de silicone elastomérico oriundos de cateteres. Os fotossensibilizadores foram diluídos em solução de PBS, sendo que o AM teve duas concentrações diferentes testadas no biofilme: 100M e 1mM e a HBLa+3 somente uma de 10M. A irradiação de ambos os corantes com os microrganismos foi feita através de dois LEDs diferentes, um vermelho com = 630nm ± 20nm e outro azul com = 460nm ± 30nm. Foi realizada uma curva de fração de sobrevivência em função do tempo de irradiação de cada amostra com biofilme e de suspensão do microrganismo em formato de leveduras para verificar a susceptibilidade destes frente à PDT. As leveduras apresentaram 100% de redução em ambos os fotossensibilizadores, porém em tempos de irradiação diferentes (30s para a HBLa+3 e 6 min para o AM na concentração de 100M). Quando a terapia foi aplicada em biofilme, o AM em 100M não apresentou nenhuma redução significativa, enquanto que em concentração de 1mM houve redução de 100% após 6 min de irradiação. Já a HBLa+3 mostrou pouca redução em biofilme na concentração de 10M (menos de 1 log de redução. Concluímos que o microrganismo C. albicans se organizou em biofilme padronizado nos discos elastoméricos oriundos de cateteres e através do OCT, o biofilme medido apresentou 110m de espessura, informando uma mudança óptica ao ser submetido pela PDT com o AM 1mM. / Photodynamic therapy (PDT) is a phototherapy based on the use of a photosensitizer (PS) in the presence of low intensity light with resonant wavelength of absorption of the PS and biological systems that can raise awareness, generating reactive oxygen species. Studies show that PDT has a lethal effect on Candida albicans. The biofilm formed by C. albicans is the cause of infections associated with medical devices such as catheters, with a proven resistance to antifungal agents, and the removal of the catheter colonized almost always is necessary. However, few studies in literature report the behavior and response of biofilm organized by C. albicans against PDT. The aims of this study were to develop a methodology for in vitro biofilm formation of C. albicans, evaluate the sensitivity of the biofilm of C. albicans to antimicrobial photodynamic therapy using PS as the methylene blue (MB) and hypocrellin B: La+3 (HBLa+3) and analyze the biofilm by Optical Coherence Tomography (OCT). For biofilm formation, discs were made from elastomeric silicone catheters. The PS were dissolved in solution of PBS, and the MB had two different concentrations tested in the biofilm: 100M and 1mM; HBLa+3 only one of 10M. The irradiation of both dyes with the microorganism was done by two different LEDs, one with red emission at = 630nm ± 20nm and the other one blue emission at = 460nm ± 30nm. We performed a curve of survival fraction versus time of irradiation of each sample with biofilm and suspension of the microorganism in the yeast form to verify the susceptibility of the front PDT. The yeast showed 100% reduction using both PS, but at different times of irradiation (30s to HBLa+3 and 6 min for the MB at 100M). When the therapy was applied in biofilm, the MB 100M did not show any significant reduction, while at concentration of 1mM was reduced by 100% after 6 min of irradiation. The HBLa+3 biofilm group showed a lower reduction in the concentration of 10M in biofilm (less than 1 log reduction). OCT was performed for visualization and measurement of the thickness of the biofilm formed. The composition of the extracellular matrix of the biofilm polymer hindered the diffusion of PS inside, requiring higher concentrations of MB to disseminate it and to obtain satisfactory reduction for PDT. HBLa+3 group, in higher concentration, formed aggregates difficulting its use for PDT. We conclude that the organism C. albicans was organized in biofilms in a standardized way using elastomeric discs from catheters and the OCT showed that the biofilm measured 110m at thickness, showing an optical change when subjected to the PDT with MB 1mM.

Os probióticos são organismos vivos que quando ingeridos em quantidades adequadas, conferem benefícios aos indivíduos. Um destes benefícios é a capacidade de inibir o crescimento de micro-organismos patogênicos como Candida. Para avaliar a redução ou inibição de Candida em usuários de próteses totais promovida pela ingestão de probióticos, foram recrutados 135 pacientes, dos quais 59 permaneceram até o final do período experimental de 8 semanas. A ingestão dos probióticos ocorreu através de sua incorporação em queijo minas frescal. Foram selecionados pacientes usuários de próteses totais, uni ou bimaxilares albergando Candida na cavidade bucal. As amostras foram coletadas através de um enxaguado bucal 1 semana antes do início do experimento e ao final do período experimental de 8 semanas. Foi determinado o número de UFC de Candida/ml da amostra. Os sujeitos da pesquisa (n=59) receberam embalagens com 20g de queijo minas frescal a cada 14 dias por 8 semanas consecutivas. Os participantes foram divididos aleatoriamente em três grupos, experimental 1 e 2, e controle. Os grupos experimentais receberam os queijos suplementados com probióticos, respectivamente, Lactobacillus acidophilus NCFM e Lactobacillus rhamnosus Lr-32, e o grupo controle recebeu o queijo sem suplementação probiótica. Os queijos possuíam semelhança quanto a aroma e cor. Além da quantificação de Candida, foram realizados testes para identificação das espécies e avaliação da atividade enzimática da fosfolipase e proteinase. Os resultados inferem que os probióticos L. acidophilus NCFM e L. rhamnosus Lr-32 suplementados em queijo minas frescal foram capazes de reduzir os níveis de Candida bucal, em pacientes usuários de próteses totais, após ingestão diária dos queijos por 8 semanas consecutivas. Antes e após 8 semanas do experimento, Candida albicans foi a espécie mais isolada dos pacientes nos três grupos avaliados. Não houve diferença significativa com relação à atividade enzimática da fosfolipase e proteinase, pelos isolados de Candida sp., antes e após 8 semanas de ingestão do queijo. Conclusão: os dados indicam que queijos contendo L. acidophilus NCFM ou L. rhamnosus Lr-32 tem o potencial de reduzir a colonização oral por Candida, sugerindo a sua utilização para reduzir o risco de candidoses da cavidade oral. / Probiotics are living organisms which when ingested in adequate amounts confer benefits to individuals. One of these benefits is the ability to inhibit the growth of pathogenic microorganisms such as Candida. Reduction or inhibition of Candida isolated from complete denture wearers, uni or bimaxillary, was evaluated by ingestion of minas frescal cheese supplemented with probiotics. 135 patients were recruited, who 59 remained until the end of the experiment. The participants were patients in treatment at the Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo. The samples were collected through a rinsed mouthwash at the base line and 8 weeks of experiment, before the installation of the new prosthesis. The samples were inoculated on Saubouraud agar dextrose with chloramphenicol plates, incubated for 24-48 hours, in order to quantify in colony-forming units per milliliter (CFU/mL) of Candida presents in the oral cavity of these patients. Subjects who presented fungus positive culture received packages containing 20g of minas frescal cheese every 14 days for 8 consecutive weeks. The participants were divided into three groups: two experimental and one control. The experimental groups received the cheeses supplemented with probiotics Lactobacillus acidophilus NCFM and Lactobacillus rhamnosus Lr-32. The control group received the cheese without probiotic supplementation. The cheeses had similarity as flavoring and coloring. In addition to the quantification of Candida, tests for species identification, phospholipase and proteinase activities were carried out. The results infer that L. acidophilus NCFM and L. rhamnosus Lr-32 supplemented in minas frescal cheese were able to reduce the levels of oral Candida in complete denture wearers, after daily intake of cheeses for 8 weeks of the experiment. At baseline and after 8 weeks of the experiment Candida albicans was the most frequently isolated from denture wearers in all groups. Furthermore, no significant difference was observed in the phospholipase and proteinase activities by isolates of Candida sp., before and after 8 weeks of ingestion of cheese. Conclusion: The data indicate that L. acidophilus NCFM and L. rhamnosus Lr-32 has the potencial to reduce Candida colonization in oral cavity, suggesting its use for reducing the risk of oral candidiasis.

Orientador: Célia Marisa Rizzatti Barbosa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-18T20:42:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_CristianeMariaBrasil_D.pdf: 1004692 bytes, checksum: 29697b5c7bdbece2ba32ca361de7e805 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As propriedades de superfície de resinas e reembasadores a base de polimetilmetacrilato utilizados em próteses dentais removíveis podem interferir na adesão, colonização e formação do biofilme de Candida spp., microrganismo associado à estomatite protética. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência da rugosidade e da energia livre de superfície de uma resina a base de polimetilmetacrilato e um reembasador rígido na adesão e estrutura de biofilmes de Candida albicans. Discos de resina acrílica termopolimerizável e de reembasador rígido à base de polimetilmetacrilato foram confeccionados nas dimensões de 10 x 2 mm. As diferentes rugosidades de superfície dos espécimes foram obtidas por meio de diferentes acabamento/polimento. A energia livre de superfície variou pela formação de películas de saliva ou plasma ou a combinação de ambos sobre os espécimes. Após a mensuração da rugosidade e da energia livre de superfície, os espécimes foram divididos aleatoriamente de acordo com os grupos experimentais. Biofilmes de Candida albicans ATCC 90028 foram formados sobre as superfícies e avaliados quanto à contagem celular, bioatividade e arquitetura (bio-volume, espessura média e rugosidade média) nas fases de adesão e após 48 horas. Os dados foram analisados utilizando-se a análise de variância a dois critérios seguido do teste de Tukey. O nível de significância foi de p=0,05. Os resultados revelaram que mesmo havendo diferenças significantes (p<0,001) entre os valores da rugosidade, isto não se refletiu nos parâmetros avaliados do biofilme de C. albicans no período de 48 horas. Não houve diferença significativa nos valores da energia livre de superfície, no entanto, a diferença das películas provocou alterações significativas do biofilme de C. albicans na fase de adesão e 48 horas (p>0,05). Pode-se concluir que a alteração da rugosidade de superfície não afeta a estrutura do biofilme de C. albicans de 48 horas, no entanto, a alteração da energia livre de superfície por meio da deposição de proteínas salivares e/ou plasmáticas altera a estrutura do biofilme nas fases de adesão e 48 horas / Abstract: The properties of surface of the resins and reliners base of polymethymethacrylate used in removable dental prosthesis can interfere in the adhesion, colonization and formation of biofilm of Candida spp., microorganism associated to the prosthetic stomatitis. The objective of this research was to evaluate the influence of the roughness and the free energy of surface of the resin the base of polymethymethacrylate and a rigid reliner in the adhesion and structure of biofilms of C. albicans. Discs of the termopolymerized acrylic resin and rigid reliner to the base of polymethymethacrylate had been confectioned in the dimensions 10 x 2 mm. The differents roughness of surface of the specimens were obtained by means of different finishing/polishing. The free energy of surface varied for the formation of pellicle of saliva or serum or the combination of both on the specimens. After the measurement the roughness and the free energy of surface, the specimens were divided randomly in accordance to the experimental groups. Biofilms of Candida albicans ATCC 90028 were formed on the surfaces and evaluated for cell count, bioactivity and architecture (bio-volume, average thickness and average roughness) in the adhesion phases and after 48 hours. The data were analyzed using analysis of variance with two criteria followed by the Tukey test. The significance level was p=0,05. The results showed that even with significant differences (p<0.001) between the values of roughness, it did not reflect in the parameters evaluated of biofilm of C. albicans in 48 hours. There was no significant difference in the values of the free energy of surface; however, the difference of the pellicles caused significant alterations of biofilm of C. albicans in the adhesion phase and 48 hours (p>0,05). It can be concluded that the alteration of the roughness of surface don't affect the structure of biofilm of C. albicans of 48 hours, however, the alteration of the free energy of surface by deposition of salivary and/or serum proteins modifies the structure of biofilm in the adhesion phases and 48 hours / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

The susceptibilities of C.dubliniensis fluconazol-resistant (FR), C. dublinienis fluconazole-susceptible (FS) and C. albicans from oral candidiasis were tested to antiseptics chlorhexidine gluconate (CHX), cetylpiridinium chloride (CPC), triclosan (TCS) and natural compounds carvacrol, eugenol and thymol. In general C. dubliniensis FS was more sensitive to antiseptics than C. dublinienis FR and C. albicans. However to CHX the group FR was significantly less susceptible than the others. To fungicidal activity, the three groups did not show susceptibilities differences to CHX and TCS and the group FR was as sensitive as C. albicans to CPC. In general a similar profile of susceptibility was observed to natural products. The susceptibilities of the three groups of Candida spp to antiseptics confirmed the good antifungal activity of them. The authors discuss the importance of monitoring the susceptibility of Candida to antifungal agents as well as to antiseptics widely used in order to detect emergence of antiseptics resistance. / As suscetibilidades in vitro de C. dubliniensis resistentes ao fluconazol (RF), C. dublinienis sensíveis ao fluconazol (SF) e C. albicans sensíveis ao fluconazol foram testadas para os antissépticos gluconato de clorexidina (CHX), cloreto de cetilpiridineo (CPC), triclosan (TCS) e para os compostos naturais carvacrol, eugenol e timol. Em geral as cepas de C. dubliniensis SF apresentaram maior suscetibilidade aos agentes antissépticos do que as cepas C. dublinienis RF e C. albicans SF. No entanto, para o antisséptico CHX as cepas de C. dubliniensis RF foram significativamente menos susceptíveis quando comparadas as demais. A atividade fungicida dos três grupos de isolados não mostrou diferença quanto a susceptibilidades para a CHX e o TCS, e o grupo RF foi tão sensível quanto C. albicans ao CPC. Em geral, foi observado um perfil semelhante de susceptibilidade aos produtos naturais. As suscetibilidades dos três grupos de Candida spp aos antissépticos confirmou boa atividade antifúngica. Os autores discutem a importância de controlar a susceptibilidade de Candida aos agentes antifúngicos, bem como antissépticos utilizados a fim de detectar o aparecimento de resistência aos antissépticos.

Orientadores: Wander José da Silva, Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T12:52:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavalcanti_YuriWanderley_D.pdf: 36598802 bytes, checksum: f05687dd3da4ac323b62e27ca3d8816c (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A prevalência das infecções por Candida é elevada; logo, melhor compreensão dos mecanismos de desenvolvimento do biofilme é necessária para a redução da virulência e apropriado manejo clínico. Objetivou-se analisar a virulência de biofilmes de Candida albicans desenvolvidos sob diferentes condições. O papel das superfícies de biomateriais, da película salivar, e do estágio de desenvolvimento dos biofilmes foi avaliado no Capítulo 1. A influência da presença de outros microrganismos na virulência de C. albicans e na interação com o epitélio foi avaliada no Capítulo 2. O papel da atmosfera e da população bacteriana dos biofilmes foi investigado no Capítulo 3. No Capítulo 1, biofilmes de C. albicans foram desenvolvidos sobre discos de resina acrílica e titânio recobertos com película de saliva, ou de saliva com plasma. A superfície dos materiais foi analisada quanto a rugosidade e energia livre de superfície (ELS). Avaliou-se o número de microrganismos viáveis, a concentração de DNA, a atividade metabólica, a expressão de fatores de virulência e a estrutura dos biofilmes. Não houve diferenças quanto a rugosidade das superfícies. A película minimizou as diferenças entre a ELS dos materiais, sendo maior ELS observada para películas de saliva com plasma. O número de microrganismos viáveis, a concentração de DNA e a atividade metabólica aumentaram ao longo da maturação do biofilme. Maior atividade metabólica, maior expressão de ALS1, ALS3 e HWP1, e maior número de hifas foram verificados em biofilmes desenvolvidos na presença de película de saliva com plasma. Não houve diferenças entre os materiais. Concluiu-se que a presença de plasma na película salivar aumenta a virulência de C. albicans. No capítulo 2, biofilmes maduros (72 h) de C. albicans, e de C. albicans com bactérias, foram desenvolvidos sobre a superfície de resina acrílica. Esses biofilmes foram então analisados ou utilizados para infectar um modelo de epitélio oral humano reconstituído (RHOE). Avaliou-se o número de hifas e a expressão de fatores de virulência. A resposta epitelial foi avaliada por meio da expressão de IL-18 e Dectin1, da atividade da enzima lactato-desidrogenase (LDH), e a invasão epitelial. Maior número de hifas e maior expressão de HWP1, SAP4 e SAP6 foram verificados em biofilmes multi-espécie desenvolvidos sobre o acrílico. Biofilmes multi-espécies que infectaram o RHOE também apresentaram maior número de hifas e maior expressão de ALS3, EPA1, SAP6 e HWP1. Consequentemente, esses epitélios apresentaram maior invasão tecidual, maior atividade de LDH e maior expressão de IL-18. Concluiu-se que a presença de bactérias aumenta a virulência e patogenicidade de C. albicans. No capítulo 3, biofilmes de C. albicans e de C. albicans com estreptococos foram desenvolvidos sobre titânio em atmosfera de aerobiose e anaerobiose. Biofilmes de C. albicans (com ou sem estreptococos) também foram desenvolvidos na presença de Porphyromonas gingivalis, em anaerobiose. Avaliou-se a formação de hifas e a expressão de fatores de virulência. A atmosfera de anaerobiose e o co-cultivo com estreptococos geraram maior número de hifas e maior expressão de fatores de virulência. Embora P. gingivalis tenha inibido a virulência de C. albicans em biofilmes duo-espécies, esse efeito foi revertido na presença de estreptococos. Concluiu-se que a atmosfera de anaerobiose e a presença de estreptococos estimulam a virulência de C. albicans / Abstract: Candida infections have high prevalence; therefore, better understanding of the development mechanisms of biofilms is required for the reduction of virulence and for more appropriated clinical management. The aim of this study was to analyse the virulence of Candida albicans biofilms developed under different conditions. The role of biomaterial surfaces, salivary pellicle, and stage of biofilm development has been reported in Chapter 1. The influence of the presence of other microorganisms in virulence of C. albicans and on the interaction with the epithelium was evaluated in Chapter 2. The role of the atmosphere and of the biofilm¿s bacterial population was investigated in Chapter 3. In Chapter 1, C. albicans biofilms were developed on acrylic resin and titanium discs coated with saliva pellicle, or saliva with blood plasma pellicle. The materials¿ surfaces were analysed with regards to surface roughness and surface free energy (SFE). We evaluated the number of viable organisms, the DNA concentration, the metabolic activity, the expression of virulence factors and the architecture of the biofilms. There were no differences in the surface roughness of materials. The pellicles eliminated the differences between SFE of materials. Higher SFE was observed for discs coated with pellicles of saliva with plasma. The number of viable organisms, the DNA concentration and the metabolic activity increased throughout the biofilm maturation. Higher metabolic activity, increased expression of ALS1, ALS3 and HWP1, and more hyphae were observed in biofilms grown in the presence of saliva with plasma pellicle. There were no differences between the materials. In conclusion, the presence of saliva with plasma pellicle increases the C. albicans virulence. In chapter 2, mature biofilms (72 h) of C. albicans, or C. albicans with bacteria, were developed on the surface of acrylic resin discs. These biofilms were then analysed or used to infect a reconstituted human oral epithelium model (RHOE). Biofilms were evaluated according to the number of hyphae and the expression of virulence factors. The epithelial response was evaluated by the expression of IL-18 and Dectin1, by the activity of lactate dehydrogenase enzyme (LDH), and with regards the epithelial invasion. Increased number of hyphae and increased expression of HWP1, SAP4 and SAP6 were observed in multi-species biofilms developed on acrylic. Multi-species biofilms that have infected RHOE also had a greater number of hyphae and increased expression of ALS3, EPA1, SAP6 and HWP1. Consequently, these epithelia showed greater tissue invasion, higher LDH activity and higher IL-18 expression. We concluded, therefore, that the presence of bacteria promotes the virulence and pathogenicity of C. albicans. In Chapter 3, biofilms of C. albicans and C. albicans with streptococci were developed on titanium, aerobically and anaerobically. C. albicans biofilms (mixed or not-mixed with streptococci) were also grown in the presence Porphyromonas gingivalis, anaerobically. Biofilms were evaluated according to the formation of hyphae and expression of virulence factors. Anaerobic conditions and co-cultivation of streptococci produced higher number of hyphae and increased expression of virulence factors. Although P. gingivalis has inhibited the virulence of C. albicans, this effect was reversed in the presence of streptococci. We concluded that the anaerobic atmosphere and the presence of streptococci stimulate the C. albicans virulence / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica