Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Co-orientadora : Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Ana Paula Candido Santos / Banca: Michelle Cardoso de Sousa / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Estela Kaminagakura Tango / Resumo: Muitos produtos probióticos são compostos pela associação de lactobacilos no intuito de potencializar seu efeito benéfico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a imunomodulação e atividade anti-Candida causada por diferentes combinações de suspensões probióticas em macrófagos e em Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA), e L. paracasei (LP) foram suspendidos para obtenção das suspensões LR, LA, LP, LR+LA, LR+LP, LA+LP e LR+LA+LP. Foram utilizadas suspensões de Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 e C. glabrata (CG) ATCC 9030. Macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram ativados por cada suspensão de lactobacilos e desafiados por cada uma das cepas fúngicas. Foram investigadas taxa de fagocitose, produção de citocinas e óxido nítrico e a viabilidade celular. A melhor suspensão probiótica para cada cepa fúngica seria usada nos testes in vivo, com G. mellonella, no entanto, devido à baixa virulência das espécies não-albicans, os testes in vivo prosseguiram com CA e LR. Duas cepas clínicas de CA foram acrescentadas: 21 e 60. Suspensões de LR foram injetadas na hemolinfa das larvas 24 h antes do desafio com as cepas fúngicas. Foram determinadas curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL das cepas de C. albicans e de hemócitos. Os resultados foram analisados estatisticamente de acordo com a distribuição normal (ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn) e a curva de sobrevivência pelo teste de Log-rank (Mantel-Cox), p<0,05. As ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Many probiotic products are composed by association of lactobacilli in order to potentiate their beneficial effect. Therefore, the objective of this study was evaluating the immunomodulation and anti-Candida activity caused by different combinations of probiotic suspensions in macrophages and in Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA) and L. paracasei (LP) were suspended to obtain the suspensions LR, LA, LP, LR + LA, LR + LP, LA + LP and LR + LA + LP. Suspensions of Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 and C. glabrata (CG) ATCC 9030 were used. Mouse macrophages (RAW 264.7) were activated by each suspension of lactobacilli and then challenged by each fungal strain. Phagocytosis, cytokine and nitric oxide production and cell viability were investigated. The best lacobacilli suspension for each fungal strain would be used in the in vivo assays with G. mellonella, however, because of low virulence of the non-albicans species, in vivo tests were performed with CA and LR. Two clinical strains of CA were added: 21 and 60. LR suspensions were injected into the haemolymph of the larvae 24 h before challenging with fungal strains. Survival curve, CA strains CFU/mL counting and hemocytes were determined. The results were statistically analyzed according to their normal distribution (ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn) and the survival curve by Log-rank test (MantelCox), p <0.05. The best suspensions for CA, CK and CG were LR (which obtained the best results in the cytokine profile), LP and LA (which obtained the best results on phagocytosis), respectively. In G. mellonella, LR suspension increased percentage survival and hemocyte counting and decreased CFU/mL counting in all groups, with statistically significant differences in the results. Thus, it can be concluded that the suspensions of lactobacilli have ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Alexandre Luiz souto Borges / Coorientador: Eliton Souto de Medeiros / Banca: Laís Regiane da Silva Concilio / Banca: Eliandra de Sousa Trichês / Banca: Estevão Tomomitsu Kimpara / Banca: Eduardo Bresciani / Resumo: A estomatite protética é uma das afecções mais comuns e recorrentes em pacientes portadores de próteses totais. O fungo do gênero Candida, promotor dessa patologia, além de resistente se torna ainda mais complexo de ser combatido devido à dificuldade da ação de fármacos tópicos que só conseguem permanecer por um curto período no local da infecção, em virtude da dinâmica da cavidade bucal. O processo de Solution Blow Spinning permite a obtenção de fibras ultrafinas que podem ser aplicadas em vastas áreas, inclusive na bioengenharia. Uma das aplicabilidades das fibras ultrafinas é sua utilização para liberação controlada de fármacos de forma eficiente e duradoura. Dessa forma, o intuito do presente trabalho foi incorporar Cinamaldeído (CA), composto que possui propriedades antimicrobianas, a mantas de Poli(ácido lático) e Poli(etileno glicol) (PLA/PEG) e avaliá-las quanto à produção e caracterização por, Microscopia eletrônica de varredura (MEV), Termogravimetria (TGA), Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC), Espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), Espectroscopia no ultravioleta visível (UV/vis), ensaios mecânicos e ação antifúngica. Para realização dos experimentos, foram fiadas as seguintes mantas: PLA, PLA/PEG e PLA/PEG 23,8% CA. As micrografias obtidas por MEV mostraram, que os diâmetros das fibras que não continham CA, apresentaram diâmetros semelhantes entre si, PLA (354±160 nm)a e PLA/PEG (428±250nm)a, sendo esses diâmetro menores dos que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Denture stomatitis is one of the most common and recurrent conditions in patients with total dentures. The fungal of the genus Candida, the causer of this pathology, besides being resistant, becomes even more complex to be combated due to the difficulty of the action of topical drugs that can only remain for a short time at the site of infection due to the dynamic of the oral cavity. The Solution Blow Spinning process allows the production of ultrafine fibers that can be applied in large areas, including bioengineering. One of the applications of ultrafine fibers is their use for controlled release of drugs in an efficient and long-lasting manner. Thus, the aim of the present work was to incorporate Cinnamaldehyde (CA), a compound that has antimicrobial properties, to Poly (lactic acid) and Poly (ethylene glycol) blankets (PLA / PEG) and to evaluate them for the production and characterization by Scanning Electron Microscopy (SEM), Thermogravimetric (TGA), Differential Scanning Calorimetry (DSC), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), Ultraviolet-visible (UV/vis) spectroscopy, mechanical properties and antifungal action. Antifungal activity was verified against C. albicans, C. krusey and C. glabrata by broth microdilution test, disk diffusion and anti-biofilm activity, in both multi-species and mono-species biofilms. For the experiment, three types of meshes were spun: pure PLA, PLA/PEG and PLA / PEG 23.8% CA. The micrographs obtained by SEM showed that the fibers th... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Benedito Oliveira Amorim / Coorientadora: Liliana Scorzoni / Banca: Mônica Fernandes Gomes / Banca : Dayane Batista Tada / Resumo: A epidemiologia das infecções causadas por Candida sofreu mudanças nos últimos anos. Embora Candida albicans ainda seja o principal patógeno causador de candidíase, relatos recentes reportam o aumento da incidência de infecções causadas por espécies de Candida não-albicans. A toxicidade dos fármacos antifúngicos utilizados juntamente com o desenvolvimento da resistência tem se tornado um sério problema clínico. Com isso, atualmente existe a urgência na descoberta de novos compostos com atividades antifúngicas. Objetivos: avaliar a atividade antifúngica do fármaco Cloridrato de Verapamil, determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM), frente à Candida albicans ATCC 18804, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 90018 e Candida glabrata ATCC 9030. Além de avaliar a citotoxicidade do fármaco em queratinócitos humanos (HaCaT). Metodologia: a determinação da CIM foi realizada pela técnica de microdiluição de acordo com The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). A CFM foi determinada por plaqueamento em ágar Sabouraud de alíquotas provenientes das diluições do ensaio de microdiluição. A avaliação da citotoxicidade foi realizada pela técnica de redução da resazurina, sendo possível avaliar a atividade mitocondrial das células HaCaT. Resultados: o fármaco Cloridrato de Verapamil demonstrou atividade antifúngica contra as quatro espécies patogênicas de Candida, com o valor de CIM de 1250 µM; ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The epidemiology of Candida infections has changed in recent years. Although Candida albicans is still the main pathogen causing candidiasis, recent reports have reported an increase in the incidence of infections caused by nonalbicans Candida species. The toxicity of the antifungal drugs used together with the development of resistance has become a serious clinical problem. With this, there is now an urgency in the discovery of new compounds with antifungal activities. Objectives: To evaluate the antifungal activity of the drug Verapamil Hydrochloride, to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Fungicidal Concentration (CFM) against Candida albicans ATCC 18804, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 90018 and Candida glabrata ATCC 9030 In addition to evaluating the cytotoxicity of the drug in human keratinocytes (HaCaT). Methodology: MIC determination was performed by the microdilution technique according to The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST). The CFM was determined by plating on Sabouraud agar from aliquots from the dilutions of the microdilution assay. The evaluation of cytotoxicity was performed using the resazurin reduction technique, and it was possible to evaluate the mitochondrial activity of HaCaT cells. Results: The drug Verapamil Hydrochloride demonstrated antifungal activity against the four pathogenic species of Candida, with MIC value of 1250 μM; CFM value greater than 1250 ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

NASCIMENTO, A. A. Frequência e sensibilidade antifúngica de candida spp. isoladas de úlceras de pé diabético. 2017. 110 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) - Curso de Medicina, Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2017 / Submitted by Mestrado Ciências da Saúde (ppgcsufcsobral@gmail.com) on 2017-01-25T19:25:24Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_aanascimento.pdf: 1432101 bytes, checksum: 188ea1d5536b9c9c7a462bb91ce2d2c4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Márcia Sousa (marciasousa@ufc.br) on 2017-01-26T14:37:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_aanascimento.pdf: 1432101 bytes, checksum: 188ea1d5536b9c9c7a462bb91ce2d2c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T14:37:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_aanascimento.pdf: 1432101 bytes, checksum: 188ea1d5536b9c9c7a462bb91ce2d2c4 (MD5) Previous issue date: 2017-01-20 / Patients with diabetes represent a unique group of individuals who appear to be more likely to develop infections than others. Foot problems represent one of the most important chronic complications of diabetes mellitus. The risk of lower limb amputation can be increased if ulceration is followed by bacterial, fungal, and, in more severe cases, synergism between bacterial and fungal infections. However, there is a lack of reports in the literature of the incidence of fungal pathogens in these samples. This study aims to describe, through a prospective study, the culture, isolation, identification and sensitivity test of Candida spp. present in diabetic patient´s foot ulcers. Samples were collected at the North Regional Hospital from September 2015 to September 2016. A total of 154 samples were collected from 77 patients, where 50.65 % were female and 49.35 % were male. Of the total number of patients, 59.74 % were diagnosed with type 2 diabetes mellitus, where hypertension was the most prevalent comorbidity. Patients aged 71-80 years were more susceptible to complications of diabetes and the majority of patients (70.13 %) had fasting glycemia values above the reference value. Peripheral vascular disease was present in all patients, where 97.40 % had necrotic and infected lesions in the feet, increasing cases of debridement and revascularization. Of the total number of pacientes, 70.13 % had local or generalized amputation, being classified in grade 4 or 5, by Wagner's Classification, where, consequently, all of them were in antibacterial use, but none were using antifungal. In total, 59.74 % and 54.54 % of the patients never received care orientation or did daily selfexamination of the feet, respectively; and 97.40 % had their wounds reinfected, being necessary to perform new vascular procedures. The fungal species that grew in culture were identified through the conventional mycological methodology. Most of the samples identified were C. tropicalis (44.33 %) and all samples of C. albicans identified and isolated in the study were tested for antifungal sensitivity. Species of Candida nonalbicans are being more incident than the species of C. albicans. All C. albicans samples from this study were considered sensitive to the sensitivity test, according to the methodology and references of CLSI-M27A2. The number of deaths of patients related to diabetic foot in this study was worrisome (14.29 %). Preventive and primary measures should be taken to decrease the high mortality rate in diabetic patients with foot ulcers. Self-care is an important factor in the prevention of complications in diabetic feet and, for good disease control, effective self-management is necessary. We believe that our results have important implications for the prevention and recognition of fungal infections in diabetic foot and we recommend that diabetic patients with foot problems should be routinely examined for mycological evaluation because fungi play a potential role in the pathogenesis of ulceration. / Pacientes com diabetes representam um grupo único de indivíduos que parecem ser mais propensos a desenvolver infecções do que outros. Os problemas com os pés representam uma das mais importantes complicações crônicas do diabetes mellitus. O risco de amputação de membros inferiores pode ser aumentado se a ulceração é seguida por infecções bacterianas, fúngicas e, em casos mais graves, sinergismo entre infecções bacterianas e fúngicas. Entretanto, há escassez de relatos na literatura da incidência de patógenos fúngicos nessas amostras. Este estudo tem por objetivo descrever, através de um estudo prospectivo, a cultura, isolamento, identificação e teste de sensibilidade de Candida spp. presentes em úlceras dos pés de pacientes diabéticos. A coleta das amostras foi realizada no Hospital Regional Norte, entre setembro de 2015 a setembro de 2016. Foram coletadas 154 amostras de 77 pacientes, onde 50,65 % eram do gênero feminino e 49,35 % eram do gênero masculino. Do total de pacientes, 59,74 % foram diagnosticados com diabetes mellitus tipo 2, onde a hipertensão foi a comorbidade de maior prevalência. Pacientes entre 71-80 anos foram mais susceptíveis às complicações do diabetes e a maioria dos pacientes (70,13 %) estava com valores de glicemia de jejum acima do valor de referência. A doença vascular periférica estava presente em todos os pacientes, onde 97,40 % apresentavam lesões necrosadas e infectadas nos pés, aumentando os casos de desbridamentos e revascularizações. Do total de pacientes, 70,13 % tinham amputação local ou generalizada, sendo classificados em grau 4 ou 5, pela Classificação de Wagner, onde, consequentemente, todos estes estavam em uso de antibacterianos, porém nenhum estava em uso de antifúngico. No total, 59,74 % e 54,54 % dos pacientes nunca receberam orientação para os cuidados ou fizeram autoexame diário dos pés, respectivamente; e 97,40 % tiveram suas feridas reinfectadas, sendo necessário realizar novos procedimentos vasculares. As espécies fúngicas que cresceram em cultivo foram identificadas através da metodologia micológica convencional. A maioria das amostras identificadas foram C. tropicalis (44,33 %) e todas as amostras de C. albicans identificadas e isoladas no estudo foram realizadas testes de sensibilidade antifúngica. Espécies de Candida não albicans estão sendo mais incidentes que a espécie de C. albicans. Todas as amostras de C. albicans deste estudo foram consideradas sensíveis ao teste de sensibilidade, segundo a metodologia e referências do CLSI-M27A2. Foi preocupante a quantidade de óbitos dos pacientes relacionados ao pé diabético neste estudo (14,29 %). Medidas preventivas e primárias devem ser tomadas para diminuir a elevada taxa de mortalidade em pacientes diabéticos com úlceras nos pés. O autocuidado é fator importante na prevenção de complicações em pés diabéticos e, para bom controle da doença, é preciso autogerenciamento efetivo. Nós acreditamos que nossos resultados têm implicações importantes para a prevenção e reconhecimento sobre as infecções fúngicas no pé diabético e recomendamos que pacientes diabéticos com problemas nos pés devam ser examinados rotineiramente para avaliação micológica, pois os fungos possuem papel potencial na patogênese da ulceração.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:26Z : No. of bitstreams: 1 Publico-00231.pdf: 1784115 bytes, checksum: 4dcd9596246858abd2e260995c2c0ab4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Candida rugosa é um patógeno emergente que merece destaque pela sua maior ocorrência em países da América Latina. Esta levedura tem o potencial de colonizar e causar infecções de corrente sanguínea no homem, bem como de apresentar resistência a diversos antifúngicos, principalmente aos azólicos. Objetivos: comparar caracteres fenotípicos, como atributos de virulência e sensibilidade antifúngica, além de realizar identificação e tipagem molecular de isolados clínicos de C. rugosa obtidos de pacientes que desenvolveram candidemia, com cepas isoladas de pacientes que foram somente colonizados por esta espécie, sem desfecho de candidemia na internação. Também foi de nosso interesse avaliar tais diferenças entre as cepas provenientes de pacientes internados ao longo de dois períodos avaliados: 1995/96 e 2001/02. Material e Métodos: As cepas foram caracterizadas fenotipicamente quanto a fatores de virulência, incluindo a produção de enzimas extracelulares (proteinase, fosfolipase e lipase) e a formação de biofilme. Foram realizados teste de susceptibilidade a cinco antifúngicos pelo método de microdiluição em caldo, sendo eles: anfotericina B, fluconazol, voriconazol, caspofungina e anidulafungina. Para confirmação de espécie e avaliação de variabilidade genotípica, foram utilizadas as técnicas moleculares de RAPD, microssatélite e sequenciamento da região ITS (rRNA). Resultados: Observou-se grande variabilidade nos resultados referentes à produção de enzimas hidrolíticas. A população foi classificada, no geral, como baixa produtora de proteinase, não produtora de fosfolipase e baixa e média produtora de biofilme. A produção de lipase foi o único fator de virulência expresso de maneira considerável pelos isolados clínicos, destacando-se a alta produção desta enzima por cepas isoladas de sangue, sugerindo a importância da mesma no estabelecimento de infecção por C. rugosa. Com relação à sensibilidade aos antifúngicos, os isolados mostraram-se sensíveis a todas as drogas, exceto ao fluconazol. A avaliação dos resultados obtidos por 3 diferentes métodos moleculares demonstrou alto relacionamento filogenético entre os isolados clínicos, exceto pela cepa de referência a qual foi sempre posicionada em diferente cluster. A análise genotípica revelou similaridade de 90,5% entre todos os isolados, e de 87% para a cepa de referência ATCC1051 pela técnica de RAPD, e uma similaridade de 92% entre os isolados clínicos e de 86,5% para a cepa controle pelo método de microssatélite. O seqüenciamento da região ITS identificou todos os isolados como sendo C. rugosa, apresentando uma identidade que variou de 89% a 93% para os isolados clínicos, e 99% para a cepa de referência ATCC10571. Conclusões: Não foi possível estabelecer uma correlação direta entre a expressão de todos os fatores fenotípicos avaliados e o desfecho clínico dos pacientes, embora haja evidências importantes da atividade de lipase influenciando candidemia por C. rugosa. Sugere-se que houve uma disseminação clonal dos isolados de C. rugosa no ambiente hospitalar avaliado ao longo de vários anos. Adicionalmente, as diferenças genéticas encontradas entre os isolados clínicos e a cepa de referência ATCC10571, juntamente com algumas diferenças fenotípicas observadas exclusivamente nesta cepa, tais como alta produção de biofilme, macromorfologia acentuadamente rugosa e baixa atividade de lipase, indicam a possibilidade de heterogeneidade do táxon C. rugosa. / Introduction: Candida rugosa is an emergent pathogen recognized by its higher occurrence in Latin American countries. This yeast has the ability to colonize and cause human bloodstream infections as well as to show resistance to several antifungal drugs, specifically to azoles. Objectives: To compare phenotypic properties such as virulence attributes and antifungal susceptibility, as well as to perform molecular identification and typing of C. rugosa clinical isolates obtained from patients who were either colonized or developed candidemia due to this species during the hospitalization period. We were also interested in evaluating such differences among strains isolated across two different periods: 1995/96 and 2001/02. Material and Methods: The strains were phenotypically characterized according to virulence factors, including the production of extra cellular enzymes (protease, phospholipase and lipase) and biofilm formation. We performed susceptibility testing to 5 antifungal drugs by using broth microdilution: amphotericin B, fluconazole, voriconazole, caspofungin and anidulafungin. To confirm identification to the species level and evaluate genetic variability, we have employed RAPD, microsatelite and rDNA ITS region sequencing. Results: Phenotypic properties varied considerably among the isolates, specifically regarding to hydrolytic enzymes production. Most of the isolates were low proteinase producers. The strains were phospholipase negative and showed a not very expressive biofilm formation in general. Nevertheless, lipase production was the only virulence factor considerably expressed by the clinical isolates, specifically by blood strains, suggesting the importance of this attribute in C. rugosa infection. The strains were sensitive to all the antifungal drugs tested, except fluconazole. The clinical isolates were highly related as determined by 3 different methods. However the control strain ATCC10571 was considered genotipically very different Our isolates were 90.5% similar among them and 87% similar to C. rugosa control strain as determined by RAPD, and 92% similar among them and 86,5% similar to ATCC10571, as determined by microsatelite. All the isolates were identified as C. rugosa by ITS region sequencing. The percentage of similarity ranged from 89% to 93% for the clinical isolates, and 99% to C. rugosa ATCC10571. Conclusions: It was not possible to establish a direct relationship between the expression of all virulence properties and patients clinical outcomes. However there is mounting evidence that lipase activity influences candidemia due to C. rugosa. It is possible that clonal dissemination in the hospital environment have occurred throughout several years. In addition, the genetic differences found between our isolates C. rugosa control strain ATCC10571, together with the phenotypic differences observed, such as higher biofilm formation and rough colony morphology, as well as low lipase activity for this control strain, suggest the genetic heterogeneity among the taxon C. rugosa. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:11:57Z : No. of bitstreams: 1 baldan_rcf_me_araca.pdf: 521281 bytes, checksum: 0f50e815f21fa4a3959c51153cef58af (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tem sido descrito que cerca de 30% do total leucoplasias possui tendência à malignização, a uma taxa de 2,9% ao ano. O envolvimento concomitante de leucoplasias com Candida albicans tem sido relacionado a possíveis processos de malignidade, tornando este questionamento uma fonte de debate. O presente trabalho avaliou a expressão qualitativa de p 53, Ki-67, PCNA e AgNOR em leucoplasias associadas à Candidose. Não foram observadas diferenças significativamente estatísticas (Tukey test, p<0,05) no grupo corado por AgNOR. Esses resultados discutem a taxa de proliferação celular epitelial e, talvez, indícios de alterações genéticas malignas presentes nas leucoplasias associadas à Candidose. / It has been described that 30% of leukoplakia with tendences to malignization, in a rate of 2,9% per year. The envolvement of leukoplakia associated to Candida albicans has been related to possible process of malignity, witch makes this question a source of debate. The aim of this study was to evaluate the qualitative expression of p53, Ki-67, PCNA and AgNOR in leukoplakia related to Candidosis. It wasþt observated statistical diferences in the AgNOR group (F test, p<0,05-ANOVA one-way). This results discuss a rate of celular epitelial proliferation and possibly genetic alterations present in leukoplakia related to Candidosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30Bitstream added on 2014-06-13T19:45:07Z : No. of bitstreams: 1 zamperini_ca_dr_arafo.pdf: 1388179 bytes, checksum: 6b6bce25f31321d415cd6c36937b0ae0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A adesão de Candida às superfícies protéticas é o passo inicial para ocorrência da estomatite protética. Entre os diversos fatores envolvidos na adesão de Candida spp. às superfícies poliméricas estão as interações hidrofóbicas e eletrostáticas, a rugosidade superficial e a película salivar. Assim, os objetivos deste estudo foram: investigar o potencial de diferentes tratamentos a plasma (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) de modificar uma resina acrílica para base de prótese (VIPIWAVE) para reduzir a aderência de Candida albicans (ATCC 90028), avaliada pelo ensaio de XTT e cristal violeta. O efeito da rugosidade de superfície e do pré-condicionamento com saliva também foram avaliados; investigar se modificações de superfícies por meio de dois tratamentos a plasma (Ar/50W; AAt/130W) reduziriam a aderência de Candida glabrata (ATCC 2001), avaliada pela coloração cristal violeta, sobre superfícies lisas de resina acrílica. Além disso, o efeito do pré-condicionamento com saliva também foi avaliado; e ainda, avaliar se variações nos períodos de pré-condicionamento com saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), nos parâmetros de centrifugação (velocidade e tempo) e número de doadores de saliva influenciariam os resultados de adesão de Candida albicans a uma resina acrílica para base de prótese, avaliada por meio do ensaio de XTT e coloração cristal violeta. Além disso, a correlação entre os dois métodos utilizados para avaliação da adesão de Candida albicans também foi avaliada. Os resultados obtidos demonstraram que os tratamentos a plasma são efetivos para modificação da hidrofobicidade de superfície ou incorporação de átomos de flúor na superfície da resina acrílica. Entretanto, após os tratamentos... / The adhesion of Candida to denture surfaces is the initial step for occurrence of denture stomatitis. Among the various factors involved on Candida adhesion to polymeric surfaces are the hydrophobic and eletrostatic interactions, surface roughness and pellicle salivary. Hence, the aims of this study were: to investigate the potential of different plasma treatments (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) to modify a denture base acrylic resin (VIPIWAVE) to reduce the Candida albicans adhesion (ATCC 90028), evaluated by XTT reduction assay and crystal violet staining. The effect of surface roughness and saliva coating was also evaluated; to investigate the potential of two plasma treatments (Ar/50W; AAt/130W) to modify a denture base acrylic resin to reduce the Candida glabrata adhesion (ATCC 2001), evaluated by crystal violet staining. Moreover, the effect of saliva coating was also evaluated; and to assess the effect of different periods of preconditioning with saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), variations in the centrifugation parameters (speed and time) and number of donors of saliva on Candida albicans adhesion to a denture base resin using crystal violet staining and XTT reduction assay. Additionally, the correlation between the two methods used for assessing Candida albicans adhesion was also evaluated. The results obtained demonstrated that the plasma treatments were effective in modifying hydrophobicity or incorporation of fluorine into acrylic resin. However, there were significant alterations in the contact angle measured after immersion in water. Groups ArO2/70W and ArSF6/70W showed significantly lower absorbance readings to Candida albicans adhesion than the other groups. No statistically significant difference in the adherence of Candida albicans, evaluated by... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29Bitstream added on 2014-06-13T20:26:08Z : No. of bitstreams: 1 lazarin_aa_dr_arafo.pdf: 2142552 bytes, checksum: 63a785fe41ed3de17382a8e94e97b844 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foi proposto avaliar diferentes vernizes experimentais, que apresentam em sua formulação monômeros hidrofílicos ou zwiteriônicos, como método para modificar a superfície de resina acrílica para base de prótese, com o objetivo de prevenir a adesão de C. albicans. Foram confeccionados corpos-de-prova com características superficiais que simulavam a parte polida das próteses (superfície lisa) e com características superficiais que simulavam a parte interna das próteses (superfície rugosa) utilizando-se uma resina para base de prótese específica para micro-ondas (Vipi Wave). Matrizes metálicas com 10 cavidades (13,8 mm de diâmetro e 2 mm de altura) foram incluídas em mufla, entre 2 placas de vidro, para simular a superfície lisa, ou em contato com gesso para obter amostras que simulassem a superfície rugosa da prótese. Todos os corpos-de-prova foram submetidos à mensuração da rugosidade utilizando-se um rugosímetro (Mitutoyo SJ 400) com cutoff de 2,5 mm. A rugosidade superficial foi determinada (Ra-µm) pela média de três mensurações realizadas em cada amostra. Após a leitura da rugosidade, os corpos-de-prova foram divididos em grupo controle (n=72; 36 lisos e 36 rugosos), não recebendo nenhum tratamento superficial, e 12 grupos experimentais (n=72; 36 lisos e 36 rugosos) que receberam uma camada do verniz experimental sendo polimerizado em forno EDG. Os vernizes experimentais apresentaram em sua composição o monômero metil metacrilato (MMA), dois agentes de ligação cruzada (TEGDMA e Bis-GMA) e o foto iniciador MBP (4- metil benzofenona). Além desses componentes, os vernizes identificados pelos códigos P, E e T apresentaram monômeros hidrofílicos em 3 concentrações (25, 30 e 35%). O verniz identificado pelo código M apresentou um monômero zwiteriônico (MZ), nas mesmas... / The aim of the present study was to evaluate the use of different experimental varnishes containing zwitterion or hydrophilic monomers as a manner to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion of C. albicans. For such purpose, specimens with surface characteristics that simulated the polished side of the dentures and the inner side of the dentures were fabricated using a microwave-polymerized denture base acrylic resin (Vipi Wave). Hollow metallic matrices with 10 cavities (13.8 mm diameter x 2 mm high) were flasked either between two glass plates, in order to produce specimens with smooth surfaces that simulated the polished side of the dentures, or in direct contact with the stone, in order to obtain specimens with rough surfaces that simulated the inner side of the dentures. All specimens were subjected to surface roughness readings in a roughness meter (Mitutoyo SJ 400) with cutoff length of 2.5 mm. Surface roughness (Ra, µm) was determined as the average of three random measurements made on each specimen. After the roughness readings, the specimens were randomly assigned to one control group (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens), in which the specimens received no surface treatment, and 12 experimental groups (n=72; 36 smooth and 36 rough specimens) in which the specimens were coated with one of the experimental varnishes followed by polymerization in an EDG oven. The 12 experimental varnishes presented in their composition the monomer methyl methacrylate (MMA), two crosslinking agents (TEGDMA and Bis-GMA) and a photoinitiator agent (4-methyl benzophenone . MPB). In addition to these components, the experimental varnishes labeled as P, E and T presented hydrophilic monomers at three concentrations (25, 30 and 35%). The experimental varnish labeled as M presented a zwitterion... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-18. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:06Z : No. of bitstreams: 1 000843693.pdf: 366683 bytes, checksum: f4504cb95cbb08f21d4a54b0e5602077 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR multiplex é um método preciso, fácil, econômico e rápido... / Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR methods is an accurate, easy, economical and quick to....