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Avaliação de medula óssea em cães pancitopênicos de uma população hospitalar da região Centro-Oeste do BrasilGirardi, Angela Ferronatto 24 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-24 / CAPES / A pancitopenia pode estar associada a distúrbios intra e extramedulares. Quando a etiologia não é óbvia o exame de medula óssea é necessário. O estudo tem como objetivo avaliar a prevalência da pancitopenia, relatar e discutir alterações de medula óssea e diagnósticos diferenciais em cães pancitopênicos. A ocorrência de pancitopenia aos hemogramas realizados num período de 13 meses consecutivos em um hospital veterinário foi avaliada, e após autorização dos proprietários dos cães pancitopênicos foi obtido aspirado de medula óssea. Esfregaços foram confeccionados e corados por Giemsa, onde contagem diferencial de 500 células foi realizada e foram avaliadas relação mielóide: eritróide, celularidade, megacariócitos e exame parasitológico direto. PCR para Leishmania (Leishmania) infantum chagasi e Ehrlichia canis foi realizado a partir do aspirado de medula óssea. Hemogramas de 3120 caninos com diversas alterações clínicas foram analisados para identificar pancitopenia, que representaram 167 (5.4%) cães. Destes, foi obtida autorização de proprietários de 65 cães pancitopênicos para coleta de medula óssea. Interpretação de características quantitativas foi realizada a partir do esfregaço de medula óssea e a etiologia foi firmada em 46 (70.8%) destes, que incluiu infecção por E. canis e L. chagasi, anemia aplásica idiopática, insuficiência renal crônica e co-infecções. Em 17 (26.2%) animais não foram observadas alterações medulares. O achado mais observado foi hiperplasia mielóide e eritróide em 16 (24.6%) cães. A prevalência de pancitopenia observada foi elevada comparando a outros dados relatados em literatura, fato que pode ter ocorrido devido ao número de casos decorrentes de doenças infecciosas (58,5%) nos caninos avaliados: número expressivo decorrente de sua característica endêmica. / The pancytopenia can be associated with intra and extra medullary disorders. When the etiology is not obvious, the examination of bone marrow is necessary. The study aims to evaluate the prevalence of pancitopenia, report and discuss bone marrow alterations and pancitopenia differential diagnosis in dogs. The occurrence of pancitopenia in blood counts performed over a period of 13 consecutive months at a veterinary hospital was evaluated, and with approval of the owners of dogs, bone marrow aspirate was obtained. Smears was prepared and stained by Giemsa, where 500 cells differential count was performed and were assessed myeloid:erythroid ratio, cellularity, megakaryocytes and cytological examination. PCR for Leishmania (Leishmania) infantum chagasi and Ehrlichia canis was conducted from the bone marrow aspirate. Blood counts of 3120 canines, with several clinical changes were analyzed to identify pancitopenia, which accounted for 167 (5,4%) dogs. Of these, authorization was obtained from owners of 65 dogs for bone marrow collection. Interpretation of quantitative characteristics was carried out from the bone marrow smear and the etiology was established in 46 (70.8%) of these, which included infection by E. canis and L. chagasi, idiopathic aplastic anemia, chronic renal failure and co-infections. In 17 (26.2%) animals were not observed medullary changes. The most observed finding was myeloid and erythroid hyperplasia in 16 (24.6%) dogs. The prevalence of pancitopenia observed was high when compared with data reported in the literature, which may be due to the number of cases due to infectious diseases (58,5%) in evaluated canine: expressive number due to its endemic feature.
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Influência da geometria oclusal e material restaurador na carga para fratura e distribuição de tensões em coroas totais /Lima, Aline Lins de. January 2014 (has links)
Orientador: Alexandre Luiz Souto Borges / Banca: Gilberto Antonio Borges / Banca: Tarcísio José de Arruda Paes Júnior / Resumo: Este estudo avaliou a influência de diferentes padrões de altura de cúspides de restaurações totais fornecidos pelo banco de dados do sistema CAD/CAM CEREC (Jovem, Asiático e Adulto) na carga para fratura de dois materiais restauradores (resina acrílica e cerâmica). Sessenta preparos para coroa total em G10 (tecido de fibra de vidro impregnado com resina epóxi substituto personalizado da dentina) foram digitalizados pelo. CEREC e divididos em três grupos segundo os padrões oclusais fornecidos pelo banco de dados do CEREC de acordo com as diferentes alturas de cúspide: Jovem (J), Asiático (As) e Adulto (Ad). Cada padrão oclusal foi usinado com dois tipos de materiais diferentes: um com baixo módulo elástico (6 ± 0.5GPa) resina acrílica CAD-Waxx(R) e outro com alto módulo elástico (63 ± 0.5GPa) cerâmica feldspática VITA Mark II(C). Os preparos em G10 foram incluídos em resina de poliuretano e foram simulados alvéolos artificiais com poliéter de consistência leve. Todas as coroas foram cimentadas com cimento resinoso dual RelyX ARC® e armazenadas em água destilada por 24 h. Os corpos-de-prova foram submetidos ao teste de carga para fratura utilizando uma máquina de ensaios universal (EMIC - DL1000MF) com célula de carga de 1000 kgf a uma velocidade de 1.0 mm/min. Diferentes tipos de fratura foram obtidos e então classificados em cinco padrões: 1 (envolvendo o sulco central), 2 (envolvendo cúspides disto-lingual e disto-vestibular), 3 (envolvendo a cúspide disto-lingual), 4 (envolvendo sulco central e sulco lingual) e 5 (fratura em diversas partes). As médias e valores de carga para fratura, dados em Newton (N), foram analisados estatisticamente por meio dos testes ANOVA e Tukey (5%). O teste ANOVA dois fatores mostrou diferença estatisticamente significante para os fatores testados e o efeito interação (p < 0.05). As médias, desvios-padrões e resultados do teste de Tukey foram os seguintes: R/J- 2007.0 N ±... / Abstract: This study assessed the influence of different cuspal patterns of total restorations provided by the database CEREC CAD/CAM system (Young, Asian and Adult shape) on load-to-fracture of two restorative materials (resin or ceramic). Sixty anatomic total crown preparations in G10 (customized Dentin Substitute) were scanned with CEREC and divided in three groups according to the occlusal pattern from CEREC database with different cusp heights: Young (Y), Asian (As) and Adult (Ad). Each occlusal pattern was machined with two different types of materials: one with a low-elastic modulus (6 ± 0.5GPa) CAD-Waxx resin (R) and another with a high-elastic modulus (63 ± 0.5GPa) VITA Mark II ceramic (C). The G10 specimens were embedded in polyurethane and artificial alveoli were simulated using a polyether. All crowns were cemented with resinous dualcure cement and stored in distilled water for 24 h. The specimens were load to fracture using a universal testing machine (EMIC- DL1000MF) with a load-cell of 1000 kgf at a crosshead speed of 1.0 mm/min. The fracture type was classified in five patterns: 1 (involving the central sulcus), 2 (involving distal-lingual and distal-buccal cusps), 3 (involving the lingual cusp), 4 (involving the central and lingual sulcus), and 5 (crown fractured in several parts). Load fracture means were analyzed with ANOVA and tukey's tests(5%). ANOVA two-way showed significant differences for the tested factors and for their interaction (p < 0.05). The means ± SD and results of tukey's test were: R/Y- 2007.0 ± 345.0a, R/As 742.6 ± 142.0b, R/Ad 1139.0 ± 132.0c, C/Y- 454.2 ± 77.5d, C/As 590.9 ± 94.3b, C/Ad 1149,4 ± 201.0c (different letters mean significant differences). The Adult pattern showed predominantly type 1 fractures for CAD-Waxx and type 5 for VITA Mark II. For the Asian pattern, type 3 was predominant for both materials. For the Young pattern, similar percentage for type 1 and 2 for CAD-Waxx, While for VITA..... / Mestre
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Correlação das proteínas do plasma seminal com a congelabilidade do sêmen de cãesCamargo, Laíza Sartori de January 2017 (has links)
Orientador: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: Os objetivos deste estudo foram validar a sonda fluorescente (MitoStatus Red) para análise de potencial mitocondrial em espermatozoide de cães por citometria de fluxo, associada a análise de integridade de membrana plasmática e do acrossomo (experimento I). Além disso, foi conduzida análise proteômica (abordagem shotgun) do plasma seminal de cães, sua correlação com a congelabilidade do sêmen e capacidade de ligação das células espermáticas em membrana perivitelina da gema de ovo (TL) (experimento II). No experimento I foram utilizado 10 ejaculados, com motilidade espermática >75% e as concentrações de 20 nM, 50 nM, 100 nM e 200 nM da sonda MitoStatus Red foram comparadas na citometria de fluxo. Concluiu-se que 20 nM foi a concentração ideal, sem danos as estruturas celulares. No experimento II foram utilizados 10 animais, 2 ejaculados/animal (n = 20). Os ejaculados foram avaliados por cinética espermática, citometria de fluxo (potencial mitocondrial, integridade de membrana plasmática e de acrossomo) e TL. A análise proteômica do plasma seminal foi avaliada por espectrometria de massas. Os ejaculados foram divididos em 3 clusters (cluster Low, cluster Medium, cluster Hight) de acordo com os parâmetros espermáticos pré e pós-descongelação. Os grupos foram correlacionados com as proteínas encontradas no plasma seminal. Concluiu-se que existe relação entre presença ou ausência de proteínas do plasma seminal de acordo com a qualidade espermática. / Mestre
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Efeito da luz visível associada à ftalocianina de cloro-alumínio na inativação da Leishmania infantum chagasi em sangue de cão / Effects of visible light associated with chloro-aluminium phthalocyanine on the inactivation of Leishmania infantum chagasi in dog bloodBeck, Cristiane [UNESP] 03 June 2016 (has links)
Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-28T00:42:01Z
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Previous issue date: 2016-06-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral é uma doença infecciosa, de caráter zoonótico, emergente e de notificação obrigatória. No Brasil tem como agente o protozoário Leishmania infantum chagasi, e o principal reservatório é o cão (Canis familiaris). A transfusão sanguínea é muito utilizada na rotina da clínica, entretanto está associada a transmissão de doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio na inativação da Leishmania infantum chagasi em sangue canino, quando inoculados em hamsters (Mesocricetus auratus). Foram preparados 3 grupos experimentais compostos por 6 hamsters cada. O grupo controle recebeu sangue negativo para Leishmania, o grupo doença foi inoculado com sangue parasitado com Leishmania infantum chagasi e o grupo tratamento recebeu sangue parasitado tratado com luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio. Os animais foram monitorados por 180 dias e então submetidos a avaliação clínica. Em seguida os animais foram anestesiados para a coleta de sangue por meio de punção intracardíaca e procedendo-se assim a eutanásia. O sangue foi colocado em microtubos e o soro separado por centrifugação e acondicionado a -30ºC, até a realização do teste de aglutinação direta. Após procedeu-se a coleta do fígado e baço para a realização da histopatologia. Outra parte destes órgãos e a medula óssea foram acondicionados em tubos livres de DNAse e RNAse, congelados a -30ºC até a realização da PCR e qPCR. Impressões do fígado e baço foram feitas em lâminas para a microscopia para verificar a presença das formas amastigotas do parasita. Após 180 dias os animais não apresentaram sinais clínicos e os exames sorológicos e parasitológicos foram negativos. Quanto ao exame macroscópico, alguns animais apresentaram hepato e esplenomegalia, já na análise histopatológica nenhum tecido analisado demonstrou formas amastigotas do parasita. Na avaliação da PCR o baço e a medula óssea de todos os hamsters, dos grupos doença e tratado, apresentaram amplificação da Leishmania infantum chagasi. Na qPCR ocorreu uma significativa diminuição (P<0,01) na parasitemia quando comparado ao grupo tratado com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio, com o grupo que recebeu sangue parasitado sem tratamento. Com esses resultados é possível concluir que a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio reduz a parasitemia da Leishmania infantum chagasi em sangue canino. / Visceral Leishmaniasis is an emerging zoonotic infectious disease that requires mandatory reporting. In Brazil, it is caused by the protozoan Leishmania infantum chagasi, with dogs as main reservoir (Canis familiaris). Blood transfusion is frequently used in clinical routine, however it is associated with the transmission of infectious diseases. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with visible light associated with chloro-aluminium phthalocyanine on the inactivation of Leishmania infantum chagasi in canine blood, when inoculated in hamsters (Mesocricetus auratus). Three experimental groups consisted of six hamsters each. The control group received blood negative for L. infantum chagasi, the diseased group was inoculated with blood infected with L. infantum chagasi, and the treatment group received infected blood previously subjected to therapy with visible light associated with chloroaluminium phthalocyanine. The animals were observed for 180 days and then subjected to clinical evaluation. Then the animals were anesthetized for blood collection through intracardiac puncture and were euthanized. The blood was placed into microtubes and the serum was separated by centrifugation and stored at -30 ° C until the direct agglutination test was performed. After, liver and spleen collection was performed to histopathological examination. Another part of these organs and bone marrow were placed in tubes DNase and RNase free, and frozen at -30°C until the PCR and qPCR were performed. Imprints of liver and spleen were performed on slides for microscopy to verify the presence of amastigotes of the parasites. After 180 days the animals showed no clinical signs and serologic and parasitological tests were negative. During pathological examination, some animals showed hepatomegaly and splenomegaly; under microscopic analysis, any tissue showed amastigote forms of the parasite. In the PCR evaluation of spleen and bone marrow, all hamsters from diseased and treated groups showed amplification of Leishmania infantum chagasi. Results from q-PCR revealed a significant decrease (P <0.01) in the number of parasites in the group inoculated with blood subjected to chloro-aluminium photodynamic therapy, compared to the group inoculated with parasitized blood that had not been subjected to photodynamic therapy. With these results it is possible to conclude that visible light associated with chlorine-aluminum phthalocyanine reduces parasitaemia of Leishmania infantum chagasi in canine blood. / FAPESP: 2014/03353-4
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Avaliação ultrassonográfica de tumores mamários e linfonodos locorregionais em cadelas / Breast tumor and locoregional lymph nodes sonographic evaluation in bitchesSimm, Rejane Guerra Ribeiro [UNESP] 28 July 2016 (has links)
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DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo:
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Agradecemos a compreensão.
on 2016-08-29T17:26:20Z (GMT) / Submitted by REJANE GUERRA RIBEIRO null (rejane.guerra.vet@hotmail.com) on 2016-08-29T21:20:42Z
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Previous issue date: 2016-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás (FAPEG) / As cadelas, assim como as mulheres, apresentam uma elevada incidência de neoplasia mamária, por isso a incessante busca de diagnóstico mais precoce. A avaliação dos linfonodos locorregionais devem fazer parte do estadiamento clínico das cadelas com neoplasia mamária. Como o exame ultrassonográfico é uma importante técnica de avaliação tecidual, o objetivo deste trabalho é padronizar a técnica de varredura do linfonodo axilar em cadelas, e assim auxiliar o ultrassonografista a identificá-lo com maior facilidade para posteriores avaliações do parênquima. Usando transdutor linear em frequência de 12MHz e ganho de 58%, foram avaliados 30 linfonodos axilares (direito e esquerdo) de 16 cadelas hígidas, peso corporal, médio de 12,8Kg. Em apenas um animal não foi possível visibilizar o linfonodo axilar, pois a presença de gordura em excesso impediu sua visibilização. Todos os linfonodos apresentaram características normais: formato ovalado, contorno regular, hipoecogênico e vascularização hilar. Concluiu-se que o exame ultrassonográfico do linfonodo axilar deva fazer parte do estadiamento de cadelas com tumor de mama, pois é um exame exequível quando se tem conhecimento anatômico da região explorada. Após este estudo prévio, foram selecionadas 30 cadelas com tumores de mama, que foram submetidas a avaliação ultrassonográfica dos linfonodos axilares e inguinais, a fim de classificá-los em metastático ou não metastático. As características ultrassonográficas dos tumores mamários também foram descritas, visando diferenciar os critérios ecográficos relacionadas com o comportamento benigno e maligno destes tumores. Concluiu-se que a avaliação ultrassonográfica não permitiu predizer a malignidade dos tumores mamários (p=0,99) e nem a presença de metástase (p>0,5) e reatividade (p>0,5) em linfonodos locorregionais. / The dogs, as well as women, have a high incidence of breast cancer, so the constant search for earlier diagnosis. The evaluation of locoregional lymph nodes should be part of the clinical staging of bitches with mammary neoplasia. As the ultrasound examination is an important tissue valuation technique, the goal of this work is to standardize the scanning technique of axillary lymph node in dogs, and so help the sonographer to identify it more easily for further assessment of the parenchyma. Using linear transducer frequency of 12MHz and gain 58% were evaluated 30 axillary lymph nodes (right and left) of 16 otherwise healthy dogs, body weight, average 12,8Kg. In only one animal was not possible to visualize the axillary lymph nodes, because the presence of excess fat prevented their visualization. All lymph nodes were normal characteristics: oval shape, regular contour, hypoechoic and hilar vascularization. It was concluded that the sonographic examination of axillary lymph node should be part of the staging of bitches with breast tumor, it is a workable test when it has anatomical knowledge of the explored region. After this preliminary study, we selected 30 dogs with breast tumors, who underwent sonographic evaluation of the axillary and inguinal lymph nodes in order to classify them in metastatic or nonmetastatic. The ultrasonographic features of breast tumors have also been described, aiming to differentiate the sonographic criteria related to benign and malignant behavior of these tumors. It was concluded that the sonographic evaluation not possible to predict the malignancy of breast tumors (p = 0.99) nor the presence of metastasis (p> 0.5) and reactivity (p> 0.5) in locoregional lymph nodes.
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Avaliação epigenética dos genes NKX3.1 E CDH1 e expressão do C-MYC, NKX3.1 e E-Caderina por imuno-histoquímica em microarranjo de tecido (TMA) de lesões pré-neoplásicas e neoplásicas na próstata de cãesAlves, Carlos Eduardo Fonseca. January 2016 (has links)
Orientador: Renée Laufer Amorim / Resumo: A próstata canina é um bom modelo para estudos comparados entre o cão e o homem, uma vez que essas duas espécies desenvolvem espontaneamente carcinoma de próstata (CP). Para melhor caracterização do CP canino, a presente pesquisa foi dividia em quatro capítulos que avaliam diferentes aspectos dos CPs em cães. A atrofia inflamatória proliferativa (PIA) é uma lesão pré-neoplásica descritas em humanos e pouco estuda em cães. Nós caracterizamos essa lesão em cães e identificamos uma forte relação entre a localização topográfica da PIA com os CPs. Além disso, foi identificada a perda de expressão gênica e proteica de PTEN e AR na PIA. Esses fatores associados corroboram com o potencial pré-neoplásico desta lesão em cães. Um achado interessante foi a alta expressão de P63 na PIA e em um grupo de CP caninos. Para melhor caracterizar este grupo, foi avaliada a expressão imuno-histoquímica de diferentes citoqueratinas e outras proteínas relacionadas ao desenvolvimento do CP em humanos. Os carcinomas que apresentam expressão de P63 apresentaram padrões morfológicos com escore de Gleason alto e um fenótipo mais agressivo quando comparado à tumores que não apresentação expressão de P63. Posteriormente, a expressão gênica e proteica de E-caderina, NKX3.1 e C-MYC foi avaliada em CP como marcadores nas diferentes lesões. Além disso, nós avaliamos a metilação como mecanismo regulatórios dos genes CDH1 e NKX3.1. Foi possível identificar a perda de E-caderina e NKX3.1 nos tumores, comparado à ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The canine prostate gland can be used as a model to human prostatic disease since dogs and men are the only species that spontaneously develop prostate carcinoma (PC). To better characterize the canine PC, this research was divided into four chapters that evaluated different aspects of the PC in dogs. The proliferative inflammatory atrophy (PIA) is a pre-neoplastic lesion described in humans and few studies in dogs describe it as a preneoplastic lesion. This study characterized PIA in dogs and identified a strong relationship between the PIA topography with PC. In addition, we identified the loss of PTEN and AR expression in PIA. These findings demonstrated the potential of PIA as a preneoplastic lesion in dogs. An interesting finding in this research was the high expression of P63 in PIA and a group of PC. This study found a group of PC showing P63 positive expression in neoplastic epithelial cells. Thus, these tumors were selected to better characterize them using immunohistochemistry. These tumors had an aggressive phenotype and presented high expression of AKT and C-MYC and loss of NKX3.1. Further, we selected a usual group of PC and evaluate the expression of E-cadherin, NKX3.1 and C-MYC. In addition, we evaluated the methylation as a regulatory mechanism of CDH1 and NKX3.1 genes. We have identified loss of E-cadherin and NKX3.1 in PC compared to normal prostate and C-MYC overexpression. The expression of E-cadherin was related to overall survival and Gleason score. The ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Influência da tecnologia de impressão 3D (biomodelos) no planejamento clínico terapêutico de pacientes portadores de caninos inclusosViana, Tanisa Carla Toscano 25 January 2017 (has links)
Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2017-03-22T14:01:49Z
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PDF - Tanisa Carla Toscano Viana.pdf: 12346895 bytes, checksum: fe10348e684cc31cbfbc93ec862d8fda (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T15:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2017-01-25 / Several factors may hinder the correct eruption of the canines, leading to impaction, however, due to their importance, there is a great interest in carrying out their traction, however, inaccurate diagnosis and treatment plans based on 2D images have been responsible for failures reported in the literature . This work investigated the influence of the biomodel in the clinical planning of canines included, through two questionnaires answered by orthodontists, the first one after evaluating a clinical case of included canines through radiographic examinations and the other after analyzing the same clinical case through the biomodel image 3D. The study included orthodontists registered in the CRO-PB, 75% female, 51.7% aged 40 years or less, with a dental degree of 15 years or less (53.4%) and time Postgraduate course of 8 years or less (57.6%). 98.3% answered that the presented biomodel helped to clarify the case better, 96.7% answered that the biomodel brings more safety in the indication of treatment, we did not find statistically significant differences between the two situations regarding the degree of difficulty of the case, in Significant differences were observed between the prognosis of the presented case when comparing the responses of the participants without and with the use of biomodels, regarding the treatment option there were no significant changes when presenting the biomodel, however this change is observed when the question is asked about the Direction of traction. It was concluded that the biomodel provided a better clarification of the case and more safety at the time of indicating the treatment plan, as well as may influence the prognosis and initial direction in the cases of traction, however there were no significant changes in the type of treatment indicated to the case Nor in the degree of difficulty. / Diversos fatores podem dificultar a correta erupção dos caninos, levando a impacção, porém, devido à sua importância, há um grande interesse em realizar o seu tracionamento, contudo diagnósticos e planos de tratamento imprecisos baseados em imagens 2D têm sido responsáveis por insucessos relatados na literatura. Diante desse contexto este trabalho teve por objetivo investigar a influência da tecnologia de impressão 3D (biomodelo), imagem 3D no planejamento clínico de caninos inclusos. A amostra foi composta por ortodontistas inscritos no CRO-PB que responderam a dois questionários, sendo o primeiro respondido após avaliar um caso clinico de caninos inclusos através de exames radiográficos e o segundo após analisar o mesmo caso clínico apenas com o biomodelo. O estudo mostrou que o biomodelo influenciou positivamente mudando o prognóstico e plano de tratamento, sendo que 98,3% dos participantes da pesquisa afirmaram que o biomodelo ajudou a esclarecer melhor o caso e 96,7% disseram que o biomodelo trouxe mais segurança na indicação do plano de tratamento.
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Isolamento, quantificação e caracterização morfológica de células mesenquimais de sangue do cordão umbilical canino / Isolation, quantification and morphologic characterization of mesenchymal cells from canine umbilical cord bloodJuliana Jarra Ozorio 11 July 2008 (has links)
Esse projeto tem como objetivo estabelecer técnicas de cultivo, isolamento, expansão e quantificação de células mesenquimais e hematopoéticas de sangue de cordão umbilical (SCU) de cães de raças variadas para aplicação em terapias celulares. Atualmente, vários tipos de células-tronco têm sido estudados devido a sua capacidade de diferenciação em diversos tecidos (HERZOG et al., 2003). O isolamento, quantificação e expansão dessas células permitem que a terapia celular seja utilizada na tentativa de tratamento em patologias (BARKER et al., 2003). Entre as fontes de células-tronco adultas (medula óssea, sangue periférico, tecido subcutâneo) mais precisamente as células progenitoras mesenquimais está o sangue de cordão umbilical. Sua principal função é o transporte de nutrientes e preencher as crescentes demandas de oxigênio da mãe para o feto (ALMEIDA et al., 2000). Neste estudo foi utilizado o sangue do cordão umbilical de cães ao nascimento, de 11 cadelas gestantes pesando entre 15 e 35 Kg. As células mesenquimais foram isoladas através da separação por gradiente de densidade com o reagente FICOLL, posteriormente o sangue foi diluído em PBS e centrifugado. O pellet contendo células foi retirado e essas então acondicionadas em meio DMEM contendo 10% de soro fetal bovino e antibiótico, homogeneizadas e contadas através da câmara de Newbauer. As células foram então plaqueadas de acordo com o ensaio que seriam submetidas. Através do ensaio de CFU-F pudemos observar uma população de células aderentes isoladas da porção mononuclear do sangue de cordão umbilical que apresentou-se altamente heterogênea. Foram identificados, pelo menos, quatro tipos morfológicos distintos: células epitelióides grandes e pequenas; células de aspecto fusiforme; e células de aspecto estrelado e quando em confluência, as células apresentaram padrão de crescimento similar ao de miofibroblastos, normalmente observado em culturas de músculo liso e de estroma da medula óssea hematopoética. Na maioria das análises as colônias se apresentaram em número desejável, havendo uma variação de baixo a alto. Esse ensaio apresentou grande eficácia no isolamento, quantificação e caracterização morfológica das células mesenquimais obtidas a partir do sangue de cordão umbilical canino. / This project has as objective established cultivation techniques, isolation, expansion and quantification of mesenchymal cells from umbilical cord blood (UCB) of dogs of varied breeds for application in cellular therapies. Nowadays, several cell-trunk types have been studied due to his/her differentiation capacity in several woven (HERZOG et al., 2003). The isolation, quantification and expansion of those cells allow the cellular therapy to be used in the treatment attempt in pathologies (BARKER et al., 2003). Among the adult cell-trunk sources (bone marrow, peripheral blood, subcutaneous tissue) more precisely the progenitors mesenchymal cells are the umbilical cord blood. Her main function is the transport of nutrients and to fill out the crescents demands of the mother\'s oxygen for the fetus (ALMEIDA et al., 2000). In this study, the blood was used from the umbilical cord of dogs to the birth, of 11 pregnant female dogs weighing between 15 and 35 Kg, the mesenchymal cells were isolated through the separation for density gradient with the reagent FICOLL, later the blood was diluted in PBS and centrifuged according to protocol, the pellet containing cells was removed and those then conditioned in half DMEM containing 10% of bovine fetal serum and antibiotic, homogenized and counted through the camera of Newbauer. They were plated then in agreement with the rehearsal that they would be submitted. Through the rehearsal of CFU-F (Colony Forming Unit - Fibroblast) we could observe a population of isolated adherent cells of the mononuclear population of the umbilical cord blood that came highly heterogeneous. They were identified, at least, four different morphologies: big and small epithelial cells; aspect fusiforme; and cells of starry aspect and when in confluence, the cells presented pattern of similar growth to the of miofibroblastos, usually observed in cultures of flat muscle and of stromal of the hematopoietic bone marrow. In most of the analyses the colonies came in desirable number, having a variation of low the high. That rehearsal presented great effectiveness in the isolation, quantification and morphologic characterization of the mesenchymal cells obtained starting from the umbilical cord blood of canine.
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Alterações do tubo digestório de cães da raça Golden Retriever afetados pela distrofia muscular / Alterations of digestory tube in the Golden Retriever dogs affecteds by muscular dystrophyAlida Abatemarco Catelli 28 August 2006 (has links)
O modelo experimental canino Golden Retriever portador da Distrofia Muscular (GRMD) é o melhor substituto entre os modelos animais para estudar a Distrofia Muscular de Duchenne. Os principais sinais clínicos observados no cão afetado são disfagia, hipertrofia da língua, emagrecimento progressivo, fraqueza muscular, desvio de eixo dos membros e contraturas. A doença é determinada pela ausência da distrofina, uma proteína da membrana muscular, que tem papel vital na manutenção da estrutura e função da célula muscular. A GRMD não afeta apenas a musculatura estriada esquelética, podendo afetar inclusive o funcionamento do trato digestório, já que o músculo liso é o elemento primário dos órgãos tubulares. Objetivou-se neste trabalho, através do estudo morfológico, verificar se a distrofia muscular afeta a arquitetura geral do trato digestório e como está disposta sua estrutura muscular. Foram realizadas avaliações descritivas macroscópicas e microscópicas ópticas com colorações de Hematoxilina-Eosina, Tricrômio de Masson e Picrosirius. Em conjunto, nove cães GRMD afetados foram submetidos à avaliação da implantação de um novo manejo alimentar, num período de um ano, direcionado à correção dos problemas envolvidos na disfagia do cão distrófico. O esôfago e o estômago apresentaram-se como as porções mais afetadas do tubo digestório. Suas fibras musculares apresentavam-se com diâmetros variados e estavam entremeadas com abundante deposição de tecido conjuntivo, fibroblastos e infiltrado mononuclear com distribuição intersticial. O esôfago apresentou alterações muito severas, refletindo na sua funcionalidade, e levando ao megaesôfago secundário, devido à constituição por músculo estriado em toda a totalidade. O intestino não apresentou alterações histopatológicas significativas. Observou-se diferença de severidade entre lesões que ocorrem na musculatura estriada e na musculatura lisa, que pode ser devido à distribuição distinta do complexo distrofina-glicoproteína existentes nesses dois tipos de musculaturas. Desta forma, a ausência da proteína distrofina tende a ser menos crítica para a função muscular lisa no intestino, tal como é para o músculo esquelético. A musculatura lisa do estômago apresentava-se mais afetada que a do intestino, podendo ser explicado pelo fato do primeiro sofrer maiores ciclos de contrações e distenções, o que pode resultar em aumento de área de colágeno no tecido muscular e conseqüente perda de sua arquitetura. No cão afetado GRMD, a apreensão é uma fase crítica. Houve significativas respostas na implantação do novo manejo alimentar, quando aquela etapa foi substituída por auxílio humano. Assim a regurgitação mecânica tendeu a zero e pareceu diminuir o gasto energético excessivo. O modo como foram oferecidos o alimento e água preveniu o aparecimento de pneumonias por aspiração. A quantidade de água adicionada ao alimento seco foi suficiente para manter os animais hidratados. O manejo atual determinou manutenção dos pesos, ausência de desidratação clínica e ausência de óbitos, sendo assim indicado como manejo base a ser aplicado para a disfagia e megaesôfago adquirido secundário a distrofia muscular. Conclui-se que o manejo adequadamente direcionado torna-se especialmente importante para prevenir complicações e reflete em manutenção de equilíbrio e fortalecimento do sistema imune, e conseqüentemente, suporte perante a doença, proporcionando uma sobrevida com qualidade / The experimental dog model Golden Retriever affected by muscular dystrophy (GRMD) is the most appropriate substitute among animal models to study Duchenne Muscular Dystrophy. The main clinical signs observed in affected dogs are dysfagy, tongue hypertrophy, progressive weight loss, weakness, splaying of the limbs and contractures. The disease is due to the absence of dystrophin, a transmembrane muscle protein, which has a vital role on the maintence of structure and function of the muscle cell. GRMD doesn?t affect only skeletal muscle, also acted including in the digestory tract function, since the smooth muscle corresponds to0 the primary component of the digestive tube. The aim of this study was to evaluate, through of morphologic studies, if the muscular dystrophy affects the general architecture of digestory tract and how is arranged its muscular structure. There were evaluated the tubular viscera of GRMD affected dogs, through gross and light microscopic description, stained with Hematoxilin and Eosin, Masson trichrome and Picrossirus technique. Jointly, nine GRMD affected dogs were submitted on evaluation of the establishment of a new alimentary management, during a year, directed to the correction of problems involved on the dysphagy of dystrophic dog. The esophagus and the stomach presented the most affected portions. Muscle fibers presents varied diameter and were intermixed with abundant connective tissue, fibroblast and mononuclear infiltrate. The esophagus presents severe alterations, reflecting on its functionability, and leading to secondary megaesophagus, due to total constitution of striated muscle. The gut doesn?t presented significative histopathologic alterations. There was observed difference of severity between lesions that occurs on the striated muscle and the smooth muscle, and this fact could be due to the distinct distribution of the dystrophin-glycoprotein complex that occurs in these types of muscles. In this way, the absence of dystrophin was inclined to be less critical to the function of the intestine smooth muscle than of the skeletal striated muscle. The stomach smooth muscle presented more affected than the intestine smooth muscle, being explained to the fact of the first to suffer more contraction and distention cycles, which results in increase of collagen area on the muscle tissue and consequently, loss of its architecture. On the GRMD affected dog, the apprehension is a critical phase. There were significative answers on new management, since those phases was substituted by human relief. The mechanic regurgitation was inclined to zero and seems to decrease the excessive energetic caloric burned. The way which was offered the food and water warned the occurrences of aspiration pneumonia. The amount of water added to dry food was enough to hidric maintenance. The present management determined weight maintenance, absence of clinic dehydration and absence of death, being indicated as basal management to be applied on the dysphagy and secondary megaesophagus acquired in the muscular dystrophy. Concluding, the management adequately directed became especially important to warn complications and reflects on maintenance of the balance and strength of immune system, consequently, support in front of the disease, given then life with quality
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Efeito da terapia com células tronco mesenquimais na proteinúria de cães com doença renal crônica / Effect of mesenchymal stem cell therapy on the proteinuria of dogs with chronic kidney diseaseDouglas Segalla Caragelasco 19 December 2017 (has links)
A proteinúria de origem renal é um indicador de lesão e atua na progressão da doença renal crônica em cães. Na rotina clínica, várias são as recomendações em relação à terapia de manutenção, que visam minimizar ou retardar a progressão da doença. Com o recente progresso na pesquisa sobre a terapia com as células tronco mesenquimais (CTM), tem-se discutido sobre a possibilidade de minimização dos mecanismos inflamatórios e imunológicos de autoperpetuação da lesão renal com a sua utilização, assim a análise sequencial das proteínas urinárias por métodos qualitativos, tais como a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a imunodetecção das proteínas por Western Blot pode trazer subsídios para esta avaliação. Portanto, como hipótese, suscita-se que a administração de CTM em cães com DRC possa trazer benefícios com o intuito de minimizar o desenvolvimento da proteinúria, contribuindo para o retardo na velocidade de progressão da doença renal. Trata-se de um estudo prospectivo, longitudinal e duplo-cego em que foram avaliados 22 cães com DRC, tratados com solução fisiológica (SF) ou CTM e avaliados a cada 30 a 45 dias em 12 momentos, divididos em grupos de acordo com o estágio da doença, grupo A (estágio 2, SF:n=6, CTM:n=3) e grupo B (estágio 3, SF:n=6, CTM:n=7). Observou-se que os cães do Grupo B apresentaram proteinúria mais intensa, maior porcentagem de proteínas de alto peso molecular, maior imunodetecção de albumina, proteínas ligadas ao retinol e a vitamina D e menor imunodetecção de proteína de Tamm-Horsfall ao longo do acompanhamento, quando comparado ao Grupo A. Os resultados obtidos nesse estudo não permitiram definir conclusões contundentes de que a terapia com a CTM tenha trazido alterações importantes que indicassem o seu benefício. Os dados sugerem que os cães nos estágios iniciais da DRC (estágio 2) poderiam ser os mais favorecidos com a referida terapia, entretanto mais estudos contemplando um número maior de animais, como o maior tempo de acompanhamento devem ser conduzidos para tal investigação. / Protein of renal origin is an indicator of injury and acts on the progression of chronic kidney disease in dogs. In the clinical routine, several recommendations regarding maintenance therapy are aimed at minimizing or delaying the progression of the disease. With the recent progress in the research on mesenchymal stem cell therapy (CTM), it has been discussed the possibility of minimizing the inflammatory and immunological mechanisms of self-perpetuation of the renal lesion with its use, thus the sequential analysis of the urinary proteins by qualitative methods such as polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and the immunodetection of proteins by Western blot can prove the efficacy of the therapy. Therefore, as hypothesis, it is suggested that the administration of CTM in dogs with CKD can fetch benefits in order to minimize the development of proteinuria, contributing to the delay in the rate of progression of renal disease. This is a prospective, longitudinal, double-blind study in which 22 dogs with CKD were treated with physiological solution (SF) or CTM and evaluated every 30 to 45 days in 12 moments divided into groups according to (stage 2, SF: n = 6, CTM: n = 3) and group B (stage 3, SF: n = 6, CTM: n = 7). Group B dogs were found to have more intense proteinuria, a higher percentage of high molecular weight proteins, greater albumin immunodetection as well as retinol-binding protein and vitamin D-binding protein, and decreased Tamm-Horsfall protein immunodetection throughout follow-up, when compared to Group A. The results obtained in this study did not allow to draw conclusive conclusions that CTM therapy brought important changes that indicated its benefit. The data suggest that dogs in the early stages of CKD (stage 2) could be the most favored with such therapy, however more studies contemplating a larger number of animals, such as longer follow-up, should be conducted for such investigation.
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