Micoplasmas e ureaplasmas têm sido isolados de pequenos ruminantes, mas existem poucos estudos. O Mycoplasma ovine/caprine sorotipo 11, conhecido como cepa 2D, ainda não classificado como espécie, vem sendo relacionado a casos de vulvovaginite e problemas reprodutivos em ovinos e caprinos. Os ureaplasmas apresentam a habilidade em induzirem doenças no trato genital, confirmada por inoculações experimentais de isolados obtidos de animais doentes em animais saudáveis, resultando em moderada granularidade e hiperemia na vulva. Estes ureaplasmas não receberam ainda a designação de espécie, sendo apenas conhecidas suas características sorológicas, nas quais é fundamentada a classificação em nove sorotipos, sendo o IX relacionado a infertilidade e aborto em ovelhas. Este trabalho teve como objetivo o isolamento de micoplasmas e ureaplasmas do trato reprodutivo de fêmeas e machos das espécies caprina e ovina e tipificação genotípica dos isolados por meio de PFGE e sequenciamento do gene 16S rRNA. Foram obtidos 20 isolamentos de ureaplasma no trato reprodutivo de fêmeas e machos da espécie ovina, um isolamento de micoplasma e sete com crescimento misto de micoplasma e ureaplasma. Nas fêmeas da espécie caprina foram obtidos cinco isolamentos, sendo quatro de ureaplasma e um de micoplasma. Dos isolados submetidos a PFGE , 11 de origem ovina resultaram em oito diferentes perfis confirmando a capacidade da técnica em tipificar ureaplasma de origem ovina. O sequenciamento do gene 16S rRNA, analisado pelo UPGMA, permitiu agrupar seis isolados ao Ureaplasma diversum ATCC 49782, e quatro não foram agrupados com nenhuma outra espécies de ureaplasma, quando utilizado o ponto de corte 97%. Em nosso estudo, os isolados de ovino e caprino agrupados às referências de U. diversum não permite concluir que sejam da mesma espécie. A utilização do gene 16S rRNA gera grande quantidade de informações úteis para inferências filogenéticas e pode ser a primeira escolha na investigação de novas espécies. Técnicas filogenéticas como sequenciamento do espaço intergênico 16S-23S rRNA, e gene da urease podem auxiliaram futuramente na classificação dos isolados obtidos de ovino e caprino. / Mycoplasmas and or ureaplasmas have been isolated from small ruminants but are few studied. Mycoplasma ovine/caprine serotype 11, known as 2D strain, has not been classified yet as specie. However, it has been associated to vulvovaginitis and reproductive disorder in caprine and ovine. Ureaplasmas may cause genital tract diseases. Experimental infections with isolates recovered from sick animals resulted in granularity and hyperemia of the vulva. These have not been designated as specie but are divide in nine serological characteristics types. The serotype IX is associated to infertility and abortion in sheep. The present study aims the isolation of mycoplasmas and ureaplasmas from reproductive tract of ovine and caprine, genotyping of isolates by PFGE, and sequencing of their 16S rRNA. Ureaplasma isolates were recovered from the reproductive tract of 20 ovine, being them, male and female. Mycoplasma was isolated alone in one sample. A mixture of mycoplasma and ureaplasma was obtained in seven samples. On the material obtained from female caprine, five isolations were performed. Four of them were ureaplasma and one was a mycoplasma. Eleven isolates from ovine showed eight distinct profiles at PFGE, confirm that the method can typify ovine origin ureaplasmas. Six isolates were grouped to the Ureaplasma diversum ATCC 49782, through the sequencing of their 16S rRNA using the UPGMA. However, when using a 97% cutoff, four isolates could not be grouped to none of the ureaplasma specie. The isolates from ovine and caprine grouped to U. diversum, do not allow conclude that they are all the same specie. The use of 16S rRNA sequencing showed many useful information to phylogenetic inference, and can be the first choice for when investigating new species. Phylogenetic techniques, as sequencing of the intergenic space 16S-23S rRNA and urease gene, can be used to help the classification of new ureaplasma isolates from ovine and caprine.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-05-19T16:02:01Z No. of bitstreams: 1 Carlos Fernando Lapenda de Moura.pdf: 1499572 bytes, checksum: 147091032479327a533c2391b6d997a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T16:02:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Fernando Lapenda de Moura.pdf: 1499572 bytes, checksum: 147091032479327a533c2391b6d997a2 (MD5) Previous issue date: 2010-12-17 / This work has been written with the purpose to identify and analyze the impacts of the Milk Program from the state of Paraíba and the New Cariri Agreement on dairy goats farming in the city of Cabaceiras. In order to execute it, there were used theoretical references regarding the Local Productive Arrangement (APL) and Food Security Policy. Those references have been made to analyze public policy programs implemented in Cariri region: the New Cariri Agreement and the milk program from the state of Paraiba. The applied methodology was the quantitative, qualitative and exploratory method, due to the nature and the purpose of this research. The use of the empirical research has evaluated the production of goat milk and its producers characteristics, as well as the ASCOMCAB structure - (Association of Goats and Sheep Breeders from Cabaceiras, 2001 – 2010). The choice for this case study was made as a proceeding method for organizational research. It has occurred because ASCOMCAB is the plant that manages the milk produced in Cabaceiras and is located in the working area of the milk in Paraiba. Through the results obtained in this research It could be concluded that the consequences of the studied public policy implementation were positive, mainly by encouraging producers to invest in dairy production, getting access to new technologies, herd genetic improvement, ensuring the sale of production, improvement on production and profitability of the goat milk, improvement on technical support, industrialization of this branch through the implementation of milk processing plant and also through the access to banks financing. As a positive impact of this work it could be considered the performance of some institutions and actors involved in the APL of the dairy goat farming from Cabaceiras region, especially SEBRAE/PB, Banco do Brazil SA, EMATER, BNB, UFPB, SENAI and other institutions mentioned in this thesis. They’ve been listed for have being contributing to the socioeconomic situation improvement of Cabaceiras region and especially for social action aimed at feeding ensuring of needy children, pregnant women and elderly through the access to goat's milk of an excellent nutritional quality. / Este trabalho foi elaborado com o objetivo de identificar e analisar os impactos do Programa do Leite da Paraíba e do Pacto Novo Cariri sobre a caprinocultura leiteira do município de Cabaceiras. Para realizá-lo foram utilizados os referenciais teóricos relativos ao Arranjo Produtivo Local (APL) e Política de Segurança Alimentar para analisar os programas de políticas públicas implantados no Cariri paraibano: Pacto Novo Cariri e Programa do leite da Paraíba. A metodologia utilizada, em razão da natureza e dos objetivos da pesquisa, fora a modalidade quantitativa, qualitativa e exploratória. A pesquisa empírica avaliou a produção de leite de cabra, características dos produtores e a estrutura da ASCOMCAB – Associação dos Criadores de Caprinos e Ovinos do Município de Cabaceiras - entre os anos de 2001 e 2010. A escolha do estudo de caso, como método de procedimento para pesquisas organizacionais, ocorreu em razão de ser a ASCOMCAB que gerencia a usina beneficiadora do leite de cabra produzido em Cabaceiras, que se situa na área de atuação do Programa do Leite da Paraíba. Pelos resultados obtidos na pesquisa, concluiu-se que as consequências da implantação das políticas públicas estudadas foram positivas, principalmente pelo incentivo ao produtor em investir na produção leiteira, acesso a novas tecnologias, melhoramento genético do rebanho, garantia da venda da produção, lucratividade do leite, melhora da produção e da produtividade do leite de cabra, melhora da assistência técnica, industrialização do setor através da implantação da usina de beneficiamento de leite e acesso ao financiamento através de bancos. Também como impacto positivo se lista a atuação de instituições e atores que atuam no APL da caprinocultura leiteira de Cabaceiras e região,especialmente o SEBRAE/PB, Banco do Brasil S/A, EMATER, BNB, UFPB, SENAI e outras relacionadas nesta dissertação, pela contribuição para a melhora socioeconômica de Cabaceiras e região e, principalmente, pela ação social voltada para a segurança alimentar das crianças carentes, gestantes e idosos do município de Cabaceiras e região, através do acesso ao leite de cabra de excelente qualidade nutricional.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-21T14:31:04Z No. of bitstreams: 1 Emanuela Polimeni de Mesquita.pdf: 1210412 bytes, checksum: 02de6c8d7089277eeaf347ccef119edf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-21T14:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Emanuela Polimeni de Mesquita.pdf: 1210412 bytes, checksum: 02de6c8d7089277eeaf347ccef119edf (MD5) Previous issue date: 2014-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This paper aims to evaluate the embryo-fetal development in Moxotó breed animals by using fetal measurement in order to obtain more informations about measures and breed standards. Tests were performed every seven days during the first 60 days of pregnancy to evaluate embryonic vesicle, HR, head/torso differentiation, placentons, umbilical cord, CRL, BPD, TD and AD. After 60 days, the tests were carried out every 14 days, evaluating the following parameters: placentons, crown-rump length (CRL), biparietal diameter (BPD), thoracic diameter (TD), abdominal diameter (AD), vertebral column and femur length. In this study it was possible to correlate TD/placentons (r=0,94), BPD/CRL (r=0,97), TD/BPD, AD/TD, CRL/placentons, BPD/placentons and TD/CRL (r=0,99). The means and standard errors for nulliparous and primiparous females were also compared, as well as for single pregnancy and twin pregnancy animals, but no statistical difference was found. According to the findings, it is possible to state that there was a high correlation between crown-rump length (CRL), placentons, biparietal diameter (BPD), thoracic diameter (TD) and abdominal diameter (AD) during gestation. In addition, it is possible to state that the high correlation between placentons and gestational age allows for its use as a parameter for the determination of the fetal age in Moxoto breed goats, especially when it comes to animals at an advanced gestational age, when it is difficult to obtain images of fetal structures due to its size. / Pretendeu-se com o presente trabalho avaliar através da fetometria, o desenvolvimento embrionário/fetal em fêmeas da raça Moxotó, visando maiores informações acerca das mensurações e do padrão racial. Foram realizados exames a cada sete dias até os 60 dias de gestação, para avaliação de vesícula embrionária, FC (frequência cardíaca), diferenciação cabeça/tronco, placentônios, cordão umbilical, botões dos membros, CCC (comprimento crâniocaudal), DBP (diâmetro biparietal), DT (diâmetro torácico), DA (diâmetro abdominal) e, após os 60 dias os exames foram realizados com intervalos de 14 dias, sendo avaliados os parâmetros: placentônios, CCC, DBP, DT, DA e comprimento do fêmur (CF). Neste estudo, pôde-se correlacionar o DT/placentônios (r = 0,94), DA/placentônios (r = 0,91), DBP/CCC (r = 0,97), DT/DBP, DA/DT CCC/placentônios, DBP/placentônios e DT/CCC (r = 0,99). Foram ainda comparadas as médias e erros-padrão de fêmeas nulíparas e pluríparas, bem como fêmeas que tiveram gestações simples e gemelares, porém não houve diferença estatística entre elas. Diante dos achados pode-se afirmar houve alta correlação entre Comprimento craniocaudal (CCC), Placentônios, Diametro biparietal (DBP), Diâmetro torácico (DT) e Diâmetro abdominal (DA) no decorrer da gestação. E ainda assegurar que a alta correlação dos placentônios com a idade gestacional possibilita seu uso como parâmetro para a determinação da idade fetal em cabras da raça Moxotó, principalmente em se tratando de animais com gestação avançada, onde há dificuldade de se obter imagens de estruturas fetais devido ao tamanho deste.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-25T11:36:05Z No. of bitstreams: 1 Lucia Cristina Pereira Arruda.pdf: 816795 bytes, checksum: 9fa61d0ae8d88b3e46fe1ef1a41a264d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T11:36:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucia Cristina Pereira Arruda.pdf: 816795 bytes, checksum: 9fa61d0ae8d88b3e46fe1ef1a41a264d (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / With the aim of identify the best method to assess lipid peroxidation in goat and sheep sperm, semen samples were diluted in skimmed milk (Glycerol 7%) and Tris-egg yolk (Glycerol 5%) extenders, respectively, and frozen (-196 °C). After thawing (37°C/30s), samples were analyzed to lipid peroxidation by spectrophotometry and high performance liquid chromatography – DAD (TBARS method) and flow cytometry (C11-BODIPY581/591). It was observed that peroxidation levels obtained by spectrophotometry were significantly higher than those found by HPLC method. C11-BODIPY581/591 complemented the data obtained by TBARS (HLPC) method, helping to better understand the results and providing an overview of damaged caused to cells. In conclusion, the dosage method of TBARS by HPLC and C11-BODIPY581 are more appropriated to assess lipid peroxidation in goat and sheep sperm, and it can be used with success together or separated,. After determine the best method to assess plasma membrane lipid peroxidation of goat and sheep sperm cryopreserved with Trolox, semen samples were diluted in skimmed milk (goat) or tris-egg yolk (sheep) extenders, without antioxidants (control group) or with Trolox at 20 μM or 40 μM/mL. After thawing at 37oC for 30 seconds, samples were submitted to assessment of lipid peroxidation by high performance liquid chromatography (HPLC) and flow cytometry (C11-BODIPY581/591), as well as plasma membrane integrity, acrosomal integrity and sperm kinematics. Semen extenders and fresh semen samples were also assessed by HPLC. No significant difference (P>0.05) was observed among experimental groups of both species to sperm kinematics, plasma membrane and acrosomal integrity. Significant difference also was not observed (P>0.05) among treatment groups to lipid peroxidation reductionIn conclusion, the cryopreservation process did not trigger lipid peroxidation on goat and sheep sperm plasma membrane, independent of Trolox addiction (20 e 40 μM). / Objetivando identificar o melhor método para avaliar a peroxidação lipídica em espermatozoides de caprinos e ovinos, amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado (Glicerol 7%) e Tris-gema de ovo (Glicerol 5%), respectivamente, e congeladas (-196 °C). Após descongelação (37 °C/30s), as amostras foram submetidas à avaliação da peroxidação lipídica por espectrofotometria e cromatografia líquida de alta performance - DAD (método de TBARS) e citometria de fluxo (C11-BODIPY581/591). Observou-se que as concentrações de malonaldeído obtidas por espectrofotometria foram significativamente maiores que as encontradas pelo método de HPLC. O C11-BODIPY581/591 complementou os dados obtidos pelo método do TBARS (HPLC), auxiliando na melhor compreensão dos resultados, evidenciando danos ocorridos às células. Concluindo-se que o método de dosagem de TBARS pelo HPLC e C11-BODIPY581/591 são os mais indicados para avaliação da peroxidação lipídica em espermatozoides de caprinos e ovinos podendo ser utilizados com sucesso juntas ou isoladamente. Determinados os melhores métodos, avaliou-se a ocorrência de peroxidação lipídica da membrana plasmática de espermatozoides caprinos e ovinos criopreservados com diluidor suplementado com Trolox, onde amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado (caprino) ou tris-gema de ovo (ovinos), sem antioxidante (grupo controle) ou adicionadas de Trolox nas concentrações de 20μM ou 40 μM /mL (tratamentos). Após descongelação a 37 °C/30s, as amostras foram submetidas à avaliação da peroxidação lipídica por cromatografia líquida de alta performance (HPLC-DAD) e citometria de fluxo (C11-BODIPY581/591). Analisou-se ainda a integridade de membrana plasmática, acrossomal e cinética espermática. Amostras dos diluidores e do sêmen fresco foram também avaliadas por HPLC. Não foi constatada diferença significativa (P>0,05) entre os grupos experimentais de ambas as espécies para os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal. Também não foi observada diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos para redução da peroxidação lipídica. Conclui-se que o processo de criopreservação não desencadeia a peroxidação lipídica da membrana plasmática de espermatozoides caprinos e ovinos independente da adição de Trolox (20 e 40 μM).

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-27T16:58:27Z No. of bitstreams: 1 Adriana Trindade Soares.pdf: 1620169 bytes, checksum: d8db8fd6a1234a1aaa06487952e44c4f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-27T16:58:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana Trindade Soares.pdf: 1620169 bytes, checksum: d8db8fd6a1234a1aaa06487952e44c4f (MD5) Previous issue date: 2010-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objetive of this study was to verify the effect of different concentrations of Trolox and Glutathione (GSH) it was used sperm from five bucks, collected by artificial vagina with six replicates. After subjective analysis(wave moving, motility, vigor and sperm concentration) of each ejaculate, a pool of samples was performed and diluted (240 x 106 sperm/mL) in skimmed-milk plus glycerol 7% with antioxidants, according to the experiment: Exp. 1) G1= Control, G2= Trolox 30μM, G3= Trolox 60μM and G4=Trolox 120μM; Exp. 2) G1= Control, G2= GSH 2mM, G3= GSH 5mM and G4= GSH 7mM. Samples were packed in straws (0.25 mL), frozen and stored in Liquid Nitrogen (-196 oC). After thawing (37 oC/30 seconds), semen aliquots of each group were submitted to iPM, iAc, MMP, kinematic by CASA and ultrastructure analysis. In the Exp. 1 and 2, it was observed that iMP, iAc, PMM and kinematics parameters showed no significant difference (P>0.05) among groups. Exp. 1, in ultrastructural analysis, acrosome, plasma membrane on the tail region and axoneme integrity did not differ (P>0.05) among groups, but they were observed in lower (P<0.05) percentage than those of fresh samples. However, Trolox 60μM/mL and Trolox 120μM/mL groups had higher (P<0.05) percentage of sperms with intact plasma membrane on the head region than control and Trolox 30μM/mL groups, but they did not differ (P>0.05) of the fresh samples. Higher percentage (P<0.05) of sperms with intact mitochondrias wereobserved on fresh, control and Trolox 60μM/mL samples than those of Trolox 30μM/mL and 120μM/mL. Exp. 2, in ultrastructural analysis, it was observed that percentages of acrosome and plasma membrane (tail and head region) intacts did not differ (P>0.05)between Control and GSH (2, 5 and 7 mM/mL) groups, but they were lower (P<0.05) than in nature semen. However, semen samples of in nature and Control groups had higher percentage (P<0.05) of gametes with intact axonemes than those of GSH (2, 5 and 7 mM/mL) groups. Higher percentage (P<0.05) of sperms with intact mitochondrias were observed on Control group than those of GSH (5 and 7 mM/mL) groups, but it did not differed of in nature semen and GSH 2mM/mL. Based on ultrastructural analysis, it can be concluded that Trolox 60μM/mL can be used in skimmed-milk plus glycerol 7% diluent to preserve the integrity of sperm plasma membrane on the head region. However, the GSH (2, 5 and 7mM/mL) addition in skimmed-milk and glycerol 7% diluent to freezing goat semen did not preserve sperm integrity. / Objetivando-se avaliar in vitro o efeito da congelação de espermatozoides caprinos em diluente à base de leite desnatado acrescido de Trolox e Glutationa reduzida (GSH) em diferentes concentrações, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores, colhido com vagina artificial, em seis repetições. Após avaliação subjetiva (turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração espermática) de cada ejaculado, procedeu-se à formação do pool e diluição (240x106 espermatozoides/mL) com leite desnatado e glicerol 7%, acrescido de antioxidantes, de acordo com o experimento: Exp. 1) G1= Controle, G2= Trolox 30μM, G3= Trolox 60μM e G4= Trolox 120μM; Exp. 2) G1= Controle, G2= GSH 2mM, G3= GSH 5mM e G4= GSH 7mM. Em seguida, as amostras foram acondicionadas em palhetas (0,25mL), congeladas e armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). Após descongelação (37oC/30 segundos), alíquotas de sêmen de cada grupo foram avaliadas quanto a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossoma (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética espermática e ultraestrutura. As análises de iMP, iAc, PMM e cinética dos espermatozoides caprinos criopreservados em meio adicionado de diferentes concentrações de Trolox e GSH, não evidenciaram diferença significativa (P>0,05) entre os grupos. A ultraestrutura foi avaliada em amostras de sêmen in natura e pós descongelação. Nos Exps. 1 e 2, as análises de iMP, iAc, PMM e cinética espermática dos espermatozoides caprinos criopreservados não evidenciaram diferença significativa (P>0,05) entre os gruposControle e Trolox (30, 60 e 120 μM/mL). No Exp. 1, a análise ultraestrutural evidenciou que os porcentuais de acrossoma, membrana plasmática da região da cauda e axonema íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos (Controle e Trolox 30, 60 e 120 μM/mL), mas foram inferiores (P<0,05) aos do sêmen in natura.Entretanto, as amostras dos grupos Trolox 60μM/mL e Trolox 120μM/mL apresentaram maior porcentagem (P<0,05) de espermatozóides com membrana plasmática intacta na região da cabeça do que as dos grupos Controle e Trolox 30μM/mL, mas não diferiram (P>0,05) do sêmen in natura. Maior porcentagem (P<0,05) de espermatozides com mitocôndrias intactas foi observada nas amostras de sêmen in natura, e dos grupos Controle e Trolox 60μM/mL do que naquelas do Trolox 30μM/mL e 120μM/mL. No Exp. 2, a análise ultraestrutural demonstrou que os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM/mL), mas foram inferiores (P<0,05) aos do sêmen in natura. Todavia, as amostras de sêmen in natura e do grupo Controle apresentaram maior porcentual (P<0,05) de gametas com axonema íntegros do que as dos grupos tratados com GSH (2, 5 e 7mM/mL). Maior porcentagem (P<0,05) de espermatozóides com mitocôndrias íntegras foi observada nas amostras de sêmen do grupo Controle do que nos tratados com GSH (5 e 7mM/mL), e não diferirem das amostras do sêmen in natura e do GSH 2mM/Ml. Com base na análise ultraestrutural, é possível concluir que Trolox 60 μM/mL pode ser adicionado ao diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado e glicerol 7%, visando preservar a integridade da membrana plasmática na região da cabeça dos espermatozoides. Todavia, a adição de GSH (2, 5 e 7mM/mL) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado e glicerol 7%, não preserva a integridade dos espermatozoides.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-28T12:55:08Z No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 1040308 bytes, checksum: b0653bfe634b8d58d0d6d1c3c04816e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T12:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 1040308 bytes, checksum: b0653bfe634b8d58d0d6d1c3c04816e9 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mycoplasma agalactiae is the main causative organism of contagious agalactia (CA), a disease characterized by mastitis followed by agalactia, polyarthritis, and keratoconjunctivitis. In 2001, M. agalactiae was isolated and identified in Brazil, causing great economic losses. Considering the need for characterization of Brazilian strains of M. agalactiae and implementation of effective control, this work was performed in three steps. The first article describes the biochemical and protein profile of isolates of M. agalactiae in small ruminants through the culture in modified Hayflick medium, biochemical tests, polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunogenicity of these proteins by Western blot (WB). The samples had similar protein in the profile bands ranging from 30-135 kDa in SDS-PAGE, in addition the presence of a protein of 48 kDa immunodominant WB was shown. To continue identifying the agent involved in the AC in Brazil, the second article describes the analysis of ten sequences of M. agalactiae isolated from goats and sheeps. A DNA fragment of 360 bp of the 16S rRNA gene was amplified by PCR and sequenced. The analysis revealed a high degree of similarity among all the sequences. The study revealed greater than 99% similarity with the reference samples of M. agalactiae. In the third article, efficacy of three inactivated vaccines prepared with a local of M. agalactiae sample and adsorbed with three adjuvants was evaluated in goats and sheep. The antibody response in vaccinated animals was analyzed using an indirect ELISA. The three vaccines induced antibody production, and can be an alternative to reduce economic losses and prevent contagious agalactia. These results confirms the presence and spread of M. agalactiae in the country and enhances the possibility of controlling the disease through the adoption of livestock vaccination. / Mycoplasma agalactiae é o principal microrganismo causador da agalaxia contagiosa (AC), doença caracterizada por mastite seguida de agalaxia, poliartrite e ceratoconjuntivite. Em 2001, M. agalactiae foi isolado e identificado no Brasil, determinando grandes prejuízos econômicos. Considerando a necessidade de caracterização de amostras brasileiras de M. agalactiae e da implantação de medidas eficazes de controle, esse trabalho foi realizado em três etapas. O primeiro artigo descreve o perfil bioquímico e protéico de isolados de M. agalactiae de pequenos ruminantes através do cultivo em meio Hayflick modificado, testes bioquímicos e eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a imunogenicidade destas proteínas por Western Blot (WB). As amostras apresentaram similaridade no perfil protéico com bandas variando de 30 a 135 kDa no SDS-PAGE, além da presença de uma proteína imunodominante de 48 kDa no WB. Para dar continuidade a identificação do agente envolvido na AC no Brasil, o segundo artigo descreve a análise de dez sequências de M. agalactiae isolados de caprinos e ovinos. Um fragmento de DNA de 360 bp do gene 16S rRNA amplificado por PCR foi sequenciado. A análise revelou alto grau de similaridade, entre as dez sequências e uma similaridade maior que 99% com amostras de referência de M. agalactiae. No terceiro artigo, a eficiência de três vacinas inativadas, preparadas com amostra local de M. agalactiae e adsorvidas com três adjuvantes, foi avaliada em caprinos e ovinos. A resposta sorológica dos animais vacinados foi analisada através de um ELISA indireto. As três vacinas induziram produção de anticorpos, podendo ser utilizadas como uma alternativa para reduzir as perdas econômicas e prevenir a agalaxia contagiosa. Estes resultados confirmam a presença e disseminação do M. agalactiae no país e fortalece a possibilidade de controle da doença pela adoção da vacinação dos rebanhos.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-28T13:59:26Z No. of bitstreams: 1 Andreia Fernandes de Souza.pdf: 1003019 bytes, checksum: ea7c3d1a2fe054ea8f10319bec70c776 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T13:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andreia Fernandes de Souza.pdf: 1003019 bytes, checksum: ea7c3d1a2fe054ea8f10319bec70c776 (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In Northeastern Brazil, the food lack on the low pluviometric index period is one of the factors that interfere on the goat reproduction, in spite of these animals be adapted to this region. The Aim of this study was to evaluating the effect of high (HPI) and low (LPI) pluviometric index on the proteins profile of goat semen of the American Alpine race raised on Camocim de São Félix, Pernambuco. It was realized semen collection by artificial vagina method during two years (2005, 2006). The semen samples were submitted to macroscopic (color, volume and appearance) and microscopic (progressive motility, vigor, concentration, morphology, and acrosome and DNA integrity) analyses and then divided into aliquots to realize the procedures: 1) freezing (0.5 mL), 2) protein dosages (1 mL) and 3) analysis of acrosome and DNA integrity (± 0.5 mL). The samples were packed in straws (0.25 mL), freezing in machine TK3000 (-0.25 °C/min, 25 °C to 5 °C, and - 20 °C/min of 5 °C to -120 °C) and stored in cryobiologic container (-196 C). After thawing (37 ° C, 30 seconds), the samples were evaluated to progressive motility (PM), vigor and acrosome and DNA integrity. The semen protein profile was conducted through the analysis of two-dimensional electrophoresis, after determination of total protein for standardization of the protein amount applied in gel electrophoresis. On the in natura semen, there was no significant difference (P>0.05) on the PM among animals and between LPI (79.82%) and HPI (81.25%) periods, as well as on sperm vigor on the LPI (4.17) and HPI (4.00) periods. However, it was observed higher(P<0.05) percentage of sperm with intact acrosome on semen collected on HPI (90.25%) than LPI (80.26%). After thawing, it was observed significant difference (P<0.05) on the PM of the samples obtained during the LPI (60.00%) and HPI (71.30%) periods, and no significant difference (P>0.05) on the cells with intact acrosome on the LPI (67.98%) and HPI (66.83%). In the protein samples extracted of in nature and thaw sperm membrane, 56 and 165 spots of proteins were identified with 25 to 103.0 kDa and 9.0 to 131.0 kDa, and with 3.36 to 9.74 and 3.37 to 8.80 pIs, respectively. On the evaluation of the seminal plasma proteins were detected 96 spots of protein, with 49 spots in the LPI period (15 to 97 kDa, 4.48 to 9.83 pI) and 47 spots in the HPI period (4 to 106 kDa and 3.00 to 8.96 pI). The periods HPI and LPI had 22 common spots of proteins, corresponding to 45.83% of similarity among spots analyzed. In the gel analysis of the thawed semen samples it was observed increase of protein spots number than in natura semen. It is suggested that groups of proteins of low molecular mass of seminal plasma membrane and the sperm of goats are responsible for sperm motility and the presence of a group of proteins on 14-15 kDa and 45kDa are responsible for the viability of the sperm cells in this experiment. / Na região Nordeste do Brasil, a ausência de alimentos no período de baixo índice pluviométrico é um dos fatores que mais interferem na reprodução dos caprinos, apesar destes animais estarem bem adaptados a esta região. Objetivando avaliar o efeito dos períodos de alto (AIP) e baixo (BIP) índice pluviométrico no perfil de proteínas do sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados no Município de Camocim de São Felix (Pernambuco), foram realizadas colheitas de sêmen pelo método de vagina artificial em dois anos consecutivos (2005 e 2006). As amostras de sêmen foram submetidas à análise macroscópica (cor, volume e aspecto) e microscópica (motilidade progressiva, vigor, concentração, morfologia, integridade de acrossoma e DNA) e, a seguir, divididas em alíquotas com a finalidade de realizar os procedimentos de: 1) congelação (0,5 mL), 2) dosagem de proteínas (1 mL) e 3) análise de integridade de acrossoma e de DNA (± 0,5mL). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina TK3000 (- 0,25 ºC/min, de 25 ºC a 5 ºC, e a – 20 ºC/ min, de 5 ºC a -120 ºC) e armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). Após descongelação (37 oC; 30 segundos), as amostras foram avaliadas quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade de acrossoma e de DNA. O perfil de proteínas das membranas espermáticas e do plasma seminal foi realizado através da análise de eletroforese bidimensional, após dosagem de proteína total para padronização da quantidade de proteínas aplicadas no gel de eletroforese. No sêmen in natura, não seobservou diferença significativa (P>0,05) na motilidade progressiva (MP) entre animais e entre os períodos BIP (79,82%) e AI (81,25%), assim como no vigor espermático nos períodos BIP (4,17) e AIP (4,00). Porém foi observado maior (P<0,05) porcentual de espermatozóides com acrossomas integros colhidos no período AIP (90,25%) do que no BIP (80,26%). Após descongelação, constatou-se diferença significativa (P<0,05) na MP das amostras colhidas nos períodos BIP (60,00%) e AIP (71,30%), e não significativa (P>0,05) no porcentual de células com acrossomas íntegros no BIP (67,98%) e AIP (66,83%). Nas amostras de proteínas extraídas da membrana de espermatozóides in natura e descongelado, foram identificados 56 e 165 spots de proteínas com 25 a 103,0 kDa e 9,0 a 131,0 kDa, e com pIs 3,36 a 9,74 e de 3,37 a 8,80, respectivamente. Na avaliação das proteínas do plasma seminal foram detectados 96 spots de proteínas, sendo 49 spots no período BIP (15 a 97 kDa e pI de 4,48 a 9,83) e 47 spots no período AIP (4 a 106 kDa e pI de 3,00 a 8,96). Os períodos AIP e BIP apresentaram 22 spots de proteínas comuns, correspondendo a 45,83% de similaridade entre os spots analisados. Na análise dos géis das amostras de sêmen descongelado, constatou-se aumento do número de spots de proteínas focalizados. Sugere-se que os grupos de proteínas de baixa massa molecular do plasma seminal e da membrana espermática de caprinos interferem na motilidade espermática; e que um grupo de proteínas de 14-15 kDa e 45kDa atua na viabilidade das células espermáticas.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-28T15:22:34Z No. of bitstreams: 1 Alba Maria Soares Barbosa.pdf: 700846 bytes, checksum: f86a8e1e3bf4b04ccf6f9f2e1bc5db91 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T15:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alba Maria Soares Barbosa.pdf: 700846 bytes, checksum: f86a8e1e3bf4b04ccf6f9f2e1bc5db91 (MD5) Previous issue date: 2011-07-27 / The aim of this research was to identify the gastrointestinal parasites and evaluate the infection with strongyles in dairy goats and sheep in the Metropolitan Region of Recife - PE, through parasitologic fecal exams, Famacha tests and proteinogram. Animals were used from four farms, and two with concomitant goats breeding and sheep farm identified as 1 (G1) and farm 2 (G2), a only goats breeding (G3) and one only sheep breeding (G4).The research was conducted from September 2009 until July 2010. Flocks G1, G3 and G4 were studied for 10 months and Flock G2 for 8 months. The animals were examined by Famacha technique, packed cell volume and total protein plasma concentration. It was performed egg count (EPG), oocyst count (OoPG) and larvae count (LPG) per gram of feces, e animals were classified according a prior established convention to evaluating parameters values, using reference data for OPG, Hematocrit, and Famacha test to resistant, resilient and sick animals. Parasitism was observed in all study period in goats and sheep, identifying type Strongyloidea eggs, Strongyloides sp., Trichuris sp., Moniezia spp. and oocysts of Eimeria spp. The sheep had a better response to parasitism at studied region, ranking mostly of them as resistant and resilient, while most of the goats were framed as sick. / Objetivou-se, com este trabalho, identificar o parasitismo gastrintestinal e avaliar a resposta à infecção por estrongilídeos em rebanhos caprinos e ovinos da Região Metropolitana de Recife – PE, por meio de exames coproparasitológicos, do método famacha e proteinograma . Foram utilizados animais pertencentes a quatro propriedades, sendo duas com criação concomitante de caprinos e ovinos, identificadas como granja 1 (G1) e granja 2 (G2), uma com criação apenas de caprinos (G3) e outra com criação apenas de ovinos (G4). A pesquisa foi desenvolvida entre os meses de setembro de 2009 e julho de 2010. Os rebanhos G1, G3 e G4 foram acompanhados por 10 meses e o rebanho G2 por 8 meses. Os animais foram examinados pela técnica Famacha, determinação do volume globular e da concentração plasmática de proteína total. Foi realizada a contagem de ovos (OPG), contagem de oocistos (OoPG) e larvas (LPG) por grama de fezes, e os animais caracterizados de acordo com classificação convencionada para os valores dos parâmetros avaliados, utilizando-se os dados de referência para OPG, Hematócrito e Famacha em resistentes, resilientes e doentes. O parasitismo foi constatado em todo período de estudo em caprinos e ovinos, identificando-se ovos tipo Strongyloidea, Strongyloides sp., Trichuris sp., Moniezia spp. e oocistos de Eimeria spp. Os ovinos apresentaram melhor resposta ao parasitismo na região estudada, classificando-se em sua maioria como resistentes e resilientes, enquanto a maior parte dos caprinos foi classificada como doentes.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-01T15:31:24Z No. of bitstreams: 1 Andre Mariano Batista.pdf: 715032 bytes, checksum: 92e93d004a4a86c672f3ad4c9e8e4af1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T15:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andre Mariano Batista.pdf: 715032 bytes, checksum: 92e93d004a4a86c672f3ad4c9e8e4af1 (MD5) Previous issue date: 2009-02-12 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Sperm processing methods are routinely applied on the in vitro fertilization (IVF) systems for various species with the objective to remove seminal plasma/crioprotectant and to increase sperm quality. Aiming at study the sperm viability after use of the Swim-up or density gradient methods (Percoll® and CapriPure®) in frozen-thawed goat semen samples for use in assisted reproduction, six Boer goat semen samples were collected. Following, the samples were evaluated for concentration, progressive motility and morphology, diluted, packaged in straws (0.25 mL), frozen using machine and stored in liquid nitrogen. After thawing (37 oC for 30 s), sperm of all six goat were mixed-up making a pool and then were evaluated for progressive motility, membrane integrity (PI/DCF), acrossomal integrity (FITC/PNA) and mitochondrial membrane potential (JC-1). After that, the pool was split into two aliquots for the accomplishment of the sperm selection using the methods Swim-up and Percoll® (Experiment 1) and centrifugation in Percoll® and CapriPure® density gradient (Experiment 2). After use of each method of selection, the analyses was proceeded it from progressive motility, membrane integrity, acrossomal integrity and of mitochondrial integrity. Exp. 1 evidenced lower percentage of progressive motility spermatozoa (P<0.05) with intact plasma membrane (P<0.01) after use of Swim-up method, when compared with samples submitted to sperm preparation with Percoll®. In the Exp. 2, Percoll® gradient determined reduction (P<0.05) in percentage of acrosome intact spermatozoa when compared with percentage of the sample immediately after thawing, not having significant difference (P>0.05) if comparing submitted samples with the CapriPure® gradient. There were significant differences in the percentage of spermatozoa with high mitochondrial membrane potential inthe samples of semen submitted the selection using Percoll® (P<0.05) and CapriPure® (P<0.01), density gradients, when compared with the values of samples evaluated immediately after thawing. However, there were no significant difference (P<0.05) in the high mitochondrial membrane potential values between Percoll® and CapriPure® density gradients. On the basis the results of mobile spermatozoa and with the intact plasma membrane, are possible to conclude that to select viable sperm of frozen goat semen samples should use density gradient methods and CapriPure® is a good alternative to Percoll®. / Métodos de processamento espermático são rotineiramente utilizados nos sistemas de fertilização in vitro (FIV) de várias espécies, com o objetivo de remover o plasma seminal/crioprotetores e aumentar a qualidade espermática. Visando estudar a viabilidade espermática após utilização dos métodos Swim-up ou gradiente de densidade (Percoll® e CapriPure®) em amostras criopreservadas de sêmen caprino para uso em reprodução assistida, foram colhidas amostras de sêmen de seis reprodutores Boer. A seguir, as amostras foram avaliadas (motilidade progressiva, concentração, e morfologia), submetidas a duas lavagens em solução Tris, diluídas, envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina e armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). Após descongelação (37 oC; 30 segundos),procedeu-se à formação do pool das amostras dos reprodutores de cada dia de congelação e, a seguir, a avaliação de integridade de membrana (IP/DCF), integridade acrossomal (FITC/PNA) e potencial de membrana mitocondrial (JC-1). Em seguida, o pool foi dividido em duas alíquotas para a realização da seleção espermática utilizando os métodos Swim-up e Percoll® (Experimento 1) e centrifugação em gradiente de densidade Percoll® e CapriPure® (Experimento 2). Após utilização de cada método de seleção, procederam-se às análises de motilidade progressiva, concentração, integridade de membrana, integridade acrossomal e potencial de membrana mitocondrial. No Exp. 1 foram constatados menores porcentuais de espermatozóides portadores de motilidade progressiva (P<0,05) e de espermatozóides com membranas intactas (P<0,01) após utilização do método Swim-up, quando comparado as amostras submetidas à preparação espermática com Percoll®. No Exp. 2, o gradiente de Percoll® determinou redução (P<0,05) no porcentual de espermatozóides portadores de acrossoma intacto quando comparado ao porcentual da amostra imediatamente após a descongelação, não havendo diferença significativa (P>0,05) ao se comparar às amostras submetidas ao gradiente CapriPure®. Houve diferença significativa nos porcentuais de espermatozóides com alto potencial de membrana mitocondrial nas amostras de sêmen submetidas à seleção utilizando os gradientes de densidade Percoll® (P<0,05) e CapriPure® (P<0,01), quando comparado aos valores das amostras avaliadas imediatamente após a descongelação. No entanto, nenhuma diferença (P>0,05) foi observada entre os porcentuais de espermatozóides com alto potencial de membrana mitocondrial das amostras submetidas à seleção utilizando os gradientes de densidade Percoll® e CapriPure®. Com base nos resultados de espermatozóides móveis e com membranas intactas, é possível concluir que, para selecionar espermatozóides viáveis de amostras congeladas de sêmen caprino, deve-se usar a centrifugação em gradiente de densidade, e que o CapriPure® é uma boa alternativa ao uso doPercoll®.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-15T14:32:59Z No. of bitstreams: 1 Daniela da Silva Pereira Campinho.pdf: 282831 bytes, checksum: 7ff72a635b08513f99aa70d049fc00d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-15T14:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniela da Silva Pereira Campinho.pdf: 282831 bytes, checksum: 7ff72a635b08513f99aa70d049fc00d2 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The Ruminants Pestiviruses are often associated with temporary and subclinical or mild clinical signs, with the largest losses related to the infection of pregnant females that can cause fetal loss and birth of persistently infected (PI) animals. The Pestivirus are distributed in many countries, including Brazil, where studies in goats and sheep are scarce. Several studies have reported the use of molecular techniques for detection of Pestivirus, among them, the RT-PCR and the RT-qPCR.They are able to detect PI animals, which are the main source of the virus-Care in the herd. The objective of this study was to determined the lower limit of detection for Pestivirus from supernatant cell culture and serum samples from small ruminants using RT-PCR and qRT-PCR. The extraction of nucleic acids was performed with a commercial kit QIAamp ® MinElute ® Virus Spin, the reverse transcriptase reaction followed the protocol recommended by the manufacturer of the enzyme reverse transcriptase M-MLV. The evaluation of the detection limit of RT-qPCR and RT-PCR was performed using a Pestivirus calibration curve (dilution factor 10) with known and decreasing TCID50/mL called panpestivirus using primers (Vilcek et al., 1994).The detection limit of RT-qPCR in cell culture supernatant was 10-3 TCID50/mL and of RT-PCR was 10.2 TCID50/mL, since the lower limit of detection using sera weeding, sheep and Gibco ® Lamb as a diluent were TCID50/mL. The tests conducted under the conditions described in this study proved to be sensitive and can be used as a strategy for etiologic diagnosis of Pestivirus, especially for the molecular identification of IP animals, which is essential for the control of Pestiviroses. / Em ruminantes as pestiviroses são frequentemente associadas a infecções subclínicas ou com sinais clínicos leves e passageiros, sendo as maiores perdas relacionadas com a infecção de fêmeas prenhes que podem causar perdas fetais e nascimento de animais persistentemente infectados (PI). Os Pestivirus estão distribuídos em muitos países, inclusive no Brasil, onde estudos em caprinos e ovinos são escassos. Vários estudos têm relatado a utilização de técnicas moleculares para a detecção de Pestivirus, dentre elas a RT-PCR e a RT-qPCR que são capazes de detectar animais PI, principal fonte de manutenção do vírus no rebanho. Objetivou-se com este estudo determinar o limite mínimo de detecção para Pestivirus a partir de sobrenadante de cultura celular e soro de pequenos ruminantes utilizando a RT-PCR e qRT-PCR. A extração dos ácidos nucléicos foi realizada com kit comercial QIAamp® MinElute® Virus Spin, a reação de transcriptase reversa seguiu o protocolo recomendado pelo fabricante da enzima transcriptase reversa M-MLV. A avaliação do limite de detecção da RT-qPCR e RT-PCR para Pestivirus foi realizada utilizando uma curva de calibração (fator de diluição 10) com TCID50/mL conhecidas e decrescentes utilizando primers denominados panpestivírus. O limite de detecção da RT-qPCR em sobrenadante de cultura celular foi de 10-3 TCID50/mL e da RT-PCR foi de 10-2 TCID50/mL, já o limite mínimo de detecção utilizando os soros capino, ovino e Gibco® Lamb como diluentes foram de 1 TCID50/mL. Os ensaios realizados nas condições descritas nesse estudo demonstraram ser sensíveis, podendo ser utilizados como uma estratégia de diagnóstico etiológico do Pestivirus, sobretudo para a identificação molecular de animas PI, o que é essencial para o controle das pestiviroses.