Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: George Shigueki Yasui / Banca: Sérgio Fonseca Zaiden / Banca: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Banca: Luciano Andrade Silva / Resumo: O transplante de células germinativas primordiais (CGPs) é uma abordagem promissora para área da Aquicultura, mas para isso é necessária à compreensão dos estágios de desenvolvimento embrionário e larval como também a padronização de técnicas relacionadas à micromanipulação do embrião e de células germinativas a fim de obter com sucesso quimeras germinativas. Assim, os objetivos desta pesquisa foram avaliar o efeito de três temperaturas (22ºC, 26ºC e 30ºC) sob o desenvolvimento inicial de B. amazonicus (espécie doadora); desenvolver protocolos para micromanipulação de ovos, de células embrionárias e de criopreservação de blastômeros em Astyanax altiparanae (espécie receptora); identificar as CGPs e a rota de migração dessas células em ambas as espécies, além da produção de quimeras germinativas através do transplante de células embrionárias a fim de que a espécie receptora estéril (3n) produza gametas da espécie doadora. Para isso, os reprodutores das espécies envolvidas foram induzidos hormonalmente à reprodução, os gametas foram extrusados e fertilizados pelo método a seco. Para avaliar o desenvolvimento inicial, ovos recém-fertilizados foram distribuídos em aquários com oxigenação e temperatura controlada, coletados em momentos pré-estabelecidos e analisados sob estereomicroscópio. Para o desenvolvimento do protocolo de micromanipulação de ovos de Astyanax altiparanae, inicialmente avaliou-se a eficácia na remoção do córion em alíquotas de ovos recém-fertilizados distribuí... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Primordial germ cell (PGCs) transplantation is a promising approach for aquaculture area, but it is necessary the understanding of the embryonic and larval development stages as well as the standardization of techniques related to embryo micromanipulation and germ cells in order to get germ chimeras successfully. Thus, the aims of this research were to evaluate the effect of three temperatures (22°C, 26°C and 30°C) on the early development of Brycon amazonicus (donor species); develop protocols for micromanipulation of egg, embryonic cells and blastomeres cryopreservation in Astyanax altiparanae (host species); identify the PGCs and their migration route in both species, also producing germ chimeras through transplantation of embryonic cells to host sterile species (3n) in order to produce gametes from the donor species. For this, broodstock of the involved species were hormonally induced to reproduction, and the gametes were stripped and fertilized by dry method. To evaluate the early development, newly fertilized eggs were distributed into aquarium with controlled oxygenation and temperature, collected at pre-established times and analyzed under a stereomicroscope. For the development of micromanipulation protocol of eggs from Astyanax altiparanae, it was initially evaluated the effectiveness of removing the chorion, in aliquots of newly fertilized eggs distributed on Petri dishes containing pronase (0.05%) or trypsin (0.15%) diluted in saline solutions (Holtfreter; Characin; Ringer; Hanks, D-PBS or MEM) and it was observed the most efficient enzymatic solution without affecting the viability of the embryo. After dechorionation, the eggs were submerged the same saline solutions tested for removing the chorion, free of enzymes. To determine the best incubation saline solution, morphology and quantification of the eggs were ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mario Tanomaru Filho / Coorientador: Ricardo Battaglino / Banca: Renato de Toledo Leonardo / Banca: Leslie Morse / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Resumo: O objetivo deste estudo foi analisar as respostas biológicas 'a materiais utilizados em Endodontia que apresentam na formulação Mineral Trióxido Agregado (MTA) ou cimento Portland (PC) utilizando sistemas de cultura de células. O estudo foi dividido em três capítulos: No capitulo 1 foram avaliados bioatividade e biocompatibilidade de dois novos cimentos endodônticos comercialmente disponíveis; MTA Fillapex (MTA-F, cimento endodôntico à base de MTA, Ângelus) e Ephiphany SE (EP-SE, cimento endodôntico a base de resina metacrilato, SybronEndo). A linhagem de osteoblastos humanos (Saos-2) foi utilizada como modelo de estudo. Os resultados de MTT mostraram uma taxa significante de morte celular nas primeiras horas de exposição para todos os materiais avaliados. Entretanto, o grupo MTA-F apresentou aumento de células viáveis após 7 dias de presa. As imagens de microscopia eletrônica de varredura e o resultado de EDS (energia de dispersão atômica) mostraram diferenças na morfologia dos nódulos minerais formados pelos osteoblastos expostos ao MTA-F. No capítulo 2, células de folículo dental humanos (hDFCs) de dois terceiros molares inclusos indicados para exodontia por razões ortodônticas foram isoladas para avaliação da bioatividade e da biocompatibilidade do PC associado a diferentes agentes radiopacificadores em cultura primária de células. Os materiais estudados foram o cimento Portland branco (PC) e as associações de PC com: óxido de bismuto (CPBi), óxido de zircônio (CPZir) e tungstato de cálcio (CPCa). Além dos resultados de viabilidade celular e atividade de fosfatase alcalina, a biocompatibilidade do PC e das associações com agentes radiopacificadores foi analisada por imagens de microscopia eletrônica de varredura, que mostraram as hDFCs aderidas aos materiais. O capítulo 3 apresenta um estudo original de pesquisa básica, no qual foi avaliada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to analyze the biological responses to new endodontic materials based on Portland cement (PC) and the PC itself in cell culture systems. The study was divided into three chapters as follows: The first chapter describes a research in which the bioactivity and biocompatibility of two new commercially available sealers; MTA Fillapex (MTA-F, PC-based sealer, Angelus) and Ephiphany SE (EP-SE, resin-based sealer, SybronEndo); were evaluated in human osteoblast-like cells (Saos-2). The MTT results showed a significant cell death rate during the first hours of exposure to all test materials. After 7 days of exposure, MTA-F group showed a suitable increasing rate of cell viability. Interestingly, the images of scanning electron microscopy and the result of EDS (energy-dispersive X-ray spectroscopy) showed morphological differences in the mineralized nodules formed by osteoblasts exposed to MTA-F. In Chapter 2, human dental follicle cells (hDFCs) were isolated from two included third molars, which were extracted for orthodontic reasons. The hDFCs were suitable to assess the bioactivity and biocompatibility of PC associated with different radiopacifying agents in primary cell culture system. The materials tested were the white Portland cement (PC) and PC associations with radiopacifying agents: bismuth oxide (PCBi), zirconium oxide (PCZir) and calcium tungstate (PCCa). Besides the results of cell viability and alkaline phosphatase activity, the biocompatibility of the PC was corroborated by the images of scanning electron microscopy, which allowed us to visualize the hDFCs adhered to the material surfaces. Chapter 3 presents an original study of basic research, aimed to evaluate the hypothesis of the transcription factor NFATc1 activation in human osteoblast-like cells as a result of exposure to PC... 9Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Rubens Monti / Banca: Jonas Contiero / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Guilherme Peixoto / Banca: Kátia Sivieri / Resumo: As proteases são importantes enzimas industriais com vasta área de aplicação. Como catalisam a hidrólise de proteínas, são amplamente exploradas na produção de hidrolisados proteicos a partir das proteínas do leite (caseínas e soro de queijo), soja e peixe, gerando produtos de alto valor agregado. Neste trabalho, a tripsina (EC 3.4.2.1.4) e pepsina (EC 3.4.23.1) foram imobilizadas em suporte alternativo de baixo custo pó de sabugo de milho (SM) para a obtenção de hidrolisados parciais do soro de queijo bovino e bubalino, principal subproduto da indústria de laticínios. O suporte pré-tratado foi ativado com grupos glioxil e IDA-glioxil (tripsina) e glutaraldeído (tripsina e pepsina). Os derivados apresentaram rendimentos de imobilização maiores que 80% para a tripsina e 90% para a pepsina com atividades recuperadas maiores que 85% e 94%, respectivamente. O derivado de tripsina-glioxil-SM exibiu uma excelente estabilidade térmica a 65 ° C, que foi 1111 vezes maior em comparação à enzima livre seguido pelos derivados tripsina-IDA-glioxil-SM (900 vezes) e tripsina-glutaraldeído-SM (5,38 vezes). Para o derivado pepsina-glutaraldeído-SM a estabilidade térmica foi realizada em 45ºC e foi 1,42 vezes maior com relação à enzima livre. Os derivados estabilizados tripsina-glioxil-SM e pepsina-glutaraldeído-SM foram empregados em um reator de leito empacotado para hidrólise do lactosoro bovino e bubalino. A relação derivado enzimático/volume útil foi de 1:2 e o processo foi conduzido a 45ºC com uma vazão de 10,1mL/h. Para a hidrólise, os soros de queijo bovino e bubalino foram dialisados e tratados com caulim para a redução dos teores de lactose e gordura, respectivamente. Os hidrolisados foram fracionados por cromatografia de filtração em gel (Sephadex G25) para obtenção de pools de peptídeos ˂5kDa. O transporte e a absorção de cada um dos pools de peptídeos foram avaliados pelos métodos in vitro da... / Abstract: Proteases are important industrial enzymes with wide range of application. They catalyze the hydrolysis of proteins and are widely exploited in the production of protein hydrolysates from milk protein (casein and whey), soy and fish, generating high value-added products. In this work, trypsin (EC 3.4.21.4) and pepsin (EC 3.4.23.1) were immobilized on a low cost alternative support, corn cob powder (CCP) to obtain partial hydrolysates of bovine and buffalo cheese whey, the main by-product of the dairy industry. The pretreated support was activated with glyoxyl and IDA-glyoxyl groups (trypsin) and glutaraldehyde (trypsin and pepsin). The derivatives showed immobilization yields higher than 80% and 90% for trypsin and pepsin, respectively, and recovered activities higher than 85% for trypsin derivatives and 94% for pepsin derivative. The derivative trypsin-glyoxyl-CCP showed excellent thermal stability at 65 ° C, which was 1111 times higher that obtained with free enzyme, followed by derivative trypsin-IDA-glyoxyl-CCP (900-fold) and trypsin-glutaraldehyde-CCP (5.38-fold). For the derivative pepsin-glutaraldehyde-CCP the thermal stability was held at 45 ° C and was 1.42 times greater than the free enzyme. Stabilized derivatives trypsin-glyoxyl-CCP and pepsin-glutaraldehyde-CCP were used in a packed bed reactor for the hydrolysis of bovine and buffalo cheese whey. The relationship derivative/working volume was 1:2 and the process was conducted at 45 ° C with a flow of 10.1mL/h. For the hydrolysis, bovine and buffalo cheese whey were dialyzed and treated with kaolin to reduce lactose and fats, respectively. The hydrolysates were fractionated by gel filtration chromatography (Sephadex G25) to obtain 5kDa peptide pools. The transport and absorption of each peptide pools were evaluated by in vitro methods simulating the gastrointestinal digestion/dialysability and by Caco-2 cell ... / Doutor

Orientador: José Buratini Junior / Banca: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: Marcelo Nogueira / Banca: Cláudia Lima Verde Leal / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Fatores de crescimento fibroblástico (FGFs) regulam o desenvolvimento folicular e a maturação oocitária através de ligação aos seus receptores (FGFRs). Os RNAm que codificam o FGFR2c e o FGFR3c foram detectados em folículos antrais bovinos. Com o objetivo de identificar FGFs que poderiam regular a foliculogênese por meios desses, investigou-se os padrões de expressão do FGF16 e FGF20 em folículos antrais bovinos, bem como os níveis de RNAm desses FGFs e seus receptores (FGFR2c e FGFR3c) durante a maturação in vitro de complexos cumulus-oócito (COCs). Além disso, dados preliminares do nosso laboratório indicativos de que a expressão do FGF17 em oócitos é regulada ao longo da maturação oocitária motivaram a investigação da função dessa proteína na maturação de COCs in vitro. Sendo assim, avaliou-se o efeito do FGF17 na expansão do cumulus e no controle da transcrição de fatores EGF-like [ampiregulina (AREG), epiregulina (EREG) e betacelulina (BTC)] e outros genes reguladores da expansão [cicloxigenase 2 (COX2), hialurona sintase 2 (HAS 2), pentraxina 3 (PTX3), proteína indutora do fator de necrose tumoral 6 (TSG6)]. Os RNAm dos FGF16 e FGF20 e as respectivas proteínas foram detectados no ovário bovino. A abundância de RNAm de FGF16 e FGF20 foi maior em células da granulosa e da teca de folículos atrésicos comparados a folículos saudáveis ou transicionais. O tratamento com FSH diminuiu a abundância de RNAm para FGF16 e FGF20 e o IGF1 inibiu FGF16 em células da granulosa cultivadas in vitro. Ao longo da maturação a expressão do FGF16 e do FGF20 foi estável no oócito, enquanto que a expressão dos receptores FGFR2c e FGFR3c foi estimulada nas células do cumulus pelo FSH. A proteína FGF16 foi localizada no oócito, células do cumulus e da teca e o FGF20 em oócitos, células do cumulus, da granulosa e da teca. O FGF17 aumentou a proporção... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fibroblast growth factors (FGFs) regulate follicular development and oocyte maturation. Messenger RNA encoding receptors FGFR3c and FGFR2c have been detected in bovine antral follicles. Aiming to identify FGFs that can potentially regulate folliculogenesis through these receptors, the expression patterns of FGF16 and FGF20 were assessed in bovine antral follicles. Messenger RNA expression of these FGFs and their receptors (FGFR2c and FGFR3c) was also assessed in oocytes and cumulus cells, respectively, during in vitro maturation. In addition, previous data suggesting that FGF17 mRNA expression is regulated in the oocyte led us to investigate the effects of FGF17 on cumulus expansion and on the expression of EGF-like factors [amphiregulin (AREG), epiregulin (EREG) and betacelullin (BTC)] and other genes that regulate expansion [cyclooxygenase 2 (COX2), hyaluronan synthase 2 (HAS 2), pentraxin 3 (PTX3), protein-inducing tumor necrosis factor 6 (TSG6)]. FGF16 and FGF20 mRNA and proteins were detected in the bovine ovary. Messenger RNA abundance of FGF16 and FGF20 was higher in granulosa and theca cells from atretic follicles compared with healthy or transitional follicles. Treatment with FSH decreased mRNA expression of FGF16 and FGF20 and IGF1 inhibited FGF16 mRNA abundance in cultured granulosa cells. During maturation, mRNA expression of FGF16 and FGF20 was stable in the oocyte, while FGFR2c and FGFR3c were stimulated in cumulus cells by FSH. FGF16 protein was localized to the oocyte, cumulus and theca cells, and FGF20 was detected in the oocyte, cumulus, granulosa and theca cells. Supplementation of maturation medium with FGF17 increased the proportion of fully expanded COCs, but did not alter mRNA expression of COX2, HAS2, PTX3, TSG6, AREG, EREG and BTC in cumulus cells during in vitro maturation. In conclusion, FGF17 enhances bovine cumulus expansion... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Vera Claudia Lorenzetti Magalhães Cursi / Banca: Cristina Maria Rodrigues Monteiro / Resumo: Morte celular programada (MCP) ou apoptose é um fenômeno correspondente a resposta do hospedeiro a uma infecção viral, envolvida na morte e/ou sobrevivência da célula infectada. O vírus da cinomose, canine distemper virus (CDV) é capaz de induzir a apoptose em células linfoides circulantes, tecidos linfóides e cerebelo de cães naturalmente infectados. O CDV também afeta as células Vero e linhagens de células de tumor cervical modulando várias etapas da MCP. Além disso, a fase de imunossupressão, estabelecida a partir da infecção pelo CDV, nem sempre está associada à detecção de partículas virais nas células infectadas. No presente estudo, células mononucleares de sangue periférico de cães (CMSP) foram coletadas, cultivadas e infectadas com a estirpe vacinal de CDV (Onderstepoort) e após 24 h da infecção os eventos iniciais da apoptose foram evidenciados pela marcação e quantificação das proteínas anexina v™ e ApoTrace™. A expressão do RNA mensageiro relacionado ao gene Bax, BCl-2, caspase-3, 8 e 9 e survivin foi realizada em culturas de CMPC infectadas e não infectadas após 24h pela reação de cadeia de polimerase em tempo real. A infecção viral foi responsável pela perda da viabilidade CMPC com expressão da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p < 0,001) após 24 h. Os valores elevados da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC encontrados estão em contraste com a maior expressão do mRNA do survivin e da BCl-2, considerados marcadores anti-apoptotic (p < 0,0002). Além disso, Bax, caspase 3, 8 e 9 foram expressos na mesma proporção nas CMPC infectado e não infectado, sem diferenças entre elas (p < 0,005). Em síntese, as células infectadas pelo CDV aumentaram a expressão de survivin e transcrição de gene BCL-2, um mediador de... (Resumo completo, clicar acesso eletronico abaixo) / Abstract:Programmed cell death or apoptosis is a central axis of the host response to virus infection involved in cell survival and death. In this respect, several responses are developed by host cells that may control virus replication and infection. On the other hand, viruses have developed strategies to counteract host responses. Canine distemper virus (CDV) has been described to induce apoptosis in lymphoid tissues, lymphoid cells and cerebellum of naturally infected dogs. It has been also described affecting Vero cells and cervical tumor derived cells line by modulating programmed cell death pathways. In addition, the immunosuppression stage established from CDV infection is not always associated to virus detection in damaged cells. Examining the host response at early stages of immunosuppression, especially the expression of activators and/or inhibitors of apoptosis processes can provide important understanding of how the immune responses to CDV are orchestrated. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) early events of apoptosis were detected by search for annexin V™ and ApoTrace™ markers. The expression of mRNA of Bax, BCl-2, caspase-3, 8 and 9 and also survivin genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post- infection by real time polymerase chain reaction. The vaccine strain induced loss of PBMC viability with expression of annexin™ V FITC and Apo-Trace™ FITC in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The initial of early apoptosis after 24h post- infection is in contrast with higher expression of mRNA of surviving and BCl-2, two major anti-apoptotic proteins (p < 0.0002...(Complete abstract click eletronic acces below) / Mestre

Orientador: Márcia Carneiro Valera. / Banca: Samira Esteves Afonso Camargo / Banca: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Banca: Simone Helena Gonçalves de Oliveira / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Resumo: A proposta deste estudo foi avaliar a citotoxicidade dos peróxidos de hidrogênio (PH) e carbamida (PC), para uso caseiro e profissional, sobre cultura de fibroblastos de mucosa de tecido gengival humano (FMM1). As células utilizadas foram cultivadas em DMEM e após 24 horas foi colocado meio de cultivo condicionado com os agentes clareadores: G1- PC 35% sem fotoativação (SF); G2- PC 35% ativado por luz halógena; G3- PC 35% ativado por diodo emissor de luz (LED); G4- PC 37% SF; G5- PC 37% ativado por luz halógena; G6- PC 37% ativado por LED; G7- PH 3% SF; G8- PH 7,5% SF; G9- PH 9,5% SF; G10- PC 10% SF; G11- PC 15% SF e G12- PC 20% SF. Uma curva padrão de viabilidade celular foi obtida a partir de células que não receberam tratamento (controle). O ensaio com MTT foi realizado após 24 e 48 horas, para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, foi medido colorimetricamente a quantidade de PH liberado nas condições experimentais. Os dados da viabilidade celular obtidos foram analisados estatisticamente através dos testes ANOVA e Tukey, (p<0,05). Todos os grupos apresentaram diferença significativa em relação ao controle. Dentre os agentes clareadores para uso profissional o PC 37% apresentou maior citotoxicidade e quantidade de peróxido de hidrogênio liberada que o PC 35%. A ativação por luz halógena ocasinou maior citotoxicidade e maior quantidade de PH liberado. Dentre os agentes clareadores para uso caseiro a base de peróxido de hidrogênio houve uma maior taxa de sobrevivência celular na concentração mais baixa de peróxido de hidrogênio (PH 3%); nos clareadores a base de peróxido de carbamida houve uma maior taxa de sobrevivência celular na concentração mais baixa de peróxido de carbamida (PC 10%). A taxa de sobrevivência celular foi significantemente menor após 48 horas. Concluiu-se que a citotoxicidade foi proporcional à concentração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the citotoxicity of hydrogen peroxide (HP) and carbamide peroxide (CP) on fibroblasts from mucosa of human gingival tissue (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and was placed in contact with conditioned medium with bleaching agents: G1- 35% CP without curing, G2-35% CP activated by halogen light; G3- 35% CP activated by light emission diode (LED); G4- 37% CP without curing; G5- 37% CP activated by halogen lamp; G6- 37% CP activated by LED; G7- 3% HP without curing; G8- 7.5% HP without curing; G9 - 9.5% HP without curing; G10- 10% CP without curing, G11-15% CP without curing, and G12- 20% CP without curing. A standard curve of cell growth and viability was obtained from cells that received no treatment (control). The MTT test was performed after 24 and 48 hours to assess the viability and cell growth. In parallel, was measured the amount of PH released under the experimental conditions. The data of cell viability were statistically analyzed by ANOVA and Tukey's tests (p <0.05). All groups showed significant differences in relation to the control group. Among the bleaching agents for office application, the 37% CP showed higher cytotoxicity and the 35% CP released the higher quantity of hydrogen peroxide. The activation by halogen light promoted the higher cytotoxicity and higher HP released. Among the home bleaching agents based on hydrogen peroxide there was a higher rate of cell survival in low concentration of hydrogen peroxide (3% HP); the bleaching based on carbamide peroxide had a higher cell survival rate in low concentration of carbamide peroxide (CP 10%). The cell viability was significantly lower after 48 hours. It was concluded that the cytotoxicity was related to the concentration of bleaching agent and the curing with halogen light increased the hydrogen peroxide release. / Doutor

Orientador: Mario Tanomaro Filho / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Joni Augusto Cirelli / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Banca: Loise Pedrosa Salles / Resumo: Cimentos de silicato decálciosão estudados como materiais reparadores. O estudo foi divido em 4 capítulos: No primeiro, citotoxicidade (MTT e Apoptose), genotoxicidade (teste Cometa) foram avaliadas em Saos-2 para os materiais: Cimentos de silicato de cálcio puro (CSC); Modificado (CSCM); Resinoso (CSCR1, CSCR2 e CSCR3). Na viabilidade, CSC e CSCR3 (50mg/mL) foram citotóxicos. CSCR1, CSCR2 e CSCR3 mostraram maior apoptose. Somente CSC e CSCR2 não foram genotóxicos em 10mg/mL (P<0.05). No cap.2, CSCM e CSCR2, foram associados a radiopacificadores: óxido de zircônio e óxido de nióbio (micro e nano), óxido de bismuto, tungstato de cálcio. MTA foi o controle para citotoxicidade e bioatividade. Todos foram viáveis e apresentaram apoptose semelhantes (1:8). A necrose foi superior (P<0.05). Ambos CSCs induziram fosfatase alcalina (ALP) e ARS. No cap.3, Biodentine (Septodont), MTA Plus (Avalon), CSCRs Nb2O5 e ZrO2 foram analisados quanto à cito e genotoxicidade. No MTT (1, 3 e 7d), todos foram similares. No qPCR, houve expressão de BAX (3d.) para CSCRs, MTAP e CSCR ZrO2 (5d). Para BCL2, (3 e 5d) somente MTAP e CSCR Nb2O5 (5d.). Na genotoxicidade, todos (1:2 e 1:8) permaneceram similares (P<0.05). Cap. 4, os mesmos foram avaliados na bioatividade: MTT, proliferação celular, ALP (1, 3 e 7d), qPCR (alp e ocn), e ARS. Todos os grupos foram viáveis e induziram ALP, ARS e expressão gênica, destacando os materiais CSCR Nb2O5 e Biodentine. Desta forma, os materiais apresentam potencial biológico para ser usado na endodontia. Estudos adicionais devem ser realizados, especialmente para os materiais experimentais. / Abstract: Calcium silicate-based cements are studied as reparative materials. This study was divided into 4 chapters: In the first, cytotoxicity (MTT and apoptosis) and genotoxicity (Comet assay) were evaluated in Saos-2 for: Pure calcium silicatebased (CSC); Modified (CSCM); resin-based (CSCR1, CSCR2, CSCR3). In the Viability assay, CSC and CSCR3 (50mg/mL) showed lower cell viability. CSCR1, CSCR2, CSCR3 showed more apoptosis. Only CSC and CSCR2 were not genotoxity in 10mg/mL (P<0.05). Chapter 2, CSCM and CSCR2 were associated with radiopacifiers: zirconium oxide and niobium oxide (micro and nano), bismuth oxide and calcium tungstate. MTA was used for the control of cytotoxicity and bioactivity tests. All were viable and showed similar apoptosis (1:8). Necrosis was superior (P<0.05). CSCM and CSCR induced alkaline phosphatase (ALP) and ARS. Chapter 3, was compared Biodentine (Septodont), MTA Plus (Avalon), CSCRs ZrO2 and Nb2O5, on cytotoxicity and genotoxicity. In MTT (1, 3 and 7 days) all were similar. In the qPCR, BAX was expressed by CSCRs (3d). MTAP and CSCR ZrO2 expressed in 5 days. For BCL2 gene (3 and 5d) only MTAP and CSCR Nb2O5 (5d). In genotoxixity assay, all (1:2 and 1:8) were similar (P<0.05). Chapter 4, we evaluated the same materials in Saos2 bioactivity: MTT, cell proliferation, ALP (1, 3 and 7d), qPCR (alp and ocn) and ARS. All groups were viable and induced ALP, ARS and gene expression, particularly CSCR Nb2O5 and Biodentine. Therefore, the biological materials has the potential to be used in endodontics. Additional studies should be conducted, especially for experimental cements. Additional studies should be conducted, especially for experimental cements. / Doutor

Orientador: Crispin Humberto Garcia Cruz / Banca: Mário Antonio Alves da Cunha / Banca: Pedro Oliva Neto / Banca: Ozair Souza / Banca: Vanildo Luiz Del Bianchi / Resumo: A bactéria Zymomonas mobilis é considerada um microrganismo com alto potencial biotecnológico para a produção de etanol e levana, por apresentar baixa produção de biomassa e alta tolerância a elevadas concentrações de etanol. Apesar disso, sua eficiência pode ser prejudicada, devido a exposição das células livres a condições desfavoráveis durante os processos fermentativos convencionais. A utilização de células imobilizadas é uma alternativa para solucionar tais problemas, pois oferece inúmeras vantagens como maior concentração celular, maior estabilidade e conseqüentemente maior produção. Diante disso, o objetivo deste trabalho, foi selecionar um suporte adequado para a imobilização de Zymomonas mobilis visando aumentar a produção de etanol e levana empregando sacarose como fonte de carbono. Os suportes avaliados foram: alginato, quitosana, bucha vegetal e bagaço de cana. Os melhores parâmetros para a produção de etanol e levana, foram determinados utilizando a metodologia de superfície de resposta (MSR). O primeiro experimento realizado foi 2(5-2) com as variáveis independentes: concentração de sacarose; pH; tempo de incubação; temperatura e agitação do meio de cultura. Com base nas melhores condições observadas no experimento 2(5-2) foi avaliada a capacidade de reutilização dos suportes em fermentações subseqüentes durante 12 dias. A produção de etanol foi determinada pelo método de microdifusão e a levana foi determinada indiretamente em unidades de frutose após hidrólise ácida. A biomassa foi determinada por densidade ótica a 570 nm e a fixação do microrganismo no suporte foi confirmada por microscopia eletrônica de varredura. No experimento 2(5-2), verificou-se que o melhor suporte de imobilização foi a bucha vegetal, a qual apresentou os maiores valores de biomassa imobilizada (2,95 g/L); produção de levana (24,9 g/L) e etanol (50,95 g/L). Para os experimentos com ... / Abstract: Zymomonas mobilis is considered to have high biotechnological potential for ethanol and levan production, because it produces little biomass and shows good tolerance to ethanol concentrations. However, this efficiency can be decreased if the free cells are exposed to unfavorable conditions during conventional fermentations. Cell immobilization is an alternative to solve this problem and offers numerous advantages such as higher cell concentrations, greater stability and improved production. Thus the aim of this work was to select a suitable support for the immobilization of Zymomonas mobilis in order to increase the production of ethanol and levan from sucrose as the carbon source. The optimum values for ethanol and levan production were determined using response surface methodology (RSM). The first experiment was a 2(5-2) design with the following independent variables: sucrose concentration, pH, incubation time, temperature and agitation of the culture medium. Based on the best conditions observed in the 2(5-2) experiment, reuse of the support was evaluated during 12 days of fermentation. Ethanol production was determined by microdiffusion and the levan production on fructose units after acid hydrolysis. The biomass was determined by optical density at 570 nm and microbial growth on the support was verified by scanning electron microscopy. In the 2(5-2) experiment the loofa sponge was the best support for immobilization with the highest values for immobilized biomass (2.95 g/L); levan production (24.9 g/L) and ethanol production (50.95 g/L). In the immobilization support reuse experiments in batch fermentations, all the supports evaluated could be reused for 12 cycles, with the exception of chitosan beads. Sugarcane bagasse was shown to be the best substrate for microbial adhesion (3.23 g/L) and for levan (32.13 g/L) and ethanol production (36.50 g/L). Thus the loofa sponge and sugarcane bagasse represented the most promising support ... / Doutor

Orientadora: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Sérgio Fonseca Zaiden / Resumo: A literatura foi revisada em relação à célula de Sertoli de peixes teleósteos, levando em conta seus aspectos morfofuncionais, sua importância, a terminologia e a interação entre ela e outras células do testículo. No universo de 76 trabalhos pesquisados, foi notado que as células de Sertoli têm função de fagocitose, nutrição das células germinativas, esteroidogênese, participa na formação do cisto de células germinativas, e na formação da barreira hemotesticular. Além dessas funções, nos peixes teleósteos com fertilização interna a célula de Sertoli participa na formação dos dúctulos eferentes e das estruturas especializadas para levar grupos de espermatozóides para dentro do oviduto. A despeito da diferença entre a morfologia e a localização das células de Sertoli de mamíferos, a célula encontrada nos teleósteos foi considerada homóloga à mesma, devido à similaridade de funções / Abstract: The literature was reviewed around the Sertoli cells in teleost fish, regarding their morphological and functional aspects, importance, terminology and interaction with other testis cells. In the 76 reports searched, it was observed that the Sertoli cells have these functions: phagocytose, nutrition of germinative cells, take part in development of germinative cists, development of the hemotesticular barrier and efferent ducts, and formation of the specialized structures to carry the cluster of sperm in the female oviduct of teleost species that have internal fertilization. In spite of the morphological differences and localization of the Sertoli cells of mammals, the cell found in the teleost was considered homologs to this one, because its similarity in functions / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Resumo: O mastocitoma é uma neoplasia caracterizada pela proliferação de mastócitos e corresponde ao tumor cutâneo mais frequente em cães. Seu comportamento biológico extremamente variável dificulta a determinação prognóstica e terapêutica, o que torna necessário a busca por indicadores prognósticos mais confiáveis. As células T regulatórias (Tregs) constituem um subgrupo dos linfócitos T que expressam CD4 e CD25, e são transcritas pelo fator Foxp3. As Tregs, através de seu potencial imunossupressor, regulam as respostas imunes em diversas enfermidades. Do ponto de vista oncológico, elas são responsáveis pela limitação da resposta imune antitumoral, promovendo uma tolerância imunológica às células neoplásicas mastocitárias. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo quantificar, através da citometria de fluxo, a expressão de Tregs e a relação Treg/CD8+ no sangue periférico de cães portadores de mastocitoma cutâneo (n = 18) no momento do diagnóstico. Tais variáveis também foram avaliadas entre diferentes graus histológicos de mastocitoma, segundo classificação de Kiupel et al. (2011). Os resultados mostraram que cães portadores de mastocitoma (8,99 ± 1,15) apresentaram porcentagem significativamente maior (p<0,01) de Tregs do que cães saudáveis (4,71 ± 0,51). Não houve diferença nas quantidades de Tregs obtidas para cães portadores de mastocitoma de alto grau (5,55 ± 1,16) e baixo grau (4,96 ± 0,70). Cães com mastocitoma (0,27 ± 0,04) também apresentaram relação Treg/CD8+ significativamente maior (p = 0,04) do que os cães controle (0,12 ± 0,01). Concluiu-se que o mastocitoma em cães leva a um aumento na população de Tregs no sangue periférico, além de propiciar um aumento na relação Treg/CD8+ / Abstract: Mast cell tumor is a neoplastic proliferation of mast cells which is the most frequent cutaneous tumor in dogs. Its extremely variable biological behavior makes the prognostic and therapeutic determination more difficult, which demands the search for more reliable prognostic indicators. The regulatory T cells (Tregs) are a subset of T lymphocytes that express CD4 and CD25, and are transcribed by Foxp3 factor. The Tregs, through their immunosuppressive potential, regulate the immune responses in several diseases. Regarding the oncological aspects, they are responsible for the limitation of the antitumoral immune response, promoting an immunological tolerance to the neoplastic mast cells. In this context, the current study had the objective to quantify, through flow cytometry, the expression of Tregs and the Treg/CD8+ ratio in the peripheral blood of dogs with cutaneous mast cell tumor (n = 18) at diagnosis. Such variables were also evaluated in different histologic grades of mast cell tumor, according to the grading system proposed by Kiupel et al. (2011). The results indicated that dogs with mast cell tumor (8,99 ± 1,15) showed significantly higher percentage (p<0,01) of Tregs when compared to healthy dogs (4,71 ± 0,51). There was not difference in the quantities of Tregs for dogs with high (5,55 ± 1,16) and low (4,96 ± 0,70) grade mast cell tumor. Dogs with mast cell tumor (0,27 ± 0,04) also presented significantly higher Treg/CD8+ ratio (p = 0,04) when compared to control dogs (0,12 ± 0,01). It was concluded that the mast cell tumor in dogs increases Tregs in the peripheral blood, and also leads to a higher Treg/CD8+ ratio / Mestre