Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T17:45:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_AnaPaulaOttati_D.pdf: 575108 bytes, checksum: c15fa4b5bd43feff857f23fee42d426e (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Neste trabalho investigamos os efeitos do extrato de Chlorella vulgaris (ECV) em animais expostos ao chumbo e infectados com Listeria monocytogenes. Para a realização dos experimentos, camundongos receberam simultaneamente doses do ECV e acetato de chumbo durante 10 dias. Ao final deste período os animais foram infectados. A capacidade do ECV de reverter a mielossupressão induzida pelo chumbo foi demonstrada pelo aumento no número de CFU-GM e restabelecimento do potencial clonogênico das células pluripotentes da medula óssea em culturas de longa duração (LTBMC). A administração da alga aumentou a atividade das células NK e a capacidade proliferativa de linfócitos nos animais expostos ao chumbo e infectados. A eficácia da Chlorella nestes modelos foi demonstrada pela ação quelante do ECV, onde observamos uma redução de 34% nos níveis de metal no sangue quando a alga foi administrada simultaneamente ao chumbo. Além disso, experimentos com camundongos C57BL/6 com deficiência funcional do gene para IFN-g, demonstraram a importância dessa citocina na proteção conferida pelo ECV. O tratamento com o ECV estimulou a secreção de citocinas do tipo Th1 (IL-1, IFN-g e TNF-a) no grupo infectado e normalizou os níveis dessas citocinas nos grupos expostos ao chumbo e infectados/expostos ao chumbo. Da mesma forma, a produção de citocinas do tipo Th2 (IL-6 e IL10) foi significativamente modulada pelo extrato da alga nos grupos expostos ao chumbo, infectados e infectados/expostos ao chumbo / Abstract: In this work, we investigated the effects of Chlorella vulgaris extract (CVE) in lead-exposed and Listeria monocytogenes infected mice. Experiments were carried out in mice treated simultaneously with CVE and lead acetate for 10 days. At the end of this period, the animals were infected. The capacity of CVE to prevent the myelosuppression induced by lead was demonstrated by the increased numbers of CFU-GM in clonal assays and the restored clonogenic potential of pluripotent stem cells in long-term bone marrow cultures (LTBMC). The extract also stimulated NK cell activity and lymphocyte proliferation in lead-exposed and infected animals. A 34% reduction of blood lead levels was observed when CVE was given to mice simultaneously to lead acetate, suggesting a chelating activity of Chlorella. Experiments in mice lacking a functional IFN-g gene demonstrated that this cytokine is of paramount importance in the protection afforded by CVE. The CVE treatment stimulated the secretion of Th1 cytokines (IL-1, IFN-g e TNF-a) in the infected group, and normal levels of these cytokines were determined in the lead-exposed groups. Likewise, the production of Th2 type cytokines (IL-6 and IL-10) was modulated by the algae extract in all groups studied. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Gil Eduardo Serra / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-22T14:32:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_TadeuAlcides_D.pdf: 4774613 bytes, checksum: c7e2b1d0b5fd0d96402e7be8802fc300 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo:Nas destilarias de álcool brasileiras utiliza-se o método de condução da fermentação denominado de "Melle-Boinot", que caracteriza-se pela recuperação e reciclagem de leveduras em ciclos de fermentações subsequentes. Contudo, juntamente com a reciclagem das leveduras ocorre a reciclagem de etanol e de outros componentes, que ao longo do processo ocorre de forma acumulativa. Ao final da fermentação o vinho é passado em centrífugas contínuas de pratos, para a separação do fermento, que contém as células de levedura, e da sua fase líquida que contém todos os componentes do vinho como água, etanol e metabólitos da fermentação, como metanol, propano 1, butanol e álcool amüico. Da mesma forma, em fermentações contínuas o fermento centrifugado apresenta as mesmas características. Assim sendo, o objetivo desse trabalho foi avaliar a interferência do etanol e metabólitos reciclados com o vinho sobre a performance fermentativa. As fermentações foram conduzidas em laboratório empregando-se a levedura Saccharomyces cerevisiae catalogada pela ESALQ/USP como IZ 1904, e mosto preparado a partir de melaço. Foram conduzidos dois ensaios empregando-se mosto com concentrações nominais de 180 e 310g/L de açúcares redutores totais. Os tratamentos empregados foram: a)fermento convencional: recuperação da biomassa de levedura e sua ressuspensão em vinho; b) fermento beneficiado: recuperação de biomassa de levedura e sua ressuspensão em água. A condução do ensaio deu-se ao longo de oito fermentações com sete reciclos de fermento com três repetições de ensaios. Empregando-se a menor concentração de ART no mosto (180g/L) observou-se efeitos discretos dos tratamentos testados. Nesse caso os teores de açúcares redutores residuais (ARR) foram maiores para os inóculos convencionais. Com o emprego de mosto com 310g/L de ART as diferenças foram maiores, destacando-se sempre o inoculo beneficiado. Dos resultados obtidos pode-se concluir que a reciclagem de vinho, através da centrifugação para a recuperação do fermento, ao final da fermentação, recicla também metabólitos que interferem na performance fermentativa. Essa interferência negativa acentua-se ao longo dos reciclos e com o aumento do teor de ART no mosto de alimentação. Os resultados permitem inferir que deve-se estudar uma reestruturação no tratamento do fermento nas destilarias, de acordo com as possibilidades do uso de equipamentos ou processos, que permitam uma melhor separação do vinho das células de leveduras / Abstract: This trial was conducted to evaluate the influence of metabolites presents in wine, from separated materials by Melle-Boinot process in the parameters of alcoholic fermentation simulated in laboratory conditions. The experiments were taken using Saccharomyces cerevisiae (IZ 1904) and juice of molasse from Piracicaba County, State of São Paulo, Brazil, with two contents of Total Reducing Sugars in juice: 180 and 310g/L. The treatments were: yeast dispel in water (optimized culture) and yeast dispel in water and wine (conventional culture). The seven recycles were taken of yeast after the turn on the alcoholic fermentation. Using juice with 180g/L of TRS, the residual sugar contents in wine were greatest when conventional culture was used. Several differences were observed when the content of TRS in juice was 3 lOg/L. From the results it can be concluded which: l)The interference of the wine recycled on the metabolism of yeast is easily detected when the greatest sugar content in juice was used.2)The effects of metabolites on the metabolism of yeasts were verified. It is an indication of which the Melle-Boinot process may be optimized in industrials conditions / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-22T20:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_AlvaroAlbertode_M.pdf: 3284235 bytes, checksum: 332338fb10ce449e8ef87191e25624ac (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: No presente trabalho foram preparadas e caracterizadas partículas de biocatalisador constituídas de células aeróbias viáveis imobilizadas em alginato de densidades variadas. Corno sistema modelo de células aeróbias viáveis foi usado urna linhagem de células do gênero Acetobacter altamente produtora de ácido acético. Os suportes de alginato de densidades variadas foram preparados mediante a adição de diferentes quantidades de a-alumina (material inerte) à matriz do gelo Para assegurar a mesma distribuição de células no biocatalisador preparado, a a-alumina foi confinada em urna região no núcleo das partículas, a qual foi recoberta por urna suspensão concentrada de células em solução de alginato. As partículas com essa configuração e de diâmetros aproximadamente uniformes foram obtidas através de extrusão simultânea de duas soluções de gel de diferentes concentrações, em um ejetor constituído de dois tubos capilares concêntricos. As partículas de biocatalisador foram caracterizadas em função da concentração inicial de células viáveis imobilizadas, estimada através da taxa específica de respiração celular; da densidade das partículas, determinada através da velocidade terminal de queda das mesmas e do seu desempenho no processo de oxidação do etanol a ácido acético em reator de leito fluidizado. O desempenho do biocatalisador foi analisado através do coeficiente volumétrico de transferência de oxigênio gás-líquido, KLa, e da produtividade de ácido acético, Pr, ambos determinados no estado estacionário, com o sistema operando em contínuo. Para caracterizar os efeitos da densidade das partículas na transferência de oxigênio gás-líquido, propõe-se uma correlação empírica entre o coeficiente volumétrico de transferência de oxigênio gás-líquido, a fração sólido-líquido, ES/L' e o número de Reynolds da partícula, Rep. Um modelo matemático simplificado para a predição da produtividade de ácido acético é proposto, considerando a transferência de oxigênio gás-líquido como a etapa limitante do processo. As partículas de biocatalisador apresentaram-se estáveis no processo contínuo em biorreator de lei to fluidizado. Partículas mais densas promoveram maiores taxas de transferência de oxigênio da fase gasosa para o meio líquido e, por conseguinte, maiores produtividades de ácido acético. Os resultados obtidos demonstram a potencialidade biocatalisador preparado com partículas mais densas de gel alginato para o uso em processos com células aeróbias viáveis / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Maria Luiza S. Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T01:07:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_JoaoFlavioPanattoni_M.pdf: 1565897 bytes, checksum: 4fb6eebdac2cbbdd70e0ae1e5155148e (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A incidência de patologias do complexo DNA-proteína, medida pelo método de metacromasia induzida, bem como os parâmetros vigor e motilidade, foram estudados em espermatozóides de touro provenientes de 42 partidas seminais congeladas a partir de 1973 a 1995. Os resultados indicam que esses parâmetros diferem estatisticamente para grupos de sêmen criopreservados por tempos diferentes. As anomalias no complexo DNA-proteína foram mais elevadas para as partidas de 1973 e 1974, diferindo de todas as demais, que por sua vez não diferiram entre si. Admite-se que o tipo de envasamento e o diluidor do sêmen tenham alguma participação nesses resultados, pois apenas as partidas de 1973 e 1974 foram envasadas em ampolas. Quanto aos parâmetros vigor e motilidade, houve diminuição nos seus valores, em função do aumento no tempo de criopreservação, porém não diretamente correlacionada ao tipo de envasamento. Especialmente para o parâmetro vigor foi observada uma distribuição não simétrica de valores inclusive para tempos de criopreservação mais recentes, como 1991 a 1995. Considerando-se que as técnicas de congelação e descongelação utilizadas neste período são muito semelhantes entre si, acredita-se que a existência de partidas seminais que apresentem vigor e motilidade muito abaixo da média do grupo possa ocorrer devido a condições de manutenção da congelação fora do padrão ideal, como por exemplo, utilizando-se níveis insatisfatórios de nitrogênio líquido no botijão de armazenamento de sêmen ou por manipulação excessiva ou inadequada das partidas seminais durante o período de criopreservação, causando exposição das mesmas à temperatura ambiente por tempo excessivo. Os dados levantados sugerem cautela na utilização de sêmen criopreservado por tempos muito longos, especialmente se associado a isto tiver sido utilizada a técnica de preservação e envasamento mais antiga. Cuidados adicionais de preservação deverão ser mantidos / Abstract: The incidence of the DNA-protein complex pathologies, measured by induced metachromasy method, as welI as vigor and motility pattems, were studied in bulI sperm from 42 ftozen batches from 1973 to 1995. Results indicate that these parameters differ statistically for cryopreserved semen groups in accord to different time. Complex DNA-protein anomalies were higher for 1973 and 1974 batches, differing ftom alI the remaining, which in tum did not differ among themselves. It is acknowledged that storage type and semen dilutor have some participation in these results because on1y 1973 and 1974 batches were stored in ampules. Decrease was shown in the amounts of vigor and motility parameters, as a function of increase in cryopreservation time, however, not direct1y correlated to storage type. A non-symmetric distribution of amounts was observed especially for vigor parameter, inc1uding more recent cryopreservation time as 1991 to 1995. Considering that the fteezing and thawing techniques used by both groups during this period are very similar it is assumed that the existence of seminal batches showing vigor and motility much below group's average could be due to not maintaining ideal freezing conditions, for instance , using unsatisfying levels of liquid nytrogen in the semen storage tank or due to excessive or inadequate manipulation of semen batches during cryopreservation period, causing their exposure to environmental temperature for excessive time. ColIected data suggest caution when using cryopreserved semen for very long periods of time especialIy if the older preservation and storage technique has been utilized associated to it. Additional preservation measures need to be kept / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Ranulfo Monte Alegre / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T09:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parente_AnaCatarinaGomes_M.pdf: 3129195 bytes, checksum: 4ec831904e09767661681a08cf4e8f4b (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O processo de tratamento de águas residuárias por lodo ativado em reator batelada seqüencial (RBS) apresenta várias vantagens: grande flexibilidade de operação; é apropriado para tratar efluentes com variação de carga hidráulica e orgânica e apresentam excelente razão custo/benefício, razões pelas qual o interesse por sua utilização tem aumentado nos últimos anos. No presente trabalho estudou-se o tratamento de águas residuárias sintéticas por lodo ativado em reator RBS, com longo tempo de aeração, após completado o volume final do reator. Observou-se que houve aumento da concentração de sólidos suspensos na fase de alimentação do reator e diminuição na fase aerada sem alimentação (25 a 45 horas). Em vários experimentos a concentração final de sólidos foi menor que a inicial; porém, como o volume final foi o dobro do inicial, a massa final de sólidos sempre foi maior que a inicial. Em dois pares de experimentos foi necessário descartar sólidos antes de iniciar novo experimento. Houve casos em que a concentração da Demanda Química de Oxigênio (DQO) aumentou no final da etapa aerada sem alimentação, provavelmente como conseqüência de ter ocorrido respiração endógena e autólise celular. Foram utilizadas três concentrações de alimentação de DQO (2464,67; 3365,379 e 5245,456 mg/l) e a concentração final de sólidos suspensos, concentração final de DQO, pH e índice volumétrico de lodo (IVL) variaram de 808,70 a 3478,72; 117,31 a 833,33 mg/l; 6,2 a 7,8 e 15,63 a 70,27 g/ml respectivamente. A taxa específica de crescimento celular na fase de alimentação apresentou valores altos e uma grande variação (0,095 a 0,392 h-1), devido ao fato de que nesta fase a fração mais biodegradável do substrato foi consumida rapidamente. A constante de velocidade de redução de DQO também apresentou valores altos na fase de alimentação (0,17 a 4,94 h-1), como conseqüência da alta velocidade de consumo de substrato e o modelo proposto de primeira ordem não ter apresentado bom ajuste. Na fase aerada sem alimentação, a constante de velocidade de redução de DQO variou de 0,003 a 0,146 h-1 e o coeficiente de morte celular de 0,003 a 0,062 h-1, sendo a maior eficiência de redução de DQO obtida de 93,52 % com vazão de alimentação de 264 ml/h, concentração de alimentação de DQO de 3365,379 mg/l em 50 horas de tratamento / Abstract: The use of activated sludge in sequential batch reactors (SBR's) for wastewater treatment has been a subject of growing interest in the last few years due to the advantages it shows over other currently employed processes. It is only suitable for treating streams with variations in both the flow rate and organic load, and also presents a high operation flexibility as well as an excellent cost/efficiency ratio. In the present work activated sludge in SBR's was employed to study synthetic wastewater treatment with long aeration time, typically 25 to 45 hours, after reactor feeding. It was observed an increase in the suspended solids concentration at the end of the aerated feed stage, accompanied by its decrease during the aeration stage without feed. In many experiments the final concentration of suspended solids was lower than that measured at the beginning but, as the final volume was twice the initial one, the final mass of suspended solids was always higher. Moreover, in four experiments, it was necessary to discharge the excess of activated sludge before starting a new set of experiments. Also, in some cases, there was an increase in the chemical oxygen demand (COD) levels at the end of the aeration stage, probably due to endogenous respiration and cellular autolysis. For three different COD levels of feeding (2,464.67; 3,365.379 and 5,245.456 mg/l), the final concentration of suspended solids, final COD level, pH and sludge volume index (SVI) varied between 808.70 and 3,478.72 mg/l, 117.31 and 833.33 mg/l, 6.2 and 7.8, and 15.63 and 70.27 g/ml, respectively. The specific growth rate in the feed stage showed high values as well as a large variation (0.095 to 0.392 h-1) due to the fact that, in this stage, the most biodegradable substrate fractions were quickly consumed. Similarly, high values for the COD reduction rate constant in the feed step (0.17 to 4.94 h-1) were observed, as a consequence of rapid substrate consumption and the fact that the first order mathematical model, chosen previously to describe the process, did not prove to be suitable. In the aeration stage without feed, the COD reduction rate constant varied between 0.003 and 0.062 h-1, while the cellular decay constant was in the range of 0.003 to 0.062 h-1. The highest efficiency value for the COD reduction (93.52%) was observed for a flow rate of 400ml/h and a COD of 3,365.739 mg/l after 50 hours of treatment / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T07:05:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kota_DanielJiro_M.pdf: 555074 bytes, checksum: 910a5d4735f12d01edac8766de74e9c5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A bactéria Enterobacter cloacae tem se destacado como importante agente de infecção hospitalar, muitas vezes levando ao óbito de pacientes imunodeprimidos. Estudando as propriedades de virulência desta bactéria em nosso laboratório, foi detectado que 18% das amostras estudadas demonstraram atividade citotóxica sobre células Vero. A citotoxina, de peso molecular de 100 KDa, foi purificada da amostra com maior atividade citotóxica (118.9) por cromatografia de troca iônica e exclusão molecular, não mostrou atividade letal em camundongos e não causou acúmulo de fluido em intestino de camundongos recém-nascidos. Além disso, não apresentou atividade leucotóxica. Quanto à sua propriedade hemolítica, constatou-se que a toxina purificada apresentou atividade hemolítica sobre eritrócitos de coelho, carneiro e boi, sendo não hemolítica sobre eritrócitos humanos, com presença ou ausência de ~mercaptoetanol. O mecanismo de ação desta toxina parece estar relacionado com o comprometimento da mitocôndria, o que ativaria a via apoptótica e a lise da membrana das células Vero. Quand~ aquecida por 100°C por 30 minutos, esta perdeu toda sua atividade citotóxica, demonstrando ser termolábil. Apesar da similaridade em sua citotoxicidade sobre as células Vero com os efeitos causados por verotoxinas, os genes STX (Shiga-Toxin) 1 e 2 e VT (Verotoxin)1 e 2, característicos de verotoxinas, não foram amplificados pela PCR / Abstract: The bacterium Enterobacter cloacae has been recognized as an important infectious agent in hospitaIs, sometimes leading patients to obit. Studying its virulence properties in our laboratory, 18% of the strains were characterized as cytotoxic against Vero cells. The cytotoxin was purified from the most cytotoxic strain (118.9) by means ionic exchange and molecular exclusion chromatography techniques respectively, increasing its relative activity in 62.5%. The purified toxin did not display either lethal activity nor did it cause fluid accumulation in neonatal mice intestine. Furthermore, no leukotoxic activity was detected and regarding its hemolytic activity, the purified toxin showed hemolytic activity against rabbit, bovine and sheep erythrocytes, but not against human erythrocytes, with or without beta-mercaptoethanol. The toxicity mechanism seems to be associated with a failure in the mitochondria's function, which would activate the apoptotic pathway and membrane lyses. When heated for 100°C for 30 minutes, the toxin lost completely its cytotoxicity. Despite the fact that the toxin displayed similar effects in Vero cells compared to verotoxins, PCR did not amplified the STXl and -2 and VTl and 2 genes, found in verotoxin expressing strains / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Paulo Correa Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:45:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_MatheusPinotti_M.pdf: 608462 bytes, checksum: c319342a5d3bf7ac8ad1819f8e89c76a (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientador : Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:12:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Avancini_RitaMariaPereira_D.pdf: 3157954 bytes, checksum: d5d7b827a0faad06d88206cde7070cb9 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Os núcleos das células tróficas proximais de ovário de Chrysomya putoria, nas diferentes fases do desenvolvimento ovariano, foram examinados em preparações submetidas à reação de Feulgen. Tinha-se como objetivo conhecer as alterações cromatínicas/cromossômicas durante o desenvolvimento das células relacionadas ao processo de formação dos ovos. A alteração mais marcante encontrada foi a organização do material cromatínico sob a forma de cromossomos politênicos típicos. Nessa fase são vistas 6 unidades cromossômicas, nas quais, em determinado momento do seu processo de compactação, pode ser visualizado o padrão de bandas e interbandas característico de politênicos de dípteros. Após essa fase, os cromossomos tornam-se mais e mais encurtados, até que, quando todos apresentam praticamente o mesmo comprimento, os filamentos começam a se separar, originando numerosas unidades, de tamanhos diferentes entre elas que, espalham-se por todo o espaço nuclear. A partir daí, até o final do desenvolvimento, o núcleo tem aparência interfásica, apresentando um ponto heterocromático fortemente corado. A porção eucromática do cromossomo X sofre descompactação precoce, em relação aos autossomos e à sua própria porção heterocromática. Se a fêmea adulta estiver sob uma dieta de açúcar e água, os cromossomos politênicos podem permanecer como tal por um período muito mais longo do que quando sob dieta padrão. Através de microespectrofotometria mostrou-se que os núcleos tornam-se altamente endopoliplóides durante a ovogênese, atingindo o valor máximo de 2048 C, resultado de 10 ciclos de duplicação do DNA. Valores menores, a cada fase, foram obtidos nos núcleos distais, mostrando que há assincronia nos ciclos endorreplicativos das diferentes células tróficas do folículo. O volume ocupado pela cromatina corada aumenta cerca de 12 a 15 vezes durante o desenvolvimento. Os valores Feulgen-DNA bem como a área ocupada pelo corpo heterocromático não acompanham, proporcionalmente, o crescimento do restante da cromatina. As células epitelias do folículo mostraram tornarem-se também endopoliplóides, passando por até 4 ciclos de replicação, após o início da vitelogenese / Abstract: The nuclei of proximal nurse cells of the ovary of Chrysomya putoria in the different stages of ovarian development were examined in preparations submitted to the Feulgen reaction. The objective was to follow the chromatin/chromosomal alterations occurring during the development of those cells involved in the process of egg formation. The most marked alteration encountered was the organizatian of the chromatin in the form of typical polytene chromosomes. In this stage 6 chromosomes could be seen, in which, at a specific point in their process of compactation, the pattern of bands and interbands characteristic of dipteran polytene chromosomes, could be seen. After this stage the chromosomes became increasingly shorter until, when all were practically the same length, their constituent filaments began to separate and scatter throughout the nuclear space. From this point on, up to the end of development, the nucleus exhibited an interphasic appearance, presenting one strongly staining heterochromatic body. The euchromatic region of the X chromosome underwent premature decompactation as compared to the autosomes and to its own heterochromatic segment. If the adult female were maintained on a sugar and water diet, the polytene chromosomes would remain as such for a much longer period than when maintained on a standard diet. Microspectrophotometry showed that the nuclei became highly endopolyploidy during oogenesis, attaining a maximum value of 2048 C, resulting from 10 cycles of DNA duplication. At each stage, lower values were found in the distal nuclei, showing the existence of asynchrony in the endoreplicative cycles of the different nurse cells of the follicle. The volume occupied by the stained chromatin increased 12 or 15 times during development. Neither this Feulgen-DNA values nor the area occupied by the heterochromatic body proportionally followed the growth of the rest of the chromatin. The epithelial cells of the follicle also showed endopolyploidization, passing through up to 4 cycles of replication after the start of vitellogenesis / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador: Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torsoni_AdrianaSouza_D.pdf: 11780689 bytes, checksum: df0db8e2a1746ca552768be3fb477c68 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Uma variedade de estímulos, como a sobrecarga hemodinâmica, pode levar a um aumento de tensão mecânica em cardiomiócitos, que normalmente é compensado pelo desenvolvimento de um fenótipo hipertrófico. A resposta inicial à sobrecarga é caracterizada por uma rápida e coordenada ativação de vias de sinalização intracelulares que regulam a expressão gênica e culminam com o crescimento hipertrófico de cada cardiomiócito. A importância relativa de cada elemento que participa das vias de sinalização e sua contribuição para as alterações adaptativas observadas nos miócitos cardíacos em resposta à sobrecarga pressora têm sido o foco de diversas pesquisas. No presente estudo, investigamos a ativação e localização subcelular da FAK em miócitos ventriculares de ratos neonatos (MVRN) submetidos a ciclos de estiramento, além da sua participação na ativação do gene do fator natriurético atrial (ANF). O estiramento pulsátil dos cardiomiócitos, de 5 a 20%, por períodos de 10 a 120 minutos, levou a um aumento da fosforilação da FAK no seu resíduo de tirosina 397, conforme detectado pelo anticorpo fosfoespecífico. Tal ativação foi paralela com uma alteração na localização da Fak em MVRN que, da região perinuclear em miócitos não estirados, passou a distribuir-se ao longo dos miofilamentos, como agregados protéicos, em células estiradas. Além disso, 4 horas de estiramento pulsátil aumentou a atividade do gene repórter da luciferase contendo o promotor do ANF. A interrupção da sinalização pelo complexo endógeno Fak/Src, seja pela expressão de um mutante negativo de Fak, onde a tirosina foi substituída por fenilalanina no resíduo 397, ou pelo tratamento com um inibidor farmacológico da c-Src, diminuiu severamente a ativação da Fak e sua redistribuição ao longo dos miofilamentos, mediados pelo estiramento, além de inibir a ativação do gene do ANF. No entanto, a expressão de um mutante selvagem de Fak potencializou a fosforilação dessa quinase, induzida por estiramento, sem alterar a expressão gênica do ANF, em comparação aos MVRN não transfectados...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: A variety of stimuli, such as hemodynamic overload, can lead to an increase in mechanical stress on cardiomyocytes that can be compensed by the development of a hypertrophyc phenotype. The hypertrophyc response is characterized by a rapid and coordinate activation of intracellular signaling pathways that regulate gene expression and results in a hypertrophyc growth of cardiac myocyte. The relative importance of each element that participate of signaling pathway and its contribution for the adaptative changes observed in cardiac myocyte in response to pressure overload, has been the focus of diverse researches. In the present study we investigated the Fak activation and subcellular localization in neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs) submitted to pulsatile stretch, instead its participation in the atrial natriuretic factor (ANF) gene activation 5% to 20% (10-120 minute) pulsatile stretch of NRVMs lead to an increase of Fak phosphorylation at Tyr-397, as detected by phosphospecific antibody. This activation was accompanied by a change in Fak localization in NRVMs that, of the perinuclear regions in nonstretched cells change to aggregates regularly distributed along the myofilaments in stretched cells. Furthermore, a 4-hour cyclic stretch enhanced the activity of the ANF promoter-luciferase reporter gene. Disrupting endogenous FaklSrc signaling either by expression of a dominant-negative Fak mutant with phenylalanine substituted for Tyr-397 or by treatment with a c-Src pharmacological inhibitor markedly attenuated stretchinduced Fak activation and its redistribution at myofilaments and inhibited stretch-induced ANF gene activation...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Ingeniero Civil en Química / Ingeniero Civil en Biotecnología / Debido a la gran demanda de proteínas recombinantes y en particular de anticuerpos para el uso terapéutico en humanos, se busca optimizar los cultivos celulares para obtener mayor producción de proteínas y menores costos de producción. Uno de los métodos utilizados en el mejoramiento de los cultivos es la ingeniería celular donde, mediante la inserción o eliminación de un gen, se modifican las vías metabólicas de las células. Las líneas celulares animales tienen la desventaja de que su metabolismo es incapaz de oxidar la glucosa completamente a CO2 y H2O. La mayor parte de la glucosa, es oxidada a piruvato y finalmente a lactato, el que tiene un impacto negativo en el crecimiento celular y en la producción de proteínas. El trabajo consistió en caracterizar los clones CHO MDHII y CHO PYC generados a partir de una línea celular CHO productora de IgG, que sobreexpresan los genes MDHII y PYC2 las cuales han mostrado mejorar la eficiencia del metabolismo en otras líneas celulares, produciendo menos lactato y aumentando el flujo de carbonos desde la glicólisis hacia el ciclo del TCA. Para ello fue necesario hacer una selección previa de clones, de tal forma de escoger a los que presentaran mayor productividad específica de IgG y mayor eficiencia metabólica, caracterizada por valores bajos de producción de lactato por glucosa consumida (ΔL/ΔG). Luego se procedió a realizar las curvas de crecimiento para los clones y las células CHO wild-type que se utilizó como control. Para la caracterización del metabolismo, se midió la glucosa consumida, la producción de lactato, IgG y amonio, y se calcularon las tasas de consumo y producción de los metabolitos. La caracterización de la expresión transcripcional se realizó mediante un PCR en tiempo real, para el que fue previamente necesario extraer el RNA de las muestras, seguida de la síntesis de cDNA. Los resultados mostraron una menor producción de biomasa y anticuerpo IgG en los clones en comparación al control CHO wild-type, debido a un aumento inesperado en la producción de este último. Por otro lado, sí fue posible demostrar una mayor eficiencia metabólica de los clones debido a la disminución en la producción de lactato, en el caso del clon CHO MDHII y a una menor diferencia entre las tasas de producción de lactato y consumo de glucosa, en el clon CHO PYC. Al comparar las eficiencias de ambos clones, las células CHO MDHII mostraron una mayor eficiencia metabólica lo que se debería a un mayor flujo de carbonos desde la glicólisis al ciclo del TCA. Se cree que el clon CHO PYC no mostró una mayor eficiencia metabólica debido a que se generaría una acumulación de malato que no podría ser procesada por la enzima MDHII en el ciclo del TCA. Los cálculos de productividad específica de IgG demostraron que la producción de proteína recombinante estaría asociada al crecimiento celular y se cree que el consumo de glutamina cumpliría un rol importante en la producción de biomasa e IgG debido a que se obtuvieron mayores concentraciones de amonio en las células con mayor densidad y producción de proteína. El análisis de la expresión transcripcional no permitió detectar diferencias en la amplificación de los genes MDHII y PYC2, principalmente debido a la variación en los resultados obtenidos y a que no fue posible amplificar un producto específico para el gen PYC2. Del trabajo se puede concluir que el clon CHO MDHII presentó una mayor eficiencia metabólica debido a la menor producción de lactato y exhibió mayor producción de biomasa e IgG que el clon CHO PYC. Para comprender mejor el comportamiento de estos clones, se debe llevar a cabo un estudio de los flujos en las vías metabólicas y buscar métodos de cultivo que optimicen el crecimiento celular y la producción de proteína, para obtener el máximo beneficio de los clones. Por otro lado, es importante que en el proceso de la selección de clones, la productividad de proteína recombinante de los clones se compare con una muestra control, de tal manera de verificar que estos presentan una mejora. Además se deben seleccionar los clones que presenten una mayor densidad celular y menor producción de lactato, ya que se ha visto que estas características mejoran la productividad.