O sistema bombesina / peptídeo liberador de gastrina (gastrin-releasing peptide - GRP) está implicado na regulação de vários aspectos neurofisiológicos e comportamentais. Em ambos estudos aqui reportados utilizamos o antagonista dos receptores GRP, (D-Tpi6, Leu13 psi[CH2NH]-Leu14) bombesin (6-14), RC-3095, como ferramenta farmacológica para ampliar o conhecìmento sobre a ação do sistema bombesina / GRP na memória na amígdala basolateral (ABL) e hipocampo. No primeiro estudo demonstramos que os receptores GRP na ABL estão envolvidos na memória aversiva. Ratos Wistar machos adultos foram treinados em tarefa de esquiva inibitória de teste único e avaliados 24 horas após para a retenção da memória. No primeiro experimento, a administração sistêmica do RC-3095 após o treino causou redução da retenção da memória. No segundo experimento, a microinfusão póstreino bilateral de RC-3095 intra-amigdaliana reduziu de maneira dose-dependente a retenção da tarefa. Consistentemente, quando a ABL foi inativada funcionalmente com o agonista GABAérgico muscimol, no terceiro experimento, o efeito da admnistração sistêmica do RC-3095 foi bloqueado. Estes resultados sugerem que a ABL medeia o efeito de inibição da memória aversiva causado pelo bloqueio de receptores GRP. No segundo estudo avaliamos o papel dos receptores GRP no hipocampo dorsal de ratos no medo inato e na formação da memória aversiva. Os ratos receberam microinfusões bilaterais de salina ou RC-3095 no hipocampo dorsal cinco minutos antes do treino em tarefa de esquiva inibitória, sendo testados 24 horas após para a retenção. Foi utilizada esquiva inibitória de múltiplos testes, e o RC-3095 não afetou a aquisição da tarefa; a retenção foi prejudicada na dose de 0,4 μg. Entretanto, em avaliação no aparato do labirinto em cruz elevado, o RC-3095 não demonstrou ter afetado o medo inato ou ansiedade. Em resumo, nossos experimentos indicam que os receptores GRP na amígdala basolateral e hipocampo estão envolvidos na consolidação da memória aversiva em ratos, e que a ABL é uma região crucial na mediação dos efeitos inibidores de memória do antagonista GRP RC-3095. / The bombesin / gastrin-releasing peptide (GRP) receptor system has been implicated in regulating several neurophysiologic and behavioral aspects. In both studies here reported we used the GRP receptor antagonist D-Tpi6, Leu13 psi[CH2NH]-Leu14 bombesin (6-14), RC-3095, as a pharmacological tool in order to extend the knowledge about the actions of bombesin / GRP system in the basolateral amygdala (BLA) and hippocampus in memory. In the first paper we show that GRP receptors in the BLA are involved in the consolidation of aversively motivated memory. Adult Wistar male rats were trained in a single-trial step-down inhibitory avoidance task and tested for retention 24 hours later. In the first experiment, post-training systemic injection of RC-3095 impaired memory retention. In the second experiment, post-training bilateral microinfusion of RC-3095 into the BLA dose-dependently impaired retention. Consistently, when BLA was functionally inactivated by the GABAergic agonist muscimol, in the third experiment, the memoryimpairing effect of RC-3095 was blocked. These results suggest that BLA mediates the memory-impairing effect of GRP receptors. Next, reported in the second paper, we evaluated the role of GRP receptors in the rat dorsal hippocampus in formation of fear-motivated memory and innate fear. Adult male Wistar rats were given a bilateral microinfusion of saline or RC-3095 into the dorsal hippocampus 5 minutes before they were trained in a continuous multiple trial inhibitory avoidance task, and tested 24 hours later. RC-3095 did not affected acquisition, but at the dose of 0,4 μg impaired retention test performance. RC-3095 did not affect innate fear and anxiety assessed in an elevated plus maze. In summary, our experiments indicate that GRP receptors in BLA and hippocampus are involved in regulating aversive memory consolidation in rats, and that the BLA is a crucial area mediating the memory-impairing effects of the GRP antagonist RC-3095.

β–alanina é um β-aminoácido derivado da degradação da pirimidina uracila. Em altas concentrações desenvolve uma desordem muito rara da via de degradação das pirimidinas, conhecida como β–alaninemia. O acúmulo do β–aminoácido pode causar consequências bioquímicas como: depleção dos níveis de taurina, aumento de espécies reativas e excreção aumentada de GABA. Essas alterações levam a um distúrbio no desenvolvimento neurológico, contribuindo para a patologia da doença. A β–alanina também é utilzada como suplemento nutricional por atletas visando melhor desempenho físico. Em nosso estudo avaliamos o efeito in vitro e in vivo da β–alanina sobre alguns parâmetros de estresse oxidativo em córtex cerebral e cerebelo de ratos Wistar de 21 dias de idade. Os animais receberam três injeções subcutâneas de β–alanina (300 mg/Kg de peso corporal) e os controles receberam o mesmo volume de solução salina (NaCl 0.85%) em intervalos de três horas. Nos experimentos in vitro verificamos a influência de diferentes concentrações de β–alanina (0,5 e 1.0 mM), onde observamos que o β–aminoácido possui capacidade de alterar a homeostasia das enzimas antioxidantes CAT e SOD, pois em ambos tecidos estudados a atividades da CAT foi inibida e da SOD aumentada na concentração mais alta (1,0 mM). Verificamos que a β–alanina in vitro diminui a oxidação do DCFH em cerebelo e aumenta o conteúdo total de GSH em cortéx cerebral, não alterando os outros parâmetros analisados, entretanto, não foi o observado na administração aguda de β–alanina. Nos experimentos in vivo observamos que o DCFH juntamente com o conteúdo total de tióis aumentaram nos dois tecidos estudados. Não observamos diferença significativa quanto aos níveis de GSH e TBARS. O mecanismo de ação da β–alanina sobre a atividade das enzimas antioxidantes foi diferente nos dois experimentos, pois no modelo agudo a atividade da CAT aumentou, no entanto, a atividade da SOD foi inibida pela β–alanina em cortéx cerebral e cerebelo. Portanto, observamos que a β–alanina altera a atividade das enzimas antioxidantes, aumentando com isso o conteúdo de espécies reativas e gerando possivelmente estresse oxidativo. Esses achados podem contribuir em partes com as alterações neurológicas encontrada em pacientes com β–alaninemia. Além disso, os possíveis efeitos secundários da suplementação nutricional de β-alanina necessitam de mais atenção. / β–alanine is an β-amino acid derived from the degradation of pyrimidine uracil. In high concentrations develops a very rare disorder of pyrimidine degradation pathway, known as β-alaninemia. The accumulation of β-amino acid can cause biochemical consequences such as: depletion of taurine levels, increase of reactive species and increased excretion of GABA. These conditions may cause neurological disturbances, contributing to the pathology of the disease. The β-alanine is also used as a nutritional supplement by athletes seeking to improve physical performance. In this study we evaluated the in vitro and in vivo effects of β-alanine on some parameters of oxidative stress in cerebral cortex and cerebellum of 21-day-old rats. The animals received three peritoneal injections of β-alanine (300 mg /Kg of body weight) and the controls received the same volume of saline solution (NaCl 0.85%) at 3 hours intervals. In vitro experiments verified the influence of different concentrations of β-alanine (0.5 and 1.0 mM), where we observe that the β-amino acid has the ability to alter the homeostasis of enzymes SOD and CAT antioxidant, since in both tissues studied was inhibited activities of CAT and SOD increased at the highest concentration (1.0 mM). We found that the in vitro β-alanine decreases the oxidation of DCFH in cerebellum and increases the total content of GSH in cerebral cortex, without altering other parameters, however, was not observed in the acute administration of β-alanine. In vivo experiments we observed that the DCFH along with the entire content of thiols increased in both tissues studied. No significant difference in the levels of GSH and TBARS. The mechanism of action of β-alanine on the activity of the antioxidant enzymes was different in the two experiments, in acute model of CAT activity increased, however, SOD activity was inhibited by β-alanine in cerebral cortex and cerebellum. Therefore, we found that β-alanine alters the activity of enzymes antioxidants, thus increasing the content of reactive species and possibly generating oxidative stress. These findings may in part contribute to the neurological alterations found in patients with β-alaninemia. Besides, possible side effects of the nutritional supplementation of β-alanine need more attention.

A amígdala medial póstero-dorsal (AMePD) é um subnúcleo da amígdala medial (AMe) que participa do controle do comportamento reprodutivo em mamíferos (HEEB e YAHR, 2000; SIMMONS e YAHR, 2003). O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito da microinjeção do ácido gama-aminobutírico (GABA), somatostatina e histamina na AMePD no comportamento sexual de ratos machos. Foram utilizados 25 ratos Wistar, com cerca de 3 meses de idade, mantidos em laboratório e em condições padrão, com água e comida ad libitum, temperatura em torno de 22o C e ciclo claro/escuro de 12 h cada. Depois que os ratos passaram por um registro da atividade copulatória pré-microinjeção, os animais foram anestesiados e submetidos à cirurgia estereotáxica para a colocação unilateral da cânula-guia no encéfalo do rato situada a 2 mm da AMePD direita. Cinco dias após as microinjeções, os ratos foram microinjetados com solução fisiológica (n = 6), de GABA, na dose de 100 μg (n = 7), de somatostatina na dose de 1μM (n = 4) ou de histamina na dose de 100 nM (n = 8). Após 10 minutos de realizadas as microinjeções, fêmeas receptivas eram colocadas com os machos, quando, então, eram analisadas a latência e a freqüência dos seguintes comportamentos: investigação genital, monta sem movimentos pélvicos, monta com movimentos pélvicos, intromissão, ejaculação e período refratário pós-ejaculação. A seguir os animais eram perfundidos por via transcardíaca, seus encéfalos eram removidos e seccionados em cortes coronais em vibrátomo. Tais secções foram analisadas histologicamente e somente os animais com a localização exata das microinjeções na AMePD foram usados. A mediana e os intervalos interquartis da latência e freqüência dos comportamentos analisados para os grupos que receberam solução fisiológica, GABA, somatostatina e histamina foram comparadas pelo teste de Mann- Whitney. Os dados dos comportamentos antes da cirurgia (controle pré-injeção) e após a microinjeção na AMePD, em cada grupo experimental, foi submetida ao teste não-paramétrico de Wilcoxon. As comparações entre os 4 grupos experimentais em período pré-microinjeção e após as microinjeções foram feitas pelo teste nãoparamétrico de Kruskal-Wallis. Os percentuais de modificação de cada parâmetro comportamental estudado como resultado das microinjeções na AMePD, calculados como a relação “valor obtido no teste pós-microinjeção menos o valor obtido no teste pré-microinjeção dividido pelo valor obtido no teste pré-microinjeção multiplicado por 100” (pós-pré/pré x 100), foram transformados (como log10) e comparados entre os 4 grupos experimentais pelo teste da análise da variância (ANOVA) de uma via complementado pelo teste de Dunnett (o grupo que recebeu salina serviu como controle para as comparações post hoc dos efeitos das microinjeções). Os valores calculados para “índice copulatório”, “eficiência copulatória” e “intervalo interintromissões” para os dados obtidos pós-microinjeções na AMePD nos 4 grupos experimentais foram submetidos ao teste da ANOVA de uma via e, quando necessário, pelo teste post hoc de Tukey. O nível de significância foi estabelecido em p< 0,05. Nos ratos que receberam a microinjeção de GABA ocorreram diferenças significativas nos comportamentos de latência para investigar os genitais (p = 0,02), na freqüência de investigar os genitais (p = 0,01), na latência para montas com movimentos pélvicos (p = 0,02) e na latência para intromissão (p = 0,04) sendo todos com valores menores quando comparados com os valores pré-microinjeção em cada grupo respectivo. A variação percentual da latência para investigar os genitais mostrou uma diferença significativa entre os grupos para animais microinjetados com GABA quando comparado com o grupo controle (valores menores; p = 0,02). Esses resultados mostram uma ação de facilitação na fase pré-copulatória do comportamento sexual masculino promovida por neurônios gabaérgicos. Nos ratos que receberam a microinjeção de somatostatina ocorreram diferenças significativas na variação percentual para os comportamentos de latência para montas com movimentos pélvicos (p = 0,03) e na latência para intromissões (p = 0,03) ambos com valores menores e quando comparados com o grupo controle. Os animais que receberam somatostatina na AMePD também demonstraram uma tendência em diminuir a latência para montas com movimentos pélvicos (p = 0,06), para a latência e freqüência de para intromissões (p = 0,06) quando comparados com os valores pré-microinjeção em cada grupo respectivo. Desse modo, a somatostatina parece estimular o comportamento sexual de ratos machos e, da mesma forma que o GABA, podem estar atuando na inibição de neurônios do AMePD que, por sua vez, sejam eferências inibitórias para outras áreas encefálicas envolvidas na atividade copulatória de machos. A microinjeção de histamina gerou diferenças significativas na freqüência de montas sem movimentos pélvicos nos grupos pré-microinjeção (p = 0,01) e pós-microinjeção (p = 0,05) quando comparados entre os grupos experimentais. Na comparação com os valores pré-microinjeção em cada grupo respectivo, os animais microinjetados com histamina demonstraram diferença significativa da latência para a ejaculação. Além disso, tal neurotransmissor relacionou-se com uma tendência à diminuição nos valores obtidos para freqüência de ocorrência do comportamento de investigar os genitais (p = 0,06). Os presentes dados sugerem que as três substâncias que potencialmente poderiam estar inibindo a gênese ou modulando para menos a emissão do comportamento sexual de ratos machos não geraram os efeitos esperados inicialmente indicando que o papel no comportamento sexual feito pelo AMePD parece ser muito mais modulatório do que crucial para a atividade copulatória de machos.

O núcleo medial da amígdala é uma estrutura sexualmente dimórfica no encéfalo de ratos e está dividida em quatro subnúcleos, um deles é o póstero-dorsal (MePD). O MePD está sob ação epigenética exercida pelos esteróides sexuais em ambos os sexos e, dada sua hodologia, modula diversos comportamentos sociais como é o caso dos reprodutivos. Os espinhos dendríticos representam locais preferenciais para contato sináptico nos neurônios e a plasticidade neural. Não obstante, não está descrito ainda o efeito da lateralidade hemisférica na densidade de espinhos dendríticos no MePD de ambos os sexos. E nem se há diferenças nos espinhos dendríticos dentro deste subnúcleo nas regiões dorsal e ventral em fêmeas, uma vez que existem diferenças quanto à expressão de receptores para estrogênio nesses locais. O presente trabalho teve por objetivos estudar a densidade de espinhos dendríticos no MePD dos lados direito e esquerdo de machos e fêmeas em diestro, e estudar a densidade de espinhos dendríticos nas regiões dorsal e ventral do MePD de ratas na fase de proestro. Foram utilizados ratos Wistar adultos (n = 6 animais em cada grupo) cujos encéfalos foram processados de acordo com variação da técnica de Golgi. Neurônios bem impregnados pela prata e indubitavelmente presentes no MePD foram selecionados para estudo (n = 48 neurônios para cada variável experimental testada, 8 ramos dendríticos diferentes por área/animal). Os espinhos presentes nos primeiros 40 μm dendríticos foram desenhados com auxílio de uma câmara clara acoplada a microscópio óptico (1000 x). Os dados médios da densidade de espinhos dendríticos dos lados direito e esquerdo do MePD de machos e fêmeas em diestro foram submetidos ao teste da análise da variância de duas vias para medidas repetidas e os valores obtidos nas regiões dorsal e ventral de fêmeas em proestro foram comparados pelo teste “t” de Student pareado (em ambos os casos, o nível de significância estatística foi estabelecido em p < 0,05). Não houve diferença estatisticamente significativa quanto ao sexo, à lateralidade ou à interação entre esses fatores entre machos e fêmeas em diestro (valores em torno de 2 espinhos/μm dendrítico; p > 0,2 em todos os casos). Da mesma forma não houve entre as regiões dorsal e ventral das fêmeas em proestro (valores em torno de 1,7 espinhos/μm dendrítico; p = 0,1). Os resultados sugerem que, apesar de dados na literatura indicarem diferenças hemisféricas na ocorrência de potenciais pós-sinápticos excitatórios nos neurônios do MePD de ratos pré-púberes machos e fêmeas, não há diferença no número de espinhos nos dendritos proximais que justifiquem tal achado prévio ou, pelo menos, que não são esses os locais preferenciais para gerar tal achado eletrofisiológico. Adicionalmente, apesar de terem sido descritas expressões diferentes para receptores de tipo α e β nas regiões dorsal e ventral do MePD, isto não gera diferença no número de espinhos dendríticos proximais nessas regiões em fêmeas durante a fase do ciclo ovulatório que apresenta os maiores valores de estradiol em circulação, a saber a fase de proestro. Esses achados complementam os conhecimentos atuais sobre a MePD de ratos e indicam que a densidade de espinhos dendríticos não representa o elemento preferentemente e diretamente correlacionável com outros dados da literatura mencionados, embora seja um local de plasticidade sináptica em outras condições experimentais. / The posterodorsal medial amygdaloid nucleus (MePD) is a sexually dimorphic area in the rat brain and dendritic spines are specialized postsynaptic sites involved with local neural plasticity. Electrophysiological data showed that prepubertal males have more excitatory synapses than females in the left MePD. Besides, dorsal and ventral MePD neurons have a different expression of estrogen in mating-responsive neurons in the adult female rats. Based onβ or αreceptors these previous findings, the “single-section” Golgi method was employed in adult rats (n = 6 in each group) to reveal: (1) the effect of hemispheric laterality in the density of dendritic spines in the MePD of males and diestrus females, and (2) the density of dendritic spines in the MePD dorsal and ventral subregions in proestrus females (mean values from n = 48 neurons for each experimental variable, 8 different dendritic branches per area/animal). There were no statistically significant difference for sex, laterality, and the interaction of these factores between males and diestrous females (p > 0.2), nor for the dorsal and the ventral MePD dendritic spine density in proestrus females (p > 0.1). These findings complement current knowledge about the rat MePD and suggest that the number of proximal dendritic spines is not lateralized at adulthood. In addition, the different expression of estradiol receptors in the dorsal and ventral MePD did not induce a distinct spine number during the peak of circulating ovarian steroids in the proestrus.

Os objetivos do presente estudo foram descrever a ultra-estrutura neuronal (n=8) e analisar a distribuição dos terminais sinápticos (n=1) no subnúcleo póstero-dorsal da amígdala medial (MePD) de ratos Wistar adultos usando microscopia eletrônica de transmissão e mensurar o volume somático dos neurônios da MePD de ratos (n=5) e ratas em diestro, em proestro e em estro (n=4-5) para revelar diferenças sexuais, do ciclo estral e uma possível lateralidade nesse parâmetro morfológico usando a técnica de reconstrução seriada. Todos os animais foram perfundidos por via transcardíaca e seus encéfalos foram removidos, pós-fixados e processados para microscopia eletrônica. No primeiro experimento, secções ultrafinas (70 nm) foram analisadas e a ultra-estrutura da MePD descrita. No segundo, a estimativa do volume somático neuronal médio da MePD esquerda e direita foi realizada usando-se o método de Cavalieri associado à técnica de contagem de pontos e os dados foram comparados entre os grupos por uma ANOVA de duas vias e o teste post-hoc de Bonferroni. No neurópilo da MePD de machos, dendritos com ou sem espinhos, feixes de axônios não-mielinizados, processos axonais únicos, poucos axônios mielinizados, processos gliais e vasos sangüíneos foram identificados. Sinapses axo-dendríticas foram as mais freqüentemente observadas (58,3%) e foram principalmente excitatórias. Suas regiões pré-sinápticas continham vesículas elétron-lúcidas sozinhas ou mescladas com poucas vesículas de centro denso (DCV). Os dendritos muitas vezes receberam várias sinapses sobre um mesmo ramo, mas terminais axonais contatando mais de uma estrutura pós-sináptica também foram observados. Os espinhos dendríticos apresentaram diferentes morfologias e geralmente recebiam um único contato sináptico excitatório (33,3%). Sinapses axosomáticas (7,3%) excitatórias e inibitórias e sinapses axo-axônicas excitatórias (1%) também foram identificadas. Na MePD, o volume somático neuronal médio apresentou uma diferença estatística entre os grupos estudados (machos e fêmeas nas diferentes fases do ciclo estral) [F(3,37)=5,805; P=0,003], mas nenhum efeito da lateralidade [F(3,37)=0,246; P=0,863] ou interação entre ambos [F(3,37)=0,246; P=0,863]. Os machos (média  desvio-padrão, 2038,03  543,92 e 2113,14  339,87 m3, para a MePD esquerda e direita, respectivamente) apresentaram maior volume somático neuronal médio do que fêmeas em proestro (1521,10  136,82 e 1447,71  120,78 m3; P=0,007) e em estro (1680,67  272,38 e 1551,77  174,40 m3; P=0,035), mas não do que fêmeas em diestro (2028,02  459,07 e 1852,87  385,31 m3; P > 0,05). Enfim, os presentes resultados demonstram que: 1) as características nucleares e citoplasmáticas dos neurônios da MePD são similares àquelas de outras áreas encefálicas; 2) a maioria das sinapses sobre os neurônios da MePD são excitatórias, ocorrendo principalmente sobre ramos e espinhos dendríticos; 3) os espinhos dendríticos da MePD recebem somente um contato sináptico excitatório; 4) terminais sinápticos contendo somente DCV não foram identificados, no entanto, essas vesículas apareceram mescladas às mais numerosas vesículas elétron-lúcidas em todas as regiões dos neurônios da MePD; 5) o volume somático neuronal da MePD é outro parâmetro sexualmente dimórfico; 6) separar as diferentes fases do ciclo estral é de suma importância para revelar a presença dos efeitos dos hormônios gonadais nos neurônios da MePD de ratos; e 7) o volume somático neuronal não se modifica ao longo do ciclo estral, apesar de uma tendência ser observada entre as fêmeas em diestro e proestro. Portanto, o presente trabalho provém novos achados que são relevantes para o estudo da organização celular e sináptica da MePD, que poderiam ser associados a outros dados morfológicos de modo a aumentar nossa compreensão a respeito da atividade funcional dessa área em ratos adultos.

Orientador: Antonio Roberto Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:02:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zucchi_FabiolaCristinaRibeiro_M.pdf: 24090460 bytes, checksum: 27e1bbac09c938fe441fff2ec63849ce (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: o PIN é a proteína inibidora da sintase neuronal do óxido nítrico (nNOS). O mecanismo de regulação ocorre pela interação do PIN com a nNOS, inibindo sua dimerização, dissociando os dímeros já formados e assim inibindo a formação da enzima ativa. O PIN é uma proteína de 10 kDa e 89 resíduos de aminoácidos altamente conservada na natureza. O PIN humano apresenta 100% de homologia com a cadeia leve da dineína (DLC) humana. A DLC está envolvida na modulação da atividade transcional do NFkB. A dineína está envolvida em uma variedade de processos de motilidade intracelular, incluindo divisão celular, tráfego de vesículas membranosas e outras partículas intracelulares. A interação de PIN com múltiplas proteínas e sua alta conservação evolutiva sugerem que o PIN possa ser um importante regulador de vários processos fisiológicos. O óxido nítrico (NO) atua como um mensageiro não convencional nos sistemas vascular, imune e nervoso. O modelo corticogênese cerebelar humana é relativamente bem conhecido e permite correlacionar eventos morfogenéticos e bioquímicos/moleculares. Observamos que a expressão imunohistoquímica de PIN/DLC e nNOS no cerebelo humano é desenvolvimento-dependente. Durante a ontogênese estas moléculas ocorrem em regiões proliferativas, como a EGL e a zona ventricular, no núcleo e citoplasma das células. Células com aspecto migratório foram imunomarcadas para PIN, DLC e nNOS no núcleo e no citoplasma. Este resultado é inédito, e não encontramos relatos semelhantes na literatura. Os interneurônios e as células de Purkinje expressaram PIN e DLC, principalmente no núcleo celular, desde o surgimento até 98 anos. E a imunodetecção de nNOS nos interneurônios e células de Purkinje foi observada principalmente no citoplasma e ramificações dendríticas em todas as idades observadas. A camada granular interna expressou PIN, DLC e nNOS em todo o período estudado. Detectamos imunorreatividade para PIN e DLC nas células ganglionares do núcleo denteado, principalmente no núcleo celular, e para a nNOS principalmente no citoplasma, desde a ontogênese até o envelhecimento do cerebelo humano. Nossos resultados imunohistoquímicos foram validados pela detecção de PIN, DLC, DIC e nNOS em amostras cerebelares obtidas de pacientes de 6, 16, 23, 47, 68 e 82 anos de idade usando Western bloting / Abstract: PIN is the protein inhibitor of neuronal nitric oxide synthase (nNOS). PIN interacts physically with nNOS, inhibits it by destabilizing its dimer form, thus being able to regulate nNOS activity. PIN is a 10 kDa protein composed of 89 amino acid residues, which are highly conserved in nature. Human PIN has 100% amino acid sequence identify to the human dynein light chain (DLC). DLC appears to play a role in the modulation of the transcriptional activity of NF-kB. Dynein is involved in several processes of intracellular motility, including mitosis, traffic of membranous vesicles, and others intracellular particles.The interaction of PIN/DLC with multiple proteins and its high evolutive conservation suggest that PIN can be an important regulator of various physiological processes. Nitric oxide (NO) acts as a nonconventional messenger in the vascular, immune and nervous systems. The model of human cerebellar corticogenesis is relatively well known and permits to correlate morphogenetic events with their molecular counterparts. We observed that the immunohistochemical expression of PIN/DLC and nNOS in the human cerebellum is development-dependent. During ontogenesis, this molecules were detected in the nuc1eiand cytoplasm of cells in proliferative regions, such as the EGL and the ventricular zone. We show here for the first time the detection of PIN, DLC and nNOS in the nuclei and cytoplasm of cells with a migratory profile. Intemeurons and Purkinje cells expressed PIN and DLC, mainly in the cellular nuclei, from the first time they were identified until age 98 years. Immunodetection of nNOS in the intemeurons and Purkinje cells was observed mainlyin the cytoplasm and dendritic arborization in all ages observed. Internal granular layer expressed PIN, DLC and nNOS through out the time range studied. PIN and DLC immunoreactivity were detected in ganglion cells of the dentate nucleus, mainly in the cellular nuclei, whereas anti-nNOS stained mainly the cytoplasm of these cells, throughout the time range studied. Our immunohistochemical data were further validated by the detection of PIN, DLC, DIC and nNOS in cerebella obtained from patients aged 6, 16, 23, 47, 68 and 82 years-old using Western bloting / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El cerebelo, órgano ubicado en la parte posterior del cráneo, cumple la función de coordinar y regular los movimientos voluntarios, haciendo los ajustes necesarios para una suavidad en la progresión de los mismos. La enfermedad de dicho órgano presenta varios signos agrupados en el síndrome cerebelar, pudiendo tener diversas etiologías. Para llegar a un diagnóstico certero de algunas de ellas, es necesario obtener una biopsia de tejido cerebelar. En el presente estudio se evaluó la técnica de craniectomía suboccipital para la toma de una biopsia de tipo incisional de tejido cerebelar, que fue analizada histopatológicamente. Se intervinieron quirúrgicamente 9 gatos adultos sanos, previo a un examen clínico general y neurológico, los cuales fueron sometidos a la técnica de craniectomía suboccipital, obteniéndose muestras de aproximadamente 4 μm de espesor. En 8 de ellos fue posible obtener muestras de tejido cerebelar, de éstos en 5 se obtuvieron resultados histológicos satisfactorios, los que fueron analizados desde el punto de vista morfológico, enfocado principalmente a las tres capas de la corteza cerebelar. En uno de los pacientes no se obtuvo muestra alguna, dado que durante el procedimiento quirúrgico se presentó un sangramiento de los senos transversos del hueso occipital. En los 3 pacientes en que no se obtuvo resultados histopatológicos, se debió a un procesamiento de laboratorio muy agresivo para una muestra tan pequeña y que luego debió ser modificado. Los pacientes presentaron un postoperatorio óptimo, sin signología cerebelar o de ningún tipo, a excepción de uno de ellos que presentó signos cerebelares-vestibulares, los que fueron reversibles. Se concluye del presente trabajo, que la técnica de craniectomía suboccipital es una herramienta diagnóstica útil para ciertas patologías cerebelares, pero que sin embargo, debe realizarse cuidando tanto la toma de la muestra, como contar con un adecuado procesamiento en el laboratorio, a fin de cumplir con su objetivo

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La cipermetrina es un insecticida de la familia de los piretroides muy utilizado en agricultura por su capacidad letal. Sin embargo, su uso inadecuado puede provocar intoxicaciones en humanos y animales con importantes daños neurológicos. El objetivo de este trabajo es conocer los efectos de una dosis subletal única intraperitoneal de cipermetrina sobre la histología de cerebelo en ratones CF-1, utilizando inmunohistoquímica para cuantificar proliferación (ki-67) y apoptosis celulares (Apaf-1), y hematoxilina-eosina para analizar la morfología tisular. Se utilizaron 33 ratones distribuídos en tres grupos: control (n= 3), control vehículo (n= 15) y experimental con cipermetrina (n= 15), sacrificándose 3 animales por grupo los días 1- 8,6- 17,2- 25,8 y 34,4. El análisis estadístico se hizo con Mann Withney Test. Los resultados indicaron que en los días 17,2 y 25,8 ocurre una disminución del número de células de Purkinje estadísticamente significativa, y aparentemente no relacionada con los procesos de apoptosis y proliferación celulares / Financiamiento parcial: Proyecto Fondecyt 1101046-2010-2012

O gênero Cebus, representado por quatro espécies e várias subspécies, encontra-se geograficamente distribuído desde a América Central até o sul da América do Sul. Entretanto, sua anatomia é ainda muito pouco conhecida. É de fácil adaptação, podendo sobreviver em pequenas matas e restingas, mas a contínua destruição de seu habitat vem ameaçando, de forma progressiva, sua sobrevivência, o que vem ressaltar a importância de estudos dessa natureza. Considerando-se ainda as importantes funções do cerebelo, no controle e manutenção do equilíbrio corporal e do tono muscular, bem como no estabelecimento da postura e da harmonia e coordenação de movimentos, o presente trabalho tem a proposta de analisar, no C. apella, macro e mesoscopicamente, a disposição das estruturas de seu cerebelo. Com isso, tem-se por objetivo o melhor conhecimento do cerebelo do C. apella, o que nos permitirá tecer ilações a respeito de suas potencialidades funcionais, em comparação a outros primatas não-humanos, a mamíferos domésticos e ao homem. Foram utilizados 20 animais, 16 para analise macroscópica e 4 para mesoscopia, fixados e conservados em formol 10%, pertencentes ao acervo de pesquisa do Prof. Dr. Zenon Silva, na Universidade Federal de Uberlândia, MG. Após conveniente preparo de cada peça, macroscopicamente foram observados os hemisférios cerebelares, que se mostram pouco desenvolvidos em relação ao verme. No corpo do cerebelo, foram identificadas três porções, os lobos anterior, posterior e flóculonodular, assim constituídos, respectivamente: língula, lóbulo central, bastante desenvolvido, assim como suas asas, cúlmen e lóbulo quadrangular anterior; declive, lóbulo, quadrangular posterior, folha do verme, lóbulos semilunares, bem caracterizados na região equatorial dos hemisférios, sendo um superior e um inferior, túber, pirâmide, tonsilas bem desenvolvidas, e lóbulo biventre também bem demarcado. São bem evidentes as fissuras primária (entre os lobos anterior e posterior), horizontal (entre os lóbulos semilunares superior e inferior), secundária (pós-piramidal) e a póstero-lateral (separando o nódulo e a úvula e os hemisférios do lobo floculonodular), intraculminal e pós-clival. Outras fissuras menos evidentes são a pré-central, pré-culminal, pré-piramidal e intra-biventre. Os cortes para análise dos aspectos morfológicos internos, foram efetuados segundo os planos sagital mediano e horizontal, com espessura de 2 a 3 mm, sendo corados pelas soluções de Mulligan. As estruturas evidenciadas são descritas com detalhes comparando-se os dados obtidos com os da literatura consultada. Os termos anatômicos foram referidos segundo a Terminologia Anatômica (Internacional), 1&ordf;. Edição brasileira - 2001, Ed. Manole Ltda. / The gender Cebus, represented by four species and several subspecies, it\'s found geographically distributed since Central America up to the south of South America however, its anatomy is still little well-known. Its from easy adaptation and can survive in small forests and restingas, but the continuous destruction of its habitat has been threatening, in a progressive way, its survival, what point the importance of these kinds of study. Considering still the important cerebellum\'s function at the control and maintenance of body equilibrium and muscle tonus, as well as the estabilishement of posture, harmony and movements coordenating, the present work proposes to analyze, on C. apella, macro and mesoscopically, the disposition of structures at its cerebellum. This way the objective is to know better C. apella\'s cerebellum, what will allow us to weave related to its functional potentialities comparing to other no-human primates, domestic mammals and human. Its was used 20 animals, 16 to macroscopic analysis and 4 mesoscopic fixed and kept in of formaldehyde 10%, belonging to the research of Professor Dr. Zenon Silva, at Universidade Federal de Uberlândia, MG. After convenient prepare of each part, it was macroscopically observed the cerebellum hemispheres that seems little developed in relation to the worm. At cerebellum\'s body, it was identified three portions, the previous lobe, posterior and floculonodular, like this respectively constituted: língula, central lobule plenty developed, as well as its wings, cúlmen and previous quadrangular lobule, declive, posterior quadrangular lobule, worm\'s leaf, semilunar lobules well characterized at equatorial region of the hemispheres, being one above and one below, túber, pyramid, well developed tonsil and biventer lobule also well demarcated. Its very obvious the primary fissure (between the previous and posterior lobe), horizontal (between the superior and inferior lóbules semilunar) secundary (post-pyramidal) and the posterolateral (separating the nodule and the uvula and the hemisphere of lobe floculonodular), intraculminal and post-clival. Other less obvious fissures are the pré-central, pré-culminal and intra-biventer. The cuts to morfological internal analysis were effected according to the average and horizontal sagittal plans, with tickness from 2 to 3 mm, being colours by muligan\'s solutions. The obvious structures are described with details comparing the data obtained with the researched literature. The anatomic terms were refered according to the Anatomic Terminology (International), first Brazilian edition- 2001, Ed. Manole Ltda.

Os esteróides anabólico-androgênicos (EAAs) são derivados sintéticos da testosterona utilizados de maneira abusiva por indivíduos que procuram ganho de força física ou apenas efeitos estéticos. Doses suprafisiológicas destes compostos têm sido associadas a possíveis danos em tecido nervoso, a efeitos emocionais e comportamentais adversos, como alteração nas respostas de ansiedade ou agressividade. Considerando o desconhecimento dos aspectos neurais envolvidos nestas alterações comportamentais, e os resultados de trabalhos que apontam para um possível efeito deletério dos EAAs no Sistema nervoso central (SNC), investigamos a integridade do número de neurônios da amígdala basolateral (ABL) e do núcleo póstero-ventral da amígdala medial (MePV) de camundongos machos e fêmeas. Os animais receberam injeções intraperitoneais de cipionato de testosterona (Deposteron®) e estanozolol (Winstrol Depot ®) em doses suprafisiológicas, duas vezes por semana, no período de 33 dias. Assim como um grupo controle recebeu solução salina estéril a 0,9% nos mesmos dias. Foi realizada a análise numérica de perfis de corpos celulares de neurônios para a quantificação dos mesmos e testes comportamentais. Os animais tratados apresentaram respostas ansiogênicas no teste do labirinto em cruz elevado (LCE). No entanto, não foram observadas alterações na atividade motora geral em campo aberto (CA) e nos parâmetros de agressividade no teste de modelo residente-intruso. Os dois EAAs foram capazes de reduzir significantemente a quantidade de corpos celulares de neurônios nas duas áreas analisadas, sugerindo um processo de morte neuronal induzido pelos EAAs. / The androgenic-anabolic steroids (AAS) are synthetic derivatives of testosterone abusively used by individuals looking to gain physical strength or aesthetic purposes. Supraphysiological doses of these compounds have been associated with possible damages to nervous tissue, emotional and behavioral adverse effects, such as changes in anxious or aggressive responses. Considering the lack of knowledge about the neural aspects involved in these behavioral changes, and researchs that point to a possible deleterious effect of AAS in the central nervous system (CNS), we investigated the integrity of the number of cell bodies of neurons of the basolateral amygdala (BLA) and the posteroventral medial amygdala nucleus (MePV) of male and female mice. The animals received intraperitoneal injections of testosterone cypionate (Deposteron ®) and stanozolol (Winstrol Depot ®) supraphysiological doses, twice a week in the period of 33 days. As a control group received 0.9% sterile saline solution on the same days. For quantification and behavioral tests, analyses on the number of cell bodies of neurons was performed. The treated mice showed an increase in anxiety-related behaviors in the elevated plus maze test, and no changes were observed in the general motor activity in the open field and parameters of aggressiveness in the resident-intruder test model. The two AAS were able to significantly reduce the number of neuronal cell bodies in both analyzed areas, suggesting a process of neuronal death due to apoptosis induced by the AAS. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES