CARDOSO, Mirlane Guimarães de Melo. Paclitaxel potencia a hipernocicepção inflamatória : evidências da participação de citocinas e do receptor toll tipo 4 (TLR-4). 2009. 150 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-05T11:58:11Z No. of bitstreams: 1 2009_tese_mgmcardoso.pdf: 7066623 bytes, checksum: ae7fba50c1dec79440b3f6d957ef3a7c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:24:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_tese_mgmcardoso.pdf: 7066623 bytes, checksum: ae7fba50c1dec79440b3f6d957ef3a7c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:24:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_tese_mgmcardoso.pdf: 7066623 bytes, checksum: ae7fba50c1dec79440b3f6d957ef3a7c (MD5) Previous issue date: 2009 / Paclitaxel (PCX) was the first effective antineoplastic medicine in the treatment of tumors that do not respond to conventional chemotherapy. Clinically, it induces incapacitating arthralgias and myalgias that interfere with the patient quality of life and limit the duration of the treatment. This is observed in up to 57% of the patients using the drug. Despite these clinical manifestations, nothing has been published that could explain the involvement of pro-inflammatory cytokines in the triggering of the hypernociceptive effect of PCX, even though it is known that the drug shares with LPS a signaling pathway started by Toll-like receptors (TLR-2 and TLR-4) that activates genes coding for TNF-α. The literature suggests that there is a crosstalk between these two members of the Toll family and that different agonists of TLR-2 and TLR-4 are able to induce the activation of NF-kB, AP1 and MAP kinase in the generation of TNF-α, a key cytokines in the cascade liberating the final inflammatory mediators that act directly on the nociceptor. Data obtained in laboratory show that the injection of zymozan into rat knee-joints produces a periarthritis characteristic of the hypernociception seen in the knee joint incapacitation test and that PCX (8mg/kg) amplified the response when ¼ of the zymozan (ZY) doses was injected. The amplification was inhibited when animals were pre-treated with inhibitors of cytokines and prostanoids. Objective: To study the role of TNF-α and TLR-4 on the initiation of the potentiating effect of PCX on the experimental arthralgia induced by ZY. Material and Methods: Rats were pre-treated Sc with thalidomide, pentoxifiline, dexametazone, indometacin and celecoxib and then stimulated with an intra-articular subdoses of ZY (250μg/animal). After the first measurement of the paw elevation time in the knee joint incapacitation test, the animals were treated with PCX (8mg/kg ip). On a second trial, rats were treated for three consecutive days with atorvastatin (3, 10, 30mg/kg/day; VO). The following parameters were evaluated: modulation of the effect on the knee joint incapacitation test (JIT), amount of cytokines in the rat’s knee lavage (TNF-α, IL-1 β, IL-6, KC and CINC) and immunohistochemistry for TNF-α, IL-1β and TLR-4 on synovial tissue. Results: It was shown that PCX (8mg/kg) potentiates the experimental arthralgia induced by ZY in the rats as evaluated by the significant increase in paw elevation time (p<0.001) at the 4th h of arthritis in relations to controls. Such effect was significantly inhibited by pre-treatment with thalidomide (45mg/kg) and the inhibition was associated with a decrease in the amount of TNF-α produced by synovial tissue cells and detected in the joint lavage and in the immunohistochemistry for TNF-α. Likewise the inhibition of the amplifying response to PCX was seen with pre-treatment with atorvastatin at the three doses used in the experiment, which was also associated with a lower TNF-α in the joint lavage and perceptible decrease in the immunohistochemistry for TNF-α, IL-1β and TLR-4. Conclusions: PCX potentiates the hypernociception induced by ZY through an indirect effect on synovial membrane resident cells that release TNF-α probably through activation of the NF-kB pathway by TLR-4/MD2, since the potentiating effect was inhibited by atorvastatin, a TLR-4 antagonist. Released TNF-α act starting the cascade of mediators involved in the inflammatory pain and this partially explains the arthralgia in patients treated with PCX. / Paclitaxel (PCX) foi o 1º antineoplásico efetivo no tratamento de cânceres refratários a quimioterapia convencional. Clinicamente, induz artralgias e mialgias de caráter incapacitante que comprometem a qualidade de vida e limitam o tempo de tratamento antitumoral, acometendo até 57% dos doentes. Apesar destas repercussões clínicas nada foi descrito até o momento, visando elucidar o envolvimento de citocinas pró-inflamatórias, na gênese da atividade hipernociceptiva do PCX, já que a droga compartilha com o LPS uma via de sinalização desencadeada por receptores Toll (TLR-4 e TLR-2) para geração de genes que codificam TNF-α. Dados da literatura sugerem que ocorra um “cross-talk” entre esses dois membros da família Toll e, que agonistas diferentes de TLR-2 e TLR-4 são capazes de induzir a ativação de NF-αB, AP1 e MAP kinase e a geração de TNF-α, citocina chave na cascata de liberação de mediadores inflamatórios finais que atuam diretamente no nociceptor. Dados do laboratório registraram que o zymosan (ZY) intrarticular em joelhos de ratos produz uma periartrite característica da hipernocicepção no teste de incapacitação articular (IA), e que PCX (8mg/kg) amplificou essa resposta quando se injetou ¼ da dose do ZY. Tal amplificação foi inibida com o pré-tratamento com inibidores de citocina e de prostanóides. Objetivo. Investigar a participação do TLR-4 e TNF-α na gênese do efeito potencializador do PCX na artralgia experimental induzida por ZY. Material e Métodos. Ratos foram pré-tratados Sc com talidomida (TLD), pentoxifilina, dexametasona, indometacina ou celecoxib e estimulados com subdose de ZY (250μg/animal; i-art). Após a 1ª medida do tempo de suspensão de pata (TSP) no teste de IA, os animais receberam PCX (8mg/kg; ip). Numa segunda etapa os ratos receberam durante três dias consecutivos o pré-tratamento com atorvastatina (3, 10, 30mg/kg/dia; VO). Os seguintes parâmetros foram avaliados: modulação da hipernocicepção no teste de incapacitação articular, dosagem de citocinas em lavado de joelho de ratos (TNF-α, IL-1α, Il-6, KC e CINC) e imunohistoquímica para TNF-α, IL-1α e TLR-4 no tecido sinovial. Resultados. Ficou demonstrado que PCX (8mg/kg) potencializa a artralgia experimental induzida por ZY em ratos avaliada pelo aumento significativo do TSP (p<0,001) na 4ªh de artrite em relação ao controle no teste de IA. Tal efeito foi inibido de maneira significativa pelo pré-tratamento com TLD (45mg/kg) e essa inibição foi associada à redução dos níveis de TNF-α produzido pelas células do tecido sinovial no lavado articular e da marcação imunohistoquímica para TNF-. Da mesma forma a inibição dessa resposta amplificadora do PCX foi ratificado pelo pré-tratamento com atorvastatina nas três doses utilizadas no modelo, também sendo associado à diminuição significativa dos níveis de TNF- no lavado articular e visível redução na marcação imunohistoquímica para TNF-, IL-1 e TLR-4, nas três doses utilizadas. Conclusões. PCX potencializa a hipernocicepção induzida por ZY por um mecanismo indireto sobre células residentes da membrana sinovial que liberam TNF- provavelmente pela ativação da NF-B via TLR-4/MD2, pois esse efeito potencializador foi inibido pela atorvastatina, um provável antagonista de TLR-4. O TNF- liberado age iniciando a cascata de mediadores envolvidos com a dor inflamatória, o que justifica em parte as artralgias dos pacientes em tratamento com PCX.

SOARES, Pedro Marcos Gomes. Mucosite intestinal experimental induzida por 5-fluorouracil : papel de IL-1ß, IL-4 e PAF e avaliação das alterações da motilidade digestiva. 2008. 142 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-06T12:15:24Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_pmgsoares.pdf: 14518787 bytes, checksum: 6a4dbe6ae7c642ebca0081619b1b39a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:25:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_pmgsoares.pdf: 14518787 bytes, checksum: 6a4dbe6ae7c642ebca0081619b1b39a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:25:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_pmgsoares.pdf: 14518787 bytes, checksum: 6a4dbe6ae7c642ebca0081619b1b39a2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Avaliar os mediadores inflamatórios e as alterações motoras gastrintestinais no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. Métodos: Para avaliar as citocinas utilizamos camundongos balb-c ou c57/black (25-30g), tratados com IL-1Ra (100mg/Kg, i.p., diariamente) ou deficientes para IL-4 (IL-4 -/-) ou para IL-18 (IL-18 -/-). A fim de estudar a participação de PAF e 5-LO, utilizamos o BN52021 (20mg/Kg, s.c., diariamente) ou camundongos deficientes para o receptor de PAF (PAF -/-) ou para 5-LO (5-LO -/-). Para avaliar a participação de NO, animais receberam aminoguanidina (50mg/Kg, i.p., diariamente), a fim de estudar o papel da morte celular: utilizaram-se animais deficientes para FAS (FAS -/-). Todos os camundongos receberam 5-FU (450mg/Kg, i.p., dose única) ou salina. Após 3 dias, os animais foram sacrificados e amostras do duodeno, do jejuno e do íleo foram obtidas para avaliação morfométrica, da atividade de MPO e para dosagem de citocinas. Para estudar as alterações motoras gastrintestinais, ratos Wistar (250-350g) receberam 5-FU (150mg/Kg, i.p., dose única). Após 1, 3, 5, 15 ou 30 dias, foram sacrificados e o duodeno, o jejuno e o íleo foram obtidos para avaliação morfométrica, para medida da atividade de MPO e para dosagem de GSH. Outro grupo de ratos recebeu salina glicosada + tecnécio (v.o). Após 3 ou 15 dias, o estômago e segmentos do intestino (P1-P5) foram obtidos para avaliar esvaziamento gástrico (cintilografia). A resposta mecânica foi obtida utilizando-se um transdutor de força isométrico acoplado a um sistema de aquisição de dados. Carbacol (10-10-10-4M) foi aplicado sobre músculo liso do estômago ou do duodeno de ratos tratados ou não com 5-FU. Resultados: Em Camundongos balb-c e c57/black, 5-FU induziu diminuição na razão vilo/cripta no duodeno, jejuno e íleo, importante infiltrado neutrofílico e um aumento nas concentrações de TNF- α , IL-1 β , IL-6, KC. O tratamento com IL-1Ra (100mg/kg) reverteu à diminuição da razão vilo/cripta no duodeno, jejuno e íleo, à infiltração de neutrófilos e o aumento de TNF-α IL-1β, KC induzida por 5-FU. IL-4 -/- tiveram uma menor redução da razão vilo/cripta no duodeno, jejuno e íleo em comparação aos animais selvagens tratados com 5-FU, bem como apresentaram menor infiltrado neutrofílico e diminuição de TNF-α, IL-1β, IL-6 e KC no duodeno. PAF -/- não tiveram alterações da razão vilo/cripta no duodeno, aumento na concentração de IL-1β e KC com o tratamento com 5-FU. O tratamento com BN 52021 (20mg/kg) reverteu à diminuição da razão vilo/cripta no duodeno de animais c57/black tratados. O tratamento com aminoguanidina (50mg/kg), bem como IL-18 -/-, 5-LO -/- e FAS -/- não apresentaram diferenças significativas quando comparados com os camundongos selvagens em relação a mucosite por 5-FU. Em relação aos ratos, 5-FU (150mg/kg) induziu importante perda de peso, diminuição da razão vilo/cripta, infiltrado neutrofílico e redução dos níveis de GSH no duodeno, jejuno e íleo no 3° dia. No 15° dia após o tratamento com 5-FU as alterações encontradas foram restabelecidas. Encontrou-se significativo retarde no esvaziamento gástrico e no trânsito gastrintestinal em ratos tratados com 5-FU no 3° e 15° dias. Por fim, houve uma hipercontratilidade no músculo liso do fundo gástrico e duodenal de ratos no 3° e 15° dia pós tratamento com 5-FU. Conclusão: 5-Fluorouracil induz mucosite intestinal em camundongos com a participação de IL-1β, IL-4, PAF, também, induz mucosite intestinal em ratos associada a dismotilidade gastrintestinal que persiste com a resolução da inflamação.

Décadas se passaram desde que os pesquisadores iniciaram investigações sobre a patogênese da infecção pelo HIV. Atualmente, é possível identificar vários desfechos clínicos após a exposição ao vírus, entre eles estão indivíduos expostos não infectados e indivíduos que após a infecção progridem rápida ou lentamente para a aids. No entanto, a identificação de fatores que permitam diferenciar e monitorar estes desfechos continua um desafio. Neste contexto, citocinas parecem ser marcadores promissores de acompanhamento da progressão para a aids. Neste estudo, avaliamos indivíduos HIVpositivo fenotipicamente (níveis plasmáticos das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL- 17A, TNF-α, IFN-γ) e geneticamente (variantes polimórficas) com o objetivo de contribuir para o melhor entendimento da patogênese da infecção e trazer novas perspectivas às questões clínicas e terapêuticas. Nossos resultados sugerem uma associação entre o aumento dos níveis plasmáticos de IL-6 e IL-10 no estágio pré-aids em progressores rápidos (p<0,05) e lentos para a aids (p<0,05). Assim, o aumento dos níveis de IL-6 e de IL-10 podem indicar um estado inflamatório crítico, podendo ser utilizados como marcadores do curso da infecção em indivíduos HIV-positivo. Os genótipos IL10-592 AA+AC (OR 1.89, IC 95% 1,10-3,14, p<0,01) e IL17A-692 TC+CC (OR 1.61, IC 95% 0,99-2,71, p<0,05) foram associados à susceptibilidade a infecção pelo HIV em indivíduos eurodescendentes. Além disso, quando analisados em conjunto, SNPs nos genes IL4, IL6, IL10 e TLR9 mostraram efeitos aditivos significativos (p<0,01). Já em indivíduos afrodescendentes, observou-se um efeito protetor dos genótipos TLR9-1237 TC+CC (OR 0.47, IC 95% 0,23-0,96, p = 0,038), e um efeito epistático significativo entre TLR9 e IL4 (p<0,01). Estes resultados contribuem para a compreensão dos mecanismos envolvidos na resposta imune à infecção pelo HIV. Nossas análises mostram que a origem étnica tem grande influência nas associações entre as variantes genéticas e os desfechos da infecção pelo HIV. Adicionalmente, verificou-se que análises de interação gênica, avaliadas através da redução multifatorial de dimensionalidade (MDR), contribuem para a compreensão dos efeitos dos SNPs e podem ser muito úteis na identificação de redes gênicas que influenciam na susceptibilidade e/ou em diferentes cursos clínicos da infecção pelo HIV. / Decades have passed since researchers began investigations on the pathogenesis of HIV infection. Currently, it is possible to identify many clinical outcomes after exposure to the virus, which includes individuals exposed but uninfected, and rapid or slow progressors to AIDS. However, the identification of factors that allows to differentiate and monitor these outcomes remains a challenge. In such context, cytokines seem to be promising markers for monitoring the progression to AIDS. This study evaluated phenotypically (plasmatic levels of cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α, IFN-γ) and genetically (polymorphic variants) HIV-positive individuals as a contribution to a better understanding of the pathogenesis of infection and bring new perspectives to clinical and therapeutic issues. Our results suggest an association between increased serum levels of IL-6 and IL-10 in the pre-AIDS stage for rapid progressors (p<0.05), and for slow progressors to AIDS (p<0.05). Thus, the increase of IL-6 and IL-10 levels may indicate a critical inflammatory condition, and they can be used as course markers of infection in HIV-positive individuals. The genotypes IL10-592 AA+AC (OR 1.89, 95% CI 1.10-3.14, p<0.01) and IL17A-692 TC+CC (OR 1.61, 95% CI 0.99-2.71, p <0.05) have been associated with susceptibility to HIV infection in European-descendents individuals. Moreover, when analyzed together, SNPs in genes IL4, IL6, IL10 and TLR9 showed significant additive effects (p <0.01). Already in African-descendant individuals, a protective effect was observed in genotypes TLR9-1237 TC+CC (OR 0.47, 95% CI 0.23-0.96, p=0.038) and a significant epistatic effect between TLR9 and IL4 (p<0.01). These results contribute to the understanding mechanisms involved in the immune response to HIV infection. Furthermore, the analysis show that ethnic origin has a heavy influence on associations between genetic variants and the outcomes of infection by HIV. The interaction through the multifactor dimensionality reduction (MDR) contributed to the understanding the SNP effects and can be very useful to identify genes which has influence on susceptibility networks and / or different clinical courses.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-03-15T04:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337681.pdf: 1424986 bytes, checksum: 32fae657b30a885809b6a9a9ccca426e (MD5) Previous issue date: 2015 / A sepse induzida por pneumonia é responsável por cerca de 50% do casos de pneumonia no mundo. A bactéria gram-negativa Klebsiella pneumoniae é uma das bactérias mais comuns na sepse nosocomial e contribui para a alta taxa de mortalidade desta condição. Os pacientes que evoluem para sepse grave e choque séptico apresentam disfunção de órgãos e níveis elevados de citocinas plasmáticas, as quais podem ser responsáveis pela morte de muitos pacientes. Uma forma de se avaliar o quadro dos pacientes sépticos e predizer como será a progressão desta síndrome é por meio dos escores clínicos, sendo assim, o objetivo deste estudo foi verificar a aplicabilidade de escore clínico murino e correlacioná-lo com a mortalidade e disseminação bacteriana em diferentes órgãos, como também avaliar a produção de citocinas nestes órgãos, além dos níveis plasmáticos. O modelo utilizado no estudo foi a sepse induzida por pneumonia em camundongos machos. A indução da sepse foi realizada por meio da inoculação intratraqueal de Klebsiella pneumoniae 1x109 CFU/animal. A avaliação de escore clínico foi realizada ao longo do tempo e em todos os experimentos. Os resultados mostraram que animais que apresentam escores clínicos mais elevados (> 3) possuem maior probabilidade de morrerem. Animais com escore > 3 têm bacteremia transitória, porém, mostram disseminação para diferentes órgãos como coração, rim, fígado e cérebro, a partir de 2 horas após a inoculação da bactéria. A disseminação apresentou-se ainda maior 6 e 24 horas após a infecção. Observou-se também que animais com escores > 3 demonstram mais do que 3 tecidos infectados, ou seja, quanto mais órgãos afetados, maior o escore clínico e, consequentemente, maior o risco de morte. Além disso, nestes mesmos animais que apresentaram alta disseminação bacteriana e escores altos, mensurou-se o nível de 4 citocinas (TNF-a, MCP-1, IL-6 e IL-10), tanto no plasma e foco infeccioso (pulmão), quanto no coração, fígado, rim e cérebro. As citocinas também começaram a se elevar a partir de 2 horas em diferentes tecidos, mantendo-se altas até 24 horas. Os níveis de ureia, creatinina, alanina transferase e aspartato transferase aumentaram significativamente, principalmente 24 horas após a infecção. Diante do exposto, osdados deste trabalho sugerem que: i) escores de gravidade têm poder preditivo em modelos experimentais de sepse e ii) altas concentrações de citocinas teciduais podem contribuir para inflamação localizada e ser um dos fatores responsáveis pelo dano de órgãos.<br> / Abstract : The pneumonia-induced sepsis is responsible for about 50% of cases in the world. The gram-negative bacterium Klebsiella pneumoniae is one of the most common bacteria involved in nosocomial sepsis and contributes to the high mortality rate. Patients who develop severe sepsis and septic shock present organ dysfunction and elevated plasma cytokine levels which may lead to the death of many of them. Clinical scores are observations to evaluate the framework of septic patients. They can predict the syndrome progress and also the mortality. Therefore, the objective of our study was to verify the applicability of a murine clinical score system and to correlate it with mortality and bacterial dissemination in different organs. In addition, to evaluate cytokines production from these organs which present high bacterial load. The model used in our experiments was pneumonia-induced sepsis in male mice. The induction was performed by Klebsiella pneumonia inocculation of 1x109 UFC/animal intratracheally. The clinical score evaluation was performed over time in all experiments. The results demonstrated animals which present higher clinical scores (> 3) are more likely to die. Animals presenting clinical scores > 3 presented transient bacteremia, however, displayed bacterial spreading to different organs as heart, kidney, liver, and brain. The bacterial dissemination starts at 2 hours after the bacterial inoculation. The spreading was even higher 6 and 24 hours after infection. It was also observed that animals with scores above 3 present more than 3 infected tissues by K. pneumoniae. There is a correlation between clinical scores and bacterial dissemination, as many more organs are infected, major clinical scores will be showed and consequently the greatest risk of death. In addition, animals which showed bacterial dissemination in more than three organs and high clinical scores (> 3) present high levels of 4 cytokines (TNF-a, MCP-1, IL-6 and IL-10), at plasma and focus of infection (lung), as well as heart, liver, kidney and brain. The cytokines also started to rise 2 hours after infection in different tissues and remained high until 24 hours. Tissue cytokine concentrations might contribute to the organ damage of pneumoseptic animals. The levels of urea, creatinine, and aspartate transaminase and alanine transferase increasedsignificantly, especially 24 hours after infection. Therefore, this study data suggest that: i) severity scores have predictive power in experimental models of sepsis and ii) high concentrations of tissue cytokines may contribute to localized inflammation and be one of the factors responsible for the loss of function and organ damage.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-15T22:41:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O [receptor B1] para as [cininas] está normalmente ausente em condições fisiológicas, sendo expresso em processos inflamatórios ou infecciosos. Este estudo avaliou alguns dos mecanismos envolvidos na indução do receptor B1 após o tratamento com o [fator de ativação plaquetária] (PAF) ou com a [anafilotoxina C5a] na pata de rato. A injeção do agonista seletivo dos receptores B1, a [des-Arg9-bradicinina] (DABK), produziu [edema] de baixa intensidade na pata de ratos normais, enquanto o pré-tratamento local com PAF ou C5a causou aumento temporal do edema à DABK precedido pelo aumento da expressão dos receptores B1. A regulação dos receptores B1 após tratamento com os fatores quimiotáticos PAF e C5a envolve vias comuns de modulação como a síntese de proteínas, a ativação do [fator de ativação-?B] (NF-?B), a ativação de [quinases] e de [mastócitos]. Além disso, o PAF ainda pode lançar mão de mecanismos adicionais de modulação destes receptores como o [recrutamento de neutrófilos], a expressão de [moléculas de adesão] e a [produção de citocinas próinflamatórias] (TNFa e IL-1ß). Com relação ao PAF, pode-se sugerir ainda, que a ativação do eixo NF-?B/TNFa/neutrófilo por este mediador é suficiente para o aumento do RNAm para o receptor B1. Além disso, o eixo NF-?B/TNFa/neutrófilo é também necessário para a produção de IL-1ß Ademais, nossos resultados sugerem a existência de uma regulação positiva direta entre estes mediadores inflamatórios possibilitando o aumento rápido e sustentado das respostas mediadas pelos receptores B1. Finalmente, os resultados descritos no presente trabalho fornecem novas evidências sobre como os fatores quimiotáticos podem regular os receptores B1 in vivo, e tentam sugerir uma possível seqüência temporal de eventos envolvidos nesta indução.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T06:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T22:59:41Z : No. of bitstreams: 1 183472.pdf: 3605301 bytes, checksum: ffc5710572e3d382f1897738c15fc260 (MD5) / Estudo do efeito do tratamento local com [citocinas pró-inflamatórias] sobre as respostas mediadas pelos [receptores B1 e B2] para as [cininas] na [pata de rato]. O tratamento com as citocinas [IL-1b] ou [TNFa] foi capaz de induzir um aumento dose-dependente e marcante da [resposta edematogênica] mediada pelos receptores B1, acompanhado de um aumento na [expressão] destes receptores, sem interferir com as respostas mediadas pelos receptores B2. O aumento funcional dos receptores B1 na pata de rato, induzido pela IL-1b e pelo o TNFa, parece depender da produção de metabólitos do [ácido araquidônico], da produção secundária de outras citocinas pró-inflamatórias, da ativação de algumas [quinases], além da estimulação do fator de transcrição nuclear [NF-kB] e de [síntese protéica]. Além disso, o aumento das respostas mediadas pelos receptores B1, na pata de ratos pré-tratados com IL-1b, parece envolver a migração de [neutrófilos], dependente da produção de [PAF] e de [moléculas de adesão]. Estes dados contribuem para esclarecer alguns mecanismos envolvidos na interação entre o sistema de cininas e citocinas durante o processo inflamatório.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-07Bitstream added on 2014-06-13T20:41:30Z : No. of bitstreams: 1 polegato_bf_dr_botfm.pdf: 3262960 bytes, checksum: 5e228e55d5391695f03d5175bdcfb7ef (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doxorrubicina, ou adriamicina, é uma droga utilizada como agente antineoplásico no tratamento de tumores sólidos e neoplasias hematológicas, principalmente. Apesar de seu amplo uso, apresenta como efeito colateral mais importante a cardiotoxicidade. A toxicidade crônica é bastante conhecida e estudada e cursa com miocardiopatia dilatada e quadro clínico clássico de insuficiência cardíaca. A toxicidade aguda, por cursar com quadro clínico pouco exuberante e manifestar-se através de alterações eletrocardiográficas, é muito pouco diagnosticada e seu mecanismo fisiopatológico não é totalmente conhecido. Os mecanismos envolvidos na toxicidade cardíaca são distintos dos mecanismos de ação da droga e são múltiplos: aumento do estresse oxidativo, aumento da apoptose e alteração na dinâmica intracelular do cálcio. Nossa hipótese é que ocorra lesão estrutural e funcional cardíaca, precocemente, após infusão da doxorrubicina. O objetivo do presente estudo foi avaliar a função ventricular esquerda agudamente após administração de doxorrubicina, a expressão gênica das proteínas reguladoras do trânsito de cálcio, a atividade de metaloproteinases 2 e 9 no miocárdio e alterações das citocinas inflamatórias no miocárdio de ratos tratados com a droga. Para isso, foram utilizados ratos Wistar machos adultos (n=35), que foram submetidos à infusão intraperitoneal de dose única de doxorrubicina de 20 mg/Kg ou volume equivalente de salina (grupo controle). Os animais foram eutanasiados 48 horas após injeção da droga. Todos os ratos foram submetidos ao ecocardiograma antes e 48 horas após a injeção da doxorrubicina. Além da avaliação da função cardíaca in vivo pelo ecocardiograma, a função ventricular esquerda foi avaliada in vitro através de estudo do coração isolado, segundo preparação... / Doxorubicin, or adriamycin, is a drug used as an antineoplastic agent in the treatment of solid tumors and hematologic malignancies. Despite of its use, there are several side effects, and the most important is cardiotoxicity. Chronic toxicity is well known and studied. It presented with dilated cardiomyopathy and clinical features of heart failure. The acute toxicity has mild clinical signs manifesting usually as electrocardiographic changes. Probably, this acute effect is underdiagnosed and the pathophysiological mechanism is not fully understood. The mechanisms involved in cardiac toxicity are multiple, and include increased oxidative stress, increased apoptosis and alteration in intracellular calcium dynamics. Our hypothesis is that structural and functional damage occurs in the heart early after infusion of doxorubicin. The purpose of this study was to evaluate left ventricular function acutely after doxorubicin administration. In addition, gene expression of calcium regulatory proteins, activity of metalloproteinases 2 and 9, and inflammatory cytokines in the myocardium of rats treated with this drug will also be evaluated. Thus, we used adult male Wistar rats (n = 35) who received a single-dose, by intraperitoneal infusion, of doxorubicin (20 mg / kg) or equivalent volume of saline (control group). After 48 hours of drug injection the rats were euthanized. All animals were submitted to echocardiography before drug infusion and immediately before euthanasia. Besides in vivo cardiac function evaluation by echocardiography. In vitro left ventricular function was assessed by isolated perfusion heart study, according to Langendorff preparation. We evaluated interstitial collagen and myocyte hypertrophy by light microscopy, and cardiac tissue metalloproteinases 2 and 9 activity was assessed by zymography. In addition... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-28Bitstream added on 2014-06-13T19:23:27Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_mnm_dr_arafo.pdf: 1578323 bytes, checksum: 6ef77905acf94bb01ba70858855a37c0 (MD5) / O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase / The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-18Bitstream added on 2014-08-13T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000776180.pdf: 1926203 bytes, checksum: 60db49d6033717478f4a4a7a4f1c63aa (MD5) / Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os .... / Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ...

Orientador: Raquel Mantuanelli Scarel Caminaga / Banca: Márcia Pinto Alves Mayer / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo: A Doença Periodontal (DP) é uma doença infecciosa de caráter multifatorial causada por microrganismos periodontopatogênicos e influenciada por fatores como: suscetibilidade genética do hospedeiro, reação do sistema imune, hábito de fumar e doenças sistêmicas. Estudos recentes realizados por nosso grupo verificaram indivíduos com predisposição genética à periodontite crônica, mesmo após ajustes para idade, gênero, cor da pele e hábito de fumar. Tal predisposição genética foi determinada pela presença de um haplótipo formado por polimorfismos no gene IL8. O objetivo do presente estudo é comparar a microbiota subgengival de sítios afetados ou não pela DP, antes e após 45 dias do tratamento periodontal não-cirúrgico em indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à periodontite crônica. Dessa forma, será possível saber se, entre indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à DP, ocorrem diferenças qualitativa e/ou quantitativa de microrganismos periodontopatogênicos. Também se pretende avaliar se indivíduos geneticamente suscetíveis e não suscetíveis à DP respondem diferentemente ao tratamento periodontal não-cirúrgico, por meio da análise de parâmetros clínicos e microbiológicos. Foram selecionados 65 indivíduos divididos quanto à presença ou não do referido haplótipo ATC/TTC no gene IL8, de forma que os indivíduos "suscetíveis" e "não suscetíveis" à DP foram subdivididos quanto à presença ou ausência de periodontite crônica. Os pacientes selecionados foram submetidos a novo exame clínico periodontal e coleta de placa subgengival antes e 45 dias após tratamento periodontal. Três microrganismos periodontopatogênicos Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontal disease (PD) is a multifactorial disease caused by periodontopathogenic microorganisms and influenced by factors such as genetic susceptibility, reaction of the immune system, smoking and the occurrence of systemic diseases. Recent studies carried out by this group have observed individuals with a genetic predisposition to periodontitis even after adjusting for covariates such as age, gender, skin color and smoking. Such genetic predisposition was determined by the haplotype presence formed by IL8 gene polymorphisms. The purpose of this study is to compare the subgingival microbiota of sites with and without PD, before and after 45 days of non-surgical periodontal treatment in individuals who are genetically susceptible and non susceptible to PD. In this way, it will be possible to know if there are qualitative/quantitative differences of periodontopathogenic microorganisms between individuals who are genetically susceptible and non susceptible to PD, and if between these groups, there is differential influence on non-surgical periodontal treatment on the clinical and microbiological parameters. Sixty-five individuals were selected and divided regarding the presence or not of that ATC/TTC haplotype in the IL8 gene. The "susceptible" and the "non susceptible" individuals were subdivided about the presence or absence of PD. In each group there are patients with and without periodontitis. The selected patients were submitted to a new periodontal exam and had their gingival fluid collected before and after 45 days of periodontal treatment. The periodontopathogenic microorganism Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, and Treponema denticola have been quantified by absolute quantification by the use of Real Time PCR (qPCR). The microbiological data... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre