Made available in DSpace on 2015-04-20T12:22:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jairo Rafael Machado Dias.pdf: 849761 bytes, checksum: dca51d3fa3d74a4571094bea16a2073a (MD5) Previous issue date: 2013-03-15 / The culture of the sweet orange is characterized by being an activity of great social and economic importance in the state of Amazonas, in Brazil as well, but lacks information related to nutritional standards for the Amazon region. In this sense, the objective was to establish sufficiency range (SR), the critical level (CL) and standards through Compositional Nutrient Diagnosis (CND) to assess nutritional status of sweet orange in different phases of development. 120 plots were monitored commercial sweet orange grafted in lemon clove, sampled in citrus-producing region in the Amazon, in the municipalities: Iranduba, Manacapuru, Manaus, Presidente Figueiredo and Rio Preto da Eva between 2010 and 2011. The FS, NC and CND norms for orange fruits with six months of age were established from the set of plots, while the standards for CND orange phase of full flowering and fruit three and six months of age were obtained from orchards with productivity exceeding 25 tonnes ha-1 in the main crop (June 2012). SR, CL and CND standards for nitrogen (N), phosphorus (P), potassium (K), calcium (Ca), magnesium (Mg), sulfur (S), boron (B), copper (Cu), iron (Fe ), manganese (Mn) and zinc (Zn) were established to sweet oranges in different phases of development. The diagnosis through nutritional standards CND has a low level of agreement compared to nutritional standards proposed by the literature. RS and CL obtained by CND disagree with the CL proposed in the literature for most nutrients. In almost 50% of the plots monitored, P, K, Ca, S, B, Cu and Fe are below critical levels proposed in this paper. The nutritional status of orange varied with foliar sampling period. The concentration of foliar N, P, K and Cu were higher, Ca and Zn in smaller flowering page. It is suggested that the sweet orange has different nutritional requirements among the three phenological stages. / O cultivo da laranjeira Pera caracteriza-se por ser uma atividade de grande importância econômica e social no Amazonas, bem como no Brasil, porém carece de informações relacionadas aos padrões nutricionais para o Estado. Neste sentido, objetivou-se com o presente estudo estabelecer faixa de suficiência (FS), nível crítico (NC) e normas por meio da Diagnose da Composição Nutricional (CND) para avaliação nutricional da laranjeira Pera em diferentes fases fenológicas. Foram monitoradas 120 glebas de laranjeiras Pera enxertadas em limoeiro cravo em fase de produção, amostradas na região produtora de citros no Amazonas, nos municípios de Iranduba, Manacapuru, Manaus, Presidente Figueiredo e Rio Preto da Eva nos anos agrícolas de 2010/2011 e 2011/2012. As FS, NC e normas CND para laranjeiras com frutos de seis meses de idade foram estabelecidas a partir do conjunto das glebas, enquanto que as normas CND para laranjeira na fase de florescimento pleno e com frutos de três e seis meses de idade foram obtidas a partir de pomares com produtividade superior a 25 toneladas ha-1 na safra principal (junho de 2012). FS, NC e normas CND para nitrogênio (N), fósforo (P), potássio (K), cálcio (Ca), magnésio (Mg), enxofre (S), boro (B), cobre (Cu), ferro (Fe), manganês (Mn) e zinco (Zn) foram estabelecidas para laranjeiras Pera em diferentes fases fenológicas. O diagnóstico nutricional por meio de normas CND apresenta baixo grau de concordância comparativamente aos padrões nutricionais propostos pela literatura. FS e NC obtidos pelo CND discordam das FS propostas pela literatura para maioria dos nutrientes. Em quase 50% das glebas monitoradas, P, K, Ca, S, B, Cu e Fe estão abaixo dos níveis críticos propostos neste trabalho. O estado nutricional da laranjeira foi variável com período de amostragem foliar. A concentração foliar de N, P, K e Cu foram maiores, Ca e Zn menores na floração principal. Sugere-se que a laranjeira Pera apresenta exigência nutricional diferente entre os três estágios fenológicos estudados.

Made available in DSpace on 2017-07-10T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eloi Gasparin.pdf: 10922176 bytes, checksum: e0f71949d1aaae845d79c9e0f67aea23 (MD5) Previous issue date: 2013-11-08 / The increase in production and yield as well as the correct use of agricultural inputs are essential factors to be taken into consideration when thinking about modern agriculture. Several techniques, previously used, mainly in the mining sector, have been incorporated to the agricultural sector with the precision agriculture management. The orcharding has also been improved by several studies under development in order to make such sector more competitive both nationally and internationally. The physical and chemical characteristics of orange fruits may change depending on the conditions to which they are exposed to, up from their blossoming period until harvest. Such conditions can be both climatic and related to the fruit position on the treetop. Although good fruit appearance is important, physical and chemical characteristics are as well, both for fresh consumption and industrial processing. Thus, this trial aimed at studying the three-dimensional spatial variability of physical and chemical characteristics of orange fruits in orchards, based on the generation of threedimensional maps and the SGeMS software. The trial was carried out in an orchard with Monte Parnaso orange variety, in Nova Laranjeiras city, Paraná, whose average altitude is 760 m and UTM central coordinates are around 7191655 m S and 341660 m E, 22J. So, 715 orange fruits from nine trees were analyzed during 2011, 2012 and 2013. Physical and chemical parameters showed weak correlation according to their position on the tree, but there was a trend of increasing values concerning the following attributes: diameter, fruit weight and juice mass as the vertical position of the fruits increases. For TSS content, the highest values were observed in the peripheral area of the tree and in its apical third part; but, for TTA content, it tended to decrease with the increasing vertical position of fruit. At last, the applied methodology was appropriate for the three-dimensional study concerning physical and chemical characteristics of orange fruits / O aumento da produção e da produtividade bem como a correta utilização dos insumos agrícolas são fatores indispensáveis quando se pensa em agricultura moderna. Com o surgimento da agricultura de precisão, várias técnicas anteriormente utilizadas, principalmente no setor de minérios, estão sendo incorporadas no setor agrícola. A fruticultura também tem se beneficiado devido a vários estudos em desenvolvimento com o intuito de tornar o setor competitivo tanto nacional como internacionalmente. As características físicas e químicas dos frutos de laranja podem sofrer alterações conforme as condições a que são expostas, desde o período de floração à colheita. Tais condições podem ser climáticas e relacionadas à posição que o fruto ocupa na copa da árvore. Embora a boa aparência dos frutos seja desejável, as características físicas e químicas são importantes tanto para o consumo in natura como para o processamento industrial. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi estudar a variabilidade espacial tridimensional das características físicas e químicas de frutos em pomar de laranjas, a partir da geração de mapas tridimensionais com o auxílio do software SGeMS. O experimento foi conduzido em pomar de laranjas da variedade Monte Parnaso, localizado no município de Nova Laranjeiras - PR, com altitude média de 760 m e coordenadas UTM centrais aproximadas de 7.191.655 m S e 341.660 m E,22J. Foram analisados 715 frutos de laranja provenientes de nove árvores, nos anos de 2011, 2012 e 2013. Os atributos físicos e químicos apresentaram correlação fraca quanto à posição que os mesmos ocupam na árvore, mas houve tendência de aumento de valores de atributos como o diâmetro, massa do fruto e a massa do suco à medida que aumentava a cota vertical dos frutos. Para o teor de SST, os maiores valores foram encontrados na área periférica da árvore e no terço apical; e para o teor de ATT, a mesma tende a diminuir com o aumento da cota vertical do fruto. A metodologia utilizada mostrou-se adequada para o estudo tridimensional de características físicas e químicas de frutos

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Gilson Vitorino.pdf: 2030180 bytes, checksum: 2cdb690e4f8dd7c201d29d466e8f25b7 (MD5) Previous issue date: 2013-09-23 / Studies are conducted to find substances of vegetable origin, such as alternative chemical control to combat the dengue vector, once there is no validated vaccine for that. In this paper, from the extraction and analytical study of the essential oil of the fresh peel of Citrus sinensis L.Osbeck was possible to analyze the larvicidal effect of the oil against third stage larvae of Aedes aegypti (Linnaeus, 1762). The oil was extracted quantitatively by steam distillation process using Clevenger type apparatus. The physico-chemical properties of essential oil were determined (density, refractive index, solubility, color and appearance). The oil was characterized analytically by infrared (FTIR) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS),thus identifying its major compound. LC50 from the oil was calculated from the Reed-Muench method (1938) and Pizzi (1950), respectively. The yield of oil was 2.47% m/m.Through spectroscopic techniques used,it was possible to identify 15 compounds, justifying presence of d-limonene as a major constituent. The essential oil exhibited LC50 of 99.014 (± 2.098) μg.mL-1 and the standard d-Limonene 126.037 (± 2.092) μg.mL-1. The results indicate that the essential oil Citrus sinensis L. Osbeck comprises substances with larvicidal effect against mosquito Aedes aegypti. / Estudos são desenvolvidos no sentido de encontrar substâncias de origem vegetal, como controle químico alternativo ao combate do vetor da dengue, uma vez em que até o presente momento não há vacina validada para a mesma. No referido trabalho, a partir da extração e do estudo analítico do óleo essencial das cascas frescas de Citrus sinensis L.Osbeck , foi possível analisar o efeito larvicida do óleo contra as larvas em terceiro estágio do mosquito Aedes aegypti (Linnaeus, 1762). Extraiu-se quantitativamente o óleo pelo processo de hidrodestilação, usando aparelho do tipo Clevenger. Determinaram-se as propriedades físico-químicas do óleo essencial (densidade, índice de refração, solubilidade, cor e aparência). Caracterizou-se analiticamente o óleo por infravermelho (FTIR) e cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massas (CG-EM), identificando desta forma o seu composto majoritário. Calculou-se a CL50 do óleo, a partir dos métodos de Reed-Muench (1938) e Pizzi (1950), respectivamente. O rendimento do óleo foi de 2,47% m/m. Através das técnicas espectroscópicas utilizadas, foi possível identificar 15 compostos, justificando a presença do d-Limoneno como constituinte majoritário. O óleo essencial exibiu CL50 de 99,014 (±2,098) μg.mL-1 e o padrão d-Limoneno 126,037 (±2,092) μg. mL-1. Os resultados apresentados indicam que o óleo essencial Citrus sinensis L. Osbeck, é constituído por substâncias que possuem efeito larvicida frente ao Aedes aegypti.

A migração da citricultura paulista das regiões norte e central para a região sudoeste, tem submetido a cultura à clima mais chuvoso e, consequentemente, à maior ocorrência da podridão floral dos citros (PFC). A PFC, cujo agente causal é C. acutatum, induz a abscisão de frutos jovens e pode causar perdas de 100%. Alguns componentes do monociclo dessa doença ainda encontram-se indefinidos. Os processos de sobrevivência e colonização têm sido sustentados por evidências oriundas de experimentos não conclusivos. Até o momento, os métodos de detecção não têm sido eficazes para detectar o patógeno em folhas assintomáticas de citros, além de não serem capazes de quantificá-lo. Diante dessas lacunas, esse trabalho buscou avaliar o período de sobrevivência do patógeno na superfície de folhas assintomáticas entre as floradas; verificar se o patógeno coloniza os tecidos das folhas de citros; estabelecer um método sensível para detecção e quantificação de C. acutatum e C. gloeosporioides na superfície foliar e; monitorar quantitativamente os patógenos em campos de produção de citros no Estado de São Paulo. A sobrevivência do patógeno foi avaliada em condições controladas, casa de vegetação e condições ambientais. Foi notado que o patógeno sobreviveu até sete meses em condições controladas, até dez meses em casa de vegetação e até seis meses sob condições ambientais. Chuvas regulares associadas ao molhamento foliar prolongado, auxiliaram na manutenção e sobrevivência do inóculo na superfície foliar. O processo de colonização do patógeno foi investigado por microscopia de luz, transmissão e confocal. Não foi observada colonização do patógeno em tecidos foliares. O peg de penetração proveniente dos apressórios penetrou a cutícula e ficou restrito numa camada péctica, acima da parede periclinal da epiderme. Diferentes métodos foram avaliados para a detecção e quantificação de C. acutatum e C. gloeosporioides em folhas de citros. Foi desenvolvida uma PCR em tempo real (qPCR) e uma PCR multiplex em tempo real (qPCR multiplex), ambas específicas e altamente sensíveis à detecção dos patógenos. O DNA da planta não influenciou na amplificação da qPCR. As qPCR foram muito mais sensíveis que a PCR convencional e Nested-PCR. Distintos métodos para processamento das amostras e para obtenção do DNA foram avaliados. O método do congelamento e a maceração do tecido foliar, foram os mais eficazes para o processamento da amostras e, a extração do DNA (CTAB ou Qiagen) foi melhor método de obtenção do DNA para quantificação dos patógenos. O spot e extração do DNA foram validados para a detecção dos patógenos tanto para a qPCR quanto para a qPCR multiplex. O monitoramento dos patógenos foi realizado em áreas localizadas em duas distintas regiões do Estado de São Paulo. Foi notado considerável aumento na quantidade de inóculo quando ocorreram chuvas regulares, com muitos dias com chuvas. O inóculo se concentrou no interior da copa em épocas com baixo volume de chuvas. A quantidade de inóculo de C. acutatum na área localizada em Santa Cruz do Rio Pardo foi consideravelmente maior que na área de Barretos e ambas apresentaram quantidades similares de C. gloeosporioides. / The migration of the citrus culture in São Paulo State from the northern and central regions to the south-western region submitted the culture to a wetter climate and, consequently, a higher incidence of postbloom fruit drop (PFD). PFD, whose causal agents are C. acutatum and C. gloeosporioides, induces the abscission of young fruits and can causes loss of 100% of the culture. Some monocycle components of this disease are still undetermined. The survival and colonization processes are supported by evidences from inconclusive experiments. To date, the detection methods have not been effective in detecting and quantifying the pathogen in asymptomatic citrus leaves. This study aimed to assess the survival period of C. acutatum on the surface of asymptomatic leaves between the flowering seasons, to verify whether the pathogen colonizes the tissues of citrus leaves of citrus, to establish a sensitive method for detection and quantification of C. acutatum and C. gloeosporioides on leaves surface and to monitor quantitatively the pathogens in citrus orchards in the State of São Paulo in Brazil. The survival of the pathogen was evaluated under controlled conditions, in a greenhouse and in environmental conditions. The pathogen survived for seven months under controlled conditions, ten months in a greenhouse and six months under environmental conditions. Regular rainfall associated with the prolonged leaf wetness favored the maintenance and survival of the inoculum on the leaf surface. The colonization process of the pathogen was investigated by light, confocal and transmission microscopy. Pathogen colonization was not observed on leaf tissues. The penetration peg from appressoria penetrated the cuticle and was restricted in a pectic layer on the periclinal epidermal wall. Different methods were evaluated for the detection and quantification of C. acutatum and C. gloeosporioides on leaves of citrus plants. It was developed a realtime PCR (qPCR) and a real-time multiplex PCR (qPCR multiplex), both specific and highly sensitive in the detection of pathogens. The plant DNA did not influence the qPCR amplification. The qPCRs were much more sensitive than the conventional PCR and Nested-PCR. Different methods for sample processing and for DNA extraction were evaluated. The freezing and maceration methods of foliar tissue were the most effective for sample processing and the DNA extraction (CTAB or Qiagen) was best method for extracting the DNA for pathogen quantification. The Spot and DNA extraction were validated for the detection of pathogens for both qPCR and multiplex qPCR. The monitoring of pathogens was carried out in two separate regions of the State of São Paulo in Brazil. It was observed a considerable increase in the number of inoculum when regular rainfall occurred, with many rainy days. The inoculum was concentrated within the tree canopy in seasons with low volume of rainfall. The number of inoculum of C. acutatum the at region of Santa Cruz do Rio Pardo was considerably higher than in the region of Barretos and both showed similar amounts of C. gloeosporioides.

A laranjeira \'Pera\' é a cultivar mais plantada na citricultura brasileira. Com a incidências de doenças e aumento do custos de produção na citricultura, torna-se necessário a avaliação de materiais genéticos mais promissores que a laranjeira \'Pera\'. Portanto, buscou-se avaliar o desempenho horticultural de laranjeiras doces consideradas meia-estação e identificar aquelas superiores à cultivar padrão (Pera IAC). Foram avaliadas dezessete cultivares de laranja doce (Pera IAC, Pera IAC 2000, Pera 2, Pera 3, Pera 4, Pera Alexandre Maróstica, Pera Milton Teixeira, Seleta Amarela, Seleta Rio, Homosassa, Finike, Biondo, Bidwells Bar, Sanguínea, Vaccaro Blood, Torregrosa e Jaffa) enxertadas em tangerineira \'Sunki\'. O experimento foi instalado em maio de 2007, no espaçamento 6,5 x 2,5 m e conduzido sem irrigação. Avaliaram-se o crescimento vegetativo, produção, eficiência produtiva, abscisão dos frutos, sensibilidade ao déficit hídrico, incidência de podridão floral (PFC), incidência e severidade de mancha preta dos citros (MPC), qualidade e curva de maturação dos frutos. As médias das variáveis foram comparadas com a cultivar padrão (Pera IAC) e analisadas pelo teste de Dunnett (P < 0,05). Para sensibilidade ao déficit hídrico e curvas de maturação foram realizadas analises de regressão. As plantas de laranja \'Pera 3\' registraram as menores alturas, no sétimo ano após o plantio. As plantas de laranja \'Pera Milton Teixeira\' e \'Pera Alexandre Maróstica\' foram os únicos materiais que registraram produções acumuladas superiores às das plantas de laranja \'Pera IAC\'. As plantas de \'Seleta Amarela\', \'Pera 3\', \'Pera 4\', \'Vaccaro Blood\' e \'Pera Milton Teixeira\' registraram as maiores eficiências produtivas. As plantas da laranja \'Pera IAC\' registraram as maiores alternâncias produtivas e as plantas de laranja \'Sanguínea\' registraram as menores alternâncias. As seleções \'Pera 2\', \'Pera 3\', \'Pera 4\' e \'Pera Milton Teixeira\' registraram as menores abscisões de frutos. As plantas das laranjas \'Pera Milton Teixeira\', \'Pera IAC\', \'Pera IAC 2000\', \'Pera 2\', \'Seleta Rio\' e \'Pera 3\' foram classificadas como cultivares de alta sensibilidade ao déficit hídrico e as plantas das laranjas \'Bidwells Bar\', \'Jaffa\', \'Torregrosa\' e \'Sanguínea\' como de baixa sensibilidade. As menores incidências de MPC foram registradas nos frutos da laranjeira \'Pera IAC\' e não houve diferenças entre as cultivares para incidência de PFC. Para o teor de sólidos solúveis, apenas os frutos da laranja \'Finike\', \'Pera 2\' e \'Pera Alexandre Maróstica\' foram superiores aos da cultivar padrão. A seleções \'Pera IAC\', \'Pera 2\', \'Pera 3\' e \'Pera 4\' apresentaram alta similaridade fenotípica entre si. Ao estabelecer a curva de maturação, verificou-se uma maior precocidade da laranjeira \'Seleta Rio\' e uma maturação mais tardia para a seleção \'Pera Alexandre Maróstica\' quando comparadas a laranjeira \'Pera IAC\'. / \'Pera\' is the most widely planted sweet orange cultivar in the Brazilian citrus industry. Due to incidences of diseases and increase in production costs it is necessary to find promising genetic materials than \'Pera\' sweet orange. Therefore, the horticultural performance of sweet oranges, considered mid-season, were evaluated and identified those ones which were better than standard cultivar (Pera IAC). Seventeen sweet orange cultivars (Pera IAC, Pera IAC 2000, Pera 2, Pera 3, Pera 4, Pera Alexandre Maróstica, Pera Milton Teixeira, Seleta Amarela, Seleta Rio, Homosassa, \'Finike, Biondo, Bidwells Bar, Sanguínea, Vaccaro Blood, Torregrosa e Jaffa) were evaluated, all of then were grafted on \'Sunki\' mandarin and were nonirrigated. The experimental orchard was planted in May 2007, from 12 month-old plants (nursery trees) disposed in a 6,5 m × 2,5 m spacing. We evaluated the vegetative growth, yield, yield efficiency, fruit drop, sensitivity to drought, incidence of postbloom fruit drop (PFD), incidence and severity Black Spot of Citrus (CBS), fruit quality and index of ripeness. The averages of variables were compared with the standard cultivar (Pera IAC) and analyzed by Dunnett\'s Test (P < 0.05). For sensitivity to drought and index of ripeness were performed regression analyzes. The lowest hight and canopy volume were recorded in the \'Pera 3\' sweet orange trees seven years after planting. The \'Pera Milton Teixeira\' and \'Pera Alexandre Marostica\' sweet orange trees were the only materials which had superiority over the \'Pera IAC\' sweet orange trees regarding cumulative yield. The largest yield efficiency was registered in \'Seleta Amarela\', \'Pera 3\', \'Pera 4\', \'Vaccaro Blood\' and \'Pera Milton Teixeira\' sweet orange trees. The most alternate bearing index was found in the standard cultivar and \'Sanguinea\' sweet orange trees showed smaller bearing index. Smaller fruit drop were checked in cultivars Pera 2, Pera 3, Pera 4 and Pera Milton Teixeira. The \'Pera Milton Teixeira\', \'Pera IAC\', \'Pera IAC 2000\', \'Pera 2\', \'Seleta Rio\' and \'Pera 3\' sweet orange trees showed high sensitivity to drought while the \'Bidewells Bar\', \'Jaffa\', \'Torregrosa\' and \'Sanguínea\' sweet orange trees showed low sensitivity. Regarding the evaluated diseases, the orange \'Pera IAC\' recorded the lowest incidences of MPC and PFC differences were not cheked among the cultivars. For the soluble solids content, only the \'Finike\', \'Pera 2\' and \'Pera Alexandre Marostica\' sweet oranges fruits were superior to standard. The cultivars Pera IAC, Pera 2, Pera 3 and Pera 4 sweet oranges showed high phenotypic similarity. The \'Seleta Rio\' sweet orange was considered early-maturing cultivar and \'Pera Alexandre Maróstica\' a late-maturing cultivar when compared \'Pera IAC\' sweet orange.

Orientador: Celso Eduardo Benedetti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T05:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_BrunaMedeia_D.pdf: 41386343 bytes, checksum: 8048b677c8a43e7438a1c349c584b9ec (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O cancro cítrico, causado pelo fitopatógeno Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) constitui uma doença que afeta todos os cultivares comerciais de citros e é uma ameaça para a citricultura brasileira. A doença é caracterizada pela formação de pústulas, devido à hiperplasia e hipertrofia induzida pela bactéria. A patogenicidade de Xac é dependente do sistema secretório tipo III, que transloca proteínas efetoras pertencentes à família AvrBs3/PthA para dentro da célula hospedeira. Estudos recentes mostram que PthAs funcionam como fatores de transcrição no hospedeiro, transativando genes específicos da planta que irão beneficiar a bactéria ou desencadear uma resposta de defesa. Com o objetivo de entender melhor o mecanismo de ação de PthAs como ativadores da transcrição, nosso laboratório identificou, através da técnica de duplo-híbrido, várias proteínas de laranja (Citrus sinensis) que interagiram com diferentes PthAs. Entre elas, destacamos uma ciclofilina (CsCyp), que realiza isomerização de resíduos de prolina, uma proteína com domínio tioredoxina (CsTdx), relacionada com interação proteína-proteína e redução de pontes dissulfeto e uma cisteína protease (CsCP), envolvida na resposta de defesa da planta. Este trabalho teve como objetivo a caracterização estrutural e funcional de CsCyp. A resolução da estrutura de CsCyp mostrou que CsCyp pertence ao grupo de ciclofilinas divergentes que possuem um loop adicional (KSGKPLH), duas cisteínas invariáveis (C40 e C168) e um glutamato (E83) conservado. Este último interage com resíduos do loop, estabilizando-o. A função destes elementos era desconhecida até o momento e o trabalho visou elucidar sua atuação na regulação da atividade PPIase da proteína. Neste trabalho, verificamos que C40 e C168 formam uma ponte dissulfeto. Dados de modelagem e simulação suportaram a hipótese de que a formação da ponte dissulfeto induz mudanças conformacionais que quebram a interação do E83 com o loop divergente, levando ao fechamento do sítio ativo de CsCyp. O estudo descreveu, portanto um mecanismo de regulação redox, que controla a atividade PPIase da proteína. Adicionalmente, mostrou-se que CsTdx interage com CsCyp através dos resíduos conservados C40 e C168, sendo críticos para tal interação. Foi mostrado também que CsCyp interage com o domínio C-terminal (CTD) da RNA Polimerase II (RNA Pol II), especificamente com a repetição YSPSAP. Surpreendentemente, através da transformação de plantas com construções para silenciamento e superexpressão de CsCyp, verificamos que plantas de citros com níveis reduzidos de CsCyp apresentaram um aumento dos sintomas do cancro cítrico quando infiltradas com Xac, enquanto que plantas com níveis aumentados de CsCyp apresentaram sintomas reduzidos quando infiltradas com Xac, indicando que CsCyp tem papel importante no desenvolvimento dos sintomas do cancro cítrico. Este trabalho também mostra a expressão e purificação das proteínas CsTdx e CsCP e a comprovação de que CsCP interage com PthAs 2 e 3 através de ensaios de duplo-híbrido / Abstract: Citrus canker, caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) is a disease that affects most species of the genus Citrus and represents a threat to the Brazilian citrus industry. The disease is characterized by the formation of pustules due to hyperplasia and hypertrophy induced by the bacteria. Xac pathogenicity is dependent on a type III secretory system that translocates effector proteins which belongs to AvrBs3/PthA family inside the host cell. Recent studies showed that these proteins work as transcriptional factors that transactivate specific plant genes which will either benefit the bacteria or trigger defense response. To gain insights into PthA mechanism of action as transcription activators, our laboratory identified that PthA targeted the citrus protein complex comprising the thioredoxin CsTdx, ubiquitin-conjugating enzymes CsUev/Ubc13 and cyclophilin CsCyp. Also, we showed previously that the CsCyp binds the citrus thioredoxin CsTdx and the C-terminal domain of RNA Polymerase II (CTD), and that CsCyp complements the function of Cpr1 and Ess1, two yeast prolyl-isomerases that regulate transcription by the isomerization of proline residues of the regulatory C-terminal domain (CTD) of RNA polymerase II. In this work we solved the 3D structure of CsCyp in complex with its inhibitor cyclosporine A (CsA), showing that CsCyp is a divergent cyclophilin that carries the additional loop KSGKPLH, invariable cysteines C40 and C168, and conserved glutamate E83. Despite the suggested roles in ATP and metal binding, the function of these unique structural elements remains unknown. Here we show that the conserved cysteines form a disulfide bond that inactivates the enzyme, whereas E83, which belongs to the catalytic loop and is also critical for enzyme activity, is anchored to the divergent loop to maintain the active site open. In addition, we demonstrate that C40 and C168 are required for the interaction with CsTdx and that CsCyp binds the citrus CTD YSPSAP repeat. Our data support the model where formation of the C40- C168 disulfide bond induces a conformational change that disrupts the interaction of the divergent and catalytic loops, via E83, causing the active site to close. This suggests a new type of allosteric regulation in divergent cyclophilins, involving disulfide bond formation and a loop displacement mechanism. Moreover, we present evidence that PthA2 inhibits the peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (PPIase) activity of CsCyp in a similar fashion as CsA, and that silencing of CsCyp, as well as treatments with CsA, enhance canker lesions in Xac-infected leaves. Given that CsCyp appears to function as a negative regulator of cell growth and that Ess1 negatively regulates transcription elongation in yeast, we propose that PthAs activate host transcription by inhibiting the PPIase activity of CsCyp on the CTD / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutora em Genética e Biologia Molecular

A leprose dos citros é uma doença de grande importância econômica aos citricultores, devido aos prejuízos por ela causados. A doença provoca lesões localizadas nos ramos, frutos e folhas e pode causar grandes perdas aos pomares não tratados. A leprose dos citros possui etiologia viral sendo o vírus denominado Citrus leprosis virus (CiLV). Atualmente, atribuí-se a leprose dois tipos de vírus que causam sintomas morfológicos e citopatológicos distintos: o tipo nuclear (CiLV-N) e o tipo citoplasmático (CiLV-C). O presente trabalho teve como objetivo investigar as alterações anatômicas e comparar o perfil protéico entre as lesões causadas pelos dois tipos de vírus em laranjeira-doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. Para as análises anatômicas foram coletadas amostras de tecidos sadios e de tecidos lesionados. As amostras foram fotografadas e em seguida fixadas em solução de Karnovsky, desidratadas em série etílica, infiltradas em resina hidroxi-etil-metacrilato (Leica Historesin), seccionadas em micrótomo rotativo a 5-7 µm de espessura, coradas com azul de Toluidina para as análises histológicas usuais. Também foram realizados testes histoquímicos para fenóis, compostos pécticos, proteína e lipídios. A captura de imagens digitais dos materiais preparados em lâminas foi realizada em microscópio equipado com câmera de vídeo. Para a análise do perfil protéico as amostras coletadas foram imediatamente criofixadas em nitrogênio líquido e armazenadas em refrigerador a - 80ºC para posterior extração protéica. As proteínas extraídas foram quantificadas e depois separadas por eletroforese em gel de policrilamida. As lesões foliares se iniciaram como pontuações necróticas, envolvidas por halos cloróticos que limitam o crescimento da lesão. Nos ramos, ocorreram dois tipos de lesões com fendas. As lesões de ramos e de folhas provenientes do campo com sintomas de CiLV-C apresentaram similaridades com as amostras inoculadas. No caso das lesões foliares causadas pelo CiLV-N observa-se a presença de três regiões distintas: o centro necrótico, o halo intermediário e o halo clorótico. As lesões nos frutos de ambos os tipos de leprose eram distintas. Ductos traumáticos gomosos foram observados nos ramos infectados pelo CiLV-C e nos feixes vasculares de folhas e frutos infectados pelo CiLV-N. Quanto ao perfil protéico, verificou-se um aumento na concentração protéica nos tecidos infectados, em especial, nas lesões causadas pelo CiLV-N. Foi possível observar que havia um padrão anatômico e histoquímico nas lesões causadas pela leprose em laranjeira doce independente do tipo de vírus, pois em todas as lesões foi verificada hipertrofia e hiperplasia celular, plasmólise, a redução de grãos de amido, o acúmulo de compostos lipídicos nas células da área necrosada e a presença de um halo, ao redor dessa área, constituído de células que acumulam proteínas. / The citrus leprosis of citrus has been considered a disease of great economic importance to citrus producers due to the damage that it causes. The disease is responsible for lesions found in the twigs, leaves and fruits, and it may cause great losses to the untreated orchards. The citrus leprosis has viral etiology being the virus called Citrus leprosis virus (CiLV). Currently, there are two types of virus attributed to leprosis that cause different morphological and cythopatological symptoms: the nuclear (CiLV-N) and cytoplasmic type (CiLV-C). This study aimed to investigate the anatomical changes and to compare the proteic profile between the injuries caused by two types of virus in sweet orange [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. For anatomical analyses healthy tissue and different lesions were photographed and then fixed in Karnovsky solution, dehydrated in a graded ethylic series, embedded in hidroxy-ethyl methacrylate resin (Leica Historesin), sectioned (5 ?m thick), stained and mounted in synthetic resin. The digital images were capture in a microscope with video camera. For the analysis of protein profiles the samples were collected and immediately cryofixed in liquid nitrogen and stored in the refrigerated - 80 ° C. The proteins were extracted, quantified and then separated by gel electrophoresis of polyacrylamide gel. Foliar lesions began as necrotic spots surrounded by a yellow halo that inhibited the lesion expansion. The twigs presented two different lesions: depressed ones and pustules with ruptures. The collected-field lesions of leaves and twigs showed that symptoms of CiLV-C had a certain similarity with the inoculated samples. In the case of foliar lesions caused by CiLV-N there was the presence of three different regions: the necrotic center, the intermediate halo and chlorotic halo. The fruit lesions caused by both types of leprosis virus were different. Ductos traumáticos gomosos foram observados nos ramos infectados pelo CiLV-C e nos feixes vasculares de folhas e frutos infectados pelo CiLV-N. Gummous traumatic ducts in twigs infected by CiLV-C and in the vascular bundles of fruit and leaves infected with CiLV-N were observed. In the proteic profile, there was an increase in protein concentration in the infected tissues especially for injuries caused by CiLV-N. It was possible to observe that there was an anatomical and histochemical pattern in the lesions caused by leprosis in sweet orange independently of the type of virus, therefore in all the injuries was verified hyperplasia, hypertrophy, cell plasmolisis, the reduction of starch grains, the accumulation of lipids compounds in the cells of the necrotic areas and the presence of a halo, surrounding that area, constituted by cells that accumulate proteins.

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-21T14:57:13Z No. of bitstreams: 1 Renata Cristina Medeiros.pdf: 370604 bytes, checksum: a1271c406faf0f594ad0f7e8f50b9b13 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T14:57:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata Cristina Medeiros.pdf: 370604 bytes, checksum: a1271c406faf0f594ad0f7e8f50b9b13 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The citrus industry is one of the most important agricultural activities to Brazil, considering economic and social aspects. For production of fresh market fruit, there is little diversity of studies in Brazil, and investments are insufficient to change that. The northeastern region is fortunate to have the best conditions for development of the culture, and the micro-region around Garanhuns County, in Pernambuco Estate, has a great potential for the production of citrus fruits, for table consuming, because of the favourable soil and climatic conditions. The objective of this study was to evaluate the varieties of citrus, for table consuming, at the conditions of Southern Agreste region of Pernambuco, on agronomic parameters and physical characteristics, chemical and physico-chemical characteristics of fruits, in order to support the selection of genotypes for the region and contribute to the diversification of fruit plantation. The Citrus collection where the experiment took place is located at the Experimental Station of Brejão, which belongs to the Agricultural Institute of Pernambuco (IPA). For the study of the collection were used morphological descriptors proposed for citrus. Was measured the physical characteristics of the fruits: shape, epicarp color, height and diameter, fruit mass, thickness of the epicarp, mesocarp thickness, number of seeds per fruit and juice yield. Regarding physicalchemical and chemical parameters, were evaluated total soluble solids, titratable acidity, content of ascorbic acid (vitamin C) and hydrogenic potential. To evaluate plant growth, the variables chosen were stem diameter above and below the graft, plant height and canopy volume. The experimental design was randomized blocks with four replications and one plant per plot, being spaced 6x4 m. The treatments consisted in 15 varieties of oranges, two of lime and one of lemon. It was revealed that six varieties studied are within the requirements of the Brazilian Program for the Improvement Standards and Commercial Packaging of horticultural and five varieties of oranges had different maturation than is usually reported in the literature. / A citricultura é uma das atividades agrícolas de maior importância econômica e social para o Brasil. Para produção de frutas de consumo “in natura”, há pouca diversidade de estudos no Brasil, e os investimentos são insuficientes para mudar este quadro. A região nordeste é privilegiada por dispor das melhores condições para desenvolvimento da cultura, e a microrregião de Garanhuns, em Pernambuco, apresenta potencial para a produção de frutos cítricos de mesa, devido suas condições edafoclimáticas. Objetivou-se com este trabalho avaliar as variedades de citros de mesa nas condições edafoclimáticas da região Agreste Meridional de Pernambuco, mediante parâmetros agronômicos e características físicas, físicoquímicas e químicas dos frutos, visando dar suporte à seleção de genótipos para a região e contribuir com a diversificação da fruticultura. A coleção de Citros onde foi realizado o experimento está implantada na Estação Experimental de Brejão, pertencente ao Instituto Agronômico de Pernambuco (IPA). Para o estudo da coleção foram utilizados descritores morfológicos propostos para os citros. Foram aferidas as características físicas dos frutos como: formato; coloração do epicarpo; altura e diâmetro; massa do fruto; espessura do epicarpo mais mesocarpo; espessura do endocarpo; número de sementes por fruto e rendimento em suco. Para as análises físico-químicas e químicas foram avaliados: sólidos solúveis, acidez titulável, teor de ácido ascórbico (vitamina C) e potencial hidrogênionico. Nas plantas as variáveis de crescimento avaliadas foram: diâmetro do caule acima e abaixo da linha de enxertia, altura da planta e volume da copa. O delineamento experimental adotado foi em blocos ao acaso, com quatro repetições e uma planta por parcela, sendo espaçadas 6x4 m. Os tratamentos foram compostos por 15 variedades de laranjas, duas de limas e uma de limão. Foi revelado que das variedades estudadas, apenas seis laranjas, as limas e o limão estão dentro das exigências do Programa Brasileiro para a Modernização da Horticultura e que cinco variedades de laranjas apresentaram maturação diferente das relatadas na literatura.

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.

A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.