La presente tesis evalúa y determina “in vitro” la actividad antimicrobiana del aceite de Copaiba (Copaifera paupera) obtenido del árbol del mismo nombre, frente a las bacterias patógenas: Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Staphylococcus aureus (ATCC 25923). La actividad antimicrobiana in vitro del aceite de copaiba se determinó usando la metodología de difusión en disco de Kirby-Bauer, método recomendado por Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para la determinación de la sensibilidad bacteriana a los antibióticos y estandarizado para el estudio. Se logró establecer el volumen óptimo (5 microlitos) de aceite de Copaiba a impregnarse en los discos problemas para un adecuado efecto antimicrobiano y estandarización del método. La actividad antimicrobiana fue comparada utilizando los siguientes discos patrones: Ceftriaxona (30ug), Ciprofloxacina (5ug) y Gentamicina (10ug). Se logró obtener un efecto antimicrobiano adecuado con la cepa de P. aeuroginosa. El presente estudio es de tipo descriptivo, observacional y de corte transversal. PALABRAS CLAVES: Aceite de Copaiba. Actividad antimicrobiana “in vitro”. Método de difusión en disco de Kirby-Bauer. / This thesis evaluates and determines "in vitro" antimicrobial activity Copaiba oil (Copaifera paupera) obtained from the tree of the same name, against pathogenic bacteria: Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Staphylococcus aureus (ATCC 25923). In vitro antimicrobial activity copaiba oil was determined using the disk diffusion method of Kirby-Bauer method recommended by Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) for the determination of bacterial sensitivity to antibiotics and standardized for the study. It was possible to establish the optimum volume (5 microliters) Copaiba oil to soak in trouble discs adequate antimicrobial and standardization of the method. The antimicrobial activity was compared using the following discs patterns: ceftriaxone (30ug), Ciprofloxacin (5ug) and Gentamicin (10ug). He managed to get a suitable antimicrobial effect with the strain of P. aeruginosa. The present study is a descriptive, observational and cross-sectional. KEYWORDS: Copaiba oil. Antimicrobial activity "in vitro". Disk diffusion method of Kirby. / Tesis

Orientador: Francisco Carlos Groppo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T17:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nery_LeticiaRodrigues_D.pdf: 3127489 bytes, checksum: 64956d23f2784400afae608bf37195fd (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O objetivo desta pesquisa foi verificar o efeito radioprotetor de uma formulação homeopática feita à base de radiação X e outra fitoterápica, à base de óleo de copaíba, comparando-as com a vitamina E. Foram observados os efeitos destas substâncias sobre a função salivar e a morfologia da glândula parótida, em ratos irradiados com radiação X. Para tanto, foram utilizados 200 ratos divididos nos seguintes grupos (n=5): G1 que recebeu NaCl 0,9% (controle - sham) e não foi irradiado; G2 - recebeu NaCl 0,9% + irradiação; G3 - recebeu suspensão de acetato de dl-alfa-tocoferol (vitamina E) 40mg/kg/vo/dia; G4 - recebeu vitamina E na mesma dosagem do G3 + irradiação; G5 - recebeu a homeopatia de radiação X dinamizada a 15 CH 1mL/kg/vo/dia; G6 - recebeu a mesma homeopatia + irradiação; G7 - recebeu óleo de copaíba 2g/kg/vo/dia e G8 - recebeu óleo de copaíba na mesma dosagem + irradiação. Todos os tratamentos foram mantidos por sete dias. Ao final deste período, os animais foram anestesiados, posicionados no acelerador linear e, com exceção dos grupos 1, 3, 5 e 7, receberam 15Gy de radiação X. Os tratamentos foram mantidos por mais sete dias após a irradiação. Após 12 horas, 3, 10, 17 e 24 dias da irradiação, os animais foram submetidos à anestesia, a secreção salivar foi estimulada com pilocarpina e a saliva coletada por 30 minutos. Imediatamente após a coleta da saliva, os animais foram sacrificados por aprofundamento da anestesia e as glândulas salivares, cuidadosamente dissecadas. As glândulas salivares foram submetidas à inclusão em parafina. Após processamento, foram feitos cortes (6 ?m) e submetidos à coloração HE. Foram obtidas fotomicrografias para avaliação das glândulas parótidas. A análise histomorfológica das glândulas mostrou um aumento da desorganização estrutural com o passar dos tempos nos animais irradiados, independente do tratamento utilizado, enquanto que as glândulas dos animais não irradiados mantiveram-se íntegras. Foi possível observar que, de uma maneira geral, os tratamentos não afetaram a produção salivar tanto nos animais irradiados quanto nos não irradiados. Além disso, foi possível observar que após 10 dias da irradiação houve recuperação significativa da produção salivar, independentemente dos tratamentos utilizados e a lag phase não foi afetada pelos tratamentos, nem pela irradiação. Pode-se concluir que quantitativamente a formulação homeopática feita à base de radiação X, a formulação fitoterápica feita à base de óleo de copaíba e a vitamina E não se comportaram como um radioprotetor nas glândulas parótidas e na sua função / Abstract: The aim of the present study was to observe the radioprotective effect of a homeopathic formulation (X rays) and a phytotherapeutic formulation based on copaiba oil, comparing both with E vitamin. The effect of these formulations over the salivary function and the morphology of parotid gland were observed in rats irradiated with X radiation. One hundred-sixty rats were divided into the following groups (n=5): G1 - received 0.9% NaCl (Control - sham) and it was not irradiated; G2 - received 0.9% NaCl and it was irradiated; G3 - received 40mg/kg/vo/dia dl-alpha-tocopherol (E vitamin) suspension; G4 - received the same E vitamin dose and it was irradiated; G5 - received a 15 CH dynamized homeopathic formulation of X rays 1mL/kg/vo/dia; G6 - received the same formulation and it was irradiated; G7 - received a formulation of 2g/kg/vo/dia copaiba oil and G8 - received the same formulation and it was irradiated. All treatments were kept during seven days. After this period, all animals were anesthetized, positioned in a linear accelerator and, except for groups 1, 3, 5 and 7, groups received 15 Gy of X radiation. The treatments were kept more seven days after irradiation. After 12 hours, 3, 10, 17 and 24 days from irradiation, all animals were submitted to general anesthesia; the salivary secretion was stimulated with pilocarpine and then collected during 30 minutes. Right after the saliva collection, the animals were killed by the same anesthesia and the salivary glands were carefully dissected and submitted to routine histological techniques. Six micrometers slices were stained with HE technique and photomicrographies were obtained from parotid glands. The histomorphological analysis showed an increased structural disorganization along time in the irradiated animals, independently of the treatments, while the glands of the non-irradiated animals remained sound. It was possible to observe, generally, that the treatments did not affect the saliva production in both irradiated and non-irradiated animals. Besides, after 10 days from the irradiation, a significant recovering on saliva production was verified independently of the treatments. The lag phase was not affect by the treatments or by the irradiation. We concluded that the treatments did not act as radioprotective agents in the parotid gland / Doutorado / Radiologia Odontologica / Doutor em Radiologia Odontológica

Orientador: Paulo Mitsuo Imamura / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-09T04:10:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romero_AdrianoLopes_M.pdf: 3449725 bytes, checksum: efe9788675287ceea4663671f084ad15 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: óleo-resina de copaíba comercial é um exudado do tronco de diversas espécies do gênero Copaifera (Caesalpinoideae, Leguminosae). Esse óleo é utilizado na medicina popular como cicatrizante, antiinflamatório, no tratamento de bronquites e doenças de pele, assim como na indústria cosméstica como fixador para perfumes e como solvente para tintas e vernizes. Apesar de existir extensa literatura sobre o óleo de copaíba e alguns artigos recentes relatarem o isolamento de novos compostos, muitas das configurações absolutas permanecem indeterminadas. Diante desse fato este trabalho teve como objetivo, isolar os constituintes químicos do óleo de copaíba comercial para caracterização e efetuar a determinação das configurações absolutas dos mesmos. O óleo-resina de copaíba foi submetido a uma extração ácido-base fornecendo duas frações: Fração Neutra (81,7%) e Fração Ácida (18,3%). O estudo da fração neutra permitiu o isolamento de onze sesquiterpenos, sendo dois deles relatados pela primeira vez neste material {(-)-7(11)-selinen-4-ol e (-)-torreyol}; três dinorlabdanos, sendo um inédito como produto natural; e o clerodano 7- acetoxibacchotricuneatina D. A configuração absoluta dos dinorlabdanos foram determinadas pela síntese a partir do ácido (-)-3-hidroxi-copálico e a estereoquímica do C-13 dos álcoois dinorlabdânicos foi estabelecida pela aplicação do método de Mosher modificado. Da fração ácida foram isolados três diterpenos ácidos (copálico, 3-acetoxi-copálico, 3-hidróxicopálico). Além disso, após tratamento de uma amostra da fração ácida com diazometano e purificação por cromatografia em coluna de sílica gel, foram isolados oito diterpenos, sendo um destes inédito (3,19- diidróxi-copalato de metila) e dois terpenos raros (o guamaato de dimetila e o 4-hidroperóxido-18-norcopalato de metila) / Abstract: The commercial copaiba oleoresin is an exuded obtained from the trunk of many species of the Copaifera genus (Caesalpinoideae, Leguminosae). This oil is used in the popular medicine as cicatrizant, anti-inflammatory, in the treatment of bronchitis and for skin diseases, and also in the cosmetic industry as fixative of the perfumes and as solvent for inks and varnishes. Although there are an extensive report concerning the composition of copaíba oil in the literature and some recent papers report the isolation of new compounds, the absolute configuration of many of then remains unknown. Thus, this work had as objective to isolate the compounds of the commercial copaíba oleoresin in order to characterize and determine the absolute configurations. Thus, the copaíba oleoresin was submitted to acid-base extraction supplying two fractions: Neutral Fraction (81.7%) and Acidic Fraction (18.3%). The study of the neutral fraction allowed the isolation of eleven sesquiterpenes, where two of then were not yet reported previously in this material {(-)-7(11)-selinen-4-ol and (-)-torreyol}; one new dinorlabdane and two known dinorlabdane and the diterpene clerodane 7-acetoxibacchotricuneatine D. The absolute configuration of dinorlabdanes was established by synthesis starting from (-)-3-hydroxycopalic acid and the stereochemistry of the C-13 carbon was determined using Mosher¿s modified method. From the acid fraction were isolated three diterpenic acids (copalic, 3-acetoxy-copalic, 3-hydroxy-copalic). Besides, after treatment of a sample of acidic fraction with diazomethane and purification through SiO2 gel column chromatography, a new compound (methyl 3,19-dihydroxy-copalate) was isolated along with two rare diterpenes (dimethyl guamaate and methyl 4-hydroperoxy-18- norcopalate) and five known diterpenes / Mestrado / Quimica Organica / Mestre em Química

Recentemente o câncer de um modo geral, sobretudo o câncer de pulmão tem sido causa de grande preocupação no mundo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral do óleo (Copaifera reticulata Ducke) in natura e sua fração resina em linhagens celulares não cancerosas (E10) e cancerosas (E9) de pulmão de camundongo. O óleo foi submetido a hidrodestilação para a obtenção da fração resina. As células após o cultivo a 37°C foram tratadas com 8 diferentes concentrações do óleo e da resina, foram mantidas na mesma temperatura por mais 48h na estufa. Depois adicionou-se o reagente Thyazolyl blue tetrazolium bromide para o teste de citotoxicidade e determinação da concentração inibitória de 50% de células viáveis (IC50). Com os resultados, observou-se que ambos os tratamentos agiram como antitumorais e quando comparados entre si percebe-se que o óleo in natura agiu melhor que sua fração resina, sugerindo ser mais citotóxico para as células cancerosas a uma concentração aproximadamente onze vezes menor (E9 [0,0287µL/mL]) do que para as células não cancerosas (E10 [0,3142µL/mL]). A fração resina também inibiu a proliferação celular, na concentração E10 [0,0930µL/mL] e E9 [0,8002µL/mL]. Verificou-se através da técnica de fluorescência com Laranja de Acridina e Brometo de Etídio que os tratamentos induziram a morte das células por apoptose. Conclui-se que o óleo in natura da C. reticulata Ducke agiu melhor como agente antitumoral do que a resina, sugerindo que ocorre um sinergismo entre suas frações e que estudos futuros in vitro e in vivo são necessários para garantir a sua padronização e utilização. / In recent times cancer in general, especially lung cancer has been a cause of great concern in the world. The objective of this work was to evaluate the antitumor activity of the oil (Copaifera reticulata Ducke) in natura and its resin fraction in non-cancerous (E10) and cancerous (E9) lung cells lines of mouse. The oil was subjected to hydrodistillation to obtain the resin fraction. Cells after cultivation at 37°C were treated with 8 different concentrations of oil and resin, and were maintained at the same temperature for another 48h in the oven. The MTT reagent was then added for the cytotoxicity test and determination of the 50% viable cell inhibitory concentration (IC50). The results showed that both treatments acted as antitumor and when the data were compared it was observed that the oil in natura acted better than its resin fraction because it was more cytotoxic to the cancer cells at a concentration almost eleven times smaller (E9 [0,0287µL/mL) than for non-cancer cells (E10 [0,3142µL/mL]). The resin fraction also inhibited cell proliferation, but at a very close concentration for the two cells line (E10 [0,0930µL/mL] and E9 [0,8002 µL/mL]). It was verified by the fluorescence technique with Acridine Orange and Ethidium Bromide that the treatments induced the death of the cells by apoptosis. Its concluded that the in natura oil of C. reticulata Ducke acted better as an antitumor than the resin, suggesting that synergism occurs between its fractions and that future in vitro and in vivo studies are necessary to guarantee its standardization and use.

Recentemente o câncer de um modo geral, sobretudo o câncer de pulmão tem sido causa de grande preocupação no mundo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral do óleo (Copaifera reticulata Ducke) in natura e sua fração resina em linhagens celulares não cancerosas (E10) e cancerosas (E9) de pulmão de camundongo. O óleo foi submetido a hidrodestilação para a obtenção da fração resina. As células após o cultivo a 37°C foram tratadas com 8 diferentes concentrações do óleo e da resina, foram mantidas na mesma temperatura por mais 48h na estufa. Depois adicionou-se o reagente Thyazolyl blue tetrazolium bromide para o teste de citotoxicidade e determinação da concentração inibitória de 50% de células viáveis (IC50). Com os resultados, observou-se que ambos os tratamentos agiram como antitumorais e quando comparados entre si percebe-se que o óleo in natura agiu melhor que sua fração resina, sugerindo ser mais citotóxico para as células cancerosas a uma concentração aproximadamente onze vezes menor (E9 [0,0287µL/mL]) do que para as células não cancerosas (E10 [0,3142µL/mL]). A fração resina também inibiu a proliferação celular, na concentração E10 [0,0930µL/mL] e E9 [0,8002µL/mL]. Verificou-se através da técnica de fluorescência com Laranja de Acridina e Brometo de Etídio que os tratamentos induziram a morte das células por apoptose. Conclui-se que o óleo in natura da C. reticulata Ducke agiu melhor como agente antitumoral do que a resina, sugerindo que ocorre um sinergismo entre suas frações e que estudos futuros in vitro e in vivo são necessários para garantir a sua padronização e utilização. / In recent times cancer in general, especially lung cancer has been a cause of great concern in the world. The objective of this work was to evaluate the antitumor activity of the oil (Copaifera reticulata Ducke) in natura and its resin fraction in non-cancerous (E10) and cancerous (E9) lung cells lines of mouse. The oil was subjected to hydrodistillation to obtain the resin fraction. Cells after cultivation at 37°C were treated with 8 different concentrations of oil and resin, and were maintained at the same temperature for another 48h in the oven. The MTT reagent was then added for the cytotoxicity test and determination of the 50% viable cell inhibitory concentration (IC50). The results showed that both treatments acted as antitumor and when the data were compared it was observed that the oil in natura acted better than its resin fraction because it was more cytotoxic to the cancer cells at a concentration almost eleven times smaller (E9 [0,0287µL/mL) than for non-cancer cells (E10 [0,3142µL/mL]). The resin fraction also inhibited cell proliferation, but at a very close concentration for the two cells line (E10 [0,0930µL/mL] and E9 [0,8002 µL/mL]). It was verified by the fluorescence technique with Acridine Orange and Ethidium Bromide that the treatments induced the death of the cells by apoptosis. Its concluded that the in natura oil of C. reticulata Ducke acted better as an antitumor than the resin, suggesting that synergism occurs between its fractions and that future in vitro and in vivo studies are necessary to guarantee its standardization and use.

O óleo de copaíba é um produto natural encontrado principalmente na região amazônica, onde é utilizado na medicina popular como tratamento para inflamações e como cicatrizante. A espécie Copaifera multijuga Hayne demonstrou um potencial efeito anti-inflamatório em relação a outras espécies de Copaífera L., tendo como principal responsável o composto majoritário β-cariofileno. Nosso grupo de pesquisa vem estudando a veiculação deste óleo em nanoemulsões e desenvolveu uma formulação que contém uma elevada proporção de óleo de copaíba no núcleo oleoso (20 % w/v), sem prejuízo da estabilidade do sistema. A partir desta formulação, seguiram-se os estudos de avaliação da permeação cutânea, de otimização da formulação e de avaliação de atividade anti-inflamatória, apresentados neste trabalho. Um método em cromatógrafo a gás acoplado à espectrômetro de massas no modo headspace (HS-CG/EM) foi validado a fim de analisar β-cariofileno em mostras de pele provenientes do teste de permeação cutânea com nanoemulsões de óleo de copaíba. O método mostrou-se específico, linear, preciso e exato. O teste de permeação cutânea demonstrou que apenas com a nanoemulsão é possível detectar β-cariofileno na camada da derme, enquanto que, com o óleo, somente no estrato córneo. A seguir, foram testados dois tensoativos catiônicos na formulação da nanoemulsão para verificar se a carga positiva na interface da gotícula poderia promover a permeação cutânea do β-cariofileno. O tensoativo brometo de cetiltrimetilamônio provou ser mais eficiente em concentrações consideradas seguras para o uso tópico, revertendo o potencial zeta para valores adequados, sem interferir no tamanho de gotícula e índice de polidispersão. O tensoativo oleilamina também reverteu o potencial zeta, porém somente em concentrações muito elevadas, podendo ser consideradas tóxicas. O teste de permeação cutânea demonstrou que a incorporação de tensoativos catiônicos aumenta a retenção de β-cariofileno na epiderme em três vezes, enquanto que, na derme, não há diferença estatística entre as formulações aniônica e catiônica. Após, as nanoemulsões escolhidas foram incorporadas em hidrogéis de Carbopol®, Natrosol® e quitosana com vistas ao espessamento e adequação da viscosidade ao uso tópico. O hidrogel com quitosana 8 apresentou-se instável, com aumento de tamanho de gotícula e índice de polidispersão, apesar de não ter afetado o potencial zeta. Os hidrogéis de Carbopol® e Natrosol® apresentaram bons resultados de caracterização físico-química, porém somente o hidrogel de Natrosol® foi escolhido para os estudos de permeação cutânea e atividade anti-inflamatória in vivo, devido ao seu caráter neutro. No estudo de permeação cutânea das nanoemulsões incorporadas em hidrogel, houve um aumento na retenção de β-cariofileno na derme em relação às nanoemulsões, e houve a facilitação de permeação até o fluido receptor. Por fim, o estudo da atividade in vivo das formulações selecionadas demonstrou que o óleo de copaíba apresenta atividade anti-inflamatória e que a sua incorporação em nanoemulsões aumenta este efeito. No entanto, ambas nanoemulsões, tanto negativamente quanto positivamente carregadas, apresentaram resultado semelhante para a inibição do edema. Quando compara-se a permeação cutânea das formulações verifica-se que na derme não há diferença estatística, o que pode justificar a semelhança do grau de inibição da inflamação no teste in vivo. Em relação à atividade das nanoemulsões incorporadas em hidrogéis, pode-se verificar que no teste de edema de pata apenas a formulação carregada positivamente teve um efeito mais pronunciado, enquanto no edema de orelha as formulações obtiveram um perfil equivalente ao controle cetoprofeno, porém não potencializaram o efeito do óleo. Quanto ao estudo com os parasitos causadores da Leishmaniose, os testes in vitro mostraram que os tratamentos (óleo de copaíba, β-cariofileno e suas nanoemulsões) foram mais eficazes contra as espécies L. major e L. donovani em comparação às espécies L. amazonensis e L. braziliensis. O teste in vivo mostrou que todos os tratamentos foram capazes de reduzir a área da ferida dos camundongos infectados com L. major. No entanto, eles não conseguiram recuperar totalmente os animais. / Copaiba oil is a natural product found especially in the Amazon region, where it is used as treatment for inflammations and as wound healer in the popular medicin. The species Copaifera multijuga Hayne showed a potential anti-inflammatory effect in relation to other Copaifera L. species, mainly due to its major compound, β-caryophyllene. Our research group studied the oil incorporation in nanoemulsions and developed a formulation containing a high copaiba oil proportion in the oil core (20% w/v) without loss of system stability. Based in this nanoemulsion, we present in this study the skin permeation, the formulation optimization and the anti-inflammatory activity. A method in gas chromatograph coupled with mass spectrometer in headspace mode (HS-GC/MS) was validated to analyze β-caryophyllene in skin samples from the skin permeation assay. The method proved to be specific, linear, precise and accurate. Skin permeation test showed that only with the nanoemulsion is possible to detect β-caryophyllene in the dermis layer, while with the oil, only in the stratum corneum. After, two cationic surfactants were tested in the nanoemulsion to prove if the positive charge on the droplet interface could promote β-caryophyllene permeation. Cetyltrimethylammonium bromide proved to be more effective at concentrations considered safe for topical use, reversing the zeta potential to suitable values, without interfering with droplet size and polydispersity index. Oleylamine also reversed the zeta potential, but only at very high concentrations, that may be considered toxic. Skin permeation test showed that the incorporation of cationic surfactants increases β-caryophyllene retention in the epidermis by three fold, whereas in the dermis, there is no statistical difference between the cationic and anionic nanoemulsions. Afterward, the chosen nanoemulsions were incorporated in Carbopol®, Natrosol® and chitosan hydrogels in order to adjust the viscosity for topical use. Chitosan hydrogel presented instability, with an increase in droplet size and polydispersity index, although it has not affected the zeta potential. Carbopol® and Natrosol® hydrogels showed good results in physicochemical characterization, but only Natrosol® hydrogel was chosen for the following skin permeation 10 and anti-inflammatory activity in vivo studies due to its neutral character. In nanoemulsions thickened-hydrogel skin permeation study, there was an increase in the β-caryophyllene retention in the dermis compared to nanoemulsions, and promoted permeation to the receptor fluid. Finally, in vivo anti-inflammatory activity from selected formulations showed that the copaiba oil has anti-inflammatory activity and that its incorporation into nanoemulsions increases this effect. However, both negative and positively charged nanoemulsions, showed similar results for inhibition of edema. When the nanoemulsions’ skin permeation is compared, it is found that in the dermis there is no statistical difference, which may explain the similarity degree of inflammation inhibition in the in vivo test. Regarding to the activity of the nanoemulsions incorporated in hydrogels, it can be verified that in paw edema assay, only the positively charged formulation had a more pronounced effect, whereas in the ear edema the formulations obtained a profile equivalent to the control, ketoprofen, but did not potentiate the effect of the oil. As for the study with the parasites causing Leishmaniasis, in vitro tests showed that the treatments (copaiba oil, β-caryophyllene and their nanoemulsions) were more effective against L. major and L. donovani compared to L. amazonensis and L. braziliensis. In vivo assay showed that all treatments were able to reduce the wound area of mice infected with L. major. However, they were unable to fully recover the animals from the disease.

A resistência bacteriana aos antibióticos tem se disseminado mais rapidamente do que a introdução de novos compostos, portanto, a investigação e desenvolvimento de novas moléculas para o controle microbiano é necessário. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de diferentes óleos de copaíba OC(S), OC(C) e OC(E), do gel de quitosana/gelatina (QG) e de emulsões de quitosana/gelatina/óleo de copaíba (QGOC) frente às linhagens de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27873. A quitosana foi obtida a partir de gládios de lula por desmineralização, desproteinização e desacetilação e uma solução a 2% foi preparada em ácido acético 1%. O gel de gelatina 2% foi obtido por dissolução de gelatina comercial (Sigma) em água, sendo gelatinizada a 60ºC por 30 min. O gel QG e as emulsões QGOC(S), QGOC(C) e QGOC(E) foram preparadas pela mistura dos géis de quitosana e gelatina na proporção 2:1 sob agitação constante. A concentração das emulsões QGOC foi ajustada de acordo com a concentração inibitória mínima (CIM) encontrada para o gel QG e para os óleos individualmente. Os ensaios de atividade antimicrobiana foram realizados utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo para a determinação da CIM e da concentração bactericida mínima (CBM). O efeito citotóxico dos compostos também foi investigado sobre células VERO. Os valores de CIM e CBM para o gel QG sobre S. aureus, E. coli e P. aeruginosa foram de 31, 2; 62,5 e 31, 2 &#956g/mL, respectivamente, no entanto para P. aeruginosa observou-se que o gel mostrou atividade bacteriostática. Os óleos de copaíba apresentaram atividade apenas para S. aureus, com CIM e CBM de 2000 &#956g/mL para OC(S), 500 &#956g/mL para OC(C) e 62,5 &#956g/mL para OC(E), com caráter bactericida. A interação entre os antimicrobianos na forma da emulsão QGOC(E) sugere efeito sinérgico para S. aureus. As demais emulsões não apresentaram efeito sinérgico, entretanto, a atividade antimicrobiana e o efeito bactericida foram mantidos com a adição dos óleos no gel QG, com exceção da bactéria P. aeruginosa em que a adição dos óleos reduziu a eficácia do gel QG. Os óleos de copaíba apresentaram efeito citotóxico sobre as células VERO, enquanto o gel QG e a combinação na forma de emulsões não mostraram citotoxicidade. Os resultados desse estudo evidenciam que a combinação QGOC pode ser uma fonte em potencial para o desenvolvimento de um novo agente antimicrobiano seletivo no controle de infecções bacterianas. / Antibiotic resistance increases faster than the introduction of new compounds thus, the research and development of new drugs and antimicrobial systems is required. This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of different copaiba oils CO(S), CO(C) and CO(E), chitosan/gelatin gel (CG) and chitosan/gelatin/copaiba oil (CGCO) emulsions against the strains of Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27873. Chitosan was obtained from squid pens by desmineralization, desproteinization and deacetylation and a 2% solution was prepared in 1% acetic acid. A 2% gelatin gel was obtained by dissolution of commercial gelatin (Sigma) in water and gelatinized at 60ºC for 30 min. CQ gel and CQCO emulsions were prepared by mixing chitosan and gelatin gels at 2:1 (w/w) ratio under constant stirring. The concentration of CGCO emulsions were adjusted according to the minimum inhibitory concentration (MIC) for CG gel and oils separately. MIC and minimum bactericidal concentrations (MBC) with oils, CG gel and CGCO emulsions were determined using the micro-broth dilution technique. The cytotoxicity effect of compounds on VERO cell line was also evaluated using the MTT assay. CG gel inhibited S. aureus, E. coli and P. aeruginosa growth showing a MIC and a MBC of 31.2; 62.5 and 31.2 &#956g/mL, respectively except for P. aeruginosa, that showed bacteriostatic effect. Copaiba oils inhibited only S. aureus with MIC and MBC of 2,000 &#956g/mL to CO(S), 500 &#956g/mL to CO(C) and 62.5 &#956g/mL to CO(E). The combined emulsion CGCO(E) suggesting synergistic effect to S. aureus. However, the other emulsions showed not synergistic effect, but showed the same MIC and MBC values as those obtained for the isolated compounds, except for P. aeruginosa where the addition of oils reduced the effectiveness of CQ gel. The copaiba oils showed toxicity to VERO cells, while the CG gel and the CGCO were not cytotoxic. The results of this study demonstrated that the combination of CGCO may be a potential source for the development of a new selective agent to control these important bacterial pathogens.

Alguns decênios atrás, o advento da nanotecnologia abriu perspectivas inovadoras permitindo alcançar novos alvos. Na área farmacêutica, as nanopartículas abriram alternativas ineditas de acesso para tratar órgãos e tecidos. Dentre as diversas nanopartículas existentes, este trabalho assentou sobre as nanopartículas lípidicas sólidas porque elas permitem a utilização de substâncias naturais, que representam um interesse cada vez maior devido às suas potencialidades diversificadas e comprovadas. Assim, foram escolhidos o óleo de copaíba e a alantoína devido às suas propriedades farmacológicas. Da mesma maneira que existem vários tipos de nanopartículas, existem várias técnicas para produzi-las. Neste estudo, o método por homogeneização à alta pressão foi selecionado devido às diversas vantagens. Para validar essas opções tecnológicas e caracterizar as nanopartículas, análises morfológicas, físico-químicas e térmicas foram realizadas. O segundo propósito desta pesquisa foi a avaliação do potencial antifúngico das nanopartículas contra fungos leveduriformes e filamentosos multirresistentes, devido às diversas propriedades microbiológicas do óleo de copaíba. Consequentemente, diversos ensaios micológicos foram feitos a fim de determinar onde e como essas nanopartículas agiram sobre esses fungos. Os resultados mostraram que a produção de nanopartículas lípidicas sólidas homogêneas e estáveis físico-quimicamente foi possível. Além disso, essas nanopartículas, compostas por substâncias naturais, demonstraram atividade antifúngica contra fungos multiresistentes, fato que não ocorreu com as matérias-primas isoladas. A nanotecnologia foi fundamental e levou a desenvolver suspensões antifúngicas. / Some decades ago, the advent of nanotechnology has opened new perspectives allowing reaching new targets. In the pharmaceutical area, nanoparticles have opened new ways for treating organs and tissues. Among the various existing nanoparticles, this work was based on solid lipid nanoparticles because they permitted the use of natural substances which represent a growing interest due to their diverse and proven strengths. So, copaiba oil and allantoin were chosen. Just as there are several types of nanoparticles, there are several techniques to produce them. In this study, the method of high pressure homogenization was selected because of several advantages. To validate these technological options and characterize nanoparticles, morphological, physico-chemical and thermal analysis were performed. The second purpose of this research was to evaluate the antifungal potential of nanoparticles against multiresistant yeasts and filamentous fungi due to various microbiological properties of copaiba oil. Consequently, many mycological tests were performed to determine where and how these nanoparticles acted on these fungi. The results showed the production of homogeneous and physico-chemically stable solid lipid nanoparticles is possible and, moreover, these nanoparticles produced with natural substances demonstrated their antifungal activity against multiresistant fungi, which did not happen with isolated raw materials. The nanotechnology was fundamental and led to develop antifungal suspensions.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / La realización del estudio tiene como objetivo el aislamiento de la bacteria Porphyromonas gingivalis, de pacientes con cuadros de periodontitis de la clínica estomatológica, perteneciente a la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, para luego enfrentarlas con la oleorresina de Copaifera reticulata “Copaiba”. Las muestras para la obtención del microorganismo, son tomadas con conos de papel N° 30 ó 40, colocados dentro del surco gingival a profundidad, por un tiempo de 60 segundos, luego se llevan al medio de transporte BHI (infusión cerebro corazón), diluidos en diferentes concentraciones y sembradas en el medio de agar sangre suplementado, incubándose en condiciones de anaerobiosis, a 37 °C durante 7 a 14 días. Para su identificación preliminar, se realizan pruebas de catalasa, oxidasa, y medios diferenciales como SIM, Urea, TSI (Tripe azúcar hierro) y Citrato. Para la identificación definitiva de la bacteria purificada, se realiza la prueba automatizada de Api 20 Anaerobios. El enfrentamiento se realiza por el test de difusión en agar con disco, para lo cual se prepara diez concentraciones distintas de la oleorresina, siendo el diluyente dimetilsulfoxido. Así mismo se prepara una suspensión equivalente al patrón 1 de Mc Farland de P. gingivalis, para ser sembrada, en un medio de agar sangre suplementado, luego se colocan los discos equidistantemente y se incuba a 37 °C durante siete a diez días en anaerobiosis. Los resultados de las mediciones de los halos de inhibición, dan una media en la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de 3,4345 %. Se concluye que la oleorresina de copaiba, es un posible fitoproducto, que complementaria el tratamiento odontológico. / Tesis

Determina la efectividad clínica y antibacteriana de la Copaifera reticulata “copaiba” asociada a la terapia periodontal no quirúrgica, en el paciente diabético tipo II con periodontitis. Se identifican 40 zonas homólogas en las diferentes hemiarcadas superior o inferior con periodontitis, registrando: profundidad al sondaje (PS), nivel de inserción clínica (NIC), sangrado al sondaje (SS) y color de la encía (CE). Se realizó un recuento bacteriano de la bolsa periodontal y la prueba de hemoglobina glicosilada (HbA1c). Se estudiaron dos zonas homólogas, por paciente, formando un grupo de estudio (n=20) que recibió copaiba como apoyo al tratamiento y otro grupo control (n=20) recibió clorhexidina. Los datos fueron evaluados usando las pruebas estadísticas de Wilcoxon y Fisher. La comparación de las diferencias de grupo evidenció valores en la PS de 2,0 ±0,79 mm y 2,05 ±0,89 mm y del NIC de 2,35 ±0,93 mm y 2,15 ±0,58 mm en el grupo control y de estudio, respectivamente. No encontrándose diferencias significativas en ambas variables (p>0,05). El SS se redujo en 95% y 90% en el grupo control y de estudio respectivamente. El cambio de color se evidenció en casi la totalidad de la muestra estudiada. El recuento bacteriano se redujo en ambos grupos, siendo el grupo de estudio, con menor cantidad de unidades formadoras de colonias (UFC), no encontrándose diferencias significativas (p>0,05). Concluye que la copaiba como apoyo a la terapia periodontal generó una efectividad en la mejora de las variables clínicas y bacterianas en pacientes diabéticos tipo II con periodontitis. / Tesis