Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-30T16:34:29Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 665364 bytes, checksum: a2ae6f5c8c9784ceb68ce8a28992f282 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-30T16:34:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 665364 bytes, checksum: a2ae6f5c8c9784ceb68ce8a28992f282 (MD5) Previous issue date: 1997-04-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Objetivou-se com este trabalho identificar as estruturas químicas dos pigmentos presentes no feijão-preto adquirido na região de Viçosa. Etanol 70% acidificado com 0,5% de HCl foi utilizado como solvente extrator. Após a obtenção do extrato bruto, foram testadas diversas fases móveis para cromatografia descendente em papel. BFW (n-butanol - ácido fórmico - água) na proporção 15:2,5:2,4 apresentou os melhores resultados e possibilitou a separação das seis frações de antocianinas presentes. Através de reações químicas específicas e métodos espectrofotométricos e cromatográficos identificaram-se as três principais frações isoladas. São elas: delfinidina 3- glicosídeo, cianidina 3-glicosídeo e malvidina 3-glicosídeo. Avaliou-se, através de ensaios biológicos, o efeito da retirada do tegumento e das antocianinas e de outros polifenóis na qualidade das proteínas do feijão. Foram analisados PER, NPR, NPU e digestibilidade. Os resultados obtidos mostram que a retirada do tegumento do feijão cozido reduz seu valor protéico, provavelmente pela eliminação simultânea de aminoácidos sulfurados e lisina provenientes de proteínas presentes nessa parte dos grãos. A extração de pigmentos de feijão não provocou o aumento da qualidade protéica, como se esperava. Esse resultado se deve, provavelmente, à migração de polifenóis dos tegumentos para os cotilédones durante o processo de extração desses compostos. Esta migração proporciona a interação destes polifenóis com proteínas, tornando-as indisponíveis. / The objective of this work was to identify the chemical structures of black bean pigments from Viçosa, Minas Gerais, Brazil. The extraction solvent was anaqueous solution of ethanol 70% acidified with 0,5% HCl. After the acquisition of crude extract, several mobile phases for descendent paper chromatography were tested. Best results were obtained with BFW (butanol- formic acid-water) 15:2,5:2,4, which allowed the isolation of six anthocyanins fractions could be separated. Through specific chemical reactions and spectrophotometric and chromatographic methods, the three main fractions were identified: delfinidin 3-glucoside, cianidin 3-glucoside and malvidin 3-glucoside. The effect of removal of tegument, anthocyanins and other polyphenols from beans in the protein quality were evaluated by biological assays. PER, NPR, NPU and digestibility were determined. The results indicated that removal tegument of cooked bean, reduced its protein value, probably due to simultaneous elimination of sulfur aminoacids and lysine from proteins present in the tegument. The extraction of anthocyanins did not increase the protein quality of beans as expected. Possibly, this result was due to the migration of polyphenols from bean tegument to cotyledons during the extraction process, where polyphenols may interact with proteins making them not available. / Tese antiga, sem ficha catalográfica

A adição de vitaminas aos produtos industrializados tornou-se prática comum para as indústrias de alimentos e os teores adicionados devem obedecer à legislação brasileira durante toda a vida de prateleira dos produtos. Sabendo da sensibilidade das vitaminas a fatores como oxigênio, luz e calor, é essencial conhecer o comportamento destes compostos no alimento frente aos fatores críticos. Informações confiáveis sobre teores de vitaminas somente podem ser obtidas com métodos analíticos validados. Neste trabalho foi desenvolvido e validado um método de análise para vitaminas B1, B2, B6 e PP em leite em pó/fórmulas infantis, cereais e bebidas instantâneas por cromatografia líquida de alta eficiência com uma única etapa de extração que apresentou recuperações de 90 a 120% dependendo do teor e da matriz analisada. Após a validação do método analítico, foi avaliada a estabilidade das vitaminas em amostras submetidas a diferentes condições de estocagem durante 10 meses. Os resultados mostram que a principal causa de perda das vitaminas B2 e B6 é a exposição à luz, que pode ser agravada pela temperatura e/ou presença de oxigênio no meio, enquanto as vitaminas PP e B1 mostraram-se bem estáveis sob as diferentes condições e no tempo estudado. / Food fortification with vitamins is a very common practice in food industry and the added content must be in compliance with Brazilian Legislation during the whole product shelf life. Due to the vitamins sensibility to light, temperature and oxygen it\'s necessary to know the behavior of these compounds when submitted to these critical conditions. Trustful information about the vitamins content just can be obtained from validated analytical methods. In this work it was developed and validated a HPLC method for determination of vitamins B1, B2, B6 e PP in milk/infant formula, cereals and beverage powders with the same extract which presented recoveries within 90 and 120% depending on the matrix and the vitamins level. After method validation, the vitamins stability in different samples was evaluated during 10 months under different storage conditions. The results showed the high sensitivity of vitamins B2 and B6 to light exposure that can become worse when samples were exposed to high temperature and oxygen. Vitamins PP and B1 had very stable behavior under the studied conditions and for the period of this study.

Dissertation submitted for obtain the degree of Doctor in Chemical Engineering, at the Faculdade de Engenharia da Universidade do Porto, under supervisory Dr. Alírio Egídio Rodrigues

Submitted by Bruna Rodrigues (bruna92rodrigues@yahoo.com.br) on 2016-10-06T11:25:19Z No. of bitstreams: 1 DissDEHS.pdf: 5034297 bytes, checksum: a761997254e4c996e0a446da6e96ce62 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T13:59:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissDEHS.pdf: 5034297 bytes, checksum: a761997254e4c996e0a446da6e96ce62 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T13:59:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissDEHS.pdf: 5034297 bytes, checksum: a761997254e4c996e0a446da6e96ce62 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T13:59:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissDEHS.pdf: 5034297 bytes, checksum: a761997254e4c996e0a446da6e96ce62 (MD5) Previous issue date: 2016-01-22 / Não recebi financiamento / The researches in biotransformation and biocatalysis are found widespread in several activities in Chemistry and Biotechnology. The use of microorganisms in biocatalysis and biotransformation process to recycle expired or unused medicines have been the aim of this investigation. Therefore, the fungi Penicillium sp, P. griseoroseum, Aspergilus aculeatus, A. flavus and A. niger have been used to carry out the biotransformation of the drugs Simvastatin, Sodium Mycophenolate, Carbamazepine, Propranolol Hydrochloride and Metoprolol Succinate. Chemometric methods have been applied in this investigation in order to optimize the fermentation processes, extraction procedures and the chromatography parameters. In order to evaluate the fermentation processes, a 24 factorial planning has been applied, whereas for the extraction procedures, an experimental planning for a ternary mixture has been applied. Lastly, an analytical method by HPLC-DAD was optimized in order to quantify a metabolite. A central composite design was carried out in order to do that. The results achieved from the fermentation showed that the variables used in the positive level contributed to the increased production of the substance of interest. According to the central composite design performed to the chromatography parameters, in which the resolution response and retention time were evaluated, the best conditions found were the column rate temperature at 45 °C, 0.1% formic acid, the beginning of phase B at 15% and the flow rate at 0.70 mL/min. Evaluating the economic aspects, it can be concluded that the application of Chemometrics to optimize the stages of fermentation and analytical approach produced an increase of 38.73% in the production of the metabolite of interest, from 171.12 mg/L to 237.4 mg/L, and a 7.5% reduction in the total costs involved. Thus, this work demonstrates that Chemometrics allied with drug biotransformation, such as Metoprolol Succinate via fungi of the genus Penicillium sp., can be used to recover and recycle expired or unused drugs. / As pesquisas na área de biotransformação e biocatálise encontram-se atualmente em amplo desenvolvimento em vários ramos da química e da biotecnologia. A utilização de microorganismos no desenvolvimento de processos de biocatálise e biotransformação visando à reciclagem de medicamentos e fármacos vencidos, ou fora de uso, foi uma das propostas deste projeto. Para tanto foram utilizados os fungos Penicillium sp, P. griseoroseum, Aspergillus aculeatus, A. flavus e A. niger para promover a biotransformação dos fármacos Sinvastatina, Micofenolato Sódico, Carbamazepina, Cloridrato de Propranolol e Succinato de Metoprolol. Métodos quimiométricos foram utilizados no decorrer do projeto com o intuito de otimizar os processos de fermentação, extração e cromatografia. Para avaliação do processo fermentativo foi realizado um planejamento fatorial completo 24. Já para o processo de extração, utilizou-se um planejamento experimental de mistura ternária. Por fim, o método analítico através de HPLC-DAD foi otimizado para a quantificação do metabólito de interesse, para tanto foi realizado um planejamento composto central. Os resultados obtidos para a fermentação demonstraram que as variáveis utilizadas no nível positivo contribuem para o aumento na produção da substância de interesse. De acordo com o planejamento composto central realizado para cromatografia, onde foram avaliadas as respostas resolução e tempo de retenção, a melhor condição encontrada foi quando utilizada temperatura da coluna a 45ºC, 0,1% de ácido fórmico, início da fase B em 15% e 0,70 mL/min de vazão. Avaliandose os aspectos econômicos, pode-se concluir que a aplicação da quimiometria na otimização das etapas de fermentação e metodologia analítica, promoveu um aumento de 38,73 % na produção do metabólito de interesse, de 171,12 mg/L para 237,4 mg/L, e uma redução de 7,5% nos custos totais envolvidos. Dessa forma, este trabalho demonstra que a quimiometria aliada à biotransformação de fármacos, como o Succinato de Metoprolol via fungos do gênero Penicillium sp., podem ser utilizados para a recuperação e reciclagem de fármacos vencidos ou fora de uso.

A adição de vitaminas aos produtos industrializados tornou-se prática comum para as indústrias de alimentos e os teores adicionados devem obedecer à legislação brasileira durante toda a vida de prateleira dos produtos. Sabendo da sensibilidade das vitaminas a fatores como oxigênio, luz e calor, é essencial conhecer o comportamento destes compostos no alimento frente aos fatores críticos. Informações confiáveis sobre teores de vitaminas somente podem ser obtidas com métodos analíticos validados. Neste trabalho foi desenvolvido e validado um método de análise para vitaminas B1, B2, B6 e PP em leite em pó/fórmulas infantis, cereais e bebidas instantâneas por cromatografia líquida de alta eficiência com uma única etapa de extração que apresentou recuperações de 90 a 120% dependendo do teor e da matriz analisada. Após a validação do método analítico, foi avaliada a estabilidade das vitaminas em amostras submetidas a diferentes condições de estocagem durante 10 meses. Os resultados mostram que a principal causa de perda das vitaminas B2 e B6 é a exposição à luz, que pode ser agravada pela temperatura e/ou presença de oxigênio no meio, enquanto as vitaminas PP e B1 mostraram-se bem estáveis sob as diferentes condições e no tempo estudado. / Food fortification with vitamins is a very common practice in food industry and the added content must be in compliance with Brazilian Legislation during the whole product shelf life. Due to the vitamins sensibility to light, temperature and oxygen it\'s necessary to know the behavior of these compounds when submitted to these critical conditions. Trustful information about the vitamins content just can be obtained from validated analytical methods. In this work it was developed and validated a HPLC method for determination of vitamins B1, B2, B6 e PP in milk/infant formula, cereals and beverage powders with the same extract which presented recoveries within 90 and 120% depending on the matrix and the vitamins level. After method validation, the vitamins stability in different samples was evaluated during 10 months under different storage conditions. The results showed the high sensitivity of vitamins B2 and B6 to light exposure that can become worse when samples were exposed to high temperature and oxygen. Vitamins PP and B1 had very stable behavior under the studied conditions and for the period of this study.

Introdução: A família Passifloraceae se destaca dentre os principais grupos de plantas nativas utilizadas na medicina popular brasileira. Este trabalho descreve a química e farmacologia de Passiflora serratodigitata L. Objetivos: Determinar os principais grupos de substâncias ativas, quantificar flavonóides, estabelecer um perfil cromatográfico em cromatografia líquida (CLAE), estudar as atividades antiúlcera, anti-inflamatória e antioxidante do extrato bruto e frações de Passiflora serratodigitata, e comparar a atividade antiúlcera com uma formulação nanoencapsulada. Material e Métodos: Folha e caules secos de P. serratodigitata foram fornecidos pelo Instituto Agronômico de Campinas. O extrato bruto (EB) foi preparado por maceração seguida de percolação, e foi fracionado por partição líquido-líquido nas frações hexano, diclorometano, acetato de etila e aquosa. A triagem fitoquímica se direcionou para os principais grupos químicos relatado na família. O perfil cromatográfico para flavonóides foi realizado em cromatografia em camada delgada e CLAE. A quantificação de flavonóides foi determinada por espectrofotometria. As atividades anti-inflamatória e antiúlcera foram estudada em ratos Wistar. O modelo de úlcera aguda contou com lansoprazol como controle e os resultados foram analisados pelos softwares ImageProPlus® e XLStat®. A quantificação de flavonóides foi realizada em espectrofotômetro. A atividade antioxidante foi avaliada pela redução do DPPH. A formulação nanoparticulada foi caracterizada físico-quimicamente (tamanho de partícula, distribuição, potencial Zeta e eficiência de encapsulamento), e foi realizada uma comparação entre a atividade antiúlcera das nanopartículas com seus respectivos extratos não encapsulados. Resultados: A triagem fitoquímica revelou a presença de alcalóides, flavonóides e taninos. Os perfis cromatográficos apresentaram a presença de vários flavonóides, com predomínio na fração acetato de etila, e revelaram a presença de cinco compostos majoritários. Um destes compostos foi isolado, e apresentou estrutura semelhante ao neoflavonóide seratina, encontrada em literatura. A atividade anti-inflamatória apresentou resultado significativo apenas na dose de 400 mg/kg de EB, mas nenhum dos mediadores inflamatórios estudados foi inibido. A atividade antioxidante apresentou resultados satisfatórios, sendo a fração acetato de etila e o EB com atividade mais pronunciada, em convergência com a maior quantidade de flavonóides presentes nesses extratos. A atividade antiúlcera apresentou resultados extremamente significativos, com inibição total de úlcera para a fração acetato de etila, uma inibição superior a 70% para o EB e uma dose-dependência de inibição na fração aquosa. As nanopartículas formadas apresentaram distribuição unimodal de tamanho, potencial Zeta favorável e eficiência de encapsulamento superior a 80%. A atividade antiúlcera revelou proteção semelhante em doses dez vezes menores. Conclusões: Passiflora serratodigitata L. possui flavonóides, taninos e alcalóides. O perfil em CLAE acusou a presença de cinco compostos majoritários. O EB e as frações mais ricas em flavonóides apresentaram expressiva atividade gastroprotetora in vivo. As nanocápsulas apresentaram atividade semelhante em doses menores. / Introduction: The Passifloraceae family stands out among the main groups of native plants used in Brazilian folk medicine. This work describes chemical and pharmacological characterization of Passiflora serratodigitata L. Objectives: Determine the main groups of active substances, the total flavonoid content, establish a chromatographic profile in high performance liquid chromatography (HPLC), study the antiulcer, anti-inflammatory and antioxidant activities of the hydroalcoholic crude extract and its fractions of Passiflora serratodigitata, and compare the antiulcer activity with a nanoencasulated formula. Material & Methods: Dried leaves and stem of P. serratodigitata were provided by Instituto Agronômico de Campinas. The hydroalcoholic crude extract (HE) was prepared by maceration followed by percolation, and then it was fractioned by liquid-liquid extraction into hexane, dichloromethane, ethyl acetate and aqueous extracts. The phytochemical screening was directed to main groups presented in the family. The chromatographic profile for flavonoids was performed by thin-layer chromatography and HPLC. The flavonoid quantification was determinated by spectrophotometry. The antiulcer activity was studied in Wistar rats for three different HE ethylacetate and aquous fractions dosages, using lansoprazole as control. The ulcer was induced by an acidified ethanol solution (acute ulcer model), and the results were analyzed by the software ImageProPlus® and XLStat®. The flavonoid quantification was made by spectrophotometry. The anti-inflammatory activity was studied in Wistar rats. The antioxidant activity was studied by the DPPH method. Nanoparticle were physic-chemically characterized (size distribution, Zeta potential and encapsulation efficiency), and a comparison between nanoparticle and plant extracts\' antiulcer activity was performed. Results: The phytochemical screening revealed the presence of alkaloids, flavonoids and tannins. The chromatographic profile showed the presence of various flavonoids. The HPLC assay showed a major presence of flavonoids in ethyl acetate and aqueous fractions, and revealed five main components, one of which was identified as similar to the neoflavonoid serratin. The antiulcer activity showed a protection of about 73% for all doses of HE and total protection for the ethyl acetate and aqueous extracts. The flavonoid quantification reported 12.9% of flavonoids in HE, 11,9% in the ethyl acetate fraction, and 3.8% in the residual water fraction. The anti-inflammatory activity showed significant results only for crude extract dose of 400 mg/kg, but none of the inflammation mediators studied were inhibited. For the antioxidant activity, results of EC50 for ethyl acetate fraction and crude extract were better when compared to residual water fraction, but not to Trolox®. The nanoparticle formulation originated nanocapsules with unimodal size distribuition, negative zeta potential, and antiulcer activity in doses ten times lower. Conclusions: Passiflora serratodigitata L. contains alkaloids, tannins and flavonoids. The HPLC analysis determined the presence of five major flavonoids. The CE and its most flavonoid-rich fractions showed an expressive in vivo gastric mucosa protection against acidified ethanol induced lesion.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 parte1.pdf: 1831171 bytes, checksum: 228d3280be1b514141d6d1e465f701b6 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Medicinal plants are an alternative therapy for the prevention and cure of disease since the beginning of humanity. This relationship is so intimate that mingles with the own evolution of man. Brazil has a great diversity on plants that possess non-researched medicinal potential and are promising sources of therapeutic and pharmacological innovations. The Rubiaceae family is considered the biggest one of the order Gentianales, presenting around 637 genera and 10,700 species. The species Richardia grandiflora (Cham. & Schltdl.) Steud., known popularly as ervanço , poaia or ipeca-mirim , has ethnopharmacological indications to use as decoction against hemorrhoids and as vermifuge. Aiming at contributing to the chemotaxonomic study of the the family Rubiaceae and considering the small amount of data in literature about the chemical constitution of the species Richardia grandiflora, the latter was submitted to a phytochemical study to isolate its chemical constituents, through usual chromatographic methods, and after identifying them by means of spectroscopic methods such as IR and 1H and 13C NMR, besides comparison with literature data. Three constituents were isolated through this phytochemical study: oleanolic acid, ursolic acid, unpublished in the species, and 132-hydroxy-(132-S)-phaeophytin (a), isolated for the first time from the genre. / As plantas medicinais constituem uma alternativa terapêutica para a prevenção e cura de doenças desde o início da humanidade. Tal relacionamento é tão íntimo que se confunde com a própria evolução do homem. O Brasil tem grande diversidade de plantas com potenciais medicinais, não-pesquisadas, e que são promissoras fontes de inovações terapêuticas e farmacológicas. A família Rubiaceae, considerada a maior da ordem Gentianales, possui cerca de 637 gêneros e 10.700 espécies. A espécie Richardia grandiflora (Cham. & Schltdl.) Steud., conhecida popularmente como ervanço, poaia ou ipeca-mirim, tem indicações etnofarmacológicas para uso contra hemorróidas e como vermífugo na forma de decocto. Visando a contribuir com o estudo quimiotaxonômico da família Rubiaceae e tendo em vista a pouca quantidade de dados na literatura acerca da constituição química da espécie Richardia grandiflora, esta foi submetida a um estudo fitoquímico para o isolamento de seus constituintes químicos, através dos métodos cromatográficos usuais, e posterior identificação estrutural dos mesmos, utilizando-se os métodos espectroscópicos de IV e RMN 1H e 13C, além de comparações com modelos da literatura. Deste estudo foram isolados e identificados três constituintes: o ácido oleanólico, o ácido ursólico, inéditos na espécie, e a 132-hidroxi- (132-S)-feofitina (a), inédita no gênero.

Introdução: A família Passifloraceae se destaca dentre os principais grupos de plantas nativas utilizadas na medicina popular brasileira. Este trabalho descreve a química e farmacologia de Passiflora serratodigitata L. Objetivos: Determinar os principais grupos de substâncias ativas, quantificar flavonóides, estabelecer um perfil cromatográfico em cromatografia líquida (CLAE), estudar as atividades antiúlcera, anti-inflamatória e antioxidante do extrato bruto e frações de Passiflora serratodigitata, e comparar a atividade antiúlcera com uma formulação nanoencapsulada. Material e Métodos: Folha e caules secos de P. serratodigitata foram fornecidos pelo Instituto Agronômico de Campinas. O extrato bruto (EB) foi preparado por maceração seguida de percolação, e foi fracionado por partição líquido-líquido nas frações hexano, diclorometano, acetato de etila e aquosa. A triagem fitoquímica se direcionou para os principais grupos químicos relatado na família. O perfil cromatográfico para flavonóides foi realizado em cromatografia em camada delgada e CLAE. A quantificação de flavonóides foi determinada por espectrofotometria. As atividades anti-inflamatória e antiúlcera foram estudada em ratos Wistar. O modelo de úlcera aguda contou com lansoprazol como controle e os resultados foram analisados pelos softwares ImageProPlus® e XLStat®. A quantificação de flavonóides foi realizada em espectrofotômetro. A atividade antioxidante foi avaliada pela redução do DPPH. A formulação nanoparticulada foi caracterizada físico-quimicamente (tamanho de partícula, distribuição, potencial Zeta e eficiência de encapsulamento), e foi realizada uma comparação entre a atividade antiúlcera das nanopartículas com seus respectivos extratos não encapsulados. Resultados: A triagem fitoquímica revelou a presença de alcalóides, flavonóides e taninos. Os perfis cromatográficos apresentaram a presença de vários flavonóides, com predomínio na fração acetato de etila, e revelaram a presença de cinco compostos majoritários. Um destes compostos foi isolado, e apresentou estrutura semelhante ao neoflavonóide seratina, encontrada em literatura. A atividade anti-inflamatória apresentou resultado significativo apenas na dose de 400 mg/kg de EB, mas nenhum dos mediadores inflamatórios estudados foi inibido. A atividade antioxidante apresentou resultados satisfatórios, sendo a fração acetato de etila e o EB com atividade mais pronunciada, em convergência com a maior quantidade de flavonóides presentes nesses extratos. A atividade antiúlcera apresentou resultados extremamente significativos, com inibição total de úlcera para a fração acetato de etila, uma inibição superior a 70% para o EB e uma dose-dependência de inibição na fração aquosa. As nanopartículas formadas apresentaram distribuição unimodal de tamanho, potencial Zeta favorável e eficiência de encapsulamento superior a 80%. A atividade antiúlcera revelou proteção semelhante em doses dez vezes menores. Conclusões: Passiflora serratodigitata L. possui flavonóides, taninos e alcalóides. O perfil em CLAE acusou a presença de cinco compostos majoritários. O EB e as frações mais ricas em flavonóides apresentaram expressiva atividade gastroprotetora in vivo. As nanocápsulas apresentaram atividade semelhante em doses menores. / Introduction: The Passifloraceae family stands out among the main groups of native plants used in Brazilian folk medicine. This work describes chemical and pharmacological characterization of Passiflora serratodigitata L. Objectives: Determine the main groups of active substances, the total flavonoid content, establish a chromatographic profile in high performance liquid chromatography (HPLC), study the antiulcer, anti-inflammatory and antioxidant activities of the hydroalcoholic crude extract and its fractions of Passiflora serratodigitata, and compare the antiulcer activity with a nanoencasulated formula. Material & Methods: Dried leaves and stem of P. serratodigitata were provided by Instituto Agronômico de Campinas. The hydroalcoholic crude extract (HE) was prepared by maceration followed by percolation, and then it was fractioned by liquid-liquid extraction into hexane, dichloromethane, ethyl acetate and aqueous extracts. The phytochemical screening was directed to main groups presented in the family. The chromatographic profile for flavonoids was performed by thin-layer chromatography and HPLC. The flavonoid quantification was determinated by spectrophotometry. The antiulcer activity was studied in Wistar rats for three different HE ethylacetate and aquous fractions dosages, using lansoprazole as control. The ulcer was induced by an acidified ethanol solution (acute ulcer model), and the results were analyzed by the software ImageProPlus® and XLStat®. The flavonoid quantification was made by spectrophotometry. The anti-inflammatory activity was studied in Wistar rats. The antioxidant activity was studied by the DPPH method. Nanoparticle were physic-chemically characterized (size distribution, Zeta potential and encapsulation efficiency), and a comparison between nanoparticle and plant extracts\' antiulcer activity was performed. Results: The phytochemical screening revealed the presence of alkaloids, flavonoids and tannins. The chromatographic profile showed the presence of various flavonoids. The HPLC assay showed a major presence of flavonoids in ethyl acetate and aqueous fractions, and revealed five main components, one of which was identified as similar to the neoflavonoid serratin. The antiulcer activity showed a protection of about 73% for all doses of HE and total protection for the ethyl acetate and aqueous extracts. The flavonoid quantification reported 12.9% of flavonoids in HE, 11,9% in the ethyl acetate fraction, and 3.8% in the residual water fraction. The anti-inflammatory activity showed significant results only for crude extract dose of 400 mg/kg, but none of the inflammation mediators studied were inhibited. For the antioxidant activity, results of EC50 for ethyl acetate fraction and crude extract were better when compared to residual water fraction, but not to Trolox®. The nanoparticle formulation originated nanocapsules with unimodal size distribuition, negative zeta potential, and antiulcer activity in doses ten times lower. Conclusions: Passiflora serratodigitata L. contains alkaloids, tannins and flavonoids. The HPLC analysis determined the presence of five major flavonoids. The CE and its most flavonoid-rich fractions showed an expressive in vivo gastric mucosa protection against acidified ethanol induced lesion.

Esta tese foi dividida em três capítulos. O capítulo I descreve o desenvolvimento do método Column switching UHPLC-MS/MS para a determinação simultaneamente de fármacos psicotrópicos em amostras de plasma de pacientes esquizofrênicos. A politerapia é uma prática comum no tratamento da esquizofrenia. Portanto, a monitorização terapêutica destes fármacos tem sido realizada para o ajuste das doses e individualização da terapia farmacológica. O método Column switching UHPLC-MS/MS apresentou linearidade na faixa de concentração de 0,025 a 1,25 ng mL-1 com R2 acima de 0,9950 e a falta de teste de ajuste (p > 0,05); precisão com coeficientes de variação inferiores a 12% e exatidão com erro padrão relativo inferior a 14%. Este método foi aplicado com sucesso para determinação de fármacos em amostras de plasma de pacientes esquizofrênicos para fins de monitorização terapêutica. No capítulo II, o desempenho cromatográfico de colunas C18 superficialmente e totalmente porosas com diferentes tamanhos de partícula foi avaliado para a análise de fármacos psicotrópicos por LC-MS/MS e LC-DAD. Com o sistema LC-MS/MS foram avaliados os seguintes parâmetros cromatográficos: altura do prato reduzido vs velocidade linear reduzida, impedância vs velocidade linear reduzida, tempo da corrida cromatográfica vs vazão, pressão vs vazão, resolução, capacidade de pico, assimetria e fator de retenção. Já com o sistema LC-DAD foram avaliados a hidrofobicidade, atividade silanol e impurezas metálicas também foram avaliadas. As colunas com superfície carregada apresentaram maior eficiência cromatográfica para os fármacos em sua forma ionizada. Já as colunas com partículas menores que 2 µm (Cortecs 1,6 µm, Acquity 1,7 µm, e Kinetex 1,7 µm) apresentaram maior eficiência cromatográfica para os fármacos na forma parcialmente ionizada. Os modelos matemáticos gerados foram capazes de prever a pressão e o tempo da corrida cromatográfica em diferentes vazões para todas as colunas. Considerando a eficiência, impedância, resolução, capacidade de pico, fator de retenção e hidrofobicidade, as colunas Cortecs 1,6 µm e Acquity 1,7 µm apresentaram melhor desempenho durante a análise dos fármacos em amostra de plasma. O capítulo III descreve o desenvolvimento e validação dos métodos SPME-UHPLC-MS/MS e Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS para a determinação dos endocanabinóides (AEA e 2-AG) em amostras biológicas. Para a otimização do processo SPME foram avaliadas as fases SPME (C18, C30 e HLB) e os solventes para dessorção (metanol, acetonitrila e isopropanol). Os aditivos modificadores de matriz, como cloridrato de guanidina, ácido trifluoroacético e acetonitrila foram avaliados por planejamento experimental. Os métodos SPME-UHPLC-MS/MS e Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS, com a fase HLB biocompatível, apresentaram para ambos endocanabinóides valores de LOQs de 1 ng mL-1 e 50 ng mL-1, respectivamente. O método Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS permitiu o direto acoplamento da fibra SPME ao espectrômetro de massas via dessorção/ionização nanoeletrospray que resultou em rápida determinação quantitativa dos endocanabinóides em amostras biológicas. / This thesis is divided into three chapters. Chapter I describes the development of a column switching UHPLCMS/MS method to determine psychotropic drugs in schizophrenic patients plasma samples simultaneously. Polytherapy is a common practice in schizophrenia treatment. Therefore, therapeutic drug monitoring has been applied to adjust doses and to customize pharmacological therapy. The column switching UHPLCMS/MS method developed here is linear at concentrations ranging from 0.025 to 1.25 ng mL-1 with R2 above 0.9950 and presents lack of fit test (p > 0.05), precision with coefficients of variation lower than 12%, and accuracy with relative standard error lower than 14%. This method was successfully applied to determine drugs in schizophrenic patients plasma samples for therapeutic drug monitoring. In chapter II, the chromatographic performance of C18 superficially porous columns and of C18 fully porous columns with different particle sizes were evaluated for analysis of psychotropic drugs by LC-MS/MS and LC-DAD. Within the LC-MS/MS system, the following chromatographic parameters were assessed: reduced plate height vs reduced linear velocity, impedance vs reduced linear velocity, chromatographic run time vs flow rate, backpressure vs flow rate, resolution, peak capacity, asymmetry, and retention factor. Within the LC-DAD system, hydrophobicity, silanol activity, and metal impurities were also examined. Columns with charged surface displayed improved chromatographic efficiency for drugs in the ionized form. Columns with particles smaller than 2 µm (Cortecs 1.6 µm, Acquity 1.7 µm, and Kinetex 1.7 µm) presented higher chromatographic efficiency for the drugs, which were in their partially ionized form. The generated mathematical models were able to predict the backpressure and the chromatographic run time at different flow rates for all the columns. Considering efficiency, impedance, resolution, peak capacity, retention factor, and hydrophobicity, columns Cortecs 1.6 µm and Acquity 1.7 µm provided the best performance during analysis of drugs in plasma samples. Chapter III describes the development and validation of the SPME-UHPLC-MS/MS and the Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS methods for determination of endocannabinoids (AEA and 2-AG) in biological samples. To optimize the SPME process, SPME coatings (C18, C30, and HLB) and solvents for desorption (methanol, acetonitrile, and isopropanol) were evaluated. Matrix modifier additives, such as guanidine hydrochloride, trifluoroacetic acid, and acetonitrile, were assessed by experimental design. The SPME-UHPC-MS/MS and the Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS methods with HLB biocompatible coating provided LOQ values of 1 ng mL-1 and 50 ng mL-1, respectively, for both endocannabinoids. The Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS method allowed direct coupling of SPME fibers to the mass spectrometer by desorption/ionization nanoelectrospray, which resulted in rapid quantitative determinations of endocannabinoids in biological samples.

Esta tese foi dividida em três capítulos. O capítulo I descreve o desenvolvimento do método Column switching UHPLC-MS/MS para a determinação simultaneamente de fármacos psicotrópicos em amostras de plasma de pacientes esquizofrênicos. A politerapia é uma prática comum no tratamento da esquizofrenia. Portanto, a monitorização terapêutica destes fármacos tem sido realizada para o ajuste das doses e individualização da terapia farmacológica. O método Column switching UHPLC-MS/MS apresentou linearidade na faixa de concentração de 0,025 a 1,25 ng mL-1 com R2 acima de 0,9950 e a falta de teste de ajuste (p > 0,05); precisão com coeficientes de variação inferiores a 12% e exatidão com erro padrão relativo inferior a 14%. Este método foi aplicado com sucesso para determinação de fármacos em amostras de plasma de pacientes esquizofrênicos para fins de monitorização terapêutica. No capítulo II, o desempenho cromatográfico de colunas C18 superficialmente e totalmente porosas com diferentes tamanhos de partícula foi avaliado para a análise de fármacos psicotrópicos por LC-MS/MS e LC-DAD. Com o sistema LC-MS/MS foram avaliados os seguintes parâmetros cromatográficos: altura do prato reduzido vs velocidade linear reduzida, impedância vs velocidade linear reduzida, tempo da corrida cromatográfica vs vazão, pressão vs vazão, resolução, capacidade de pico, assimetria e fator de retenção. Já com o sistema LC-DAD foram avaliados a hidrofobicidade, atividade silanol e impurezas metálicas também foram avaliadas. As colunas com superfície carregada apresentaram maior eficiência cromatográfica para os fármacos em sua forma ionizada. Já as colunas com partículas menores que 2 µm (Cortecs 1,6 µm, Acquity 1,7 µm, e Kinetex 1,7 µm) apresentaram maior eficiência cromatográfica para os fármacos na forma parcialmente ionizada. Os modelos matemáticos gerados foram capazes de prever a pressão e o tempo da corrida cromatográfica em diferentes vazões para todas as colunas. Considerando a eficiência, impedância, resolução, capacidade de pico, fator de retenção e hidrofobicidade, as colunas Cortecs 1,6 µm e Acquity 1,7 µm apresentaram melhor desempenho durante a análise dos fármacos em amostra de plasma. O capítulo III descreve o desenvolvimento e validação dos métodos SPME-UHPLC-MS/MS e Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS para a determinação dos endocanabinóides (AEA e 2-AG) em amostras biológicas. Para a otimização do processo SPME foram avaliadas as fases SPME (C18, C30 e HLB) e os solventes para dessorção (metanol, acetonitrila e isopropanol). Os aditivos modificadores de matriz, como cloridrato de guanidina, ácido trifluoroacético e acetonitrila foram avaliados por planejamento experimental. Os métodos SPME-UHPLC-MS/MS e Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS, com a fase HLB biocompatível, apresentaram para ambos endocanabinóides valores de LOQs de 1 ng mL-1 e 50 ng mL-1, respectivamente. O método Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS permitiu o direto acoplamento da fibra SPME ao espectrômetro de massas via dessorção/ionização nanoeletrospray que resultou em rápida determinação quantitativa dos endocanabinóides em amostras biológicas. / This thesis is divided into three chapters. Chapter I describes the development of a column switching UHPLCMS/MS method to determine psychotropic drugs in schizophrenic patients plasma samples simultaneously. Polytherapy is a common practice in schizophrenia treatment. Therefore, therapeutic drug monitoring has been applied to adjust doses and to customize pharmacological therapy. The column switching UHPLCMS/MS method developed here is linear at concentrations ranging from 0.025 to 1.25 ng mL-1 with R2 above 0.9950 and presents lack of fit test (p > 0.05), precision with coefficients of variation lower than 12%, and accuracy with relative standard error lower than 14%. This method was successfully applied to determine drugs in schizophrenic patients plasma samples for therapeutic drug monitoring. In chapter II, the chromatographic performance of C18 superficially porous columns and of C18 fully porous columns with different particle sizes were evaluated for analysis of psychotropic drugs by LC-MS/MS and LC-DAD. Within the LC-MS/MS system, the following chromatographic parameters were assessed: reduced plate height vs reduced linear velocity, impedance vs reduced linear velocity, chromatographic run time vs flow rate, backpressure vs flow rate, resolution, peak capacity, asymmetry, and retention factor. Within the LC-DAD system, hydrophobicity, silanol activity, and metal impurities were also examined. Columns with charged surface displayed improved chromatographic efficiency for drugs in the ionized form. Columns with particles smaller than 2 µm (Cortecs 1.6 µm, Acquity 1.7 µm, and Kinetex 1.7 µm) presented higher chromatographic efficiency for the drugs, which were in their partially ionized form. The generated mathematical models were able to predict the backpressure and the chromatographic run time at different flow rates for all the columns. Considering efficiency, impedance, resolution, peak capacity, retention factor, and hydrophobicity, columns Cortecs 1.6 µm and Acquity 1.7 µm provided the best performance during analysis of drugs in plasma samples. Chapter III describes the development and validation of the SPME-UHPLC-MS/MS and the Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS methods for determination of endocannabinoids (AEA and 2-AG) in biological samples. To optimize the SPME process, SPME coatings (C18, C30, and HLB) and solvents for desorption (methanol, acetonitrile, and isopropanol) were evaluated. Matrix modifier additives, such as guanidine hydrochloride, trifluoroacetic acid, and acetonitrile, were assessed by experimental design. The SPME-UHPC-MS/MS and the Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS methods with HLB biocompatible coating provided LOQ values of 1 ng mL-1 and 50 ng mL-1, respectively, for both endocannabinoids. The Bio-SPME-Nano-ESI-MS/MS method allowed direct coupling of SPME fibers to the mass spectrometer by desorption/ionization nanoelectrospray, which resulted in rapid quantitative determinations of endocannabinoids in biological samples.