O objetivo do presente estudo foi o de empregar um método analítico para a quantificação do tramadol no plasma de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia, avaliar as concentrações plasmáticas e o efeito analgésico do tramadol nestes animais. Inicialmente, foram realizadas as cirurgias de ovário-salpingo-histerectomia e posterior avaliação da dor em 12 cadelas divididas em dois grupos de 6 animais, as quais receberam em dose única 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa ou intramuscular, com a administração em duplo cego. Posteriormente, realizou-se a implantação e padronização do método para detecção e quantificação do tramadol em plasma de cães. Para tal, utilizou-se a cromatografia líquida de alta performance para a determinação da concentração de tramadol, sendo necessária a adaptação e validação deste método para as condições do nosso laboratório. A validação da metodologia compreendeu o estudo da linearidade, a construção da curva de calibração, a determinação da precisão e recuperação do tramadol. De acordo com os resultados obtidos, o método foi considerado adequado, pois apresentou linearidade de resposta dentro da faixa desejável. Após a validação da metodologia iniciaram as avaliações das concentrações plasmáticas de tramadol no plasma das cadelas e foram calculados os parâmetros farmacocinéticos. Os resultados obtidos mostraram, que as variações das concentrações de tramadol foram significantemente afetadas pelas vias de administração. O grupo que recebeu tramadol por via intravenosa apresentou área sob a curva do tempo zero até o infinito (ASC0 → ∞) superior ao grupo tratado por via intramuscular, indicando que o tramadol administrado por via intravenosa possibilita maior biodisponibilidade deste fármaco no organismo animal. Em relação ao efeito analgésico observou-se que a administração de 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa, promoveu analgesia com duração entre 1,50 a 2,00 h em 67% dos animais (4 cadelas), enquanto a via intramuscular promoveu analgesia por até 6 h em 67% dos animais. No presente estudo foram observadas amplas variações nas concentrações plasmáticas de tramadol, no momento que foi observada a presença de dor; a concentração plasmática do tramadol variou cerca de 300 a 600 ng/ml em 71,0% dos animais. Portanto, a cromatografia liquida de alta performance com detector ultra violeta mostrou-se adequada para avaliar as concentrações plasmáticas do tramadol de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia e a via de administração exerce grande influência sobre o efeito analgésico do tramadol, sendo que a administração por via intramuscular promoveu analgesia com duração maior do que àquela produzida pela via intravenosa / The aim of this study was to use an analytic method to tramadol quantification in the plasma of female dogs submitted to ovaryhisterectomy, evaluate the plasmatic concentrations and its analgesic effect on these animals. First of all, there were made the ovaryhisterectomy surgeries and posterior pain evaluation in 12 female dogs divided in 2 groups of 6 animals, wich received 2 mg/kg of tramadol in a single dose, by intravenous or intramuscular route, with the in double blind administration. Then, it was implantation and standardization of the method to detect and quantify tramadol in dog′s plasma. For that, it was utilized the high performance liquid chromatography to determine tramadol′s concentration, being necessary the adaptation and validation of this method to our laboratorie′s conditions. The method′s validation considered the linearity study, the construction of calibration′s curve, the accuracy′s determination and the recovery of tramadol. According to the results, the method was considered suitable, because it presented linearity response in the desirable range. After the validation of the methodology, the evaluation of tramadol′s plasmatic concentrations in the female dogs started and were calculated the pharmacokinetics parameters. The results showed that the variation of tramadol′s concentrations was significantly affected by administration routes. The group that received tramadol by intravenous route presented area under curve the time zero until infinity (AUC0→ ∞) superior to the group treated by intramuscular route, showing that the tramadol administrated by intravenous route can have more biodisponibility of this drug in the animal′s body. Regarding the analgesic effect it was observed that the administration of 2 mg/kg of tramadol, by intravenous route, promoted analgesia with length between 1.50 to 2.00 h in 67% of the animals (4 female dogs), while the intramuscular route promoted analgesia until 6 h in 67% of the animals. In this study it was observed wide variations in the tramadol′s plasmatic concentrations. In the moment that the pain′s presence was viewed, tramadol′s plasmatic concentration varied around 300 to 600 ng/ml in 71.0% of the animals. For this reason, the high performance liquid chromatography with ultra violet detector presented suitable to evaluate tramadol′s plasmatic concentrations in female dogs submitted to ovaryhisterectomy and the administration route makes big influence on tramadol′s analgesic effect moreover, the administration by intramuscular route promoted analgesia with length bigger than the other one produced by intravenous route

O presente trabalho teve como objetivo determinar, por meio da Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CG-MS), produtos oriundos da degradação do digluconato de clorexidina (CHX) 2 % em gel. Foram selecionados três géis: comercial Gel_Chlorhexidina® (Maquira), CHX gel UNIARARAS (Manipulado pela Farmácia Ensino Uniararas) e gel CHX 2 % preparado a partir de uma uma solução comercial de CHX 20 % Sigma® no laboratório. Para que fosse possível comparar os resultados, foi preparada uma solução de CHX 2 % partindo da mesma solução comercial de CHX Sigma®. Para a avaliação dos produtos de degradação da CHX 2 %, os géis e a solução foram pesados (1 g / gel 1 mL /solução) e acondicionados em tubos plásticos (Eppendorf®). Os tubos foram subdivididos em quatro diferentes situações de armazenamento (sobre a bancada de trabalho com e sem a presença de luz, em forno de Pasteur a 36,5 °C sem luz e em geladeira a 8 °C sem luz) e quatro diferentes períodos de análise (inicial, após 1 mês, 3 meses e 6 meses de armazenamento) resultando em 52 análises cromatográficas. Após o período determinado, as amostras foram extraídas, filtradas e analisadas por meio de CG-MS. Os resultados mostraram, na análise inicial, que todos os géis e a solução já continham produtos de degradação da CHX (espécies de oxigênios reativos - ROS). Um dos ROS era a pCA. Além da pCA, outros ROS foram observados, oCA e/ou mCA (isômeros da pCA) e os organoclorados orto-isocianato clorofenil e 2-amino-5-clorobenzonitrila. A porcentagem de pCA calculada nas amostras dos géis não foi gradual nem uniforme, levantando a hipótese de falta de homogeneidade da CHX na formulação do gel. A não homogeneidade foi comprovada através de análise em espectrofotometria UV/Vis. Uma sugestão de manipulação dos géis de CHX foi então sugerida e a homogeneidade da CHX nos géis manipulados desta maneira foi comprovada através de análise em espectrofotometria UV/Vis. Concluiu-se que os géis e a solução de CHX a 2 % analisados neste trabalho, apresentaram produtos oriundos da degradação da CHX em todas as situações de armazenamento e tempo de análises propostas, essa degradação é um problema intrínseco da CHX. Os produtos formados a partir da oxidação da CHX são tóxicos e possuem características genotóxicas, podendo trazer riscos ao seres humanos com danos celulares e no DNA. Mais estudos são necessários para verificar o potencial carcinogênico da CHX, de seus produtos de degradação e se o uso de produtos contendo CHX é seguro em seres humanos. / The aim of this study was to determine, by means of gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), products originated from the degradation of 2 % chlorhexidine digluconate (CHX) gel. Three gels were selected: commercial Gel_Chlorhexidina® (Maquira), 2 % CHX gel UNIARARAS (handled at the Pharmacy Education UNIARARAS) and 2% CHX gel prepared in laboratory from a commercial 20% CHX solution (Sigma®). For comparison of the results, a 2% CHX solution was also prepared from the same commercial 20 % CHX solution (Sigma®). For assessment of the products of 2 % CHX degradation, the gels and the solution were weighed (1 g / gel - 1 mL / solution) and placed in plastic tubes (Eppendorf®). The tubes were divided into four different storage conditions (on the workbench with and without the presence of light, Pasteur oven at 36.5 °C without light and in a refrigerator at 8 °C without light) and four different evaluation periods (initial and after 1 month, 3 months and 6 months of storage), resulting in 52 chromatographic analyses. After the specified evaluation periods, the samples were extracted, filtered and analyzed by GC-MS. The results showed that, in the initial analysis, all gels and the solution already contained CHX degradation products (reactive oxygen species - ROS). One of the ROS was para-chloroaniline (pCA). In addition to pCA, other ROS were observed, oCA and/or mCA (pCA isomers) as well as the organochlorines ortho-chlorophenyl isocyanate and 2-amino-5-chloro-benzonitrile. The percentage of pCA calculated in the CHX gel samples was neither gradual nor uniform, raising the possibility of lack of homogeneity in gel formulation. The lack of homogeneity was confirmed by UV/Vis spectrophotometry. Changes in the preparation of the CHX gels were suggested, and the homogeneity of the CHX gels prepared following the suggestions was confirmed by UV/Vis spectrophotometry. It was concluded that the 2% CHX gels and solution evaluated in this study presented products from CHX degradation in all storage conditions and evaluation periods, and this degradation is an intrinsic problem of CHX. The products formed from the oxidation of CHX are toxic and have genotoxic characteristics, and may pose risks for humans such as damage to cells and DNA. Further studies are required to determine the carcinogenic potential of CHX and its degradation products and whether the use of products containing CHX in humans is safe.

As pragas urbanas constituem enormes riscos para a saúde de nossas comunidades, em uma relação sinantrópica em que os artrópodes peçonhentos assumem um papel primordial. Iniciativas de controle são efetivadas em regiões de elevada incidência, como no caso do município de Americana, estado de São Paulo, através de captura mecânica de escorpiões em cemitérios municipais, desde 2006. Durante essas atividades, verificou-se que os escorpiões evitavam ambiências com a presença de fungos filamentosos, levantando a hipótese de que existiria uma possível barreira biológica nociva aos mesmos. Nesse contexto, esse trabalho objetivou o estudo de interações entre isolados de fungos filamentosos e escorpiões coletados de um mesmo ambiente, através de cinco etapas de bioensaios. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente, considerando-se um delineamento experimental casualizado em blocos. Foi realizado o teste F da análise da variância ao nível de 5% de significância. As médias de cada ambiência testada de cada bioensaio foram comparadas pelo teste de Tukey (α= 0,05). Os resultados indicaram dois isolados de fungos (Mucor sp. e Phialophora sp.) com maior potencial de repelência e três isolados (Paecilomyces sp. - isolado 1, Rhizopus sp. e Fusarium sp. - isolado 4), com maior mortalidade para T. serrulatus. Em sequência, foram selecionados os isolados de Paecilomyces sp. e Rhizopus sp. com indicação de maior mortalidade. Os extratos brutos desses isolados foram submetidos a partições líquido-líquido com acetato de etila e água para obtenção de frações ativas, com avaliação de maior efeito escorpionicida para a fração acetato de Paecilomyces sp. A fração acetato de Paecilomyces sp. foi submetida a uma extração em fase sólida com 19 frações resultantes que foram submetidas a cromatografia em camada delgada, com a seleção de seis frações por similaridade. Duas frações ativas C e D apresentaram maior efeito escorpionicida em bioensaio e foram analisadas em cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas de alta resolução, resultando em um composto ativo de massa molar de 375 Da. No banco de dados Dictionary of Natural Products (CHEMnetBASE) foram encontrados 137 metabólitos secundários compatíveis com esse composto, mas sem referência de atividade inseticida que estivesse associada ao efeito escorpionicida demonstrado nos bioensaios. A identificação molecular do isolado de Paecilomyces sp. indicou uma sequência de 569 pb para a espécie Paecilomyces formosus. / Urban pests pose enormous risks to the health of our communities, in a synanthropic relationship in which venomous arthropods play a primordial role. Control initiatives are carried out in regions of high incidence, such as in the municipality of Americana, São Paulo State, through mechanical capture of scorpions in cemeteries since 2006. During these activities, it was verified that the scorpions avoided environments with the presence of filamentous fungi, raising the hypothesis that there would be a possible biological barrier harmful to them. In this context, this work aimed to study the interactions between isolates of filamentous fungi and scorpions harvested from the same environment through five stages of bioassays. The data obtained were statistically analyzed, considering a randomized block design. The F test of the analysis of variance was performed at the 5% level of significance. The means of each environment tested from each bioassay were compared by the Tukey test (α= 0.05). The results indicated two isolates of fungi (Mucor sp. and Phialophora sp.) with higher potential for repellency and three isolates (Paecilomyces sp., Rhizopus sp. and Fusarium sp.) with a higher mortality to T. serrulatus. In sequence, the isolates of Paecilomyces sp. and Rhizopus sp. were selected with indication of higher mortality. The crude extracts of those isolates were submitted to liquid-liquid partitions with ethyl acetate and water to obtain active fractions, with evaluation of a higher scorpionicidal effect for the acetate fraction of Paecilomyces sp. The acetate fraction of Paecilomyces sp. was subjected to a solid phase extraction with 19 resulting fractions, again submitted to thin layer chromatography, with the selection of six fractions by similarity. Two active fractions (C and D) presented a higher scorpionicidal effect and were analyzed by ultra high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry, resulting in an active compound of 375 Da molar mass. In the Dictionary of Natural Products (CHEMnetBASE) database were found 137 secondary metabolites compatible with this compound but without reference to insecticidal activity that was associated with the scorpionicidal effect demonstrated in the bioassays. The molecular identification of Paecilomyces sp. indicated a 569 bp sequence for the species Paecilomyces formosus.

Neste trabalho efetuou-se um detalhado estudo metodológico das técnicas empregadas para a caracterização espectroscópica e cromatográfica dos ácidos húmicos. Neste estudo demonstrou-se que outros fatores, além de características intrínsecas dos ácidos húmicos, podem afetar os resultados obtidos pelas diferentes técnicas espectroscópicas utilizadas. Dentre estes fatores o mais importante foi o íon vanadila (VO2+) residual que afetou drasticamente os resultados das análises espectroscópicas levando à supressão: dos sinais de RMN de 13C de grupos hidrofílicos; dos sinais de RPE dos radicais livres orgânicos; e da intensidade de fluorescência. Pela supressão seletiva dos sinais de RMN de 13C dos grupos carboxilas e daqueles associados a carboidratos foi possível inferir que estas estruturas possivelmente estejam diretamente envolvidas na complexação do VO2+, assim como a supressão dos sinais de fluorescência e de RPE dos radicais livres orgânicos indicaram que estes radicais e estruturas fluorescentes também podem estar envolvidas na complexação deste íon ou então o efeito do íon paramagnético pode difundir-se facilmente pela estrutura dos ácidos húmicos. Adicionalmente, os ácidos húmicos com maior conteúdo de VO2+ apresentaram um maior tamanho molecular aparente, indicando um possível efeito agregante deste íon. A análise multivariada dos dados obtidos possibilitou o isolamento destes efeitos do VO2+ e as novas variáveis obtidas pela técnica dos componentes principais, independentes do conteúdo deste íon, indicaram que o cultivo mais intenso do solo levou ao acúmulo relativo de estruturas mais recalcitrantes e com maiores conteúdos de estruturas associadas à lignina e C-Alquila de cadeia longa. Além disto, observou-se que o sinal dos radicais livres orgânicos dos ácidos húmicos era devido à pelo menos dois centros paramagnéticos distintos sendo que o VO2+ suprimiu preferencialmente o sinal com maior valor-g, atribuído a radicais livres orgânicos onde o elétron desemparelhado estaria delocalizado sobre átomos de oxigênio. / In this work it was realized a detailed methodological studies of spectroscopic and chromatographic techniques that were applied in the humic substances characterization. In these studies it was demonstrated that, besides the intrinsic characteristics of humic substances, there are other factors which can affect the results obtained with the different spectroscopic techniques utilized. Among these factors, the residual vanadyl ion (VO2+) affected drastically the spectroscopic results causing the suppression of: 13C NMR signals of hydrophilic groups; EPR signals from organic free radicals; and the fluorescence intensity. By the selective suppression of 13C NMR signals from carbohydrates and carboxyl groups it was proposed that these structures could possibly be directly involved in the VO2+ complexation. The suppression of fluorescence signals and EPR ones from organic free radicals indicated that or these radicals and the fluorescent structures can also be involved in the VO2+ complexation, either the paramagnetic ion effect can diffuse through the humic substances structures. In addition, the increase of VO2+ contents resulted in a higher apparent molecular size indicating a possibly aggregating effect of this ion. The multivariate analysis from the obtained data allowed the isolation of these effects from VO2+. The new variables obtained by the principal components technique, independent from that ion content, indicated that the most intense cultivation of the soil lead to the relative accumulation of more recalcitrant structures associated to lignin and long chain C-alkyl. Besides this, we observed that the organic free radicals signal from humic acids was due to at least two paramagnetic centers. The residual VO2+ suppressed preferentially the signal with the highest g-value. This signal was assignment to organic free radicals where the unpaired electron could be delocalized on oxygen atoms.

A hidroxicloroquina (HCQ) é um importante fármaco quiral usado, principalmente, no tratamento de artrite reumatóide, lupus eritematoso sistêmico e malária e cujas propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas são estereosseletivas. Em relação às propriedades farmacocinéticas, alguns estudos prévios indicam que o metabolismo estereosseletivo parece ser função da espécie estudada, o que implica na necessidade de métodos seletivos para a determinação de seus enantiômeros em materiais biológicos. Assim, propôs-se o desenvolvimento e a validação de métodos para análise dos enantiômeros do fármaco inalterado e de seus principais metabólitos em frações microssomais de homogeneizados de fígado de ratos e camundongos. Para tanto foram empregadas as técnicas de eletroforese capilar (CE) e de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Inicialmente foi desenvolvido um método por HPLC, em uma etapa, para a quantificação dos enantiômeros de dois metabólitos da HCQ, desetilcloroquina (DCQ) e desetilhidroxicloroquina (DHCQ) em microssomas de fígado de ratos e camundongos. A separação foi efetuada utilizando-se a coluna Chiralpak AD-RH e hexano:isopropanol (92:8, v/v) acrescido de 0,1% de dietilamina como fase móvel. O procedimento de extração líquido-líquido foi utilizado para a preparação das amostras. A metodologia desenvolvida resultou na completa resolução dos enantiômeros da HCQ, DCQ e DHCQ e pode ser considerada adequada, visto que os parâmetros de validação mostraram valores dentro dos limites exigidos na literatura. O segundo método desenvolvido permitiu a quantificação dos enantiômeros dos três metabólitos da HCQ: DCQ, DHCQ e bisdesetilcloroquina (BDCQ) em microssomas de fígado de camundongos. A separação foi efetuada utilizando-se um tubo capilar de sílica fundida e solução do eletrólito tris(hidroximetil)aminometano 100 mmol/L, ajustada a pH 9,0 com ácido fosfórico e acrescida de 1% (m/v) de β –CD - sulfatada e 30 mmol/L de β –CD - hidroxipropilada. O procedimento de extração líquido-líquido foi eficiente para remover interferentes e os parâmetros de validação mostraram valores dentro dos limites exigidos na literatura. Os métodos desenvolvidos foram aplicados no estudo in vitro do metabolismo da HCQ em frações microssomais de fígado dos animais, verificando-se que o principal metabólito formado é o (-)-(R)-DHCQ, para ambas espécies estudadas. / Hydroxychloroquine (HCQ) is an important chiral drug used specially in the treatment of rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus and malaria, with stereoselective pharmacokinetic and pharmacodinamic properties. Concerning these properties, some previous studies indicate that the stereoselective metabolism seems to be a function of the studied species, therefore selective methods are required for the determination of its enantiomers in biological matrix. Thus, the present work reports the development and validation of methods for the analysis of the enantiomers of HCQ and its main metabolites in microsomal fraction of rats and mice liver homogenates. Capillary electrophoresis (CE) and high-performance liquid chromatography (HPLC) were used for this purpose. Initially, a one-step HPLC method was developed for the quantification of the enantiomers of two HCQ metabolites, desethylchloroquine (DCQ) and desethylhydroxychloroquine (DHCQ) in microsomal fraction of rats and mice liver homogenates. The separation was performed on a Chiralpak AD-RH column using hexane:isopropanol (92:8, v/v) plus 0.1% diethylamine as the mobile phase. Liquid-liquid extraction procedure was used for sample preparation. The developed methodology resulted in the complete resolution of HCQ, DCQ and DHCQ enantiomers and can be considered suitable because the validation parameters are in accordance with the limits established in the literature. The second developed method allowed the quantification of the enantiomers of the three HCQ metabolites, DCQ, DHCQ and bisdesethylchloroquine (BDCQ) in microsomal fraction of mice liver homogenates. The separation was performed using a fused-silica capillary tube and tris (hydroxymethyl) aminometane 100 mmol/L electrolyte solution, adjusted at pH 9.0 with phosphoric acid, containing 1% (w/v) sulfated- β -CD and 30 mmol/L hydroxypropyl- β -CD. The liquid-liquid extraction procedure was efficient to remove interferents and the validation parameters showed values within accordance to the literature. The developed methods were applied in the in vitro metabolism study of HCQ in microsomal fractions of the liver of the animals and it was verified that the main metabolite formed is (-)-(R)-DHCQ for both animal species studied.

A presença de nove ésteres (acetato de etila, butanoato de etila, hexanoato de etila, lactato de etila, octanoato de etila, nonanoato de etila, decanoato de etila, octanoato de isoamila e dodecanoato de etila) foi investigada por cromatografia gasosa hifenada à espectrometria de massas via injeção direta de amostras (ID-CG-EM). Cento e trinta e seis amostras de aguardente de cana foram coletadas durante sua destilação em diferentes produtores em diferentes cidades localizadas no interior do estado de São Paulo. Também foram analisadas 21 amostras de cachaça comercial, 10 amostras de rum e 10 amostras de uísque importados e obtidos em lojas \"duty free shop\". A metodologia analítica desenvolvida para análise de ésteres demonstrou-se apropriada para a determinação destes compostos em bebidas destiladas, sendo simples (injeção direta), seletiva e relativamente rápida. Apresentou baixos limites de detecção e quantificação e boa repetibilidade. O acetato de etila é o principal éster presente nas bebidas destiladas seguido pelo lactato de etila. Em todas as amostras de bebidas destiladas analisadas neste trabalho foi detectada a presença do éster lactato etila. A presença deste éster está relacionada com a contaminação do mosto por bactérias (Lactobacillus spp) responsáveis pela fermentação láctica. A concentração de lactato de etila nas amostras de cachaça e rum é muito superior à encontrada nas amostras de uísque. A análise multivariada dos resultados analíticos aplicada ao banco de dados dos ésteres juntamente com as concentrações de carbamato de etila e benzaldeído levaram à formação de dois grupos bem distintos: amostras destiladas em alambiques de cobre e amostras destiladas em colunas de aço inox. Os modelos estatísticos gerados pelas análises exploratórias de PCA, PLS e LDA utilizando o carbamato de etila, benzaldeído, decanoato de etila e o dodecanoato de etila como discriminantes revelaram ser possíveis a diferenciação entre estes dois grupos de destilados com uma porcentagem de acerto de 81% para PCA, 78,4 % para a PLS e 97,6% para LDA. Os métodos cromatográficos sugeridos pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) para a determinação de ésteres não englobam o monitoramento do lactato de etila, subestimando o resultado final. / The presence of nine esters (ethyl acetate, ethyl butanoate, ethyl hexanoate, ethyl lactate, ethyl octanoate, ethyl nonanoate, ethyl decanoate, isoamyl octanoate, and ethyl dodecanoate) was investigated by gas chromatography hyphenated to a mass spectrometry through sample direct inject (DI-GC-MS). One hundred and thirty six sugar cane spirits collected immediately after its distillation from different producers and different cities located in the countryside of São Paulo state. Also, it was analyzed 21 commercial samples of cachaça, 10 samples of rum and 10 samples of whiskey imported and purchased from the duty free shop. The analytical method applied to esters analysis was appropriated for the determination of these compounds in distilled spirits, since it is simple (direct inject), selective and reasonably fast. It presented low detection and quantification limits and good reproducibility. Ethyl acetate is the main ester present in the distilled spirits followed by ethyl lactate. Ethyl lactate was detected in all the distilled beverage samples analyzed herein. The occurrence of this ester is related to bacterial contamination of must (Lactobacillus spp) responsible for the lactic fermentation. The ethyl lactate content in cachaça and rum samples are superior that presented by whiskey samples. The multivariate analysis of the analytical results applied to the esters data set jointly with the content of ethyl carbamate and benzaldehyde lead to the clustering of two quite distinct groups: sugar cane spirits distilled in copper alembic and sugar cane spirits distilled in stainless steel column. The resulting statistical model generated by PCA, PLS and LDA exploratory analysis employing ethyl carbamate, benzaldehyde, ethyl decanoate, and ethyl dodecanoate as discriminators was able to distinguish between these two groups with a accuracy of 81 % for PCA, 78,4 % for PLS and 97,6 % for LDA. The chromatographic method recommended by the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) for the esters determination does not include the monitoring of ethyl lactate leading to a underestimating of the final result.

Os ácidos naftênicos (AN) são considerados os principais responsáveis pela corrosão durante a fase líquida do refino de petróleo e, como os óleos crus nacionais apresentam altos índices de acidez, medidos pelo índice TAN (do inglês total acid number), têm recebido especial atenção em recentes pesquisas sobre seu conteúdo e natureza. Contudo, não existe um método de extração validado que permita extrair os AN do petróleo em quantidade suficiente para a caracterização e identificação estrutural. Neste trabalho foram testados vários métodos de extração dos AN (cromatografia líquida de alta eficiência em escala preparativa, cromatografia líquida em coluna aberta e extração em fase sólida) para duas frações de petróleo brasileiro com elevada acidez. Foram avaliadas as diferentes fases estacionárias e o melhor procedimento foi a extração em fase sólida com fase SAX. Os extratos e uma amostra técnica de AN foram analisados por cromatografia gasosa monodimensional e bidimensional abrangente com detectores de ionização por chama e espectrometria de massas. Para a mistura técnica de AN também se fez uso de técnicas espectroscópicas (ressonância magnética nuclear e infravermelho) que se mostraram eficientes para a sua caracterização, além das técnicas cromatográficas. Os resultados indicaram a presença majoritária de ácidos carboxílicos acíclicos com até C e de alguns AN monocíclicos com até 18 átomos de carbono. / Naphthenic acids (NA) are considered primarily responsible for corrosion in the liquid phase of the petroleum refining, and as national crude oils presents high levels of acidity, measured by the TAN (Total Acid Number), they have receiving special attention in recent research about their content and nature. However, there is no validated extraction method that allows extracting the NA oil in sufficient quantity for characterization and structural identification. Several methods for extraction of NA were tested in this study (HPLC in preparative scale, open column liquid chromatograhpy and solid phase extraction) for two fractions of Brazilian oil with high acidity. Different stationary phases were evaluated and the best procedure is the solid phase extraction with SAX phase. The extracts and a technique NA sample were analyzed by gas chromatography mono dimensional and comprehensive twodimensional with detector flame ionization and mass spectrometry. For technical mixture of NA it was also carried out spectroscopic techniques (nuclear magnetic resonance and infrared) that have proven to be successful for this characterization, in addition to chromatographic techniques. The results indicated the predominant presence of carboxylic acids up to C20 alcohols and some NA monocyclic up to 18 carbon atoms.

A crescente demanda por água doce de boa qualidade, associada ao aumento na frequência de florações tóxicas de cianobactérias em reservatórios utilizados para consumo humano, levou à publicação da Portaria nº. 518/04 pelo Ministério da Saúde. Entre outros parâmetros de potabilidade, as empresas fornecedoras de água tratada devem realizar o monitoramento de cianotoxinas. Para tanto, métodos analíticos rápidos e precisos para a determinação destes compostos são imprescindíveis. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo empregar a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas para o estudo das principais cianotoxinas em território nacional: microcistinas, anatoxina-a(s), cilindrospermopsina e saxitoxinas. Os resultados obtidos estão distribuídos em capítulos específicos dedicados a cada grupo de toxinas. Dessa forma, o primeiro capítulo apresenta um estudo de fragmentação na fase gasosa de ânions de microcistinas em um equipamento do tipo orbitrap. É demonstrado que o modo negativo de ionização por electrospray fornece informações estruturais importantes e complementares ao modo positivo de ionização. Uma abertura seletiva do peptídeo cíclico é proposta e mecanismos discutidos, o que facilita a interpretação de resultados durante a caracterização de variantes desconhecidas. O modelo de fragmentação desenvolvido foi utilizado para identificar a variante [Leu1]MC-LR em um extrato de Microcystis spp. O segundo capítulo descreve metodologias qualitativas de LC/MS para o monitoramento e identificação do organofosforado natural anatoxina-a(s), cuja análise é prejudicada pela ausência de padrões comerciais. A cromatografia de interação hidrofílica foi empregada e mecanismos de fragmentação na fase gasosa propostos, discutindo-se os íons característicos desta estrutura química. Tal modelo permitiu a identificação desta toxina nas cepas de Anabaena oumiana ITEP-25 e ITEP-26 pela primeira vez. O terceiro capítulo disserta sobre os mecanismos de fragmentação na fase gasosa da toxina cilindrospermopsina quando ionizada por electrospray na forma de aduto com metais alcalinos. Diferenças nas vias de fragmentação são demonstradas de acordo com o raio atômico do metal formador do aduto, com implicações práticas na sua determinação cromatográfica. Já o quarto capítulo discute os mecanismos de fragmentação de variantes sulfatadas de saxitoxinas (GTX1e4, GTX2e3, dcGTX2e3, GTX5) após ionização por electrospray no modo positivo e negativo. É demonstrado pela primeira vez que uma conformação estrutural específica do grupamento sulfato explica a intensa eliminação de SO3 observada para as variantes GTX1, GTX2 e dcGTX2 no modo positivo de ionização. Por outro lado, o modo negativo de ionização apresenta vantagens uma vez que a dissociação na fonte é insignificante se comparada à dissociação observada no modo positivo. Como resultado, métodos quantitativos no modo negativo podem apresentar maior sensibilidade, permitindo a detecção destas toxinas em amostras ambientais em quantidades mais baixas. De maneira geral, conclui-se que a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas é ferramenta poderosa para a análise quali e quantitativa das principais cianotoxinas, podendo ser amplamente empregada para o monitoramento de água para consumo humano. / The increasing occurrence of toxic cyanobacterial blooms in reservoirs used to supply drinking water for human consumption has prompted the publication of resolution 518/04 by the Brazilian Ministry of Health. Among other quality requirements, the monitoring of cyanotoxins in treated water is mandatory for companies responsible for potable water distribution. Therefore, precise and rapid analytical methods are essential. In this context, the aim of this work is to employ liquid chromatography coupled to mass spectrometry to study the most important cyanotoxins in our country: microcystins, anatoxin-a(s), cylindrospermopsis and saxitoxins. The obtained results are distributed in four chapters, each one dedicated to a single group of toxins. In this way, chapter one presents the gas-phase fragmentation behavior of deprotonated microcystins in an Orbitrap instrument. It is demonstrated that electrospray negative ionization can provide significant structural information about microcystins. These results are complementary to the positive ionization mode. A selective ring opening process is proposed and possible mechanisms are discussed, which may facilitate data interpretation when unknown variants are considered. The general fragmentation model was further applied to the characterization of [Leu1]MC-LR in a Microcystis spp. cell extract. The second chapter describes qualitative analytical methods for the identification of anatoxin-a(s), a natural organophosphate whose determination is hampered by the lack of commercial standards. Hydrophilic interaction liquid chromatography was employed and fragmentation mechanisms proposed, identifying the characteristic product ions of this toxin. The developed methods were further used to identify anatoxin-a(s) for the first time in Anabaena oumiana strains ITEP-25 and ITEP-26. The third chapter presents data related to the gas-phase fragmentation behavior of cylindrospermospin when this toxin is ionized as metal adducts. Different fragmentation pathways are accessed depending on the atomic radius of the metal cation involved. Practical implications for the chromatographic analysis of this toxin are presented. The last chapter describes the fragmentation behavior of sulphate-containing saxitoxin variants (GTX1&4, GTX2&3, dcGTX2&3, GTX5) after electrospray ionization in both the positive and negative modes. A mechanism for the intense SO3 elimination from [M+H]+ ions from GTX1, GTX2 and dcGTX2 is proposed for the first time and relies on a specific structure conformation. On the other hand, the negative ionization mode shows much less in-source dissociation when compared to the positive mode. As a consequence, methods based on negative ionization might be more sensitive for sulfate-containing variants, allowing the detection of lower amounts of these toxins in environmental samples. At the end, it can be concluded that liquid chromatography is a well-suited and powerful technique for the qualitative and quantitative analysis of cyanotoxins, being an invaluable contribution to water safety evaluation.

O fenol é utilizado na indústria como agente desinfetante, no preparo de resinas fenólicas e pigmentos de tintas. Apresenta-se no estado sólido à temperatura ambiente, com coloração fracamente rósea, odor acre e é higroscópico. Na exposição ocupacional aguda o composto pode levar a lesões eritematosas e sensação de calor, cronicamente, afetar a maturação celular no compartimento medular ósseo devido à formação de 1,4-benzoquinona. Os monitoramentos ambiental e biológico possuem relevância nas situações de exposições ocupacionais. O objetivo do trabalho foi validar e aplicar métodos apropriados na determinação de fenol em amostras de ar do ambiente de trabalho e urinas provenientes de trabalhadores do setor de macharia de uma indústria de peças sanitárias. Amostras de urina e ar foram analisadas, permitindo-se verificar a aplicação dos métodos cromatográficos para determinação de fenol. / Phenol is used as an industrial disinfectant agent, in the preparation of phenolic resins and paint pigments. When in solid state, it shows a light pink color, ocre odor and is hygroscopic. In acute occupational exposure, the compound can produce erythemic injuries and burn sensation and, chronically, affect the cellular maturation of bone marrow due the 1,4-benzoquinone. Environmental and biological monitoring are important in occupational exposure situations. The aim of this work was to validate a method to be applied in the determination of phenol concentration in air samples originated from work environment and urines taken from molding area workers at a sanitary devices foundry. Urine and air samples were analyzed, showing application of chromatography methods in phenol quantification.

A adição de diferentes substâncias (adulterantes e diluentes) no crack (freebase) é um fenômeno bem conhecido no mercado ilícito. Os adulterantes podem interagir com a cocaína e determinar novas e desconhecidas síndromes tóxicas influindo no estado clínico das intoxicações, especialmente em casos em que houve modificação das vias de administração. No Brasil a análise de adulterantes, contaminantes e/ou diluentes adicionados ao crack não constitui rotina nos laboratórios oficiais. Nesse contexto, o presente trabalho pretendeu a caracterização de um grupo de amostras de crack que fornecerá informações na investigação sobre o narcotráfico, no estudo da morbi-letalidade, bem como na toxicovigilância. O método utilizado neste trabalho foi realizado com a técnica de cromatografia gasosa acoplada a detector em ionização de chamas CG-DIC. Os resultados obtidos nas análises de amostras provenientes de apreensões realizadas na região metropolitana de São Paulo num período de 20 meses, no período de março de 2008 a novembro de 2009, mostraram que 9,16% das amostras continham lidocaína, benzocaína e cafeína como adulterantes e 14,57% continham outros adulterantes totalizando 23,73%. O percentual em teor médio de cocaína presentes nas amostras de crack foi de 71,3%. Adicionalmente foram avaliadas as propriedades organolépticas. O resultado das análises das amostras estudadas mostrou maior teor de cocaína em relação à cocaína comercializada na forma de sal (cloridrato ou sulfato) comercializado como \"droga de rua\" no Estado de São Paulo. Ainda, os interferentes e adulterantes encontrados nas amostras estudadas permitem a inferência do importante problema de saúde pública advindos do uso dessa droga. / The addition of different substances (contaminants and fillers) in the crack (freebase) is a well known phenomenon in the illicit market. The contaminants can interact with cocaine and identify new and unknown toxic syndromes influencing the clinical state of intoxication, especially in cases where there was a modification of the routes. In Brazil, the analysis of adulterants, contaminants and / or extenders added to the crack is not routine in official laboratories. In this context, this work aims to characterize a sample group of crack that provides information on an investigation into drug trafficking in the study of morbidity and mortality, as well as toxicological. The method used in this study utilized the technique of gas chromatography coupled with flame ionization detector GC-FID. The analysis results of samples from seizures made in the metropolitan region of Sao Paulo in a period of 20 months, from March 2008 to November 2009 showed that 9.16% of the samples contained lidocaine, benzocaine, and caffeine as adulterants and 14.57% contained other adulterants totaling 23.73%. The average content in percentage of cocaine present in the samples of crack was 71.3%. Additionally, we evaluated the organoleptic properties of the row samples. The results of analysis of the samples tested showed higher levels of cocaine in the cocaine sold in the form of salt (hydrochloride or sulfate) marketed as \"street drug\" in the State of São Paulo. Still, the interferences and adulterants found in the samples studied allow the inference of important public health problem arising from the use of this drug.