Orientador: Pedro de Oliva Neto / Banca: Valeria Marta Gomes de Lima / Banca: Ivanise Guilherme Branco / Resumo: Os alimentos funcionais são utilizados para melhoria da qualidade de vida para humanos e animais, refletindo também na qualidade do alimento consumido pela população. Através da substituição de promotores de crescimento na nutrição de animais por probióticos, há eliminação de resíduos de antibióticos nos alimentos de origem animal, no meio ambiente e diminuição de resistência de microrganismos patógenos a estas moléculas. A utilização de probióticos em alimentos para animais é comprovadamente eficaz no aumento da produtividade, mas é limitado pelo alto custo de inoculação de microrganismos. O soro de leite é uma alternativa para a produção de probióticos de baixo custo e de alta disponibilidade, mas necessita ser complementado para suprir as necessidades de crescimento de microrganismos probióticos. A formulação de um meio de cultura para cultivo de bactérias. probióticas dos gêneros Lactobacillus sp e Bifidobacterium sp com subprodutos da indústria láctea, mostrou-se eficaz para induzir o crescimento bacteriano, especialmente Bifidobacterium Bb 12, quando suplementado com extratos orgânicos como extrato de levedura , peptonas e extrato de carne. / Abstract: Functional foods are used to improve the quality of life for humans and animals, also reflecting the quality of food consumed by the population. Through the replacement of growth promoters in animal feeding with probiótics, have elimination of antibiotic residues in foods of animal origin, the environment and reduction of resistance of microorganisms pathogenic to these molecules. The use of probiotics in feed is proven effective in increasing productivity, but is limited by the high cost of inoculating microorganisms. Whey is an alternative for the production of probiotic low cost and high availability, but needs to be supplemented to meet the growing needs of probiotic microorganisms.The formulation of a culture medium for growing bacteria genera of probiotic Lactobacillus sp and Bifidobacterium sp with byproducts of the dairy industry, was effective to induce bacterial growth, especially Bifidobacterium Bb 12, when supplemented with organic extracts like yeast extract, peptones and meat extract. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-27Bitstream added on 2014-06-13T20:35:44Z : No. of bitstreams: 1 marcon_me_me_sjrp.pdf: 1453049 bytes, checksum: b4536ab171585525b2b903960ee3869c (MD5) / Os alimentos funcionais são utilizados para melhoria da qualidade de vida para humanos e animais, refletindo também na qualidade do alimento consumido pela população. Através da substituição de promotores de crescimento na nutrição de animais por probióticos, há eliminação de resíduos de antibióticos nos alimentos de origem animal, no meio ambiente e diminuição de resistência de microrganismos patógenos a estas moléculas. A utilização de probióticos em alimentos para animais é comprovadamente eficaz no aumento da produtividade, mas é limitado pelo alto custo de inoculação de microrganismos. O soro de leite é uma alternativa para a produção de probióticos de baixo custo e de alta disponibilidade, mas necessita ser complementado para suprir as necessidades de crescimento de microrganismos probióticos. A formulação de um meio de cultura para cultivo de bactérias. probióticas dos gêneros Lactobacillus sp e Bifidobacterium sp com subprodutos da indústria láctea, mostrou-se eficaz para induzir o crescimento bacteriano, especialmente Bifidobacterium Bb 12, quando suplementado com extratos orgânicos como extrato de levedura , peptonas e extrato de carne. / Functional foods are used to improve the quality of life for humans and animals, also reflecting the quality of food consumed by the population. Through the replacement of growth promoters in animal feeding with probiótics, have elimination of antibiotic residues in foods of animal origin, the environment and reduction of resistance of microorganisms pathogenic to these molecules. The use of probiotics in feed is proven effective in increasing productivity, but is limited by the high cost of inoculating microorganisms. Whey is an alternative for the production of probiotic low cost and high availability, but needs to be supplemented to meet the growing needs of probiotic microorganisms.The formulation of a culture medium for growing bacteria genera of probiotic Lactobacillus sp and Bifidobacterium sp with byproducts of the dairy industry, was effective to induce bacterial growth, especially Bifidobacterium Bb 12, when supplemented with organic extracts like yeast extract, peptones and meat extract.

Submitted by GUSTAVO LARANJEIRA DE MELO SANTOS null (guga_apt@hotmail.com) on 2018-02-19T14:17:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 2218885 bytes, checksum: 6ec87dc4d56aad48c63206410b5c1268 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-02-20T12:55:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_glm_me_jabo.pdf: 2218885 bytes, checksum: 6ec87dc4d56aad48c63206410b5c1268 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-20T12:55:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_glm_me_jabo.pdf: 2218885 bytes, checksum: 6ec87dc4d56aad48c63206410b5c1268 (MD5) Previous issue date: 2018-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O estudo do cultivo de microalgas na aquicultura é importante para incrementar o conhecimento da biologia das espécies, favorecendo posterior produção em ambientes controlados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento da microalga Ankistrodesmus gracilis em meio de cultura composto por biomassa de Azolla caroliniana e Lemna minor e utilizar a microalga na alimentação do Xiphophorus maculatus visando melhorar o desempenho zootécnico. O experimento com a microalga durou 28 dias em condições controladas e os parâmetros físicos e químicos foram mensurados semanalmente com a avaliação diária do crescimento. A planta L. minor apresentou melhores resultados para macro e micronutrientes, e o crescimento também foi maior no meio de cultura para a microalga A. gracilis (552 x 105 cel mL-1) do que no meio de A. caroliniana (292 x 105 cel mL-1). No meio de cultura de L. minor a microalga A. gracilis apresentou maiores teores de clorofila-a, taxa de crescimento, densidade celular média e máxima e fósforo total. O teor de lipídio foi maior no meio de L. minor e o de proteína foi igual em ambos os meios. O uso de microalga A. gracilis crescida no meio de macrófita, foi utilizada para a alimentação do peixe ornamental Platy (X. maculatus). Para preparação da ração a microalga crescida nos dois meios de cultura diferentes foi liofilizada e adicionada na ração na proporção de 10%. Os tratamentos foram alimento inerte, somente ração (controle); alimento inerte com microalga A. gracilis cultivada em meio de cultura A. caroliniana e alimento inerte com microalga A. gracilis cultivada em meio de cultura L. minor. Em relação ao desempenho zootécnico observou-se diferenças significativas (p<0,05) para o tratamento contendo microalga cultivada em meio de L. minor em relação ao peso final, ganho de peso, taxa de crescimento, consumo, peso inicial e sobrevivência, e o controle obteve o pior desempenho zootécnico. Dentre as duas macrófitas estudadas L. minor demonstrou ser mais eficiente promovendo elevada densidade celular, evidenciando que estas plantas podem ser uma nova ferramenta para o cultivo em laboratório desta microalga, em função do baixo custo, eficiência de produção e disponibilidade do recurso. Para o peixe ornamental X. maculatus a ração contendo a microalga cultivada em meio de cultura L. minor apresentou melhores resultados. Já no de A. caroliniana apesar de inferior a L. minor demonstrou ser melhor que o controle (somente ração), comprovando que as macrófitas além de servirem como meio de cultura para microalga, também podem ser um incremento em rações de peixes ornamentais. / Studies on the cultivation of microalgae are greatly relevant for in-depth analysis of species´ biology and for highlighting production in controlled environments. Current analysis assesses growth of the Ankistrodesmus gracilis microalgae in a culture medium composed of Azolla caroliniana and Lemna minor biomass and to use a microalga in the feeding of Xiphophorus maculatus aiming to improve the zootechnical performance. Assay with microalga lasted 28 days in controlled conditions, and physical and chemical parameters were measured weekly, coupled to daily growth evaluation. Macrophyte L. minor had better results macro and micronutrients. and growth was also higher in the culture medium for microalgae A. gracilis (552 x 105 cell mL-1 ) than in A. caroliniana medium (292 x 105 cell mL-1 ). Microalga A. gracilis had higher rates of chlorophyll- , growth and medium, maximum cell density rates and total phosphorus in this culture medium. Lipid rates were greater in L. minor medium. Protein rate was equal in the two media. The use of microalga A. gracilis grown in macrophyte medium was employed for the feeding of the ornamental fish Platy (X. maculatus). To prepare the feed the microalgae grown in the two different culture media were lyophilized and added to the ration in the ratio at 10%. Treatments consisted of inert feed, ration only (control); inert feed plus microalga A. gracilis cultivated in A. caroliniana medium; inert feed plus microalga A. gracilis cultivated in L. minor medium culture. In the case of animal performance, significant differences (p<0.05) were registered for treatment with microalga cultivated in L. minor medium with regard to final weight, weight gain, growth rate intake, initial weight and survival, and the control obtained the worst zootechnical performance. L. minor proved to be more efficient since it enhanced high cell density. This fact showed that these plants may be a new tool for laboratory culture due to low costs, production efficiency and availability. In the case of the ornamental fish X. maculatus, feed with the microalga cultivated in L. minor medium had the best results. In the case of A. caroliniana, albeit lower than L. minor, it proved to be better than control (feed only). Besides being employed as culture medium for microalgae, macrophytes may also constitute a partial increase in the ration of ornamental fish. / 134543/2016-5

Submitted by Róbinson Gerardo Trindade Portilla Erazo null (robinson.gtpe@gmail.com) on 2017-09-27T14:49:27Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Robinson_VF_Repositorio_26-09-2017.pdf: 2688773 bytes, checksum: 22f612426a45deee274ee0dbd4e1fcba (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-09-28T14:26:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 portillaerazo_rgt_me_ilha.pdf: 2688773 bytes, checksum: 22f612426a45deee274ee0dbd4e1fcba (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-28T14:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 portillaerazo_rgt_me_ilha.pdf: 2688773 bytes, checksum: 22f612426a45deee274ee0dbd4e1fcba (MD5) Previous issue date: 2017-08-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A biomassa derivada de microalgas apresenta um grande potencial devido a sua sustentabilidade e alta produtividade, sendo possível extrair lipídios para produção de biodiesel. Entretanto, desafios na cadeia de produção como um todo devem ser resolvidos para que o biodiesel de microalgas seja viável. Uma das etapas críticas é o cultivo, sendo o meio de cultura um elemento de alto custo. O objetivo principal deste trabalho é avaliar o crescimento de microalgas visando produção de lipídios para biodiesel, utilizando como fontes de nutrientes a vinhaça originada do processo produtivo de etanol no setor sucroalcooleiro. Foram isolados e indentificados três gêneros nativos de microalgas: uma cianobactéria Aphanocapsa sp., uma clorofícea Oocystis sp. e outra clorofícea Scenedesmus sp. O cultivo da microalga Scenedesmus sp. em fotobiorreator de placas planas com meio de cultivo MBM (Modified Bristol Medium) se mostrou modesta em termos de produtividade de biomassa (8 mg/l.dia) e em teor de lipídios na biomassa seca (1,5%). O cultivo dessa mesma microalga em tubos de ensaios com meio alternativo utilizando vinhaça (três diluições de 2%, 5% e 10% em volume) no meio de cultura mostrou desempenho comparável em relação ao meio sintético MBM, sendo que a partir do dia 6, os quatros cultivos se estabilizam em torno de uma concentração celular de 6×106 de células/ml, indicando que a vinhaça pode ser uma fonte de nutrientes de baixo custo para o cultivo de microalgas. Deste modo, é possível reduzir custos em uma importante etapa do processo global de produção de biodiesel de microalgas, viabilizando economicamente esta alternativa energética. / The biomass derived from microalgae presents great potential due to its sustainability and high productivity, it being possible to extract lipids to produce biodiesel. However, challenges in the production chain as a whole must be solved to make microalgae biodiesel viable. One of the critical steps is cultivation, with the culture medium being a costly element. The main purpose of this work is to evaluate the microalgae growth focusing in lipid production for biodiesel using as sources of nutrients the vinasse originated from the sugar-alcohol production process. Three natives microalgae genres have been isolated and identified: cyanobacteria Aphanocapsa sp., chlorophycea Oocystis sp. and other chlorophycea Scenedesmus sp. The cultivation of the microalgae Scenedesmus sp. in flat plate photobioreactor with Modified Bristol Medium (MBM) was modest in terms of biomass yield (8 mg/l.day) and lipid content in dry biomass (1.5%). The cultivation of this same microalga in test tubes in an alternative medium using vinasse (three dilutions of 2%, 5% and 10% in volume) in the culture medium showed a comparable performance in relation to the MBM, starting in the 6th day the stabilization of the cell concentration in 6×106 cells/ml for the four cultives, indicating that the vinasse can be a source of low cost nutrients for the cultivation of microalgae. In this way, it is possible to reduce costs at an important stage in the overall process of microalgae biodiesel production, making this energy alternative economically viable. / CAPES: 1420416

This study aimed to identify through polyphasic approach (phenotypic and genotypic methods) strains of Aeromonas spp. isolated from surface water and sediment from three different points of the Coco River, Cearà following the salinity gradient of the water. Sampling was conducted between October 2011 and March 2012 each collection consisted of six samples. Aeromonas strains were isolated according to the technique described in the literature Gelatin Phosphate Salt Agar (agar plus GSP 20 &#956;g/mL ampicillin). The physico-chemical parameters (salinity, pH and temperature) of water were on a track that favored not only survival, but also the multiplication of micro-organisms in both sites. Among this sample was isolated 140 strains suspected of Aeromonas and (36.4%) 51 strains were confirmed like Aeromonas spp., wich will be identifiyed until species for fenotipic and genotipic tests. In parallel to the insulation work was done a survey of alternative culture media, where we assessed the efficiency of culture media with different compositions in the characterization of colonies of multiple species of Aeromonas. While the antimicrobial susceptibility profile of Aeromonas strains were resistant 100% penicillin (PEN) and cephalothin (CFL) and 100% antimicrobial susceptibility Amikacin (AMI) and imipenem (IMP) among the nine antimicrobials tested and generally A. caviae was the species that showed resistance to antimicrobials. Among the 27 strains tested (45.8%) were multidrug-resistant by making a multiple resistence antibiotic (MRA) > 2. Five factors of different virulence and all strains were tested had at least one of the five virulence factors tested so that different combinations of virulence factors were found in isolates from the same sample. The results of genetic analysis using primers Aero16S-F and Aero16S-F showed that all isolates identified by conventional microbiological tests were confirmed by PCR and 65.6% of the species identified by conventional biochemical tests were confirmed by Box-PCR method. / Este trabalho teve como objetivo principal identificar atravÃs de abordagem polifÃsica (tÃcnicas fenotÃpicas e genotÃpicas) de cepas de Aeromonas spp. isoladas de Ãgua de superfÃcie e sedimento de trÃs pontos distintos do Rio CocÃ, Fortaleza, Cearà seguindo o gradiente de salinidade da Ãgua. Foram realizadas coletas no perÃodo de outubro de 2011 a marÃo de 2012, sendo cada coleta composta por seis amostras. As cepas de Aeromonas foram isoladas de acordo com a tÃcnica descrita na literatura em Ãgar Gelatina Fosfato Sal (Ãgar GSP acrescido de 20 &#956;g/mL de ampicilina). Os parÃmetros fÃsico-quÃmicos (salinidade, pH e temperatura) da Ãgua estavam em uma faixa que favorecia nÃo sà a sobrevivÃncia, mas tambÃm a multiplicaÃÃo dos micro-organismos em dois pontos de coleta. Foram isoladas 140 cepas suspeitas de Aeromonas, 36 (25,7%) foram identificadas atà espÃcie sendo elas: A. caviae, A. media, A. eucrenophila e A. veronii, sendo A. caviae a espÃcie que apareceu com maior frequÃncia. Em paralelo ao trabalho de isolamento foi feita uma pesquisa com dois meios de cultivo alternativos, Ãgar UNISC e Ãgar Amido Ampicilina (AAA), nos quais foi avaliada a eficiÃncia dos meios de cultura com diferentes composiÃÃes, na caracterizaÃÃo de colÃnias de vÃrias espÃcies de Aeromonas. O perfil de suscetibilidade antimicrobiana das cepas de Aeromonas apresentou resistÃncia de 100% a Penicilina (PEN) e Cefalotina (CFL) e 100% de sensibilidade aos antimicrobianos Amicacina (AMI) e Imipenem (IMP) entre os nove antimicrobianos testados e de forma geral A. caviae (38,9%) foi a espÃcie que mais apresentou resistÃncia. Dentre as cepas avaliadas 27 (45,8%) foram multirresistentes por apresentarem um MAR > 2. Foram testados cinco fatores de virulÃncia diferentes e todas as cepas apresentaram pelo menos um desses fatores, de forma que diferentes combinaÃÃes desses fatores foram observadas em isolados provenientes da mesma amostra. Os resultados da anÃlise genÃtica utilizando os iniciadores Aero16S-F e Aero16S-R mostraram que todos os isolados identificados atravÃs de testes clÃssicos de microbiologia foram confirmados por meio da tÃcnica de PCR e 65,6% das espÃcies identificadas por testes bioquÃmicos convencionais foram confirmadas pelo mÃtodo de Box-PCR.

Resumo: O bacurizeiro (Platonia insignis Mart.) é uma frutífera nativa da Amazônia que apresenta alogamia acentuada e auto-incompatibilidade esporofítica. O objetivo desse trabalho foi estudar a germinação de pólens de bacuri por admitir-se tratar de uma técnica semelhante ao comportamento germinativo "in vivo". A viabilidade "in vitro" tem sido utilizada para representar a capacidade potencial do pólen para completar o processo de fertilização. Os ensaios foram conduzidos em condições de laboratório em um delineamento inteiramente casualizado, analisados em esquema fatorial 2 x 3 x 4, onde: 2- formas de propagação (pé-franco e enxertada) X 3-estágios da antese (préantese, antese e pós-antese) X 4-concentrações de sacarose (0%; 7,5%; 10 e 20%), com 10 repetições. Para plantas de bacuri estudadas, há diferença de germinação do pólen, sendo que para polinização manual, o pólen deve ser coletado na antese, enquanto que o melhor meio para germinação é com 7,5 g 100 mL-1 de sacarose / Abstract: The "bacurizeiro" (Platonia insignis Mart.) is an Amazon fruitful native tree that has marked allogamy and self-sporophytic incompatibility. The aim of this work was to study the pollen germination of "bacuri" to admit it is a similar technique to the germination behavior "in vivo". The viability "in vitro" has been used to represent the potential ability of pollen to complete the fertilization process. The tests were conducted under laboratory conditions in a completely randomized design, tested in a 2 x 3 x 4 factorial, where: 2- plant forms (grafted and freestanding) X 3- pollen stage (pre-anthesis , anthesis and post anthesis) X-4 sucrose concentrations (0%, 7.5%, 10 and 20%), with 10 repetitions. For each bacurizeiro plant studied, there is difference in pollen germination, and for hand pollination, pollen should be collected at anthesis, while the best medium for germination is with 7,5 g 100 mL-1 of sucrose / Orientador: Antonio Baldo Geraldo Martins / Coorientador: José Carlos Barbosa / Banca: José Antônio Alberto da Silva / Banca: Fabíola Vitti Môro / Banca: Simone Rodrigues da Silva / Banca: Luiz Evaldo de Moura Pádua / Doutor

No / The development of therapeutics to treat cancer is conceptually more difficult than for nonlife-threatening diseases for several reasons, including its complex pathophysiological nature, the molecular individuality of each tumor, and the robustness and predictability of preclinical models toward determining efficacy and safety. A major limitation to development of a “blockbuster” therapeutic strategy is the infinite combination of cellular and molecular perturbations and associated heterogeneity of causative genetic factors driving disease progression. Although challenging, the diversity of drug targets, coupled with the lethality of the disease, has encouraged studies of a vast array of approaches and opportunities for disease treatment over the years.

Unlike thin tissues (e.g., skin) which has been successfully grown, growing thick tissues (e.g., bone and muscle) still exhibit certain limitations due to lack of nutrients (e.g., glucose and oxygen) feeding on cells in extracapillary space (ECS) region, or also known as scaffold in an in vitro static culture. The transport of glucose and oxygen into the cells is depended solely on diffusion process which results in a condition where the cells are deprived of adequate glucose and oxygen supply. This condition is termed as hypoxia and leads to premature cell death. Hollow fibre membrane bioreactors (HFMBs) which operate under perfusive cell culture conditions, have been attempted to reduce the diffusion limitation problem. However, direct sampling of glucose and oxygen is almost impossible; hence noninvasive methods (e.g., mathematical models) have been developed in the past. These models have defined that the glucose diffusivity in cell culture medium (CCM) is similar to the diffusivity in water; thus, they do not represent precisely the nutrient transport processes occurring inside the HFMB. In this research, we define glucose as our nutrient specie due to its limited published information with regard to its diffusivity values, especially one that corresponds to cell/tissue engineering (TE) experiments. A series of well-defined diffusion experiments are carried out with TE materials of varying pore size and shapes imbibed in water and CCM, namely, cellulose nitrate (CN) membrane, polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane, poly(L-lactide) (PLLA) scaffold, poly(caprolactone) (PCL) scaffold and collagen scaffold. A diffusion cell is constructed to study the diffusion of glucose across these materials. The glucose diffusion across cell-free membranes and scaffolds is investigated first where pore size distribution, porosity and tortuosity are determined and correlated to the effective diffusivity. As expected, the effective diffusivity increases correspondingly with the pore size of the materials. We also observe that the effective glucose diffusivity through the pores of these materials in CCM is smaller than in water. Next, we seeded human osteoblast cells (HOSTE85) on the scaffolds for a culture period of up to 3 weeks. Similar to the first series of the diffusion experiments, we have attempted to determine the effective glucose diffusivity through the pores of the scaffolds where cells have grown at 37°C. The results show that cell growth changes the morphological structure of the scaffolds, reducing the effective pore space which leads to reduced effective diffusivity. In addition, the self-diffusion of glucose in CCM and water has also been determined using a diaphragm cell method (DCM). The results have shown that the glucose diffusivity in CCM has significantly reduced in comparison to the water diffusivity which is due to the larger dynamic viscosity of CCM. The presence of other components and difference in fluid properties of CCM may also contribute to the decrease. We finally employ our experimentally deduced effective diffusivity and self-diffusivity values into a mathematical model based on the Krogh cylinder assumption. The glucose concentration is predicted to be the lowest near the bioreactor outlet, or in the scaffold region, hence this region becomes a location of interest. The governing transport equations are non-dimensionalised and solved numerically. The results shown offer an insight into pointing out the important parameters that should be considered when one wishes to develop and optimise the HFMB design.

L'utilisation grandissante des cellules souches mésenchymateuses (CSM) en ingénierie tissulaire augmente la nécessité d'améliorer leur expansion. Ces travaux ont concerné l'étude d'un procédé performant d'expansion de CSM porcines en mode agité. Tout d'abord, un milieu de culture a été adapté aux CSM porcines multipotentes. Puis, différents modes d'expansion en conditions agitées ont été évalués avec les cellules fixées sur des microporteurs. La culture sur le microporteur Cytodex 1 a permis d'atteindre une vitesse spécifique de croissance de 0,54 j-1, supérieure à celle observée en flacon statique (0,31 j-1), avec les mêmes conditions de culture. En parallèle, une méthode de comptage innovante a été proposée pour le dénombrement automatique des cellules cultivées sur Cytodex 1, sans passer par une étape de trypsination. Enfin, les conditions opératoires du procédé d'expansion ont été étudiées. En comparaison d'une culture de CSM sur Cytodex 1 sans agitation, une agrégation des cellules et une baisse apparente de la concentration cellulaire ont été observées à 25 et 75 rpm. Par ailleurs, l'ajout de microporteurs au cours d'une culture de 300 h, réalisée dans un système de culture agité à 25 rpm et dans un volume de 200 mL, a permis de prolonger la prolifération cellulaire en évitant l'agrégation tout en maintenant la multipotence des CSM. Une concentration cellulaire de 3 x 105 cellules/mL a été obtenue, au lieu de 1,2 x 105 cellules/mL en flacons statiques avec les mêmes conditions de culture. Un procédé performant d'expansion de CSM porcines en conditions agitées a ainsi pu être proposé / The extensive use of mesenchymal stem cells (MSC) in tissue engineering increases the necessity to improve the expansion performance. This work aimed at studying an efficient expansion process for porcine MSC in agitated mode. First, a culture medium was adapted to the multipotent porcine MSC. Then, various expansion modes and agitation conditions were evaluated with the cells fixed on microcarriers. Cultures on the Cytodex 1 microcarrier enabled to reach a specific growth rate of 0.54 d-1, which was higher than the one observed in static T-flasks (0.31 d-1), with the same culture conditions. In parallel, an innovative counting method was proposed for the automatic enumeration of cells cultivated on Cytodex 1, without passing by a trypsination step. Finally, the operating conditions of the expansion process were studied. Compared to a culture of MSC on non-agitated Cytodex 1 microcarriers, cell aggregation occurred and an apparent decrease in the cell concentration was observed at an agitation rate of 25 and 75 rpm. Moreover, the addition of microcarriers during a 300 h culture, performed in an agitated culture at 25 rpm and in a volume of 200 mL enabled to prolong the cell proliferation without any aggregation, while maintaining the multipotency of the cells. A cell concentration of 3 x 105 cells/mL was obtained, instead of the 1.2 x 105 cells/mL in static flasks with the same culture conditions. An efficient expansion process for porcine MSC under agitated conditions has therefore been proposed

No presente trabalho, cultivou-se o microrganismo Escherichia coli RR1, contendo o vetor que carrega o gene estrutural para a síntese do hormônio de crescimento humano (hGH) (baseado no promotor pL e pR do fago l sob controle do repressor termosensível cI857) em processos descontínuo e descontínuo-alimentado realizados em biorreatores com capacidade útil de 2 e 4 L. Tal cepa é auxotrófica com relação aos aminoácidos l-leucina e l-prolina e à tiamina (vitamina B1). Nos cultivos descontínuos com concentrações menores de extrato de levedura e bactotriptona em relação ao meio denominado basal, a concentração celular foi baixa, atingindo 2,4 g.L-1, com fator de conversão glicose à células de 0,25 g.g-1. Em cultivos descontínuos com aumento (em relação ao meio basal) da concentração de extrato de levedura e de bactotriptona e com adição de l-prolina, a concentração celular alcançou valores da ordem de 5,9 g.L-1 e fator de conversão glicose à células de 0,48 g.g-1, simultaneamente à maior formação de acetato (2,5 g.L-1), este último prejudicial ao processo. Contudo, este resultado de crescimento celular não se repetiu devido a mudança do lote de células utilizado entre o primeiro e o segundo conjunto de ensaios. Os cultivos descontínuos-alimentados foram realizados com diferentes formas de alimentação bem como diferentes composições de solução de alimentação. Uma alimentação contínua com velocidade exponencial e composição semelhante à do meio, pareceu ser a mais favorável, levando à concentração celular final de 9,2 g.L-1 e fator de conversão glicose a células, na fase descontínua-alimentada, de 0,36 g.g-1. Os ensaios com indução térmica não foram eficientes provavelmente devido à problemas na detecção das concentração de glicose existente no instante inicial da ativação da síntese do hGH. Esta glicose presente pode ter prejudicado a formação do hGH por conseqüência do processo fermentativo causado pelo aumento da temperatura e pela presença de elevada concentração de nutrientes complexos. O meio de cultivo utilizado possivelmente não supriu as necessidades metabólicas da célula para a síntese do hormônio de crescimento humano e em nenhum dos cultivos com indução térmica houve a produção de hGH. / In the present work, the host Escherichia coli RR1, having the vector with the structural gene for human growth hormone (hGH) synthesis, based on pL or pR promoters from bacteriophage l under the control of the thermosensitive repressor cI857, was cultivated in batch and fed-batch cultures in bioreactors with working volumes of 2 and 4 L. This host has amino acids (l-leucine and l-proline) and thiamine (Vitamin B1) auxotrophy. Batch cultures under low yeast extract and bacto-tryptone concentrations (relative to the basal medium) resulted in a low biomass yield (2.4 g.L-1) and cell yield on glucose (0.25 g.g-1). Increasing these concentrations and adding l-proline to the medium led to higher biomass formation (5.9 g.L-1), cell yield on glucose (0.48 g.g-1) and acetate high levels (2.5 g.L-1), which were harmful to the process. However, these results of cellular growth were not reproducible due to different cell stocks applied. The fed-batch cultures were performed under different feeding strategies and different nutrients concentrations of the feeding solution. A continuous exponential feeding rate with growth medium-like composition seemed to be the most favorable, reaching final cellular concentration of 9.2 g.L-1 and yield on glucose on fed-batch mode of 0.36 g.g-1. The heat-shock runs were not efficient probably due to problems in detection of glucose concentration existing on initial instant of hGH activation synthesis. Glucose interferes with the hGH synthesis because the fermentation caused by temperature shift and presence of high complex nutrients concentration. The culture medium used, probably was not able to supply cell metabolic needs for the human growth hormone synthesis and in no other temperature-induced experiment the hGH production was observed.