A cisticercose suína é uma doença causada pela larva de Taenia solium, Linneaus, 1758, denominada Cysticercus cellulosae (cisticerco). A doença está amplamente distribuída pelo mundo, sendo mais freqüente nos países onde o consumo de carne suína é elevado e as condições sanitárias são deficientes, como em grande parte dos países em desenvolvimento. A cisticercose causa prejuízo em criações de suínos, pois, a carne infectada torna-se imprópria para o consumo humano. Para o diagnóstico da cisticercose suína são realizados o exame da língua in vivo e o exame post-mortem (necropsia). O exame da língua é pouco sensível apesar da elevada especificidade, uma vez que a localização do parasita pode não ser disseminada. A análise post-mortem é baseada em sítios de predileção dos cisticercos. Por isso, são analisados em rotina de inspeção sanitária, o coração, a língua, o diafragma e músculos mastigadores (masseteres e pterigóide). No entanto, infecções brandas, com reduzido número de cisticercos instalados nos tecidos, podem não ser diagnosticadas na necrópsia, evidenciando uma sensibilidade baixa. Recentemente, tem sido sugerida a implementação de testes imunológicos, dentre eles o ELISA (Enzyme Linked Immunossorbent Assay), que tem por princípio a pesquisa de anticorpos no soro. Assim, o presente trabalho objetiva a avaliação de antígenos no método de ELISA para o imunodiagnóstico da cisticercose suína. Dessa forma, 7 suínos, desmamados, provenientes de criação tecnificada foram infectados com 200.000 ovos de T. solium. Foram coletadas amostras sangüíneas antes da infecção e a cada 7 dias até o 140º dia pós-infecção e os soros obtidos foram congelados a 20ºC negativos. Os soros foram avaliados através do ELISA utilizando antígeno total (T-Tso) e de escólex (Es-Tso) de C. cellulosae e de líquido vesicular de C. longicollis (LV-Tcra). O exame da língua in vivo apresentou sensibilidade baixa pois, não foi detectada a presença de cisticercos nos 7 animais durante o período da infecção. Mediante o exame post-mortem, constatou-se a cisticercose em todos os animais. Por outro lado, a quantidade de cisticercos por animal foi baixa tendo em vista a alta dose de ovos inoculados. Foram detectados ao todo 238 cisticercos, sendo todos viáveis. Quanto à distribuição, foi observado que a musculatura do membro anterior e do membro posterior apresentaram as maiores quantidades de parasitas com 24,38% (58) e 28,57% (68) respectivamente. Apenas 18,67% (43) dos cisticercos foram encontrados em tecidos indicados para inspeção da carne. Quanto ao ELISA, obteve-se a padronização do teste para os 3 antígenos, que detectou aumento significativo de anticorpos à partir do 21º dia p.i., para os 7 suínos. O maior índice de reatividade foi encontrado para o antígeno LV-Tcra. O teste com antígenos Es-Tso e LV-Tcra apresentaram os melhores resultados, detectando níveis de anticorpos acima do cut-off nos soros dos animais. Na análise dos soros dos animais suspeitos através do ELISA com Es-Tso, 64,3% (9) das amostras apresentaram absorbâncias acima do cut-off, sendo os animais considerados prováveis portadores de cisticercose. Ficou demonstrada a boa sensibilidade do ELISA com os 3 antígenos, sobretudo quando utilizados o Es-Tso, detectando a doença em animais com infecção leve. Ademais, o ELISA com o antígeno Es-Tso apresenta-se como uma importante ferramenta na pesquisa epidemiológica da cisticercose. / Swine cysticercosis is a disease caused by the Taenia solium’s metacestodes, called Cysticercys cellulosae (Cisticerci). This disease is largely spread around the world and is more frequent in countries where swine meat consumption is high and sanitary conditions are poor, as in developing countries. Cysticercosis is harmful to the raising of the swine because infected meat is not proper for human consumption. To diagnose swine cysticercosis one clinically examines the tonge in vivo and also examines post-mortem (necropsy). The tonge exam has little sensitivity in spite of its high specificity as the parasite location cannot be determined. Post-mortem analysis is based on metacestodes’s favorite sites. Therefore, the heart, the tonge, the diaphragm, and the chewing muscles (masseteres and pterigoidis) in the tissue are analyzed in the regular sanitary inspection. However, mild infections, with a minor number of metacestodes in the tissues may not be diagnosed in the necropsy, showing that evidently there is an low sensitivity. Recently there has been suggestions of immunological tests, including the ELISA (Enzyme Linked Immunossorbent Assay) which has as a principle the antibodies research in swine’s serum. Thus, this study’s aim is to evaluate the antigens in the ELISA method for immunodiagnosis of the swine cysticercosis. The experiment used 7 weaned swine for technological rising were orally infected with 200.000 T. solium eggs. At every 7 days, up to the 140º day of infection, 10 mL of blood was collected and the serum was frozen at minus 20ºC. The serum were analyzed through the ELISA and the analyses used 3 antigens: total (T-Tso) and scolex (Es-Tso) of C. cellulosae and C. longicollis’s vesicular fluid (LV-Tcra). The in vivo tongue exam showed low sensitivity because at no time during in the infection the presence of metacestodes could be detected. Through the post-mortem exam one could notice the cysticercosis in all animals. However, the amount of metacestodes per animal was very low, considering the high number of inoculated eggs. As a total 238 metacestodes were detected and all were viable. As for distribution, one observed that the muscles of front and hindquarters showed more parasites with 24,38 % (58) and 28,57% (68), respectively. Only 18,67% (43) of metacestodes were found in tissue appointed for meat inspection. As for the ELISA, the standardization was obtained for 3 antigens, that detected a significant rise of antibodies from the 21th day of infection. It was also observed that the test using the 3 antigens could detected antibodies anti-Cysticercus from the 21th day post-infection. The highest rate of reactivity was found for the antigen LV-Tcra. The immunoenzimatic tests with the Es-Tso and LV-Tcra showed best results, detecting antibodies level over the cut-off in the animals. In the analysis of the suspected animals with ELISA using Es-Tso, 64,3% (9) samples showed high absorbance to the cut-off and the animals considered probably cysticercosis carriers. In conclusion, it was proved that there is good sensitivity in the ELISA, particularly when the antigen Es-Tso is used, detecting cysticercosis in animals with mild infection. Moreover, the ELISA with the Es-Tso show as an important tool for the cysticercosis epidemiological research.

A utilização de antígenos de Taenia crassiceps vem se mostrando como via alternativa no imunodiagnóstico da neurocisticercose (NC), sendo as frações de 18 e 14 kDa consideradas específicas. No presente trabalho, foram sintetizados seis peptídeos, com base nas seqüências de aminoácidos das proteínas de 10, 14 e 18 kDa de T. crassiceps e homólogas às seqüências de aminoácidos de T. solium. Os peptídeos foram divididos em \"a\" e \"b\", denominados como, P1a, P2a, P3a e P4a e P1b, P3b e P4b, sendo, as seqüências de aminoácidos dos peptídeos \"a\", uma seqüência interna dos peptídeos \"b\". Em estudo da antigenicidade dos peptídeos conduzido por teste ELISA, P1a e P4a isolados ou utilizados como múltiplos peptídeos antigênicos (MAP) contendo dois, três ou quatro peptídeos, apresentaram reatividade com soro hiperimune anti-líquido vesicular de T. crassiceps, enquanto que MAPs contendo apenas P2a e P3a não foram antigênicos. Anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps (n=3) e anti-T. solium (n=19), reconheceram, em ordem decrescente, P1b (72,7%), P1a (45,5%) e P3a e P2a (9,1%), enquanto que P3b, P4a e P4b não apresentaram reatividade com os AcMos utilizados. Com soros humanos de pacientes com NC (NC) e de indivíduos supostamente saudáveis (ISS), P1b e P1a foram considerados potencialmente antigênicos, isolados ou em MAPs com três ou quatro peptídeos. A avaliação do teste ELISA com peptídeo sintético isolado ou MAP, respectivamente, P1b e MAP-a (P1a+P3a+P4a), foi realizada baseando-se em três diferentes cut off, a, b e TG-ROC. De acordo com os cut off utilizados, ELISA com P1b apresentou índices de positividade entre 59,0-79,5% com amostras de soros NC (n=39); 1,3-11,8% com ISS (n=76); 3,4-10,2% com amostras de soros de pacientes com hidatidose provindos do Rio Grande do Sul (H-R) (n=59); 0,0-50,0% com amostras de soros de pacientes com hidatidose provindos do Peru (H-P) (n=8) e 0,0-9,1% com amostras de soros de pacientes com outras parasitoses (OP) (n=33). ELISA com MAP-a apresentou índices de positividade entre 57,7-92,3% com NC (n=26); 1,4-9,6% com ISS (n=73); 0,0-13,3% com H-R (n=15) e 12,5-37,5% com H-P (n=8). Na tentativa de aumentar a positividade do teste ELISA com peptídeos sintéticos, antígeno de 18 e14 kDa de T. crassiceps foi adicionado, porém, não houve maior antigenicidade ao complexo antigênico. Os peptídeos sintéticos utilizados mostraram-se promissores para o diagnóstico sorológico da NC, porém, não foram representativos dos epítopos imunodominantes presentes em cisticercos de T. solium. Outras seqüências de aminoácidos necessitam ser ensaiadas, a fim de obter um complexo antigênico sintético equivalente ao antígeno nativo, porém, o alto custo da síntese dos peptídeos ainda é uma barreira que limita a investigação de novos MAPs. / Taenia crassiceps antigens have been showed like one alternative rote to the immunodiagnosis of neurocysticercosis (NC), where 18- and 14-kDa fractions have been considered specific. In this study, six peptides were synthesized based on 10, 14 and 18 kDa fractions of amino acids sequence of proteins of the T.crassiceps and homologous to T. solium. Peptides were divided in \"a\" and \"b\", denominated P1a, P2a, P3a and P4a and P1b, P3b and P4b, being that amino acids sequences of the \"a\" peptides are one internal sequence of the \"b\" peptides. In antigenic study of the peptides conducted by ELISA, isolated P1a and P4a peptides or used like multiple antigenic peptides (MAP) with two, three or four peptides, cross-reacted with anti-vesicular fluid of the T. crassiceps hyperimmune serum, while that, MAPs with only P2a and P3a did not showed antigenicity. Monoclonal antibodies (Mabs) anti-T. crassiceps (n=3) and anti-T.solium (n=19) Mabs recognized in decreasing order, P1b (72,7%), P1a (45,5%) and P3a and P2a (9,1%), while, P3b, P4a and P4b did not showed reactivity with Mabs used. In human serum samples of the patients with neurocysticercosis (NC) and serum healthy individuals (HI), where P1b and P1a peptides were analyzed isolated or in MAPs with three or four peptides, both of them showed antigenic potential. The evaluation of the ELISA tests with synthetic peptides isolated or in MAPs, P1b and MAP-a (P1a+P3a+P4a), respectively, was analyzed in three differents cut off, a, b and TG-Roc. Based on its, ELISA assayed with P1b showed 59,0-79,5% positivity when NC serum samples where tested (n=39); 1,3-11,8% with HI serum samples (n=76); 3,4-10,2% with human serum samples of the patients with hydatidosis from Rio Grande do Sul (H-R) (n=59); 0,0-50,0% with human serum samples of the patients with hydatidosis from Peru (H-P) (n=8) and 0,0-9,1% with human serum samples of the patients with others parasitoses (OP) (n=33). By the way, ELISA assayed with MAP-a showed 57,7-92,3% positivity with NC (n=26); 1,4-9,6% with HI (n=73); 0,0-13,3% with H-R (n=15) and 12,5-37,5% with H-P (n=8). On the attempt of increase the positivity of the ELISA test using synthetic peptides, 18- and 14-kDa fractions of the T. crassiceps was added, but they did not promoted more antigenicity. Synthetic peptides used showed promising results on neurocysticercosis serumdiagnosis, but they were no representatives of dominants epitopes present in T. solium cysticercus. Others amino acids sequences need be used to have a synthetic antigenic complex similar to native antigens, however, the high cost of the peptide synthesis still is a problem that limit the study of the news MAPs.

Orientador: Germano Francisco Biondi / Resumo: A cisticercose bovina é resultante da ingestão de ovos de T. saginata proveniente de pastagens e águas contaminadas fornecidas aos animais. É causa de preocupações na área de saúde pública por ocasionar a teníase em humanos, mas causa sérios prejuízos na indústria agropecuária e aos pecuaristas, devido às condenações ou tratamentos de frio ou salga pelas quais as carcaças consideradas positivas são submetidas. O método de diagnóstico rotineiramente utilizado para a cisticercose bovina tem sido a inspeção post-mortem. Muitos pesquisadores têm desenvolvido métodos de diagnóstico antemortem, com especificidade e sensibilidade variadas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a aplicação da amplificação de DNA circulante de T. saginata, através da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), como ferramenta diagnóstica para cisticercose bovina. Para a realização da pesquisa foram utilizadas amostras de sangue de bovinos abatidos em frigoríficos sob S.I.F., segundo apresentarem ou não cisticercose. Inicialmente avaliaram-se cinco pares de oligonucleotídeos iniciadores através da determinação do limiar de detecção da PCR de cada um deles. Objetivou-se ainda estabelecer qual a fração do sangue experimentalmente contaminado resultaria em amplificação de fragmentos de DNA através da PCR, para posteriormente avaliar a aplicabilidade da PCR em amostras de sangue de bovinos naturalmente infectados com T. saginata. O melhor limiar de detecção foi observado com o uso do par de oligonucleotídeos iniciadores SCAR K, nas frações de sangue denominadas pellet e sobrenadante. As amostras de sangue de animais positivos para cisticercose na inspeção de rotina e submetidos a PCR não resultaram em amplificação do fragmento de DNA desejado, sugerindo que a baixa carga parasitária possa ter influenciado os resultados. / Abstract: Bovine cysticercosis is caused by the ingestion of T. saginata eggs from contaminated pastures and water provided to animals. It is a public health problem by causing the taeniasis in human beings, but it also causes serious damages in the agro-cattle industry and to the cattle raisers by de condemnation or treatment by coldness or salting of carcass detected as positive. Routinely bovine cysticercosis diagnosis has been the post-mortem inspection. Several researchers have developed ante-mortem diagnosis methods, with variable specificity and sensitivity. The present study aimed at evaluating the amplification of circulating DNA of T. saginata, by the Polymerase Chain Reaction (PCR), as a diagnostic tool to bovine cysticercosis. Blood samples from bovines slaughtered under Federal Meat Inspection abattoirs were taken according to the presence or absence of cyst forms. Initially, we evaluated five primers and established which blood fraction experimentally contaminated resulted in DNA fragment amplification by PCR. The best detection limit was observed with the use of the SCAR K primers, in the blood fractions denominated "pellet" and "supernatant". Blood samples of naturally infected animals considered positive in the routine inspection didn't result in the desired DNA fragment amplification by PCR. / Mestre

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-03T18:19:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vânia Beatriz Lopes Moura - 2010.pdf: 929596 bytes, checksum: 432fcdfb3a382e721d28d0a4c6c4642d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-03T20:38:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vânia Beatriz Lopes Moura - 2010.pdf: 929596 bytes, checksum: 432fcdfb3a382e721d28d0a4c6c4642d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-03T20:38:21Z (GMT). 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The iNOS uses the same substrate to synthesize nitric oxide (NO), which is a highly microbicide compound responsible for the cysticerci control. To observe if there is an association between macrophages expressing arginase and an increase of the susceptibility to T. crassiceps, BALB/c mice were infected IP with 10 cysticerci and followed up by 84 days. It was measured the number and stages of the cysticerci, profile of systemic cytokines, profile of the macrophages in inflamed tissue and collagen deposition over the peritoneum. Besides, infected mice were treated with arginase inhibitor or L-arginine and followed up by 56 days. The parasitic load was observed, which increased significantly after the 30th day. At the end of experimental period number of cysticerci was 1022 (±230). The serum interferon- (IFN-) of infected animals was higher than controls at the 28th day after infection and IL-4 at the 42th day. Macrophages were the major cells observed at the infected site, and the polimorphonuclear cells (PMN) picked at the 14th day after the infection, returning to the normal values at the 42th day. Cells carrying the marker CD301, present on AAMø, and high arginase activity increased in the early phase after infection. The presence of collagen in the peritoneum of infected animals decreased until 14th day after the infection, however, in the latest phases the collagen increases and become superior to the control. The treatment with the arginase inhibitor or L-arginine did not alter the profile of the infection; however the arginase inhibitor inhibited the deposition of collagen in the peritoneum. These results suggest that the enzyme arginase does not interfere with the control of the cysticerci during experimental infection with T. crassiceps cysticerci, but it is important for the formation of fibrosis in cysticercosis. / A infecção murina por cisticercos de Taenia crassiceps vem sendo utilizada como um modelo experimental para estudo da cisticercose humana e animal. Nesta infecção encontram-se parasitos presentes em um infiltrado inflamatório rico em macrófagos. Estes macrófagos podem ser divididos em alternativamente ativados (AAMØ), que expressam uma grande quantidade da enzima arginase ou classicamente ativados (CMØ,) que expressam uma grande quantidade da enzima óxido nítrico sintase induzida (iNOS). A arginase utiliza o substrato L-arginina para produção de ornitina, favorecendo a proliferação celular e a síntese de colágeno. A iNOS utiliza o mesmo substrato para síntese de óxido nítrico (NO) que é um gás microbicida responsável pelo controle dos cisticercos. Para observar se há uma associação entre a presença de macrófagos expressando arginase com aumento da susceptibilidade à infecção por T. crassiceps, camundongos BALB/c foram infectados IP com 10 cisticercos e acompanhados diariamente por 84 dias. Foi avaliado o número dos cisticercos, o perfil sistêmico de citocinas, o perfil dos macrófagos do infiltrado e a deposição de colágeno no peritônio ao longo da infecção. Adicionalmente, os camundongos infectados foram tratados com inibidor de arginase ou com L-arginina. A carga parasitária aumentou significativamente após o 30º dia, atingindo 1022 (±230) cisticercos no final do período experimental. O interferon γ (IFNγ) sérico dos animais infectados foi superior ao dos controles no 28o dia após a infecção e a IL-4 no 42o dia. Os macrófagos foram predominantes durante todo período experimental e os polimorfonucleares (PMN) apresentaram um pico no 14o dia após a infecção, retornando aos valores normais no 42o dia. Células portando o marcador CD301 presente em AAMø e com alta atividade da enzima arginase aumentaram nas duas primeiras semanas após a infecção mantendo-se alta por todo período experimental. A presença de colágeno no peritônio dos animais infectados diminuiu até 14o dia após a infecção, porém, nas fases mais tardias o colágeno aumentou tornando-se superior ao dos controles. O tratamento com o inibidor da arginase ou L-arginina não alterou o perfil da infecção, porém, o inibidor de arginase inibiu a deposição de colágeno no peritônio. Estes resultados sugerem que a enzima arginase não interfere no controle dos cisticercos durante a infecção experimental por cisticercos de T. crassiceps, mas ela é importante na formação de fibrose característica da cisticercose.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2838276 bytes, checksum: ab260e36167467b459860c7472987dd6 (MD5) Previous issue date: 2012-05-29 / The bovine cysticercosis is a zoonotic disease that causes damage both in terms of health and in terms of economy. This research was developed in order to better understand the anatomical and microscopic characteristics related to the implantation of cysticerci and the immune evolution of the disease, and evaluate the performance of the immunoassay ELISA in the diagnosis of nine experimentally infected animals by oral administration of Taenia saginata eggs. Field work with the animals included the monthly collection of blood every 30 days, being that from 120 days post-infection an animal was slaugthered every 30 days to perform the anatomic-pathological examination and proceed with the collection of cysticerci. The samples from naturally infected animals were obtained by collecting in commercial slaughterhouse. Regarding muscular location of cysticercus in Group 1, the sites routinely inspected with predominance of occurrence were the heart (37.7%), head muscles (17.1%) and the tongue (2.3%). In relation to the assessed commercial cuts, 8.2% of cysticerci were found in the sparerib, 6.6% in the shoulder, 6.2% in the tenderloin and 5.8 in the rump. Other not-routinely inspected tissues that presented cysticerci were the diaphragm, the liver and the esophagus with 2.7%, 12.0% and 1.2% of the total cysticerci. Not viable cysticercus was the majority in head muscles (77.3%), followed by 76.3% in heart muscle and 71.0% in the liver and tongue (50%). Concerning viability, liver presented 87.5% of the not viable cysticerci, followed by the tongue 66.7%, and the heart with 63.2%, but the highest frequency of viable cysticerci was found in the head muscles (68.3%). Of the nine animals studied, five had the kinetics of antibody production against the cysticerci in a similar way when measured the production of antibodies of the IgM and IgG classes, once the peak of antibody production occurred in the period of 0-30 days post-infection followed by a natural decline and maintained detectable until the end of the study. However, the other two groups, each containing two animals, showed the kinetics of antibody production different from most animals, being that one group had a delayed response to the presence of cysticerci and the other group showed no immune response against antigens secreted by cysticerci. For the production of IgG1, it was possible to detect increased levels of antibodies from 30 days post-infection, having the production peak at 270 days, and IgG2 at 60 days. Regarding the cellular response observed against the cysticerci, it was possible to observe that in the case of viable cysticerci, inflammatory cells were present in the major part; and in the case of unviable cysticerci, the presence of repairing tissue cells, being also correlated the amount of calcareous corpuscles with the parasite's stage of death. With regard to the performance of the ELISA test against experimentally and naturally infected animals using a cut-off 1 and 2 added with 2 standard-deviation (SD), it was of 12% and 24.4%, respectively; and when using the cut-off 1 and 2 added with 3 SD the test sensitivity was at 1.99% and 14.4%, respectively. As for the samples from experimentally infected animals using the cut point 1 and 2 added with 2 SD the sensitivity was at 55.9% and 92.5%; and adding 3 SD the values found were 31.2% and 86%, respectively; the specificity of the test in all situations tested was at 100%. The combination of these results should be considered for diagnosis of bovine cysticercosis through the ELISA test, suggesting its use in combination with the anatomic-pathological test routinely performed in slaughterhouses. / A cisticercose bovina é uma doença de caráter zoonótico que acarreta prejuízos tanto de ordem sanitária quanto de ordem econômica. Essa pesquisa foi desenvolvida com o objetivo de conhecer melhor as características macroscópicas e microscópicas relacionadas à implantação dos cisticercos e a evolução imunológica da doença, bem como avaliar o desempenho do imunoensaio ELISA no diagnóstico de bovinos com infecção natural e experimental, através da administração oral de ovos de Taenia saginata. Os trabalhos de campo com os nove animais infectados experimentalmente envolveram coleta mensal de sangue nos intervalos de 30 dias, sendo que a partir de 120 dias pós-infecção um animal era abatido a cada 30 dias para realizar o exame anátomo-patológico e proceder com a coleta de cisticercos. As amostras dos animais naturalmente infectados foram obtidas através da coleta em matadouro-frigorífico comercial. Com relação à localização muscular dos cisticercos no grupo 1 (animais experimentalmente infectados), os sítios inspecionados rotineiramente predominantes de ocorrência foram o coração (37,7%), músculos mastigatórios (17,1%) e língua (2,3%). Em relação aos cortes comerciais estudados, foram encontrados os valores de 8,2% de cisticercos no acém, 6,6% na paleta, 6,2% no contra-filé e 5,8% na alcatra. Os outros tecidos não inspecionados rotineiramente que apresentaram cisticercos foram o diafragma, fígado e o esôfago, com 2,7%, 12,0% e 1,2% dos cisticercos totais. Houve predominância de cisticercos inviáveis nos músculos mastigatórios (77,3%), seguidos de 76,3% na musculatura do coração e 71,0% do fígado e na língua (50%). Os cisticercos viáveis predominaram na alcatra (80,0%), diafragma (71,4%) e esôfago (66,7%). Nos sítios de predileção dos animais naturalmente infectados, foram encontrados 61,78% dos cisticercos totais no coração, seguido dos músculos mastigatórios (38,21%) e fígado (10,19%). Em relação à viabilidade, o fígado apresentou 87,5% de cisticercos inviáveis, seguidos da língua com 66,7%, coração 63,2%, entretanto nos tecidos mastigatórios foi encontrada a maior frequência de cisticercos viáveis (68,3%). Dos nove animais estudados, cinco apresentaram a cinética de produção de anticorpos contra os cisticercos de forma semelhante quando mensurados a produção de anticorpos da classe IgM e IgG, constituindo-se o grupo 1. O pico de produção de anticorpos do grupo 1 ocorreu no período de 0-30 dias pós-infecção seguido de um declínio natural, mantendo-se detectável até o final do estudo, no entanto os outros dois grupos contendo dois animais cada apresentaram a cinética de produção de anticorpos diferente do grupo 1, sendo que, o grupo 2 não apresentou resposta imunológica contra os antígenos secretados pelos cisticercos e o grupo 3 apresentou resposta tardia à presença dos cisticercos. Em relação à produção média de IgG1 para todos os grupos, foi possível detectar elevação dos níveis de anticorpos a partir de 30 dias pós-infecção, tendo-se o pico de produção aos 270 dias e IgG2 aos 60 dias. Já em relação à resposta celular hospedeiro-parasito, foi possível observar que no caso de cisticercos viáveis estavam presentes em sua maioria células inflamatórias, e no caso de cisticercos inviáveis a presença de células reparadoras de tecido, sendo também correlacionada a quantidade de corpúsculos calcáreos com o estádio de morte do parasito. Com relação ao desempenho do teste ELISA frente a animais infectados naturalmente e experimentalmente utilizando o ponto de corte 1 (calculado a partir de amostras de animais negativos para a cisticercose durante inspeção de rotina em matadouro-frigorífico) e ponto de corte 2 (amostras de animais negativos para a cisticercose criados em isolamento) adicionados de 2 desvios-padrão (SD), a sensibilidade do teste foi de 12% e 24,4%. Ao utilizar o ponto de corte 1 e 2 adicionados de 3 SD a sensibilidade ficou em 1,99% e 14,4%, respectivamente. Já para as amostras de animais experimentalmente infectados utilizando o ponto de corte 1 e 2 adicionados de 2 SD a sensibilidade ficou em 55,9% e 92,5% e, adicionando 3 SD foram encontrados os valores de 31,2% e 86%. A especificidade do teste em todas as situações testadas ficou em 100%. A combinação desses resultados deve ser valorizada no diagnóstico da cisticercose bovina por meio do teste ELISA sugerindo sua utilização em associação com o teste anátomo-patológico realizado rotineiramente em matadouros-frigoríficos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1196324 bytes, checksum: 0760aa5309df096b43864d5ebdabc40a (MD5) Previous issue date: 2013-03-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bovine cysticercosis, caused by the larval form of Taenia saginata, is a current problem in Brazilian beef cattle, determining economic losses to the meat industry due to the carcass condemnation, also represents risks to public health. The main control measure of this zoonosis is applied after post-mortem examination at meat inspection; however, this method fails in detecting cysticerci in cases of low infections, reinforcing the need for additional research to develop alternatives for diagnosis, such as serological tests. The objectives of this study were: to evaluate different laboratory protocols of ELISA for the diagnosis of bovine cysticercosis using Taenia crassiceps (Tcra) larvae antigens to assess their performance against different categories of control sera from slaughtered cattle and, through immunoblotting, to identify peptides with significant diagnostic potential for bovine cysticercosis. Serum samples of cattle experimentally infected with eggs of T. saginata and negative for cysticercosis were also used in the evaluation of different laboratory protocols of ELISA, which involved six antigens of Tcra: total (T), total sonicated (Ts), total dialysate (Td), membrane (M), vesicular fluid (VF) and sonicated vesicular fluid (sVF). From previously defined protocols, we evaluated the performance of ELISA in a final step with the antigens T, Ts and M against sera of positive bovines (experimental and natural) and negative for cysticercosis, and of bovine with other pathologies. The immunoblotting assays were conducted with the T antigen, using four groups of control sera and then reactive peptides were identified and their frequencies and performance ratios were set. With previous evaluation of the protocols we have defined antigen concentrations of 10 μg/ml for VF and sVF antigens and 40 μg/ml for T, Ts, Td and M antigens; the established conjugate dilutions were 1:1.250 ( T, Ts and M) and 1:2,500 (Td, VF and sVF); the best serum dilution tested was 1:100 and the best blocking substance was 5% skimmed milk powder; and the antigens that best differed positive and negative animals were M and T antigens, followed by Ts and Td. The sensitivity rates obtained by ELISA were, respectively, with 2 and 3 standard deviations, 85 and 81.25% for T antigen, 82.5 and 78.75% for Ts antigen, and 80 and 80% for M antigen; specificity rates, with 2 and 3 standard deviations, were, respectively: 47.5 and 58.75% for T antigen, 65 and 73.75% for Ts antigen, and 58.75 and 62.5% for M antigen. In the immunoblotting, the most important diagnostical peptides, in descending order of accuracy were: 6-8 kDa (90.8%), 129-143 kDa (74.2%), 99-105 kDa (71.7%) and 14-19 kDa (71.1%). The suitable combination of various tested parameters contributed to increase the reliability of the ELISA test, once it facilitates the distinction between positive and negative animals. These protocols provided high sensitivity rates, which enables the practical applicability of the test, because it complements the post-mortem examination that shows high specificity, but low sensitivity in detecting carcasses with discrete infections. The results obtained by immunoblotting showed that the T antigen has peptides with a high diagnostic potential; hence, another serological test is useful in the diagnosis of bovine cysticercosis. / A cisticercose bovina, causada pela forma larvar da Taenia saginata, constitui um problema atual na pecuária de corte brasileira, determinando prejuízos econômicos para a indústria da carne em decorrência da condenação de carcaças parasitadas, além de representar riscos à saúde pública. A principal medida de controle desta zoonose é aplicada após o exame post mortem realizado na rotina de inspeção de carnes, no entanto, este método apresenta falhas na detecção de cisticercos em casos de infecções discretas, reforçando a necessidade de pesquisas adicionais para o desenvolvimento de alternativas para o diagnóstico, como os testes sorológicos. Os objetivos deste estudo foram avaliar diferentes protocolos laboratoriais do ELISA para o diagnóstico da cisticercose bovina utilizando antígenos de larva de Taenia crassiceps (Tcra), avaliar o seu desempenho frente a diferentes categorias de soros-controle de bovinos abatidos e, através do immunoblot, identificar os peptídeos com importante potencial diagnóstico para a cisticercose bovina. Amostras de soro de bovinos experimentalmente infectados com ovos de T. saginata e negativos para a cisticercose também foram utilizadas na avaliação de diferentes protocolos laboratoriais do ELISA, que envolveu seis antígenos de Tcra: total (T), total sonicado (Ts), total dialisado (Td), membrana (M), líquido vesicular (LV) e líquido vesicular sonicado (LVs). A partir de protocolos definidos previamente, foi avaliado o desempenho do ELISA numa etapa final com os antígenos T, Ts e M frente soros de bovinos positivos (experimentais e naturais) e negativos para a cisticercose e de bovinos com outras patologias. Os ensaios de immunoblot foram realizados, com o antígeno T, utilizando os quatro grupos de soros-controle e, em seguida, os peptídeos reativos foram identificados e estabelecidas as suas frequências e taxas de desempenho. Com a avaliação prévia dos protocolos ficaram definidas as concentrações de antígeno de 10 μg/ml para os antígenos LV e LVs e de 40 μg/ml para os antígenos T, Ts, Td e M; as diluições de conjugado estabelecidas foram 1:1.250 (T, Ts e M) e 1:2.500 (Td, LV e LVs); a melhor diluição de soro testada foi 1:100 e a melhor substância bloqueadora, o leite em pó desnatado a 5%; e os antígenos que melhor diferenciaram animais positivos e negativos foram o M e o T, seguidos pelos antígenos Ts e Td. As taxas de sensibilidade obtidas pelo teste ELISA foram respectivamente, com 2 e 3 desvios-padrão, 85 e 81,25% para o antígeno T, 82,5 e 78,75% para o antígeno Ts e 80 e 80% para o antígeno M; as taxas de especificidade, com 2 e 3 desvios-padrão, foram respectivamente: 47,5 e 58,75% para o antígeno T, 65 e 73,75% para o antígeno Ts e 58,75 e 62,5% para o antígeno M. Já no immunoblot os peptídeos de maior importância diagnóstica, em ordem decrescente de acurácia foram: 6-8 kDa (90,8%), 129-143 kDa (74,2%), 99-105 kDa (71,7%) e 14-19 kDa (71,1%). A combinação adequada dos diversos parâmetros testados contribuiu para ampliar a confiabilidade do teste ELISA, uma vez que facilita a diferenciação entre animais positivos e negativos. Estes protocolos proporcionaram altas taxas de sensibilidade o que facilita a aplicabilidade prática do teste, pois complementa o exame post mortem que apresenta alta especificidade, porém baixa sensibilidade em detectar carcaças com infecções discretas. Os resultados obtidos pelo immunoblot mostraram que o antígeno T possui peptídeos com alto potencial diagnóstico, sendo, portanto, outro teste sorológico útil no diagnóstico da cisticercose bovina.

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Resumo: O complexo teníase-cisticercose é causado pelos cestódeos Taenia saginata e Taenia solium, que têm o homem como hospedeiro definitivo e obrigatório e os bovinos e os suínos, respectivamente, como hospedeiros intermediários. A presença da forma adulta destes cestódeos no intestino delgado causa pequenos danos ao homem, enquanto a presença das formas larvárias nos tecidos e órgãos causam lesões nos hospedeiros intermediários, resultando na cisticercose. O homem pode também ser hospedeiro ocasional da T. solium e desenvolver a cisticercose, quando da ingestão acidental de seus ovos. Uma das medidas de controle desta zoonose é a inspeção sanitária de bovinos e suínos ao abate, evitando assim que os parasitas completem seu ciclo biológico. Assim, o complexo teníase-cisticercose, além de ser um grave problema de saúde pública, é também um problema econômico na agropecuária, visto que as carcaças podem ser condenadas quando da presença de formas larvares ou terem seu valor reduzido. A neurocisticercose é a forma mais grave desta zoonose no homem e seu diagnóstico é realizado por meios imunológicos e/ou por exames de imagens, que permitem a visualização dos das lesões no sistema nervoso central. Já a teníase é diagnosticada por meio da pesquisa de proglotes ou de ovos das tênias nas fezes, os quais são indistinguíveis morfologicamente. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de teníase humana por meio da análise dos resultados de exames coproparasitológicos rotineirame... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The taeniasis-cysticercosis complex is caused by the cestodes Taenia saginata and Taenia solium, which have man as their definitive and mandatory host and cattle and swine, respectively, as intermediate hosts. The presence of the adult form of these cestodes in the small intestine causes minor damage to humans, while the presence of the larval forms in tissues/organs causes damage to the intermediate hosts, resulting in cysticercosis. Man can also be an occasional host of T. solium and develop cysticercosis when ingesting its eggs. One of the measures to control this zoonosis is sanitary inspection of cattle and pigs at slaughter in order to prevent the parasites from completing their biological cycle. Thus, in addition of being a serious public health problem the taeniasiscysticercosis complex is also an economic problem once the carcasses with the larval forms can be condemned or have a reduced value. Neurocysticercosis is the most severe form of this zoonosis in man and its diagnosis is done by immunological method and/or by imaging exams, which allow the visualization of the lesions in the central nervous system. Taeniasis is diagnosed by searching for proglottids and/or tapeworm eggs in feces, which are morphologically indistinguishable. The objective of the present study was to evaluate the occurrence of human taeniasis by analyzing the results of the coproparasitological exams routinely performed in a private clinical analysis laboratory at a city in São Paulo state, B... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Larvas de cisticercos de Taenia crassiceps foram deixadas em repouso em TRIS 9mM pH 7,2 com 1mM EDTA até 180 minutos, os sobrenadantes coletados e processados nos 30, 60, 120 e 180 minutos, dando origem aos antígenos de excreção e secreção (ES 30; ES 60; ES 120 e ES 180). A caracterização do antígeno de excreção e secreção de larvas de Taenia crassiceps foi feito por SDS-PAGE e imunoblot utilizando anticorpos monoclonais (AcMos) anti-T. crassiceps e anti-T. solium e anticorpos humanos. Os resultados mostraram que o rendimento do antígeno ES foi menor nos primeiros 30 minutos (0,4 µg) por larva quando comparado os demais ES (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). O SDS-PAGE confirmou que no ES 30 há menos proteínas. No imunoblot, o ES 180 mostrou que 6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra; anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 e A6) reconheceram apenas as frações 18- e 14-kDa do antígeno ES 180. Os AcMos anti-E-Tso (B8) e anti-LV-Tso (B6) não reconheceram frações do antígeno ES 180. Anticorpos presentes em amostras humanas de pacientes com NC reconheceram as frações protéicas entre 94- a 30-kDa e as de 18- e 14-kDa. Utilizando antígeno ES 180 e amostras de soros de pacientes supostamente saudáveis (GC), foram identificadas proteínas acima de 30-kDa e somente uma amostra reconheceu a de 16- kDa, anômala em relação ao perfil 18- e 14-kDa. As amostras de soro de pacientes com outras parasitoses mostraram reatividade com frações ≥ de 30-kDa do ES 180 e o maior índice de reatividade foi com a proteína 71-KDa. Um total de 77%; 70%; 60% e 70% das amostras de pacientes com toxocaríase, esquistossomose mansônica, hidatidose e Chagas, respectivamente, reconheceram a fração 71-kDa do ES 180. O antígeno ES pode contribuir com futuros estudos abordando a complexa relação parasito hospedeiro na cisticercose e na produção de vacinas para o uso em suínos. / Cysticercus Larvae of Taenia crassiceps were maintained in TRIS 9mM pH 7,2 with 1mM EDTA for 180 minutes; the supernatant was collected and processed at 30; 60; 120 and 180 minutes, originating excretion-secretion antigens (ES 30; ES 60; ES 120 and ES 180). The characterization of the ES antigen was conducted through SDS-PAGE and immunoblot using anti-T. crassiceps and anti-T. solium monoclonal antibodies (AcMos) and human antibodies. The results showed that the production of ES antigen was lower in the first 30 min. (0,4 µg) compared with the others (ES 60: 2,4 µg; ES 120: 2,9 µg; ES 180: 2,5 µg). The SDS-PAGE confirmed that ES 30 presented less protein. By immunoblot,6 AcMos (anti-LV-Tcra; anti-ES-Tcra;anti-LV-Tso: A3; anti-T-Tso: B4, B11 and A6) have recognized only the 18- and 14-kDa fractions of the ES 180. The anti-E-Tso (B8) and the anti-LV-Tso (B6) AcMos did not recognize any fractions. Antibodies from human samples NC recognized the proteins from 94- to 30-kDa and from 18- and 14-kDa. Using serum samples of apparently healthy individuals (GC), the ES 180 antigen showed proteins > 30-kDa and one sample recognized the 16-kDa fraction, anomalous when compared to the 18- and 14-kDa fractions. The serum samples of subjects with other parasitoses showed reactivity ≥ 30-kDa, more frequently with 71-KDa protein. A total of 77%; 70%; 60% and 70% of the samples from subjects presenting toxocariasis, esquistossomose mansonic, hydatidosis and Chagas disease, respectively, recognized the 71-kDa fraction of ES 180. The ES antigen may contribute to further studies on the complex cysticercosis parasite/host relation as well as for the production of vaccines for swine.

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As doenças parasitárias dos animais de produção causam grande impacto produtivo na produção pecuária, e também, devido ao caráter zoonótico de algumas delas, podem oferecer riscos à saúde humana. O serviço de inspeção veterinária se encarrega de realizar os controles necessários para evitar que produtos contaminados cheguem ao consumo humano. A planificação dos diagnósticos realizados na inspeção post-mortem, aliada ao cruzamento com os dados de origem dos animais, é uma importante ferramenta para elencar quais as doenças mais prevalentes e quais os principais fatores epidemiológicos envolvidos nestas doenças, auxiliando na tomada de decisões para efetuar medidas de controle. Para tanto foram realizados dois estudos: Um estudo para investigar a prevalência geral de lesões correspondentes a cisticercose, hidatidose e fasciolose em carcaças de bovinos, suínos, ovinos e bubalinos abatidos em matadouros-frigoríficos de todo o estado do Rio Grande do Sul, Brasil, inspecionados pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE) da Secretaria da Agricultura, Pesca e Agronegócio do Estado do Rio Grande do Sul, no período de Dezembro de 2012 a Maio de 2013. Os suínos abatidos nas condições deste estudo não apresentaram casos de cisticercose, e obtiveram uma prevalência de lesões por doenças parasitárias de 0,007%, demonstrando níveis mínimos de contaminação. Os bovinos apresentaram índices baixos de cisticercose (0,6%), porém os índices de fasciolose (6,5%) e hidatidose (4,6%) demonstram que o estado ainda é endêmico para estas doenças. Nos abates de ovinos obteve-se prevalência alta para hidatidose (15,5%), demonstrando a doença ainda como um risco desta atividade. O conhecimento de tais dados pode servir de base para o planejamento de controle das doenças e também para avaliação da eficácia dos sistemas produtivos em manter os rebanhos livres de doenças. O segundo estudo avaliou a influência das diferentes idades e diferentes sistemas de terminação na prevalência de Hemoncose e/ou a presença de formas adultas de Haemonchus spp em bovinos no momento do abate. O sistema de manejo na recria e terminação alterou significativamente a prevalência de Haemonchus spp. em bovinos abatidos. Novilhos Superprecoces têm 5,91 vezes mais chance de estarem parasitados por Haemonchus spp. no momento do abate do que bovinos abatidos com mais de 36 meses de idade. As contagens de ovos de helmintos por grama de fezes em Novilhos Superprecoces foram significativamente superiores as de bovinos com idade tradicional de abate. Ressalta-se a importância da detecção do parasitismo por inspeção no abate e exame laboratorial das fezes, para servir de norte para a avaliação da eficácia de programas sanitários e detectar possíveis falhas ou riscos de manejo, possíveis causadores de prejuízos nos sistemas pecuários. / In Brazil, livestock production plays an important role in the economy. Parasitic diseases of livestock cause great impact on production, and also due to zoonotic characteristics of some of them, may offer risks to human health. The veterinary inspection service is in charge of the necessary controls to prevent contaminated products from reaching the human consumption. The planning of diagnoses made by post-mortem inspection, together with the linkage with the data of animal origin, is an important tool to determine what the most prevalent diseases and what the main epidemiological factors involved in these diseases, assisting in making decisions to make control measures. Therefore, we conducted two studies: A study to investigate the overall prevalence of lesions corresponding cysticercosis, hydatidosis and fascioliasis in beef, swine, sheep and buffaloes slaughtered in all abattoirs inspected by the State Inspection Service (SIE) of the Secretariat of Agriculture, Fisheries and Agribusiness State of Rio Grande do Sul, in the period December 2012 to May 2013. The pigs slaughtered in the conditions of this study showed no cases of cysticercosis, and obtained a prevalence of injuries parasitic diseases of 0.007%, showing minimum levels of contamination. The cattle have low rates of cysticercosis (0.6%), but the prevalences of fascioliasis (6.5%) and hydatid disease (4.6%) show that the state is still endemic for these diseases. In sheep slaughter gave high prevalence for cystic echinococcosis (15.5%), demonstrating the disease still is a risk of this activity. Knowledge of such data can serve as a basis for disease control planning and also to evaluate the effectiveness of production systems to keep livestock free of diseases. The second study evaluated the influence of different ages and different finishing systems in the prevalence of hemoncosis and or the presence of adult stages of Haemonchus spp in cattle at slaughter. The management system in growing and finishing influences significantly the prevalence of Haemonchus spp. in slaughtered cattle. Super-young steers have 5.91 times more likely to be infected with Haemonchus spp. at slaughter than slaughtered bovine animals over 36 months of age. The helminth egg counts per gram of feces in Super-young steers were significantly higher than those of traditional cattle slaughter age. We emphasize the importance of detection of parasitism by inspection at slaughter and laboratory examination of feces to serve guidance for the evaluation of the effectiveness of health programs and detect possible failures or risks managements, which are possible causes of losses in livestock systems.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 928214 bytes, checksum: f836c005563b3eda57ceef56008490fb (MD5) Previous issue date: 2007-07-17 / The bovine cisticercosis is an illness caused by the larva of Taenia saginata called Cysticercus bovis. Recently the implementation of immunologic tests has been suggested as alternative for the diagnosis of the illness, amongst these tests the Immunoblotting, that basically detect antibodies in the serum. The present work objectives the evaluation of the Immunoblotting performance in the immunodiagnosis of bovine cisticercosis as well as of Taenia saginata and Taenia crassiceps antigens. The Taenia saginata antigens (Tsag) was gotten from the calves through the experimental infection and the Taenia crassiceps (LVcra and Tcra) antigen was gotten through experimental infection in mice balb/c. The antigens had been tested in four groups of Immunoblot control-serum: 28 samples of animals experimentally infected, 32 from naturally infected animals, 28 samples without illnesses and 19 samples with other pathologies. The peptides that had only reacted with the positive serum had been selected and identified as important, observing the localization criteria (molecular weight) as well as its physical appearance, particularly the color intensity. Related to these characteristics, valid for three tested antigens, the bands of 4-6, 14 and 18KDa had been distinguished between the others, showing the highest taxes of performance and a differentiated profile, with bigger area and height, similar to a spot. The 4-6KDa peptides presented the taxes of 66.7, 66.7 and 50% of sensitivity and 97.5, 84.6 and 96.2% of specificity when used the LVcra, Tcra and Tsag antigens, respectively. The 14KDa peptide presented 87.5, 87.5 and 77.8% of sensitivity and 97.5 94.9 and 100% of specificity with the LVcra, Tcra and Tsag antigens, respectively. The 18KDa peptide presented for LVcra, Tcra and Tsag, respectively, 75, 41.7 and 88.9% sensitivity values and 97.5, 89.7 and 92.3% of specificity. Crossed reactions with other illnesses between the three antigenic preparations and the 4-6, 14 and 18KDa peptides had not been observed. The values reached in this experiment indicate that the peptides with molecular weight of 4-6, 14 and 18KDa, can be considered important in the diagnosis of bovine cisticercosis. Low sensitivity values of Immunoblot had been observed when serum of animals with natural infection, generally discrete, had been considered. On the other hand, serum samples of antibodies from the studied bovines demonstrated high taxes of performance in the recognition of the 4-6, 14 and 18 Kda peptides, what characterize the test qualitatively, becoming it useful for the diagnosis of cisticercosis, as well as teste antigens. / A cisticercose bovina é uma doença causada pela larva de Taenia saginata, denominada Cysticercus bovis. Recentemente, tem sido sugerida, como alternativa para o diagnóstico da doença, a implementação de testes imunológicos, dentre eles o Imunoblot, que tem por princípio a detecção de anticorpos no soro. O presente trabalho objetiva a avaliação do desempenho do imunoblot no imunodiagnóstico da cisticercose bovina, bem como, dos antígenos de Taenia saginata e Taenia crassiceps. Os antígenos de Taenia saginata (Tsag) foram obtidos através da infecção experimental dos bezerros e os de Taenia crassiceps (LVcra e Tcra), através da infecção experimental em camundongos balb/c. Os antígenos foram testados no Immunoblotting frente a quatro grupos de soros-controle: 28 amostras de soro de animais experimentalmente infectados, 32 de animais naturalmente infectados, 28 sem doenças e 19 com outras patologias. Foram selecionados os peptídeos que reagiram somente com os soros positivos, os quais foram identificados como importantes, observando os critérios de localização (peso molecular), bem como sua aparência física, particularmente a intensidade de cor. As bandas de 4-6, 14 e 18KDa destacaram-se entre as outras, mostrando as mais altas taxas de desempenho e um perfil diferenciado, com área e altura maiores, semelhantes a uma mancha. Os peptídeos de 4-6KDa apresentaram as taxas de 66,7, 66,7 e 50% de sensibilidade e 97,5, 84,6 e 96,2% de especificidade quando utilizados os antígenos LVcra, Tcra e Tsag, respectivamente. O peptídeo de 14KDa apresentou 87,5, 87,5 e 77,8% de sensibilidade e 97,5 94,9 e 100% de especificidade com os antígenos LVcra , Tcra e Tsag , respectivamente. O peptídeo de 18KDa apresentou para LVcra, Tcra e Tsag, respectivamente, valores de 75, 41,7 e 88,9% de sensibilidade e 97,5, 89,7 e 92,3% de especificidade. Não foram observadas reações cruzadas com outras doenças entre as três preparações antigênicas e os peptídeos de 4-6, 14 e 18KDa. Os valores alcançados neste experimento indicam que os peptídeos com peso molecular de 4-6, 14 e 18KDa, podem ser considerados importantes no diagnóstico da cisticercose bovina. Observaram-se baixos valores de sensibilidade do imunoblot quando se consideraram soros de animais com infecção natural, geralmente discreta. Por outro lado, as altas taxas de desempenho demonstradas no reconhecimento dos peptídeos de 4-6, 14 e 18KDa, pelos anticorpos presentes nas amostras de soros dos bovinos estudados, caracterizam qualitativamente o teste, tornando-o útil no diagnóstico da cisticercose.