INTRODUÇÃO: A leucemia promielocítica aguda (LPA) é um subtipo distinto de leucemia mielóide aguda (LMA), caracterizado pela presença de um acúmulo de promielócitos anormais na medula óssea e/ou sangue periférico, riscos de coagulopatias e por alterações cromossômicas estruturais envolvendo sempre o locus gênico para o receptor alfa do ácido retinóico (RAR). Corresponde morfologicamente aos subtipos M3 e M3variante de LMA, segundo a Classificação Franco- Américo- Britânica (FAB) e ao subtipo de LMA associada à translocação recíproca e balanceada entre os cromossomos 15 e 17[t(15;17)] e variantes, segundo a classificação da Organização Mundial de Saúde. O curso clínico da LPA tem sido modificado, nos últimos anos, de uma leucemia aguda rapidamente fatal para um dos mais curáveis subtipos de LMA. A introdução de agentes terapêuticos que atuam diretamente na lesão molecular, como o ATRA e o Trióxido de Arsênico, teve grande impacto na sobrevida da LPA. A eficácia do tratamento é dependente do rearranjo genético presente nas células leucêmicas, o diagnóstico morfológico é sugestivo da alteração genética, devendo ser rapidamente confirmado por técnicas de citogenética molecular. MÉTODOS: Utilizando a citogenética convencional e molecular (FISH) com sondas de fusão para o rearranjo PML-RAR e de ruptura para o gene RAR, analisou-se 62 pacientes portadores de LPA, diagnosticados por estudo morfológico/imunofetípico no HC-FM/USP entre os anos de 1997 a 2006. RESULTADOS: Dos 62 pacientes analisados, 37 (59,7%) apresentaram a t(15;17)(q22;q21) visível no cariótipo; destes, 26 (42,0%) apresentaram a t(15;17) como anormalidade clonal isolada, 10 (16,1%) apresentaram outras alterações cromossômicas clonais em adição a t(15;17) e um paciente (1,6%) apresentou uma variante complexa da t(15;17). Dezoito pacientes (29%) tiveram a confirmação da presença da t(15;17)-rearranjo PML-RAR através da técnica de FISH-fusão e sete (11,3%) não apresentaram ruptura no RAR. Ausência de sangramento ao diagnóstico (p<0,02) e a presença de morfologia M3v (p<0,01) se associaram à ausência ruptura no RAR. A taxa de sobrevida global (SG) em dois anos, entre os 55 pacientes que apresentaram a t(15;17)-rearranjo- PML-RAR ao diagnóstico citogenético, foi de 49,28%. Duas variáveis prognósticas mostraram estar estatisticamente relacionadas à pior taxa de SG nesse estudo: idade acima de 60 anos e presença de morfologia de M3v. A taxa de Sobrevida Livre de Doença em dois anos nesses pacientes foi de 72,10%.CONCLUSÃO: Cerca de 11% dos pacientes diagnosticados para LPA, através de estudo morfológico/imunofenotípico, não apresentaram diagnóstico citogenético compatível para esta doença. Na ausência de sangramento ao diagnóstico e na presença de morfologia M3v o teste de FISH deve ser priorizado. / INTRODUCTION: Acute promyelocytic leukemia (APL) is a distinct subtype of acute myeloid leukemia (AML), characterized by clonal expansion of myeloid precursors blocked at promyelocytic stage, risks of coagulopathy and presence of chromosomal translocations involving RAR (retinoic acid receptor ) gene. Corresponds to the M3 and M3variant subtypes of AML, according to the French-American-British (FAB) classification and the subtype of AML associated with balanced reciprocal translocation between chromosomes 15 and 17 [t (15; 17)] and variants, according to the World Health Organization classification. The clinical APL course has been changed in late years, from highly fatal to highly curable subtype of AML. The introduction of therapeutic agents that act directly on the molecular lesion, such as ATRA and arsenic trioxide, had a great impact on survival of APL. The efficacy of treatment is dependent on genetic rearrangement present in the leukemia cells, the morphologic diagnosis although predictive of the specific genetic lesion genetic, should be quickly confirmed by molecular techniques. METHODS: We analysed cytogenetics findings in 62 patients diagnosed as promyelocytic leukemia by morphological and immunophenotypic studies at the Hematology Service of Clinical Hospital of Sao Paulo Medical School from 1997 to 2006. For this, we used karyotype and FISH with PML-RARA fusion translocation and RARA break-apart probes. RESULTS: Of the 62 patients studied, 59.7% showed the t(15;17)(q22;q21) visible in the karyotype [42.0% had t(15;17) as the sole clonal abnormality, 16.1% showed other additional abnormalities and 1.6% had a complex variant of t(15;17)], 29% had the confirmation of the rearrangement PML-RAR through the FISH-fusion technique and 11.3% showed no break in RAR. No bleeding at diagnosis (p<0.02) and the presence of M3v morphology (p<0.01) were associated to no RAR rearrangement. The 24months overall survival of 55 patients with t(15;17) confirmed by cytogenetics was 49.28%. Two parameters were associated to worse rate of overall survival in this study: age > 60 years and M3v morphology . The 24 months disease-free survival was 72.10%. CONCLUSION: 11,3% of patients diagnosed as promyelocytic leukemia by morphological and immunophenotypic studies, showed no consistent cytogenetic diagnosis for this disease. In the absence of bleeding at diagnosis and in the presence of the M3v morphology, FISH test should be prioritized.

Estudamos os cariótipos de 50 espécimes (22 machos e 28 fêmeas) de Alouatta clamitans (bugio-ruivo) com técnicas citogenéticas tradicionais e de FISH com as sondas de pintura de todos os cromossomos humanos. Para os machos, foram observados dois números diploides diferentes (2n=45 e 49), com a ausência aparente do cromossomo Y devido à translocação Y-autossomo, e sete fórmulas cromossômicas distintas, com 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 24 cromossomos metacêntricos ou submetacêntricos e 21, 27, 28, 29, 30, 31 ou 32 cromossomos acrocêntricos. Para as fêmeas encontramos uma maior variabilidade no número diploide (2n=46, 48 e 50) e cinco fórmulas cromossômicas distintas, com 20, 22, 23 ou 25 cromossomos metacêntricos ou submetacêntricos e 21, 25, 27, 28 ou 30 cromossomos acrocêntricos. Os cromossomos X eram submetacêntricos, com exceção de duas fêmeas que apresentaram heteromorfismo neste par, com um dos cromossomos submetacêntrico e o outro metacêntrico. O sexo dos espécimes foi confirmado pela análise dos cariótipos. Pares heteromórficos autossomos também foram verificados. Dentre os indivíduos procedentes da Grande São Paulo, foram observadas as mesmas fórmulas cromossômicas em espécimes oriundos de diferentes fragmentos florestais, indicando que a fragmentação ainda não levou ao isolamento genético destas populações. A redução do número diploide orientada no sentido norte-;sul foi corroborada, com espécimes procedentes do estado de São Paulo apresentando 2n=49 ou 50 além de um exemplar do extremo sul deste estado com 2n=48 e os demais indivíduos oriundos de Santa Catarina com 2n=45 ou 46. Com a aplicação das técnicas de bandamento GTG e de FISH, foi possível verificar o sistema sexual múltiplo da espécie, do tipo X1X1X2X2X3X3/X1X2X3Y1Y2. Esta é a primeira descrição citogenética molecular com a hibridação de todas as sondas de cromossomos humanos em exemplares desta espécie com 2n=48, 49 e 50. Alguns cromossomos que apresentaram diferentes morfologias entre os espécimes analisados e foram responsáveis pelas diferentes fórmulas cromossômicas observadas, apresentaram regiões que não foram hibridadas por quaisquer sondas humanas. A partir da técnica de FISH foi possível determinar que o exemplar fêmea com 2n=48 é resultante do acasalamento de indivíduos portadores de diferentes cariótipos, com um dos genitores com o número diploide típico de espécimes procedentes da região sul (2n=45 ou 46) e o outro típico de espécimes procedentes da região sudeste do Brasil (2n= 49 ou 50). Este padrão levaria à formação de dois trivalentes durante a divisão meiótica, com implicações causadas para a formação dos gametas que poderiam reduzir ou impedir a fertilidade dos indivíduos portadores deste cariótipo, constituindo um mecanismo de isolamento pós&minus;zigótico e indicando que as populações do sudeste e sul do Brasil já estão isoladas a ponto de constituírem espécies diferentes. Também analisamos com citogenética tradicional e com a hibridação de todas as sondas de cromossomos humanos um exemplar que foi apreendido pelo IBAMA e entregue ao DEPAVE-3 e que apresentou características morfológicas divergentes das encontradas para Alouatta clamitans. Os dados nos levaram a concluir que este indivíduo é um representante de Alouatta ululata, sendo esta a primeira descrição cariotípica desta espécie, restrita geograficamente ao norte do estado do Maranhão, Piauí e Ceará. Sendo assim, a citogenética se mostrou uma importante ferramenta para a identificação da espécie e da correta origem geográfica dos indivíduos, além de ter contribuído para evitar a introdução na fauna do município de São Paulo de um exemplar não endêmico desta região. Contribuímos também para a reintrodução de outros indivíduos que fizeram parte do Projeto &ldquo;Manejo e Conservação do Bugio, Alouatta clamitans (Primates, Atelidae) na Região Metropolitana de São Paulo: aprimorando o programa de reintrodução&rdquo;, em parceria com o DEPAVE-3. / We studied the karyotypes of 50 specimens (22 males and 28 females) of Alouatta clamitans (brown howler monkey) with traditional and FISH cytogenetic techniques with painting probes of all human chromosomes. For the males were observed two different diploid number (2n=45 and 49), with the apparent absence of Y chromosome due to translocation Y-autosome and seven distinct chromosomal formulas, with 17, 18, 19, 20, 21, 22 or 24 biarmed chromosomes and 21, 27, 28, 29, 30, 31 or 32 acrocentric chromosomes. For females we found greater variability in the diploid number (2n = 46, 48 and 50) and five distinct chromosomal formulas, 20, 22, 23 or 25 biarmed chromosomes and 21, 25, 27, 28 or 30 acrocentric chromosomes. The X chromosomes were submetacentric, except for two females who had heteromorphic pairs, with one of submetacentric chromosomes and the other metacentric. Autosomes heteromorphic pairs were also observed. Among the coming individuals in the Grande São Paulo, the same chromosomal formulas in specimens from different forest fragments were observed, indicating that fragmentation has not yet led to genetic isolation these populations. The reductions of diploid number oriented in north&minus;south direction was observed, with coming state specimens from São Paulo presented 2n=49 or 50 as well as an extreme Southern copy of this state with 2n=48 and other individuals from Santa Catarina with 2n=45 or 46. We verified the multiple sex chromosome system X1X1X2X2X3X3/X1X2X3Y1Y2. This is the first description of hybridization with all human chromosomes painting probes in specimens with 2n=48, 49 and 50. It was also determined that the female specimen with 2n=48 is the result of the mating of individuals with different karyotypes, with one parent with the typical diploid number of specimens coming from the South (2n=45 or 46) and other typical specimens coming from the Southeast of Brazil (2n=49 or 50). This standard would lead to the formation of two trivalent during meiotic division, with implications due to the formation of gametes that could reduce or prevent the fertility of individuals of this karyotype, being a post&minus;zygotic isolation mechanism and indicating that the southeastern and southern Brazil populations are already isolated enough to constitute different species. We also analyze a specimen that was seized by IBAMA and delivered to DEPAVE-3 and presented different morphological characteristics found to Alouatta clamitans, the species occurring in the supposed geographic region origin of this specimen (Ibiúna/SP). This individual was classified as Alouatta ululata, geographically restricted to the northern state of Maranhão, Piauí and Ceará. Thus, karyological studies proved an important tool for species identification and the correct geographic origin of individuals. We also contributed to reintroducing individuals who were part of the project &ldquo;Manejo e Conservação do bugio Alouatta clamitans (Primates, Atelidae) na Região Metropolitana de São Paulo: aprimorando o programa de reintrodução&rdquo; in partnership with the DEPAVE&minus;3.

Os transtornos do espectro autista (TEA) são um grupo de doenças neuropsiquiátricas caracterizadas por um prejuízo na capacidade de comunicação e de interação social e por padrões comportamentais estereotipados. Os TEA são geneticamente heterogêneos o que dificulta a identificação das alterações genéticas que estão contribuindo para estes transtornos. No presente estudo, selecionamos como uma primeira abordagem o estudo de translocações cromossômicas, buscando encontrar genes candidatos para posteriores estudos funcionais. No primeiro caso, uma translocação de novo balanceada envolvendo os cromossomos 2q11 e Xq24, não identificamos nenhum candidato funcional rompido pelos pontos de quebra. Detectamos ainda a presença de uma isodissomia materna do cromossomo 5 nesta paciente. Este resultado sugere que, possivelmente, tanto a translocação cromossômica quanto a isodissomia devem estar contribuindo para a etiologia do TEA nesta paciente, caracterizando este como um caso de efeito poligênico. Já o estudo da translocação de novo balanceada (3,11)(p21,q22) revelou que o gene TRPC6, um canal de cálcio envolvido no desenvolvimento de dendritos e sinapses excitatórias, encontrava-se rompido no cromossomo 11 deste paciente. As análises dos neurônios e células progenitoras neurais deste paciente obtidas através da técnica de reprogramação celular e o estudo global de expressão gênica sugerem fortemente que o rompimento do gene TRPC6 é o fator etiológico do TEA neste caso. Por fim, nós também realizamos um estudo de expressão gênica global de pacientes autistas idiopáticos e verificamos que os genes diferencialmente expressos nestes pacientes estão principalmente envolvidos na regulação da dinâmica do citoesqueleto, indicando que este pode ser o processo biológico comumente afetado nos pacientes autistas. Nosso trabalho mostra que os estudos citogenéticos são importantes para a identificação de genes candidatos para os TEA e reforça a hipótese de que estes transtornos são causados por diferentes variantes genéticas mas que levam ao comprometimento de um processo biológico comum. Acreditamos que o modelo de reprogramação celular contribuirá para o entendimento da implicação de tais processos na etiologia dos TEA. / Autism spectrum disorders (ASD) are a group of neurodevelopmental diseases characterized by impairments in social and communicative skills and repetitive behaviors. The investigation of ASD causes is hampered by the genetic heterogeneity of these neurodevelopmental diseases. In the present study, we mapped the breakpoints associated to chromosomal translocations found in two autistic patients as a first screening approach, trying to identify single candidate genes that could be further investigated by functional analysis. In the first case, a de novo balanced translocation involving the chromosomes 2q11 and Xq24, we did not find any functionally known relevant gene disrupted by the breakpoints but, surprisingly, SNP-array data showed that the patient also presents a maternally inherited isodisomy on chromosome 5. In this case, is possible that ASD is caused by the combination of the molecular results caused by the translocation and the UPD on chromosome 5, which would characterize this case as an example of polygenic effects on ASD etiology. On the other hand, the study of a second case, a boy with a de novo balanced translocation (3;11)(p21;q22), revealed that TRPC6, a calcium channel involved in dendritic spine and excitatory synapse formation, was disrupted by the translocation on chromosome 11. Making use of cellular reprogramming to generate neurons and neuronal progenitor cells from this patient and expression analysis, we demonstrated that TRPC6 disruption can respond for the phenotype seen in this patient. Finally, we also performed a genome-wide expression analysis to investigate idiopathic autistic patients and we verified that ASD DEGs are mainly implicated in cytoskeleton dynamics, suggesting that the regulation of this cellular structure can be one of the common mechanisms of ASD etiology. Our work shows that cytogenetic studies are important for the identification of ASD candidate genes and reinforces the hypothesis that these disorders are caused by different genetic variants that are implicated in a common biological process. We believe that cellular reprogramming will contribute for the understanding of the implication of such biological processes in the etiology of ASD.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hugo Pereira Leite Filho.pdf: 1747513 bytes, checksum: 1d5d4b0eff9478fb7f58eca6fa166bec (MD5) Previous issue date: 2006-08-25 / This study has involved the interaction among knowledge in very distinctive areas, or else: informatics, engineering e genetics, emphasizing the building of a taking decision backing system methodology. The aim of this study has been the development of a tool to help in the diagnosis of chromosomal aberrations, presenting like tutorial model the Turner Syndrome. So to do that there have been used classification techniques based in decision trees, probabilistic networks (Naïve Bayes, TAN e BAN) and neural MLP network (from English, Multi- Layer Perception) and training algorithm by error retro propagation. There has been chosen an algorithm and a tool able to propagate evidence and develop efficient inference techniques able to originate appropriate techniques to combine the expert knowledge with defined data in a databank. We have come to a conclusion about the best solution to work out the shown problem in this study that was the Naïve Bayes model, because this one presented the greatest accuracy. The decision - ID3, TAN e BAN tree models presented solutions to the indicated problem, but those were not as much satisfactory as the Naïve Bayes. However, the neural network did not promote a satisfactory solution. / O estudo envolveu a interação entre áreas de conhecimento bastante distintas, a saber: informática, engenharia e genética, com ênfase na metodologia da construção de um sistema de apoio à tomada de decisão. Este estudo tem como objetivo o desenvolvimento de uma ferramenta para o auxílio no diagnóstico de anomalias cromossômicas, apresentando como modelo tutorial a Síndrome de Turner. Para isso foram utilizadas técnicas de classificação baseadas em árvores de decisão, redes probabilísticas (Naïve Bayes, TAN e BAN) e rede neural MLP (do inglês, Multi- Layer Perceptron) com algoritmo de treinamento por retropropagação de erro. Foi escolhido um algoritmo e uma ferramenta capaz de propagar evidências e desenvolver as técnicas de inferência eficientes capazes de gerar técnicas apropriadas para combinar o conhecimento do especialista com dados definidos em uma base de dados. Chegamos a conclusão que a melhor solução para o domínio do problema apresentado neste estudo foi o modelo Naïve Bayes, pois este modelo apresentou maior acurácia. Os modelos árvore de decisão-ID3, TAN e BAN apresentaram soluções para o domínio do problema sugerido, mas as soluções não foram tão satisfatória quanto o Naïve Bayes. No entanto, a rede neural não promoveu solução satisfatória.

O 153Sm-EDTMP é um radiofármaco utilizado em medicina nuclear com resultados promissores no alívio da dor metastática. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos do 153Sm-EDTMP em nível celular. O presente trabalho foi conduzido com o intuito de avaliar os efeitos citogenéticos do 153Sm-EDTMP em linfócitos periféricos de pacientes com metástases ósseas (com e sem radio e/ou quimioterapias anteriores) pela da técnica de detecção de aberrações cromossômicas, tanto in vivo como in vitro. Para tanto, as amostras sangüíneas foram coletadas antes e 1 hora após a administração endovenosa do 153Sm- EDTMP (atividade média de 42,53 + 5,31 MBq/kg de peso corpóreo), levando-se em consideração o rápido clearance sangüíneo. Os principais tipos de aberrações cromossômicas estruturais encontrados foram os gaps e quebras, fragmentos acêntricos, anéis cêntricos, double minutes e dicêntricos. A análise estatística mostrou que o único grupo de pacientes que apresentou uma diferença significativa na freqüência de aberrações cromossômicas 1 hora após o tratamento foi o que recebeu prévio tratamento radio e quimioterápico antes da terapia com 153Sm-EDTMP. Quanto a averiguação do número modal de cromossomos e da cinética do ciclo celular, a análise estatística mostrou que não houve diferença significativa entre os grupos analisados, sugerindo que o tratamento com 153Sm-EDTMP não influenciou nesses parâmetros. A molécula carreadora, EDTMP, não teve qualquer influência na indução de aberrações cromossômicas. Em relação aos ensaios in vitro, os dados obtidos de linfócitos periféricos submetidos às diferentes concentrações radioativas de 153Sm-EDTMP (0,046 – 1,110 MBq/mL) de doadores sadios e de pacientes sem prévio tratamento se ajustaram melhor ao modelo de regressão linear (Y=A+BX). O dano cromossômico induzido pelo 153Sm-EDTMP observado in vitro foi cerca de 2 vezes maior do que o encontrado in vivo para o grupo de pacientes sem prévio tratamento. Os dados obtidos mostraram que a terapia com 153Sm-EDTMP induziu uma pequena quantidade de danos citogenéticos em linfócitos periféricos de pacientes 1 hora após sua administração, embora, teoricamente, um efeito estocástico a longo prazo não possa ser descartado. / The 153Sm-EDTMP is a radiopharmaceutical used in nuclear medicine with promising results for the relief of metastatic pain. Therefore, there are few knowledge about the effects of 153Sm-EDTMP at cellular level. The present study was conducted with the aim of evaluating the cytogenetic effects of 153Sm-EDTMP in peripheral lymphocytes from patients with bone metastasis (with and without previous radio and/or chemotherapy) by the chromosome aberration technique, either in vivo or in vitro. For that, the blood samples were collected before and one hour after the endovenous administrations of 153Sm-EDTMP (mean activity of 42.53 + 5.31 MBq/kg body weight), taking into account the rapid blood clearance. The principal types of structural chromosome aberrations found gaps and breaks, acentric fragments centric rings, double minutes and dicentrics. The statistical analysis showed that the group submitted to previous radio and chemotherapy before153Sm-EDTMP administration showed significant difference in chromosome aberrations frequency one hour after the treatment. The analysis of the chromosome modal number and the kinetics of cellular cycle showed no statistical difference among the groups, suggesting that the treatment with 153Sm-EDTMP, did not influence these parameters. The carrier molecule, EDTMP, did not influence the induction of chromosome aberration. In relation to the in vitro assays, the obtained data of peripheral lymphocytes of healthy donors and patients with no previous treatment exposed to different radioactive concentration of 153Sm-EDTMP (0.046 – 1.110 MBq/mL) were better adjusted by linear regression model (Y=A+BX). The chromosome damage induced by 153Sm-EDTMP observed in vitro was about 2 fold higher than that found in vivo for the group of patients with no previous treatment. The obtained data showed that the therapy with 153Sm- EDTMP induced a few quantity of cytogenetic damages in peripheral lymphocytes one hour after its administration in patients, although, theoretically, a long term stochastic effect cannot be disregarded.

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-06T17:20:00Z No. of bitstreams: 1 Clausio Antonio Ferreira de Melo.pdf: 1234735 bytes, checksum: b484875f7a75cae77cbddff1d89b47ed (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-06T17:20:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Clausio Antonio Ferreira de Melo.pdf: 1234735 bytes, checksum: b484875f7a75cae77cbddff1d89b47ed (MD5) Previous issue date: 2009-02-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mitotic chromosomes of nine Solanum L. (Solanaceae A.Juss.) species were cytogenetically analyzed using the conventional technique, CMA/DAPI and florescent in situ hybridization. S. atropurpureum Schrank, Solanum dulcamara L., S. gilo L., S. melongena L. and S. nitidibaccatum Bitter., showed a diploid chromosome number 2n=24. While Solanum luteum Mill., S. nigrum L., and S. laciniatum Ait., showed 2n=48, 2n=72, 2n=92, respectively.The species karyotype were symmetric, with morphology metacentric or submetacentric and the interphasic nucleus were semi-reticulated type. The condensation pattern was always from the telomere to the centromere. S. luteum showed heteropcnotic chromosomes pair in metaphases. S. dulcamara, S. atropurpureum and S. luteum, two CMA3 +/DAPI- terminals blocks were observed in one chromosome pair. Solanum nitidibaccatum showed two subdivided satellites with the application of fluorochromes. We also observed in this species in several CMA3 +/DAPI- blocks in telomeres. In Solanum laciniatum and S. nigrum were observed four CMA3 +/DAPI- blocks in two chromosome pair. The application of DNAr 45S probes in the FISH technique was applied only in S .luteum, S. nigrum, and in S. laciniatum, and showed two hybridization sites of rDNA 45S in the fist one, and four sites in the others. We noticed that the localization of species-specific marker was successful, allowing the identification of the analyzed species. The estimation of the genetic diversity in Solanum species was also made using ISSR markers. A total of 27 primers were tested giving 299 polymorphic bands with a average of 97,4%. However the intra-specific average was lower 16,7%. We realized that the application of just one UBC 841 or 846 primer can be used to identify the genotypes of S. melongena safely. The dendrogam gendered by UPGMA method grouped the species analyzed in four groups. / Cromossomos mitóticos de nove espécies do gênero Solanum L. (Solanaceae A. Juss.) foram analisados, pelas técnicas de coloração convencional, CMA3/DAPI e FISH com sonda DNAr 45S. S. atropurpureum Schrank, Solanum dulcamara L., S. gilo L., S. melongena L. e S. nitidibaccatum Bitter., apresentaram 2n=24. Solanum luteum Mill., S. nigrum L., e S. laciniatum Ait., apresentaram 2n=48, 2n=72, 2n=92, respectivamente. O cariótipo das espécies foi bastante simétrico, com morfologia variando de metacêntrico a submetacêntrico e núcleo interfásico semi-reticulado. O padrão de condensação observado foi do tipo proximal. Em S. luteum foi observado um par cromossômico com heteropcnose negativa em células metafásicas. S. dulcamara, S. atropurpureum e S. luteum apresentaram dois blocos CMA3 +/DAPI- terminais em um par cromossômico. Em S. nitidibaccatum dois satélites evidenciados pela técnica de CMA3/DAPI apresentaram-se subdivididos, além dessa característica observaram-se blocos CMA3 +/DAPI- na maioria dos telômeros em S. nitidibaccatum. Em S. laciniatum e S. nigrum foram observados quatro blocos CMA3 +/DAPIem dois pares cromossômicos, um em cada homólogo. A técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) com sonda DNAr 45S revelou dois sítios de DNAr 45S em S. luteum e quatro sítios em S. nigrum e S. laciniatum. Constatou-se que a localização de marcadores espécie-específicos foi satisfatória, permitindo a identificação das espécies citadas. A análise da diversidade genética em espécies do gênero Solanum via marcadores ISSR também foi estimada, em que um total 27 oligonucleotídeos iniciadores foram testados fornecendo 299 bandas polimórficas, representando um polimorfismo total de 97,4%. Entretanto o polimorfismo intra-específico foi de apenas 16,7%. Observou-se que a aplicação de apenas um olii, UBC 841 ou 846 pode ser feita para a identificação dos genótipos de S. melongena com segurança. A análise da diversidade genética via ISSR foi satisfatória, resultando no agrupamento dos táxons em quatro clados principais.

O 153Sm-EDTMP é um radiofármaco utilizado em medicina nuclear com resultados promissores no alívio da dor metastática. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos do 153Sm-EDTMP em nível celular. O presente trabalho foi conduzido com o intuito de avaliar os efeitos citogenéticos do 153Sm-EDTMP em linfócitos periféricos de pacientes com metástases ósseas (com e sem radio e/ou quimioterapias anteriores) pela da técnica de detecção de aberrações cromossômicas, tanto in vivo como in vitro. Para tanto, as amostras sangüíneas foram coletadas antes e 1 hora após a administração endovenosa do 153Sm- EDTMP (atividade média de 42,53 + 5,31 MBq/kg de peso corpóreo), levando-se em consideração o rápido clearance sangüíneo. Os principais tipos de aberrações cromossômicas estruturais encontrados foram os gaps e quebras, fragmentos acêntricos, anéis cêntricos, double minutes e dicêntricos. A análise estatística mostrou que o único grupo de pacientes que apresentou uma diferença significativa na freqüência de aberrações cromossômicas 1 hora após o tratamento foi o que recebeu prévio tratamento radio e quimioterápico antes da terapia com 153Sm-EDTMP. Quanto a averiguação do número modal de cromossomos e da cinética do ciclo celular, a análise estatística mostrou que não houve diferença significativa entre os grupos analisados, sugerindo que o tratamento com 153Sm-EDTMP não influenciou nesses parâmetros. A molécula carreadora, EDTMP, não teve qualquer influência na indução de aberrações cromossômicas. Em relação aos ensaios in vitro, os dados obtidos de linfócitos periféricos submetidos às diferentes concentrações radioativas de 153Sm-EDTMP (0,046 – 1,110 MBq/mL) de doadores sadios e de pacientes sem prévio tratamento se ajustaram melhor ao modelo de regressão linear (Y=A+BX). O dano cromossômico induzido pelo 153Sm-EDTMP observado in vitro foi cerca de 2 vezes maior do que o encontrado in vivo para o grupo de pacientes sem prévio tratamento. Os dados obtidos mostraram que a terapia com 153Sm-EDTMP induziu uma pequena quantidade de danos citogenéticos em linfócitos periféricos de pacientes 1 hora após sua administração, embora, teoricamente, um efeito estocástico a longo prazo não possa ser descartado. / The 153Sm-EDTMP is a radiopharmaceutical used in nuclear medicine with promising results for the relief of metastatic pain. Therefore, there are few knowledge about the effects of 153Sm-EDTMP at cellular level. The present study was conducted with the aim of evaluating the cytogenetic effects of 153Sm-EDTMP in peripheral lymphocytes from patients with bone metastasis (with and without previous radio and/or chemotherapy) by the chromosome aberration technique, either in vivo or in vitro. For that, the blood samples were collected before and one hour after the endovenous administrations of 153Sm-EDTMP (mean activity of 42.53 + 5.31 MBq/kg body weight), taking into account the rapid blood clearance. The principal types of structural chromosome aberrations found gaps and breaks, acentric fragments centric rings, double minutes and dicentrics. The statistical analysis showed that the group submitted to previous radio and chemotherapy before153Sm-EDTMP administration showed significant difference in chromosome aberrations frequency one hour after the treatment. The analysis of the chromosome modal number and the kinetics of cellular cycle showed no statistical difference among the groups, suggesting that the treatment with 153Sm-EDTMP, did not influence these parameters. The carrier molecule, EDTMP, did not influence the induction of chromosome aberration. In relation to the in vitro assays, the obtained data of peripheral lymphocytes of healthy donors and patients with no previous treatment exposed to different radioactive concentration of 153Sm-EDTMP (0.046 – 1.110 MBq/mL) were better adjusted by linear regression model (Y=A+BX). The chromosome damage induced by 153Sm-EDTMP observed in vitro was about 2 fold higher than that found in vivo for the group of patients with no previous treatment. The obtained data showed that the therapy with 153Sm- EDTMP induced a few quantity of cytogenetic damages in peripheral lymphocytes one hour after its administration in patients, although, theoretically, a long term stochastic effect cannot be disregarded.

In dieser Arbeit wurden 48 Patienten nach multimodaler Tumortherapie bei lokal fortgeschrittenem Rektumkarzinom im Rahmen der CAO/ARO/AIO-04-Studie untersucht. Die Patienten wurden neoadjuvant radiochemotherapiert und entweder in Arm A mit 5-FU (1. und 5. RTx-Woche, 1000 mg/m2/Tag) oder in Arm B mit 5-FU und Oxaliplatin (5-FU Tag 1-14 und Tag 22-35, 250 mg/m2/Tag; Oxaliplatin Tag 1,8,22,29, 50 mg/m2/Tag) zusätzlich zur Bestrahlung mit 50,4 Gy (1,8 Gy/Tag; 3DCRT oder IMRT oder VMAT oder VMAT und 3DCRT) behandelt. Bei Nachsorgeuntersuchungen (NS) 1 und 2 Jahre nach Therapieende wurde die Spättoxizität nach LENT/SOMA-Kriterien erfasst. Blutproben wurden akquiriert zur Durchführung des Mikronukleustests (MNT), eines zuverlässigen und einfach durchführbaren Tests zur Darstellung genomischer Schäden in peripheren Blutlymphozyten (PBL). Innerhalb des Kollektivs trat eine interindividuelle Variabilität der Mikrokern(MK)-Ausbeuten auf, die nur zum Teil (Effekt des Geschlechts bei BE 1y) durch Patientenalter und geschlecht, Bestrahlungsart und –volumina und Zeitpunkte der NS erklärt werden konnte. Bezogen auf einzelne Patienten traten im Verlauf der NS konstant hohe bzw. niedrige MK-Ausbeuten auf. Im Vorfeld konnte eine Zunahme der MK-Ausbeuten im Verlauf der RCT gezeigt werden (Helms 2010; Hennies 2010; Wolff et al. 2011b). Die MK-Ausbeuten waren jeweils 1 Jahr und 2 Jahre nach Ende der RCT signifikant (p<0,0001) über dem Level von vor Beginn der RCT. Die MK-Ausbeuten lagen bei beiden NS signifikant (p<0,0001) unter dem Level des Endes der RCT. Für die Gesamt-, Rektum- und Hautspättoxizität bestand keine Korrelation mit dem Ausmaß der MK-Ausbeuten. Die Befunde im Bereich der Blase sollten weiter beobachtet werden, da ein Zusammenhang zwischen dem Grad der Blasenspättoxizität und den MK-Ausbeuten bei der 1. NS bestand. Auf der einen Seite kann vermutet werden, dass genetische Faktoren (Radiosensitivität) interindividuelle Schwankungen der MK-Ausbeuten erklären könnten. Auf der anderen Seite könnten dezidiertere Kenntnisse der Einflussvariablen (z. B. integrale Dosis des Knochenmarks) zur Klärung beitragen. Die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit könnten die Kenntnis der Relation experimentell darstellbarer zytogenetischer Schäden und klinischer Folgen einer multimodalen Tumortherapie bei einzelnen Patienten verbessern.

Le gène MLL (Mixed-Lineage Leukemia), un homologue du gène trithorax de la Drosophile, localisé à la bande chromosomique 11q23, est fréquemment réarrangé dans plusieurs types de leucémies, essentiellement suite à des translocations chromosomiques. Dans les différentes translocations chromosomiques, la partie N-terminale de MLL est fusionnée avec les séquences d’un gène partenaire. Malgré le grand nombre de partenaires de fusion rapportés, peu de fusions MLL ont été bien caractérisées sur le plan moléculaire. De plus, l’impact pronostique de plusieurs fusions moins fréquentes n’est pas bien établi. L’objectif de mon projet est de caractériser plusieurs translocations MLL qui ont été détectées dans 39 spécimens leucémiques collectés par la Banque de cellules leucémiques du Québec (www.bclq.gouv.qc.ca), et d’établir une corrélation entre les résultats de la cytogénétique et différents paramètres biologiques et cliniques des leucémies respectives. L’identification des gènes partenaires de fusion (GPF) dans notre série (30 échantillons étudiés), a révélé la fusion de MLL à un gène partenaire très récurrent dans 26 leucémies: MLLT3(AF9), AFF1(AF4), MLLT4(AF6), MLLT1(ENL), ELL; à un GPF modérément commun dans 1 leucémie : MLLT6(AF17); et à un partenaire rare de MLL dans 3 leucémies : GAS7 et AF15/CASC5 (2 cas). Nous avons poursuivi notre travail avec la caractérisation des points de cassure de deux fusions, soit MLL-ELL associée à un syndrome myéloprolifératif (une association rare), et MLL-GAS7 (une fusion rare de MLL), associée à une leucémie aiguë myéloïde. L’analyse des transcrits de fusion par RT-PCR et séquençage a révélé respectivement la fusion de l’exon 9 de MLL à l’exon 2 de ELL et des exons 7 ou 8 de MLL (deux transcrits) à l’exon 2 de GAS7. Ce travail permettra d’effectuer des études fonctionnelles et des projets de recherche translationnelle en utilisant ces spécimens de leucémies avec différents réarrangements de MLL, bien caractérisés sur le plan clinique et moléculaire. / The MLL (Mixed-Lineage Leukemia) gene, a human homolog of the Drosophila trithorax gene, located at chromosomal band 11q23, is frequently rearranged in several types of leukemia, mostly by chromosomal translocations. In different chromosomal translocations, the N-terminal part of MLL is fused to sequences of the partner gene. Despite the large number of fusion partners that have been reported, several gene fusions remain poorly characterized at the molecular level. Moreover, the prognostic impact of less frequent fusions is not well established. The aim of my project is to characterize different MLL fusions detected in 39 leukemic samples, collected by the Quebec Leukemia Cell Bank (www.bclq.gouv.qc.ca) and to correlate cytogenetics with the clinical and biological features of the corresponding leukemia. Identification of fusion partner genes in our series (30 samples studied), revealed fusion of MLL to one of the most frequent partners in 26 leukemias: MLLT3(AF9), AFF1(AF4), MLLT4(AF6), MLLT1(ENL), ELL; to a moderately common MLL fusion partner in 1 leukemia: MLLT6(AF17); and to a rare partner in 3 leukemias: GAS7 and AF15/CASC5 (2 cases). We have characterized the breakpoints of two fusions, MLL-ELL in a myeloproliferative syndrome (a rare association) and MLL-GAS7 (a rare MLL fusion) associated with acute myeloid leukemia. Fusion transcripts analysis by RT-PCR and sequencing revealed respectively, a fusion of MLL exon 9 to ELL exon 2 and of MLL exon 7 or exon 8 (two transcripts) to GAS7 exon 2. This study is essential to perform functional studies and translational research projects using these well characterized leukemic specimens with different MLL rearrangements.

No description available.