Regensburg, Univ., Diss., 2005.

Techn. Hochsch., Diss., 2003--Aachen.

PANDER/FAM3B (PANcreatic-DERived factor) é uma citocina capaz de induzir apoptose em células-β secretoras de insulina e regular a homeostase da glicose nos tecidos periféricos. Considerando que PANDER/FAM3B também é expresso em tumores de próstata, o presente trabalho avaliou o papel desta citocina na inibição da apoptose in vitro, assim como o crescimento e invasividade tumoral de células de carcinoma de próstata da linhagem DU145 in vivo, usando o modelo de superexpressão estável mediada por lentivirus. Os nossos resultados apontam um aumento da viabilidade e uma diminuição da morte celular em células que superexpressam PANDER quando comparadas ao grupo controle. Este efeito protetor é acompanhado por um aumento da expressão de genes anti-apoptoticos e uma diminuição da atividade proteolítica das caspases. Por outro lado, a superexpressão de PANDER/FAM3B por tumores in vivo se correlaciona com aumento da massa tumoral e o aumento de vasos sanguíneos nos tumores. Em síntese, nossos dados demonstram que, em contraste ao papel observado em células β-pancreáticas, o PANDER/FAM3B inibe morte celular e promove a tumorigenicidade e o crescimento tumoral in vivo, sugerindo ao mesmo tempo, algum envolvimento com angiogênese e metástase em células DU145. / PANDER / FAM3B (pancreatic-derived factor) is a cytokine capable of inducing apoptosis in secreting β-cells and insulin to regulate glucose homeostasis in peripheral tissues. Whereas PANDER / FAM3B is also expressed in prostate tumors, this study evaluated the role of this cytokine in the inhibition of apoptosis in vitro as well as tumor growth and invasiveness of prostate carcinoma DU145 cells lineage in vivo, using the model Stable overexpression mediated by lentivirus. Our results suggest that increased viability and decreased cell death in cells that overexpress PANDER when compared to the control group. This protective effect is accompanied by an increased expression of anti-apoptotic genes and a decrease in proteolytic activity of caspases. Moreover, overexpression of PANDER / FAM3B by tumors in vivo correlates with increased tumor mass and the increase of blood vessels in tumors. In summary, our data demonstrate that in contrast to the role observed in pancreatic cells, PANDER / FAM3B inhibits cell death and promotes tumorigenicity and tumor growth in vivo, suggesting at the same time, some involvement in angiogenesis and metastasis in cell DU145.

FAM3B/PANDER, é uma nova proteína tipo citocina pertencente a família FAM3. Foram reveladas algumas similaridades estruturais entre o FAM3B e outras citocinas associadas ao câncer, como IL-6 e FAM3C suportando a hipótese, de que FAM3B também poderia estar envolvido na progressão tumoral. Considerando que o FAM3B é expresso por tumores de mama, este trabalho dedicou-se a elucidar suas possíveis funções em tumores, a partir de um modelo de superexpressão na linhagem celular tumoral da mama, MDA-MB-231. Ensaios celulares e moleculares sugeriram que o FAM3B é capaz de conferir, proteção à morte celular e de aumentar taxa de migração nas células MDA-MB-231 via, principalmente, Bcl-2 e Bcl-xL. Em concordância, os resultados in vivo demonstraram aumento do volume e peso tumoral, com aumento da expressão de Bcl-2 nos tumores dos animais inoculados com as células MDA-MB-231-FAM3B. Estes resultados indicam que esta proteína, exerce funções nas etapas de invasão e metástase em tumores de mama, o que permite considerar o FAM3B, como um possível candidato a marcador tumoral. / FAM3B/PANDER is a new cytokine-like protein, member of the new FAM3 family. Recent data has been shown similarities between FAM3B/PANDER and others citokines involved in tumor progression, like IL-6 and FAM3C/ILEI, supporting the hypothesis that FAM3B is also involved in tumor progression. In Silico data revealed that FAM3B is expressed by breast tumors and using the overexpression of FAM3B in MDA-MB-231 tumor cell line, the aim was evaluated possible roles of FAM3B in breast tumor progression. The results revealed that FAM3B overexpression inhibits cell death and promotes cell migration in MDA-MB-231 cell line, through, at least in parts, Bcl-2 and Bcl-xL pathways. In agreement, in vivo results shown an increase in volume, weight tumors and increase expression of Bcl-2 in mice with cells overexpressing FAM3B.These results suggest important functions of this protein in cell invasiveness and migration, which allows us to consider, FAM3B as a possible future candidate as a molecular biomarker.

Orientadores: Maria Heloisa Souza Lima Blotta, Fábio Hüssemann Menezes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RomuloTadeuDiasde_D.pdf: 6549447 bytes, checksum: 24fbe2753f341d2925f429da63a49b0f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A presença de células T ativadas em lesões ateroscleróticas confirma a sua participação na progressão da doença. Recentemente, um novo subtipo de linfócitos TCD4+ produtores de IL-17 (TH17) foi descrito e a sua associação a doenças de caráter inflamatório, bem como a sua capacidade de induzir a produção de mediadores frequentemente encontrados em lesões ateroscleróticas (IL-1?? TNF-? ??TGF-? ??CCL2 e MMP) sugerem que possam ter uma participação na aterosclerose. O objetivo do presente estudo foi investigar componentes da resposta TH17 em lesões ateroscleróticas humanas e relacioná-los a outros integrantes da resposta imunológica. Como controle foram utilizados fragmentos da artéria aorta de 3 doadores de órgãos. Para tal, avaliamos fragmentos de placas ateroscleróticas obtidas de 41 pacientes com estenose crítica de carótida, submetidos à endarterectomia. A expressão gênica e protéica de diversos mediadores foi avaliada pelo método de RT-PCR em tempo real e imunoistoquímica, respectivamente. Em alguns experimentos fragmentos de placa aterosclerótica foram submetidos à estimulação in vitro com IL-23, IL-2, LPS, PHA ou ?CD3+?CD28, para posterior análise da expressão gênica (RT-PCR) e protéica (ELISA e citometria de fluxo) de mediadores relacionados à resposta TH17. A detecção do RNAm de IL-17 se restringiu a um pequeno número de amostras e em baixa concentração, enquanto a marcação imunoistoquímica foi negativa em todas as placas analisadas. Entretanto, observamos maior expressão relativa do RNAm de mediadores relacionados à resposta TH17 (IL-23, RorC, CCR4, IL-1?, TNF-? MMP-9), à resposta TH1 e TH2 (IFN-? e GATA-3), à resposta anti-inflamatória (FoxP3, IL-10, EBI3 e IL-27R) e a mediadores com potencial citotóxico (granzima A, perforina e granulisina) em placas de pacientes do que em amostras controle. Células positivas para IL-23, IL-1?, IL-18, ICAM-1, IL-10 e TGF- ? foram encontradas com maior frequência em placas classificadas como instáveis, ricas em macrófagos, células espumosas, cristais de colesterol e focos de necrose. Finalmente, a análise da suspensão celular obtida de fragmento de lesão revelou a presença de 1% de células IL-17+, enquanto a estimulação in vitro resultou em pequena produção de IL-17 apenas após estímulo com anti?CD3+ anti-CD28. Em conjunto, os resultados mostraram a expressão de componentes da resposta TH17, em associação com mediadores da resposta TH1, TH2 e Treg em lesões ateroscleróticas humanas / Abstract: The detection of activated T cells in human atherosclerotic plaques confirms their participation in the disease progression. In this scenario, IFN-? -producing T cells (TH1) are well recognized as having a pro-atherogenic role. Recently, a new subtype of IL-17-producing T helper (TH17) lineage of cells has been described and their association with inflammatory diseases, as well as their capacity to induce mediators frequently found in atherosclerotic lesions (IL-1? ? TNF-? ,?TGF-?,??CCL2 e MMP) suggest that they may have a role in atherosclerosis. The aim of this study was to investigate whether components of the immune response mediated by TH17 cells are present in human atherosclerotic lesions and their association with other immune mediators. For this purpose, 41 patients with critical stenosis of carotid submitted to endarterectomy were evaluated. Aortic fragments from organ donors were used as control. Carotid specimens were analyzed for mRNA and protein expression by real time RT-PCR and immunohistochemistry, respectively. In some experiments fragments of atherosclerotic plaques were incubated in vitro with IL-23, IL-2, LPS, PHA or ?CD3+?CD28 to further evaluate mRNA and protein expression. A low number of samples showed a small expression of IL-17 mRNA, while no staining for IL-17 was detected in any of the analyzed plaques. Up-regulation of IL-17 related genes (IL-23, RorC, CCR4, CCR4, IL-1?, TNF-?, MMP-9), as well as TH1 e TH2 (IFN-? e GATA-3), anti-inflammatory mediators (FoxP3, IL-10, EBI1 e IL-27R) and cytotoxic molecules (granzyme A, perforin e granulysin) mRNA expression were detected in patients plaques compared to control arteries. In addition, unstable plaques showed a high number of IL-23, IL-1?, IL-18, ICAM-1, IL-10 e TGF- ? ??granzyme B and perforin positive cells. Finally, the analysis of plaque derived cell suspensions revealed only 1% of IL-17+ cells, while in vitro stimulation resulted in IL-17 production only in the presence of anti-CD3+anti-CD28. Altogether our results showed components of TH17 response in association with mediators of TH1, TH2 and Treg response in human atherosclerotic lesions. Further studies are ongoing to elucidate the interaction, balance and collaborative potential among these effectors lineages in atherosclerosis control / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

O aumento da adiposidade corpórea pode gerar diversos mediadores inflamatórios com capacidade de influenciar a proliferação e a diferenciação hematopoética e, consequentemente, a complexa regulação da hematopoese. Por isso, propusemo-nos, neste trabalho, avaliar a influência do aumento da adiposidade corpórea sobre a proliferação e a diferenciação de células hematopoéticas, bem como sua capacidade em sintetizar citocinas. Ratos Wistar, machos foram alimentados com uma dieta rica em lipídios durante 14 semanas. Após esse período foram avaliados hemograma, mielograma, perfil lipídico, concentrações séricas de leptina, insulina e adiponectina. Citômetria de fluxo foi utilizada para avaliação da porcentagem de células CD34+/CD133+, bem como o ciclo celular de células medulares. Células medulares foram utilizadas para avaliar a atividade proliferativa in vitro e a capacidade de diferenciação, in vitro, na presença de IL-3, EPO, GM-CSF e G-CSF. Animais, alimentados com dieta hiperlipídica, apresentaram maiores concentrações de leptina circulante, com aumento de gordura corporal, aumento da concetração de proteína C reativa, colesterol total, LDL, VLDL e triacilglicerol. O hemograma apresentou neutrofilia absoluta e a medula óssea apresentou-se hipercelular com aumento do número de granulócitos maduros e da população celular CD133-/CD34+. Os resultados dos testes in vitro demonstraram aumento da capacidade de síntese de IL-3 e aumento de G-CSF, com aumento do potencial proliferativo, também evidenciado pelo maior número de células medulares na fase S/G2/M, bem como o aumento da diferenciação granulocítica. Esses resultados sugerem que a leucocitose e neutrofilia observadas em situações de aumento da adiposidade corpórea são decorrentes de uma complexa modulação do sistema hematopoético. / The body fat increase can generate various inflammatory mediators, that are capable to influence the proliferation and differentiation of hematopoietic cells and consequently modulate the complex regulation of the hematopoiesis. In this study we have proposed to evaluate the effect of increase body fat on the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, as well as its ability to synthesize cytokines. Male Wistar rats were subjected to a high fat diet during a period of 14 weeks. After that period were evaluated hemogram, mielogram, lipid profile and the serum concentrations of leptin, insulin and adiponectin. Flow cytometry was used to evaluate the percentage of CD34+/CD133+, as well as the cell cycle of bone marrow cells. Bone marrow cells were used to perform the proliferation and differentiation capacity in vitro in the presence of IL-3, EPO, GM-CSF and G-CSF. Animals fed high-fat diet had higher concentrations of circulating leptin with increase body fat, and increase of C-reactive protein, total cholesterol, LDL, VLDL and triacylglycerol concentrations. The hemogram showed absolute neutrophilia and a hypercellular bone marrow with increase of granulocytic mature population and CD133-/CD34+ cells. The results in vitro, showed an increase of IL-3 and G-CSF production, and higher proliferative potential with an increase in S/G2/M bone marrow cell cycle phases, as well as an increase of the granulocytic differentiation. The results suggest that leukocytosis and neutrophilia observed in this model of body fat increase are in fact a result of a complex modulation of the hematopoietic system.

Orientador: Lício Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T07:04:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Geloneze_SylkaD'OliveiraRodovalho_D.pdf: 6829918 bytes, checksum: 54ecf818c1e1d1ee6ece76250f538ae2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A obesidade é hoje um dos mais importantes problemas de saúde pública no planeta. A profilaxia e o tratamento desta doença têm se revelado bastante difíceis e, em decorrência das inúmeras doenças associadas que aumentam consideravelmente a morbidade e mortalidade precoces dos pacientes obesos, têm se indicado, em casos selecionados, e com freqüência crescente o tratamento cirúrgico bariátrico. Apesar de, na maioria dos casos de pacientes submetidos à cirurgia bariátrica, os resultados serem bastante favoráveis, existe ainda uma heterogeneidade nos desfechos clínicos e metabólicos obtidos. Assim, a identificação de marcadores que possam ser avaliados antes da cirurgia e que tenham valor preditivo dos desfechos clínicos podem auxiliar na seleção de pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar se a presença do polimorfismo Gly428Ser do gene codificador da proteína PGC1alfa (Co-ativador alfa do receptor gama ativado por proliferador do peroxissomo) desempenha algum papel preditivo dos desfechos da cirurgia bariátrica em pacientes obesos. Foram avaliados 55 pacientes (26 Gly/Gly e 29 Gly/Ser + Ser/Ser), submetidos à gastroplastia com reconstrução em Y de Roux. Os pacientes foram acompanhados por um ano com avaliação de parâmetros clínicos, metabólicos e inflamatórios. A presença do polimorfismo foi associada a uma maior redução da relação cintura/quadril, dos níveis sanguíneos de glicose, proteína C reativa, interleucina-6 e do número de leucócitos. Por fim, a presença do polimorfismo também se relacionou a uma maior redução da espessura da intima-média em carótida. Assim, concluímos que a presença do polimorfismo Gly428Ser de PGC-1alfa èum marcador de melhor desfecho clínico e metabólico da cirurgia bariátrica em pacientes obesos / Abstract: Bariatric surgery is currently employed as an effective approach to treat class III obesity and class II obesity with co-morbidities. Unfortunately, the general anthropometric and metabolic outcomes of the surgery are not homogeneous and defining eligibility criteria that allow for a more precise prediction of the outcomes of this invasive procedure will refine the selection of patients. Here we tested the hypothesis that the Gly482Ser polymorphism of the ppargc1a gene would predict different outcomes following bariatric surgery. Fifty five patients (26 Gly/Gly and 29 Gly/Ser + Ser/Ser) selected for Roux-en-Y gastric bypass according to the NIH Consensus Statement criteria were followed up for one year monitoring anthropometric, metabolic and inflammatory parameters. Patients with the Gly482Ser polymorphism had significantly improved reductions in the waist/hip ratio, fasting blood glucose, C-reactive protein, blood leukocyte count, serum interleukin-6 and intima-media thickness of the carotid artery, as compared with Gly/Gly patients. Thus, the Gly482Ser polymorphism may predict a more favorable metabolic and inflammatory outcome for obese patients submitted to bariatric surgery leading to a reduced atherosclerotic risk / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Sabe-se que a desnutrição modifica a resposta imune específica e inespecífica do organismo frente a agentes infecciosos comprometendo a produção e a função de células linfo-hemopoéticas, estando associada a modificações da resposta imune, resultando em maior suscetibilidade à infecções, porém os mecanismos exatos que comprometem o sistema imune em estados de desnutrição ainda estão para serem esclarecidos. A literatura relata que aproximadamente 60% das infecções que evoluem para sepse são adquiridas no ambiente hospitalar, envolvendo geralmente bactérias Gram negativas e incidindo especialmente em indivíduos com nutrição inadequada. Considerando tais aspectos e em função da complexidade da interação do estado nutricional e resposta do organismo frente a agentes patogênicos, envolvendo controles celulares e moleculares múltiplos ainda pouco conhecidos, propusemo-nos a estudar alguns aspectos da resposta inflamatória em desnutrição. Camundongos Swiss machos adultos, submetidos a desnutrição protéica-energética, após perda de aproximadamente 25% do peso corpóreo, foram inoculados com lipopolissacarideo de Escherichia coli: Hemograma, mielograma, esplenograma e dosagens sistêmicas de citocinas, foram realizadas. Células coletadas da cavidade peritonial de animais que não foram estimulados com LPS foram utilizadas para as determinações de citocinas e NO in vitro, bem como para quantificação dos receptores CD14 e TLR-4/MD-2 e do fator de transcrição NFκB. Células da cavidade peritonial foram usadas, também, para realização dos testes de espraiamento, fagocitose e atividade cida com Candida albicans. Animais desnutridos apresentaram anemia, leucopenia; severa redução na celularidade da medula óssea, do baço e da cavidade peritonial. A capacidade de espraiamento, fagocitose, atividade cida e síntese de citocinas e NO foram significativamente menores nos animais dos grupo desnutrido. O número de receptores de CD14 e TLR-4/MD-2 e do fator de transrição NFκB, também foram significativamente menores nos animais desnutridos. Estes achados sugerem que. animais desnutridos apresentam resposta deficiente frente ao LPS. A menor expressão de receptores CD14 e TLR-4/MD-2 pode ser responsável, em parte pela imunodepressão observada. Os dados nos levam a inferir que o estado nutricional interfere no estado de ativação de macrófagos e na capacidade de resposta dos animais. / Malnutrition modifies the specific and non-specific immune response of the organism to infectious agents, hampering the production and function of Iympho-hemopoietic cells leading to a higher susceptibility of the orgonism to infections. However, the exact mechanisms by which the immune system is undermined has not yet been fully elucidated. Approximately 60% of infections that evolve to bacteremia are nosocomial, and usually involve Gram negative bacteria in individuais that have inadequate nutrition. Taking this into consideration, and in view of the complexity of the interaction between nutritional state and the organism\' s response to infection, which involves poorly known multiple cellular and molecular controls, we proposed to study a few aspects of the inflammatory response in protein malnutrition. Male, outbred Swiss mice were sumbitted to protein malnutrition and after the loss of about 25% of total body weight they were inoculad whith lipopolissacharide of Escherichia coli: Hemogram, mielogram, splenogram and the determination of systemic production of cytokines were used to evaluate. Cells from the peritoneal cavity of animais who were not inoculated were collected for determination of cytokines and NO production in vitro and to evaluate the expression of NFκB and CD14 and TLR-4/MD-2 receptors. Cells from the peritoneal cavity were used too for the spreading, phagocytosis and killing tests with Candida albicans. Malnourished animais presented anemia, leucopenia a severe reduction on bone marrow, spleen and peritoneal cavity cellularity. The spreading, phagocytosis, killing and the production of cytokines and NO was significantly lower in malnourished animais. The number of CD14 and TLR-4/MD-2 receptors and NFκB was found to be significantly lower in malnourished animais. These findings suggest that malnourished mice present a deficient response to LPS. The smaller expression of CD14 and TLR-4/MD-2 receptors may be partly responsible for the immunodeficiency observed. These data lead us to infer that the nutritional state interferes in the activation of macrophages and in the immune response capacity.

Les particules constituent une composante préoccupante de la pollution atmosphérique, notamment la fraction PM2,5 (diamètre aérodynamique inférieur à 2,5 µm) qui est capable de pénétrer dans les poumons jusqu’aux alvéoles pulmonaires. Elle peut être à l’origine de processus d’inflammations entrainant des pathologies respiratoires. Des travaux ont notamment montré que des macrophages alvéolaires exposés à des PM2,5 sécrètent des cytokines inflammatoires. L’identification des composés des PM2,5 responsables des effets observés, n’est pas encore élucidée. La composition en métaux, et en composés organiques ainsi que les caractéristiques physiques des particules sont des facteurs qui ont tous été proposés comme étant impliqués dans l’induction de la réponse inflammatoire. L’objectif de cette thèse est d’étudier in vitro les effets des particules sur la réponse immunitaire de cellules de type macrophage, la lignée cellulaire THP-1. Les paramètres mesurés sont la sécrétion de cytokines inflammatoires et des marqueurs du stress oxydant en vue d’une explication mécanistique des phénomènes observés. Il a été montré que des PM2,5 induisent de façon significative la sécrétion de cytokines IL-1[bêta] et IL-8. Des particules de noir de carbone (fines et ultrafines) dopées en métaux n’induisent pas (ou très peu) de sécrétion de cytokines supérieure à celle induite par des particules non dopées. En revanche, l’effet d’hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) adsorbés à la surface de particules dépend de la taille de celles-ci. Ainsi, la comparaison des effets des HAP seuls à ceux adsorbés aux particules a montré que les particules ultrafines potentialisent les effets des HAP. La taille apparaît comme le paramètre le plus déterminant dans la modulation de la sécrétion des cytokines. Les particules ultrafines, caractérisées par un fort potentiel oxydant, induisent également un stress oxydant in vitro. Elles génèrent la formation d’un produit de peroxydation lipidique, le HNE qui lui-même est un médiateur du stress oxydant. Cependant, ce composé ne mime pas le stress oxydant induit par les particules ultrafines / Particles are concerning constituent of the atmospheric pollution, in particular the PM2,5 fraction (aerodynamic diameter lower than 2,5 µm) which is capable of penetrating into lungs up to alveoli. It can be the cause of inflammation processes leading to respiratory diseases. Studies have shown that alveolar macrophages exposed to PM2,5 secrete inflammatory cytokines. Identification of PM2,5 compounds responsible for observed effects, is not clarified yet. Factors such as the composition in metals and organic compounds, as well as the physical characteristics of particles have all been proposed as being involved in the induction of the inflammatory response. The aim of this thesis is to study in vitro effects of particles on the immune response of macrophages, specifically of the cell line THP-1. The parameters measured are the secretion of inflammatory and oxidative stress markers, in order to give a mechanistic explanation of observed phenomena. It was shown that PM2,5 induce in a significant way the secretion of cytokines IL-1[bêta] and IL-8. Black carbon particles (fine and ultrafine) coated with metals do not (or very slightly induce) a secretion of cytokines superior to that induced by uncoated particles. On the contrary, effect of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) adsorbed on particles surface depends on its size. Comparison between the effects of PAHs alone and those adsorbed on particles, showed that ultrafine particles potentiate PAH effects. Particle size appears to be the most determining parameter in the modulation of cytokines secretion. Ultrafine particles, characterized by a strong oxidizing potential, also induce an oxidative stress in vitro. They lead to the formation of a lipid peroxidation product, the HNE which is a mediator of the oxidative stress. However, HNE does not mime the oxidative stress induced by ultrafine particles

Orientador: Licio Augusto Velloso / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T13:49:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romanatto_Talita_M.pdf: 698647 bytes, checksum: 63eca0e91717781c0ea52f0ebec9855e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A insulina e a leptina induzem uma potente resposta anorexigênica e termogênica atuando sobre neurônios do hipotálamo. Evidências recentes sugerem que a resistência à ação desses hormônios deve participar dos mecanismos centrais que favorecem o desenvolvimento da obesidade e sua associação com o diabetes mellitus. O consumo de dieta rica em gordura induz a expressão de proteínas pró-inflamatórias em hipotálamo de ratos, inclusive da citocina TNF-a. O presente estudo avaliou o efeito de diferentes doses intracerebroventriculares (ICV) de TNF-a sobre a ativação da via de sinalização da insulina, a ingestão alimentar e o consumo de O2/produção de CO2. Ratos Wistar, machos de oito semanas, foram canulados por via ICV e tratados com diferentes doses de TNF-a, insulina ou salina. A dose mais alta de TNF-a promoveu uma redução de 20% na ingestão alimentar de 12 horas, sendo esta redução inferior àquela produzida pela insulina. Na mesma dose, a citocina promoveu um aumento da temperatura corporal e do quociente respiratório. O TNF-a induziu a ativação de elementos da via pró-inflamatória no hipotálamo, como JNK, p38 e NF?B, o que resultou na transcrição de genes de resposta rápida e indução de proteínas da família SOCS. Com relação à via molecular da insulina, o TNF-a não induziu a ativação de substratos proximais e intermediários, no entanto, mesmo a dose mais baixa foi capaz de ativar elementos distais da via, como ERK e FOXO-1. Cocluindo, o TNF-a exerce um potente efeito anorexigênico e pró-termogênico no hipotálamo de ratos através de mecanismos independentes da ativação de proteínas proximais da via de sinalização da insulina. ERK e FOXO-1, que participam como intermediários em várias outras vias de sinalização, incluindo a via da insulina, são ativados pelo TNF-a no hipotálamo e podem estar envolvidas no efeito anorexigênico e pró-termogênico do TNF-a nesse órgão / Abstrasct: Insulin and leptin induce potent anorexigenic and pro-thermogenic responses in specialized neurons of the hypothalamus. Recent evidence suggest that resistance to the action of these hormones play a role in the mechanisms that favor the development of obesity and its common association with type 2 diabetes mellitus. The consumption of a fat-rich diet induces molecular and functional resistance to leptin and insulin in the hypothalamus, which is accompanied by the expression of pro-inflammatory proteins including the cytokine TNF-a. The present study has evaluated the effect of different doses of intracerebroventricular (ICV) TNF-a upon the activation of insulin signal transduction, food ingestion, and the consumption of O2/ production of CO2. For that, eight weeks old male Wistar rats were ICV cannulated and treated with saline, insulin or TNF-a. High dose TNF-a ?promotes a reduction of 20 % of 12 h food intake, which is an inhibitory effect marginally inferior than the one produced by insulin. In addition, TNF-a increases body temperature and respiratory quotient, effects not reproduced by insulin. TNF-a is also capable of activating canonical pro-inflammatory signal in the hypothalamus, inducing JNK, p38, and NF?B, which results in the transcription of early responsive genes and induction of proteins of the SOCS family. Finally, TNF-a does not activate signal transduction through early and intermediary elements of the insulin signaling pathway such as IRS-2 and Akt, however, TNF-a, even at low doses, is capable of activating late elements of the insulin signaling pathway such as ERK and FOXO-1. In conclusion, TNF-a exerts potent anorexigenic and pro-thermogenic effects in the hypothalamus through mechanisms independent of the activation of proteins that participate in early and intermediary steps of the insulin signaling pathway. ERK and FOXO-1, which act as late signal transducers for several signaling pathways, including insulin, are activated by TNF-a in the hypothalamus and may participate in the anorexigenic/pro-thermogenic effects of TNF-a in this organ / Mestrado / Medicina Experimental / Mestre em Fisiopatologia Médica