Introdução: Doenças pulmonares ou infecções que ocorrem no início da vida podem ter permanente impacto na vida adulta. Pouco se sabe sobre o perfil de células do sistema imunológico em pulmões de crianças lactentes. Objetivo: Descrever o perfil de células do sistema imunológico no pulmão de lactentes sem doença pulmonar. Métodos: Amostras de pulmões histologicamente normais, obtidas através de autópsia de dez crianças que morreram de causas acidentais ou de doenças não pulmonares, foram marcadas por anticorpos contra linfócitos B e T, macrófagos, células NK (natural Killer), células citotóxicas, células dendríticas e mastócitos. As células foram quantificadas no epitélio, na camada interna, na camada externa das vias aéreas e nos septos alveolares. Membrana basal e septos alveolares foram medidos através de análise de imagem. Resultados expressos em células/mm de membrana basal epitelial brônquica ou alveolar. Resultados: A mediana das idades foi 2,5 meses (1-730 dias). Os resultados mostraram que a camada interna apresentou pequena densidade celular. No epitélio da via aérea e no parênquima houve predominância de células que estão relacionadas com a imunidade inata, tais como: CD56+, Granzyme + e CD68+. A camada externa e o parênquima alveolar apresentaram a maior densidade celular. Poucas células T CD4+ e células dendríticas foram encontradas na maioria dos compartimentos do pulmão. Conclusão: Há uma compartimentalização de células relacionadas com o sistema imunológico ao longo da via aérea e parênquima dos pulmões das crianças estudadas. Esta configuração pode estar relacionada com o desenvolvimento dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunidade adquirida. Este conhecimento é importante para entender os mecanismos da imunocompetência pós-natal dos pulmões / Introduction: Pulmonary diseases or infections occurring early in life may have a permanent impact in adulthood. Little is known about the normal immune cell profile in the lungs of infants. Objective: To describe the immune cell profile of infants without lung disease. Methods: Histologically normal lung samples obtained at autopsy of ten infants that died either due to incidental or inflicted causes or non-pulmonary diseases were stained for antibodies against B and T lymphocytes, macrophages, NK cells, cytotoxic cells, dendritic cells and mast cells. Cells were quantified in the airway epithelial layer, inner layer, outer layer and alveolar septa. Basement membrane or alveolar septa lengths were assessed by image analysis. Results are expressed as cells/mm. Results: The median age of patients was 2.5 months and ranged from 1- 730 days. The inner layer of the airways was the region with the smallest density of cells. There was a predominance of cells related to the innate immunity such as CD56+, Granzyme B+ and CD68+ cells in the epithelial layer and alveolar parenchyma. The outer layer and the lung parenchyma presented the highest cellular density. There were very few CD4+ T cells or dendritic cells in most of the lung compartments. Conclusions: There was a compartmentalization of immune cells along airways and parenchyma in infants, which may be related to the development of innate and acquired lung defense mechanisms. This knowledge is important to understand mechanisms of postnatal immune competence of the lungs

A melatonina (MLT) é um hormônio responsável pela regulação dos ritmos circadianos, com ampla atuação na fisiologia animal, incluindo os seres humanos. Sua ação moduladora sobre o sistema imune possibilitou estudar seu efeito sobre a estimulação de monócitos na diferenciação em células dendríticas (DCs). Monócitos estimulados com MLT, durante a etapa de adesão de duas horas, apresentaram aumentada presença dos receptores para citocinas GM-CSF, IL-4 e TNF-a, necessários à geração de DCs in vitro. DCs geradas sob estímulo de MLT mostraram um aumento nas moléculas de membrana como CD40, CD80 e CD83. Foram detectadas as citocinas IL-6, IL-8 e IL-10 nos sobrenadantes de DCs imaturas, bem como IL-6, IL-8 e TNF-a para as DCs maduras. Lys estimulados por estas DCs mostraram um elevado índice de proliferação e detectou-se variação nas concentrações das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g, dos sobrenadantes das co-culturas. O uso do inibidor da MLT, Luzindol mostrou tendência a inibição dos efeitos desse hormônio. / Melatonin (MLT) is a hormone responsible for the circadian rhythm regulation, with wide range of actions in animal physiology, including the human beings. Its modulatory action on immune system permited to study its effects on monocyte stimulation to differentiate into dendritic cells (DCs). Monocytes stimulated with MLT, kept for two hours adhesion time, presented enhanced cytokine membrane receptors for GM-CSF, IL-4, TNF-a, needed to in vitro DCs generation. DCs obtained by MLT stimuli show an enhanced presence of membrane molecules, as CD40, CD80 and CD83. The cytokines IL-6, IL-8 e IL-10 were present in the supernatants of imature DCs, as well the IL-6, IL-8 e TNF-a in mature DCs supernatants. Lymphocytes supernatants from DCs co-culture showed an enhanced proliferation index and, were detected a variation for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a e IFN-g cytokines. The MLT inhibitor Luzindole show a tendency to inhibition of this hormone.

Introdução: Doenças pulmonares ou infecções que ocorrem no início da vida podem ter permanente impacto na vida adulta. Pouco se sabe sobre o perfil de células do sistema imunológico em pulmões de crianças lactentes. Objetivo: Descrever o perfil de células do sistema imunológico no pulmão de lactentes sem doença pulmonar. Métodos: Amostras de pulmões histologicamente normais, obtidas através de autópsia de dez crianças que morreram de causas acidentais ou de doenças não pulmonares, foram marcadas por anticorpos contra linfócitos B e T, macrófagos, células NK (natural Killer), células citotóxicas, células dendríticas e mastócitos. As células foram quantificadas no epitélio, na camada interna, na camada externa das vias aéreas e nos septos alveolares. Membrana basal e septos alveolares foram medidos através de análise de imagem. Resultados expressos em células/mm de membrana basal epitelial brônquica ou alveolar. Resultados: A mediana das idades foi 2,5 meses (1-730 dias). Os resultados mostraram que a camada interna apresentou pequena densidade celular. No epitélio da via aérea e no parênquima houve predominância de células que estão relacionadas com a imunidade inata, tais como: CD56+, Granzyme + e CD68+. A camada externa e o parênquima alveolar apresentaram a maior densidade celular. Poucas células T CD4+ e células dendríticas foram encontradas na maioria dos compartimentos do pulmão. Conclusão: Há uma compartimentalização de células relacionadas com o sistema imunológico ao longo da via aérea e parênquima dos pulmões das crianças estudadas. Esta configuração pode estar relacionada com o desenvolvimento dos mecanismos de defesa da imunidade inata e da imunidade adquirida. Este conhecimento é importante para entender os mecanismos da imunocompetência pós-natal dos pulmões / Introduction: Pulmonary diseases or infections occurring early in life may have a permanent impact in adulthood. Little is known about the normal immune cell profile in the lungs of infants. Objective: To describe the immune cell profile of infants without lung disease. Methods: Histologically normal lung samples obtained at autopsy of ten infants that died either due to incidental or inflicted causes or non-pulmonary diseases were stained for antibodies against B and T lymphocytes, macrophages, NK cells, cytotoxic cells, dendritic cells and mast cells. Cells were quantified in the airway epithelial layer, inner layer, outer layer and alveolar septa. Basement membrane or alveolar septa lengths were assessed by image analysis. Results are expressed as cells/mm. Results: The median age of patients was 2.5 months and ranged from 1- 730 days. The inner layer of the airways was the region with the smallest density of cells. There was a predominance of cells related to the innate immunity such as CD56+, Granzyme B+ and CD68+ cells in the epithelial layer and alveolar parenchyma. The outer layer and the lung parenchyma presented the highest cellular density. There were very few CD4+ T cells or dendritic cells in most of the lung compartments. Conclusions: There was a compartmentalization of immune cells along airways and parenchyma in infants, which may be related to the development of innate and acquired lung defense mechanisms. This knowledge is important to understand mechanisms of postnatal immune competence of the lungs

A infecção por HIV-1 leva a uma séria imunodeficiência causada principalmente pela depleção de linfócitos T auxiliadores, a principal célula-alvo do vírus. Além dos linfócitos T CD4, o HIV-1 também pode interagir e infectar macrófagos e células dendríticas (DCs). As DCs são resistentes à infecção pelo HIV-1, mas podem internalizar vírions em compartimentos e transferi-los para linfócitos T CD4&#43, em um processo chamado trans-infecção. Para promover sua infecção, o HIV-1 subverte o citoesqueleto da actina da célula hospedeira em várias etapas de seu ciclo. Em DCs o citoesqueleto também é essencial para internalização do HIV-1 e formação dos compartimentos. Miosinas são proteínas motoras que interagem com filamentos de actina e estão envolvidas em diversos processos celulares, incluindo migração, transporte de moléculas, endocitose e reciclagem de componentes de lipid rafts. Apesar de existirem mais de 40 tipos de miosinas em humanos, apenas a miosina 2a foi estudada no contexto da trans-infecção. Por isso, nosso objetivo nesse trabalho foi estudar o papel das miosinas 1c e 1e na maturação de células dendríticas derivadas de monócitos (MDDCs) e na internalização de HIV-1 por estas células. Confirmamos por Real Time PCR a expressão de 10 miosinas em MDDCs de doadores saudáveis, depois verificamos que há regulação negativa da expressão do gene da miosina (myo1c) em MDDCs de pacientes HIV&#43. Analisamos a ativação das células em resposta ao lipopolissacarídeo (LPS) por meio da expressão de CD86 e HLA-DR em MDDCs silenciadas para myo1c e 1e. Não houve diferença na expressão dos marcadores de ativação em células silenciadas para miosina 1e (myo1e) em relação ao controle. No entanto, na maioria dos doadores testados, o silenciamento da myo1c interferiu com o aumento de expressão desses marcadores, indicando que a myo1c possa ter um papel na ativação celular por LPS. Ademais, a localização subcelular do HIV-1 em MDDCs silenciadas para myo1c e ativadas com LPS ficou mais próxima ao fenótipo de células imaturas. Contudo, não houve diferença na quantidade HIV-1 internalizado por MDDCs silenciadas para as miosinas 1c e 1e ou tratadas com um inibidor específico de miosinas do tipo 1. Estes resultados sugerem que a myo1c pode estar envolvida na ativação de células dendríticas e consequentemente alterar o mecanismo de internalização do HIV-1 por MDDCs. / Infection by human immunodeficiency virus (HIV) leads to severe immunodeficiency caused by depletion of T helper cells, the main targets of the virus. Besides T CD4&#43 cells, HIV-1 can infect and interact with other immune cells, including dendritic cells and macrophages. Dendritic cells are resistant to HIV infection, however, they can bind and internalize HIV in compartments and then transfer the virus to CD4&#43 T cells in a process called trans-infection. To promote infection, HIV-1 subverts actin cytoskeleton of host cell at several points of its cycle. In DCs, cytoskeleton is also essential to HIV-1 internalization and compartment assembly. Myosins are motor proteins that can interact with actin and take part in several cellular processes, including migration, molecular trafficking, endocytosis and lipid raft recycling. Even though there are about 40 myosin types, only myosin 2a has been investigated in trans-infection. Thus, our aim was to evaluate the role of myosins 1c and 1e in monocyte derived dendritic cell (MDDC) activation and HIV-1 internalization. We have validated the expression of 10 myosins in MDDCs by real-time PCR, and observed a down regulation of myosin 1c gene in HIV&#43 patients. We have evaluated cell activation in response to lipopolysaccharide (LPS) through CD86 and HLA-DR expression in myosin 1c and 1e knocked down MDDCs. There was no change in expression of activation markers in myosin 1e knocked down MDDCs compared with control cells. However, in most donors, myosin 1c knock down impaired the increase of activation markers following LPS treatment, suggesting that myosin 1c may play a role in cell activation by LPS. In addition, subcellular location of HIV-1 in MDDCs knocked down for myosin 1c and activated with LPS, was similar to immature cell phenotype. Nevertheless, we have not observed changes in the amount of HIV-1 internalized by myosin 1c or 1e knocked down MDDCs or in MDDCs treated with myosin I inhibitor. These data suggest that myosin 1c may play a role in MDDC activation and therefore alter the mechanism of HIV-1 internalization by MDDCs.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000425543-Texto+Completo-0.pdf: 747447 bytes, checksum: 25a6005ed4d57ac7cb87a5a7d22ed8de (MD5) Previous issue date: 2010 / Aging is associated with the gradual decline in the immune system function (immunosenescence), both in humoral immunity as well in cellmediated responses, resulting in an increased susceptibility to infections and cancer, as well as reduced response to vaccination. Dendritic cells (DCs) are the most powerful and efficient antigen-presenting cells (APC), playing a pivotal role in the presentation and consequent T-cell mediated immune response. However, most of the studies focusing on immunosenescence focus on T cells. Also, most of the data on aged dendritic cells come from in vitro studies. The interaction between dendritic and T cells affects the processing and consequent presentation of antigens, influencing the effectiveness of T cell-mediated immune responses. The goal of this study was to evaluate the stimulatory capacity of dendritic cells from old mice in a specific T CD4+ response compared to young mice in vivo. Transgenic T cells from TEa mice, specific for the Ea:IAb complex were transferred to normal C57Bl/6 mice. T cells from young mice being transferred into young and old animals, and T cells from old mice transferred into young and old animals. The results demonstrate that, after immunization with EaRFP antigen, young dendritic cells stimulated equally young and old T cells. However, dendritic cells from old animals were less capable of stimulating old as well as young T cells. While both T cells, young and old, acquired CD44+ phenotype when transferred to young animals, young T cells when transferred to old animals did not acquired the same phenotype. This fact suggested that dendritic cells from old animals possess lower capacity to stimulate T cells, even if these cells come from a young animal. We hypothesized that this could be due to an extremely diminished dendritic cells number in old animals, or rather to some deficiency in one of the signals supplied by dendritic cells in T lymphocyte priming (antigen presentation or costimulatory signals). The dendritic cells total number was lower in old mice compared to young mice. Also, the number of antigen presenting cells was lower in draining lymph nodes of old animals and the expression of CD86 by dendritic cells did not differ between old and young animals. Altogether, the results suggest that the impairment of antigen presentation capacity presented by aged dendritic cells is critical for their loss of stimulatory potential of CD4+ T cells. / O envelhecimento está associado com o declínio progressivo nas funções do sistema imunológico (imunosenescência), tanto na imunidade humoral quanto na imunidade mediada por células, resultando em maior suscetibilidade a infecções e câncer, além da diminuição na capacidade de responder a vacinas. As células dendríticas (DCs) são as mais poderosas e eficientes apresentadoras de antígenos (APC), desempenhando um papel primordial na apresentação e conseqüente resposta imune mediada por células T. Poucos estudos enfocam a atividade das células dendríticas no envelhecimento, sendo que a maioria dos dados são relativos às funções das células T. As interações entre as células dendríticas e as células T afetam o processamento e consequente apresentação de antígenos, influenciando a efetividade das respostas imunes mediadas por células T. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade estimulatória de células dendríticas de camundongos velhos em uma resposta específica T CD4+ comparada à resposta imune de camundongos jovens. Para isso, células T de camundongos transgênicos TEa, específicas para o complexo Ea:IAb foram transferidas para camundongos normais C57Bl/6, células T de camundongos jovens para animais velhos e jovens, e células T de camundongos velhos para animais velhos e jovens. Os resultados demonstram que, após imunização com o antígeno EaRFP, tanto as células T jovens quanto as células T velhas foram estimuladas de modo semelhante por células dendríticas jovens. Contudo, células dendríticas de animais velhos não foram capazes de estimular suficientemente as células T de animais velhos nem mesmo as células T de animais jovens. Enquanto ambas as células T, jovens e velhas, adquiriram o fenótipo CD44+ quando transferidas para os animais jovens, células T jovens transferidas para animais velhos não adquiriram o mesmo fenótipo. Esse fato sugeriu que células dendríticas de animais velhos possuem baixa capacidade de estimular células T, mesmo que essas células venham de um animal jovem. Nós hipotetizamos que esse resultado poderia estar ligado a um número extremamente diminuído de células dendríticas nos animais velhos, ou ainda em uma deficiência em um dos sinais fornecidos pelas células dendríticas no priming de linfócitos T (apresentação de antígeno ou sinais coestimulatórios). O número total de células dendríticas foi significativamente menor em camundongos velhos comparado a camundongos jovens. Além disso, o número de células apresentando antígeno foi menor no linfonodo drenante de animais velhos, e a expressão de CD86 por células dendríticas de animais velhos não foi diferente da dos animais jovens. Os resultados sugerem que a diminuição da capacidade de apresentação de antígeno apresentada no envelhecimento é crítica para a perda do potencial estimulatório de células T CD4+ por células dendríticas.

Orientador: Patrícia Ucelli Simioni / Banca: Patricia Pasquali Parise / Banca: Daniela Maira Camargo / Resumo: A quebra da tolerância imunológica a antígenos próprios é um mecanismo gerador comum às respostas imunes deletérias. Várias estratégias têm sido propostas para modular respostas autoimunes, entre as quais se destacam a administração oral de antígenos relacionados à doença, a transferência adotiva de células tolerogênicas e/ou o tratamento com citocinas reguladoras. Nesse contexto, tem sido mostrado que a ingestão de antígenos proteicos presentes na dieta pode gerar efeitos indiretos sobre o sistema imune do hospedeiro, caracterizados pela supressão da resposta imune a proteínas antigenicamente não relacionadas, conhecidos como supressão bystander. O presente projeto teve por objetivo analisar os efeitos indiretos da tolerância oral induzida pela ingestão de ovalbumina (OVA) e a transferência adotiva de células dendríticas isoladas de animais tolerantes a OVA (tDC) na colite induzida por TNBS em camundongos. Os resultados mostraram que o tratamento de camundongos com OVA por via oral, antes ou após a indução da colite e a transferência adotiva de tDC, foram capazes de reduzir sinais da doença, tais como a perda de peso, bem como preservar parcialmente a integridade do tecido colônico, quando comparados aos animais colíticos não tratados com OVA (controles). A supressão bystander relacionada ao consumo de OVA foi associada à expansão da frequência de células T reguladoras (regs) e de células T secretoras de interleucina (IL) -10, possíveis mecanismos de regulação das manifestaç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The breakdown of immune tolerance to self antigens is a common mechanism for deleterious immune responses. Several interventions have been proposed to modulate autoimmune responses, such as oral administration of disease-related antigens, adoptive transfer of tolerogenic cells and/or treatment with regulatory cytokines. In this context, it has been demonstrated that the ingestion of protein antigens can generate indirect effects on the immune system of the host, characterized by suppression of the immune response to antigenically unrelated proteins, known as bystander suppression. The present project aims to analyze the indirect effects of oral tolerance induced by ovalbumin (OVA) and by adoptive transfer of tolerant dendritic cells (tDC) in TNBS induced colitis in mice. Our results showed that the treatment of oral OVA mice before or after induction of colitis and the adductive transfer of tDC were able to reduce the signs of the disease, such as weight loss, as well as partially preserve the integrity of the Compared to non-OVA treated animals (controls). The bystander suppression related to OVA consumption appears to favor the expansion of regulatory (regs) T and interleukin (IL)-10 secreting T cells responsible for reducing the clinical manifestations of TNBS-induced colitis. On the other hand, DC obtained from OVA-tolerant animals showed increased expression of CD80. Administration of this cells population to colitic animals was able to reduce the clinical and histological signs of colitis, possibly by reducing Th17 cells, reduction of secretion of Il-17 and IL-9 and augment of IL-10 and IL-4. To the best of our knowledge, there are no data in the literature showing the effect of oral tolerance and the adoptive transfer of tDC in the treatment of colitis / Mestre

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T18:50:30Z No. of bitstreams: 1 TESE ANA TEREZA CERQUEIRA LIMA.pdf: 649231 bytes, checksum: 100883de49719c590e1a22088b02b0ee (MD5) / Rejected by Delba Rosa (delba@ufba.br), reason: Por gentileza, preencher os campos preenchidos em caixa baixa, Autor, título, instituição, etc. Grata. on 2017-03-23T12:52:45Z (GMT) / Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-06-05T17:45:14Z No. of bitstreams: 1 TESE ANA TEREZA CERQUEIRA LIMA.pdf: 649231 bytes, checksum: 100883de49719c590e1a22088b02b0ee (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:59:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE ANA TEREZA CERQUEIRA LIMA.pdf: 649231 bytes, checksum: 100883de49719c590e1a22088b02b0ee (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE ANA TEREZA CERQUEIRA LIMA.pdf: 649231 bytes, checksum: 100883de49719c590e1a22088b02b0ee (MD5) / CNPQ / Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório cuja resposta adaptativa é fortemente TH1. Apesar desta forte resposta TH1, existem fortes evidências da produção de mecanismos imunoregulatórios como a produção de IL-10. Além de participar do controle da resposta adaptativa a IL-10 é produzida durante a resposta imune inata. Esta resposta é caracterizada pela participação de células como macrófagos, células dendríticas e citocinas como IL-12 e TNF-α. A interação entre estas células e o parasito, para a produção destas citocinas, parece ser intermediado por receptores da imunidade inata do tipo Toll: Os receptores Toll Like. A literatura não deixa muito claro qual o verdadeiro papel do Toll Like 4 na interação entre T. gondii e células dendríticas. O nosso geral objetivo foi demonstrar o efeito da interação de células dendríticas humanas e o antígeno solúvel de T. gondii e qual o envolvimento do TLR-4 na resposta imunológica contra T. gondii. Foram utilizadas células dendríticas humanas e antígeno solúvel de T. gondii. Após 48 horas da interação das células com antígeno foram avaliados marcadores de maturação e produção de citocinas como a IL-10 e IL-12. A produção de Il-12 foi também avaliada após a interação das células dendríticas com células J558(mimetizam ligação CD40-CD40L) e a expressão de IL-10, IL-12 e TFG-b foi avaliada por PCR. No primeiro artigo, portanto, demonstramos que o antígeno solúvel do parasito estimulou marcadores de maturação CD40(p<0,05), CD80(p<0,05), CD83 (p<0,01), CD86(p<0,05) e HLA-DR (p < 0,05). Produziu significativamente IL-10(p < 0,01) e IL-12(p< 0,05), mas a produção de IL-10 é superior a de IL-10/IL-12(p < 0,01). A IL-12 não foi produzida quando as células dendríticas estiveram em contato com a linhagem de células J558. A expressão de IL-10 (p < 0,01) e de IL-12 (p < 0,01) por PCR foi também observada quando as células dendríticas tiveram contato com o antígeno. A expressão de TGF-b não foi observada. No segundo artigo, no qual bloqueamos o TLR-4 nas células dendríticas a produção de IL-10 e IL-12 foram avaliadas. Foi possível demonstrar que o bloqueio deste receptor impede a produção de IL-10(p < 0,05) e IL-12(p < 0,05). Sendo assim este Toll Like é importante para a resposta inata contra o parasito, mas também é importante para a resposta regulatória demonstrada no primeiro trabalho. Neste trabalho de tese concluímos que o antígeno solúvel dos taquizoítos do parasito T. gondii é capaz de estimular resposta pró-inflamatória e anti-inflamatória através das células dendríticas e que a produção de IL-10 é superior a de IL-12. Concluímos ainda que a produção destas citocinas esta associada ao receptor Toll Like 4. / Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite whose adaptive response is strongly TH1. Despite this strong TH1 response, there is strong evidence of the production of immunoregulatory mechanisms, such as IL-10 production. Besides participating in the control of adaptive response to IL-10 is produced during the innate immune response. This response is characterized by the involvement of cells such as macrophages, dendritic cells and cytokines such as IL-12 and TNF-α. The interaction between these cells and the parasite, for the production of these cytokines appears to be mediated by the innate immunity receptor Toll like, Toll like receptors. The literature does not very clear what the true role of Toll like 4 in the interaction between T. gondii and dendritic cells. Our main objective was to demonstrate the effect of the interaction of dendritic cells and human soluble T. gondii antigen and which involvement of TLR-4 in immune response against T. gondii. Human dendritic cells and soluble T. gondii antigen were used. After 48 hours the interaction of antigen with cell maturation markers were evaluated and the production of cytokines such as IL-10 and IL-12. The production of IL-12 was also evaluated after the interaction with dendritic cells J558 cells (CD40-CD40L binding mimic), and the expression of IL-10, IL-12 and b-GFR was assessed by PCR. In the first article, thus demonstrated that soluble parasite antigen-stimulated maturation markers CD40 (p <0.05), CD80 (p <0.05), CD83 (p <0.01), CD86 (p <0, 05) and HLA-DR (p <0.05). IL-10 produced significantly (p <0.01) and IL-12 (p <0.05), but IL-10 production is higher than the IL-10 / IL-12 (p <0.01). IL-12 was not produced when dendritic cells were in contact with the line of J558 cells. The IL-10 expression (P <0.01) and IL-12 (p <0.01) by PCR was also observed when dendritic cells had been in contact with the antigen. The TGF-b was not observed. In the second article, in which block the TLR-4 dendritic cells IL-10 and IL-12 were assessed. It has been shown that blockade of this receptor prevents IL-10 production (p <0.05) and IL-12 (p <0.05). Thus, this Toll like is important for the innate response against the parasite, but it is also important for the regulatory response demonstrated the first working. In this thesis work we conclude that the soluble antigens of the parasite tachyzoites of T. gondii is able to stimulate pro-inflammatory and anti-inflammatory response by dendritic cells and IL-10 production is higher than that of IL-12. We conclude that the production of these cytokines is associated with a Toll like receptor 4

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-02-07T18:23:30Z No. of bitstreams: 1 Renata Siqueira Portella.. Presença de células....pdf: 2025004 bytes, checksum: a85d3195f20f2a79bd6ff1b32049c260 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-07T18:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata Siqueira Portella.. Presença de células....pdf: 2025004 bytes, checksum: a85d3195f20f2a79bd6ff1b32049c260 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / A doença de Chagas é caracterizada por apresentar duas fases com curso clínico bastante variável. Na fase aguda ocorre uma intensa miocardite, sendo o parasita facilmente detectado no sangue periférico e nos tecidos. A fase crônica cardíaca é caracterizada por uma cardiopatia, com intensa destruição das fibras cardíacas, presença de áreas de fibrose e escassos parasitas. Os mecanismos envolvidos na patogenia dessa miocardite ainda não são muito claros. Acredita-se que as células reguladoras e as células dendríticas estejam envolvidas nesse processo. Para compreender os mecanismos envolvidos, na resposta inflamatória à infecção pelo T. cruzi, resolvemos investigar a participação das células dendríticas, das células reguladoras e o perfil dos linfócitos T CD4+ e CD8+, utilizando duas linhagens de camundongos isogênicos, que apresentam diferentes graus de susceptibilidade a infecção. Em nossos resultados constatamos que os camundongos DBA/1 apresentaram maior sobrevida à fase aguda (90%), mesmo tratando os camundongos A (70%) com benzonidazol por três dias consecutivos, com o intuito de diminuir a carga parasitária prevenindo a alta mortalidade. A resistência dos DBA/1 e a susceptibilidade dos A, a infecção pelo T. cruzi, estaria relacionada ao perfil da resposta inflamatória e regulatória desenvolvida no decorrer da doença. Observamos que os camundongos DBA/1 possuem mais células dendríticas ativadas no baço e coração e mais células T CD4+CD25hi do que os camundongos da linhagem A. Essa diferença do perfil de resposta pode estar provocando uma maior expansão e diferenciação dos linfócitos T CD4+ pelas células dendríticas, levando ao controle da carga parasitaria. / Chagas’diseasse, due to Trypanosoma cruzi infection is characterized by the development of two phases with a variable clinical course. During the acute phase there occurs a severe myocarditis with the parasite being easily detected in peripheral blood and tissues. The chronic cardiac phase is characterized as a chronic cardiopathy, when severe destruction of cardiac myocells and fibrosis are present and parasites are rare. The mechanisms involved in the pathogenesis of this myocarditis are somewhat obscure. It is believed that regulatory and dendritic cells play a role in this process. In an attempt to clarify the mechanisms involved in the inflammatory response to infection with T. cruzi we decided to investigate the participation of dendritic and regulatory cells and of TCD4 and TCD8 lymphocytes, using two strains of isogenic mice , which exhibit different degrees of susceptibility to infection. Our results have shown that the DBA/1 mice presented a higher survival (90%) in the acute phase than the A mice (70%), even when these were treated with Benznidazole for three consecutive days, with the objective of to reduce the parasitemia and the high mortality. Resistance of DBA/1 mice and susceptibility of A mice could be related to the evolution of the inflammatory and regulatory responses, during the infection. It was seen that DBA/1 mice disclosed a higher number of activated dendritic cells in the spleen and heart and a higher number of T CD4+CD25hi than the mice of A strain. This differences of the response could be influencing in the TCD4 differentiation and on the control of parasitic load

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-06-26T19:23:24Z No. of bitstreams: 1 Martha Sena Suarez Estudo de interação...2015 pdf.pdf: 1536322 bytes, checksum: c3de271bff83040bfeb7ce96dcbadb56 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-06-26T19:23:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Martha Sena Suarez Estudo de interação...2015 pdf.pdf: 1536322 bytes, checksum: c3de271bff83040bfeb7ce96dcbadb56 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-26T19:23:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martha Sena Suarez Estudo de interação...2015 pdf.pdf: 1536322 bytes, checksum: c3de271bff83040bfeb7ce96dcbadb56 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Os neutrófilos são essenciais para a resposta imune inata contra uma variedade de patógenos. Eles são capazes de modular a resposta imune através da produção de citocinas e quimiocinas, degranulação e a sua interação direta com outras células no local da infecção, tais como as células dendríticas. A interação entre as células do sistema imune inato é essencial para direcionar a resposta imune adaptativa, a qual é responsável pela eliminação de microrganismos e manutenção de memória imunológica. Objetivo: Este estudo avaliou a interação de neutrófilos humanos com Leishmania braziliensis, através da análise da expressão de moléculas de superfície, liberação de enzimas presentes nos grânulos e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Também foi avaliada a interação entre neutrófilos humanos infectados e células dendríticas, a fim de se observar o efeito desta interação na indução da ativação das células dendríticas. Metodologia: Os neutrófilos foram purificados a partir do sangue periférico de doadores saudáveis e as células dendríticas foram geradas in vitro. Os neutrófilos foram infectados ou não com L. braziliensis e co-cultivados com as células dendríticas. Em seguida, os sobrenadantes e as células foram coletadas para avaliar a liberação de enzimas, tais como mieloperoxidase (MPO) e metaloproteinase 9 (MMP-9). O fenótipo e a função dos neutrófilos foram analisados através da expressão de Mac-1 (CD18 e CD11b), CD16, CD62-L e produção de ROS. As células dendríticas foram adicionadas à co-cultura e a expressão de CD1a, a DC-SIGN, HLA-DR e CD80 foram avaliados, bem como a produção de citocinas e quimiocinas. Resultados: A infecção de neutrófilos com L. braziliensis induz a produção de MPO, MMP-9, IL-8, LTB4 e ROS. Observou-se também um aumento na expressão de Mac-1 e uma diminuição na expressão de CD16 e CD62-L. As células dendríticas tratadas com o sobrenadante dos neutrófilos infectados apresentaram redução significativa da expressão do DC-SIGN e aumento da expressão do HLA-DR e CD80. Nessas condições, observamos também a presença de IL-8 na cultura. Conclusões: Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que os neutrófilos, além de agirem como células efetoras na destruição do parasito, também podem ser importantes na modulação da ativação das células dendríticas. / Neutrophils are essential in the innate immune response against a variety of pathogens. They are able to modulate immune response by cytokine and chemokine production, release of granules and their direct interaction with other cells at the infection site. Dendritic cells are recruited in response to cytokines and chemokines produced by neutrophils. The interaction between cells of the innate immune system is essential for targeting the adaptive immune response, which is responsible for eliminating microorganisms and the maintenance of immunological memory. Objective: Evaluate the interaction of human neutrophils with Leishmania braziliensis, through the analysis of surface molecule expression, release of granules enzymes and production of reactive oxygen species (ROS). We also evaluated the interaction between human infected neutrophils and dendritic cells, in order to observe the effect of this interaction on dendritic cells. Methodology: Neutrophils were purified from peripheral blood of healthy donors and dendritic cells were generated in vitro. Neutrophils were infected or not with L. braziliensis and cocultured with DC. Afterwards, supernatants and cells were harvested to evaluate the release of granules enzymes, such as myeloperoxidase (MPO) and metalloproteinase 9 (MMP-9). Neutrophils phenotype and function were analyzed by the expression of Mac-1 (CD18 and CD11b), CD16 and ROS production. Dendritic cells were added to the co-culture to asses the rate of infection of DCs in the presence of neutrophils. Dendritic cells were also treated with supernatant of infected neutrophils and the expression of CD80, DC-SIGN and HLA-DR were evaluated, as well as the cytokine production. We also filtered the supernatant of infected neutrophils to compare the difference in the activation of dendritic cells. Results: Neutrophil infection with L. braziliensis induced the production of MPO, MMP-9, IL-8, LTB4 and ROS. We also observed an increase in Mac-1 and a decrease in CD16 and CD62-L expression. Dendritic cells treated with the infected supernatant of neutrophils showed a significant reduction of the DC-SIGN expression and increased expression of HLA-DR and CD80. Under these conditions, we also observed the presence of IL-8 in culture. Conclusions: Neutrophils act as effector cells in the destruction of the parasite and could be important in mediating the activation of DCs.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:04Z : No. of bitstreams: 1 000853903.pdf: 918508 bytes, checksum: d82c80d39357f403a66df5582254910d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O interferon alfa (IFN-α), um IFN do tipo I, se apresenta como uma citocina com grande potencial terapêutico, pois atua no combate direto às células tumorais, além de agir sobre a maturação de células dendríticas (DCs), que são células apresentadoras de antígenos profissionais e peças chave na elaboração da uma resposta antitumoral. Entretanto, a administração sistêmica de citocinas pode produzir toxicidade importante nos pacientes, de modo que a indução de sua produção in situ poderia representar uma forma de imunomodulação mais adequada. Assim, o objetivo deste estudo é verificar a ação de vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α para transdução de células tumorais, permitindo assim a produção localizada de IFN-α, a fim de explorar, in vitro, seu potencial lítico e imunomodulatório sobre DCs. Vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α humano (Lego-IFN) ou GFP (Lego-GFP) foram utilizados para a transdução in vitro de células de câncer colorretal. A transdução foi feita com diferentes multiplicidades de infecção (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0, 4.0) para avaliarmos o efeito dose-dependente, seguido de co-cultura com DCs derivadas de monócitos de doadores saudáveis (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0, DC-4.0). Após 48h de co-cultura, as DCs foram avaliadas fenotípica e funcionalmente, através da análise dos marcadores de membrana por citometria de fluxo, capacidade de aloestimulação e de indução de linfócitos T citotóxicos (CTLs). Nós observamos que a transdução com Lego-GFP, mas não com Lego-IFN, aumentou a imunogenicidade das células tumorais, com aumento de expressão de CD54 e HLA-DR. A co-cultura de DCs com células tumorais transduzidas com Lego-IFN aumentou discretamente seu perfil de ativação, mas não seu potencial aloestimulatório in vitro. Observamos que linfócitos cultivados com DC-2.0 produziram níveis mais altos de IFN-γ, sugerindo a indução de um perfil Th1, enquanto que... / Interferon alpha (IFN-α) is a type I IFN with great therapeutic potential, since it is able to directly fight tumor cells and enhance the maturation of dendritic cells (DCs), the main antigen-presenting cells, required for an effective antitumor response. However, the systemic administration of cytokines can induce severe collateral effects. Therefore, the induction of cytokine secretion in situ should represent a more adequate approach for cytokine-based immunotherapy. Thus, the goal of this study was to induce IFN-α secretion by colon cancer cells by transduction with a lentivirus vector carrying the human IFN-α gene, followed by analysis of its immunomodulatory potential over DCs. Transduction was made with different multiplicities of infection (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0 and 4.0) to evaluate the dose-dependent effects. Such cells were co-cultured with monocyte-derived DCs from healthy donors (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0 and DC-4.0). Forty-eight hours later, DCs were evaluated for their phenotype (surface activation/maturation markers) by flow cytometry, their ability to induce allogeneic response in a mixed leukocyte reaction (MLR) and effectiveness to induce cytotoxic T cells. We observed that transduction with Lego-GFP, but not Lego-IFN, increased tumor cells' immunogenicity with up-regulation of the markers CD54 and HLA-DR. Co-culture of Lego-IFN-transduced tumor cells with DCs slightly enhanced their activation phenotype but not their potential to stimulate T cell proliferation in vitro. Furthermore, we observed that lymphocytes cultured with DC-2.0 produced higher levels of IFN-γ, suggesting an induction of Th1 profile on T cells, while DC-GFP induced more IL-10 and IL-4. Additionally, DC-4.0 was more efficient in generating cytotoxic T lymphocytes (CTLs) that the control DC, however DC-GFP induced even more CD8+T cell proliferation. The enhancement of tumor cell immunogenicity and the superior induction of CLTs ...