Orientador: Man Chin Chung / Resumo: A tripanossomíase americana ou doença de Chagas é uma zoonose endêmica em 21 países das Américas do Sul e Central, apontada como uma grave doença parasitária resultante da infecção por Trypanosoma cruzi que utiliza insetos triatomíneos como vetores. Existem dois fármacos para o tratamento dessa enfermidade, o nifurtimox (NFX) e o benznidazol (BNZ), ativos apenas na fase aguda da doença, sendo que no Brasil apenas o BNZ é comercializado. Em busca de novas alternativas para o tratamento, destaca-se o hidroximetilnitrofural (NFOH), ativo contra as formas tripomastigotas e amastigotas em ensaio in vitro e in vivo (agudo). O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos do NFOH em ensaios in vivo na fase aguda e crônica utilizando cepa Bolívia e cepa CL Brener bioluminescênte. O estudo com a cepa Bolívia em fase crônica utilizou um ciclo de imunossupressão de 14 dias consecutivos com dexametasona (5 mg/kg) para verificação da reativação da parasitémia, enquanto o ensaio (agudo e crônico) com cepa Brener CL bioluminescênte, aplicando-se 2-3 ciclos de imunossupressão com ciclofosfamida (200 mg/kg, intervalos de quatro dias entre as doses). Os resultados demonstraram efeito semelhantes nos tratamentos com NFOH (150 mg/kg/ 20 dias) e BZN (100 mg/kg /20 dias) na fase aguda com cepa Bolívia, com eliminação da parasitémia e diminuição dos infiltrados inflamatórios e ninhos amastigotas. No ensaio de fase crônica com cepa Bolívia, o NFOH (150 mg/kg/ 60 dias) foi eficaz em eliminar a paras... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Made available in DSpace on 2016-06-17T14:14:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf.txt: 436440 bytes, checksum: 1d22503c32c1f332f780c4197a546123 (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O diagnóstico da doença de Chagas crônica (DCC) baseia-se em metodologias que usam em sua fase sólida antígenos brutos, semipurificados ou recombinantes, podendo resultar em baixa sensibilidade ou reação cruzada. Uma forma para resolver este problema é o uso de quimeras formadas por epítopos conservados e repetitivos de diferentes estruturas parasitárias em uma única molécula. O nosso objetivo foi caracterizar e avaliar o uso de quimeras em imunoensaios para o diagnóstico da DCC. As quimeras, IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 foram purificadas por meio de cromatografia e sua pureza avaliada por SDSPAGE. Ensaios de dicroísmo circular (DC) e espalhamento dinâmico da luz (EDL) foram usados para avaliação do raio hidrodinâmico das quimeras, avaliação de sua estabilidade e escolha do sistema tampão que oferecesse o menor estado de agregação molecular. Ensaios sorológicos para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi através de ELISA foram realizados utilizando um painel de 857 amostras positivas para a DCC e 689 negativas. Para avaliação de reação cruzada foram usadas 1079 amostras de diversas doenças endêmicas no país. A purificação foi eficiente uma vez que o SDS-PAGE indicou ausência de degradação das quimeras. As análises de DC e EDL mostraram que as quatro quimeras apresentaram menor tendência de agregação em tampão carbonato pH 9,6, sendo, assim, este o sistema para a sensibilização das placas. Os ensaios sorológicos revelaram valores elevados de sensibilidade (Sen) e especificidade (Esp) para a molécula IBMP-8.4 (Sen-99,3%; Esp- 100%). O desempenho para as demais moléculas foi satisfatório, ficando os valores de Sen e Esp acima de 94%. As moléculas IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 apresentaram respectivamente 0,46%, 0,85%, 0,46% e 0,37% de reação cruzada. Os resultados apontam que as quimeras atingiram os critérios de proficiência do Ministério da Saúde podendo, dessa forma, ser utilizados em ensaios diagnósticos para a DCC. Chronic Chagas disease (CCD) diagnosis is based on serological methods employing crude, semipurified or recombinant antigens, which eventually may result in low sensitivity or crossreactivity. An alternative method for solving this problem is the use of chimeric molecules composed by conserved and repetitive epitopes of distinct parasite structures. Our objective was to evaluate the use of chimeras in immunoassays for the diagnosis of CCD. The chimeras IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP-8.4 were purified by chromatography and their purity assessed by SDS-PAGE. Circular dichroism (CD) and dynamic light scattering (DLS) were used to assess the hydrodynamic radius of the chimeras, to evaluate their stability and to select the buffering system that offers the lowest state of molecular aggregation. Serological tests for detection of anti-Trypanosoma cruzi were performed by ELISA using a panel of 857 positive and 689 negative serum samples for CCD. Cross-reactivity was assessed by using 1079 serum samples from patients with unrelated diseases. The purification was efficient since SDS-PAGE indicated the absence of degradation of chimeric proteins. Analyses of CD and DLS showed that the four chimeras had low aggregation tendency in carbonate buffer, pH 9.6. Serological testing showed high values of sensitivity (Sen) and specificity (Spe) for IBMP-8.4 (Sen-99.3%; Spe-100%). The performance of other molecules was satisfactory, being the Sen and Spe values above 94%. Cross-reaction was observed in 0.46%, 0.85%, 0.46% and 0.37% of the samples tested against IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP- 8.4, respectively. The results indicate that the chimeras reached the Brazilian Ministry of Health proficiency criteria and may thus be used in diagnostic assays for CCD.

Introdução: A DCh (doença de Chagas) é uma doença negligenciada, com evolução para formas graves em 30% dos casos. No passado, era restrita à América Latina, entretanto, nas últimas décadas, o fenômeno migratório modificou o perfil epidemiológico, globalizando a doença. Inegáveis avanços aconteceram no Brasil, nas últimas décadas, mesmo assim, restam aproximadamente 3 milhões de pacientes. Desigualdades regionais são encontradas, com indicadores desfavoráveis na região Nordeste, relacionados não só ao predomínio de casos em crianças, identificados por avaliação sorológica, mas também pelo número de mortes relacionado à doença. Na fase crônica, amplo espectro de apresentações pode ser encontrado, variando desde a forma indeterminada, com favorável evolução, até pacientes com grave envolvimento cardíaco e alta mortalidade. Diante da apresentação heterogênea, a predição do risco de evolução e morte na DCH continua sendo um grande desafio. Maior ainda é a identificação de fatores determinantes, sobretudo do tipo de acometimento cardíaco. Assim, é possível que marcadores genéticos possam contribuir efetivamente, nesse cenário. O valor dos polimorfismos nos genes do fator de necrose tumoral (TNF) e da enzima conversora da angiotensina (ECA) na doença de Chagas é controverso. Objetivo: avaliar se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308 são marcadores de risco para a ocorrência de Insuficiência cardíaca na cardiopatia chagásica crônica (CCC), em população do Nordeste brasileiro. Material e métodos: realizado estudo tipo caso-controle. Foram analisados 201 pacientes portadores de T. cruzi + classificados em estágios, de acordo com a Diretriz Latino Americana para Cardiopatia Chagásica - Sociedade Brasileira de Cardiologia. Foram incluídos 99 pacientes em estágio C com presença de disfunção ventricular, definida por fração de ejeção do ventrículo esquerdo menor que 50% e sintomas prévios ou atuais de IC e 102 em estágio A, pacientes assintomáticos, com eletrocardiograma e ecocardiograma normais. Foram excluídos portadores de manifestação digestiva. Analisaram-se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308. Resultados: o perfil geral da população estudada apresenta pacientes naturais de estados do Nordeste brasileiro, com 81,1% do estado de Pernambuco, com baixos indicadores de escolaridade (frequência à escola de até 4 anos: 52,7% e renda familiar de até 1 salário mínimo: 64,7%). Há predominância feminina (64%), com igualdade entre grupos (p=0,3). Idade média de 55 anos, sendo mais jovens no estágio A (idade média: 51 anos) (p=0,001). A hipertensão arterial sistêmica esteve presente em 40% da população, com discreto predomínio entre pacientes do estágio C (p=0,05), e a Diabetes esteve presente em 8%, sem diferença entre os grupos (p=0,5). A fração de ejeção do ventrículo esquerdo média do estágio C foi 38±9% e de 67±5% no estágio A. Na avaliação de associação entre os genótipos dos polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA e as distintas formas clínicas na DCh foi encontrada associação entre o genótipo II no polimorfismo da ECA e a permanência no estágio A. O padrão não permaneceu quando a avaliação do OR foi ajustada para sexo, idade e uso de benznidazol e também no estudo por alelos, evidenciando ausência de associação entre todos os polimorfismos estudados. Conclusão: os polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA pesquisados não se constituíram em marcadores de risco para o desenvolvimento de CCC grave / Intoduction: Chagas disease (CD) is a neglected disease, with progression to severe forms in 30% of cases. In the past, it was restricted to Latin America. However, in recent decades, the phenomenon of migration has led to its epidemiological profile having changed and the disease is now a global one. Despite undeniable advances having taken place in Brazil in recent decades, there remain close to 3 million cases. Regional inequalities are found including unfavorable indicators in the Northeast which are not only about the predominance of cases in children, identified by serological evaluation, but also the number of deaths related to CD. In the chronic phase, a broad spectrum of presentations can be found, ranging from the indeterminate form, with favorable evolution, to patients with severe cardiac involvement and high mortality. Given the heterogeneous presentation, predictions on the risk of progression and death due to CD remain very challenging. Greater still is the identification of their determining factors, particularly as to the type of cardiac involvement. Thus, it is possible that genetic markers may contribute effectively, given this situation. The value of polymorphisms in the genes of the tumor necrosis factor (TNF), and of the angiotensin converting enzyme (ACE) in Chagas\' disease is controversial. Objective: To assess whether the I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 are risk factors for the occurrence of heart failure (HF) in chronic Chagas cardiomyopathy (CCC), in the population of Northeast Brazil. Materials and methods: A case-control study was conducted. 201 patients with T. cruzi + classified in stages, in accordance with the Latin American guideline for Chagas cardiopathy - Brazilian Society of Cardiology, were analyzed. These included 99 patients in stage C (presence of ventricular dysfunction (defined as the ejection fraction of the left ventricle being less than 50%) and previous or current symptoms of HF and 102 patients in stage A (asymptomatic patients) whose electrocardiograms and echocardiograms were normal. Those with digestive manifestation were excluded. The I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 were analyzed. Results: The general profile of the population studied presents patients from states in the Northeast of Brazil of whom 81.6% are from the State of Pernambuco, and whose education indicators are low (4 years of elementary schooling: 52.7%) and whose family income is up to 1 minimum wage: 64.7%. Females predominate (64%), with equality between groups (p=0.3). Average age is 55 years and younger in Stage A (mean age: 51 years) (p=0.001). Systemic arterial hypertension was present in 40% of the population, with a slight predominance among patients in Stage C (p=0.05), and 8% had Diabetes, with no difference between groups (p=0.5). The mean ejection fraction of the left ventricular of Stage C patients was 38±9% and 67±5% in stage A patients. On evaluating the association between the genotypes of the I/D polymorphisms of TNF-308 and the ACE gene and the distinct clinical forms in CD, an association was found between genotype A in the polymorphism of ACE and permanence in Stage A. The pattern did not remain when the evaluation of OR was adjusted for sex, age and use of benznidazole, nor did it in the study by alleles, thus showing evidence of the absence of association between all of the polymorphisms studied. Conclusion: The TNF-308 polymorphisms and the I/D of the ACE gene surveyed were not found to be risk factors for the development of serious CCC

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Alejandro Luquetti Ostermayer.pdf: 346489 bytes, checksum: c2559928ce370a8044e13975ad38a042 (MD5) Previous issue date: 2011-07-18 / The main papers published on the last five years on the area of human Chagas disease, mainly on parasitological, serological and therapeutic aspects, reflecting areas of recent involvment of the author, were selected. As a baseline, briefly comments on publications on the last 40 years were included. Parasitemia profile measured by hemoculture during the chronic infection was the subject of the first two. The first (published in 2006) included six hemocultures from each of 27 patients, the last three after specific treatment. Results were compared with those of 13 non treated, infected patients. The supressive effect of benznidazole was demonstrated in 89% of the patients and treatment failure was registered in three cases (11%) during the two year follow-up. In the second paper (2011) a single hemoculture was performed in 152 infected women, 101 pregnant. Parasitemic pregnant women doubled the number of non-pregnant, mainly during the first months of pregnancy. A new ELISA test was developed (2010) by employing two recombinant proteins and two synthetic peptides. Sensitivity was 99.3% on 165 positive sera, and specificity of 100% (216 negatives). A multicentric study was done (2009) with participation of laboratories of North America (Mexico), Central America (Honduras) and South America (Brazil) with 98 serum samples from patients of Mexico employing reagents made from Tc1 and Tc2 strains. Results showed good agreement among laboratories demonstrating the feasibility of using reagents prepared from both types of T. cruzi. In another multicentric study (Bolivia, Argentina and Brazil) xenodiagnosis performed in 17 patients after a 60 days course of allopurinol treatment, remained positive, showing the lack of effect of this drug in the chronic phase. A national serological survey in children born after insecticide spraying (below five years old) with filter paper, involved 104,954 samples, tested with ELISA and indirect immuofluorescence. Only 11 samples (0.01%) were identified as by vector transmission (negative mothers) mainly from the northeast of the country, areas without Triatoma infestans. These findings (2011) confirm the effectivity of house spraying for the control of the disease. As a sub-product of this investigation, an unusual number of cases of congenital transmission (n = 12) was found only in the State of Rio Grande do Sul, where TcV-TcVI circulates. When compared with other states (n=8) the proportion was 10 times higher. This is the first report on geographical differences related to congenital transmission in Brazil. We considered that all these findings contributed significantly to a better knowledge on different aspects of Chagas disease. / Foram selecionados os principais trabalhos publicados nos últimos cinco anos na área de doença de Chagas no homem, com ênfase em aspectos parasitológicos, de diagnóstico sorológico e de tratamento, os quais refletem o foco das investigações do autor neste período. Como embasamento desses estudos foram brevemente comentados artigos publicados nos últimos quarenta anos. O perfil parasitêmico no indivíduo infectado crônico, por meio de hemocultura, foi objeto de dois artigos. No primeiro (publicado em 2006), foi determinada a parasitemia em 27 pacientes, por meio de três hemoculturas seriadas antes do tratamento específico e três após. Os resultados foram comparados com os de 13 pacientes não tratados. O efeito terapêutico do benznidazol no sentido de supressão da parasitemia foi detectado em 89%, enquanto que a falha terapêutica foi comprovada em três casos (11%) nos primeiros dois anos. No segundo (2011), foi realizada hemocultura em 101 gestantes e 51 mulheres não grávidas, todas infectadas. A parasitemia foi o dobro nas gestantes (60,4%), em relação às não grávidas, em particular nos primeiros meses da gestação. Um ensaio imunoenzimático (ELISA) (2010) foi desenvolvido com dois antígenos recombinantes e dois peptídios sintéticos, com sensibilidade de 99,3% (em 165 soros reagentes) e especificidade de 100% (em 216 negativos). Em estudo multicêntrico, com a participação de laboratórios da América do Norte (México), Central (Honduras) e do Sul (Brasil), em 98 amostras de soro de pacientes do México (2009), foi encontrada excelente concordância entre os laboratórios, empregando-se testes sorológicos de diferentes origens (TcI e II), demonstrando que antígenos de diferentes cepas de Trypanosoma cruzi apresentam desempenho similar. Em estudo multicêntrico (Bolívia, Argentina e Brasil) foi demonstrado, por xenodiagnóstico, que o allopurinol não teve efeito parasiticida em 17 pacientes, em comparação com dez não tratados (estudo do Brasil), pela persistência do exame parasitológico positivo em todos os tratados (2007). Em inquérito nacional sorológico em crianças que nasceram após as medidas de controle (abaixo de cinco anos) de toda a área rural do Brasil (n = 104.954) foram encontradas 104 (0,1%) amostras positivas em papel-filtro (ELISA e imunofluorescência indireta), sendo confirmadas com soro apenas 11 de transmissão vetorial (0,01%), todas em municípios sem Triatoma infestans. Este trabalho confirma a efetividade da borrifação com inseticidas no Brasil (2011). Como sub-produto desse trabalho, verificou-se que a transmissão congênita foi 10 vezes superior no estado do Rio Grande do Sul (TcV-VI) com 12 casos, em comparação com outros oito no restante do país, demonstrando pela primeira vez diferenças geográficas no tocante à transmissão vertical no Brasil. Consideramos que os trabalhos apresentados contribuíram efetivamente ao conhecimento de diferentes aspectos da doença de Chagas.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-27T12:04:45Z No. of bitstreams: 1 marcelle-bral-de-mello.pdf: 1087389 bytes, checksum: 74eb4d07ffe50812d0cea3fd71cdf47a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T12:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcelle-bral-de-mello.pdf: 1087389 bytes, checksum: 74eb4d07ffe50812d0cea3fd71cdf47a (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Bio-Manguinhos produz, desde a década de 80, Kits para diagnóstico, inclusive para o diagnóstico da doença de Chagas. O kit EIE-Recombinante-Chagas, que utiliza na sua composição as proteínas recombinantes CRA e FRAdo T. cruzi, foi registrado como produto junto à ANVISA no ano de 1999. No período de renovação do registro, o Kit passou por uma avaliação prévia no INCQS, onde não foi possível alcançar condição satisfatória quanto aos níveis de sensibilidade. O presente trabalho teve por objetivo retomar a padronização deste Kitno âmbito do desenvolvimento tecnológico. Para tanto foi estabelecido a padronização de três modelos de protótipos, utilizando variações das construções disponíveis das proteínas recombinantes CRA e FRA, na forma de apresentação como antígeno e como conjugado. Posteriormente, foi avaliado o desempenho de cada protótipo, em três diferentes fases. Na primeira fase, o melhor desempenho foi apresentado pelo protótipo 3, cujos níveis de sensibilidade e especificidade foram respectivamente de 99% e 99,5% (IC 95%). Na segunda fase o nível de sensibilidade do protótipo 3 foi de 95.8% e o de especificidade 100%, mantendo a melhor condição de desempenho em relação aos demais. Na última fase, somente o protótipo 3 foi avaliado em função da indisponibilidade de volume das amostras selecionadas e os níveis de sensibilidade e especificidade encontrados de 100%.O desempenho do protótipo 2 foi insatisfatório nas duas primeiras fases de avaliação.Tendo em vista o bom desempenho alcançado pelo protótipo 3, propomos a continuação deste modelo na elaboração futura de lotes-piloto, de estudos multicêntricos e de validação, em ações conjuntas com o controle e a garantia da qualidade para a elaboração de documentação visando pedido de registro desse produto junto aos órgãos regulatórios. / Bio-Manguinhos produces, since the 80’s, a variety of kits for diagnosis, including the kit for Chagas’ disease diagnostic. The EIE-Recombinant-Chagas’ kit, which has in its constitution the recombinant proteins CRA and FRA from T. cruzi, was registered at ANVISA as a product in 1999. During the renewal of the registration period, the kit was submitted to a previous registration analysis by The National Institute for Quality Control in Health (INCQS), when it did not show satisfactory sensitivity levels. The present work aimed to remake the kit standardization process under the scope of the technological development. In order to do it, we established the standardization of three prototype models, each one using variations of available constructions from CRA and FRA recombinant proteins in the form of presentation as antigen and as conjugate. Afterwards, we evaluated the performanceof each prototype, in three different stages. In the first one, prototype 3 showed the best performance with 99% sensitivity and 99.5% specificity levels (CI 95%). In the second stage, prototype 3 levels sensitivity and specificity were 95.8% and 100% respectively, keeping the best performance condition as compared to the other two prototypes. In the last stage, only prototype 3 was assessed due to the lack of sample volumes. The reported sensitivity and specificity levels forsuch prototype were equal to 100%. The performance of prototype 2 was unsatisfactory in the first two assessment stages. Taking into account the performance achieved by prototype 3, we propose the continuation of this model for future development of pilot lots, multicenter and validation studies, in joint actions with quality assurance and quality control for the arrangement of the documents requested by the National Regulatory Agency for the registration of the product.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-10-19T13:04:45Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarlotaJosefoviczBelisário.pdf: 4313033 bytes, checksum: 60ab172cbc6f3043ea324ea72968567a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-10-19T13:13:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarlotaJosefoviczBelisário.pdf: 4313033 bytes, checksum: 60ab172cbc6f3043ea324ea72968567a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:13:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_CarlotaJosefoviczBelisário.pdf: 4313033 bytes, checksum: 60ab172cbc6f3043ea324ea72968567a (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A doença de Chagas (DC) é uma enfermidade causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, cuja principal forma de transmissão é através das fezes de triatomíneos infectados. O Panstrongylus megistus atualmente é o principal vetor do Brasil, sendo responsável pela transmissão da DC na região da Serra do Cipó, MG, na década de 80. O P. megistus possui alta capacidade de reinfestação das casas, exigindo permanente vigilância contra a instalação de novos focos. O peridomicílio apresenta grande importância para a manutenção de triatomíneos e do T. cruzi circulando entre barbeiros e os animais que o frequentam. O objetivo do trabalho foi avaliar o cenário ecoepidemiológico da doença de Chagas no entorno do Parque Nacional da Serra do Cipó (ParnaCipó), visando subsidiar o programa de controle do P. megistus. O estudo se realizou nos municípios de Jaboticatubas e Santana do Riacho que, juntamente com Morro do Pilar e Itambé do Mato Dentro, integram o ParnaCipó. O perfil de infestação pelo P. megistus foi determinado através de captura de triatomíneos nas unidades domiciliares (setembro de 2007 a setembro de 2010) e capturas silvestres, que também incluiram avaliação da infecção em marsupiais e roedores. Cães levados à campanha de vacinação antirrábica de Jaboticatubas foram examinados a fim de determinar sua importância epidemiológica na região. Exemplares de P. megistus capturados foram utilizados para análise populacional pela morfometria geométrica. Os exemplares provenientes de Jaboticatubas foram ainda analisados por RAPD para estudo populacional. As cepas isoladas dos reservatórios e vetores foram caracterizadas como pertencentes ao grupo T. cruzi I ou T. cruzi II utilizando‐se DNA satélite como alvo. A maioria dos exemplares P. megistus foi capturada em galinheiros; no intradomicílio o ecótopo preferencial foi o quarto. Foram realizadas pesquisas em 15 áreas silvestres com a captura de 105 mamíferos, com taxa de infecção de 6,7%; todas as cepas foram caracterizadas como T. cruzi I. A prevalência em cães foi de 2,4%. Em palmeiras foram capturados Rhodnius neglectus, P. megistus e Triatoma sordida. Dentre as cepas isoladas de triatomíneos domiciliados e silvestres, apenas uma cepa proveniente do ambiente domiciliar foi caracterizada como T. cruzi II, as demais, T. cruzi I. A morfometria diferenciou a população silvestre das domiciliares. A RAPD demonstrou grande variabilidade dos P. megistus de Jaboticatubas, entretanto, sem diferenciação populacional. Frente aos resultados, podemos concluir que a população rural dos dois municípios permanece sob o risco de infecção pelo T. cruzi, uma vez que são encontrados vetores e reservatórios infectados no ambiente artificial e natural, e podem infestar as habitações a partir de diversos focos, domiciliares ou silvestres. / Chagas disease (CD) is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, whose main mode of transmission is through the feces of infected bugs. Panstrongylus megistus is currently the main vector in Brazil, being responsible for the CD transmition in Serra do Cipo, MG, in the 80s. P. megistus has high capacity to reinfestate the houses, requiring constant vigilance against the installation of new focus. The peridomicile has great importance for the maintenance of triatomine bugs and the T. cruzi circulating among triatomines and the animals that occure in this environment. The objective of this study was to evaluate the ecoepidemiologic scenario of Chagas disease in the surrounding of the National Park of Serra do Cipo (ParnaCipó), aiming to support the control program of the P. megistus. The study was conducted in the municipalities of Jaboticatubas and Santana do Riacho, which together with Morro do Pilar and Itambé do Mato Dentro, integrate the ParnaCipó. P. megistus infestation profile was determined by capturing triatomines in the households (September 2007 to September 2010) and in wild captures, which were also performed to evaluate the rodents and marsupials infection. Dogs carried to the anti‐rabies vaccination campaign of the Jaboticatubas were examined to determine their prevalence in the region. The P. megistus exemplaries captured were used to the geometric morphometry analisis. Specimens from Jaboticatubas were further analyzed by RAPD for population study. The strains isolated from reservoirs and vectors were characterized as T. cruzi I or T. cruzi II using satellite DNA as target. Most P. megistus was captured in chicken coops; inside the houses the preferred ecotope was the bedroom. Were investigated 15 wild areas with the capture of 105 mammals, with infection rates of 6.7%, all strains were characterized as T. cruzi I. The prevalence in dogs was 2.4%. In the palm trees examined were captured Rhodnius neglectus, P. megistus and Triatoma sordida. Among the strains isolated from the domiciled and wild triatomines, only one from the intradomicile was characterized as T. cruzi II, the others were T. cruzi I. The morphometric analysis differentiated the wild from the domestics populations. The RAPD showed great variability of P. megistus in Jaboticatubas, however, without population differentiation. Based on the results, we conclude that the rural population of both municipalities remains at risk of infection by T. cruzi, since the infected vectors in artificial and natural environment follow to be found, and can infest the dwellings from various domestic or wild focus.

Introdução: A DCh (doença de Chagas) é uma doença negligenciada, com evolução para formas graves em 30% dos casos. No passado, era restrita à América Latina, entretanto, nas últimas décadas, o fenômeno migratório modificou o perfil epidemiológico, globalizando a doença. Inegáveis avanços aconteceram no Brasil, nas últimas décadas, mesmo assim, restam aproximadamente 3 milhões de pacientes. Desigualdades regionais são encontradas, com indicadores desfavoráveis na região Nordeste, relacionados não só ao predomínio de casos em crianças, identificados por avaliação sorológica, mas também pelo número de mortes relacionado à doença. Na fase crônica, amplo espectro de apresentações pode ser encontrado, variando desde a forma indeterminada, com favorável evolução, até pacientes com grave envolvimento cardíaco e alta mortalidade. Diante da apresentação heterogênea, a predição do risco de evolução e morte na DCH continua sendo um grande desafio. Maior ainda é a identificação de fatores determinantes, sobretudo do tipo de acometimento cardíaco. Assim, é possível que marcadores genéticos possam contribuir efetivamente, nesse cenário. O valor dos polimorfismos nos genes do fator de necrose tumoral (TNF) e da enzima conversora da angiotensina (ECA) na doença de Chagas é controverso. Objetivo: avaliar se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308 são marcadores de risco para a ocorrência de Insuficiência cardíaca na cardiopatia chagásica crônica (CCC), em população do Nordeste brasileiro. Material e métodos: realizado estudo tipo caso-controle. Foram analisados 201 pacientes portadores de T. cruzi + classificados em estágios, de acordo com a Diretriz Latino Americana para Cardiopatia Chagásica - Sociedade Brasileira de Cardiologia. Foram incluídos 99 pacientes em estágio C com presença de disfunção ventricular, definida por fração de ejeção do ventrículo esquerdo menor que 50% e sintomas prévios ou atuais de IC e 102 em estágio A, pacientes assintomáticos, com eletrocardiograma e ecocardiograma normais. Foram excluídos portadores de manifestação digestiva. Analisaram-se os polimorfismos da I/D da ECA e do TNF-308. Resultados: o perfil geral da população estudada apresenta pacientes naturais de estados do Nordeste brasileiro, com 81,1% do estado de Pernambuco, com baixos indicadores de escolaridade (frequência à escola de até 4 anos: 52,7% e renda familiar de até 1 salário mínimo: 64,7%). Há predominância feminina (64%), com igualdade entre grupos (p=0,3). Idade média de 55 anos, sendo mais jovens no estágio A (idade média: 51 anos) (p=0,001). A hipertensão arterial sistêmica esteve presente em 40% da população, com discreto predomínio entre pacientes do estágio C (p=0,05), e a Diabetes esteve presente em 8%, sem diferença entre os grupos (p=0,5). A fração de ejeção do ventrículo esquerdo média do estágio C foi 38±9% e de 67±5% no estágio A. Na avaliação de associação entre os genótipos dos polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA e as distintas formas clínicas na DCh foi encontrada associação entre o genótipo II no polimorfismo da ECA e a permanência no estágio A. O padrão não permaneceu quando a avaliação do OR foi ajustada para sexo, idade e uso de benznidazol e também no estudo por alelos, evidenciando ausência de associação entre todos os polimorfismos estudados. Conclusão: os polimorfismos TNF-308 e I/D do gene da ECA pesquisados não se constituíram em marcadores de risco para o desenvolvimento de CCC grave / Intoduction: Chagas disease (CD) is a neglected disease, with progression to severe forms in 30% of cases. In the past, it was restricted to Latin America. However, in recent decades, the phenomenon of migration has led to its epidemiological profile having changed and the disease is now a global one. Despite undeniable advances having taken place in Brazil in recent decades, there remain close to 3 million cases. Regional inequalities are found including unfavorable indicators in the Northeast which are not only about the predominance of cases in children, identified by serological evaluation, but also the number of deaths related to CD. In the chronic phase, a broad spectrum of presentations can be found, ranging from the indeterminate form, with favorable evolution, to patients with severe cardiac involvement and high mortality. Given the heterogeneous presentation, predictions on the risk of progression and death due to CD remain very challenging. Greater still is the identification of their determining factors, particularly as to the type of cardiac involvement. Thus, it is possible that genetic markers may contribute effectively, given this situation. The value of polymorphisms in the genes of the tumor necrosis factor (TNF), and of the angiotensin converting enzyme (ACE) in Chagas\' disease is controversial. Objective: To assess whether the I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 are risk factors for the occurrence of heart failure (HF) in chronic Chagas cardiomyopathy (CCC), in the population of Northeast Brazil. Materials and methods: A case-control study was conducted. 201 patients with T. cruzi + classified in stages, in accordance with the Latin American guideline for Chagas cardiopathy - Brazilian Society of Cardiology, were analyzed. These included 99 patients in stage C (presence of ventricular dysfunction (defined as the ejection fraction of the left ventricle being less than 50%) and previous or current symptoms of HF and 102 patients in stage A (asymptomatic patients) whose electrocardiograms and echocardiograms were normal. Those with digestive manifestation were excluded. The I/D polymorphisms of ACE and TNF-308 were analyzed. Results: The general profile of the population studied presents patients from states in the Northeast of Brazil of whom 81.6% are from the State of Pernambuco, and whose education indicators are low (4 years of elementary schooling: 52.7%) and whose family income is up to 1 minimum wage: 64.7%. Females predominate (64%), with equality between groups (p=0.3). Average age is 55 years and younger in Stage A (mean age: 51 years) (p=0.001). Systemic arterial hypertension was present in 40% of the population, with a slight predominance among patients in Stage C (p=0.05), and 8% had Diabetes, with no difference between groups (p=0.5). The mean ejection fraction of the left ventricular of Stage C patients was 38±9% and 67±5% in stage A patients. On evaluating the association between the genotypes of the I/D polymorphisms of TNF-308 and the ACE gene and the distinct clinical forms in CD, an association was found between genotype A in the polymorphism of ACE and permanence in Stage A. The pattern did not remain when the evaluation of OR was adjusted for sex, age and use of benznidazole, nor did it in the study by alleles, thus showing evidence of the absence of association between all of the polymorphisms studied. Conclusion: The TNF-308 polymorphisms and the I/D of the ACE gene surveyed were not found to be risk factors for the development of serious CCC

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:29:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gustavo Carvalho.pdf: 688659 bytes, checksum: 64c90851349790785086b6829b1f9537 (MD5) Previous issue date: 2011-03-21 / Background: The concomitance of asymptomatic coronary heart disease in patients with Chagas cardiomyopathy with heart failure is not well known in medical literature, and both are very prevalent in some regions of Brazil. Objective: Determine the prevalence of coronary disease (lesion>50%) in a specific group of patients with Chagas cardiomyopathy and heart failure, in functional class III and IV, with no previous symptoms or diagnosis of coronaryopathy. Methods: Coronary angiography was performed in 61 consecutive patients with Chagas cardiomyopathy with heart failure, functional class III and IV, to exclude coronary heart disease. These patients were part of study protocol of cell therapy in heart disease, which required the implementation of coronary angiography before injecting stem cells. Risk factors for atherosclerosis also analyzed in this population were: age, hypertension, diabetes, dyslipidemia, smoking and overweight. Results: ages 51.6 + 9.6 years 65.5%(n = 40) men. The prevalence of coronary disease found in this population was 1.6%(1). The prevalence of risk factors were: hypertension 18%(11), smoking 59%(36), diabetes 1.6%(1) and dyslipidemia 6.5%(4). Conclusion: The prevalence of asymptomatic coronary disease in patients with chagasic etiology severe heart failure is low and among the risk factors for coronary heart disease, smoking was the most prevalent. / Fundamento: A concomitância da doença arterial coronária assintomática em pacientes com cardiomiopatia chagásica em IC não é bem definida na literatura médica, sendo ambas muito prevalentes em algumas regiões do Brasil. Objetivo: Determinar a prevalência da coronariopatia(lesões > 50%) em uma população específica de pacientes com cardiomiopatia chagásica e IC em classe funcional III e IV, que não apresentavam clínica ou diagnóstico prévio de coronariopatia. Métodos: Foi realizada a cineangiocoronariografia em 61 pacientes consecutivos, portadores de cardiomiopatia chagásica, em IC classe funcional III e IV, para se excluir coronariopatia. Estes pacientes faziam parte do protocolo do Estudo de Terapia Celular em Cardiopatias, que exigia a realização da cineangiocoronariografia antes de se injetar as células-tronco. Os fatores de risco para aterosclerose, também analisados nesta população, foram: idade, hipertensão arterial, diabetes, dislipidemia, tabagismo e sobrepeso. Resultados: Idade média 51,6 + 9,6 anos, 65,5%(n=40) homens. A prevalência de coronariopatia encontrada nesta população foi de 1,6%(1). As prevalências dos fatores de risco foram: hipertensão arterial 18%(11), tabagismo 59%(36), diabetes 1,6%(1) e dislipidemia 6,5%(4). Conclusão: A prevalência da coronariopatia assintomática em pacientes com IC grave de etiologia chagásica é baixa e entre os fatores de risco para doença coronária o tabagismo foi o mais prevalente.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Boaventura.pdf: 941307 bytes, checksum: 439636680eb32ef1d8b5574e0286aa19 (MD5) Previous issue date: 2008-02-29 / Chagas disease is a zoonotic disease caused by a protozoan plagued called Trypanosoma cruzi, it is a particular problem in Latin America, where it is estimated that 12 to 14 million people are infected. The populations of Trypanosoma cruzi can be divided into two major groups, the Trypanossoma cruzi I (TCI) and Trypanossoma cruzi II (TCII), the last being more heterogeneous and divided into five subgroups TCIIa, TCIIb, TCIIc, TCIId and TCIIe However, little is known of epidemiological and clinical implications of these ratings. The frequency of vertical transmission of Chagas disease can vary from 1.6 to 18.5% in accordance with the region and the methodology used in the studies. The aim of this study was to genetic characterization of 30 isolates of T. cruzi through the blood of patients with Chagas disease in the chronic phase, pregnant and not pregnant. The genetic characterization was performed with three different markers that amplified regions of the 18S and 24S α DNA ribosomal and mini-exon of the gene that allows classify the groups and subgroups of the parasite and the analysis of genetic variability among isolates of T. cruzi was performed the characterization of the variable region of minicicles of kDNA through the technique of Low-Stringency Single Specific Primer-PCR (LSSP-PCR). The 30 patients studied 75% (25/30) were women and 25% (5 / 30) not pregnant. The patients are the four different Brazilian regions being the States of Bahia 53.3% (16/30), Goiás 40.0% (12/30), Paraíba 3.3% (1 / 30) and the Federal District 3, 3% (1 / 30). The analysis of rDNA allowed show the TCII in 100% of the isolated populations in the regions studied, where the subgroup TCIIb/e has been detected in (96.66%) and TCIId in (3.33%) the latter is a sample of the group Control of the State of Bahia. The genetic variability between the 30 samples was 24.08 ± 14.4% share of bands among pairs. There was no difference between the share of bands patients of Bahia and Goiás, where the value of significance was less than 5%. There was no difference between the percentages of bands showed in analyses by age of the patients, gestational age and in the analysis of the groups of pregnant and not pregnant. In reviewing more than one tube of blood per patient coming evidenced profiles of signatures genomic complex and heterogeneous with 62.5% of bands shared less than 77% and only 37.5% had rates higher than 83% of bands sharing among samples. Suggesting so our isolates showed a great genetic variability. / A doença de Chagas é uma zoonose causada por um protozoário flagelado denominado Trypanosoma cruzi, trata-se de um problema específico da América Latina, onde estima-se que 12 a 14 milhões de pessoas estejam infectadas. As populações de Trypanosoma cruzi podem ser divididas em dois grandes grupos, o Trypanossoma cruzi I (TCI) e o Trypanossoma cruzi II (TCII), sendo o último mais heterogêneo e subdividido em cinco subgrupos TCIIa, TCIIb, TCIIc, TCIId e TCIIe, porém, pouco se sabe das implicações clínicas e epidemiológicas dessas classificações. A freqüência da transmissão vertical da doença de Chagas pode variar de 1,6 a 18,5% de acordo com a região e a metodologia usada nos estudos. O objetivo desse estudo foi a caracterização genética de 30 isolados de T. cruzi por meio da hemocultura de pacientes com doença de Chagas na fase crônica, gestantes e não gestantes. A caracterização genética foi realizada com três diferentes marcadores que amplificaram regiões 24Sα e 18S do DNA ribossômico e do gene mini-exon que permite classificar os grupos e subgrupos do parasito e para a análise da variabilidade genética entre os isolados do T. cruzi foi realizada a caracterização da região variável dos minicírculos do kDNA por meio da técnica de Low stringency specifc primer (LSSP-PCR), das 30 pacientes estudadas 75% (25/30) eram gestantes e 25% (5/30) não gestantes. As pacientes são de quarto regiões brasileiras distintas sendo elas dos Estados da Bahia 53,3% (16/30), Goiás 40,0% (12/30), Paraíba 3,3% (1/30) e Distrito Federal 3,3% (1/30). A análise do rDNA permitiu evidenciar o TCII em 100% das populações isoladas nas regiões estudadas, onde o subgrupo TCIIb/e foi detectado em (96,66%) e o TCIId em (3,33%) este último corresponde a uma amostra do grupo controle do Estado da Bahia. A variabilidade genética entre as 30 amostras analisadas foi de 24,08 ± 14,4% de compartilhamento de bandas entre os pares. Houve diferença no compartilhamento de bandas entre as pacientes da Bahia e Goiás, onde o valor de significância foi menor que 5%. Não houve diferença entre as porcentagens de bandas compartilhadas nas análises realizadas por faixa etária das pacientes, idade gestacional e na análise dos grupos de gestantes e não gestantes. Ao analisar mais de um tubo proveniente da hemocultura por paciente evidenciamos perfis de assinaturas gênicas complexas e heterogêneas com 62,5% de bandas compartilhadas menor que 77% e apenas 37,5% tiveram índices maiores que 83% de compartilhamento de bandas entre as amostras. Sugerindo assim que nossos isolados apresentaram uma grande variabilidade genética.

A doença de Chagas, causada por um protozoário flagelado denominado Trypanosoma cruzi, acomete milhares de pessoas ao redor do mundo. O tratamento continua parcialmente ineficaz, envolvendo terapias específicas dirigidas ao parasita assim como terapias adjuvantes em conduta para as manifestações clínicas. No Brasil, o benzonidazol (N-benzil-2-nitroimidazol-1-acetamida) vem sendo o único medicamento disponível para o tratamento etiológico da doença, porém pode causar efeitos colaterais aos pacientes infectados. Há emergente necessidade de avaliar o potencial de novas drogas para modular o sistema imune em resposta a agressão parasitária. A grelina tem demonstrado, em estudos recentes, ser uma importante substância com função cardioprotetora, vasodilatadora, anti-apoptótica e antioxidativa. No entanto, pouco se sabe da ação imunomoduladora da grelina na doença de Chagas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos cardioprotetores e imunomoduladores da grelina em ratos Wistar machos infectados pela cepa Y de T. cruzi. Foram analisados os seguintes parâmetros: quantificação dos parasitas sanguíneos e teciduais, análise de marcadores celulares (CD3+, CD4+, CD8+, NK, NKT, CD45RA+, macrophage e RT1B+) e produção de óxido nítrico. Além disso, outros parâmetros foram analisados, entre eles, os ensaios de linfoproliferação, apoptose de esplenócitos e avaliação de registros eletrocardiográficos. A grelina por si só não ocasionou uma diminuição da parasitemia sanguínea, tecidual ou na quantificação de óxido nítrico, porém exerceu com maestria sua ação anti-apoptótica e antiinflamatória conferindo redução do processo inflamatório cardíaco e da destruição tecidual. A associação com benzonidazol não proporcionou uma potencialização da resposta imune / Chaga\'s disease, caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, affects thousands of people around the world. The treatment remains partially ineffective, involving targeted therapies directed to the parasite as well as adjuvant therapies for the clinical manifestations. In Brazil, the benzonidazole (N-benzyl-2-nitroimidazol-1- acetamide) is the only drug available for the etiological treatment of the disease, with several side effects. There is an emerging need to evaluate potential new drugs to modulate the immune system against the parasitic aggression. Ghrelin a peptide hormone has been pointed as a substance with important cardioprotective, vasodilatory, anti-apoptotic and anti-oxidative functions. The lack of literature concerning to the immunomodulatory action of ghrelin in Chagas\' disease, turns this work inedit. For that, the objectives of this study was to evaluate the cardioprotective and immunomodulatory effects of ghrelin in male Wistar rats infected with the Y strain of T. cruzi. The following parameters were analyzed: quantification of blood and tissue parasites, analysis of cell markers (CD3+, CD4+, CD8+, NK, NKT, CD45RA+, macrophage and RT1B+), nitric oxide production, lymphoproliferation assays, splenocyte apoptosis and evaluation electrocardiographic records. Ghrelin alone did not exert any action in reducing blood or tissue parasitemia, as well as the nitric oxide quantification, but it exerted with mastery its anti-apoptotic and antiinflammatory actions triggering a reduction of the cardiac inflammatory process and tissue destruction. The combination with benzonidazole did not provide a synergic action of the immune response