Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2015-10-28T14:48:53Z No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-11-06T13:51:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-06T13:51:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5) / O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das principais hortaliças cultivadas no Brasil. A cultura pode ser afetada por diversas doenças, dentre elas destaca-se a murcha de fusário, que já foi relatada na maioria dos países onde o tomateiro é cultivado. O fungo Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) infecta tanto espécies cultivadas como espécies selvagens de tomateiro, onde coloniza as raízes e invade o sistema vascular, causando amarelecimento, murcha e posterior morte da planta. Três fatores de resistência têm sido identificados e caracterizados em espécies de Solanum (Lycopersicon) e incorporados em cultivares e híbridos comerciais. Os isolados de Fol têm sido agrupados em três raças, de acordo com a habilidade de infectar e causar doença em um conjunto de acessos diferenciadores contendo os loci de resistência I, I-2 e I-3. A identificação e caracterização genética de novas fontes e de novos alelos de resistência, bem como o estabelecimento de uma plataforma de seleção assistida por marcadores desses fatores já caracterizados, seriam importantes contribuições no sentido de aumentar a eficiência dos programas de melhoramento, permitindo, inclusive, que os melhoristas antecipem potenciais problemas relacionados ao surgimento de novas raças de Fol. Um dos principais objetivos dos modernos programas de melhoramento para resistência a doenças é o estabelecimento de sistemas de marcadores moleculares para caracterizar tanto a diversidade dos patógenos como para identificar regiões genômicas contendo alelos de resistência na planta hospedeira. Essas ferramentas moleculares fornecem uma visão mais completa do patossistema de interesse para o melhorista uma vez que possibilitam: (1) a caracterização em larga escala de um grande número de genótipos do patógeno e de genitores contrastantes da planta hospedeira; (2) a seleção de isolados representativos do patógeno para uso em sistemas efetivos de seleção e (3) a identificaçãode genes ou regiões genômicas da planta hospedeira contendo fatores de resistência. Neste contexto, os objetivos do presente trabalho foram: estudar a diversidade genética-molecular de isolados das três raças de Fol e buscar marcadores moleculares do tipo raça-específicos (Capítulo 2). Nesse trabalho, uma coleção de isolados de Fol foi caracterizada utilizando uma combinação de primers do tipo raça-específicos descritos na literatura com sendo capazes de discriminar isolados das três raças de Fol e também isolados F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici. A diversidade entre as raças foi avaliada utilizando primers universais buscando polimorfismos que serviram de base para o desenho de novos primers raça-específicos. Estes estudos são de grande valor no diagnóstico e na identificação de diferentes isolados de forma rápida e eficaz. Outro objetivo foi a caracterização genética de populações segregantes obtidas a partir de cruzamentos entre genótipos suscetíveis e resistentes às diferentes raças, visando identificar e validar novos marcadores associados a resistência a murcha de fusário em tomateiro (Capítulos 3 e 4). Para isso, as populações F2 foram inoculadas, com uma suspensão de esporos do patógeno, por meio de corte e imersão de raízes, e avaliadas quanto à resistência por meio de uma escala de notas. O DNA genômico de plantas resistentes e suscetíveis em populações segregantes para as raças 1 e 3 de Fol foi extraído e usado como molde em diferentes sistemas de marcadores, visando identificar polimorfismos ligados as essas duas características em estudo. Além disso, primers já descritos foram avaliados nas populações segregantes, para validar sua ligação aos loci de resistência. Esse aporte de informações de genômica e bioinformática tem aumentado a eficiência e oferecido uma maior segurança no processo de seleção de plantas superiores dentro dos programas de melhoramento. / The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the main vegetable crops grown in Brazil, being affected by a variety of diseases under open field and protected crop conditions. Fusarium wilt has been reported in most countries where tomatoes are cultivated. The causal agent is the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), which is able to infect both cultivated and wild tomato species. This fungus colonizes the roots and invades the vascular system, causing yellowing, wilting, and plant death. Three resistance loci (I, I-2 and I-3) have been characterized in wild species of Solanum (section Lycopersicon) and incorporated into commercial cultivars. The Fol strains have been grouped into three races, according to their ability to infect and cause disease in a set of differential accessions carrying one of these three resistance loci. Identification and genetic characterization of new resistance alleles and the establishment of a marker-assisted selection platform of the already known alleles can increase the efficiency of breeding programs, allowing the breeders to anticipate potential problems related to the emergence of new races of Fol. A major objective of breeding programs is the identification of molecular markers linked to resistance alleles that allow the characterization of a large number of genotypes, selection of parental inbred lines and detection of genes of agronomic interest. Thus, the objectives of the present study were to survey the diversity of a collection of Fol races and the search for Fol race-specific molecular markers (Chapter 2). The collection of Fol isolates was characterized using race-specific primers previously reported in the literature. These primers can separate the three races of Fol as well as isolates belonging to F. oxysporum sp. radicis-lycopersici. However, this distinction has only been possible by the combination of marker systems. In this context, the diversity among races was evaluated using universal primers looking for polymorphisms that were the basis for the design of new race-specific primers. These studies are of great value in the diagnosis and identification of different strains quickly and effectively. Another objective was the genetic characterization of segregating populations obtained from crosses between genotypes susceptible and resistant to different races, aiming to validate and identify new markers associated with resistance to fusarium wilt in tomato, (Chapters 3 and 4). For this reason, distinct F2 populations were inoculated with a suspension of spores of the pathogenvia root dipping method and evaluated using a disease severity scale. The resistant and susceptible plants were evaluated in the search for polymorphisms to be used in the design of markers linked to resistance factors to Fol race 1 (gene I) and Fol race 3 (gene I-7). In addition, primers previously described were evaluated in the segregating populations to validate their linkage with these resistance loci. This genomic information and bioinformatics will be important contribution aiming to increase the selection efficiency multi-race resistance plants within the breeding programs.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-14T16:24:56Z No. of bitstreams: 1 2015_ NancyEuniceNiñoCastañeda.pdf: 7740594 bytes, checksum: 31b928be0bd73c18fdd2d5a4ceb2eac9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-01-21T20:53:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ NancyEuniceNiñoCastañeda.pdf: 7740594 bytes, checksum: 31b928be0bd73c18fdd2d5a4ceb2eac9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-21T20:53:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ NancyEuniceNiñoCastañeda.pdf: 7740594 bytes, checksum: 31b928be0bd73c18fdd2d5a4ceb2eac9 (MD5) / Na cultura da bananeira (Musa spp.) o nematoide das galhas Meloidogyne incognita é uma das espécies predominantes principalmente no subgrupo Cavendish, causando perdas consideráveis em algumas regiões do Brasil. Meloidogyne ncognita é também considerado um dos fitoparasitas de ampla importância na agricultura mundial por sua adaptabilidade ao ambiente e ampla gama de hospedeiras. Com as limitações do melhoramento convencional no desenvolvimento de variedades resistentes de bananeiras a nematoides, o uso da genômica é uma alternativa importante para entender os mecanismos moleculares envolvidos na resposta de defesa da planta ao parasitismo. O genótipo de Musa acuminata 4279-06 foi classificado em estudos anteriores como resistente ao nematoide das galhas, e foi selecionado para este estudo com o genótipo Cavendish Grande Naine (GN), utilizado como padrão de suscetibilidade. Assim o objetivo deste trabalho foi estudar a interação M. acuminata - M. incognita a fim de identificar genes associadas ao parasitismo do nematoide e genes de defesa da planta. Inicialmente verificou-se que o ciclo de vida de M. incognita em banana GN, desde a inoculação dos J2 até a formação de fêmeas com ovos, foi de 24 dias a 25º C. Na análise histológica dos genótipos GN e 4279-06, entre 2-7 dias após de inoculação (DAI) observaram se os J2 de M. incognita penetrando pelo ápice das raízes e migrando pelo córtex até o cilindro central e aos 9 DAI já haviam estabelecido sítios de alimentação. Utilizando microscopia de fluorescência não foi observada resposta hipersensível (RH) no genótipo 4279-06, sendo que o nematoide concluiu o ciclo de vida entre 27- 30 dias, com 3-6 dias de atraso em comparação ao genótipo GN (24 dias). Foi realizada análise de transcritoma aos 3, 7 e 10 DAI nos dois genótipos, com base nos dados histológicos, utilizando a tecnologia de sequenciamento massal de RNA por Illumina e análise de bioinformática para identificar genes diferencialmente expressos relacionados ao parasitismo do nematoide e a resposta de defesa. O sequenciamento gerou um total de 510.937.976 sequências paired-end. Na análise de gene ontology (GO), um total de 320.113 termos de GO foram encontrados e relacionados às 27.604 sequências anotadas distribuídos em três categorias principais: processos biológicos (27.551 sequências), função molecular (25.362 sequências) e componente celular (25.487 sequências). Na análise de expressão diferencial, 680 genes apresentaram expressão diferencial significante. Dentre estes, 474 genes foram modulados no genótipo 4279-06 e 235 genes no genótipo GN, evidenciando uma maior regulação da expressão gênica na interação em 4279-06. Os genótipos apresentaram 29 genes comumente regulados, 445 genes exclusivamente modulados em 4279-06 e 206 em GN. Na resposta de Musa acuminata à infecção por M. incognita, foi evidente o grande envolvimento de genes ligados a fatores de transcrição das famílias MYB e WRKY, e de hormônios. Pouca resposta de defesa relacionadas ao Ácido Salicílico (de resposta a parasitas biotróficos) foi encontrada, mas sim uma ampla resposta pela via do etileno. Também foram encontrados genes que aumentam os níveis de auxinas e citocininas e que estão associados à formação de células gigantes, assim como expansinas e proteínas de domínio NAC. Proteínas da família bHLH, calose e endotransglucosilase xiloglucano foram expressas exclusivamente no genótipo 4279-06. Os resultados deste trabalho contribuem para uma maior compreensão dessa complexa interação molecular. / In banana crop (Musa spp.), the root-knot nematode Meloidogyne incognita is one of the predominant species, mainly in Cavendish (GN), causing considerable losses in some regions of Brazil. Meloidogyne incognita, also considered one of the plant parasites of wide importance in world agriculture for their adaptability to the environment and wide host range. With the difficulties of the traditional breeding programs in search for resistant varieties of bananas to nematodes, the use of genomics is an important alternative to understand the molecular mechanisms involved in plant defense response to parasitism. The banana genotype 4279-06 was classified in previous studies as resistant to the root-knot nematode, and was selected for this study, with the Cavendish Grande Naine genotype (GN) used as susceptibility standard. So the aim of this work was to study the interaction Musa acuminata - Meloidogyne incognita in order to identify genes associated with parasitism of nematode and plant defense genes. Initially, the life cycle of M. incognita in banana (NG), from the inoculation of J2 to the formation of females with eggs was 24 days at 25oC. On histological analysis of both genotypes GN and 4279-06, between 2-7 days after inoculation (DAI) it was observed that J2 of M. incognita penetrated at the roots tips and moved through the cortex to the central cylinder, and that at 9 DAI had already feeding sites established. Using fluorescence microscopy, no hypersensitive response (HR) was observed in 4279-06 genotype, and its life cycle has completed between 27- 30 days after inoculation, with 3-6 days delay in comparison with the GN genotype (24 days). Transcriptome analysis was performed at 3, 7 and 10 DAI, based on histological data, using RNA mass sequencing technology by Ilumina and bioinformatics analysis to identify differentially expressed genes related to the banana defense response in nematode interaction with the two genotypes. Sequencing generated a total of 510,937,976 sequences paired-end. In ontology gene analysis (GO), a total of 320,113 terms of GO were found and related to 27,604 annotated sequences divided into three main categories: biological processes (27,551 sequences), molecular function (25,362 sequences) and cellular component (25,487 sequences). In the analysis of differential expression, 680 genes showed significant differential expression. Of these, 474 genes were modulated in genotype 4279-06 and 235 genes in GN genotype, showing greater regulation of gene expression in the interaction with 4279-06. The genotypes showed 29 commonly regulated genes, 445 genes uniquely modulated in 4279-06 and 206 in GN. In Musa acuminata response to infection with M. incognita, was evident the great involvement of genes linked to the MYB transcription factors and WRKY families, and hormones. Little defense response related to salicylic acid (response to biotróficos parasites) was observed, but a broad response for the ethylene pathway. They have also found genes that increase the levels of cytokinins and auxins and that are associated with the formation of giant cells, like expansins and NAC domain proteins. Proteins bHLH family, callose and xyloglucan endotransglucosilase were exclusively expressed in the genotype 4279-06. These results contribute to a better understanding of this complex molecular interaction.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-15T21:15:23Z No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-27T18:12:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T18:12:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5) Previous issue date: 2018-08-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF). / As culturas do alho (Allium sativum) e da cebola (Allium cepa) destacam-se no Brasil e no mundo entre as hortaliças mais expressivas economicamente. Entretanto, ambas têm sido comprometidas pela podridão branca, doença ocasionada por Sclerotium cepivorum, um patógeno restrito a espécies de Allium. Presentemente não existem medidas eficientes de controle a podridão branca, mas o conhecimento da reação de genótipos de alho e cebola pode auxiliar no manejo da doença. Também pouco se sabe sobre a variabilidade do patógeno no Brasil, e a compatibilidade micelial pode ser utilizada para estimar esta variabilidade indiretamente. Desta forma, este estudo se propõe a: (i) avaliar a variabilidade de uma coleção de isolados de S. cepivorum brasileiros obtidos de cultivos de cebola e alho com o teste de compatibilidade micelial, e (ii) avaliar a reação de genótipos de cebola e alho a S. cepivorum em condições de cultivo comercial em campo. Inicialmente, a identificação de todos os isolados de S. cepivorum foi confirmada pela comparação de sequências do rDNA. Para análise de DNA, o DNA genômico total foi extraído e amplificado com os primers ITS1 e ITS4 para amplificar as regiões ITS1, ITS2 e 5.8S do DNA ribossômico. Posteriormente 52 isolados de diversas áreas produtoras de Allium sp. foram selecionados para a análise de compatibilidade micelial, em que foram confrontados todos os isolados em todas as combinações possíveis. Dois grupos de compatibilidade foram identificados. Segundo a análise do teste de compatibilidade, o grupo de 52 isolados apresenta indícios de baixa variabilidade genotípica, sendo predominantemente clonal. A resposta de genótipos de Allium spp. à prodridão branca foi avaliada em campo em 2016 e 2017. Em 2016 foi avaliada a resposta de 20 genótipos de alho e 30 de cebola, e em 2017, 12 de alho e 30 de cebola. Alguns genótipos testados em 2016 foram repetidos em 2017, como controle. Os experimentos foram conduzidos na estação experimental da Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba – COOPADAP em Rio Paranaíba/MG no período de maio a setembro de 2016 e 2017. As áreas utilizadas para estes experimentos encontravam-se naturalmente infestadas com microescleródios de S. cepivorum, devido a cultivos anteriores e sucessivos de alho e cebola. Os genótipos de alho e cebola testados variaram quanto à reação à podridão branca. Dentre os genótipos de alho os que apresentaram a menor sucetibilidade e a maior produtividade foram UO 73, DDR 6024 e RAL 127. Entre os genótipos de cebola, Optima F1, Sirius F1, Franciscana IPA10, Shinju F1 e Perfecta F1 destacaram-se como os genótipos com o menor sucetibilidade e com as maiores produtividades. No segundo ano de experimento, onde as temperaturas foram mais baixas que no primeiro ano, os índices de doença foram extremamente altos e não foi possível a separação dos genótipos quanto a susceptibilidade ou resistência a doença. Ressalta-se que devido ao padrão de resposta aferido no primeiro ano de estudo, existem variações na resposta dos genótipos de alho e cebola à podridão branca que devem ser considerados do ponto de vista do manejo da doença, com também em programas de melhoramento. / Garlic (Allium sativum) and onion (Allium cepa) are among the economically most important vegetable crops in Brazil and worlwide. However, both garlic and onion sustain high losses due to white rot, the most destructive disease of these crops, caused by Sclerotium cepivorum, a pathogen restricted to Allium species. Presently, there are no single efficient control measures for white rot, but the evaluation of genetic resistance among Allium genotypes may help in disease management. In addition, little is kown on the variability of the pathogen in Brazil, which can be estimated indirectly by mycelial compatibililty testes. Therefor, this study aims to: (i) estimate the variability of a collection of S. cepivorum isolates from several Brazilian garlic and onion growing regions, and (ii) evaluate the reaction of garlic and onion genotypes to S. cepivorum in commercial growing field conditions. Initially, the identification of all S. cepivorum isolates was confirmed by the comparison of rDNA sequences. For the DNA analysis, genomic DNA was extracted and amplified with primers ITS1 and ITS4 for the ITS1, ITS2 and 5.8S ribossomic DNA regions. Subsequently fifity-two isolates from different geographical origins were selected for mycelial compatibility tests, and all isolates were confronted in all possible combinations. Two mycelial compatibility groups were identified. According to the compatibility test, the group of 52 isolates appeared to display low genotypic variability and was predominantly clonal. The reaction of Allium genoypes to white rot was evaluated in the field, in the 2016 and 2017 cropping seasons. Twenty garlic and 30 onion genotypes were evaluated in 2016, while, in 2017, 12 garlic and 30 onion genotypes were tested. Some genotypes tested in 2016 were repeated in 2017, as controls. Experiments were carried out at the Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba – COOPADAP experimental fields, in Rio Paranaíba/MG, from May to September of 2016 and 2017. The fields selected for the assays were naturally infested with microesclerotia of S. cepivorum, from previous successive garlic and onion crops. Responses of garlic and onion genotypes to white rot varied. Among garlic genotypes, the ones that showed lowest degree of successibility and higher yields were UO 73, DDR 6024 and RAL 127. Among the onion genotypes, cvs. Optima F1, Sirius F1, Franciscana IPA10, Shinju F1 and Perfecta F1stood out as the genotypes with the lowest degree of successibility and greater yields. In the second experimental year, when disease levels were extremely high, associated to the prevailing lower temperatures, no differences among the genotypes were detected. From the overall field results, there are variations in the response of garlic and onion genotypes to white rot and good yields, that may be useful for disease management as well as in breeding programs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-18T14:31:29Z No. of bitstreams: 1 2012_ThiagoGomesdeSousa.pdf: 2192064 bytes, checksum: d4a63c218ac83a552f59c696195d9eab (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-18T14:31:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_ThiagoGomesdeSousa.pdf: 2192064 bytes, checksum: d4a63c218ac83a552f59c696195d9eab (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-18T14:31:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_ThiagoGomesdeSousa.pdf: 2192064 bytes, checksum: d4a63c218ac83a552f59c696195d9eab (MD5) / A podridão por esclerócio (Sclerotium rolfsii) está entre as doenças mais importantes do alho (Allium sativum) e da cebola (A. cepa). Em países de clima frio há relatos de perdas entre 10% a 65%, enquanto em países de clima tropical estas perdas podem atingir 100%. O patógeno tem uma ampla gama de hospedeiros, sendo capaz de infectar mais de 500 espécies vegetais. O fungo se propaga por estruturas de resistência, esclerócios, que podem sobreviver por vários anos no solo, além de serem facilmente levadas pela água e movimentação de pessoas e equipamentos. Alguns métodos de controle têm sido relatados contra a doença, por exemplo: o químico por meio de fungicidas (tebuconazole, thiram, procimidone), o físico com solarização (cobertura do solo com lonas e coletores solares), o cultural por meio da adição de matéria orgânica que promove o aumento da população dos microorganismos benéficos e o biológico com a inoculação de organismos antagônicos aos patógenos. Há necessidade de melhoria do manejo da doença, devido à dificuldade de controle do patógeno e o interesse ambiental de diminuição a cada dia da utilização de produtos químicos. Assim, o objetivo principal neste estudo foi avaliar produtos comerciais à base de Trichoderma no controle da podridão do alho e cebola. Primeiramente, foi avaliada a eficiência de T. harzianum comercial em relação a fungicidas (procimidona e tiofanato metílico) por teste de germinação de esclerócios (solo em caixas plásticas) em laboratório e por teste in vivo com plantas de alho em casa de vegetação. Em uma segunda parte do estudo foi avaliado a eficiência de T. harzianum e T. asperellum em campo experimental de cebola inoculado artificialmente com S. rolfsii. Em todos os trabalhos os produtos à base de Trichoderma foram superiores aos fungicidas. Nos testes in vivo com plantas de alho observou-se (a) um menor número de plantas infectadas, (b) aumento de massa seca de raiz e parte aérea em relação à testemunha com patógeno, e; (c) menor número de esclerócios capturados nos tratamentos com T. harzianum. Nos campos experimentais de cebola o tratamento Sclerotium rolfsii + T. harzianum apresentou a menor incidência, diferindo significativamente da testemunha com patógeno. No tratamento somente com T. harzianum houve o maior ganho de produtividade em relação à testemunha somente com patógeno. O tratamento com T. asperellum também reduziu a incidência da doença e induziu ganho em produtividade da cebola. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Sclerotium rot (Sclerotium rolfsii) is one of the most important diseases of garlic (Allium sativum) and onion (A. cepa). In cold climate countries losses between 10% to 65%, while in tropical countries, these losses can reach 100%. The pathogen has an extensive host range and is capable of infecting more than 500 species of plants. The fungus is spread by resistance structures, sclerotia, which can survive in soil for years, and are easily moved by wind, water and movement of people and equipment. Some methods of control have been reported against the disease, for example: the chemical by fungicides (tebuconazole, thiram, procymidone), the physical with solarization (soil covered with tarpaulins and solar panels), the culture by the addition of organic matter promoted the increase of the population of beneficial microorganisms and inoculation with biological organisms antagonistic to pathogens. There is need for improved management of the disease, due to the difficulty of controlling the pathogen and environmental interest of reduction day by day use of chemicals, thus the main objective of this study was to evaluate commercial products based on Trichoderma. First, we evaluated the efficacy of T. harzianum in relation to commercial fungicides (procymidone and thiophanate methyl) per test germination of sclerotia (soil in plastic boxes) in the laboratory and tested in vivo with garlic plants in the greenhouse. In a second part of the study was evaluated the efficacy of T. harzianum and T.asperellum onion trial field artificially inoculated with S. rolfsii. In all studies based products of Trichoderma were higher than fungicides. In vivo tests with garlic plants was observed (a) a lower number of infected plants, (b) increase in dry weight of roots and shoots compared to control with the pathogen, and (c) captured fewer sclerotia in treatments with T. harzianum. In onion trials field of treatment Sclerotium rolfsii + T. harzianum had the lowest incidence, differing significantly from the control with the pathogen. In the treatment only with T. harzianum was the largest productivity gain compared to control only with the pathogen. Treatment with T. asperellum also reduced the incidence of the disease and led to higher productivity of the onion. Key word: Allium sativum, Allium cepa, Sclerotium rolfsii, Trichoderma, biological control.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T20:54:47Z No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-18T10:29:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-18T10:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / O mofo branco, doença causada pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary possui em seu ciclo de hospedeiros 408 espécies dentro de 278 gêneros, distribuídas em 75 famílias botânicas e é responsável por perdas de rendimento que podem chegar a 100% em culturas agronômicas. As medidas de controle na maioria das vezes são ineficazes. O uso de defensivos químicos é muito oneroso, tornando-se inviável. Quanto ao controle biológico, vários estudos têm sido realizados com fungos antagonistas e, dentre eles, espécies do gênero Trichoderma tem demonstrado atividade antagônica contra S. sclerotiorum, em testes conduzidos tanto em laboratório, quanto em condições de campo. Neste trabalho, 20 isolados de Trichoderma foram testados em laboratório e em casa de vegetação. Em campo, três desses isolados foram avaliados em termos de redução do impacto do patógeno sobre o desenvolvimento das culturas de feijão comum e soja. Nestes ensaios, utilizou-se além da microbiolização de sementes, aplicação no sulco de plantio com jato direto e aplicação na parte aérea por barra traçada, cuja concentração de propágulos na suspensão de inóculo para aplicação dos isolados foi de 1x109 conídios – mL-1. Nos testes de laboratório, quatro isolados apresentaram grau máximo de antagonismo (classe 1), 10 isolados alocaram-se na classe 2 e quatro na classe 3, estas duas consideradas com potencial médio e moderado de biocontrole, respectivamente. Dois isolados exerceram baixa atividade antagônica contra S. sclerotiorum (classe 4). Quanto à germinação de escleródios, 10 isolados de Trichoderma inibiram pelo menos em 90%; quatro apresentaram índices de inibição entre 80% e 65%; dois apresentaram índices de 35% e 25% e os quatro restantes não apresentaram atividade inibitória sobre os escleródios. Já nos testes com metabólitos não voláteis, verificou-se diferença significativa na inibição do crescimento de S. sclerotiorum, com os valores médios da porcentagem de inibição micelial variando desde zero (ausência de inibição) até 100%. Dentre os 20 isolados, seis apresentaram os melhores níveis de controle de doença. Os ensaios conduzidos em campo indicaram maior eficiência dos isolados quando o inoculo foi aplicado via barra, juntamente com as sementes microbiolizadas, seguindo-se a aplicação por meio de aspersão da suspensão de esporos e, por fim, onde só houve aplicação pela microbiolização das sementes, quanto ao desenvolvimento das plantas. Os resultados obtidos indicam que esses isolados são promissores para o desenvolvimento de um programa de controle biológico. Assim, foi avaliada a produção de esporos em laboratório, utilizando dois substratos preparados com diferentes teores de água e tempo de embebição. As maiores taxas de esporulação foram observadas com os CEN162 e CEN238, em arroz parboilizado. Adição de água na proporção de 80%, e períodos de embebição superiores a 15 horas favoreceram a esporulação, independentemente do substrato. Nestas condições, os isolados apresentaram diferentes picos de esporulação no decorrer de 30 dias. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / White mold disease caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary has its cycle of hosts 408 species in 278 genera, distributed in 75 botanic families and is responsible for loss of income that can reach 100 % in agronomic crops. Control measures are most often ineffective. The use of pesticides is very expensive, making it unfeasible. As for biological control, several studies have been conducted on fungi and antagonists, among them species of the genus Trichoderma have demonstrated antagonistic activity against S. sclerotiorum in trials conducted both in laboratory and in field conditions. In this study, 20 isolates of Trichoderma were tested in laboratory and greenhouse. In the field, three of these isolates were evaluated in terms of reducing the impact of the pathogen on the development of crops of beans and soybeans. In these tests, we used beyond microbiolization seed, application in furrow application with jet direct and shoot with a slash drawn, where the concentration of propagules in the inoculum suspension for application of the isolates was 1x109 conidia - mL-1. In laboratory tests, four isolates showed maximum degree of antagonism (class 1), 10 isolates allocated to the Class 2 and four in Class 3, these two considered potential biocontrol medium and moderate, respectively. Two isolates have had low antagonistic activity against S. sclerotiorum (class 4). As for the germination of sclerotia, 10 strains of Trichoderma inhibited at least 90%, four showed inhibition rates between 80% and 65% had two rates of 35% and 25% and the remaining four showed no inhibitory activity on the sclerotia. Already in the tests with non-volatile metabolites, there was significant difference in growth inhibition of S. sclerotiorum, with the mean percentage inhibition of mycelial ranging from zero (no inhibition) to 100%. Among the 20 isolates, six showed the highest levels of disease control. Tests conducted in the field suggest greater efficiency of the isolates when the inoculum was applied by bar, along with microbiolization seeds, followed by the application by spraying the spore suspension and, finally, where there was only applied by microbiolization seeds, for the development of plants. The results indicate that these isolates are promising for developing a biological control program. Thus, we evaluated the production of spores in the laboratory using two substrates prepared with different amounts of water and soaking time. The highest rates of spore production were observed with CEN162 and CEN238 in parboiled rice. Addition of water at a ratio of 80%, and soaking periods exceeding 15 hours favored sporulation, regardless of the substrate. Under these conditions, the isolates showed different peaks for spore collecting in the course of 30 days.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-09-30T17:28:01Z No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-02T16:40:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-02T16:40:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5) Previous issue date: 2007-06-25 / A lagarta Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) é uma praga de grande importância econômica em vários países do mundo. Por ser uma espécie polífaga que ataca severamente diferentes cultivos, ter uma grande capacidade de dispersão do adulto e apresentar uma ação voraz, esse lepidóptero ocasiona perdas na produção agrícola que variam de 15 a 34%. Uma importante ferramenta para melhorar as práticas de gerenciamento da praga e seu controle é a caracterização de diferenças genéticas entre populações. O objetivo desse trabalho foi analisar a variabilidade genética entre populações de S. frugiperda de ocorrência em diferentes regiões do Brasil nas culturas de milho e algodão utilizando-se marcadores RAPD e diferenciar essas populações por meio de um marcador do DNA mitocondrial. As amplificações do DNA das amostras de S. frugiperda utilizando 20 oligonucleotídeos para cinco populações produziram um total de 752 loci de RAPD. A análise por AMOVA revelou que a maior variabilidade genética (76,34 %) foi originária de variações dentro das populações e que entre as populações foi de 23,66 %. Através do dendrograma UPGMA observou-se dois agrupamentos distintos, os das populações de S. frugiperda do milho e os das populações desta praga na cultura de algodão. As análises de RAPD diferenciaram as populações de S. frugiperda por meio de fragmentos monomórficos presentes para todos indivíduos de determinadas populações. A análise da amplificação da região NADH-DH do DNAmt mostrou a presença de um fragmento de 600 pb para as populações de S. frugiperda na cultura do milho do Brasil e do México. No entanto, nas populações oriundas das culturas do algodão do Sul e do Mato Grosso do Brasil não houve amplificação desse fragmento. Os resultados obtidos mostraram que há variabilidade genética entre as populações de S. frugiperda coletadas nas culturas do milho e do algodão de diferentes regiões do Brasil e que foi possível diferenciar as populações desta praga nessas duas culturas por meio dos marcadores de RAPD e DNAmt. Com o auxílio desses marcadores, poderão ser desenvolvidas estratégias moleculares para o monitoramento da deriva genética, dinâmica da população e o controle da dispersão desse inseto. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The caterpillar S. frugiperda (J.E. Smith) is a pest of great economic importance in several countries around the world. Since it is a polyphagous species that severely attacks different cultures, has a great dispersion capacity by the adult and presents a voracious action, this lepidopteran causes losses in agricultural production that varies from 15% to 34%. An important tool to improve the practices of managing of the pest and its control is the characterization of genetic differences among populations. The objective of this work was to analyze the genetic variability among populations of S. frugiperda occurring in different regions of Brazil in the crops of corn and cotton, using RAPD markers and to differentiate these populations by the marker of DNAmt. The amplifications of the DNA from the samples of S. frugiperda using 20 primers to five populations produced a total of 752 RAPD loci . Analysis by AMOVA revealed that the greatest genetic variability (76.34%) was derived from variations inside the populations and that among the populations it was 23.66%. Through the dendrogram UPGMA there are two distinct groupings, one from the populations of S. frugiperda from corn and the second from the populations of this pest in the cotton crops. The RAPD analyses differenciated the populations of S. frugiperda by the monomorphic fragments present to in? all the individuals of some populations. The analysis of the profile of the mitochondrial DNA shows in the NADH-DH the presence of a fragment of 600 bp to the populations of S. frugiperda in the corn culture in Brazil and Mexico. However in the populations derived from cotton crops in the South and in Mato Grosso in Brazil there was no amplification of this fragment. The results showed that there is a genetic variability among the populations of S. frugiperda collected on from corn and cotton from different regions of Brazil from the marker RAPD and that it was possible to differentiate the populations of this pest in these two cultures through the markers of RAPD and DNAmt. This way, molecular strategies can be developed for the monitoring of genetic deriving, population dynamics and the dispersion control of this insect.

Orientador : Alvaro Santos Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T04:55:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gaspar_JoseOsmar_M.pdf: 5774831 bytes, checksum: 158c3f0cc650e4c53956150c44870a22 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Partículas longas e curtas do vírus do anel do pimentão ? VAP ? (?Brazilian tobacco rattle vírus?) foram visualizadas em tecidos foliares e de anteras de tomateiros (Lycopersicon esculentum Mill.) infectados. De modo característico, o VAP apareceu formando agregados de partículas sempre associados externamente a mitocôndrias, com exceção para micrósporos e grãos de pólen maduros, onde também foram encontrados agregados de partículas não associados com essa organela celular e partículas livres no citoplasma. Algumas vezes, partículas longas e curtas do VAP aparecem associadas numa extremidade a uma mitocôndria e na outra ao tonoplasto. O VAP foi localizado em todos os estágios de maior duração da mitocrosporogênese de tomateiros infectados, ou seja, estágio pré-meiótico, estágio meiótico, estágio de micrósporo pré-mitótico e estágio de grão de pólen maduro. Em grãos de pólen maduros partículas longas e curtas do VAP foram encontradas tanto nas células vegetativas como nas generativas. Em nenhum caso foram identificados vírions do VAP no núcleo celular, nem associação das partículas virais com paredes celulósicas, paredes de calose ou parede envolvente dos grãos de pólen. A quantidade relativamente pequena do vírus em células-mães dos grãos de pólen e micrósporos pré-mitóticos e o acúmulo de partículas longas e curtas em grãos de pólen maduros, levam-nos a acreditar que ocorre síntese do VAP durante o período de amadurecimento dos grãos de pólen... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Long and short particles of the Brazilian tobacco rattle virus (BTRV) were visualized in leaf cells and in cells of the various anther tissues of infected tomato plants. The BTRV appeared mostly as aggregates of parallel particles associated on both ends to mitochondria, though isolated aggregates and individual particles were seen in microspores and mature pollen grains. In a few cases particle aggregates were observed associated with a mitochondria on one end and to the tonoplast of a vacuole on the other end. The BTRV particles could be seen in the cytoplasm of infected cells during the various phases of microsporogenesis from the stage of pre-meiotic cells until mature pollen grains. ln these the short and long particles could be seen in the cytoplasm of both the vegetative and generative cells. No virus particle was ever seen in the nuclei of infected cells; neither associated with the cellulose or callose walls, nor on the outside wall of pollen grains. The small number of virus particles present in the pollen mother cells and pre-mitotic microspores on one side, and the great number of short and long particle aggregates in the mature pollen grains on the other, indicate that virus increase must occur during pollen grain maturation and is not the result of only distribution... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015. / A bananeira (Musa spp.) é cultivada em mais de 100 países, assumindo importante papel social e econômico, visto que é o fruto mais consumido no mundo. A quinta posição no ranking de produção é ocupada pelo Brasil, onde a Sigatoka-amarela é uma doença comum nos cultivos de bananeiras. Mycosphaerellamusicola(R. Leach ex. J. L. Mulder 1979)(Anamorfo: PseudocercosporamusaeZimm. Deighton), agente causal da doença, é a espécie de Mycosphaerellade maior ocorrência no país em relação às demais espécies. Pouco se sabe sobre a diversidade genética desse patógeno. Similarmente, pouco se sabe sobre a sensibilidade de M. musicolaa fungicidas DMI (inibidores da demetilação). Análises da influência de genes efetores LysM na patogênese de membros do gêneroMycosphaerellatambém são reduzidas. Nesse contexto, os objetivos datese foram verificar a ocorrência de recombinação sexual em populações de M. musicola de 13 diferentes zonas produtoras de banana no Brasil, por meio de análises dos genes matingtypes; caracterizar a diversidade genética das populações com base em 19 locos microssatélites; analisar a sensibilidade dos isoladosa fungicidas DMI e correlacionar o resultado com a ocorrência de mutações no gene CYP51 e, como componente adicional do trabalho, caracterizar o efetor de virulência - LysM em Mycosphaerellagraminicola. Com exceção de isolados coletados em uma das áreas do Distrito Federal e no Rio Grande do Norte, as populações mostraram proporção de 1:1 de genes MAT1-1-1 e MAT1-2-1, indicando a ocorrência de recombinação sexual nessas populações. Alto nível de diversidade genética foi observado entre indivíduos dentro das populações, fato que pode ser resultante da recombinação sexual. Um considerável número de migrantes entre populações de diferentes estados foram observados. Isso indica que ações antrópicas, como o transporte de folhas contaminadas, devem ter contribuído para o fluxo gênico e a homogeneização das populações, considerando que a dispersão por ascósporos é incomum a longas distâncias. A alta fração clonal nas populações sugere que a recombinação assexual emprega um importante papel na estrutura genética e apoia as evidências de dispersão conidial dentro das áreas produtoras de banana. Cinco isolados de M. musicolado Distrito Federal exibiram tolerância aos fungicidas tebuconazole, triadimenol e cyproconazole e um ponto de mutação no aminoácido do códon 461 foi observado nos mesmos isolados. Para a caracterização do efetor LysM, a patogenicidade da linhagem B3 de M. graminicolaexpressando GFP (proteína verde fluorescente) foi avaliada em 18 genótipos de trigo o que permitiu predizer que GFP não influencia na colonização do patógeno. A colonização de B3-GFP em folhas de trigo foi acompanhada via microscopiaconfocal de varredura a laser (CLSM) confirmando que GFP é expressa durante todo o ciclo de infecção do patógeno em folhas de trigo suscetíveis. Uma transformação via Agrobacteriumtumefaciensfoi realizada para a obtenção de uma linhagem B3-GFP mutante não funcional para o gene 3LysM. Entretanto, o DNA homólogo de 3LysM não foi integrado ao sítio alvo no genoma, sendo necessários novos experimentos para a obtenção da linhagem esperada. Os resultados obtidos contribuem para otimizar a compreensão sobre a epidemiologia do patógeno e aprimorar as medidas de controle da doença. / Commercial banana varieties (Musa spp.) are cultivated in over 100 countries, assuming important social and economic roles, given that this fruit is the most widely consumed globally. Brazil is the world's fifth largest producer, where yellow Sigatoka is the most common banana disease in production areas. Mycosphaerella musicola (R. Leach ex. J. L. Mulder 1979)(Anamorfo: PseudocercosporamusaeZimm. Deighton), causal organism of the disease, is the most commonly occuring Mycosphaerella species in the country. Limited analysis of genetic diversity of this pathogen has been conducted to date.Similary, little is known regarding fungicide sensitivity of M. musicola to DMI(demethylation inhibitor) fungicides. Analysis of pathogen effector LysM genes and their influence on the pathogenesis of Mycosphaerella members is also limited. In this context, the goals of this study were to verify the occurrence of sexual recombination in M. musicolapopulations from 13 different agroecological zones across Brazil, based on analysis of mating type idiomorphs; characterize population genetic diversity by comparison of 19 microsatellite loci; analyse isolate sensitivity to DMI fungicide and correlate the results with the occurrence of mutations in the CYP51 gene and, as a additional component of the work, characterize the virulence effector – LysM in Mycosphaerellagraminicola. With the exception of isolates collected in one area of the Distrito Federal and Rio Grande do Norte, populations displayed 1:1 proportions of mating type gene idiomorphs MAT1-1 and MAT1-2, indicating the occurrence of sexual reproduction as an evident process in M. musicolapopulations. Greatest genetic diversity occurred among individuals within populations, which may be the result of sexual recombination. A considerable number of migrants between populations from different states were observed. These results indicate that anthropic action such as transport of contaminated germplasm may be contributing to gene flow and the genetic homogenization of populations, when considering that ascospore dispersal is uncommon over large distances. The high clonal fraction in populations suggests that asexual reproduction plays an important role in the genetic structure, supporting documented evidence of conidial dispersal within banana blocks. Five M. musicolaisolates from Distrito Federal exhibited low sensibility to tebuconazole, triadimenol and cyproconazole fungicides, with one point mutation in an amino acid at codon 461 observed across all these isolates. For LysM effector characterization, the pathogenicity of M. graminicolastrainB3 expressing GFP (green fluorescent protein) was evaluated on 18 wheat genotypes, shown that GFP had no influence on pathogen colonization. Colonization of the B3-GFP in wheat leaves was followed via confocal laser scanning microscopy (CLSM). The results confirmed that GFP is expressed during the whole infection cycle of the pathogen on susceptible wheat leaves. Agrobacterium tumefacienswas used to mediate transformation to generate knockout constructs for 3LysM in B3-GFP. The 3LysM homologous DNA was not integrated in the target genomic site, such that continued experiments are required to develop the desired strain for further analysis of the influence of LysM on M. graminicolapathogenesis. The results contribute to our understanding of pathogen epidemiology and contribute to development of enhanced disease control measures.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-10Bitstream added on 2014-06-13T18:35:05Z : No. of bitstreams: 1 hanai_sm_me_botfca.pdf: 494709 bytes, checksum: 99f57d8a097bc9a1b2bcd0aadbd8aa02 (MD5) / Com objetivo de avaliar a reação ao oídio de onze linhagens F5Rc1 de ervilha de vagens comestíveis e avaliar o impacto da doença nas características comerciais, realizou-se um experimento na Fazenda Experimental São Manuel / UNESP Botucatu. Juntamente com as linhagens, foram avaliadas as cultivares Torta de Flor Roxa e Triofin, como padrões de suscetibilidade e resistência ao oídio, respectivamente. Metade das plantas foram tratadas com fungicida fenarimol e a outra metade foi conduzida sem nenhum tipo de controle da doença Para quantificação da severidade do oídio, foram desenvolvidas escalas diagramáticas que se mostraram de fácil e rápida utilização. Todas as linhagens de ervilha de vagens comestíveis avaliadas apresentaram um bom nível de resistência ao oídio, quando comparadas com a cultivar Torta de Flor Roxa, sendo que a doença não afetou o peso total e o comprimento de vagens. / An experiment was set out under vinil house conditions to evaluate eleven pod pea breeding lines to powdery mildew caused by Erysiphe pisi and to check the impact of the disease on pod production. Resistant cultivar Triofin and susceptible cultivar Torta de Flor Roxa were utilized as control and the disease was evaluated by a diagramatic key basead on percentage of affected leaves. Area under the disease progress curve (AUDPC) and percentage of disease were utilized for comparing diferent progenies and checks. It’s observed that progenies were as resistant as Triofin when AUDPC was utilized as a evaluation parameter and that powdery mildew did not affected pod yield and lenght.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2008. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-09-17T19:50:29Z No. of bitstreams: 1 2008_PatriciaPereiraSilva.pdf: 2214500 bytes, checksum: c57f837d9a164c820bf25114f49e7812 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-06T13:54:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_PatriciaPereiraSilva.pdf: 2214500 bytes, checksum: c57f837d9a164c820bf25114f49e7812 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-06T13:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_PatriciaPereiraSilva.pdf: 2214500 bytes, checksum: c57f837d9a164c820bf25114f49e7812 (MD5) Previous issue date: 2008 / A batata (Solanum tuberosum) é um dos alimentos mais consumidos no mundo, depois do arroz, trigo e milho. Sua produção pode ser afetada por fatores bióticos e abióticos, sendo que, em relação aos patógenos, os vírus se encontram entre os mais importantes causando rápida degenerescência dos tubérculos, após multiplicação em campo. O vírus Potato Vírus Y ( PVY) espécie-tipo do gênero Potyvirus tem sido o principal vírus da cultura nos últimos anos. O complexo PVY é formado por várias estirpes que atacam a batateira como: PVYO ( grupo comum), PVYN ( grupo necrótico) e PVYC , sendo essa última ainda não encontrado na Brasil. Ainda existe o sub-grupo necrótico, PVYN:O que causa necrose de nervura em fumo e pode ou não causar necrose em tubérculos de batata. Outro membro do subgrupo necrótico é o PVYNTN, que induz além de mosaico nas folhas, sintomas de anéis em tubérculos. Atualmente, o PVYNTN é o principal vírus ocorrendo em batateira no Brasil e em várias partes do mundo. No Brasil já foram relatados isolados apresentando características bio-sorologicas diferentes, porém, não há dados na literatura sobre suas características moleculares. Devido a esse desconhecimento da diversidade do complexo do PVY no Brasil, neste trabalho foram realizados estudos comparativos, biológicos e moleculares, entre duas estirpes classificadas como PVYN e PVYO e dois isolados do subgrupo necrótico PVYNTN. Esses isolados foram coletados em diferentes regiões produtoras do país sendo designados ITA (Itapetininga-SP), VGS (Vargem Grande do Sul-MG) OBR (região Centro-Oeste) e NBR (região Centro-Oeste). O primeiro passo realizado foi à purificação biológica dos isolados através de diluições seriadas do inóculo, sendo posteriormente, conduzido um estudo de avaliação dos sintomas em oito variedades de batata. Todos os isolados causaram sintomas de mosaico e deformação foliar nas plantas variando em sua intensidade. Em geral, o PVYO (isolado OBR) induziu necrose de nervuras e mosaico, o PVYN (NBR) encurtamento do pecíolo e leve deformação foliar e os isolados de PVYNTN (ITA e VGS) mosaico, deformação foliar e sintomas de anéis nos tubérculos. O isolado VGS, PVYNTN, induziu também sintomas de intensa deformação foliar (topo-crespo ou bouquet) nas variedades Canoinhas, Monalisa e Mondial. Já no estudo molecular foi realizado o sequenciamento de vários genes e regiões não-codantes dos isolados, sendo que o sequenciamento completo dos quatros isolados encontra-se em fase de conclusão. Os resultados das comparações de identidades de nucleotídeos das regiões genômicas seqüenciadas e dos grupamentos obtidos a partir das árvores filogenéticas produzidas, permitem concluir até o momento, que os isolados brasileiros apresentam relacionamento filogenético com isolados americanos e com isolados europeus. O compartilhamento de seqüências desses dois grupos geograficamente distintos pode estar relacionado à importação histórica de batata semente pelo Brasil de países dos dois continentes. Ficou evidente que os isolados do subgrupo PVYNTN possuem seu genoma constituído por uma mistura de segmentos genômicos com traços de PVYN e PVYO. Também foi observado que as regiões do genoma que formam a 5’UTR, 6K1, 6K2, CP e 3’ UTR parece não estarem correlacionadas com a expressão de sintomas. Por outro lado, as regiões VPg, NIa e NIb, podem ser responsáveis pela indução de sintomas de necrose em tubérculos de batata com maior frequência nos isolados PVYNTN, quando comparados com isolados do subgrupo PVYN:O . No entanto, a variabilidade encontrada indica a região P1 com maior potencial para ser empregada no estudo de expressão de sintomas. Porém, somente com a conclusão do sequenciamento completo do genoma dos isolados brasileiros, possibilitando a localização de eventos de seleção e possível recombinação nas proteínas virais e regiões reguladoras permitirá obtermos conclusões sobre a evolução do complexo PVY no país. Essas comparações poderão contribuir para e elucidação das diferenças entre isolados brasileiros e aqueles provenientes de outros países e para o entendimento dos fatores que levam o PVY a produzir variantes. O conhecimento da diversidade de isolados do complexo PVY no Brasil, sem dúvida contribuirá para o estudo epidemiológico dessa virose, assim como, para o estabelecimento de métodos de manejo das infecções virais por estirpes de PVY em condições de campo. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Potato (Solanum tuberosum) is one of the most consumed foods in the world, next to rice, wheat and maize. The production can be affected by biotic and abiotic factors. Viruses are one of most important pathogens because it can cause rapid degeneration of the tubers, after multiplication in the field. PVY has been the main virus species causing severe losses in potatoes in the last six years. The PVY strains infecting potato are: PVYO (ordinary group), PVYN(necrotic group) and PVYC, this last strain has not yet been found in Brazil. There is the sub-group necrotic, PVYN, which causes necrosis when inoculated in tobacco plants and may or may not cause necrosis in potato tubers. The other member of the subgroup is the necrotic PVYNTN, which induces mosaic on the leaves and necrotic ringspot in potato tubers. In Brazil PVYNTN was isolated presenting different biological and serological features, but no molecular characteristics has been published. Because of this lack study in the PVY complex in Brazil, this work carried out comparative studies, of molecular and biological characteristics, between two strains, a PVYN and a PVYO (denoted OBR - Center-West region) e NBR (denoted OBR also from Center-West region of Brazil) two isolates of the subgroup PVYNTN. Denoted ITA (Itapetininga-SP), VGS (Vargem Grande do Sul- MG). For the biological studies an assessment of symptoms in eight varieties of potatoes was made. All isolates caused symptoms of mosaic and leaf deformation on plants varying in its intensity. In general, the PVYO induced veinal necrosis and mosaic, the PVYN shortening of the leaf petiole and mild deformation and PVYNTN caused mosaic, leaf deformation and necrotic rings in the tubers. The VGS isolate PVYNTN, also induced symptoms of intense leaf deformation (bouquet) in the potato varieties Canoinhas, Monalisa and Mondial. In the molecular study the sequencing of several protein isolates was performed and the complete sequencing of four isolated is being completed. Based on the results obtained we can conclude so far, that the Brazilians isolates shared phylogenetic relationships with Americans and Europeans isolates, probably as a consequence of seed potato imports from these countries that allowed virus introduction in Brazilian potatoes fields. The genome of the isolates belonging to the subgroup of PVYNTN consists of a mixture of segments present in PVYN and PVYO genomes. We also observed that the protein regions 5'UTR, 6K1, 6K2, VPg, NIa, NIb, CP AND 3 'UTR are not correlated with the expression of symptoms, and that regions VPg, NIa and NIb, may be responsible for induction of symptoms of necrosis in potato tubers, more frequently in the isolate PVYNTN when compared with isolate from the subgroup PVYN. The region P1 seems to be a putative candidate to study the expression of symptoms. More will be needed to complete the sequencing of the genome of the PVY strains to determine the selection pressure for protein mutation and virus recombination and thereby determine their roles and understand their biological role in the field. The elucidation of biological and molecular characteristics of PVY variants can provide better strategies and establish methods of management of viral infection under field conditions.