A longevidade das restaurações com compósitos está diretamente relacionada ao sucesso do tratamento estético. A vida útil das restaurações pode ser influenciada por vários fatores como o material empregado, tempo de uso clínico e a degradação da matriz dentinária por metaloproteinases da matriz (MMPs), que podem afetar a integridade da interface adesiva, fazendo com que a união dentina-­adesivo seja comprometida. Assim, buscando melhores resultados na durabilidade das restaurações adesivas, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de substâncias inibidoras de MMPs (soluções de clorexidina -­ CHX a 0,2% e doxiciclina a 3%) e agente de ligação cruzada (extrato de semente de uva -­ grape seed extract - GSE a 15%) na Resistência de União (RU) de restaurações de resina composta submetidas à ciclagem mecânica. Cavidades de Classe I foram preparadas na área central da superfície exposta de 48 molares humanos hígidos, posteriormente separados em 4 grupos (n=12) de acordo com o tratamento de superfície recebido após o condicionamento de ácido: Grupo I -­ Controle (Sistema Adesivo -­ Adper Single Bond Plus -­ 3M ESPE); Grupo II -­ CHX 0,2% + Sistema Adesivo; Grupo III -­ GSE 15% + Sistema Adesivo e Grupo IV -­ Doxiciclina 3% + Sistema Adesivo. Após os procedimentos restauradores (Filtek Supreme Ultra -­ 3M ESPE), as amostras foram armazenadas em água destilada durante 24 horas a 37°C e subdividas em dois subgrupos: A -­ Controle (armazenado em saliva artificial) e B -­ Submetido à ciclagem mecânica (Coil Cycler, Proto-­tech, forca de 50 N, frequência de 1,5 Hz em 1 x 106 ciclos de aplicação). Após ciclagem mecânica, os corpos de prova foram cortados em palitos (0,8 x 0,8 mm; n = 5 por dente) e submetidos ao teste de microtração (Bisco) a velocidade de 1 mm/min. A atividade colagenolítica da MMP-­2 sob a ação dos primers bioativos foi analisada utilizando o kit EnzChek Gelatinase/Colagenase Assay (D-­12054, Molecular Probes, Eugene, OR, EUA). A atividade gelatinolítica das MMPs-­2 e -­9 após incubação com os primers bioativos foi avaliada através de zimografia convencional. Os resultados obtidos das duas análises foram apresentados na forma de porcentagem de inibição. Zimografia in situ foi realizada utilizando gelatina de fluorescência conjugada (Kit EnzChek Gelatinase/Collagenase Assay) como substrato de MMPs e avaliada com aumento de 40x através de microscopia de fluorescência. Posteriormente, os fótons fluorescentes foram analisados em software (ImageJ). Obtidos os resultados, os dados foram submetidos à análise estatística (2way ANOVA, Tukey, p>0,05) e demonstraram que os primers bioativos não exerceram influência significante sobre a RU dentina-­adesivo, independente da ação da ciclagem mecânica. A atividade colagenolítica, segundo zimografia convencional, demonstrou que os primers bioativos foram capazes de inibir as MMPs, sendo a CHX menos eficiente. Na análise de zimografia in situ, os primers bioativos diminuíram a atividade das MMPs localizadas na interface adesiva, com aumento da atividade gelatinolítica do grupo Controle sendo maior quando submetidos à ciclagem mecânica, efeito não encontrados no grupos tratados com primers bioativos. Concluiu-­se que, apesar de não apresentarem efeitos sobre a RU da interface adesiva, os primers bioativos apresentam ação sobre a degradação da camada híbrida. / The durability of composite resin restorations is one of the main points related to the success in aesthetic treatments. The longevity of adhesive restorations can be affected by various factors such as the materials, the clinical time of use and the dentin matrix degradation mediated by matrix metalloproteinases (MMPs). MMPs can affect the adhesive interface, compromising the bonding between dentin and adhesive. Thus, searching for better results on longevity of adhesive restorations, the aim of this study was to evaluate the effect of MMPs inhibitors (chlorhexidine -­ CHX 0.2% and doxycycline 3% ) and crosslinking agent (grape seed extract -­ GSE 15%) on resin composite bond strength (BS) of restorations submitted to load cycling. Class I cavities were performed in the central area of the exposed surface of 48 sound human molars. Then, it was divided into 4 groups (n=12) according to the surface treatment received after the acid etching: Group I -­ Control (Adhesive System -­ Adper Single Bond Plus -­ 3M ESPE); Group II -­ CHX 0.2% + Adhesive System; Group III -­ Doxycycline 3% + Adhesive System e Group IV -­ GSE 15% + Adhesive System. After restorative procedures (Filtek Supreme Ultra -­ 3M ESPE), the samples were stored in distilled water for 24 hours at 37°C and then subdivided into two subgroups (n=6): A -­ Control (stored in artificial saliva) and B -­ Submitted to load cycling (Coil Cycler, Proto-­tech, 50 N, 1.5 Hz, 1 x 106 cycles). After load cycling, the specimens were cut into sticks (0.8 x 0.8 mm; n = 5 per teeth) and submitted to the microtensile test (Bisco) at 1 mm/min. The collagenolytic activity of MMP-­2 under action of bioactive primers was analyzed using EnzChek Gelatinase/Colagenase Assay Kit (D-­12054, Molecular Probes, Eugene, OR, EUA). The gelatinolytic activity of MMPs-­2 and -­9 after incubation with the bioactive primers was evaluated by gelatin zymography. The results of these two analyzes were presented by percentage of inhibition. In situ zymography was performed using fluorescence conjugated gelatin (EnzChek Gelatinase/Collagenase Assay Kit) as MMP substrate and evaluated using 40x magnification under fluorescence microscopy. Then the fluorescent photons were analyzed with an appropriate software (ImageJ). The results were subjected to statistical analysis (2-­way ANOVA, Tukey, p<0.05) and the bioactive primers showed no significant influence on the dentin-­adhesive BS, regardless the load cycling action. According to gelatin zymography, the collagenolytic activity demonstrated that the bioactive primers were able to inhibit MMPs activity and CHX was less efficient. In situ zymography analysis, showed that the bioactive primers decreased the activity of MMPs located in adhesive interface. The data also demonstrated increased gelatinolytic activity on Control group, being higher when submitted to load cycling, and which effect was not found in the groups treated with bioactive primers. It could be concluded that although the bioactive primers did not influenced the BS of adhesive interface, they demonstrated positive results on hybrid layer degradation.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Rita.pdf: 19490568 bytes, checksum: 013237cc37f3177397fb7ac6f745899e (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / The present study aimed to introduce new intracanal medications and evaluate their antimicrobial effect against endodontic microorganisms involved in most of the cases of endodontic failure. The composition of the new formulations included 3% doxycycline hydrochloride (DX) or 3% nitrofurantoin (NIT), and a 2% chlorhexidine gel (CHX) was used as a positive control.This study was divided into three phases. The first phase evaluated the antimicrobial effect of the formulations DX and NIT against Gram-positive bacteria, Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus, Gram-negative bacteria, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, and fungus Candida albicans. The formulations were tested using the traditional agar diffusion test and the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) test. Based on the descriptive analysis of the agar diffusion test, DX presented a better antibacterial effect for most bacteria in the study. NIT values were lower than the CHX’s for all bacteria, with the exception of E. coli. DX and NIT were found ineffective for C. albicans. The descriptive analysis of MIC showed that DX was more effective than NIT, but when compared with CHX, it presented a lower antimicrobial effect. The second phase evaluated the antimicrobial effect against E. faecalis on the external root surface and the ability of diffusion through dentinal tubules of the new intracanal medications. Fifty human canine teeth were instrumented, sterilized and randomly divided into 5 groups of 10 teeth each, according to the formulation used as intracanal dressing: teeth sealed without medication (SM), negative control; CHX, positive control; placebo gel (PC); NIT and DX. After filling the root canals with the formulations, the teeth were incubated in the agar plates seeded with E. faecalis. The analysis of the halos revealed that DX had a larger inhibitory zone than CHX, while PC and NIT showed no antibacterial effect on the external root surface. The last phase evaluated the antimicrobial activity on infected root canals with E.faecalis. The chosen formulation was DX, as it obtained the best results on previous phases. Microbial samples were collected during three different time periods. The first sample (S1) was collected 21 days after contamination with E. faecalis; the second sample (S2) was collected 14 days under the effect of the intracanal medication, and the third sample (S3) 7 days after replacing the medication by BHI (Brain Heart Infusion) broth. The count of Colony Forming Units (CFU/mL) was statistically analyzed by repeated measures test (ANOVA) (p<0,05). All intracanal dressings significantly reduced the number of bacterial cells in the root canal after 14 days with medication (S2). After a period of 7 days with BHI broth (S3), the CFU counts of E. faecalis remained at low values in DX and CHX groups. The SM group, however, showed a significant increase of CFU in this period, to values similar to those of the initial contamination. These results show that DX was effective in eliminating E. faecalis from the root canal system, significantly decreasing the number of microorganisms after 14 days with medication and suggesting some substantivity after 7 days.Conclusion: From the two formulations suggested in this study, DX presented better antimicrobial effect against the microorganisms in the study (agar diffusion and MIC),supported by the effect on the external root surface and inside the root canal system. This new formulation containing DX can be considered as a possible intracanal dressing, namely in cases of endodontic failure. / Este estudo teve como objetivo investigar novas formulações de medicações intracanal e verificar a ação antimicrobiana destas em microrganismos frequentemente implicados em casos de insucesso endodôntico. As formulações estudadas continham doxiciclina a 3% (DX) ou nitrofurantoína a 3% (NIT), tendo sido usado como controlo positivo um gel de clorohexidina a 2% (CHX).O estudo foi dividido em três fases experimentais. Na primeira fase, foi analisado o efeito antimicrobiano das formulações DX e NIT, na presença das bactérias de Gram positivo, Enterococcus faecalis e Staphylococcus aureus, das bactérias de Gram negativo, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, e do fungo Candida albicans através de testes de difusão em agar e da determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Com base na análise descritiva dos resultados da difusão em agar, a DX foi a que apresentou maior efeito antimicrobiano, na generalidade das bactérias estudadas. Os resultados da NITforam inferiores aos da CHX em todas as bactérias do estudo, à exceção de E. coli.Tanto a DX como a NIT evidenciaram-se inativas para C. albicans. A análise descritiva da determinação da CIM revelou que a DX apresentou maior eficácia comparativamente com a NIT, mas resultados inferiores quando comparada com a CHX.Na segunda fase, as novas formulações foram avaliadas pela sua ação antimicrobiana, na superfície externa radicular, contra E. faecalis e eventual capacidade de difusão através dos canalículos dentinários. Foram usados 50 dentes humanos (caninos), previamente instrumentados e esterilizados, distribuídos aleatoriamente em cinco grupos (n=10), e atribuída uma formulação diferente a cada grupo: sem medicação (SM), controlo negativo; gel de clorohexidina a 2% (CHX), controlo positivo; gel placebo (PC); gel de nitrofurantoína a 3% (NIT); e gel de doxiciclina a 3% (DX). Preencheu-se o interior dos canais com as respetivas formulações e fez-se a incubação dos dentes em placas de agar com E. faecalis. A análise dos halos dos grupos em estudo demonstrou que a DX tem maior atividade na face externa da raiz do que a CHX, e que a NIT e o PC não evidenciaram ação antibacteriana no exterior da raiz. Na terceira e última fase, avaliou-se a ação antimicrobiana, em canais radiculares contaminados com E. faecalis. A formulação usada nesta fase foi a DX, uma vez que foi a que obteve melhores resultados nas duas fases anteriores. Efetuaram-se colheitas bacterianas em três períodos de tempo distintos. A primeira colheita (S1) realizou-se 21 dias depois da contaminação com E. faecalis; a segunda colheita (S2) foi efetuada 14 dias após a aplicação das formulações e a terceira colheita (S3), 7 dias depois da substituição das formulações por caldo de BHI (“Brain Heart Infusion”). A contagem das Unidades Formadoras de Colónias (UFC/mL) foi analisada através do teste de medidas repetidas (ANOVA) (p<0,05). Todas as novas formulações diminuíram significativamente o número de células bacterianas no interior dos canais após os 14 dias (S2) sob a ação da medicação intracanal. Depois do período de 7 dias com o caldo de BHI (S3), os valores de UFC de E. faecalis mantiveram-se em valores baixos nos grupos DX e CHX. No grupo SM verificou-se um aumento significativo para valores similares aos da contaminação inicial.Verificou-se, assim, que a DX foi eficaz na desinfeção dos canais, reduzindo significativamente o número de microrganismos após 14 dias e demonstrando alguma substantividade após 7 dias.Conclusão: Das duas formulações sugeridas neste estudo, o gel DX apresentou uma eficácia maior sobre os microrganismos estudados (difusão em agar e CIM), corroborado pela ação na superfície externa da raiz e no interior dos canais radiculares. Na formulação apresentada, o gel DX pode ser considerado como uma medicação intracanal alternativa, nomeadamente nos casos de insucesso endodôntico.

Large-scale expansion of lineage-committed stem cells can provide an excellent ex vivo model for studying complex molecular pathways governing cell fate choices. Also, such cells could be useful for implementing cell therapeutic approaches for treatment of specific disorders involving extensive cellular damage within that lineage. Using growth factors, pluri- and multipotent stem cells have been successfully isolated and cultured from pre- and peri-implantation stage embryos, including trophectoderm, primitive ectoderm, epiblast and primitive endoderm. However, ex vivo expansion of lineage restricted cells from later embryonic lineages and adult tissues have been a challenge. N-myc is a well-characterized member of myc gene family that is known to be essential for the proliferation of numerous progenitor cell types during normal embryonic development of diverse organs including lungs, liver, heart, kidneys and brain. Considering this important role of N-myc, we hypothesized that its regulated activation in these progenitors might allow their expansion in culture. To test this hypothesis, we generated a novel doxycycline-inducible transgenic mouse line that expresses N-myc uniformly across all tissues. Using cortical precursors derived from mid-gestation embryos of these mice, we show that upon doxycycline induced N-myc expression, we can achieve at least a million-fold expansion of multipotent neural precursors within a short span of time in culture. When doxycycline is withdrawn, N-myc expression is turned off and the cells differentiate into neurons and glia. An extensive characterization of the expanded cells revealed that the cells retained their differentiation potential, genomic stability and commitment specific to their origin. The tetracycline-inducible N-myc expressing mouse line might also serve as a source for establishing other than neural lineage committed progenitor cell lines where N-myc has a known role in regulating cell proliferation and differentiation decisions.

Large-scale expansion of lineage-committed stem cells can provide an excellent ex vivo model for studying complex molecular pathways governing cell fate choices. Also, such cells could be useful for implementing cell therapeutic approaches for treatment of specific disorders involving extensive cellular damage within that lineage. Using growth factors, pluri- and multipotent stem cells have been successfully isolated and cultured from pre- and peri-implantation stage embryos, including trophectoderm, primitive ectoderm, epiblast and primitive endoderm. However, ex vivo expansion of lineage restricted cells from later embryonic lineages and adult tissues have been a challenge. N-myc is a well-characterized member of myc gene family that is known to be essential for the proliferation of numerous progenitor cell types during normal embryonic development of diverse organs including lungs, liver, heart, kidneys and brain. Considering this important role of N-myc, we hypothesized that its regulated activation in these progenitors might allow their expansion in culture. To test this hypothesis, we generated a novel doxycycline-inducible transgenic mouse line that expresses N-myc uniformly across all tissues. Using cortical precursors derived from mid-gestation embryos of these mice, we show that upon doxycycline induced N-myc expression, we can achieve at least a million-fold expansion of multipotent neural precursors within a short span of time in culture. When doxycycline is withdrawn, N-myc expression is turned off and the cells differentiate into neurons and glia. An extensive characterization of the expanded cells revealed that the cells retained their differentiation potential, genomic stability and commitment specific to their origin. The tetracycline-inducible N-myc expressing mouse line might also serve as a source for establishing other than neural lineage committed progenitor cell lines where N-myc has a known role in regulating cell proliferation and differentiation decisions.

Osteoarthritis (OA) is a degenerative joint disease which has yet no complete treatment with medication. Doxycycline, a well-known antibiotic, has been shown to prevent matrixmetallopreoteinases-MMPs, indicating potency on OA treatment. However, long term systemic use can cause side effects on other tissues. This study aimed to develop controlled drug delivery systems of doxycycline/doxycycline-chondroitin sulfate (D/D-CS) in the form of PCL microspheres for providing a better and new treatment approach via local application. After optimization studies for size, loading efficiency, surface/structure and release properties, microspheres of low Mw PCL (14 kDa) was decided to be more suitable than those of high Mw (65 kDa). The release profile of former was also more compatible with diffusion model than that of latter. The bio-effectiveness of the microspheres was evaluated with three-dimensional in vitro model / osteoarthritic-rabbit chondrocytes embedded in agarose and subjected to interleukin-1&beta / throughout incubations. In vitro treatments with D/D-CS microspheres showed significant reduction in MMP-13 activity compared with untreated OA controls for 15 and 24-day incubations. Although collagen and GAG analysis results showed no enhancement of synthesis with MS treatments, significant decrease in GAG and collagen release from D/D-CS MS treated groups and from D MS treated ones respectively. Overall evaluations of the efficacy using in vivo rabbit OA model showed better radiographic scores and histological outcomes for D/D-CS MS groups compared to only hyaluronan injected and/or untreated controls in 8 weeks. The ex-vivo biomechanical properties of cartilages demonstrated improved hardness with values comparable to healthy group upon application of D-CS MS.

Orientador: Carlos Alan Candido Dias-Junior / Resumo: O óxido nítrico (NO) é um gás produzido principalmente por células endoteliais, e durante a época gestacional, contribui para evitar aumento exacerbado da resistência vascular sistêmica (RVS), uma vez que, durante esse período, aumenta-se o volume sanguíneo e a frequência cardíaca. Quando, há disfunções endoteliais, reduz-se a biodisponibilidade de NO, provocando vasoconstrição e esta, por sua vez, consequentemente aumenta atividade das MMPs. Essa queda do NO e aumento das MMPs culminam em desordens hipertensivas gestacionais. Segundo estudos anteriores realizados em modelos de hipertensão em machos a doxiciclina, um antibiótico derivado das tetraciclinas, diminuiu a pressão arterial sistólica devido a sua capacidade de inibir a atividade das MMPs. No entanto, há escassez de trabalhos que desenvolveram estudos sobre os efeitos da doxicicilina em modelos animais de hipertensão gestacional. Por esse motivo, investigamos os efeitos da doxiciclina na inibição das MMPs na hipertensão gestacional, induzida pelo Nω-nitro-L-arginina-metil éster (LNAME) em ratas. Para tanto, realizamos zimografia para avaliar a atividade da MMP-2 e -9 na placenta, no útero e na aorta torácica. Ainda avaliamos a pressão arterial sistólica, o desenvolvimento feto-placentário e os metabólitos do NO. Também foi avaliada a capacidade antioxidante plasmática, os níveis plasmáticos de soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) e o fator de crescimento placentário (PLGF). Nossos dados mostram que o tratament... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nitric oxide (NO) is a gas produced mainly by endothelial cells, and during the gestational period contributes to avoid an exacerbated increase in systemic vascular resistance (SVR), since during this period, there is a rise in blood volume and heart rate. When there are endothelial dysfunctions, the bioavailability of NO is reduced, causing vasoconstriction and this, in turn, consequently increases the activity of MMPs. This decrease in NO and increase in MMPs culminates in gestational hypertensive disorders. According to previous studies in non-gestational hypertension models, doxycycline, an antibiotic derived from tetracyclines, lowered systolic blood pressure due to its ability to inhibit MMP activity. However, there is a shortage of works that have developed studies on the effects of doxycycline in animal models of gestational hypertension. For this reason, we investigated the effects of doxycycline on the inhibition of MMPs in gestational hypertension, induced by Nω-nitro-L-arginine-methyl ester (L-NAME) in rats. We performed a zymography to evaluate the activity of MMP-2 and -9 in the placenta, uterus and thoracic aorta. We also evaluated systolic blood pressure, fetalplacental development and NO metabolites. Plasma antioxidant capacity, plasma levels of soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1) and placental growth factor (PLGF) were also evaluated. Our data shows that the treatment with L-NAME increased blood pressure and decreased the offspring of these animals. ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A longevidade das restaurações com compósitos está diretamente relacionada ao sucesso do tratamento estético. A vida útil das restaurações pode ser influenciada por vários fatores como o material empregado, tempo de uso clínico e a degradação da matriz dentinária por metaloproteinases da matriz (MMPs), que podem afetar a integridade da interface adesiva, fazendo com que a união dentina-­adesivo seja comprometida. Assim, buscando melhores resultados na durabilidade das restaurações adesivas, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de substâncias inibidoras de MMPs (soluções de clorexidina -­ CHX a 0,2% e doxiciclina a 3%) e agente de ligação cruzada (extrato de semente de uva -­ grape seed extract - GSE a 15%) na Resistência de União (RU) de restaurações de resina composta submetidas à ciclagem mecânica. Cavidades de Classe I foram preparadas na área central da superfície exposta de 48 molares humanos hígidos, posteriormente separados em 4 grupos (n=12) de acordo com o tratamento de superfície recebido após o condicionamento de ácido: Grupo I -­ Controle (Sistema Adesivo -­ Adper Single Bond Plus -­ 3M ESPE); Grupo II -­ CHX 0,2% + Sistema Adesivo; Grupo III -­ GSE 15% + Sistema Adesivo e Grupo IV -­ Doxiciclina 3% + Sistema Adesivo. Após os procedimentos restauradores (Filtek Supreme Ultra -­ 3M ESPE), as amostras foram armazenadas em água destilada durante 24 horas a 37°C e subdividas em dois subgrupos: A -­ Controle (armazenado em saliva artificial) e B -­ Submetido à ciclagem mecânica (Coil Cycler, Proto-­tech, forca de 50 N, frequência de 1,5 Hz em 1 x 106 ciclos de aplicação). Após ciclagem mecânica, os corpos de prova foram cortados em palitos (0,8 x 0,8 mm; n = 5 por dente) e submetidos ao teste de microtração (Bisco) a velocidade de 1 mm/min. A atividade colagenolítica da MMP-­2 sob a ação dos primers bioativos foi analisada utilizando o kit EnzChek Gelatinase/Colagenase Assay (D-­12054, Molecular Probes, Eugene, OR, EUA). A atividade gelatinolítica das MMPs-­2 e -­9 após incubação com os primers bioativos foi avaliada através de zimografia convencional. Os resultados obtidos das duas análises foram apresentados na forma de porcentagem de inibição. Zimografia in situ foi realizada utilizando gelatina de fluorescência conjugada (Kit EnzChek Gelatinase/Collagenase Assay) como substrato de MMPs e avaliada com aumento de 40x através de microscopia de fluorescência. Posteriormente, os fótons fluorescentes foram analisados em software (ImageJ). Obtidos os resultados, os dados foram submetidos à análise estatística (2way ANOVA, Tukey, p>0,05) e demonstraram que os primers bioativos não exerceram influência significante sobre a RU dentina-­adesivo, independente da ação da ciclagem mecânica. A atividade colagenolítica, segundo zimografia convencional, demonstrou que os primers bioativos foram capazes de inibir as MMPs, sendo a CHX menos eficiente. Na análise de zimografia in situ, os primers bioativos diminuíram a atividade das MMPs localizadas na interface adesiva, com aumento da atividade gelatinolítica do grupo Controle sendo maior quando submetidos à ciclagem mecânica, efeito não encontrados no grupos tratados com primers bioativos. Concluiu-­se que, apesar de não apresentarem efeitos sobre a RU da interface adesiva, os primers bioativos apresentam ação sobre a degradação da camada híbrida. / The durability of composite resin restorations is one of the main points related to the success in aesthetic treatments. The longevity of adhesive restorations can be affected by various factors such as the materials, the clinical time of use and the dentin matrix degradation mediated by matrix metalloproteinases (MMPs). MMPs can affect the adhesive interface, compromising the bonding between dentin and adhesive. Thus, searching for better results on longevity of adhesive restorations, the aim of this study was to evaluate the effect of MMPs inhibitors (chlorhexidine -­ CHX 0.2% and doxycycline 3% ) and crosslinking agent (grape seed extract -­ GSE 15%) on resin composite bond strength (BS) of restorations submitted to load cycling. Class I cavities were performed in the central area of the exposed surface of 48 sound human molars. Then, it was divided into 4 groups (n=12) according to the surface treatment received after the acid etching: Group I -­ Control (Adhesive System -­ Adper Single Bond Plus -­ 3M ESPE); Group II -­ CHX 0.2% + Adhesive System; Group III -­ Doxycycline 3% + Adhesive System e Group IV -­ GSE 15% + Adhesive System. After restorative procedures (Filtek Supreme Ultra -­ 3M ESPE), the samples were stored in distilled water for 24 hours at 37°C and then subdivided into two subgroups (n=6): A -­ Control (stored in artificial saliva) and B -­ Submitted to load cycling (Coil Cycler, Proto-­tech, 50 N, 1.5 Hz, 1 x 106 cycles). After load cycling, the specimens were cut into sticks (0.8 x 0.8 mm; n = 5 per teeth) and submitted to the microtensile test (Bisco) at 1 mm/min. The collagenolytic activity of MMP-­2 under action of bioactive primers was analyzed using EnzChek Gelatinase/Colagenase Assay Kit (D-­12054, Molecular Probes, Eugene, OR, EUA). The gelatinolytic activity of MMPs-­2 and -­9 after incubation with the bioactive primers was evaluated by gelatin zymography. The results of these two analyzes were presented by percentage of inhibition. In situ zymography was performed using fluorescence conjugated gelatin (EnzChek Gelatinase/Collagenase Assay Kit) as MMP substrate and evaluated using 40x magnification under fluorescence microscopy. Then the fluorescent photons were analyzed with an appropriate software (ImageJ). The results were subjected to statistical analysis (2-­way ANOVA, Tukey, p<0.05) and the bioactive primers showed no significant influence on the dentin-­adhesive BS, regardless the load cycling action. According to gelatin zymography, the collagenolytic activity demonstrated that the bioactive primers were able to inhibit MMPs activity and CHX was less efficient. In situ zymography analysis, showed that the bioactive primers decreased the activity of MMPs located in adhesive interface. The data also demonstrated increased gelatinolytic activity on Control group, being higher when submitted to load cycling, and which effect was not found in the groups treated with bioactive primers. It could be concluded that although the bioactive primers did not influenced the BS of adhesive interface, they demonstrated positive results on hybrid layer degradation.

Orientador: Jose Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T14:15:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fortuna_GeisaMariaXaudPeixoto_M.pdf: 4179855 bytes, checksum: c2a44e33b1985187232d501fdd1ac3b0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Metaloproteinases modulam a contratilidade vascular e podem afetar a hipertensão pulmonar que ocorre na embolia pulmonar induzida (EPA). Nós examinamos os efeitos da administração de doxiciclina ( um inibidor das metaloproteinases) em cães anestesiados e submetidos à EPA. Métodos: 5 cães no grupo sham receberam somente salina. EPA foi induzida por injeção intravenosa de microesferas em quantidade suficiente para aumentar a pressão média arterial pulmonar (PMAP) em 20 mmHg e cães do grupo embolia receberam salina (grupo embolia, N=8) ou doxiciclina (10 mg/Kg, i.v.) 5 ou 30 minutos após EPA (grupos embolia + doxi 5 e embolia + doxi 30, N=9 e 8, respectivamente). Avaliação hemodinâmica foi feita no momento basal e de 5 a 120 minutos após EPA. Zimografia da MMP-2 e da MMP-9 foi feita nas amostras de plasma. Resultado: nenhuma mudança hemodinâmica foi observada no grupo sham. Embolização aumentou a PMAP em 218+/-16% e índice de resistência vascular pulmonar (IRVP) em 289+/-42% no grupo embolia (ambos p<0,05). Doxicilina aumentou o índice cardíaco (IC) em 24+/-5% e reduziu o IRVP em 23+/-4% 120 minutos após EPA no grupo embolia+doxi 30. Em acréscimo, doxi reduziu PMAP e IRVP 30 minutos após EPA com efeito máximo após 120 (25+/-4% de redução na PMAP e 33+/-6% de redução no IRVP, ambos <0,05) no grupo embolia+doxi 5. Os níveis plasmáticos de pró-MMP-9 e MMP-9 elevaram-se somente no grupo embolia e MMP-2 permaneceu inalterada. Conclusão: nosso estudo mostra que doxiciclina atenua a hipertensão pulmonar na EPA induzida e indica que, MMP-9 tem um papel na hipertensão pulmonar da EPA induzida. MMP-9 pode ser um alvo farmacológico na EPA / Abstract: Matrix metalloproteinases (MMPs) modulate vascular contractility and may affect acute pulmonary embolism (APE)-induced pulmonary hypertension. We examined the effects of the administration of doxycycline (a MMP inhibitor) following APE in anesthetized dogs. Methods: Sham operated dogs (N=5) received only saline. APE was induced by intravenous injections of microspheres in amounts to increase mean pulmonary artery pressure (MPAP) by 20 mmHg, and embolized dogs received saline (Emb group, N=8), or doxycycline (10 mg/kg, i.v.) 5 or 30 min of APE (Emb + Doxy 5 and Emb + Doxy 30 groups, N=9 and 8, respectively). Hemodynamic evaluation was performed at baseline and 5-120 after APE. Gelatin zymography of MMP-2 and MMP-9 from plasma samples was performed. Results: No significant hemodynamic changes were found in Sham animals. Embolization increased MPAP by 218±16% and the pulmonary vascular resistance index (PVRI) by 289±42% in Emb group (both P<0.05). Doxycyline increased the cardiac index by 24±5% and reduced PVRI by 23±4% 120 min of APE in Doxy 30 + Emb group. In addition, doxycyline reduced MPAP and PVRI 30 min after APE with maximum effects seen 120 min after APE (25 ± 4% decrease in MPAP and 33 ± 6% decrease in PVRI; both P<0.05) in Doxy + 5 group. Plasma pro-MMP-9 and MMP-9 levels increased only in Emb group and MMP-2 remained unaltered. Conclusions: Our study shows that doxycycline attenuates APE-induced pulmonary hypertension, and indicates that MMP-9 has a role in APE-induced pulmonary hypertension. MMP-9 may be a pharmacological target in APE / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Introdução: A doxiciclina, membro da família das tetraciclinas, é uma droga utilizada como antibiótico (posologia de 100 mg/dia) e como inibidora de metaloproteinases de matriz - MMPs - (posologia de 20 mg duas vezes ao dia), uso que tem efeito de droga anti-inflamatória. A doxiciclina é quelante de cálcio e portanto interfere na remodelação óssea. Objetiva-se neste trabalho avaliar ação do medicamento doxiciclina no controle da osteopenia. Materiais e métodos: 63 ratas Wistars obtidas no biotério central da Universidade de São Paulo campus de Ribeirão Preto foram divididas em 9 grupos com n=7 cada, sendo estes: grupo Controle com doxiciclina 10mg/kg/dia (C10), Controle com doxiciclina 30 mg/kg/dia (C30) e Controle (C), Grupo Ovariectomizado com doxiciclina 10mg/kg/dia (OVX10), Ovariectomizado com doxiciclina 30mg/kg/dia (OVX30) e Ovariectomizado com água (OVX), Grupo Sedentarismo 10mg/kg/dia (Se10), Sedentarismo 30mg/kg/dia (Se30) e Sedentário com água (Se). Todos os grupos tiveram seus modelos de indução a osteopenia por 90 dias. Em seguida, os grupos que receberam o medicamento, foram submetidos as doses diárias (10mg/kg/dia e 30mg/kg/dia) por 60 dias. As amostras dos fêmures esquerdos foram destinadas para densitometria óssea enquanto as amostras de fêmures direitos foram submetidos a análises de microscopia de luz. As amostras de tíbia direita foram destinadas à quantificação química de cálcio, magnésio, zinco e fósforo e, amostras de soro total foram submetidos a análises de quantificação de cálcio e colesterol total. O peso das ratas foi aferido em balança de precisão no próprio biotério. O fêmur esquerdo foi posteriormente seco em estufa a 37 graus Celsius e pesado em balança de precisão e o comprimento destes ossos fêmures foram aferidos com auxílio de um paquímetro digital para medição dos ossos em seu longo eixo. Foi empregada análise estatística modelo linear geral, multivariado e as análises de TRAP foram submetidas a teste de normalidade e em seguida à teste não paramétricos com Kurskal Wallis com análise de variância, havendo diferenças o post-test de Dunn foi realizado para especificar as diferenças ambas com significância de p<=0,05. Resultados: Foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre Se vs. Se10 e Se30 para BMC, quantificação de Magnésio e quantificação do trabeculado ósseo por Tricromo de Masson na porção distal, OVX vs. OVX10 para densitometria óssea e Cálcio em soro, OVX vs. OVX10 e OVX30 para quantificação de trabeculado ósseo por Tricromo de Masson na porção proximal e distal e Se vs. Se30 e OVX vs. OVX30 para imunomarcação por TRAP, todos os resultados com p<=0,05. Conclusão: Neste modelo experimental a doxiciclina teve um papel chave no transporte sanguíneo do quelato de cálcio (dados comprovados pela maior presença de cálcio no soro do grupo OVX30) e contribuiu positivamente em ossos de ratas acometidas pela osteopenia induzida por ovariectomia bilateral e sedentarismo, dados comprovados por densitometria, quantificação do trabeculado ósseo de fêmur porção distal, análise qualitativa por imunomarcação por TRAP e quantificação de Mg no osso. / Introduction: Doxycycline, a member of the tetracycline family, is a drug used as an antibiotic (100 mg / day dosage) and as an inhibitor of matrix metalloproteinases - MMPs (20 mg twice daily), a use that has anti-inflammatory effect. Doxycycline is a calcium chelator and therefore interferes with bone remodeling. The main objective of this study was to evaluate the action of the drug doxycycline in the control of osteopenia. Materials and methods: Sixty-three Wistars rats obtained from the USP, campus Ribeirão Preto, were divided into 9 groups with n = 7 each, being: Control group with Doxycycline 10 mg/kg/day (C10), Control with Doxycycline 30 mg/kg/day (OVX10), Ovariectomized with Doxycycline 30mg/kg/day (OVX30) and Ovariectomized with water (OVX), Sedentarism Group 10mg/kg/day (C30) and Control (C30), Ovariectomized Group with Doxycycline 10mg/kg/day (Se10), sedentarism 30mg/kg/day (Se30) and Sedentarism with water (Se). All groups had their induction models to osteopenia for 90 days. Subsequently, the groups receiving the medication were submitted to daily doses (10mg/kg/day and 30mg/kg/day) for 60 days. The left femur samples were assigned to Bone Densitometry, right femur samples were subjected to light microscopy, right tibia samples for chemical quantification of calcium, magnesium, zinc and phosphorus, and total serum samples were submitted to quantification of calcium and total cholesterol. The weight of the rats was measured on a precision scale at the animal house. The left femur was dried at 37 degrees Celsius on dried oven and then weighed on a precision scale, and the length of these femur bones were measured using a digital caliper to measure the bones along its long axis. Statistical analysis was used for linear general model, multivariate analysis and the TRAP analyzes were submitted to normality test and then to non-parametric test with Kurskal Wallis with analysis of variance, having differences a Dunn post-test was performed to specify the differences both with significance of p<=0.05. Results: Statistically significant differences were found between Se vs. Se10 and Se30 for BMC, quantification of Magnesium and quantification of bone trabeculation by Masson trichrome in the distal portion, OVX vs. OVX10 for bone densitometry and Calcium in serum, OVX vs. OVX10 and OVX30 for quantification of bone trabeculation by Masson trichrome in the proximal and distal portion and Se vs. Se30 and OVX vs. OVX30 for TRAP immunostaining, all results with p<=0.05. Conclusion: At this experimental model, doxycycline played a key role in the blood transport of calcium chelate (data evidenced by the higher presence of calcium in the serum of the OVX30 group) and contributed positively to bone from rats affected by osteopenia induced by bilateral ovariectomy and sedentary lifestyle, supporting data of bone densitometry, quantification of bone trabeculation of the distal femur, qualitative analysis by TRAP immunostaining and quantification of Mg in the bone.

Orientador: Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T16:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_JulianoAlves_M.pdf: 2037942 bytes, checksum: c24d96b2cb0285fc7a0e33b79cfd404a (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é o tipo mais comum de miopatia caracterizado pela perda da deambulação aproximadamente aos 10 anos de idade, levando a óbito por volta da segunda década de vida devido à insuficiência cardiorrespiratória. A degeneração muscular e a fibrose estão associadas com a inflamação nos músculos distróficos em pacientes DMD e no camundongo mdx, modelo experimental para a DMD. Sendo assim, a identificação de fármacos que possam amenizar a severidade e retardar a progressão da doença é necessária. Neste trabalho foi examinado o efeito da doxiciclina (DOX), um membro da família das tetraciclinas, na mionecrose e na fibrose intersticial nos músculos esquelético e cardíaco, além da função muscular de camundongos mdx jovens e idosos. No grupo mdx jovem, o tratamento com a DOX (Sandoz) foi administrado na água de beber 6mg/ml, para a mãe e seus recém-nascidos. Iniciou-se o tratamento no dia do nascimento e a mãe foi mantida na gaiola com os filhotes durante os 36 dias de tratamento (n=9). O grupo mdx controle recebeu apenas água (n=9). No grupo mdx idoso, o tratamento com a DOX (Sandoz) foi administrado na água de beber 6mg/ml, para os camundongos durante 9 meses. Este tratamento foi iniciado aos 8 meses e finalizado aos 17 meses de idade (n=8). O grupo mdx controle recebeu apenas água, durante o mesmo período (n=8). Através da avaliação histopatológica no músculo esquelético (bíceps braquial, diafragma e tibial anterior) e cardíaco foram identificadas e quantificadas, fibras em degeneração, fibras com núcleo central e com núcleo periférico, área de regeneração, área de inflamação e área de fibrose. Foi realizada análise bioquímica, através da determinação dos níveis séricos da Creatina Cinase (CK) no plasma sanguíneo e análise funcional da força de tração do membro torácico. Os resultados quantitativos foram comparados entre os camundongos mdx-DOX e os mdx controles. Nossos resultados mostram que a DOX amenizou o fenótipo distrófico na musculatura esquelética e cardíaca e melhorou a força muscular do membro torácico nos camundongos mdx. A DOX protegeu as fibras musculares contra a mionecrose acompanhada por uma diminuição dos níveis de CK e reduziu a área de inflamação. Além disso, a DOX retardou a progressão da fibrose miocárdica e a fibrose no músculo esquelético. Dado que a DOX apresenta compostos bem tolerados e aprovada pela FDA (Food and Drug Administration) esta droga surge como um potencial agente para o tratamento da DMD / Abstract: Duchenne muscular dystrophy (DMD) is the most common myopathy characterized by loss of ambulation at about 10 years of age with death by twenties due to respiratory and cardiac insufficiency. Muscle degeneration and fibrosis are associated with inflammation in dystrophic muscles of Duchenne muscular dystrophy and in the mdx mice. The identification of promptto- use drugs that can reduce the severity and slow down the progression of the disease is required. We examined whether doxycycline (DOX), a member of tetracycline family, can improve histopathology and muscle function of the mdx mice, an experimental model for DMD. For the short term study, DOX was administered to mothers and newborns in drinking water at 6mg/ml beginning at 1 days of birth, for 5 weeks (n=9). Control mdx mice received water only (n=9). For the long term study, DOX was given in drinking water at 6mg/ml (n=8) during 9 months (starting at 8 months age). Control mdx mice received water only (n=8). Skeletal (biceps brachii, diaphragm and tibialis anterior) and cardiac muscles were submitted to histopathological (degenerating fibers, fibers with central nucleus and nucleus with peripheral areas of inflammation and fibrosis area), biochemical (serum creatine kinase - CK) and functional studies. Quantitative results were compared between treated and untreated mdx mice. We found that DOX significantly minimized dystrophic phenotype in skeletal and cardiac muscles and improved forelimb muscle strength. The drug protected muscle fibers against myonecrosis and decreased inflammation accompanied by a decrease serum CK. Furthermore, DOX slowed down the progression of myocardial fibrosis and skeletal muscle. Given that DOX is well tolerated and approved by the Food and Drug Administration this drug emerges as a potential agent for DMD therapy / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural