Made available in DSpace on 2015-04-11T13:57:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mauricio Bacarin Silva.pdf: 2883558 bytes, checksum: 65e99cc036dea5d5fe5d36bdbf1c71bd (MD5) Previous issue date: 2011-06-15 / The products of Musa paradisiaca (banana plantain) are used as a sedative for dental pain, healing of tooth extraction surgical wounds, gastric ulcer, hypoglycemic, antidote for snake bites, diarrhea among other indications in communities that have a tradition of using plants as alternative medicine. In Endodontics, it aspires to be an ideal intracanal medicament against resistant strains in refractory endodontic infections. Therefore, the objective of this study was to test the antimicrobial activity of Musa paradisiaca glycolic extract. To perform the experiment, the Musa paradisiaca glycolic extract replaced Polyethylene glycol 400, which is a vehicle that makes up some pastes used as Endodontic intracanal medication. Well agar diffusion test was used to evaluate the antimicrobial activity against strains of Enterococcus faecalis usually related to refractory endodontic infections. Different materials were inserted in wells in two experimental steps as characterized in the following groups. Experiment A : Group 1, Polyethylene glycol 400 (PEG 400 - negative control); Group 2, PEG 400 and calcium hydroxide (Ca(OH)2); Group 3, Musa paradisiaca Glycolic Extract (EGB); Group 4, EGB and Ca(OH)2; Group 5, 2% chlorhexidine gel (CHX - positive control). Experiment B : Group 1, PEG 400 (negative control); Group 2, PEG 400 and zinc oxide (ZnO); Group 3, PEG 400, Ca(OH)2 and ZnO; Group 4, ZnO and EGB; Group 5, EGB, Ca(OH)2 and ZnO; Group 6, CHX (positive control). After incubation, measurements of inhibition zones were performed after 18 hours with a millimeter ruler. Just EGB and ZnO paste obtained statistically significant antimicrobial activity with similar results to the positive control and was subjected to macrodilution, a finding for minimum inhibitory concentration, but no dilution of the paste was able to prevent the growth of E. faecalis. These data were treated statistically at 95% significance using the Mann-Whitney test and Descriptive Statistics. The composition of EGB was assessed by Mass Spectrometry with Electrospray Ionization and it was found that one of the major components could be maltose. Thin Layer Chromatography (CCD) was carried out in phases of ethyl acetate, dichloromethane and aqueous partition resulting from liquid/liquid held in EGB, after drying under a hood. CCD suggested the presence of flavonoids, terpenes, tannins and steroids in EGB. The Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy was performed in order to also propose the composition of EGB and observed a large number of signal peaks in the region concerning the glycosides, as well as peaks corresponding to the structure of terpenes and a few characteristic of steroids. The EGB showed antimicrobial activity when combined with ZnO and can be an alternative to the composition of an intracanal medication. Every new biomaterial based on ethnobotany should be carefully tested to allow its clinical applicability, which justified the relevance of this preliminary study; however physico-chemical and biocompatibility tests are essential to future employment of herbal medicines in Endodontics / Os produtos de Musa paradisiaca (bananeira) são usados como sedativo para dor de dente, cicatrizante de feridas cirúrgicas de exodontia, úlcera gástrica, hipoglicemiante, antídoto para picada de cobras, diarréia entre outras indicações em comunidades que têm por tradição o uso das plantas como medicina alternativa. Na Endodontia, almeja-se uma medicação intracanal ideal contra cepas resistentes em infecções endodônticas refratárias. Por esse motivo, o objetivo desse trabalho foi testar a atividade antimicrobiana do extrato glicólico de Musa paradisiaca sobre Enterococcus faecalis. Para realizar o experimento, o extrato glicólico de Musa paradisiaca substituiu o Polietileno glicol 400, que é um veículo que compõe algumas pastas endodônticas usadas como medicação intracanal. Foi utilizado o teste de difusão em Ágar, pelo método do poço, para a avaliação da atividade antimicrobiana contra a cepa de Enterococcus faecalis normalmente relacionada a infecções refratárias endodônticas. Foram inseridos nos poços diferentes materiais que caracterizam os seguintes grupos em duas etapas experimentais. Experimento A : Grupo 1, Polietileno glicol 400 (PEG 400 - controle negativo); Grupo 2, PEG 400 e Hidróxido de cálcio (Ca(OH)2); Grupo 3, Extrato Glicólico de Musa paradisíaca (EGB); Grupo 4, EGB e Ca(OH)2; Grupo 5, gel de Clorexidina 2% (CHX controle positivo). Experimento B : Grupo 1, PEG 400 (controle negativo); Grupo 2, PEG 400 e Óxido de zinco (ZnO); Grupo 3, PEG 400, Ca(OH)2 e ZnO; Grupo 4, EGB e ZnO; Grupo 5, EGB, Ca(OH)2 e ZnO; Grupo 6, CHX (controle positivo). Após incubação, as medições dos halos de inibição foram realizadas após 18 horas com uma régua milimetrada. Apenas a pasta de EGB e ZnO obteve atividade antimicrobiana estatisticamente significante com resultados similares ao controle positivo e foi submetida à macrodiluição para que fosse verificada a concentração inibitória mínima, mas nenhuma diluição da pasta foi capaz de evitar o crescimento de E. faecalis. Esses dados foram tratados estatisticamente a 95% de significância usando o teste de Mann-Whitney e a Estatística Descritiva. A composição do EGB foi avaliada por Espectrometria de Massas com Ionização por Electrospray e foi verificado que um dos componentes majoritários poderia ser a maltose. A Cromatografia de Camada Delgada (CCD) foi realizada nas fases de acetato de etila, diclorometano e aquosa resultantes da partição líquido/líquido realizada no EGB, depois de seco em capela. A CCD sugeriu a presença de flavonóides, terpenos, taninos e esteróides no EGB. A Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear foi realizada com o propósito de supor a composição do EGB e foi observado grande número de picos de sinais na região referente aos glicosídeos, assim como picos referentes à estrutura molecular de terpenos e um sinal característico de esteróides. O EGB apresentou atividade antimicrobiana quando associado ao ZnO, podendo ser uma propriedade importante para a composição de um novo medicamento intracanal. Todo novo biomaterial baseado na etnobotânica deve ser testado criteriosamente para viabilizar sua aplicabilidade clínica, o que justificou a pertinência deste estudo preliminar, no entanto testes físico-químicos e de biocompatibilidade são imprescindíveis para futuro emprego de fitoterápicos na Endodontia

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-12-16T17:33:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alessandra Rossi Coelho - 2015.pdf: 1908871 bytes, checksum: 877bc61729d067f31c137085853a9b95 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-26T12:25:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alessandra Rossi Coelho - 2015.pdf: 1908871 bytes, checksum: 877bc61729d067f31c137085853a9b95 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-26T12:25:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alessandra Rossi Coelho - 2015.pdf: 1908871 bytes, checksum: 877bc61729d067f31c137085853a9b95 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Objectives: To determine the antibacterial effect provided by Endox system associated with different irrigation protocols in the preparation of infected root canals. Material and methods: A total of 18 extracted human teeth with anatomical diameters corresponding to approximately 350-400 micrometers were selected. The teeth were contaminated with suspension of Enterococcus faecalis (ATCC 29212) for 60 days and randomly divided into five groups: 1. root canal preparation (RCP) + passive ultrasonic irrigation (PUI) with NaOCl + EDTA; 2. RCP + PUI with NaOCl + EDTA + Endox system; 3. RCP + conventional irrigation (CI) with NaOCl + EDTA 4. RCP + CI with NaOCl + EDTA + Endox system; 5. RCP + PUI with distilled water + EDTA + Endox system. Three teeth uncontaminated were the negative control (group 6). Samples were taken from the root canals before the RCP after 20 minutes and 72 hours, immersed in 7 ml of Brain Heart Infusion (BHI) for a period of 48 hours, incubated at 37 °C. The presence of bacterial was assessed by turbidity of the culture medium followed by optical density analysis using UV spectrophotometer. The differences between groups were statistically analyzed by mean, standard deviation, variance analysis and Tukey test (post hoc). The significance level was 5%. Results: The presence of E. faecalis was observed after 72 h in all experimental groups. In Groups 2 and 4 decreased the optical density of the culture medium after 72 h, with no significant difference between them, while in Groups 1, 3 and 5 was increased. The average optical density of the culture medium was zero in Group 6. Conclusion: The Endox system used after the root canal preparation, associated with conventional irrigation or passive ultrasonic irrigation with NaOCl 2,5% / EDTA, was not effective in eliminating E. faecalis. / Objetivo: Avaliar o efeito antibacteriano proporcionado pelo sistema Endox associado a diferentes protocolos de irrigação durante o preparo de canais radiculares (PCR) infectados. Material e método: Foram selecionados 18 dentes humanos anteriores extraídos com diâmetros anatômicos correspondentes a aproximadamente 350-400 micrômetros. Os dentes foram contaminados com suspensão de Enterococcus faecalis (ATCC 29212) por 60 dias, e aleatoriamente distribuídos em cinco grupos experimentais: Grupo 1. PCR + irrigação ultrassônica passiva (IUP) com NaOCl 2,5% + EDTA; Grupo 2. PCR + IUP com NaOCL 2,5% + EDTA + sistema Endox; Grupo 3. PCR + irrigação convencional (IC) com NaOCl 2,5% + EDTA Grupo 4. PCR + IC com NaOCl 2,5% + EDTA + sistema Endox; Grupo 5. PCR + IUP com água destilada + EDTA + sistema Endox. Três dentes não contaminados constituíram o grupo controle negativo (Grupo 6). Amostras foram coletadas dos canais radiculares antes do PCR, após 20 minutos e 72 horas, imersas em 7 mL de Brain Heart Infusion (BHI) por um período de 48 horas, incubadas a 37ºC. A presença bacteriana foi analisado pela turvação do meio de cultura seguido pela mensuração da densidade óptica utilizando espectrofotômetro UV. As diferenças entre os grupos foram analisadas estatisticamente pela média, desvio padrão, análise de variância e teste de Tukey (post hoc). O nível de significância foi de 5%. Resultados: A presença de E. faecalis foi observada, após 72 h, em todos os grupos experimentais. Nos Grupos 2 e 4 houve redução da densidade óptica do meio de cultura após 72 h, não havendo diferença significativa entre ambos, enquanto que nos Grupos 1, 3 e 5 houve aumento. A média da densidade óptica do meio de cultura no Grupo 6 foi zero. Conclusão: O sistema Endox, utilizado após o preparo do canal radicular, associado a irrigação convencional ou irrigação ultrassônica passiva, com NaOCl a 2,5%/ EDTA, não foi efetivo na eliminação do E. faecalis.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-06-27T13:29:40Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mônica Misaé Endo - 2015.pdf: 2157390 bytes, checksum: 65185e5c03de4e1f17fae411e86b3b3b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-07-10T14:11:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mônica Misaé Endo - 2015.pdf: 2157390 bytes, checksum: 65185e5c03de4e1f17fae411e86b3b3b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T14:11:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Mônica Misaé Endo - 2015.pdf: 2157390 bytes, checksum: 65185e5c03de4e1f17fae411e86b3b3b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / The objective of this study was to investigate the antibacterial effect of alcoholic extracts of 30% red propolis, 40% green propolis and 2.5% sodium hypochlorite in different irrigation protocols in root canals infected Enterococcus faecalis. Twenty-four extracted teeth with one root canal were selected, the prepared root canals and inoculated with E. faecalis for 60 days. The teeth were randomly divided into eight experimental groups (n = 3) and 2 control groups (n = 3). In all experimental groups were performed root canal preparation and two irrigation protocols - passive ultrasonic irrigation and conventional irrigation. In the groups 1, 3, 5 and 7 was made ready root canal associated with conventional irrigation to 30% propolis, 40% propolis, 2.5% sodium hypochlorite and distilled water, respectively. In groups 2, 4, 6 and 8 was performed root canal preparation associated with passive ultrasonic irrigation and irrigated with the same solutions described above. In the groups 9 and 10 were the controls - negative (root canals uncontaminated) and positive (root canals contaminated untreated). Samples of root canals were collected and immersed in 7 mL of BHI for 48 hours, incubated at 37 °C. The bacterial growth was assessed by turbidity of the culture medium. The results showed antibacterial effectiveness of the alcoholic extract of 30% red propolis and 2.5% sodium hypochlorite when used conventional irrigation and passive irrigation, only after 20 minutes. The irrigation protocols and the substances tested were not effective to eliminate bacterial dentin contamination with E. faecalis. / objetivo deste estudo foi verificar o efeito antibacteriano dos extratos alcoólicos de própolis vermelha a 30%, própolis verde a 40% e hipoclorito de sódio a 2,5% com diferentes protocolos de irrigação em canais radiculares infectados por Enterococcus faecalis. Vinte e quatro dentes unirradiculares extraídos foram selecionados, os canais radiculares preparados e inoculados com E. faecalis durante 60 dias. Os dentes foram aleatoriamente distribuídos em 8 grupos experimentais (n=3) e 2 grupos controles (n=3). Em todos os grupos experimentais foi realizado preparo do canal radicular e dois protocolos de irrigação - irrigação ultrassônica passiva e irrigação convencional. Nos grupos 1, 3, 5 e 7 foi feito o preparo do canal radicular associado à irrigação convencional com própolis vermelha a 30%, própolis verde a 40%, hipoclorito de sódio a 2,5% e água destilada, respectivamente. Nos grupos 2, 4, 6 e 8 foi realizado o preparo do canal radicular associado a irrigação ultrassônica passiva e irrigados com as mesmas soluções descritas anteriormente. Os grupos 9 e 10 constituíram os controles – negativo (canais radiculares não contaminados) e positivo (canais radiculares contaminados sem tratamento). Amostras dos canais radiculares foram coletadas e imersas em 7 mL de BHI por um período de 48 horas, com incubação a 37ºC. O crescimento bacteriano foi analisado pela turbidez do meio de cultura. Os resultados mostraram efetividade antibacteriana do extrato alcoólico de própolis vermelha a 30% e hipoclorito de sódio a 2,5%, quando utilizada irrigação convencional e irrigação passiva, somente após 20 minutos. Os protocolos de irrigação e as substâncias testadas não foram efetivos para eliminar a contaminação dentinária bacteriana com E. faecalis.

O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades físico-químicas, antimicrobianas e biocompatibilidade do MTA branco manipulado com extratos aquoso e/ou em propilenoglicol da Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. e própolis. Dentre os testes físico-químicos foram avaliados o tempo de presa, escoamento, pH, liberação de íons cálcio e alteração volumétrica. Para verificar o efeito antimicrobiano foram aplicadas as metodologias do contato direto (Enterococcus faecalis e a Cândida albicans) e da descontaminação dentinária, empregando a microscopia confocal de varredura laser para verificar a viabilidade de Enterococcus faecalis. Para a avaliação da biocompatibilidade, 162 ratos Wistar foram utilizados, onde cada animal recebeu dois implantes subcutâneos e um alveolar. Após os períodos experimentais de 15, 30 e 60 dias foram realizadas análises microtomográfica, histológica descritiva e histomorfométrica. Adicionalmente amostras do tecido alveolar foram processadas para dosagem das citocinas TNF-&#x3B1; e IL-10 por meio do ensaio imunoenzimático (ELISA). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente com os testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn. Os resultados revelaram que a variação do veículo associado ao MTA aumentou significativamente o tempo de presa, no entanto, não houve influência na alteração volumétrica (P>0,05) e na capacidade do cimento em manter o meio alcalino e liberar íons cálcio. Os cimentos manipulados com extratos em propilenoglicol apresentaram maior escoamento (P<0,05). Apenas o extrato da própolis agregou ao MTA efeito contra o Enterococcus faecalis após 24 e 48 horas (descontaminação dentinária e contato direto respectivamente) e contra a Cândida albicans após 10 horas (P<0,05). De acordo com as avaliações histológica e histomorfométrica dos implantes em tecidos subcutâneo e alveolar não foi constatada diferença significativa entre os grupos experimentais quando comparados com o grupo no qual o MTA foi manipulado com água destilada. Segundo a análise microtomográfica e a expressão das citocinas TNF-&#x3B1; e IL-10 houve similaridade (P>0,05) entre todos os grupos. Apesar de ter alterado algumas propriedades físico-químicas, o extrato da própolis potencializou o efeito antimicrobiano do MTA sem, contudo, alterar sua biocompatibilidade. / The aim of this study was to evaluate the physicochemical, antimicrobial properties and biocompatibility of white MTA mixed with aqueous or propylene glycol extracts of Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. and propolis. Among physicochemical tests were evaluated the setting time, flowability, pH, ion calcium release and volumetric change. To verify the antimicrobial effects were applied the methods of direct contact (Enterococcus faecalis and Candida albicans) and dentin decontamination by using the confocal laser scanning microscopy to verify the Enterococcus faecalis viability. To evaluate the biocompatibility were used 162 Wistar rats. Each animal received one alveolar and two subcutaneous implants. After the experimental periods of 15, 30 and 60 days were performed the microtomography, histological description and histomorphometric analyses. Additionally alveolar tissue samples were processed for the measurement of TNF-&#x3B1; e IL-10 cytokines by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The data were statistically analyzed by the ANOVA and Tukey or KruskalWallis and Dunns tests. The results revealed that the variation of the vehicle associated to MTA significantly increased its setting time, however did not influence the volumetric change (P>0,05) and the cement\'s ability to maintain the alkaline medium and ion calcium release. Cements mixed with propylene glycol extracts showed higher flowability (P<0,05). Only propolis extract added to MTA the effect against E. faecalis after 24 and 48 hours (dentin decontamination and direct contact respectively) and against Candida albicans after 10 hours (P<0,05). According to the histological and histomorphometric evaluation of the implants in subcutaneous and alveolar tissue was not observed significant differences between the experimental groups in comparison to the reference group (MTA was mixed with distilled water). The microtomography analysis and expression of TNF-&#x3B1; and IL-10 showed that the groups were similar (P>0,05). Although the propolis extract modified some physicochemical properties of MTA it is potentiated the antimicrobial effect and did not influence the biocompatibility.

O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) sobre o Enterococcus faecalis (E. faecalis), in vitro, utilizando a clorofila (CL) como agente fotossensibilizador (FS) e o diodo emissor de luz (LED) como fonte de luz. A cultura pura de E. faecalis foi ativada em caldo de BHI a 37oC por 24h. O cultivo do microrganismo foi centrifugado a 3000rpm por 15min, e o pellet re-suspenso em 0,85% de solução salina. As concentrações da bactéria foram ajustadas para 107UFC mL-1 (unidades formadoras de colônias por mililitro). Diferentes tipos de solventes para a CL foram testados: éter, álcool de cereais, Tween 80 e P-123. 100l do inóculo e o mesmo volume da solução teste foram inseridos em cada poço da placa de microtitulação. A mistura foi agitada e aguardou-se 1min. 25l da suspensão foi removida e diluições seriadas foram realizadas. Alíquotas de cada diluição foram espalhadas na superfície da placa, armazenadas em microaerofilia e incubadas na estufa por 24h a 37oC. O número de UFC foi contado em cada placa. Para o experimento da TFDa, os grupos foram divididos em: controle (G1); TBO 1min (G2); CL+Tween 1min (G3); CL+Tween 5min (G4); CL+P-123 1min (G5); CL+P-123 5min (G6); CL+Tween 1min + LED 1min (G7); CL+Tween 1min + LED 5min (G8); CL+Tween 5min + LED 1min (G9); CL+Tween 5min + LED 5min (G10); CL+P-123 1min + LED 1min (G11); CL+P-123 1min + LED 5min (G12); CL+P-123 5min + LED 1min (G13); CL+P-123 5min + LED 5min (G14); TBO 1min + LED 1min (G15); TBO 1min + LED 5min (G16); LED 1min (G17); LED 5min (G18).Um volume de 100l da suspensão bacteriana foi inserido em poços da placa e o mesmo volume da solução do FS foi adicionado. A CL foi solubilizada em soluções aquosas de Tween ou P-123. Cada poço foi agitado e o tempo de préirradiação foi de 1 ou 5min. O LED foi acionado durante 1 ou 5min. 25l da suspensão foi submetida a diluições seriadas e as alíquotas de cada diluição foram espalhadas na superfície da placa em Ágar BHI. As placas foram armazenadas e colocadas na estufa a 37oC por 24h. Os experimentos foram realizados em triplicata e as UFC em cada placa foram contadas. As UFC foram transformadas em valores de Log10 UFC para normalizar os dados para análise estatística. A média e o desvio padrão (DP) de cada experimento foram calculados. Os resultados mostraram que o Tween e o P-123 foram os solventes mais eficazes para diluição da CL. A TFDa com utilização da CL diluída em Tween ou P-123 com tempo de pré-irradiação de 5min e com a ação do LED por 5min causou uma pequena diminuição na contagem bacteriana. A CL diluída em Tween com tempo de 1min teve uma redução significante da contagem bacteriana. O TBO quando associado ao LED durante 1min provocou uma leve redução no número de UFC. A irradiação pelo LED durante 5min foi capaz de causar uma diminuição significativa da quantidade de UFC. / The aim of this study was to investigate the effect of Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) against Enterococcus faecalis (E. faecalis), in vitro, using chlorophyll (CL) as photosensitizer (FS) agent and light-emitting diode (LED) as light source. Pure culture of E. faecalis was cultivated in BHI broth at 37oC for 24h. The culture was centrifuged at 3000rpm for 15min, and the pellets were resuspended in 0.85% saline solution. The bacterial concentrations were adjusted to 107CFU mL-1 (colony forming units per milliliter). Different types of solvents for CL were tested: ether, grain alcohol, Tween 80 and P-123. 100l of inoculum and the same volume of the test solution were inserted into each well of the microtitre plate. The mixture was mixed and 1 min was awaited. 25l of the suspension was removed and serial dilutions were performed. Aliquots of each dilution were spread on the surface of the plates, stored in microaerophilic conditions and incubated for 24h at 37oC. The number CFU was counted in each plate. For aPDT experiment, the groups were divided into: control (G1); TBO 1min (G2); CL+Tween 1min (G3); CL+Tween 5min (G4); CL+P-123 1min (G5); CL+P-123 5min (G6); CL+Tween 1min + LED 1min (G7); CL+Tween 1min + LED 5min (G8); CL+Tween 5min + LED 1min (G9); CL+Tween 5min + LED 5min (G10); CL+P-123 1min + LED 1min (G11); CL+P-123 1min + LED 5min (G12); CL+P-123 5min + LED 1min (G13); CL+P-123 5min + LED 5min (G14); TBO 1min + LED 1min (G15); TBO 1min + LED 5min (G16); LED 1min (G17); LED 5min (G18). A volume of 100l of bacterial suspension was inserted into the well of microtitre plate and the same volume of FS was added. CL was solubilized in aqueous solution of Tween and P-123. Each well was mixed and preirradiation time was 1 or 5min. LED was irradiated during 1 or 5 min. 25l of suspension was subjected to serial dilutions and aliquots of each dilution were spread on the surface of agar BHI plates. The plates were stored and incubated at 37oC for 24h. Experiments were performed in triplicate and CFU in each plate were counted. The results showed that Tween and P-123 were the most effective solvents for CL dilution. aPDT with diluted CL in Tween or P-123 with pre-irradiation time of 5min and with LED irradiation for 5min caused a small decrease in bacterial count. CL diluted in Tween with 1min time showed a significant reduction in bacterial count. TBO when associated with LED irradiation of 1min caused a slight reduction on CFU number. LED irradiation during 5min caused a significant reduction in CFU count.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study investigated the occurrence of Enterococcus faecalis in clinical specimens obtained from 25 cases in which endodontic treatment failed and 10 cases of primary endodontic infection, both of which are associated with asymptomatic apical periodontitis. As well, in cases in which it was possible to recover this bacterium, the antibacterial actions of two medications (i) calcium hydroxide based paste (Calen), and (ii) the same mixed with 1% chlorexidine, were evaluated both in vivo and in vitro. Microbiological analysis was performed on the samples collected in the root canal in three phases of the root canal treatment, as follows: (1) before the chemonomechanical instrumentation; (2) after using the intracanal dressing; and (3) after 72 hours of having removed the intracanal dressing, at this period the root canals were empty. The samples were treated according to standard microbiological procedures. The results show that of the twenty-five cases of endodontic re-treatment, E. faecalis occurred in eighteen, and in ten cases of asymptomatic primary endodontic infection, E. faecalis occurred in only two. Also, the results show a higher percentage of occurrence of E. faecalis in teeth in which endodontic treatment failed (72%) compared with cases of primary endodontic infection associated with asymptomatic apical periodontitis (20%). Of the total cases contaminated with E. faecalis, nine were treated with calcium hydroxide based paste (Calen). Of these, six showed the occurrence of E. faecalis on the second sampling, and all the nine cases showed occurrence of this bacterium on the third sampling. Of the total cases contaminated with E. faecalis, eleven were treated with calcium hydroxide based paste (Calen) mixed with 1% chlorexidine. Of these, three showed occurrence of E. faecalis on the second sampling, and two showed occurrence of this bacterium on the third sampling. These results are not conclusive for in vivo experiments, but suggest that calcium hydroxide based paste mixed with 1% chlorexidine combats E. faecalis more effectively than calcium hydroxide alone; however, more certainty will require a larger sample size. For the direct exposure experiment (in vitro), samples of 21 teeth were analyzed. The results show effective antibacterial actions of the two medications to combat E. faecalis -Statistically similar at 95% confidence level. / Este estudo investigou a presença de Enterococcus faecalis em espécimes clínicos obtidos de canais radiculares de 25 dentes cuja terapia endodôntica fracassou e 10 casos de necrose pulpar, ambos associados a lesões perirradiculares assintomáticas. Assim como, avaliou a ação antimicrobiana da pasta de hidróxido de cálcio (Calen) e dessa pasta associada à clorexidina a 1% , tanto in vivo, quanto in vitro nos casos em que foi possível resgatar a bactéria. Para análise microbiológica efetuou-se coleta dos canais radiculares em três etapas do tratamento endodôntico: antes do preparo químico-mecânico (primeira coleta), após a utilização da medicação intracanal (segunda coleta) e decorridas 72 horas da remoção da medicação (terceira coleta), período em que os canais permaneceram vazios. Dos 25 casos resistentes à terapia endodôntica, 18 apresentaram E. faecalis. Já nos 10 casos de necrose pulpar com lesão perirradicular, apenas em dois foi possível isolar o microrganismo. Os dados obtidos demonstraram que o percentual de ocorrência de E. faecalis foi mais elevado nos dentes que apresentavam tratamento resistente à terapia endodôntica do que nos casos de necrose pulpar associada à lesão perirradicular assintomática (72% X 20% respectivamente). Do total de casos contaminados por E.faecalis, nove foram medicados com pasta de hidróxido de cálcio (Calen) e 11 foram tratados com pasta de hidróxido de cálcio (Calen) associada à clorexidina a 1%. Dos nove casos medicados com hidróxido de cálcio, seis apresentaram E. faecalis após a medicação. Na terceira coleta, todos os nove casos apresentaram contaminação por E. faecalis. Dos 11 casos medicados com pasta de hidróxido de cálcio (Calen) associada à clorexidina a 1%, em três, isolou-se a bactéria na segunda coleta microbiológica. Na terceira coleta, apenas em dois casos foi possível resgatar E. faecalis. Os resultados para a investigação in vivo, quanto à eficácia das medicações, não são conclusivos, mas sugerem que a associação da clorexidina a 1% à pasta de hidróxido de cálcio apresenta uma melhor eficácia no combate ao E. faecalis. Para que seja feita qualquer inferência nessa direção, devemos considerar um maior n amostral. Amostras de E. faecalis de 21 dentes foram utilizadas no teste por exposição direta (in vitro). Os dois medicamentos apresentaram ação antimicrobiana sobre o E.faecalis, não havendo diferença estatística significante entre as pastas.

Orientador: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Resumo: Este estudo avaliou o preparo, limpeza e obturação de canais radiculares de molares inferiores por diferentes protocolos e materiais. Canais mesiais (n=48) de molares inferiores curvos (20°- 40°) foram preparados usando ProDesign Logic (PDL) até 25/.06 ou HyFlex EDM (HFEDM) 25/.08, e até PDL-40/.05 ou HFEDM-40/.04 na ampliação (Publicação 1). A irrigação final foi realizada com irrigação ultrassônica passiva-PUI ou easy clean-EC, hipoclorito de Sódio-NaOCl ou clorexidina-CLX ou água destilada (n=8): PUI/NaOCl2,5%; EC/NaOCl2,5%; EC/água destilada; PUI/CLX 2%; PUI/NaOCl 1%; PUI/NaOCl 2,5% (Publicação 2). A obturação foi realizada por condensação lateral-CL ou Termo Pack II e AHP (Publicação 3); cone único (CU) com nMTAP ou TFBC (Publicação 4). Escaneamentos (9 μm) foram realizados antes e após cada etapa experimental. Percentual de aumento volumétrico (%AV), debris (%D), redução de debris (%RD), superfície não instrumentada (%SNI), centralização, material obturador (%MO) e falhas (%F) foram analisados em toda a extensão do canal (total) e nos terços dos canais radiculares. Testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn, e T Pareado foram realizados (α = 0,05). HFEDM-25/.08 promoveu maior % AV. Após a dilatação, HFEDM apresentou maior volume (P < 0,05) e houve redução de %D e %SNI. Os sistemas produziram canais centralizados (Publicação 1). Houve diminuição do percentual e volume de debris acumulados após as técnicas e entre o PUI com diferentes soluções irrigantes. EC/NaOCl prop... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / The purpose of this study was to investigate the antibacterial efficacy of 0.12-percent and 2.0-percent chlorhexidine gluconate (CHX) on eliminating Enterococcus faecalis from dentinal tubules, and whether this antibacterial effect was enhanced by heat. To date there have been no published articles that describe the heating of 2.0-percent CHX and its antimicrobial efficacy and clinical relevance towards E. faecalis within dentinal tubules in root canal systems. Ninety-five human extracted, single rooted, maxillary, anterior teeth were used to prepare dentin disk specimens. After proper sterilization, a 2.5-mm ISO-sized diameter lumen was prepared, and then the canals were filled with brain-heart infusion (BHI) broth infected with E. faecalis. The BHI was removed and the specimens in equally divided groups were rinsed with sterile saline and filled with saline, or 0.12 percent CHX or 2.0 percent CHX at ambient temperature (24°C) or experimental temperature (46°C) and incubated at oral temperature (37°C) or the experimental temperature (46°C), respectively. The specimens were frozen to -70˚C and pulverized in liquid nitrogen. Serial dilutions were prepared of 1:100 and 1:1000 and spiral plated on BHI agar plates in duplicate. They were incubated, and the number of bacterial colonies was recorded 24 hours later for data analysis. A two-way analysis of variance (ANOVA), with factors for solution, solution temperature, and the solution-by-temperature interaction was used to determine antibacterial efficacy. Pair-wise comparisons between groups were examined for significance using the Fisher’s Protected Least Significant Differences Method. The E. faecalis CFU were log-transformed to satisfy the assumptions required for the ANOVA. The results of this investigation demonstrated no statistically significant difference with the addition of heat to either test irrigation solution regarding the elimination of E. faecalis from dentinal tubules within the root canal system. There was a statistically significant difference in the antibacterial efficacy of CHX against E. faecalis in comparison with the concentration tested. A higher concentration of 2.0-percent CHX demonstrated a significantly higher antibacterial efficacy against E. faecalis compared with 0.12-percent CHX, and likewise with the saline control. It can be concluded that the use of a higher concentration of 2.0-percent CHX is advantageous as a final irrigation solution after copious amounts of NaOCl and EDTA have been utilized for effective antimicrobial efficacy and substantivity.

Certaines pratiques agricoles telles que l’épandage de produits résiduaires organiques (PRO) ou l’irrigation des sols peuvent être à l’origine de l’introduction de bactéries pathogènes de l’Homme dans les sols. Le sol joue alors un rôle central dans la dissémination de ces bactéries pathogènes dans les différents compartiments de l’environnement et peut contaminer les matières premières végétales, les animaux d’élevage mais également les ressources en eau. Le risque sanitaire associé à la dissémination de ces bactéries pathogènes doit être évalué afin de limiter le développement de maladies infectieuses. Dans ce contexte, l’incidence et le potentiel de survie de bactéries pathogènes a été étudié dans un large ensemble de sols provenant du territoire français (Réseau de Mesure de la Qualité des Sols : RMQS). Ce travail a pour objectif général d’identifier les facteurs biotiques et abiotiques des sols qui déterminent l’incidence et la survie de d’un pathogène strict, Listeria monocytogenes, et d’un pathogène opportuniste, Enterococcus faecalis, dans ces matrices environnementales Pour ceci, 2 approches ont été adoptées : la première approche a visé à mettre au point des systèmes de détection de PCR quantitative spécifiques pour ces deux espèces bactériennes afin de détecter et quantifier ces 2 bactéries dans un ensemble de 1200 ADN de sols présentant des paramètres pédoclimatiques contrastés. L. monocytogenes n’est pas détectée dans les ADN de sols avec la méthode moléculaire développée, dont le seuil de détection est d’environ 104 bactéries par gramme de sol. La détection moléculaire d’E. faecalis a été biaisée par un problème de contamination des ADN extraits. Après extraction de nouveaux ADN sur 150 échantillons de sol, E. faecalis a été détecté en faible quantité dans 5 des 150 sols testés (4% des sols) à des concentrations d’environ 102 bactéries par gramme de sol. Dans une deuxième approche, la survie de L. monocytogenes et d’E. faecalis a été suivie dans un ensemble de 100 sols caractérisés par des paramètres pédoclimatiques variables. Des microcosmes de sols ont été inoculés et la survie bactérienne a été évaluée par des méthodes culturales classiques. L. monocytogenes survit à long terme dans un plus grand nombre de sols qu’E. faecalis. Les sols favorables à la survie à long terme sont majoritairement (44%) les mêmes pour les 2 bactéries. Les sols sableux présentant un pH acide sont défavorables à la survie des 2 bactéries. Cependant des différences sont observées quant aux paramètres physico-chimiques des sols qui déterminent la survie de ces 2 bactéries. Ainsi, la survie de L. monocytogenes est corrélée positivement au taux de saturation en cations basiques, à la capacité d’échange cationique et à la concentration en calcium pour le court terme et à la teneur en argile pour le long terme. En revanche, pour E. faecalis, une corrélation négative avec la teneur en calcium total est trouvée pour la survie à court terme alors que la survie à long terme est négativement corrélée à la concentration en phosphore assimilable. Un effet inhibiteur de la microflore des sols a été mis en évidence sur la survie de L. monocytogenes et E. faecalis : il est statistiquement significatif pour les sols présentant un pH supérieur à 7 pour les 2 pathogènes. Les résultats obtenus vont permettre de modéliser la survie de ces pathogènes dans les sols en fonction de paramètres pédo-climatiques et donc à terme de mieux gérer les épandages de PRO en fonction des types de sols pour limiter la persistance de pathogènes dans les sols. / Soil contamination by bacterial pathogens can occur through manure, sewage sludge spreading or irrigation using waste water treatment plants effluents. Agricultural soils may act as reservoirs for these pathogens, play a significant role in their dissemination, leading to the potential contamination of food and water resources. Health risk associated with the occurrence of pathogens in environmental matrices has to be thoroughly evaluated. In this context, the objectives of this work were: i) to determine the prevalence of two pathogenic bacterial species (Listeria monocytogenes and Enterococcus faecalis) in a large collection of French soils originated from a systematic soil survey of the territory, called RMQS (16x16 km grid), ii) to determine major biotic and abiotic parameters driving the survival of bacterial pathogens in soils. Two approaches were used to reach these objectives: i) the prevalence of the two pathogens was monitored in 1200 soils using specific molecular detection tools (real time PCR using TaqMan probe detection system) and ii) the survival of the 2 pathogens, inoculated in soil microcosms, was determined over a 84 days incubation period under laboratory conditions, on a subset of 100 soils from the RMQS survey, using classical microbiological methods. L. monocytogenes was not detected in the set of 1200 soils (with a detection limit estimated to be 104 bacteria per gram of soil) using the molecular detection method, while E. faecalis was detected in approximately 4% of the soils tested (on a smaller set of 150 RMQS soils). The two bacterial pathogens were able to survive in the majority of soil, although L. monocytogenes survived in a greater number of soils. Soils where both pathogens survived represented 44% of soils. The survival of both pathogens is strongly impaired in sandy acidic soils. However, textural and chemical parameters driving survival of the two pathogens differed: L. monocytogenes survival is increased in soils with higher BCSR (basic cation saturation ration) and CEC (cation exchange capacity). L. monocytogenes long-term survival is favored by higher soil clay content. E. faecalis survival is impaired in soils with high total Ca content (calcareous soils). Soil microflora inhibits survival of both pathogens especially in soil with alcaline pH’s. The results of our study will allow implementing survival models for these two pathogens. Such data is invaluable for a better and safer managment of soil manuring using various organic residues.

Atualmente, define-se como translocação bacteriana o deslocamento de bactérias e/ou seus produtos, como as endotoxinas, da luz do TGI para sítios estéreis. A ocorrência de translocação bacteriana tem sido sugerida em diversos estudos experimentais e clínicos. Apesar de todos estes estudos sustentarem a hipótese da ocorrência de translocação bacteriana, eles não demonstram que a bactéria detectada no sangue e em sítios estéreis tem efetivamente origem no TGI do animal ou paciente. Portanto, o objetivo da primeira fase deste trabalho, consistiu no desenvolvimento de um modelo experimental que comprovasse que bactérias isoladas em sítios estéreis são realmente de origem intestinal e que pudesse posteriormente viabilizar o estudo da translocação bacteriana. Para isto, realizou-se a colonização de ratos através da inoculação, via gavagem, de solução de Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV) e E. coli produtora de Beta-lactamase de espectro estendido (ESBL). O perfil de resistência destas cepas foi utilizado como marcador. Posteriormente, este estudo avaliou a translocação bacteriana em ratos submetidos a isquemia-reperfusão hepática com e sem estase venosa intestinal, utilizando o modelo de colonização. Quarenta e seis animais foram divididos nos seguintes grupos: Grupo I (n=15) ratos submetidos a isquemia hepática e estase intestinal por 30 minutos, e 1h de reperfusão; Grupo II (n=15) ratos submetidos a 30 minutos de isquemia hepática parcial sem estase intestinal, e 1h de reperfusão;Grupo III (n=8) ratos controle que apenas sofreraam manipulação cirúrgica e Grupo IV (n=8) ratos controle não cirúrgico. Os grupos foram analisados em relação: a ocorrência de translocação bacteriana; proporção de animais com crescimento da cepa pré-definida de ERV e E. coli ESBL, por órgão ou tecido; Concentração de LPS no sangue portal e sistêmico. Os resultados obtidos evidenciaram presença marcante de crescimento microbiológico positivo para cepas inoculadas na maioria dos órgãos ou tecidos analisados nos diferentes grupos. Desta forma, conseguimos comprovar que a bactéria detectada em sítios estéreis tem efetivamente origem no TGI daquele animal. A translocação de bactérias, para os órgãos sólidos, ocorreu com maior freqüência nos ratos submetidos a isquemia e reperfusão com estase intestinal. A translocação bacteriana para o pulmão ocorreu com maior freqüência nos grupos cirúrgicos, inclusive controle, do que no controle não cirúrgico. A translocação de endotoxinas, medida pela concentração sangüínea sistêmica, ocorreu com maior intensidade nos ratos submetidos a isquemia e reperfusão hepática com estase intestinal. Não houve diferenças entre os grupos quanto a proporção de animais com cultura positiva no sangue sistêmico e porta e concentração de endotoxinas no sangue porta. / Bacterial translocation is defined as the passage of viable bacteria and/or their products, such as endotoxins, from inside the gastrointestinal tract (GIT) to normally sterile sites. Experimental studies demonstrate that increase of the permeability of the intestinal mucosa and other conditions such as intestinal bacterial overgrowth or host immune deficiency may be associated with this phenomenon. The occurrence of bacterial translocation has been suggested in some experimental and clinical studies. Although all these studies sustained the occurrence of the bacterial translocation but they did not demonstrate that it has effectively origin in the TGI of the animal or patient. The first objective of this study was to develop a GIT colonization experimental model in rats with resistant Enterococcus faecalis (E.faecalis) and E.coli, to be used in further studies of bacterial translocation intending, The resistance profile of these strains is used as a marker. Afterwards, this study evaluated the bacterial translocation in rats submitted to hepatic ischemic-reperfusion with or without intestinal vein stasis. Forty six animals were used as follows: Group I (n=15) mice submitted to ischemic hepatica and intestinal stasis for 30 minutes, and 1h of reperfusion; Group II (n=15) mice submitted to partial ischemic hepatica for 30 minutes without intestinal stasis, and 1h of reperfusion; Group III (n=8) control of mice which only suffered surgical manipulation and Group IV (n=8) Group of mice without surgical control. The groups were analyzed concerning: the occurrence of bacterial translocation; proportion of animals with predefined ERV and E.Coli ESBL growth increase per organ or tissue; LPS concentration in the portal and systemic blood. The results demonstrated remarkable appearance of positive microbiological growth for inoculated stains mostly in the analyzed tissues within the different groups. By this way, we were able to prove that the bacteria present in sterile sites have effectively their origin in the TGI of that animal. The bacteria translocation in solid organs occurred frequently in group I submitted to the ischemia-reperfusion with intestinal stasis. The bacterial translocation in lung occurred more frequently in the surgical groups including chirurgical control. The endotoxin in systemic blood concentration occurred more intensively in group I submitted to the ischemia-reperfusion with intestinal stasis.