As ataxias espinocerebelares (SCAs) são doenças neurodegenerativas com herança autossômica dominante que apresentam grande heterogeneidade clínica e genética. O diagnóstico é realizado pela detecção da mutação no gene causador, que, na sua maioria, é uma expansão de repetições trinucleotídicas CAG. O objetivo deste estudo foi analisar os polimorfismos de repetições trinucleotídicas nos genes associados as SCAs tipo 1, tipo 2, tipo 3 e tipo 6 através de PCR-multiplex e eletroforese capilar, visando a melhoria do diagnóstico molecular e a determinação da distribuição das regiões polimórficas nos alelos normais. As análises foram realizadas em 124 pacientes não-aparentados que apresentavam sintomas de ataxia. Nessa amostra, foram identificados 10 pacientes com SCA2, 39 pacientes com SCA3 e 2 pacientes com SCA6. Não encontramos amostras com uma expansão CAG no gene SCA1. Os polimorfismos de cada loci foram estudados nos cromossomos normais desses pacientes (n=209-248). A freqüência dos alelos normais grandes no locus SCA1 (>32 repetições CAG) foi estabelecida em 0,05 e no locus SCA2 (>22 repetições CAG) foi 0,11, enquanto que no locus SCA3 (alelos >28 repetições) a freqüência foi 0,11. A freqüência de alelos normais grandes para o locus SCA6 (>13 repetições) foi 0,04. Concluindo, este estudo proporcionou a primeira análise detalhada da distribuição de repetições CAG nos loci SCA1, SCA2, SCA3 e SCA6 por amplificação multiplex e eletroforese capilar em pacientes brasileiros. A freqüência dos alelos normais grandes nos genes SCA3 e SCA6 nessa amostra reflete a prevalência destas duas doenças na nossa população, concordando com a hipótese que alelos patogênicos podem ser originados pela expansão de alelos normais grandes. / Spinocerebellar ataxias (SCAs) are neurodegenerative disorders inherited as an autosomal dominant trait that present large genetic and clinical heterogeneity. An accurate diagnosis relies on mutation detection in a specific causative gene, which is typically an abnormal number of CAG trinucleotide repeats. The aim of this study was to analyze polymorphic regions of trinucleotide repeats in SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 associated genes through multiplex PCR and capillary electrophoresis, aiming the improvement of molecular diagnosis and distribution of CAG repeats number in normal alleles. Analyses were carried out in 124 unrelated Brazilian patients who presented symptoms of progressive ataxia. To date, we identified 10 patients with SCA2, 39 patients with SCA3, and 2 patients with SCA6. No alleles were identified with a CAG expansion tract in the SCA1 gene. Normal CAG repeats length range was established using data from normal chromosomes (n=209-248). Frequency of large normal alleles in SCA1 locus (>32 CAG repeats) was determined to be 0.05. Frequency of large normal alleles at the SCA2 locus (>22 CAG repeats) was shown to be 0.11 while at the SCA3 locus (>28 CAG repeats) frequency of large normal alleles was 0.11. At the SCA6 locus, frequency of large normal alleles (>13 CAG repeats) was found to be 0.04. Moreover, this study provides the first detailed analysis, to our knowledge, of the distribution of CAG repeats at the SCA1, SCA2, SCA3, and SCA6 loci by multiplex-PCR and automated capillary electrophoresis in Brazilian patients. Frequency of large normal alleles in SCA3 and SCA6 genes established in this sample reflects the prevalence of these two diseases in our population, supporting the hypothesis that disease alleles emerge from expansion of large normal alleles.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-05T19:11:02Z No. of bitstreams: 1 2017_NicholasdeMojanadiCologna.pdf: 2378333 bytes, checksum: ab2fcdfd204fc8887192c8c19001e525 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-06-21T23:29:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_NicholasdeMojanadiCologna.pdf: 2378333 bytes, checksum: ab2fcdfd204fc8887192c8c19001e525 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T23:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_NicholasdeMojanadiCologna.pdf: 2378333 bytes, checksum: ab2fcdfd204fc8887192c8c19001e525 (MD5) Previous issue date: 2017-06-21 / Esta dissertação foi desenvolvida com o apoio financeiro do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O bioetanol, fonte de energia renovável, é produzido principalmente por meio da fermentação da sacarose produzida por vegetais. No entanto, os polissacarídeos presentes nos resíduos lignocelulósicos ainda contém grande quantidade de energia armazenada. Esses resíduos são considerados recalcitrantes, por serem de difícil acesso para as enzimas hidrolíticas. Ao longo da evolução, muitos microrganismos adquiriram a capacidade de mobilizar a matéria e a energia armazenadas nesse material, com um diversificado arsenal de enzimas hidrolíticas. Os fungos filamentosos se destacam dentre esses microrganismos, como por exemplo os do gênero Trichoderma. Estudos anteriores do grupo mostraram que a cepa T4 do fungo T. harzianum, quando cultivado em bagaço de cana, tem proteínas organizadas em complexos multienzimáticos no seu secretoma. O presente estudo visou verificar se fontes definidas de carbono presentes no bagaço de cana (celulose e xilana) seriam capazes de induzir individualmente a produção de complexos multienzimáticos, se sua composição seria a mesma dos observados em bagaço de cana ou depende da fonte de carbono e se esses complexos seriam compostos por enzimas capazes de hidrolisar várias fontes de carbono. Os fungos foram cultivados em meio sólido e posteriormente inoculados em meio líquido contendo as fontes de carbono. Após nove dias, os secretomas foram filtrados, dialisados, concentrados e submetidos a SDS-PAGE, 1D-BN-PAGE e 2D-BN/SDS-PAGE. Os resultados das análises eletroforéticas mostraram várias diferenças entre os secretomas dos diferentes tipos de meio de cultivo. No 2D-BN/SDS-PAGE, comprovou-se a presença de complexos devido à decomposição das bandas da primeira dimensão em diversos spots na segunda dimensão. A identificação por LC-MS/MS das bandas de 1D-BN-PAGE revelou a presença de complexos putativos. As proteínas identificadas com maior confiança foram discutidas, sendo que 23,7% delas eram comuns às três fontes de carbono. Essas proteínas eram todas Enzimas Ativas em Carboidratos (CAZimas), exceto uma proteína de Indução de Resistência Local e Sistêmica (ISR), a Epl1. A composição dos complexos se mostrou dependente das fontes de carbono. A presença de proteínas como a “Glycosyl hydrolase family 3 N terminal domain-containing protein” em quase todas as bandas de celulose e xilana, a aldose-1-epimerase em todas as bandas de xilana e duas bandas do bagaço, a feruloil esterase B somente em bandas de bagaço de cana e a proteína Epl1 em complexos de todos os tipos levanta hipóteses para a presença de proteínas organizadoras de complexos, talvez com função análoga à das escafoldina nos celulossomas. Caracterizações mais precisas dos complexos, incluindo de atividade enzimática, composição, padrões de interação e estruturas estão entre as perspectivas do trabalho. Para permitir isso, técnicas de purificação de complexos já estão em processo de implementação no laboratório, para etapas subsequentes do projeto. / Bioethanol, a renewable energy source, is produced mainly through the fermentation of plant sucrose. However, the polysaccharides present on the lignocellulosic residues still contains a high amount of stored energy. These residues are considered recalcitrant, because they are not easily accessed by hydrolytic enzymes. Throughout the evolution, many microorganisms developed the ability to mobilize the matter and energy stored in this material, with a diversified arsenal of hydrolytic enzymes. Filamentous fungi are a highlight among these microorganisms, for example those of the Trichoderma genus. Previous studies from our group have shown that the fungus T. harzianum strain T4, when grown on sugarcane bagasse, has proteins organizes in multienzyme complexes in its secretome. The present study aimed to verify if defined carbon sources present on the sugarcane bagasse (cellulose and xylan) would be able to induce individually the production of multienzyme complexes, if their composition would be the same as what was previously observed on sugarcane bagasse or carbon source-dependent, and if these complexes would be composed of enzymes able to hydrolyze different carbon sources. The fungi were grown on solid medium and after inoculated on liquid media containing the carbon sources. After nine days, the secretomes were filtered, dialyzed, concentrated and submitted to SDS-PAGE, 1D-BN-PAGE and 2D-BN/SDS-PAGE. The electrophoretic analysis results have shown several differences between the secretomes on the different growth media. On the 2D-BN/SDS-PAGE, the presence of complexes was confirmed due to the decomposition of the first dimension bands into several spots on the second dimension. Identification by means of LC-MS/MS of 1D-BNPAGE bands has revealed the presence of several putative complexes. The most reliably identified proteins were discussed, 23.7% of them being common to all three carbon sources. These proteins were all Carbohydrate-Active Enzymes (CAZymes), except for an Induced Systemic Resistance (ISR) protein, Epl1. The complexes’ composition was shown to be carbon source-dependent. The presence of proteins such as the Glycosyl hydrolase family 3 N terminal domain-containing protein on almost all cellulose and xylan bands, aldose-1-epimerase on all xylan bands and two sugarcane bagasse bands, feruloyl esterase B only on sugarcane bagasse bands and the Epl1 protein on complexes of all kinds raises hypothesis for the presence of complex-organizing proteins, maybe with an analogous function to the cellulosome scaffoldin protein. More precise characterizations, including enzymatic activity, composition, interaction patterns and structure are among this work’s perspectives. For that purpose, purification techniques for complexes are already being implemented on the laboratory, for subsequent steps of this project.

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Introdução: P. aeruginosa é o principal agente causador de infecção hospitalar sendo a primeira causa de pneumonia nosocomial em hospitais brasileiros. Os carbapenêmicos são geralmente o tratamento empírico de escolha para infecções graves causadas por esta bactéria. Entretanto, seu uso tem sido limitado pelas elevadas taxas de resistência entre os isolados de P. aeruginosa principalmente os produtores de metalo-β-lactamases (Mβla). Objetivos: Caracterizar e avaliar a produção de metalo-β-lactamase em amostras de Pseudomonas aeruginosa resistentes a ceftazidima e/ou imipenem em dois hospitais universitários de Porto Alegre. Métodos: O método de disco difusão padronizado pelo NCCLS foi utilizado para avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Um teste de aproximação de discos utilizando ceftazidima com ácido 2-mercaptopropiônico foi utilizado para triagem de amostras produtoras de Mβla. A fita de Etest combinada imipenem com EDTA também foi utilizada como teste fenotípico. Os resultados destes dois testes foram comparados à PCR para pesquisa dos genes blaSPM-1, blaIMP-1 e blaVIM-2 .Os isolados produtores de Mβla foram submetidos a tipagem molecular pela técnica de macrorestrição de DNA seguida de pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). O perfil de hidrólise para o imipenem foi avaliado nas amostras produtoras de Mβla através da variação de absorção medida a 298 nm. Resultados: Dos 92 isolados clínicos analisados, 33 foram positivos no teste de aproximação de discos. Destes, 18 foram produtores de SPM-1 e 5 de IMP-1. Todas as amostras produtoras de SPM-1 apresentaram razão de IP/IPI na fita combinada ≥ 8. Os 18 isolados de SPM-1 foram classificados como um único padrão de PFGE que foi o predominante. Seis isolados pertenciam a um segundo padrão de PFGE, sendo que cinco destes eram IMP-1. O perfil de hidrólise mostrou que os isolados produtores de SPM-1 degradam mais efetivamente o imipenem quando comparado aos produtores de IMP-1 e aos não produtores de Mβla. Conclusões: Há uma alta prevalência de Mβla entre isolados de P. aeruginosa resistentes a imipenem e/ou ceftazidima. O gene SPM-1 é o elemento genético mais prevalente entre as amostras de P. aeruginosa Mβla positivas e a disseminação clonal têm contribuído para os elevados níveis de resistência aos carbapenêmicos entre os isolados de P. aeruginosa nos hospitais deste estudo.

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Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-27T13:48:46Z No. of bitstreams: 1 2016_AldemiroSousaJorgeJunior.pdf: 1506881 bytes, checksum: 919fe742e1c5abb4ffeea48589f9f43f (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-07-12T17:57:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AldemiroSousaJorgeJunior.pdf: 1506881 bytes, checksum: 919fe742e1c5abb4ffeea48589f9f43f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-12T17:57:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AldemiroSousaJorgeJunior.pdf: 1506881 bytes, checksum: 919fe742e1c5abb4ffeea48589f9f43f (MD5) / A urbanização tem contribuído para aumentar nos países em desenvolvimento, desta maneira, os sistemas periurbanos de produção de hortaliças se tornaram mais frequentes na África, levando a um aumento da ocorrência dos nematoides das galhas (NG), com mais danos e perdas. A limitada capacidade de identificar com precisão esses patógenos resulta na não utilização de medidas adequadas de controle, como resistência genética e rotação de culturas, levando à utilização de princípios químicos altamente tóxicos. Considerando a importância do NG na África, um estudo de identificação de populações, coletadas em hortaliças foi realizado nas culturas de tomate, berinjela, pimentão verde, mandioca, pimenta, quiabo, cenoura, repolho e amaranto, provenientes da Tanzânia, Uganda, Benin, Nigéria e Quênia. Cento e quarenta e duas populações de Meloidogyne spp. foram caracterizadas, bioquimicamente, usando os fenótipos de esterase (EST). Foram identificados nesses países: M. javanica (Est J3, Rm: 1,0, 1,25, 1.,4; Est J2a, Rm: 1,0, 1,4; Est J2b, Rm: 1,0, 1,25), M. incognita (Est I2, Rm: 1,0, 1,1), M. arenaria (Est A2, Rm: 1,2, 1,3), M. enterolobii (Est E2, Rm: 0,75, 0,95), M. izalcoensis (Est I4 Rm: 0,86, 0,96, 1,24, 1,30) e duas populações atípicas, uma identificada com M. incognita e outra como Meloidogyne sp., com a predominância das três primeiras. Várias populações mistas foram detectadas em diferentes combinações. A maioria das espécies teve sua identificação confirmada pelos marcadores SCAR. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Urbanization in developing countries has contributed to increase the production of vegetables in periurban areas, which have become more frequent in Africa, leading to an increase on root–knot nematodes (RKN) infestation, resulting in more damages and crop losses. Limited ability to accurately identify these pathogens, results in failure to use appropriate control measures, such as genetic resistance and crop rotation, leading to the use of highly toxic chemicals. Considering the importance of RKN in Africa, a study of species identification was carried out on nematode populations collected in fields of tomato, eggplant, green pepper, cassava, pepper, okra, carrots, cabbage and amaranth in Tanzania, Uganda, Benin, Nigéria and Kenya. one hundred forty-two populations of Meloidogyne spp. were characterized, biochemically, using phenotypes of esterase (EST). Five species have been identified in these countries: M. javanica (EST J3, Rm: 1.0, 1.25, 1.4, J 2a EST., Rm: 1.0, 1.4; EST J2b, Rm: 1.0, 1.25), M. incognita (EST I2, Rm: 1.0, 1.1), M. arenaria (EST A2, Rm: 1.2, 1.3), M. enterolobii (EST E2, Rm: 0.75, 0.95), M. izalcoensis (EST I4 Rm: 0.86, 0.96, 1.24, 1.30) and two atypical populations, one identified as M. incognita and another as Meloidogyne sp., with predominance of the first three first species. Various mixed populations were detected in different combinations. Several species had their identification confirmed by SCAR markers.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-22T16:02:17Z No. of bitstreams: 1 2016_GláuciaGarciaFigueiró.pdf: 3597952 bytes, checksum: ea7177c7bc2bd079cef92f0cff4e6e6b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-11-21T16:20:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_GláuciaGarciaFigueiró.pdf: 3597952 bytes, checksum: ea7177c7bc2bd079cef92f0cff4e6e6b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-21T16:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_GláuciaGarciaFigueiró.pdf: 3597952 bytes, checksum: ea7177c7bc2bd079cef92f0cff4e6e6b (MD5) / A cultura da soja (Glycine max) é afetada negativamente por uma variedade de fatores abióticos e bióticos. Entre os fatores bióticos, destacam-se as doenças e, entre elas, a ferrugem-asiática da soja, causada pelo fungo Phakopsora pachyrhizi. De modo a contribuir no entendimento das relações planta-patógeno, um estudo proteômico foi proposto a fim de verificar proteínas envolvidas na defesa da planta contra este patógeno, o qual tem causado grandes perdas sobre esta cultura. Duas cultivares de soja foram utilizadas: BRSGO-7560 (resistente) e M-SOY-8001 (suscetível). No estádio V3/V4, folhas de plantas de ambas as cultivares na condição não inoculada foram coletas e também inoculadas com P. pachyrhizi, as quais foram coletas setes dias após a inoculação. As folhas coletadas em ambas as condições foram submetidas à extração de proteínas na presença de TCA/acetona. Mapas proteômicos bidimensionais (pI 4 a 7) a partir de folhas foram gerados nas condições não inoculada e inoculada, a fim de correlacionar os proteomas de ambas as cultivares visando à identificação de proteínas com abundância relativa significativa. Os peptídeos foram identificados por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS). Neste estudo foram encontradas proteínas relacionadas à defesa contra o patóteno, tais como: proteínas de choque térmico (HSP70), 1-desoxi-D-xilulose-5-fosfato reductoisomerase, glutamina sintetase, glutationa S-transferase classe DHAR, superóxido dismutase, proteína cloroplástica potencializadora de oxigênio, frutose–bifosfato aldolase, ascorbato peroxidase 1 citosólica e anidrase carbônica. Os resultados obtidos indicam a estratégia proteômica como uma abordagem a ser explorada no estudo das interações planta-patógeno. ____________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Soybean (Glycine max) is negatively affected by a variety of abiotic and biotic factors. Among the biotic factors, soybean Asian rust, caused by Phakopsora pachyrhizi stands out. In order to contribute to the understanding of this plant-pathogen interaction, a proteomic study was proposed to verify proteins involved in plant defense against this pathogen. Two soybean cultivars were used: BRSGO-7560 (resistant) and M-SOY-8001 (susceptible). In stage V3/V4, leaves of both cultivars not inoculated were colleted and to inoculated with P. pachyrhizi, seven days after inoculation leaves were collected and subjected to protein extraction in the presence of TCA / acetone. Two dimensional proteomic maps (pI 4 to 7) from leaves were generated in non-inoculated and inoculated condition, with the objective to correlate the proteomes of both cultivars of proteins with significant relative abundance. Peptides were identified by liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS /MS). In this study were observed proteins related to defense against the pathogen, such as: heat shock proteins (HSP70), 1- Deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase, glutamine synthetase, DHAR class glutathione S-transferase, superoxide dismutase, oxygen-evolving enhancer protein chloroplastic, fructose-bisphosphate aldolase, cytosolic ascorbate peroxidase 1 and carbonic anhydrase. The results obtained are supported in the literature and indicate proteomics strategy as an approach to be explored in the study of plant-pathogen interactions.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade UnB Planaltina, Programa de Pós-Graduação em Meio Ambiente e Desenvolvimento Rural, 2015. / Submitted by Andrielle Gomes (andriellemacedo@bce.unb.br) on 2015-07-06T19:54:09Z No. of bitstreams: 1 2015_TaniaMachadodaSilva.pdf: 2780537 bytes, checksum: 3ada70aa116f92349e1a3eefd7d7cace (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-17T12:02:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_TaniaMachadodaSilva.pdf: 2780537 bytes, checksum: 3ada70aa116f92349e1a3eefd7d7cace (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-17T12:02:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_TaniaMachadodaSilva.pdf: 2780537 bytes, checksum: 3ada70aa116f92349e1a3eefd7d7cace (MD5) / A avaliação toxicológica de substâncias químicas, como o mercúrio, demandam estudos relativamente longos. Apesar da eficiência destes estudos, recentes desafios têm demandado desenvolvimento de novas técnicas que possibilitem melhor percepção dos mecanismos toxicológicos a fim de possibilitar previsões de toxicidade para diferentes cenários de exposição humana, o que tem gerado grande interesse em estudos relacionados à caracterização funcional e estrutural de proteínas assim como o fluxo dessas espécies no organismo. Neste contexto, buscou-se aqui identificar e quantificar possíveis biomarcadores proteicos da toxicidade do mercúrio em amostra de leite humano de lactantes residentes em comunidades tradicionais do alto rio Madeira, no intuito de elucidar os possíveis mecanismos de transporte do mercúrio. Para tanto, utilizou-se técnicas de proteômica/metalômica, tais como eletroforese unimensional (SDS-PAGE) e quantificação do mercúrio por espectrometria de absorção atômica. O estudo contou com 9 participantes, entre o 20º e 70º dia de lactação. O perfil de consumo alimentar (principalmente fontes de proteína animal) foi determinado pela aplicação de um inquérito alimentar recordatório de 7 dias. As concentrações de mercúrio total (HgT) no cabelo foram determinadas por análise direta utilizando o equipamento por SMS 100. As amostras de leite foram digeridas em meio ácida e a determinação de HgT foi realizada por espectrometria de absorção atômica com amostrador automático e sistema de atomização eletrotérmica em forno de grafite. Por espectrometria atômica também foi possível analisar e quantificar o mercúrio presente nas bandas proteicas, obtidas no fracionamento das proteínas por SDS-PAGE, após mineralização ácida. As concentrações de HgT nas amostras de cabelo foram inferiores ao limite preconizado pela WHO (14 μg g-1), assim como abaixo das médias gerais observadas em várias regiões da Amazônia, possivelmente devido ao baixo consumo de peixe pelos participantes. A ingestão de mercúrio pelo consumo de leite materno foi acima do limite tolerável (PTWI = 5 μg/kg pc, ou 0,71 μg/kg pc/dia de Hg total) para 8 das 9 amostras de leite analisadas, entretanto, condizentes com os resultados para região amazônica. Apesar dos resultados mostrarem elevados concentrações de HgT para 88% das amostras, o leite humano é essencial para o desenvolvimento neurológico do recém-nascido, sendo seus benefícios mais relevantes que os possíveis riscos decorrentes da presença de Hg. Os géis obtidos no fracionamento das proteínas por SDS-PAGE apresentaram alta diversidade de bandas proteicas, em média 33 + 2,8 bandas por amostra. No mapeamento de mercúrio nestas bandas, observou-se maior percentagem de Hg nas bandas de baixa massa molar (< 20,1 kDa), indicando que proteínas com menor massa molar têm maior probabilidade de apresentarem mercúrio, e possivelmente, servirão como possíveis biomarcadoras do metal. Contudo, mais estudos nesta linha devem ser desenvolvidos para que se tenham maiores conclusões. / The toxicological evaluation of chemical substances such as mercury, require relatively long studies. Despite the efficiency of these studies, recent challenges have demanded development of new techniques that enable better understanding of toxicological mechanisms to enable predictions of toxicity for different scenarios of human exposure, which has generated great interest in studies related to functional and structural characterization of proteins, as well as the flow of such species in the body. In this context, we sought to identify and quantify potential protein biomarkers of mercury toxicity in human milk sample of women living in traditional communities of the Madeira River, in order to elucidate the possible mercury transport mechanisms. Therefore, we used techniques of proteomics / metallomics, such as unimensional electrophoresis (SDS-PAGE) and quantification of mercury by atomic absorption spectrometry. The study included 9 participants, between 20 and 70 days of lactation. The profile of food consumption (especially animal protein sources) was determined by applying a recall was 7 days. Total mercury concentrations (THg) in hair were determined by direct analysis using the equipment by SMS 100. Milk samples were digested in acid medium and determination of HgT was performed by atomic absorption spectrometry with autosampler and electrothermal atomization system graphite furnace. By atomic spectrometry was also possible to analyze and quantify the mercury present in the protein bands obtained in the fractionation of proteins by SDS-PAGE, after acid mineralization. Concentrations of THg in hair samples were below the limit recommended by WHO (14 μg g-1) and below the overall averages observed in several regions of the Amazon, possibly due to the low consumption of fish by participants. The mercury intake by breast milk intake was above the tolerable limit (PTWI = 5 μg/kg pc, ou 0,71 μg/kg pc/dia total Hg) for 8 of the 9 milk samples analyzed, however, consistent with the results for the Amazon region. Although the results show high THg concentrations for 88% of the samples, human milk is essential for the neurological development of newborns, with its most important benefits that the possible risks arising from the presence of Hg. The gels obtained from the fractionation of proteins by SDS-PAGE showed a high diversity of protein bands on average 33 + 2,8 bands per sample. In the mercury-mapping these bands, there was a higher percentage of mercury in low molecular weight bands (<20,1 kDa), indicating that proteins with lower molecular weight are more likely to exhibit mercury and possibly serve as potential biomarkers of metal. However, further studies in this line should be developed to have larger conclusions. / La evaluación toxicológica de sustancias químicas tales como mercurio, requiere estudios relativamente largos. A pesar de la eficacia de estos estudios, los desafíos recientes han exigido el desarrollo de nuevas técnicas que permiten una mejor comprensión de los mecanismos toxicológicos para permitir predicciones de toxicidad para diferentes escenarios de exposición humana, lo que ha generado un gran interés en los estudios relacionados con la caracterización funcional y estructural de proteínas, así como el flujo de tales especies en el cuerpo. En este contexto, hemos tratado de identificar y cuantificar posibles aquí biomarcadores de proteínas de la toxicidad del mercurio en la muestra de la leche materna de las mujeres que viven en comunidades tradicionales de la parte alta del Río Madeira, con el fin de dilucidar los posibles mecanismos de transporte de mercurio. Por lo tanto, hemos utilizado técnicas de proteómica / metalômica, tales como electroforesis unimensional (SDS-PAGE) y la cuantificación de mercurio por espectrometría de absorción atómica. El estudio incluyó a 9 de los participantes, entre los días 20 y 70 de la lactancia. El perfil de consumo de alimentos (especialmente las fuentes de proteína animal) se determina aplicando un retiro fue de 7 días. Las concentraciones de mercurio total (THg) en el cabello se determinaron mediante el análisis directo de utilizar el equipo por SMS 100. Las muestras de leche fueron digeridos en medio ácido y la determinación de THg se realizó mediante espectrometría de absorción atómica con inyector automático y sistema de atomización horno de grafito electrotérmico. Por espectrometría atómica también fue posible analizar y cuantificar el mercurio presente en las bandas de proteínas obtenidos en el fraccionamiento de proteínas por SDS-PAGE, después de la mineralización ácida. Las concentraciones de Hg total en muestras de cabello estaban por debajo del límite recomendado por la OMS (14 μg g-1) y por debajo de los promedios generales observados en varias regiones de la Amazonía, posiblemente debido al bajo consumo de pescado por los participantes. La ingesta de mercurio por la ingesta de leche materna estaba por encima del límite tolerable (ISTP = 5 μg/kg pc, ou 0,71 μg/kg pc/dia de THg) para 8 de las 9 muestras de leche analizadas, sin embargo, de acuerdo con los resultados para la región amazónica. Aunque los resultados muestran altas concentraciones THg el 88% de las muestras, la leche materna es esencial para el desarrollo neurológico de los recién nacidos, con sus beneficios más importantes que los posibles riesgos derivados de la presencia de Hg. Los geles obtenidos a partir del fraccionamiento de proteínas por SDS-PAGE mostraron una alta diversidad de bandas de proteína en promedio 33 + 2,8 bandas por muestra. En las mercurio mapeo de estas bandas, hubo un mayor porcentaje de mercurio en bandas de bajo peso molecular (<20,1 kDa), lo que indica que las proteínas con peso molecular más bajo son más propensos a exhibir mercurio y posiblemente servir como potenciales biomarcadores de metal. Sin embargo, más estudios en esta línea deben ser desarrollados para tener conclusiones más grandes.

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-18. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:21Z : No. of bitstreams: 1 000866910.pdf: 1935220 bytes, checksum: e56b37e9050493f55dcf68e77d76d9ee (MD5) / A microbiota intestinal das aves exerce papel fundamental no desenvolvimento de seu potencial produtivo por garantir o bom funcionamento do trato gastroentérico e do sistema imunológico a ele intimamente ligado. Por isso diversos aditivos já foram utilizados para favorecer o desenvolvimento de uma microbiota saudável, entretanto, ainda não temos informações sobre o perfil desejável para ela. Sendo assim, nos propusemos a utilizar a Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE), para avaliar a microbiota do ceco de aves alimentadas com dietas acrescidas de halquinol, ácido caprílico e Lactobacillus, e posteriormente desafiadas com Salmonella Enteritidis (SE). Aos 10, 20, 30 e 42 dias de vida foram quantificadas as imunoglobulinas IgA, IgM, IgY e interleucinas 17 e 8, avaliada a colonização cecal de SE (UFC/mL), observação histopatológica de tonsila cecal, e esses resulatados relacionados com a microbiota cecal avaliada pelo método TGGE. O tratamento com ácido caprílico foi igualmente eficaz ao halquinol na diminuição da colonização por SE, seguidos do grupo tratado com Lactobacillus. As concentrações de Il-8 e IgM demonstraram relação com a maturação e desenvolvimento imune local e sistêmico das aves, porém, não identificamos relação com o aumento da complexidade da microbiota, entre os diferentes trtamentos e nos grupos desafiados. No presente estudo também nao foi possível reproduzir a técnica de TGGE / The intestinal microbiota of birds plays a fundamental role in the development of their production potential to ensure the proper functioning of a gastrointestinal tract and immune system closely linked to it. So many additives have been used to encourage the growth of a healthy microbiota, however, we still have no information about the desired profile for her. So we set out to use the Gel Electrophoresis with Temperature Gradient (TGGE) to assess the cecal microbiota of birds fed diets plus halquinol, caprylic acid and Lactobacillus, and subsequently challenged with Salmonella Enteritidis (SE). At 10, 20, 30 and 42 days old were quantified immunoglobulins IgA, IgM, IgY and interleukins 17:08 assessed cecal colonization IF (CFU / ml), cecal tonsil histopathological observation, and those related to resulatados cecal microbiota evaluated by TGGE method. The treatment with caprylic acid was equally effective in reducing the halquinol colonization by IF, followed by the group treated with Lactobacillus. IL-8 and IgM concentrations shown maturation and compared with the local and systemic immune development of the poultry, however, we do not identify relationship with the increased complexity of the microbiota between different trtamentos and challenged groups. In this study it was also not possible to reproduce the TGGE

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:16:29Z : No. of bitstreams: 1 soares_la_me_arafcf.pdf: 482117 bytes, checksum: 977f1b9fe29b6c45730789f06700afaa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / São evidentes a necessidade de novas substâncias antifúngicas e a grande importância dos produtos naturais no desenvolvimento de novas ferramentas terapêuticas. Assim, neste estudo avaliou-se a atividade antifúngica dos derivados sintéticos esterificados do ácido protocatecuico. Todos os isolados apresentaram bons resultados ao teste de suscetibilidade aos derivados sintéticos do ácido protocatecuico demonstrando que 62,5% foram ativos em relação para dois isolados de T. rubrum (Tr1 e Tr2), T. rubrum MYA 3108 (Tr3) e isolado clínico T. interdigitale (Tm1) e 68,7%, para isolado clínico T. interdigitale (Tm2) e T. interdigitale ATCC 40131 (Tm3) dos 16 compostos testados. Como referência para avaliação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foram considerados todos os resultados com valores ≤ 62,5 ug\mL. A combinação fluconazol mais protocatecuatos de pentila, hexila, heptila, octila e nonila foi aditivo para isolados clínicos Tr1, Tm1 e Tm3, exceto a combinação com fluconazol mais protocatecuato de heptila, que revelou um efeito sinérgico contra Tm3. A griseofulvina em combinação com protocatecuato de nonila mostrou atividade sinérgica em duas linhagens de dermatófitos, atividade aditiva para quatro linhagens. Oito derivados do ácido protocatecuico foram associados quimicamente com o miconazol sendo encontradas interações sinérgicas e aditivas. Foi testada a associação entre protocatecuatos e o antifúngico nistatina, resultando interações antagônicas, demonstrando assim que o polieno... / There is a clear need for new antifungal compounds, and the importance of natural products in the development of novel therapeutic tools. In this study, it was evaluated the antifungal activity of protocatechuic acid esters. All of the fungus isolated showed good results when testing susceptibility to synthetic derivatives of protocatechuic acid, showing that 62.5% were active against two strains of T. rubrum (Tr1 e Tr2), T. rubrum MYA 3108 (Tr3) and clinical isolate T.interdigitale (Tm1) and 68.7% for clinical isolate of T. interdigitale (Tm2) and T. interdigitale ATCC 40131 (Tm3) of the 16 compounds tested. Reference values of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) were considered ≤ 62.5 ug/ mL. The combination of fluconazole plus pentyl, hexyl, heptyl, octyl and nonyl protocatechuates was additive to clinical isolates Tr1, Tm1 and Tm3, except the combination fluconazole plus heptyl protocatechuate, which showed a synergistic effect on Tm3. Griseofulvin in combination with nonyl protocatechuate exhibited synergistic activity two towards dermatophyte strains, additive interaction for four strains. When eight protocatechuic acid derivatives were chemically associated with miconazole, were observed synergistic and additive effects. We tested the association between protocatechuates and nystatin, resulting in antagonistic interactions. Thus it demonstrated that have not a polyene antifungal best when... (Complete abstract click electronic access below)