Orientador: Marcos Aurelio Zezzi Arruda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:31:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_FabiolaManhasVerbi_M.pdf: 591813 bytes, checksum: c8f7713c1fc6d940a1e9bbb7778fbb5d (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientador: Jose Pedrazzoli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:24:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_FernandaDias_M.pdf: 1238730 bytes, checksum: 28d5c999aab93f179f9bdc1c99b7f95c (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A determinação das isoenzimas da CK (MM, MB e BB) é de fundamental importância em diagnósticos clínicos de diversas patologias, bem como a determinação da relação entre a razão da CK-MB/CK TOTAL, utilizada como marcador específico para o diagnóstico diferencial de lesão do miocárdio. O objetivo do estudo foi avaliar o perfil eletroforéticodas isoformasMM, MBe BB como marcador de lesões do trato gastrointestinal. Para tal, avaliamos um grupo de 95 pacientes, de ambos os sexos, com idade média de 44,63 :I: 1,81 anos, divididos em cinco grupos, dos quais 15 eram normais sendo utilizados como controle, 17 portadores de gastrite, 16 pacientes com úlcera péptica, 16 indivíduos com esofagite péptica, e 31 portadores de neoplasias esofágicas, gástricas ou de cólon/reto. As isoenzimas foram individualizadas e identificadas por eletroforese em gel de agarose. Nos portadores de gastrite, úlcera ou esofagite não foram observadas diferenças significativas da isoforma MM, quando comparada com o grupo controle. No entanto, em pacientes portadores de neoplasias foi observado um decréscimo de 24% desta isoforma. Em alguns destes pacientes verificou-se uma forma anômala de MM, denominada MiMi (mitocondrial). Uma redução dos níveis séricos de CK-MM pôde ser observada em pacientes portadores de neoplasias gastrointestinais, quando comparados com portadores de outras enfermidades digestivas ou controles sadios. O potencial diagnóstico desde achado, bem como as suas causas merecem uma investigação detalhada / Abstract: Not informed. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Coorientador: Adriano Sakai Okamoto / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Ana Angelita Sampaio / Resumo: A microbiota intestinal das aves exerce papel fundamental no desenvolvimento de seu potencial produtivo por garantir o bom funcionamento do trato gastroentérico e do sistema imunológico a ele intimamente ligado. Por isso diversos aditivos já foram utilizados para favorecer o desenvolvimento de uma microbiota saudável, entretanto, ainda não temos informações sobre o perfil desejável para ela. Sendo assim, nos propusemos a utilizar a Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE), para avaliar a microbiota do ceco de aves alimentadas com dietas acrescidas de halquinol, ácido caprílico e Lactobacillus, e posteriormente desafiadas com Salmonella Enteritidis (SE). Aos 10, 20, 30 e 42 dias de vida foram quantificadas as imunoglobulinas IgA, IgM, IgY e interleucinas 17 e 8, avaliada a colonização cecal de SE (UFC/mL), observação histopatológica de tonsila cecal, e esses resulatados relacionados com a microbiota cecal avaliada pelo método TGGE. O tratamento com ácido caprílico foi igualmente eficaz ao halquinol na diminuição da colonização por SE, seguidos do grupo tratado com Lactobacillus. As concentrações de Il-8 e IgM demonstraram relação com a maturação e desenvolvimento imune local e sistêmico das aves, porém, não identificamos relação com o aumento da complexidade da microbiota, entre os diferentes trtamentos e nos grupos desafiados. No presente estudo também n"ao foi possível reproduzir a técnica de TGGE / Abstract: The intestinal microbiota of birds plays a fundamental role in the development of their production potential to ensure the proper functioning of a gastrointestinal tract and immune system closely linked to it. So many additives have been used to encourage the growth of a healthy microbiota, however, we still have no information about the desired profile for her. So we set out to use the Gel Electrophoresis with Temperature Gradient (TGGE) to assess the cecal microbiota of birds fed diets plus halquinol, caprylic acid and Lactobacillus, and subsequently challenged with Salmonella Enteritidis (SE). At 10, 20, 30 and 42 days old were quantified immunoglobulins IgA, IgM, IgY and interleukins 17:08 assessed cecal colonization IF (CFU / ml), cecal tonsil histopathological observation, and those related to resulatados cecal microbiota evaluated by TGGE method. The treatment with caprylic acid was equally effective in reducing the halquinol colonization by IF, followed by the group treated with Lactobacillus. IL-8 and IgM concentrations shown maturation and compared with the local and systemic immune development of the poultry, however, we do not identify relationship with the increased complexity of the microbiota between different trtamentos and challenged groups. In this study it was also not possible to reproduce the TGGE / Mestre

Orientador : Ladslav Sodek / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T01:18:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Horta_AnaCeciliaGoes_D.pdf: 8864702 bytes, checksum: 86f218c1a0ae8915087764c5e1886df5 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Nos dois sistemas de cultura utilizados no presente trabalho, cotiledones isolados e explantes, GLN e ASN foram igualmente eficientes em promover acúmulo de proteinas. Entretanto, a eficiencia da ALN, em cotilédones isolados, foi bastante inferior a ASN e GLN. Já em cultura de explantes, a ALN superou as outras fontes de nitrogênio, uma vez que, segundo RAINBIRD et al., 1984), "in situ" os ureideos são degradados dentro do tegumento ou vagem e o nitrogênio resultante é convertido em GLN e translocado para os cotilédones. Em ausência de N, observou-se incremento no teor de proteínas de sementes de explantes, enquanto em cotilédones isolados, apesar do aumento em peso de matéria seca, o teor de proteínas permaneceu o mesmo. Por PAGE-SD8 foi verificado que, em presença de GLN e ASN, as proteinas de reserva dos cotilédones foram sintetizadas com mais eficiencia do que nas sementes crescidas "in vivo". Enquanto em sementes de explantes a ALN promoveu a síntese de todas as subunidades das proteínas de reserva, em cotilédones isolados, sua ineficiencia foi confirmada. Na ausência de N, em cotilédones isolados, foi observado uma metabolização preferencial das subunidades alfa', alfa (78) e cadeias acidas (118), não ocorrendo sintese detectável da subunidade beta (7S). Em todos os tratamentos, mudanças substanciais na composição de aminoacidos livres, foram observadas. Um dos efeitos mais interessantes foi com respeito ao teor de ARG. Enquanto que em sementes de explantes este teor decresceu igualmente em todos os tratamentos, em cotilédones isolados, GLN promoveu um aumento de 26 vezes. No sistema de cultura de explantes, não foi observado acúmulo de ASP e nem foi detectada GLN livre na semente como observado no sistema de cultura de cotilédones isolados, no tratamento com ALN. A adição de metionina ao meio básico estimulou o crescimento e ocasionou variações na composição de aminoácidos livres e modificações qualitativas nas proteínas de reserva de cotilédones de soja. Em cotilédones isolados o aumento em peso de matéria seca e proteínas por cotiledones foi maior do que em sementes de explantes em presença de MET (MB+MET e MB-S+MET). Cotilédones crescidos em meio deficiente em enxofre (MB-S), teve 71,4 do peso de matéria fresca e 72% do peso de matéria seca dos cotilédones crescidos com sulfato <M8). Neste tratamento o teor de proteinas decresceu de 57% em relação ao MB, mas ainda alcançando o teor de proteínas das sementes desenvolvidas na planta pelo mesmo periodo. Em cultura de explantes, o teor de proteínas foi semelhante estatisticamente ao meio básico. Por PAGE-SDS, observou-se que a adição de MET inibiu especificamente a síntese da subunidade beta da fração 7S não ocorrendo modificações detectavels nas outras frações nos dois sistemas de cultura. HOLOWACH et al. (1986) mostraram que esta inibição e reversível, ou seja, com a transferência dos cotiledones crescidos em meia contendo MET para o meia básico, a subunidade acumula a taxas comparaveis ao controle. Quando cotilédones mais velhos (100 mg de peso de matéria fresca) da variedade de soja estudada neste trabalho, que ja continham subunidade beta, foram cultivados em presença de MET, a quantidade desta subunidade permaneceu constante, mostrando que esta é estavel na presença de MET. Cotilédones isolados mantidos em meio deficiente em enxofre (MB-5) acumularam todas as subunidades das conglicininas (7S) em razão similar aos cotilédones crescidos na presença de sulfato. Nesse tratamento as subunidades ácidas das glicininas (11S) foram fracamente detectadas quando comparadas com o meio básico. em sementes de explantes, a síntese das subunidades das proteinas de reserva nao foi afetada pela ausencla de enxofre no mêlo, porem, aparentemente, a concentração da subunidade beta superou aquela de sementes mantidas em meio básico. Metionina exógena afetou Significativamente a concentração de alguns aminoácidos, especialmente SER, ALA, LYS, ARG, ASP e GLU, que aumentaram em malores proporções nos dois sistemas. Entretanto, o teor de VAL aumentou somente em cotiledones isolados, enquanto que em sementes de explantes este aminoacido não foi detectado. Na ausencia de enxofre (MB-S), em cultura de cotilédones isolados, foi observado aparecimento de SER, aumento de LYS e ARG e um decréscimo em ALA, VAL e ASN quando comparados com MB. Ja em cultura de explantes foi observado um decrescimo em SER e ARG nesse tratamento. Em relação a composição de aminoácidos das diferentes subunidades das proteinas de reserva de sementes quiescentes e interessante ressaltar que, na subunidade alfa' o conteúdo de HIS e cerca de 3 vezes maior do que nas outras subunidades e que a subunidade beta se destacou por possuir o nivel mais bailxo de metionina / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

O presente trabalho teve como objetivo caracterizar o desenvolvimento da semente de Araucaria angustifolia através da proteômica comparativa, buscando compreender as alterações fisiológicas e metabólicas que ocorrem durante esse processo. Inicialmente, foram avaliados três diferentes metodologias de extração de proteínas. A metodologia composta por solução de extração contendo 7 M de uréia, 2 M de tiouréia, 1% de ditiotreitol, 2% de Triton-100, 1 mM de fluoreto de fenilmetilsulfonil e 5 µM de pepstatina, seguido de precipitação em 20% de ácido tricloroacético apresentou géis de maior resolução e reprodutibilidade, tendo sido escolhida como metodologia de extração protéica para o estudo das alterações no proteoma da semente de A. angustifolia. Uma dificuldade associada ao estudo do proteoma de espécies não sequenciadas é a baixa representatividade nos bancos de dados protéicos, resultando em identificações baseadas em homologia. Estratégias proteômicas baseadas em fracionamento em gel resultam em grandes contaminações por fragmentos de queratina. Sendo assim, foi desenvolvido um programa de remoção de espectros de baixa qualidade para utilização em proteômica baseada em homologia. As análises mostraram que o programa reduz o tempo de busca, melhora a qualidade dos alinhamentos e não resulta em perda de identificações positivas. Finalmente, utilizando as metodologias descritas, foram estudadas as alterações no proteoma durante o desenvolvimento da semente de A. angustifolia. Noventa e seis proteínas foram identificadas e agrupadas de acordo com sua função biológica e padrão de detecção. Os resultados obtidos permitiram o estabelecimento de marcadores protéicos no início e final do desenvolvimento embrionário. A análise das proteínas abundantes no início da embriogênese indica um maior controle no metabolismo oxidativo em relação aos estádios finais. Contrariamente, o final da embriogênese é caracterizado por um alto metabolismo de assimilação de carbono e acúmulo de proteínas de reserva. As implicações dos resultados obtidos no controle e melhoramento de sistemas de embriogênese somática na espécie também foram discutidas. / The aim of the present work was to characterize the seed development of Araucaria angustifolia through proteomics in order to understand the physiological and biochemical changes during this process. For that, initially, three different protein extraction methods were evaluated. The extraction based on protein solubilization in 7 M urea, 2 M thiourea, 1% dithiothreitol, 2% Triton-100, 1 mM phenylmethylsulphonyl fluoride, 5 µM pepstatin, followed by 20% trichloroacetic acid precipitation showed the highest gel resolution and reprodutivity and, thus, was chosen to be used in the analysis of the proteome of A. angustifolia seeds. One aspect that hampers the proteome study of unsequenced species is the low protein representativity in databases. So, protein identification is usually carried out through homology. Strategies based on 2-DE result in high keratin contamination. In the present work a spectra filtering software was developed and evaluated for use in homology driven proteomics. The software reduced the time of search, improved alignment quality and did not result in lost of positive identifications. Finally, using the described strategies, the changes in the proteome of A. angustifolia seeds were studied. Ninety six proteins were identified and classified according to their biological functions and expression profiles during seed development. The identified proteins may be used as protein markers of early and late embryogenesis. Proteins involved in the control of oxidative metabolism were highly expressed during the early stages of seed development; while, carbon metabolism and storage proteins were highly expressed in late stages. Considerations on the improvement and control of somatic embryogenesis through medium manipulation and protein markers screening using data generated are also discussed.

Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Carlos Augusto Araújo Valadão / Resumo: A eficiência reprodutiva em éguas é geralmente baixa, sendo que 43% de éguas puro-sangue falham em conceber um potro vivo. Infecção bacteriana no lúmen uterino é uma das principais causas de infertilidade em éguas. O exame citológico do endométrio é o mais importante método auxiliar no controle da saúde genital da égua devido ao seu baixo custo, fácil emprego e a possibilidade de rápido diagnóstico de processos inflamatórios, mesmo que subclínicos. A indução experimental de endometrite por inóculos de E. coli em éguas promoveu um aumento significativo nas proteínas de fase aguda (APPs) sistemicamente demonstrado pelo aumento nas concentrações da proteína amiloide sérica A (SAA) e fibrinogênio, leucopenia transitória e aumento da expressão de mRNA de citocinas e SAA no endométrio (METTE et al., 2010). Os objetivos do presente estudo foram correlacionar os achados de exames ultrassonográficos e hematológicos com culturas microbiológicas, citologia e histopatologia endometrial de éguas que apresentam endometrite ou histórico reprodutivo insatisfatório, avaliar a influência das lavagens uterinas no ambiente uterino e determinar qual(is) proteína(s) de fase aguda poderia(m) ser utilizada(s) como marcador(es) da resposta inflamatória sistêmica. Doze éguas da raça Quarto de Milha, divididas em dois grupos: controle e com endometrite (n=6), foram avaliadas quanto aos parâmetros hematológicos, swab uterino para cultivo microbiológico, citologia endometrial, biópsia uterina, e eletroforese do soro para determinação das concentrações de proteínas de fase aguda, antes e após o processo de lavagem uterina. Os resultados do presente estudo mostraram que a cultura microbiológica associada ao exame citológico do endométrio possibilitaram a fácil identificação e classificação da endometrite já instalada...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The reproductive efficiency of mares is generally low, and 43% of Thoroughbred mares fail to conceive a live foal. Bacterial infection of the uterine lumen is a major cause of infertility in mares. The cytological examination of the endometrium is the most important method to assist in controlling the genital health of the mare due to its low cost, is easy to use and provides a rapid diagnosis of inflammatory processes. Experimental induction of endometritis by an inoculum of E. coli in mares caused a significant increase in acute phase proteins (APPs) systemically demonstrated by increased concentrations of serum amyloid A protein (SAA) and fibrinogen, transient leucopenia and increased mRNA expression of cytokines and SAA in the endometrium.The aim of this study was to correlate the ultrasonographic and hematological findings with results of the microbiological cultures, endometrial cytology and histopathology in mares with endometritis or poor reproductive history, assess the influence of uterine flushings in the uterine environment and determine which acute phase protein(s) might be used as a marker of systemic inflammatory response and evaluate the influence of uterine lavages on the uterine environment. Twelve Quarter Horse mares were divided into 2 groups: control and with endometritis (n=6) and were evaluated for hematological variables, uterine swab for microbiological culture, endometrial cytology, uterine biopsy and serum electrophoresis for determination of acute phase proteins concentrations before and after uterine lavage. The results of this study showed that the microbial culture associated with endometrial cytology allowed easy identification and classification of endometritis, and the histopathology was necessary to identify subclinical and/or chronic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Coorientadora: Fernanda Bovino / Banca:Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca:Marcio Carvalho da Costa / Resumo: Ao final da gestação o neonato deve estar preparado, por meio de modificações funcionais e estruturais de órgãos e sistemas para dar início à vida extra-uterina. Os animais prematuros nascem antes deste processo estar completo, apresentando falhas na maturação. O objetivo deste estudo foi tentar identificar por meio da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida em dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) proteínas de fase aguda, dentre elas, albumina, ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina, glicoproteína ácida e imunoglobulinas A e G, que possam indicar a maturação no neonato prematuro. Os cordeiros foram divididos em seis grupos experimentais (parto normal, cesárea a termo, cesárea prematura, cesárea prematura com administração pré-parto materna de dexametasona, cesárea com administração de surfactante nos prematuros e cesárea prematura com administração pré-parto materna de dexametasona e surfactante ao neonato). Os resultados indicaram que após a administração de colostro, independente do tratamento, os valores séricos de proteína total e imunoglobulinas G aumentaram, indicando que há transferência de imunidade passiva através do trato gastrointestinal. A transferrina tem seus teores superiores em animais com idade gestacional superior, demonstrando potencial para ser utilizado como marcador de maturação neonatal. / Abstract:At the end of gestation the neonate should be prepared, with functional and structural modifications of organs and systems to initiate extrauterine life. Premature animals are born before this process is complete, presenting maturation failures. The aim of this study was to identify an acute phase protein, such as a lbumin, ceruloplasmin, transferrin, haptoglobin, acid glycoprotein and immunoglobulins A and G, that demonstrates that different treatments indicate a maturation in the premature neonate using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS - PAGE) . The lambs were divided into six experimental groups (normal birth, full - term cesarean section at norma l time of gestation, premature cesarean section, premature cesarean section whose mothers received prepartum dexamethasone, cesarean section giving surfactante to the prematures and premature cesarean giving prepartum dexamethasone to the mothers and surfactant to the n eonate). The results indicated that after administration of colostrum, regardless of treatment, total serum protein and immunoglobulins increased, showing the transfer of passive immunity through the gastrointestinal tract. Transfer rin has higher levels in animals with higher gestational age, demonstrating potential as a marker of neonatal maturation / Mestre

A Eletroforese Capilar (CE) é uma técnica de separação baseada na migração diferenciada de compostos iônicos ou ionizáveis em um campo elétrico, proporcionando alta resolução, eficiência e rapidez de análise. Para preservar a alta resolução, o volume injetado deve ser pequeno (da ordem de nanolitros), o que dificulta a análise de compostos em baixos níveis de concentração. O diminuto caminho óptico definido pelo diâmetro interno do capilar, associado ao pequeno volume injetado, compromete a detecção, principalmente quando se utiliza a absorbância em linha. Várias estratégias têm sido descritas para melhorar a sensibilidade em eletroforese capilar. Neste trabalho, as estratégias de pré-concentração (\"stacking\", amplificação de campo, isotacoforese, cela óptica de alta sensibilidade e extração em fase sólida em linha) foram aplicadas a dois sistemas químicos: o ácido tereftálico (matéria prima importante utilizada na síntese de poliésteres) e o besilato de atracúreo (um agente bloqueador neuromuscular), avaliando-se comparativamente os resultados. O primeiro sistema não se mostrou adequado para tai fim, pois o ácido tereftálico apresenta baixa solubilidade em água, sendo necessário adicionar hidróxido de sódio para dissolvê-lo, o que produzia um meio de alta condutividade, inviabilizando algumas das estratégias de pré-concentração. Porém, como o controle de impurezas no ácido tereftálico é de interesse industrial foi desenvolvido um método para a análise simultânea dos subprodutos principais: o ácido carboxibenzaldeído (4-CBA) e o ácido p-toluóico (pTO), que são controlados industrialmente por polarografia e cromatografia à gás, respectivamente. As análises foram realizadas em lotes industriais do ácido tereftálico cru (CTA) e do ácido tereftálico altamente purificado (PTA). As concentrações de 4-CBA e p-TOL (determinadas por CE) em ambos, CTA e PTA, estão de acordo com as especificações do produto. As análises mostraram a viabilidade da determinação das impurezas, sendo identificados ainda o ácido benzóico (BZ) e o 4-hidroximetilbenzóico (HMB). O segundo sistema químico escolhido, o besilato de atracúreo, foi adequado para avaliar as várias estratégias de pré-concentração, pois este composto é solúvel em água. A apresentação comercial deste produto consiste na mistura de três isômeros (cis-cis, cis-trans e trans-trans), cada um exibindo uma potência bloqueadora neuromuscular particular. Primeiramente foi desenvolvido um método para a separação dos três isômeros por CE e depois foi feito um estudo das impurezas presentes no sistema, avaliando-se a temperatura e o tempo de estocagem. Foram identificadas duas impurezas no composto: a laudanosina e o monoquaternário ácido. Foi escolhido o pico da laudanosina para avaliar as estratégias de aumento de sensibilidade devido este ser o principal composto de decomposição do atracúreo. O aumento de sensibilidade foi calculado em termos de ganho em sinal-ruído (S/R). O melhor resultado de aumento de sensibilidade para o \"stacking\" mediado por força iônica foi quando se dissolveu a amostra em água e comparou-se à mesma amostra dissolvida no tampão de corrida (o ganho em S/R foi da ordem de 25 vezes). Para as demais estratégias, a referência de partida foi uma amostra já dissolvida em água. Dentre todas as estratégias avaliadas, o maior ganho em sensibilidade foi obtido com os pré-concentradores (22,5 vezes de aumento em sinal-ruído (S/R)), mas a dificuldade de confecção não os tornam atrativos para as análises. A isotacoforese proporcionou o segundo maior aumento (7,6 vezes), comparável ao aumento de sensibilidade em campo amplificado (7,5 vezes) quando se utilizou um tampão com alta concentração de sal. Este ganho foi melhor que o da cela HS que teve aumento de 2,9 vezes em SIR, sugerindo que estas técnicas de pré-concentração podem ser utilizadas com vantagem em relação à cela HS proporcionando baixo custo. O aumento de sensibilidade não foi tão expressivo no \"stacking\" por injeção de grande volume (1,1), mas pode ser melhorado se o capilar inteiro for preenchido com a amostra. / Capillary Electrophoresis (CE) is a separation technique based on differential migration of ionic compounds in a electric field, providing high efficiency, resolution and faster analysis. To preserve high resolution, the injected volume must be small (nanoliters), which compromises the analysis of samples components in a low concentration level. The little pathlenght defined by the capillary internal diameter and a small injected volume, place a large demand on detection, especially when on-line absorbance detectors is used. Some strategies have been described to improve the capillary electrophoresis sensitivity. At this work, preconcentration techniques (stacking, field amplification, isotachophoresis, high sensitivity optical cell, and on line solid extraction) were applied to two chemical systems: terephthalic acid (an important raw material used in a polyester synthesis) and atracurium besylate (a neuromuscular blocking agent), and the results were comparatively evaluated. The first selected system was not suitable for this purpose, due to poor solubility of terephthalic acid in water. lt was necessary to work with solutions of crude and purified products prepared in 0.15 mol /L NaOH and that produced a high conductivity medium, jeopardizing some preconcentration techniques. However, since impurities control in terephthalic acid is of industrial interest, it was developed a method to simultaneously analyze major byproducts: 4-carboxybenzaldehyde (4-CBA) and toluoic acid (pTO), industrialy controlled by polarography and gas chromatography, respectively. Analysis were conducted in industrial batches of crude terephthalic acid (CTA) and highly purified terephthalic acid (PTA). Concentrations of 4-CBA and p-TOL, in both, CTA and PTA, were in agreement with product specification. The results showed the viability to determine several impurities using CE. Additionally, two other contaminants, benzoic acid (BZ) and 4-hydroxymethyl benzoic acid (HMB), were identified. The second selected system, atracurium besylate, was useful to evaluate some preconcentration strategies, because of this water solubility and ionic character. Commercial presentation of this pharmaceutical consists in a mixture of three isomers (cis-cis, cis-trans e trans-trans), which one presenting a particular neuromuscular potency. First, it was developed a method to separate the three isomers by CE and then a study of the product impurities was conducted, evaluating the temperature tolerance and shelf life. Laudanosine and a monoquaternary acid were identified impurities in the pharmaceutical. Laudanosine was selected for the evaluation of preconcentration techniques because it is the major decomposition product of atracurium besylate. Sensitivity enhancement was calculated in terms of signal-noise increase (S/R). The best results of enhancement sensitivity with \"stacking\" mediated by ionic strange was obtained when the sample was dissolved in water and it was compared to the same sample dissolved in a running buffer (signal-noise increase was 25 times). To the other strategies, the reference sample was dissolved in water). Among all evaluated strategies, the major sensitivity enhancement was obtained with preconcentrators (22,5 times), but its difficult manufaturing makes them not attractive for routine analysis. Isotachophoresis, the second best in terms of signal-noise (S/R) values (7,6 times), was comparable to field amplification sensitivity enhancement (7,5 times), when buffers with high salt concentration were used. Its enhancement was better than that of HS cell, that was signal-noise increase of 2,9 times), suggesting that these preconcentration techniques can be used with advantage in relation to HS cell providing low cost. Sensitivity enhancement was not expressive, in the large injection volumes strategy (1, 1 times), but it can be improved if the whole capillar1 is filled with sample.

A Eletroforese Capilar (CE) é uma técnica de separação baseada na migração diferenciada de compostos iônicos ou ionizáveis em um campo elétrico, proporcionando alta resolução, eficiência e rapidez de análise. Para preservar a alta resolução, o volume injetado deve ser pequeno (da ordem de nanolitros), o que dificulta a análise de compostos em baixos níveis de concentração. O diminuto caminho óptico definido pelo diâmetro interno do capilar, associado ao pequeno volume injetado, compromete a detecção, principalmente quando se utiliza a absorbância em linha. Várias estratégias têm sido descritas para melhorar a sensibilidade em eletroforese capilar. Neste trabalho, as estratégias de pré-concentração (\"stacking\", amplificação de campo, isotacoforese, cela óptica de alta sensibilidade e extração em fase sólida em linha) foram aplicadas a dois sistemas químicos: o ácido tereftálico (matéria prima importante utilizada na síntese de poliésteres) e o besilato de atracúreo (um agente bloqueador neuromuscular), avaliando-se comparativamente os resultados. O primeiro sistema não se mostrou adequado para tai fim, pois o ácido tereftálico apresenta baixa solubilidade em água, sendo necessário adicionar hidróxido de sódio para dissolvê-lo, o que produzia um meio de alta condutividade, inviabilizando algumas das estratégias de pré-concentração. Porém, como o controle de impurezas no ácido tereftálico é de interesse industrial foi desenvolvido um método para a análise simultânea dos subprodutos principais: o ácido carboxibenzaldeído (4-CBA) e o ácido p-toluóico (pTO), que são controlados industrialmente por polarografia e cromatografia à gás, respectivamente. As análises foram realizadas em lotes industriais do ácido tereftálico cru (CTA) e do ácido tereftálico altamente purificado (PTA). As concentrações de 4-CBA e p-TOL (determinadas por CE) em ambos, CTA e PTA, estão de acordo com as especificações do produto. As análises mostraram a viabilidade da determinação das impurezas, sendo identificados ainda o ácido benzóico (BZ) e o 4-hidroximetilbenzóico (HMB). O segundo sistema químico escolhido, o besilato de atracúreo, foi adequado para avaliar as várias estratégias de pré-concentração, pois este composto é solúvel em água. A apresentação comercial deste produto consiste na mistura de três isômeros (cis-cis, cis-trans e trans-trans), cada um exibindo uma potência bloqueadora neuromuscular particular. Primeiramente foi desenvolvido um método para a separação dos três isômeros por CE e depois foi feito um estudo das impurezas presentes no sistema, avaliando-se a temperatura e o tempo de estocagem. Foram identificadas duas impurezas no composto: a laudanosina e o monoquaternário ácido. Foi escolhido o pico da laudanosina para avaliar as estratégias de aumento de sensibilidade devido este ser o principal composto de decomposição do atracúreo. O aumento de sensibilidade foi calculado em termos de ganho em sinal-ruído (S/R). O melhor resultado de aumento de sensibilidade para o \"stacking\" mediado por força iônica foi quando se dissolveu a amostra em água e comparou-se à mesma amostra dissolvida no tampão de corrida (o ganho em S/R foi da ordem de 25 vezes). Para as demais estratégias, a referência de partida foi uma amostra já dissolvida em água. Dentre todas as estratégias avaliadas, o maior ganho em sensibilidade foi obtido com os pré-concentradores (22,5 vezes de aumento em sinal-ruído (S/R)), mas a dificuldade de confecção não os tornam atrativos para as análises. A isotacoforese proporcionou o segundo maior aumento (7,6 vezes), comparável ao aumento de sensibilidade em campo amplificado (7,5 vezes) quando se utilizou um tampão com alta concentração de sal. Este ganho foi melhor que o da cela HS que teve aumento de 2,9 vezes em SIR, sugerindo que estas técnicas de pré-concentração podem ser utilizadas com vantagem em relação à cela HS proporcionando baixo custo. O aumento de sensibilidade não foi tão expressivo no \"stacking\" por injeção de grande volume (1,1), mas pode ser melhorado se o capilar inteiro for preenchido com a amostra. / Capillary Electrophoresis (CE) is a separation technique based on differential migration of ionic compounds in a electric field, providing high efficiency, resolution and faster analysis. To preserve high resolution, the injected volume must be small (nanoliters), which compromises the analysis of samples components in a low concentration level. The little pathlenght defined by the capillary internal diameter and a small injected volume, place a large demand on detection, especially when on-line absorbance detectors is used. Some strategies have been described to improve the capillary electrophoresis sensitivity. At this work, preconcentration techniques (stacking, field amplification, isotachophoresis, high sensitivity optical cell, and on line solid extraction) were applied to two chemical systems: terephthalic acid (an important raw material used in a polyester synthesis) and atracurium besylate (a neuromuscular blocking agent), and the results were comparatively evaluated. The first selected system was not suitable for this purpose, due to poor solubility of terephthalic acid in water. lt was necessary to work with solutions of crude and purified products prepared in 0.15 mol /L NaOH and that produced a high conductivity medium, jeopardizing some preconcentration techniques. However, since impurities control in terephthalic acid is of industrial interest, it was developed a method to simultaneously analyze major byproducts: 4-carboxybenzaldehyde (4-CBA) and toluoic acid (pTO), industrialy controlled by polarography and gas chromatography, respectively. Analysis were conducted in industrial batches of crude terephthalic acid (CTA) and highly purified terephthalic acid (PTA). Concentrations of 4-CBA and p-TOL, in both, CTA and PTA, were in agreement with product specification. The results showed the viability to determine several impurities using CE. Additionally, two other contaminants, benzoic acid (BZ) and 4-hydroxymethyl benzoic acid (HMB), were identified. The second selected system, atracurium besylate, was useful to evaluate some preconcentration strategies, because of this water solubility and ionic character. Commercial presentation of this pharmaceutical consists in a mixture of three isomers (cis-cis, cis-trans e trans-trans), which one presenting a particular neuromuscular potency. First, it was developed a method to separate the three isomers by CE and then a study of the product impurities was conducted, evaluating the temperature tolerance and shelf life. Laudanosine and a monoquaternary acid were identified impurities in the pharmaceutical. Laudanosine was selected for the evaluation of preconcentration techniques because it is the major decomposition product of atracurium besylate. Sensitivity enhancement was calculated in terms of signal-noise increase (S/R). The best results of enhancement sensitivity with \"stacking\" mediated by ionic strange was obtained when the sample was dissolved in water and it was compared to the same sample dissolved in a running buffer (signal-noise increase was 25 times). To the other strategies, the reference sample was dissolved in water). Among all evaluated strategies, the major sensitivity enhancement was obtained with preconcentrators (22,5 times), but its difficult manufaturing makes them not attractive for routine analysis. Isotachophoresis, the second best in terms of signal-noise (S/R) values (7,6 times), was comparable to field amplification sensitivity enhancement (7,5 times), when buffers with high salt concentration were used. Its enhancement was better than that of HS cell, that was signal-noise increase of 2,9 times), suggesting that these preconcentration techniques can be used with advantage in relation to HS cell providing low cost. Sensitivity enhancement was not expressive, in the large injection volumes strategy (1, 1 times), but it can be improved if the whole capillar1 is filled with sample.

JUCÁ, Thiago Lustosa. Estudo proteômico de sementes em desenvolvimento e maduras de pinhão manso (Jatropha curcas L.). 2010. 102 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2010. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-13T12:51:05Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-14T22:57:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T22:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) Previous issue date: 2010 / Although the potential of the seed Jatropha as a source of raw material for the production of biodiesel is widely recognized, little is known about the deposition patterns of oil and protein during seed development. The availability of this knowledge will be crucial for the creation of new genotypes to meet the demand from the biodiesel industry. In this study, we performed an initial proteomic analysis of the endosperm in developing and mature in order to identify proteins involved in fatty acid metabolism as well as proteins with allergenic properties / toxic / antinutritional that are responsible for marking the residue of oil extraction unsuitable for consumption animal. Through two-dimensional electrophoresis (2DE) were established reference maps of protein fractions from the endosperm of the seed development (ESD) and mature (ESM), which were obtained by exploring the properties of differential solubility of proteins in the endosperm. These reference maps, 1480 spots in total were selected (712 "ESD" and 768 "ESM"), removed from the 2DE gel and digested with trypsin for subsequent analysis by mass spectrometry. Were used for searching the databases NCBInr and a local database of ESTs from developing seeds and during germination of Jatropha. A total of 525 spots were identified and classified functionally. Although most of the proteins identified were related reservation function, proteins involved in biosynthetic pathways of fatty acids were identified and diterpenes, as well as various metabolic-related proteins, protease inhibitors and curcina toxic protein. The relatively low rate of identification obtained in this study may in part be attributed to the fact that there is extensive databases for this species. The results presented here represent the first in-depth analysis of the deposition pattern and identification of proteins from seeds of Jatropha and lay the foundations on which the complete proteome of seeds of Jatropha can be established. / Embora o potencial das sementes de pinhão manso como fonte de matéria prima para a produção de biodiesel seja amplamente reconhecido, pouco se sabe sobre os padrões de deposição de óleo e proteína durante o desenvolvimento da semente. A disponibilidade deste conhecimento será de fundamental importância para a criação de novos genótipos que atendam a demanda das indústrias do biodiesel. Neste trabalho, foi realizada uma análise proteômica inicial do endosperma em desenvolvimento e maduro, objetivando identificar proteínas envolvidas no metabolismo de ácidos graxos assim como proteínas com propriedades alergênicas/tóxicas/antinutricionais que são responsáveis por tornar o resíduo da extração do óleo inadequado para o consumo animal. Através de eletroforese bidimensional (2DE) foram estabelecidos mapas de referência das frações protéicas do endosperma de sementes em desenvolvimento (ESD) e maduras (ESM), que foram obtidas explorando as propriedades de solubilidade diferencial das proteínas do endosperma. Desses mapas de referência, um total 1480 spots foram selecionados (712 “ESD” e 768 “ESM”), retirados dos géis 2DE e digeridos com tripsina para posterior análise por espectrometria de massa. Foram utilizados para as buscas, os bancos de dados do NCBInr e um banco de dados local de ESTs de sementes em desenvolvimento e durante a germinação de sementes de pinhão manso. Um total de 525 spots foram identificados e classificados funcionalmente. Embora a maioria das proteínas identificadas fosse relacionadas com função de reserva, proteínas envolvidas em vias biossintéticas dos ácidos graxos e dos diterpenos foram identificadas, assim como várias proteínas relacionadas com metabolismo, inibidores de protease e a proteína tóxica curcina. A taxa de identificação relativamente baixa obtida neste estudo pode em parte ser atribuída ao fato de não existir bancos de dados extensos para esta espécie. Os resultados aqui apresentados representam a primeira análise em profundidade do padrão de deposição e identificação das proteínas de sementes de pinhão manso e fixam as bases sobre as quais o proteoma completo de sementes de pinhão manso poderá ser estabelecido.