Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BraitnerMatiasPereira-Dissertacao.pdf: 263236 bytes, checksum: 40d93895939d8dd4dd140b2be80fc909 (MD5) Previous issue date: 2008-02-13 / A female bovine used as a donor in embryo transfer programs (ET) should produce structures with quality and quantity. The improvement of the efficiency of livestock production is a complex biological system involving interactions of hormonal, genetic, metabolic and nutritional factors. Nutrition and reproduction are closely linked in any production system. Canter OF is a nutritional supplement with vitamins, minerals and amino acids, which could improve the performace of female cattle in superovulation programs. The purpose of this paper was to verify the effects of the of Canter OF adiminitration on the superovulatory response and embryo production in (ET) zebu cows. Forty-two superovulation protocols were carried out with , on 21 Guzerá breed female bovine doners, aged 20-60 months, weighing more than 350 kg, and having normal estrous cycles (21 ± 3 days). The animals were kept in semiconfinement and received the same diet during the trial period, consisting of grass and mineral supplementation ad libitum to maintain the body condition score of between 3 and 4 (scale of 1 to 5). All animals passed thorough both the group (Canter OF ) and the control group atleast once, in Cross-over design. The product was administrated daily (20 ml) to each donor individually during the trial period. The following variables: influence of the treatments on the ovarian response to the ovarian response to the superovulatory protocol (numberand average diameter of follicles on insemination day); number of corpora lutea present on flushing day; embryo recovery rate; total embryos; number of and degenerate embryos and nofertilized eggs, and recipient gestation rate. The results showed that no difference (P> 0.05) was found between the number of corpora lutea (10.20 ± 2.04 and 9.79 ± 1.73 to a), total embryos ( 7.64 ± 2.06 to 6.64 ± 1.71) and viable embryos (4.64 ± 1.24 and 4.68 ± 1.03 to a) and between the control group and the Canter OF group, respectively. When evaluation concerned only the cows with low superovulatory response and poor embryo production, the results with Canter OF treatment were different were different. In this group, Canter OF treatments were different. In this group, Canter OF treatment increased the superovulatory response, the number of embryos per flushing, and the number of viable embryos (P <0.05). It the animals with a history of good superovulatory response no statistically significant alteration was found. In conclusion, the product used in the present protocol was effective to increase the superovulatory response and embryo production only in a donor with a low embryo production. / O que se espera do tratamento superovulatorio de uma fêmea bovina utilizada como doadora em programas de transferência de embriões (TE) é que esta produza estruturas em quantidade e qualidade. A nutrição e reprodução são dois aspectos que possuem estreitas interrelações, em qualquer sistema de produção. O Canter OF® é um suplemento nutricional com vitaminas, minerais e aminoácidos, cujos constituintes poderiam melhorar os resultados de fêmeas bovinas submetidas à superovulação. O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos da administração do Canter OF® sobre a resposta superovulatória e a produção embrionária de doadoras zebuínas submetidas aos programas de TE. Foram realizados 42 protocolos de superovulação, em 21 fêmeas bovinas doadoras da raça Guzerá, com peso corporal superior a 350 Kg, idade entre 20 e 60 meses e que estavam ciclando em intervalos regulares (21±3 dias). Os animais foram manejados em regime de semiconfinamento e receberam a mesma alimentação durante todo o período experimental, composta de volumoso e suplementação mineral ad libitum, visando manutenção do escore de condição corporal entre 3 e 4 (escala de 1 a 5). Todos os animais utilizados passaram pelo menos uma vez pelo grupo tratado (Canter OF®) e pelo grupo controle num esquema de delineamento Cross-over . O produto foi administrado diariamente (20 ml) a cada animal, de forma individual por 30 dias antes da colheita dos embriões. Foram avaliadas as seguintes variáveis: influência dos tratamentos sobre a resposta ovariana ao protocolo superovulatório (número e diâmetro médio dos folículos no dia da inseminação), número de corpos lúteos presentes no dia da colheita de embriões, taxa de recuperação embrionária, total de estruturas produzidas, número de embriões viáveis ou degenerados e oócitos não fecundados e a taxa de gestação das receptoras. Os resultados mostraram que, quando são analisados todos os animais utilizados não se observaram diferenças (P>0,05) entre o total de corpos lúteos (10,20±2,04 e 9,79 ±1,73), total de embriões (7,64±2,06 e 6,64±1,71) e embriões viáveis (4,64±1,24 e 4,68±1,03) entre o grupo Controle e o Tratado com Canter OF®, respectivamente. Quando se avaliaram apenas as vacas com pequena resposta superovulatória e produção embrionária ruim, os resultados do tratamento com Canter OF® são diferentes. Para estes animais, algumas das variáveis estudadas foram superiores no grupo tratado com Canter OF®. Neste grupo, o tratamento com Canter OF® aumentou a resposta superovulatória, o total de embriões por coleta e o número de embriões viáveis (P<0,05). E os animais com histórico de resposta superovulatória boa não apresentaram nenhuma alteração estatisticamente significativa. Conclui-se que o produto, no protocolo utilizado foi eficiente em estimular maior número de ovulações, e produção de embriões, somente em doadoras com produção embrionária baixa.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoRamosdeOliveira-dissertacao.pdf: 862332 bytes, checksum: f1f29e210f24e186303d9f28cb6d64f0 (MD5) Previous issue date: 2011-05-23 / Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The production of bovine embryos had a pronounced increase in the last decade. In Brazil, this increase was directly related to the improvement of the in vitro embryo production, particularly in dairy cattle. The present experiment used the transvaginal ultrasound-guide for ovarian follicle aspiration (TGFA) and in vitro embryo production in Gyr cattle (dairy zebu breed) to assess the potential of the donator for oocyte and embryo production. Data from a private company (Biotran Alfenas, MG - Brazil), recovered for the last three years were included in this study. Cows were supplemented with corn silage and a mixture of corn, soybean, vitamin and minerals, according to their nutritional requirements. The ovarian follicular wave was synchronized 5 days before TGFA. Briefly, auricular implant and intramuscular injections of 3 mg of estradiol benzoate and 0.530 mg of sodium cloprostenol. The TGFAs were performed according to the same basic procedures: using the ultrasound device (Pie-Medical Esaot Akila) and a vacuum system (pressure of 80 mmHg) with a disposable 20G needle in one extremity and a collector tube (50 ml) in the other. Only TGFAs with at least one oocyte recovered were considered, and a total of 178 TGFAs sessions from different Gyr cows (&#8805; 60 days after parturition) were used. The recovered oocytes were classified according to the cumulus cells layers and cytoplasm aspect. Sex-sorted (X) semen with proved fertility was used for in vitro fertilization and embryo production. According to the total recovered oocytes the cows were ordered in one of the 4 quartiles, with the top 25% (1st quartile), the median 50% (2nd and 3rd) and the bottom 25% (4th quartile). The average of recovered oocyte (total, viable and unviable), total embryo and the number of pregnancies produced in each TGFA session were compared between the first and the fourth quartiles. Conversion rates (%) of the total and viable oocytes to embryo, viable oocytes to pregnancy and embryo to pregnancy were also performed. Data were analyzed by one-way ANOVA (9.2 Version; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Differences between the first and fourth quartiles were accessed by Student s t-test and frequency data were evaluated by Fisher s Exact test. The production of oocytes and embryos, and the number of pregnancies (mean ± SD by session) were higher (P< 0.0001) in the animals of the first quartile (41.6 ± 10.6 vs 6.7 ± 3.1 oocytes; 29.1 ± 11.0 vs 4.5 ± 2.7 viable; 8.6 ± 5.7 vs 1.8 ± 1.8 embryos). The rate of pregnancy was 46.0%, 44.9%, 43.9% and 45.6% for the I; II; III and IV respective. The conversion rate of the viable oocytes to embryo was greater (P< 0.03) in animals from the fourth quartile (51.1 vs 31.9%). The interpretation was that for Gyr breed the animals with high donator potential produce in average 40 viable oocytes and 8 embryos in each session of the TGFA. The data suggest that the selection of the animals with high potential for oocyte production can improve the absolute but not relative number of the in vitro embryos produce. / A produção de embriões bovinos teve um aumento acentuado na última década. No Brasil, esse aumento foi diretamente relacionado à melhoria da produção de embriões in vitro, particularmente em rebanhos leiteiros. O presente experimento utilizou a ultrassonografia transvaginal para a aspiração de folículos ovarianos e produção in vitro de embriões em bovinos da raça Gir (raças zebuínas leiteiras) no intuito de avaliar o potencial de doadoras para a recuperação oocitária, produção de embriões e gestação. As vacas foram suplementadas com silagem de milho e concentrado à base de milho, soja, vitaminas e minerais, de acordo com as exigências nutricionais. Todos os procedimentos de aspiração foram precedidos de sincronização da onda de crescimento folicular 5 dias antes a aspiração, através de implante auricular de norgestomet, 3 mg de benzoato de estradiol e 0,530 mg de cloprostenol sódico. Dados da empresa privada (Biotran® - LTDA), recuperados dos últimos três anos foram incluídos. As aspirações foliculares foram realizadas de acordo com os procedimentos básicos: utilizou-se o dispositivo de ultrassom (Pie-Medical Esaot Akila) e um sistema de vácuo (pressão de 80 mmHg) com uma agulha descartável 20G em uma extremidade e um tubo coletor (50 ml) na outras. Somente punções com recuperação de pelo menos um oócito foram consideradas, um total de 626 sessões de aspiração de 251 animais (&#8805; 60 dias após o parto) foram utilizados. Os oócitos recuperados foram classificados de acordo com as camadas de células do cumulus e o aspecto do citoplasma. Utilizou-se sêmen sexado (X) da raça Gir com a fertilidade comprovada. De acordo com o total de oócitos recuperados as vacas foram ordenadas em quartis. O total de oócitos, bem como os viáveis e inviáveis, a conversão para embriões, e o número de gestações produzidas em cada sessão de punção foram comparados entre o primeiro e o quarto quartil. Os dados foram analisados por ANOVA one-way (versão 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). Diferenças entre o primeiro e quarto quartis foram acessadas pelo teste t de Student e os dados de frequência foram avaliados pelo teste exato de Fisher. A recuperação de oócitos (Total e viáveis) e a produção de embriões, bem como o número de gestações (média ± DP por sessão) foram maiores (P <0,0001) nos animais do primeiro quartil (41,6 ± 10,6 vs 6,7 ± 3,1 oócitos; 29,1 ± 11,0 vs 4,5 ± 2,7 viáveis, 8,6 ± 5,7 vs 1,8 ± 1,8 embriões;) as taxas de gestação foram de 46,0% 44,9%, 43,9% e 45,6% para o I, II, III e IV quartil respectivamente. A taxa de conversão dos oócitos viáveis para embrião foi maior (P <0,03) em animais do quarto quartil quando comparado ao primeiro (51,1 vs 31,9%). A interpretação foi de que na raça Gir, os animais com maior potencial de recuperação oocitária produzem em média 40 oócitos viáveis e oito embriões em cada sessão do TGFa. Baseada no potencial de recuperação oocitária resulta em um aumento absoluto, mas não relativo, na produção de embriões.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TochimaraAparecidaMiyauchi-dissertacao.pdf: 1277501 bytes, checksum: 28f321c050df674dd0101fe282f265af (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Parthenogenesis has been described as an alternative method to produce embryos for studies with embryonic cells, particularly in humans which have a restriction of fertilized embryos. Procedures used in parthenogenesis are also required to produce embryos by somatic cell nuclear transfer in domestic species. However, many biological, cellular and molecular aspects of parthenogenetic embryos are still unknown. This study aimed to compare the kinetics of development, apoptosis rate and gene expression of stress and celular metabolism in bovine parthenogenetic embryos and embryos fertilized in vitro. Oocytes (n = 1541) obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro and submitted to parthenogenetic activation (4.62 µM ionomycin for 5 min followed by 2 mM 6-DMAP for 4 h) or in vitro fertilization (2 x 106 sperm/mL for 20h with semen from a single departure). 72h postactivation/fertilization (hpaf), embryos (8-cell) were frozen for subsequent analysis of gene expression and another part has been separated into groups of high or low potential of development: Part &#8805; 8 - parthenogenetic embryos with 8 or more cells (high development potential); Part < 8 - embryos less than 8 cells (low development potential); &#8805; 8 IVF - in vitro fertilized embryos with 8 or more cells; and IVF < 8 - embryos with less than 8 cells. Embryos were cultured in CR2aa medium with 2.5% BFS in 5% CO2, 5% O2, 90% N2 at 38.5° C and were evaluated rates of blastocyst 168hpaf (D7) and 196hpaf (D8). 8-cell embryos obtained after 72hpfa were analyzed for gene expression. D8 blastocysts were fixed and subsequently apoptotic index was analyzed by TUNEL. Data were compared by analysis of variance and means by Student Newman Keuls test. Gene expression was evaluated by REST® software. Values are shown as mean ± standard error. Embryos with 8 or more cells produced higher (P < 0.01) blastocysts rates in D7 and D8 compared to embryos with less than eight cells, showing its greatest development potential, regardless if they were parthenogenetic or fertilized. Embryos of Part &#8805; 8 group had higher (P <0.05) blastocyst rate in D7 (63.6 ± 3.4%) than IVF &#8805; 8 (45.3 ± 8.9%), but at D8 rate was similar (56.7 ± 3.0% and 44.2 ± 8.9% for Part &#8805; 8 and IVF &#8805; 8, respectively; P <0.05). There was no difference (P < 0.05) on blastocyst rates at D7 and D8 between embryos with less than 8 cells derived from parthenogenesis or fertilization. There was no difference in total cell number (92.0 ± 3.4, 102.30 ± 4.8), apoptotic cells (10.8 ± 1.22, 9.5 ± 1.07) and apoptotic index (11.4 ± 1.27, 9.8 ± 1.8) for parthenogenetic and IVF blastocysts, respectively. In 8-cell embryos analyzed, there was a subexpression of genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1 and GLUT1 for Part in relation to FIV, while HSF2 was overexpressed in Part compared to FIV. In conclusion, bovine parthenogenetic embryos differ to embryos fertilized in vitro in hability of preimplantation development in vitro and gene expression, which may limit the use of parthenogenesis in studies of embryonic development. / A partenogênese tem sido descrita como um método alternativo para produzir embriões para estudos com células embrionárias, principalmente em humanos para os quais existe a restrição do uso de embriões fecundados. Procedimentos utilizados na partenogênese são também necessários para se produzir embriões por transferência nuclear com células somáticas nas espécies domésticas. Contudo, muitos aspectos biológicos, celulares e moleculares dos embriões partenogenéticos ainda são desconhecidos. Este estudo objetivou comparar a cinética do desenvolvimento, índice de apoptose e expressão de genes de estresse e metabolismo celular em embriões bovinos partenogenéticos e embriões fecundados in vitro. Oócitos (n=1541) obtidos de ovários de matadouro foram maturados in vitro e submetidos à ativação partenogenética (4,62 µM ionomicina por 5 min seguido de 2 mM 6-DMAP por 4h) ou fecundação in vitro (2 x 106 espermatozoides/ml por 20h, com sêmen de uma única partida). Com 72h pós-ativação/fecundação (hpaf) parte dos embriões (8 células) foram congelados para posterior análise da expressão gênica e outra parte foi separada em grupos de alto ou baixo potencial de desenvolvimento: Part&#8805;8 - embriões partenogenéticos com 8 ou mais células (alto potencial de desenvolvimento); Part<8 - embriões com menos de 8 células (baixo potencial de desenvolvimento); FIV&#8805;8 - embriões fecundados in vitro com 8 ou mais células; e FIV<8: embriões com menos de 8 células. Os embriões foram cultivados em meio CR2aa com 2,5% SFB em 5%CO2, 5%O2, 90% N2 a 38,5ºC e avaliadas as taxas de blastocistos com 168hpaf (D7) e 196hpaf (D8). Embriões com 8 células obtidos após 72hpfa foram analisados quanto à expressão gênica. Blastocistos em D8 foram fixados e posteriormente foram avaliados pela técnica de TUNEL o índice apoptótico. Os dados foram comparados por análise de variância e as médias por teste de Student Newman Keuls. A expressão gênica foi avaliada pelo software REST®. Os valores são mostrados como média±erro padrão. Embriões com 8 ou mais células produziram maiores (P<0,01) taxas de blastocistos no D7 e D8 do que os embriões com menos de oitos células mostrando seu maior potencial de desenvolvimento, independentemente se foram partenogenéticos ou fecundados. Embriões do grupo Part&#8805;8 apresentaram maior (P<0,05) taxa de blastocistos no D7 (63,6±3,4%) que os FIV&#8805;8 (45,3±8,9%), porém a taxa no D8 foi semelhante (56,7±3,0% e 44,2±8,9% para Part&#8805;8 e FIV&#8805;8, respectivamente; (P<0,05). Não houve diferença (P<0,05) quanto às taxas de blastocistos no D7 e D8 entre embriões com menos de 8 células oriundos da partenogênese ou fecundação. Não houve diferença quanto ao número total de células (92,0±3,4; 102,30±4,8), células apoptóticas (10,8±1,22; 9,5±1,07) e índice apoptótico (11,4±1,27; 9,8±1,8) nos blastocistos partenogenéticos e FIV, respectivamente. Nos embriões com 8 células analisados, houve subexpressão dos genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1, GLUT1 nos Part em relação aos FIV, enquanto o HSF2 esteve sobrexpresso nos Part quando comparado aos FIV. Conclui-se que embriões partenogenéticos bovinos possuem diferenças se comparados aos embriões fecundados in vitro quanto à capacidade de desenvolvimento pré-implantacional in vitro e expressão gênica, o que pode limitar o uso da partenogênese em estudos sobre desenvolvimento embrionário.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tochimara Aparecida Myauchi Dissertacao.pdf: 1469858 bytes, checksum: d9554237da81a72762ef7629c0dfa1b8 (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Parthenogenesis has been described as an alternative method to produce embryos for studies with embryonic cells, particularly in humans which have a restriction of fertilized embryos. Procedures used in parthenogenesis are also required to produce embryos by somatic cell nuclear transfer in domestic species. However, many biological, cellular and molecular aspects of parthenogenetic embryos are still unknown. This study aimed to compare the kinetics of development, apoptosis rate and gene expression of stress and celular metabolism in bovine parthenogenetic embryos and embryos fertilized in vitro. Oocytes (n = 1541) obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro and submitted to parthenogenetic activation (4.62 µM ionomycin for 5 min followed by 2 mM 6-DMAP for 4 h) or in vitro fertilization (2 x 106 sperm/mL for 20h with semen from a single departure). 72h postactivation/fertilization (hpaf), embryos (8-cell) were frozen for subsequent analysis of gene expression and another part has been separated into groups of high or low potential of development: Part &#8805; 8 - parthenogenetic embryos with 8 or more cells (high development potential); Part < 8 - embryos less than 8 cells (low development potential); &#8805; 8 IVF - in vitro fertilized embryos with 8 or more cells; and IVF < 8 - embryos with less than 8 cells. Embryos were cultured in CR2aa medium with 2.5% BFS in 5% CO2, 5% O2, 90% N2 at 38.5° C and were evaluated rates of blastocyst 168hpaf (D7) and 196hpaf (D8). 8-cell embryos obtained after 72hpfa were analyzed for gene expression. D8 blastocysts were fixed and subsequently apoptotic index was analyzed by TUNEL. Data were compared by analysis of variance and means by Student Newman Keuls test. Gene expression was evaluated by REST® software. Values are shown as mean ± standard error. Embryos with 8 or more cells produced higher (P < 0.01) blastocysts rates in D7 and D8 compared to embryos with less than eight cells, showing its greatest development potential, regardless if they were parthenogenetic or fertilized. Embryos of Part &#8805; 8 group had higher (P <0.05) blastocyst rate in D7 (63.6 ± 3.4%) than IVF &#8805; 8 (45.3 ± 8.9%), but at D8 rate was similar (56.7 ± 3.0% and 44.2 ± 8.9% for Part &#8805; 8 and IVF &#8805; 8, respectively; P <0.05). There was no difference (P < 0.05) on blastocyst rates at D7 and D8 between embryos with less than 8 cells derived from parthenogenesis or fertilization. There was no difference in total cell number (92.0 ± 3.4, 102.30 ± 4.8), apoptotic cells (10.8 ± 1.22, 9.5 ± 1.07) and apoptotic index (11.4 ± 1.27, 9.8 ± 1.8) for parthenogenetic and IVF blastocysts, respectively. In 8-cell embryos analyzed, there was a subexpression of genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1 and GLUT1 for Part in relation to FIV, while HSF2 was overexpressed in Part compared to FIV. In conclusion, bovine parthenogenetic embryos differ to embryos fertilized in vitro in hability of preimplantation development in vitro and gene expression, which may limit the use of parthenogenesis in studies of embryonic development. / A partenogênese tem sido descrita como um método alternativo para produzir embriões para estudos com células embrionárias, principalmente em humanos para os quais existe a restrição do uso de embriões fecundados. Procedimentos utilizados na partenogênese são também necessários para se produzir embriões por transferência nuclear com células somáticas nas espécies domésticas. Contudo, muitos aspectos biológicos, celulares e moleculares dos embriões partenogenéticos ainda são desconhecidos. Este estudo objetivou comparar a cinética do desenvolvimento, índice de apoptose e expressão de genes de estresse e metabolismo celular em embriões bovinos partenogenéticos e embriões fecundados in vitro. Oócitos (n=1541) obtidos de ovários de matadouro foram maturados in vitro e submetidos à ativação partenogenética (4,62 µM ionomicina por 5 min seguido de 2 mM 6-DMAP por 4h) ou fecundação in vitro (2 x 106 espermatozoides/ml por 20h, com sêmen de uma única partida). Com 72h pós-ativação/fecundação (hpaf) parte dos embriões (8 células) foram congelados para posterior análise da expressão gênica e outra parte foi separada em grupos de alto ou baixo potencial de desenvolvimento: Part&#8805;8 - embriões partenogenéticos com 8 ou mais células (alto potencial de desenvolvimento); Part<8 - embriões com menos de 8 células (baixo potencial de desenvolvimento); FIV&#8805;8 - embriões fecundados in vitro com 8 ou mais células; e FIV<8: embriões com menos de 8 células. Os embriões foram cultivados em meio CR2aa com 2,5% SFB em 5%CO2, 5%O2, 90% N2 a 38,5ºC e avaliadas as taxas de blastocistos com 168hpaf (D7) e 196hpaf (D8). Embriões com 8 células obtidos após 72hpfa foram analisados quanto à expressão gênica. Blastocistos em D8 foram fixados e posteriormente foram avaliados pela técnica de TUNEL o índice apoptótico. Os dados foram comparados por análise de variância e as médias por teste de Student Newman Keuls. A expressão gênica foi avaliada pelo software REST®. Os valores são mostrados como média±erro padrão. Embriões com 8 ou mais células produziram maiores (P<0,01) taxas de blastocistos no D7 e D8 do que os embriões com menos de oitos células mostrando seu maior potencial de desenvolvimento, independentemente se foram partenogenéticos ou fecundados. Embriões do grupo Part&#8805;8 apresentaram maior (P<0,05) taxa de blastocistos no D7 (63,6±3,4%) que os FIV&#8805;8 (45,3±8,9%), porém a taxa no D8 foi semelhante (56,7±3,0% e 44,2±8,9% para Part&#8805;8 e FIV&#8805;8, respectivamente; (P<0,05). Não houve diferença (P<0,05) quanto às taxas de blastocistos no D7 e D8 entre embriões com menos de 8 células oriundos da partenogênese ou fecundação. Não houve diferença quanto ao número total de células (92,0±3,4; 102,30±4,8), células apoptóticas (10,8±1,22; 9,5±1,07) e índice apoptótico (11,4±1,27; 9,8±1,8) nos blastocistos partenogenéticos e FIV, respectivamente. Nos embriões com 8 células analisados, houve subexpressão dos genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1, GLUT1 nos Part em relação aos FIV, enquanto o HSF2 esteve sobrexpresso nos Part quando comparado aos FIV. Conclui-se que embriões partenogenéticos bovinos possuem diferenças se comparados aos embriões fecundados in vitro quanto à capacidade de desenvolvimento pré-implantacional in vitro e expressão gênica, o que pode limitar o uso da partenogênese em estudos sobre desenvolvimento embrionário.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoRamosdeOliveira-dissertacao.pdf: 862332 bytes, checksum: f1f29e210f24e186303d9f28cb6d64f0 (MD5) Previous issue date: 2011-05-23 / Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The production of bovine embryos had a pronounced increase in the last decade. In Brazil, this increase was directly related to the improvement of the in vitro embryo production, particularly in dairy cattle. The present experiment used the transvaginal ultrasound-guide for ovarian follicle aspiration (TGFA) and in vitro embryo production in Gyr cattle (dairy zebu breed) to assess the potential of the donator for oocyte and embryo production. Data from a private company (Biotran Alfenas, MG - Brazil), recovered for the last three years were included in this study. Cows were supplemented with corn silage and a mixture of corn, soybean, vitamin and minerals, according to their nutritional requirements. The ovarian follicular wave was synchronized 5 days before TGFA. Briefly, auricular implant and intramuscular injections of 3 mg of estradiol benzoate and 0.530 mg of sodium cloprostenol. The TGFAs were performed according to the same basic procedures: using the ultrasound device (Pie-Medical Esaot Akila) and a vacuum system (pressure of 80 mmHg) with a disposable 20G needle in one extremity and a collector tube (50 ml) in the other. Only TGFAs with at least one oocyte recovered were considered, and a total of 178 TGFAs sessions from different Gyr cows (&#8805; 60 days after parturition) were used. The recovered oocytes were classified according to the cumulus cells layers and cytoplasm aspect. Sex-sorted (X) semen with proved fertility was used for in vitro fertilization and embryo production. According to the total recovered oocytes the cows were ordered in one of the 4 quartiles, with the top 25% (1st quartile), the median 50% (2nd and 3rd) and the bottom 25% (4th quartile). The average of recovered oocyte (total, viable and unviable), total embryo and the number of pregnancies produced in each TGFA session were compared between the first and the fourth quartiles. Conversion rates (%) of the total and viable oocytes to embryo, viable oocytes to pregnancy and embryo to pregnancy were also performed. Data were analyzed by one-way ANOVA (9.2 Version; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Differences between the first and fourth quartiles were accessed by Student s t-test and frequency data were evaluated by Fisher s Exact test. The production of oocytes and embryos, and the number of pregnancies (mean ± SD by session) were higher (P< 0.0001) in the animals of the first quartile (41.6 ± 10.6 vs 6.7 ± 3.1 oocytes; 29.1 ± 11.0 vs 4.5 ± 2.7 viable; 8.6 ± 5.7 vs 1.8 ± 1.8 embryos). The rate of pregnancy was 46.0%, 44.9%, 43.9% and 45.6% for the I; II; III and IV respective. The conversion rate of the viable oocytes to embryo was greater (P< 0.03) in animals from the fourth quartile (51.1 vs 31.9%). The interpretation was that for Gyr breed the animals with high donator potential produce in average 40 viable oocytes and 8 embryos in each session of the TGFA. The data suggest that the selection of the animals with high potential for oocyte production can improve the absolute but not relative number of the in vitro embryos produce. / A produção de embriões bovinos teve um aumento acentuado na última década. No Brasil, esse aumento foi diretamente relacionado à melhoria da produção de embriões in vitro, particularmente em rebanhos leiteiros. O presente experimento utilizou a ultrassonografia transvaginal para a aspiração de folículos ovarianos e produção in vitro de embriões em bovinos da raça Gir (raças zebuínas leiteiras) no intuito de avaliar o potencial de doadoras para a recuperação oocitária, produção de embriões e gestação. As vacas foram suplementadas com silagem de milho e concentrado à base de milho, soja, vitaminas e minerais, de acordo com as exigências nutricionais. Todos os procedimentos de aspiração foram precedidos de sincronização da onda de crescimento folicular 5 dias antes a aspiração, através de implante auricular de norgestomet, 3 mg de benzoato de estradiol e 0,530 mg de cloprostenol sódico. Dados da empresa privada (Biotran® - LTDA), recuperados dos últimos três anos foram incluídos. As aspirações foliculares foram realizadas de acordo com os procedimentos básicos: utilizou-se o dispositivo de ultrassom (Pie-Medical Esaot Akila) e um sistema de vácuo (pressão de 80 mmHg) com uma agulha descartável 20G em uma extremidade e um tubo coletor (50 ml) na outras. Somente punções com recuperação de pelo menos um oócito foram consideradas, um total de 626 sessões de aspiração de 251 animais (&#8805; 60 dias após o parto) foram utilizados. Os oócitos recuperados foram classificados de acordo com as camadas de células do cumulus e o aspecto do citoplasma. Utilizou-se sêmen sexado (X) da raça Gir com a fertilidade comprovada. De acordo com o total de oócitos recuperados as vacas foram ordenadas em quartis. O total de oócitos, bem como os viáveis e inviáveis, a conversão para embriões, e o número de gestações produzidas em cada sessão de punção foram comparados entre o primeiro e o quarto quartil. Os dados foram analisados por ANOVA one-way (versão 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). Diferenças entre o primeiro e quarto quartis foram acessadas pelo teste t de Student e os dados de frequência foram avaliados pelo teste exato de Fisher. A recuperação de oócitos (Total e viáveis) e a produção de embriões, bem como o número de gestações (média ± DP por sessão) foram maiores (P <0,0001) nos animais do primeiro quartil (41,6 ± 10,6 vs 6,7 ± 3,1 oócitos; 29,1 ± 11,0 vs 4,5 ± 2,7 viáveis, 8,6 ± 5,7 vs 1,8 ± 1,8 embriões;) as taxas de gestação foram de 46,0% 44,9%, 43,9% e 45,6% para o I, II, III e IV quartil respectivamente. A taxa de conversão dos oócitos viáveis para embrião foi maior (P <0,03) em animais do quarto quartil quando comparado ao primeiro (51,1 vs 31,9%). A interpretação foi de que na raça Gir, os animais com maior potencial de recuperação oocitária produzem em média 40 oócitos viáveis e oito embriões em cada sessão do TGFa. Baseada no potencial de recuperação oocitária resulta em um aumento absoluto, mas não relativo, na produção de embriões.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TochimaraAparecidaMiyauchi-dissertacao.pdf: 849651 bytes, checksum: ef29d9bc544c7cef9bb8b27b98b198ea (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Parthenogenesis has been described as an alternative method to produce embryos for studies with embryonic cells, particularly in humans which have a restriction of fertilized embryos. Procedures used in parthenogenesis are also required to produce embryos by somatic cell nuclear transfer in domestic species. However, many biological, cellular and molecular aspects of parthenogenetic embryos are still unknown. This study aimed to compare the kinetics of development, apoptosis rate and gene expression of stress and celular metabolism in bovine parthenogenetic embryos and embryos fertilized in vitro. Oocytes (n = 1541) obtained from slaughterhouse ovaries were matured in vitro and submitted to parthenogenetic activation (4.62 µM ionomycin for 5 min followed by 2 mM 6-DMAP for 4 h) or in vitro fertilization (2 x 106 sperm/mL for 20h with semen from a single departure). 72h postactivation/fertilization (hpaf), embryos (8-cell) were frozen for subsequent analysis of gene expression and another part has been separated into groups of high or low potential of development: Part &#8805; 8 - parthenogenetic embryos with 8 or more cells (high development potential); Part < 8 - embryos less than 8 cells (low development potential); &#8805; 8 IVF - in vitro fertilized embryos with 8 or more cells; and IVF < 8 - embryos with less than 8 cells. Embryos were cultured in CR2aa medium with 2.5% BFS in 5% CO2, 5% O2, 90% N2 at 38.5° C and were evaluated rates of blastocyst 168hpaf (D7) and 196hpaf (D8). 8-cell embryos obtained after 72hpfa were analyzed for gene expression. D8 blastocysts were fixed and subsequently apoptotic index was analyzed by TUNEL. Data were compared by analysis of variance and means by Student Newman Keuls test. Gene expression was evaluated by REST® software. Values are shown as mean ± standard error. Embryos with 8 or more cells produced higher (P < 0.01) blastocysts rates in D7 and D8 compared to embryos with less than eight cells, showing its greatest development potential, regardless if they were parthenogenetic or fertilized. Embryos of Part &#8805; 8 group had higher (P <0.05) blastocyst rate in D7 (63.6 ± 3.4%) than IVF &#8805; 8 (45.3 ± 8.9%), but at D8 rate was similar (56.7 ± 3.0% and 44.2 ± 8.9% for Part &#8805; 8 and IVF &#8805; 8, respectively; P <0.05). There was no difference (P < 0.05) on blastocyst rates at D7 and D8 between embryos with less than 8 cells derived from parthenogenesis or fertilization. There was no difference in total cell number (92.0 ± 3.4, 102.30 ± 4.8), apoptotic cells (10.8 ± 1.22, 9.5 ± 1.07) and apoptotic index (11.4 ± 1.27, 9.8 ± 1.8) for parthenogenetic and IVF blastocysts, respectively. In 8-cell embryos analyzed, there was a subexpression of genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1 and GLUT1 for Part in relation to FIV, while HSF2 was overexpressed in Part compared to FIV. In conclusion, bovine parthenogenetic embryos differ to embryos fertilized in vitro in hability of preimplantation development in vitro and gene expression, which may limit the use of parthenogenesis in studies of embryonic development. / A partenogênese tem sido descrita como um método alternativo para produzir embriões para estudos com células embrionárias, principalmente em humanos para os quais existe a restrição do uso de embriões fecundados. Procedimentos utilizados na partenogênese são também necessários para se produzir embriões por transferência nuclear com células somáticas nas espécies domésticas. Contudo, muitos aspectos biológicos, celulares e moleculares dos embriões partenogenéticos ainda são desconhecidos. Este estudo objetivou comparar a cinética do desenvolvimento, índice de apoptose e expressão de genes de estresse e metabolismo celular em embriões bovinos partenogenéticos e embriões fecundados in vitro. Oócitos (n=1541) obtidos de ovários de matadouro foram maturados in vitro e submetidos à ativação partenogenética (4,62 µM ionomicina por 5 min seguido de 2 mM 6-DMAP por 4h) ou fecundação in vitro (2 x 106 espermatozoides/ml por 20h, com sêmen de uma única partida). Com 72h pós-ativação/fecundação (hpaf) parte dos embriões (8 células) foram congelados para posterior análise da expressão gênica e outra parte foi separada em grupos de alto ou baixo potencial de desenvolvimento: Part&#8805;8 - embriões partenogenéticos com 8 ou mais células (alto potencial de desenvolvimento); Part<8 - embriões com menos de 8 células (baixo potencial de desenvolvimento); FIV&#8805;8 - embriões fecundados in vitro com 8 ou mais células; e FIV<8: embriões com menos de 8 células. Os embriões foram cultivados em meio CR2aa com 2,5% SFB em 5%CO2, 5%O2, 90% N2 a 38,5ºC e avaliadas as taxas de blastocistos com 168hpaf (D7) e 196hpaf (D8). Embriões com 8 células obtidos após 72hpfa foram analisados quanto à expressão gênica. Blastocistos em D8 foram fixados e posteriormente foram avaliados pela técnica de TUNEL o índice apoptótico. Os dados foram comparados por análise de variância e as médias por teste de Student Newman Keuls. A expressão gênica foi avaliada pelo software REST®. Os valores são mostrados como média±erro padrão. Embriões com 8 ou mais células produziram maiores (P<0,01) taxas de blastocistos no D7 e D8 do que os embriões com menos de oitos células mostrando seu maior potencial de desenvolvimento, independentemente se foram partenogenéticos ou fecundados. Embriões do grupo Part&#8805;8 apresentaram maior (P<0,05) taxa de blastocistos no D7 (63,6±3,4%) que os FIV&#8805;8 (45,3±8,9%), porém a taxa no D8 foi semelhante (56,7±3,0% e 44,2±8,9% para Part&#8805;8 e FIV&#8805;8, respectivamente; (P<0,05). Não houve diferença (P<0,05) quanto às taxas de blastocistos no D7 e D8 entre embriões com menos de 8 células oriundos da partenogênese ou fecundação. Não houve diferença quanto ao número total de células (92,0±3,4; 102,30±4,8), células apoptóticas (10,8±1,22; 9,5±1,07) e índice apoptótico (11,4±1,27; 9,8±1,8) nos blastocistos partenogenéticos e FIV, respectivamente. Nos embriões com 8 células analisados, houve subexpressão dos genes DNAJB1, HSPA1L, HSF1, GLUT1 nos Part em relação aos FIV, enquanto o HSF2 esteve sobrexpresso nos Part quando comparado aos FIV. Conclui-se que embriões partenogenéticos bovinos possuem diferenças se comparados aos embriões fecundados in vitro quanto à capacidade de desenvolvimento pré-implantacional in vitro e expressão gênica, o que pode limitar o uso da partenogênese em estudos sobre desenvolvimento embrionário.

Orientador: Paulo César Corrêa Borges / Banca: Edihermes Marques Coelho / Banca: Rui Geraldo Camargo Viana / Resumo: O presente trabalho demonstra as implicações penais que podem surgir do resultado das pesquisas relativas à manipulação genética de embrião humano. Sabe-se que a evolução científica no campo da engenharia genética e técnicas de reprodução humana assistida tem sido responsável por grandes avanços na área da saúde. Entretanto, com o dinamismo em que estão sendo adquiridos tais conhecimentos, surgem necessidade de serem fixados limites e responsabilidades. Neste trabalho, é abordada a temática específica da manipulação genética de embriões humanos, estabelecendo sua correlação com os valores éticos, morais e jurídico-penais. É dada ênfase à necessidade de uma tutela penal acerca do tema, bem como às diversas técnicas de manipulação de embrião humano que podem lesar o patrimônio genético e atentar contra a vida. São desenvolvidas as teorias de maior relevância que tentam definir o momento de inicio da vida, bem como a compatibilização entre os interesses de desenvolvimento tecnológico e a indispensável proteção do ser humano. Na busca da legislação adequada, capaz de incentivar as pesquisas e, ao mesmo tempo, impedir abusos, são analisadas as lacunas existentes no ordenamento jurídico-penal no que tange à proteção do embrião, bem com demonstra-se a urgente necessidade da legislação que seja efetiva na proteção do direito à vida e a intangibilidade e inalterabilidade do patrimônio genético, apontando possíveis caminhos para a devida tipificação e responsabilização jurídico-penal dos desvios / Abstract: This article discusses the criminal implications that may arise from the results of research on the genetic manipulation of the human embryo. It is known that the scientific developments in the field of genetic engineering and assisted reproduction techniques has been responsible for major breakthroughs in healthcare. However, the dynamism that is being acquired such knowledge arise needs to be fixed boundaries and responsibilities. In this paper, we addressed the specific theme of genetic manipulation of human embryos, establishing its correlation with the ethical, moral, legal and criminal. It is intended to emphasize the need for a criminal oversight on the subject as well as the various techniques for manipulating human embryo that can damage the genetic heritage and attacking the living. It will highlight the most relevant theories that attempt to define the moment of the beginning of life as well as the challenge of achieving compatibility between the interests of technological development and the necessary protection of the human being. In search of appropriate legislation, able to encourage research and at the same time prevent abuse, we intend to analyze the gaps in the legal - criminal in regard to the protection of the embryo, as well as demonstrate the urgent need for legislation that is effective in protecting the right to life and to inviolability and inviolability of genetic heritage, pointing possible paths for proper classification and criminal legal accountability of deviations / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Flávia Lombardi Lopes / Coorientador: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Felipe Perecin / Resumo: O excessivo acúmulo lipídico que acontece ao longo da produção in vitro de embriões (PIVE) tem sido apontado como prejudicial à criopreservação. Como o soro fetal bovino (SFB) é um dos fatores que provoca maior impacto neste acúmulo, e pelo mesmo ser de composição indefinida, procura-se substituí-lo nos meios de cultivo. Entre os possíveis substitutos, está o composto semi-definido, livre de ácidos graxos, a albumina sérica bovina (BSA). O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da BSA e/ou SFB na MIV sobre o acúmulo lipídico nos oócitos e embriões bovinos, e para isso, cinco experimentos foram realizados. No primeiro experimento, demostrou-se que o meio contendo SFB possui dezoito vezes mais lipídeos que o meio contendo apenas BSA como fonte proteica. No segundo experimento, confirmou-se que, ao contrário da maturação in vivo, a maturação in vitro (MIV) provoca acúmulo lipídico, sendo este acúmulo mais acentuado no grupo suplementado exclusivamente com SFB, comparado ao grupo suplementado com BSA, sem observar-se diferença nos tamanhos das gotas oocitárias entre os grupos. Oócitos maturados na presença do SFB apresentaram melhores taxas de maturação nuclear e citoplasmática, porém, mostraram diferenças com relação à quantidade e migração de lipídeos e mitocôndrias em comparação àqueles obtidos após maturação in vivo. Nos experimentos III e IV, observou-se que, além de não levar a uma esperada diminuição da quantidade de lipídeos nos blastocistos produzidos, a BSA na MIV levou a menores taxas de desenvolvimento embrionário. Sobre o tamanho das gotas embrionárias, constatou-se que a MIV suplementada com SFB provoca maior porcentagem de gotas entre 2 a 6 μm de diâmetro comparada a MIV suplementada por ambas as substancias. Além do mais, percebeu-se um aumento do tamanho das gotas ao longo da PIVE independente da suplementação ... / Abstract: The excessive lipid accumulation that occurs during in vitro production of embryos (IVPE) has been described as harmful to cryopreservation. Because fetal bovine serum (FBS) is one of the factors that cause the greatest impact in this accumulation, and because it is an undefined medium supplement, current research is aimed at replacing this supplement in culture media. Among the possible substitutes, there is a semi defined compound, fatty acid free bovine serum albumin (BSA). The present study aimed to evaluate the influence of BSA and/or FBS during IVM on lipid accumulation in oocytes and embryos, and for that, five experiments were performed. The first experiment demonstrated that the medium containing FBS has eighteen times more lipids than the medium containing only BSA as a protein source. In the second experiment, it was confirmed that, unlike in vivo maturation, in vitro maturation (IVM) causes a lipid accumulation, which is more pronounced in the group supplemented only with FBS, compared with BSA group, without showing difference in oocytes droplets sizes between groups. Oocytes matured in the presence of FBS showed better rates of nuclear and cytoplasmic maturation, however, they also showed differences relative to the amount and migration of lipids and mitochondrias in comparison to those obtained after in vivo maturation. In the experiments III and IV, it was observed that the expected decrease in the amount of lipids produced in blastocysts, supplemented solely with BSA, did not take place, and the use of BSA alone in IVM led to lower rates of embryo development. Furthermore, for embryos lipid droplets sizes, a higher percentage of droplets between 2-6μm was observed in IVM supplemented with FBS compared to supplemented with both substances.The last experiment determined the expression of genes involved in lipid synthesis, DGAT2 and PLIN2. Increased expression of PLIN2 and ... / Mestre

A indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO) é uma enzima, produzida pelas células trofoblásticas e, por sua capacidade de catabolizar o triptofano, inibe a proliferação das células T maternas, participando desta forma como importante mecanismo da tolerância materno-fetal. Contudo, pouco se sabe se a ação da IDO é influenciada por outras substâncias presentes no micro-ambiente uterino e, por esta razão, formulou-se a hipótese de que esta enzima poderia ter sua ação alterada nesse contexto e, desta forma, avaliou-se o comportamento da expressão da IDO frente à adição de alguns desses componentes presentes no útero gestante. Neste trabalho, células uterinas, de placentas e de embriões de ratas e camundongos fêmeas prenhes e não prenhes foram mantidas em cultivo e a elas adicionadas estradiol, progesterona, interferon , triptofano e 1-metil-D- triptofano, avaliando-se a expressão da IDO pela técnica de citometria de fluxo nos períodos de 4, 24 e 48 horas. Os resultados demonstraram que as diferenças mais significativas na expressão da IDO entre as ratas prenhes e não prenhes, foram observadas após a adição de progesterona (19,24%), interferon (11.22%) e triptofano (23,53%), nas ratas prenhes. Já nos camundongos fêmeas prenhes e não prenhes, as maiores expressões de IDO foram observadas no primeiro grupo pela adição de progesterona (11,33%), estradiol (9,98%) e interferon (21,78%). Considerando esses resultados, podemos concluir que a expressão da IDO pelas células uterinas, placentárias e embrionárias em cultivo sofre influência dos fatores testados, o que permite novas hipóteses para melhor compreensão da participação dessa enzima na tolerância materno-fetal, particularmente em relação a sua interação com hormônios e citocinas presentes no útero gestante. Além disso, poderá colaborar na elaboração de possíveis tratamentos de enfermidades, relacionadas à manutenção e sucesso da gestação onde haja envolvimento do sistema imunológico materno e dos mecanismos de tolerância. / Indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) is an enzyme produced by trophoblast cells and due to its ability to catabolize tryptophan, inhibits the proliferation of maternal T cells, thus playing an important role as one of the mechanisms of maternal-fetal tolerance. However, little is known whether the action of IDO is influenced by substances present in the pregnant uterine microenvironment. This study evaluated the behavior of the IDO expression in cultured placental and embryonic cells from mice and rats in face of the addition of estradiol, progesterone, interferon, tryptophan and 1-methyl-D-tryptophan, by flow cytometry, at 4, 24 and 48 hours periods. The results showed that high expressions of IDO were observed in pregnant rats cells after the addition of progesterone (19.24%), interferon (11.22%) and tryptophan (23.53%). In mice, high expressions of IDO were observed in the pregnant group cells by the addition of progesterone (11.33%), estradiol (9.98%) and interferon- (21.78%). Considering these results, we may conclude that the expression of IDO by cultured placental and embryonic cells from mice and Wistar rats is indeed influenced by factors present in pregnant uterus, which provides additional information to better understand IDO role in the maternal-fetal tolerance, particularly on its interactions with reproductive hormones and cytokines. Additionally, it may contribute to the establishment of possible treatments for pregnancy-losses related to the maternal immune system response and mechanisms of tolerance.

Esse estudo está apresentado em Capítulo 1 (Protocolo de Superovulação com IATF em Bos taurus) e Capítulo 2 [Protocolos de superovulação com IATF em Bos indicus, com 3 experimentos; 1- Momento da administração de LH em vacas Nelore (Bos indicus) superovuladas e inseminadas em tempo fixo; 2- Efeito da administração de progesterona injetável no início do protocolo de sincronização para superovulação com IATF em vacas Nelore; 3- Efeito do número de inseminações em vacas Nelore superovuladas e inseminadas em tempo fixo]. No Capítulo 1 objetivou-se avaliar o momento da retirada do dispositivo de P4 (DIB®) e da administração de LH em vacas Holandesas. Dezesseis vacas receberam DIB (D-1) e 2mg de BE (D0). Superovulou-se com 200mg de FSHp em 8 doses decrescentes a partir do D4. No D6, administrou-se PGF e estabeleceram-se quatro grupos: P24LH48 (retirada do DIB 24h e LH 48h pós PGF); P24LH60 (retirada 24h e LH 60h); P36LH48 (retirada 36h e LH 48h) e P36LH60 (retirada 36h e LH 60h; fatorial 2x2; cross-over). Realizou-se a IATF 12 e 24h pós LH. Os efeitos principais para P24vsP36 e LH48vsLH60 foram: taxa de ovulação (TO; 49,9 &plusmn; 5,7 vs 60,9&plusmn; 4,8% e 53,1&plusmn;5,3 vs 57,5&plusmn;5,4%; P>0,05), estruturas totais (ETot; 4,4&plusmn;0,9 vs 5,0&plusmn;0,9 e 3,8&plusmn;0,7 vs 5,7&plusmn;1,0; P>0,05), embriões transferíveis (ET; 3,0&plusmn;0,7 vs 4,1&plusmn;0,9 e 2,3&plusmn;0,5a vs 4,9&plusmn;0,9b; P<0,05) e embriões congeláveis (EC; 2,9&plusmn;0,7 vs 3,8&plusmn;0,8 e 2,1&plusmn;0,5a vs 4,7&plusmn;0,9b; P<0,05). O LH 60h pós PGF aumentou o número de ET e EC em Holandesas. No Capítulo 2, estudaram-se diferentes protocolos de superovulação com IATF em Nelore. No Experimento 1, vinte vacas foram superovuladas (P24) e tratadas com LH 48h (G-LH48) ou 60h (G-LH60) pós PGF (cross-over). Não houve diferença (P>0,05) para: número de folículos >8mm no LH (FolLH; 12,5±1,5 vs 9,4±1,0) e TO (71,0±4,2 vs 64,6±4,0%). No entanto, verificou-se diferença (P<0,05) para: intervalo primeira/última ovulação (IntOV; 15,0±2,1a vs 21,0±1,7bh), ETot (7,5±1,0a vs 5,1±0,5b), ET (6,2±1,0a vs 3,1±0,5b) e EC (5,9±0,9a vs 2,5±0,5b). O LH 48h pós PGF apresentou maior eficiência em Nelore. No Experimento 2, dez vacas receberam o protocolo P36LH48 e foram divididas em dois grupos no D0: Grupo BE (2mg) + P4 (50mg; G-BE+P4) ou Grupo BE (2mg; G-BE; cross-over). Os resultados para o G-BE+P4 e G-BE foram: emergência da onda folicular (EM; 3,6&plusmn;0,2 e 4,0&plusmn;0,1 d; P>0,05), variação da EM (2,5 a 4,5 vs 3,5 a 4,5d; P=0,06), FolLH (16,2&plusmn;1,4 vs 18,5&plusmn;1,1; P>0,05), IntOV (32,4&plusmn;1,8 vs 33,6&plusmn;1,6h; P>0,05), ETot (7,7&plusmn;0,8 vs 9,2&plusmn;1,2; P>0,05), ET (6,2±0.6 vs 7,2±1,1; P>0,05), EC (5,1&plusmn;0,7 vs 6,3&plusmn;1,0; P>0,05) e ED (0,6&plusmn;0,2 vs 0,8&plusmn;0,2; P>0,05). Não houve efeito da P4 i.m no D0. No Experimento 3, dez vacas foram divididas em: G-1IATF (16h pós LH) e G-2IATF (12 e 24h pós LH; cross-over). Os efeitos dos tratamentos G-1IATF e G-2IATF foram: FolLH (16,2&plusmn;1,4 vs 14,8&plusmn;1,2; P>0,05), ETot (8,2±0,9 vs 7,2±0,8; P>0,05), ET (4,3±0,7 vs 4,2±0,6; P>0,05), EC (2,9±0,6 vs 2,8±0,4; P>0,05) e estruturas não fertilizadas (0,6±0,2 vs 0,8±0,2; P>0,05). Não houve diferença na produção de embriões quando do emprego de uma ou duas IATFs. / This study is presented in Chapter 1 (Superovulations protocols with FTAI for Bos taurus) and Chapter 2 (Superovulation protocols with FTAI for Bos indicus), in this Chapter are included three experiments [1 - Moment of the application of LH in cows Nelore (Bos indicus); 2 - Effect of the injectable progesterone administration in the day 0 in Nelore cows; 3 - Effect of the number of inseminations in superstimulated and fixed-time inseminated Nelore cows]. On Chapter 1, it went to evaluate the time of intravaginal P4 device (DIBTM) withdrawal and the application of LH in Holstein cows superstimulated with FTAI. Sixteen cows, treated with DIB (D-1) and 2mg of EB (D0) were assigned in four groups (superstimulation with 200mg of FSHp in 8 decreasing doses starting on D4). On D6, PGF was administered and the cows were accomplished in four groups: P24LH48; P24LH60; P36LH48 and P36LH60 (cross-over). The FTAIs were performed 12 and 24h after LH. The main effects for treatments P24 vs P36 and LH48vsLH60 were: ovulation rate (OR; 49.9&plusmn;5.7 vs 60.9&plusmn;4.8% and 53.1&plusmn;5.3 vs 57.5&plusmn;5.4%; P>0.05), total of structures (TS; 4.4&plusmn;0.9 vs 5.0&plusmn;0.9 and 3.8&plusmn;0.7 vs 5.7&plusmn;1.0; P>0.05), transferable embryos (TE; 3.0&plusmn;0.7 vs 4.1&plusmn;0.9 and 2.3&plusmn;0.5a vs 4.9&plusmn;0.9b; P<0.05) and suitable to freezing embryos (FE; 2.9&plusmn;0.7 vs 3.8&plusmn;0.8 and 2.1&plusmn;0.5a vs 4.7&plusmn;0.9b; P<0.05). The LH 60h after prostaglandin increased the TE and FE in Holstein cows. In the Chapter 2, it was studied different superstimulation with FTAI protocols in Nelore. In the first Experiment cows (n=20) were superovulated and treated with LH 48h (G-LH48) or 60h (G-LH60) after prostaglandin. There were no significant (P>0.05) differences in the variables between LH48 and LH60: number of follicles >8mm at the time of LH (FolLH12.5±1.5 and 9.4±1.0), OR [169/249 (71.0±4.2 %) and 120/187 (64.6±4.0%)]. However, there were differences (P<0.05) between G-LH48 and G-LH60 in the variables: interval first/last ovulation (IntOV15.0±2.1a and 21.0±1.7b), TS (7.5±1.0a and 5.1±0.5b), TE (6.2±1.0a and 3.1±0.5b), and FE (5.9±0.9a and 2.5±0.5b). The LH 48h after prostaglandin was more efficient in Nelore cows. In second experiment, ten Nelore cows were divided in two groups (D0): EB plus injectable progesterone group (G-BE+P4); or EB group (G-BE). The results for G-BE+P4 and G-BE were: follicular wave emergency in days (FE; 3.6&plusmn;0.2 and 4.0&plusmn;0.1; P>0.05), variation in FE [(2.5 to 4.5) and (3.5 to 4.5)], IntOV (32.4&plusmn;1.8 and 33.6&plusmn;1.6; P>0.05), TS (7.7&plusmn;0.8 and 9.2&plusmn;1.2; P>0.05), degenerated embryos (0.6&plusmn;0.2 and 0.8&plusmn;0.2; P>0.05), TE (6.2±0.6 e 7.2±1.1; P>0.05), and FE (5.1&plusmn;0.7 and 6.3&plusmn;1.0; P>0.05). The third Experiment, ten Nelore cows were divided in two groups: G-1IATF (16h after LH) or G-2IATF (12 and 24h after LH). The results for G-1IATF and G-2IATF were: FolLH (16.2&plusmn;1.4 and 14.8&plusmn;1.2; P>0.05), TS (8.2±0.9 and 7.2±0.8; P>0.05), TE (4.3±0.7 and 4.2±0.6; P>0.05), FE (2.9±0.6 and 2.8±0.4; P>0.05) and unfertilized structures (0.6&plusmn;0.2 and 0.8&plusmn;0.2; P>0.05). There was no difference on embryo production when the cows were inseminated one (16h) or two (12 and 24h) inseminations.