Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-10Bitstream added on 2014-06-13T18:59:47Z : No. of bitstreams: 1 bueno_a_me_botfm.pdf: 693767 bytes, checksum: 41a33fd1c28d4062c5457b2ea2de4450 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / In vitro studies suggest that maternal hyperglycemia insult impairs the early embryogenesis in the preimplantation period. In this paper, we show that streptozotocin given at birth day of life or in adulthood of rats caused hyperglycemic state. Regardless of hyperglycemic intensities (mild or severe diabetes), the embryos of these dams presented development retardation and decreased development competence. Apoptosis was detected using terminal dUTP nick end labeling (TUNEL) assays, and the morulas from mild and severe diabetic rats have a higher incidence of apoptotic cells than control embryos. Tumor necrosis factor-alpha, a cytokine whose synthesis is up-regulated in the diabetic uterus, did not alter the incidence of TUNEL-positive nuclei. The glycemic intensity is related with the increased in the apoptosis indexes in morulas. On the other hand, dams with hyperglycemia, regardless of the glycemic intensity and of the tumor necrosis factor-alpha level presented preimplantation embryos with development retardation and increase of non-viable preimplantation embryos, suggesting that the presence of the hyperglycemia leads to a decreased competence development of preimplantation embryos

O embrião equino apresenta um desenvolvimento dinâmico por um longo período entre a fertilização, sua entrada no útero, fixação e posterior invasão trofoblástica após o 36º dia da gestação. Durante todo este período o concepto é sustentado pelo histotrofo endometrial. Estas características dos equídeos favorecem o seu uso com modelo experimental in vivo para estudos nos desenvolvimentos e interações fetal e maternal. Os estudos em endométrio equino tiveram foco em eventos fisiológicos nas diferentes fases do ciclo estral, enquanto os estudos aos primeiros momentos da gestação são escassos. O entendimento do processo de remodelação e morfofisiologia do endométrio após a entrada do embrião no útero não é completamente entendido. O objetivo deste trabalho foi estudar a morfofisiologia endometrial da gestação na égua envolvendo os períodos pós-fixação e peri-implantação, por histologia e microscopia eletrônica de varredura. A característica mais marcante da transformação ou adaptação endometrial à gestação foi o quase total desaparecimento das células ciliadas na superfície epitelial em ambos cornos uterinos. A capacidade de secreção das células microvilosas também passou por mudanças com o avanço gestacional. Muitas células secretórias ingurgitadas e protusas formam a maioria da população do epitélio, onde o histotrofo se acumula, e apresentaram erosões em sua superfície, provavelmente pela secreção apócrina de vesículas. A superfície epitelial apresentou pleomorfismo celular e pseudoestratificação, promovida por intensa hiperplasia celular, acompanhada de adensamento das glândulas endometriais, desde o 21º dia da gestação diminuído após o 36º dia. Linfócitos, provavelmente uNK, foram encontrados no epitélio luminal do endométrio já aos 21 dias de gestação em ambos cornos, gravídico e não gravídico. Foi evidenciado o septamento no epitélio luminal, com sulcos formados aos 35 e 36 dias, tornando-se mais profundos aos 42 dias de gestação. Toda esta evolução e adaptação contínua aconteceram principalmente no corno gravídico acompanhados em menor intensidade pelo corno não gravídico. / The equine embryo plays a dynamic development for a long period between fertilization, its entry into the uterus, fixes and subsequent trophoblastic invasion after day 36 of gestation. Throughout this period, the conceptus is supported by endometrial histotrophe. These equids characteristics favor their use as an in vivo experimental model for studying the changes and interactions in fetal and maternal development. Studies in equine endometrium were focused on physiological events in the different phases of the estrous cycle, while studies in early moments of pregnancy are scant. The process of endometrial remodeling and morphophysiology after the maternal recognition of pregnancy is not completely understood. The objective of this work was to study the endometrial morphophysiology in the mare comprising post-fixation and peri-implantation periods, by histology and scanning electron microscopy. The most striking feature of endometrial transformation or adaptation to pregnancy was the almost total ciliated cells disappearance of the epithelial surface in both uterine horns. In addition, the secretory capacity of microvillus cells underwent changes with gestational age. Many engorged and protruded secretory cells were the majority epithelium population where histotroph accumulates, and showed erosions on its surface, probably by apocrine vesicle secretion. The epithelial surface also showed cellular pleomorphic and pseudostratified epithelium as a result of intense cell hyperplasia. It was accompanied by thickening of the endometrial glands from day 21 of gestation, then decreasing after the 36th day. Lymphocytes, probably uNK, were found in the luminal epithelium of the endometrium since 21st day of gestation in both pregnant and not pregnant horns. Septation was evidenced in the luminal epithelium, with sulci formed at 35 days, becoming deeper at 42 days of pregnancy. All this continued evolution and adaptation occurred mainly in the gravid horn accompanied in less intensity by non-gravid horn.

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Felipe Perecin / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Resumo: O presente estudo teve como objetivos avaliar os efeitos de estimuladores da lipólise (Forskolin: Forsk) e inibidores da lipogênese (Ácido Linoléico: LA) durante o cultivo in vitro (CIV) sobre o acúmulo de lipídios intracitoplasmáticos e criotolerância do embrião bovino, bem como avaliar o efeito do tratamento dos embriões com Forsk sobre a taxa de concepção após transferência para receptoras. Oócitos (n=1242) foram maturados in vitro (MIV) durante 22h a 38,5°C e 5% de CO2 em ar em meio TCM-199 bicarbonato com 10% SFB e hormônios. Após fecundação, os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOF (grupo Controle) suplementado com: 100 μM LA durante todo o período do CIV (grupo LA); ou 5 μM Forsk a partir do dia 6 do CIV (grupo Forsk); ou com associação de LA e Forsk, como acima descrito (grupo LA+Forsk). O CIV foi conduzido a 38,5°C e 5% de CO2 em ar, por 7 dias. O desenvolvimento embrionário foi avaliado no dia 7 do CIV (D7), quando os blastocistos foram corados com Sudan Black B 1% para determinação do conteúdo lipídico intracitoplasmático. Os embriões foram avaliados em microscopia de luz e as imagens obtidas foram analisadas por Q-Capture Pro Image Software. O grupo Controle foi escolhido como calibrador e a média de cada grupo foi dividida pela média do calibrador para calcular a intensidade relativa de pixels, expressa em unidades arbitrárias. Os blastocistos expandidos foram vitrificados (Vitri Ingá®), aquecidos e cultivados por 24h em SOF para determinação das taxas d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the present study was to evaluate the effects of supplementation of in vitro culture (IVC) medium with drugs that stimulates the lipolysis (Forskolin: Forsk) and inhibit the lipogenesis (Linoleic Acid LA) on the intracytoplasmic lipid content and cryotolerance of bovine embryos, as well as to evaluate the effect of treatment of embryos with Forsk on the pregnancy rates after transfer to synchronized recipients. Oocytes (n=1242) were matured in vitro for 22h at 38.5°C and 5% CO2 in air in medium TCM199 with 10% FCS and hormones. After fertilization, presumptive zygotes were cultured in SOF medium (Control group) supplemented with: 100 μM LA throughout the culture period (LA group); or 5 μM Forsk from the 6th day to the end of the culture (Forsk group); or with the association of LA and Forsk, as described above (LA+Forsk group). The IVC was conducted at 38.5°C and 5% CO2 in air, for 7 days. Embryonic development was assessed on day 7 of culture (D7), when blastocysts were stained with 1% Sudan Black B to determine the intracytoplasmic lipid content. The embryos were evaluated by light microscopy and the images were analyzed by Q-Capture Pro Image software. The Control group was chosen as a calibrator and the measured value of each treatment was divided by the mean of the calibrator to generate the relative expression levels of pixels, expressed in arbitrary units. The expanded blastocysts were vitrified (Vitri Ingá®), warmed and cultured for 24h in SOF to eval... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Patologias causadas por mutações no DNA mitocondrial (mtDNA) constituem um importante grupo de doenças genéticas em humanos. Todavia, devido ao desconhecimento dos mecanismos que governam a herança mitocondrial, não existem métodos eficientes que permitam prever ou intervir na herança destas patologias. Estudos recentes indicam que mutações no mtDNA são seletivamente eliminadas na linhagem germinativa. O presente projeto investigou se o embrião é capaz de eliminar mitocôndrias disfuncionais durante o desenvolvimento pré-implantação. Para tanto, zigotos de camundongo foram tratados com clorometil-X-rosamina (MitoTracker Red CMXRos) e fotossensibilizados por 0, 2,5, 5, 10, 20 e 60 s. Houve diminuição da taxa de blastocisto, com bloqueio total do desenvolvimento quando a fotossensibilização foi realizada por período igual ou superior a 20 s. A fotossensibilização também resultou em disfunção mitocondrial, como indicado por diminuição do potencial de membrana mitocondrial. No entanto, a transferência de citoplasma de zigotos NZB/BINJ (NZB) fotossensibilizados por 20 s não afetou o desenvolvimento de embriões C57BL/6 (B6). A quantidade de mtDNA NZB também não diferiu entre os zigotos B6, independente de terem recebido citoplasma exposto ou não à fotossensibilização (30,6% ± 1,73 vs. 30,8% ± 1,73). Porém, a quantidade de mtDNA NZB foi menor (P = 0,008) nos blastocistos que receberam citoplasma fotossensibilizado (31,4% ± 1,43 vs. 24,7% ± 1,43). Como a quantidade total de mtDNA não diferiu entre os grupos, estes resultados sugerem que as mitocôndrias disfuncionais introduzidas foram destruídas. A análise de autofagossomos indicou, no entanto, que as mitocôndrias NZB não foram eliminadas por mitofagia. Diferente do esperado, o cultivo na presença de rapamicina reverteu o efeito causado pela introdução de citoplasma fotossensibilizado, resultando em níveis semelhantes de mtDNA NZB em comparação com os blastocistos que receberam citoplasma não fotossensibilizado. Concluiu-se que o embrião de camundongo é capaz de destruir mitocôndrias disfuncionais durante o desenvolvimento à blastocisto. Novos estudos deverão fornecer evidências adicionais e esclarecer os mecanismos moleculares que fundamentam esses achados. / Pathologies caused by mutations in mitochondrial DNA (mtDNA) represent an important group of genetic diseases in humans. Nonetheless, due to our limited understanding of the molecular mechanisms of mitochondrial inheritance there are no efficient methods to predict or intervene in the inheritance of these diseases. Recent studies indicate that mutations in mtDNA are selectively eliminated in the germline. This project investigated the ability of the embryo to target and eliminate dysfunctional mitochondria during early development. To test that, mouse zygotes were treated with chloromethyl-X-rosamina (MitoTracker Red CMXRos) and photosensitized for 0, 2.5, 5, 10, 20 and 60 s. There was a decrease in the rate of blastocyst development and a developmental arrest when the photosensitization was performed for a period equal to or greater than 20 s. Photosensitization also resulted in mitochondrial dysfunction, as indicated by a decreased of mitochondrial membrane potential. However, cytoplasmic transfer from NZB/BINJ (NZB) zygotes photosensitized for 20 s resulted in no effect on development of C57BL/6 (B6) embryos. The amount of NZB mtDNA introduced also did not differ between B6 zygotes, regardless of whether they received or not photosensitized cytoplasm (30.6% ± 1.73 vs. 30.8 ± 1.73%). On the other hand, the amount of NZB mtDNA was lower (P = 0.008) in the blastocysts receiving photosensitized cytoplasm (31.4% ± 24.7% ± 1.43 vs. 1.43). Since the total amount of mtDNA was not different between the groups, these results suggest that dysfunctional mitochondria introduced by cytoplasmic transfer were destroyed. Analysis of autophagosomes indicated, however, that the NZB mitochondria were not eliminated by mitophagy. Different than expected, culture in the presence of rapamycin reversed the effect caused by introduction of photosensitized cytoplasm, resulting in similar levels of NZB mtDNA compared to blastocysts receiving cytoplasm not photosensitized. It was concluded that the mouse embryo may destroy dysfunctional mitochondria during development into blastocysts. Further studies should provide additional evidence and elucidate the molecular mechanisms underlying these findings.

O período embrionário apresenta maior susceptibilidade a teratógenos, sendo a fase que as primitivas camadas germinativas e rudimento dos órgãos são formados. Cada órgão tem uma fase crítica de desenvolvimento e os processos bioquímicos envolvidos no crescimento e diferenciação tem uma seqüência ordenada, controlada por vários genes. A ossificação endocondral tem inicio sobre um molde de cartilagem hialina, com formato semelhante ao osso que irá se originar, sendo o principal responsável pela formação dos ossos curtos e longos. Assim, julgamos ser de grande valia um estudo embasado no desenvolvimento normal dos membros de embriões e fetos bovinos provenientes de vacas criadas em ambiente natural, através de estudos em microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. No processo de formação, desenvolvimento e ossificação dos membros observamos a formação de tecido mesenquimal condensado em embriões por volta da quarta semana gestacional, passando pelo processo de diferenciação em células cartilaginosas. Ao redor da sétima semana gestacional inicia-se o processo de calcificação da cartilagem com depósitos de cálcio e fósforo para formação de tecido ósseo, seguido de morte dos condrócitos. / The embryonary period presents a bigger susceptibility to theratogens, being the phase in which the primitive germinative layers and rudiment of organs are been formed. Each organ has a critical phase of development and the biochemical processes involved in growing and differentiation have an ordered sequence, controlled by several genes. The endochondrial ossification has begun over a hyaline cartilage mould, having a shape similar to the bone that will be grow, being the principal responsible for the short and long bones formation. Thus, we think it is much valid a study based on normal development of bovine embryos and fetuses\' limbs coming from cows bred in a natural environment, through studies in light microscopy and transmission electronic microscopy. In the process of formation, development and ossification of limbs, we saw condensed mesenchymal tissue formation in the embryos at around the gestational fourth week, passing through differentiation process in cartilaginous cells. At around the gestational seventh week, it has begun the calcification process of cartilage with calcium and phosphorous deposits to the bone tissue formation, followed by chondrocites death.

Os objetivos desse trabalho foram avaliar in vitro a sensibilidade de zigotos murinos à Brucella abortus, assim como a eficácia das lavagens seqüenciais e do tratamento com tripsina, padronizados pela International Embryo Transfer Society, na sua remoção e/ou inativação, a fim de estabelecer um modelo acessível para o estudo de interações embriões-patógenos. Para a coleta dos zigotos, foram utilizados camundongos fêmeas (Swiss Webster), púberes, nulíparas, 6-8 semanas de idade, acasaladas com machos inteiros da mesma linhagem, após superestimulação ovariana. Para a infecção foi utilizada a bactéria B.abortus 1119.3. A suspensão de bactérias foi preparada no momento da inoculação, na diluição de 106 bactérias/ml. Os zigotos obtidos foram separados em controle e infectados. A infecção dos zigotos foi feita com 30&micro;l da suspensão de bactérias, e após 24h e 96h foram analisados quanto à morfologia e taxa de clivagem. Os procedimentos de lavagem seqüencial e tratamento com tripsina foram realizados após 24h. Para detecção da bactéria após os procedimentos de lavagem, as amostras foram inoculadas em cultura de bactérias e submetidas ao teste de reação em cadeia pela polimerase (PCR). Uma amostra da última gota de lavagem de cada grupo também foi testada. Para analise estatística dos resultados foi utilizado o teste do &chi;2. No grupo controle não foram verificadas alterações morfológicas, já no infectado foi possível verificar a presença de blastômeros irregulares, falha de divisão, citoplasma com granulação e aspecto degenerativo. As taxas de clivagem obtidas foram de 77,4% (controle) e 59,2% (infectados) (&chi;2 de 0,001674; p<0,05) após 24h e após 96h de infecção 14,5% (controle) e 7% (infectados) (&chi;2 de 0,141616; p<0,05). Não foi possível isolar B.abortus em cultura após os procedimentos de lavagem para ambos os grupos. As amostras do grupo controle apresentaram-se negativas na PCR. Já no grupo infectado foram obtidos resultados positivos e negativos, para os embriões e para a alíquota da última gota de lavagem dos grupos tratados com a lavagem seqüencial. Foi verificada apenas em uma amostra a presença de embriões positivos para a B.abortus com amostra da última gota de lavagem negativa. Para outras duas amostras os embriões apresentaram-se livres de B.abortus, mas foram detectadas na alíquota da última gota de lavagem. Apenas em uma amostra foram obtidos resultados negativos tanto para os embriões, quanto para o meio de lavagem. Os resultados da PCR para os grupos infectados tratados com tripsina foram positivos para praticamente todas as amostras, contendo embriões ou apenas da alíquota da última gota de lavagem, com exceção dos embriões de uma amostra que apresentaram-se negativos. As novas tecnologias desenvolvidas em reprodução animal promovem manipulação invasiva do embrião. Portanto, tratamentos preconizados para a remoção de patógenos podem não ser eficazes. O risco a ser considerado é da presença de patógenos associados à zona pelúcida ou nas proximidades, que possam ser introduzidos, ou ter sua entrada facilitada no embrião. Considerando os dados apresentados, torna-se clara a importância do desenvolvimento de um modelo animal para estudos de interações embriões- patógenos, a fim de se evitar a transmissão e disseminação de doenças. / The aim of this study was evaluate in vitro mouse zygotes sensitivity to Brucella abortus, such as the embryo washing procedure and trypsin treatment, recommended by the International Embryo Transfer Society, efficacy in its removal and/or inactivation, with the purpose of established an accessible model for embryo- pathogen interaction studies. The female mice (Balb C) aging 6 to 8 weeks were superovulated and matted with fertile males of the same strain, then the zygote retrieval was performed. The bacterial suspension was prepared in the moment of inoculation and the dilution was 106 brucellas/ml. The zygotes were divided in control and infected groups (30&micro;l of the bacterial suspension); after 24h and 96h their morphology and viability were analised. The zygotes of each group were washed sequentially or treated with trypsin after 24h exposition. To verify the presence of B. abortus pos-washing the zygotes and a sample of the last wash drop of each group were tested on bacterial culture system and polimerase chain reaction (PCR). The statistical analyses was performed with the &chi;2 test. Morphological changes were not observed at the control group, but the infected one presented irregular blastomeres, clivage defective, granular cytoplasm with degenerative like morphology. The clivage rates were 77,4% (control) and 59,2% (infected) (&chi;2 de 0,001674; p<0,05) after 24h and after 96h 14,5% (control) e 7% (infected) (&chi;2 de 0,141616; p<0,05). Our results showed that the bacterial culture presented negative growing for all groups tested. The control group presented only negative results on PCR analyses. The infected group presented positive and negative results on PCR, for embryos or last wash drop sample, submitted to the sequential washing procedure. Positive embryos were found in just one sample with the last wash drop negative. To two other samples embryos presented negative PCR results but positive at the last wash drop. Negative results for embryos and last wash drop was found in just one sample. The PCR results for the groups treated with trypsin were almost all positives, for embryos or last wash drop samples, except one embryo sample that presented negative. The recent developed reproductive technologies promote excessive manipulation of the embryo. Therefore, preexistent procedures for microorganisms\' removal could not be efficient. The preeminent risk to be considered here is the potential or probability of the presence of pathogens associated with or in proximity to the zona pelúcida, which could be introduced, or facilitated its entrance on embryo. According to the data presented become clear the importance of develop a model for studies of embryo- pathogen interactions, with the aim of avoid disease transmission.

O presente estudo científico tem como objetivo descrever o desenvolvimento dos Sistemas Renais bovinos, durante o período embrionário. Para tanto, foram utilizados embriões coletados em frigoríficos da região, e após a coleta os mesmos foram fotografados e medidos utilizando-se o método Crow-Rump (CR). Para descrição morfológica foram colocados em solução de Bouin para microscopia de luz e em solução de Glutaraldeído 2,5% para microscopia eletrônica de transmissão. Nos embriões com idade gestacional aproximada de 14 a 15 dias, não observamos a presença do pronefro, entretanto encontramos o mesonefro e indícios morfológicos que indicam sua atividade funcional. O mesonefro apresenta no interior de suas células tubulares inúmeras mitocôndrias e interdigitações, indicando uma alta atividade de transporte iônico. Observamos que o metanefro, ou rim definitivo, inicia seu desenvolvimento em embriões apresentando idade gestacional aproximada de 23 e 24 dias. Nossos achados mostram que a involução do mesonefro acontece simultaneamente com a diferenciação metanefrogênica. Em idade gestacional entre 45 e 46 dias, já iniciando sua fase fetal, o metanefro possui as unidades filtradoras (néfrons), com seus respectivos glomérulos, túbulos contorcidos proximais e distais e alça de Henle. / The present scientific study it has as objective to describe the development of the bovine Renais Systems, during the embryonic period. For in such a way, embryos collected in freezers of the region had been used, and after the collection the same ones had been photographed and measured using the Crow-Rump method (CR). For morphologic description they had been placed in solution of Bouin for light microscopy and in solution of Glutaraldeide 2.5% for electronic microscopy of transmission. In the embryos with approached gestational age of 14 the 15 days, we do not observe the presence of pronephro, however we found mesonephro and morphologic indications that shows functional activity. Mesonephro presents in the interior of its tubular cells innumerable mitochondria and interdigitações, indicating one high activity of ionic transport. We observe that metanephro, or definitive kidney, initiates its development in embryos presenting approached gestational age of 23 and 24 days. Our findings show that the involution of mesonephro happens simultaneously with the metanephrogenic differentiation. In gestational age between 45 and 46 days, already initiating its fetal phase, metanephro possess the filter units (nephrons), with its respective glomeruli, proximal and distal twisted tubules and handle of Henle.

No intuito de descrever a evolução do desenvolvimento do concepto bubalino entre 10 e 60 dias de gestação, esse estudo utilizou a metodologia de mensuração por Crow rump para revelar a idade estimada de 96 embriões e fetos coletados no Matadouro municipal de Macapá, no estado do Amapá entre os anos de 2006 a 2008. Os parâmetros utilizados consistiram em medidas de comprimento (crânio caudal) e peso utilizando-se balança eletrônica de precisão. Para visualização macroscópica foram feitas fotografias, e a microscopia eletrônica de varredura auxiliou na identificação de inúmeras estruturas externas dos embriões. Foram realizados cortes histológicos de 5µm os quais foram corados em HE e picrosirius, e submetidos a técnicas de imunohistoquimica para detecção de Oct4, PCNA e vimentina. Nossos resultados revelam que embriões de mamíferos até a 5° semana de gestação são muito semelhantes aos de outras espécies de mamíferos já estudados. Similaridades entre bovinos e bubalinos persistem com exceção dos estágios fetais onde aparentemente búfalos se desenvolvem mais rapidamente que bovinos. Em conclusão, o estudo indica características importantes que podem ser utilizadas para verificar a viabilidade de embriões de búfalos e auxiliar avaliações em exames complementares como os de ultrassonografia, e também indicam a presença de importantes sítios de células pluripotentes em regiões diferentes do embrião dependendo do estágio de desenvolvimento em que o mesmo se encontra. / The aim of this study was to describe the developmental changes in the bubaline conceptus from 10-60 days of gestation using the Crown rump methodology to diagnostic the estimated age of those 96 embryos and fetuses obtained at Matadouro Municipal de Macapá, on Amapá state, from 2006 until 2008. Parameters used were cranio-caudal length (CR) and weight. For macroscopic view photographies were done, Scanning electron microscopy helps to identify inumerous external structures of the embryos. Histotogic section of 5µm were done and stained using Hematoxilin-Eosin, picrosirius, and also subjected to immunohistochemistry for Oct4, PCNA and vimentin were evaluated. Transmission electron microscopy was used in fetal membranes to describe it better. The obtained results revealed that mammal embryos until 5th weeks of gestation has to much similar characteristics to others studied species. Similarities between bovine and bubaline persist; except on fetal stages that buffalos seems develop faster than bovine ones. In conclusion, the overall data indicated the important characteristics that can be evaluated to verify the viability of buffalo embryos and help the evaluations of ultrasonographic exams, also identify the presence of important regions with pluripotente cells that changes according to the stage of the embryo development.

Resumo não disponível

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-25T15:23:31Z No. of bitstreams: 1 Rafael Soares dos Anjos.pdf: 731600 bytes, checksum: 7d6737e5dd35933a588f91ac8e29789d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T15:23:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rafael Soares dos Anjos.pdf: 731600 bytes, checksum: 7d6737e5dd35933a588f91ac8e29789d (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / In vitro production of bovine embryos (IVP) is a tool that serves to increase reproductive potential of females considered exceptional, especially, as an instrument to accelerate the progress of animal selection programs. In order to improve results, exogenous synthetic hormones are being used routinely in the animal reproduction industry. Currently there is a research using recombinant bovine somatotropin (rbST), as a substance that causes the increase in receptors for insulin-like growth factor (IGF). Both IGFs type I and type II and its receptors (IGF-IR and IGF-IIR) are expressed in in vitro produced bovine and ovine oocytes and embryos from which one can prove the close relation of IGF system with the IVP. Researches have proven a trend in oocyte quality improvement in animals treated with rbST, as well as increased fertilization rate and embryo quality improvement. This experiment aimed to study the effect of rbST on quantity and quality of in vivo aspirated oocytes, embryo production and gene expression of IGF-I and IGF-II in vitro produced embryos of bovine females of Nelore breed. Five cows were treated with two administrations of 2mL of saline solution as a placebo, with an interval of 14 days between them, being the first administration performed 19 and the second 5 days before follicular aspirations; 30 days after these aspirations, in crossover system, same protocol was used in these five animals being, in this case, the saline solution replaced by 500mg of rbST in order to compare treatments. It was held to IVP of oocytes recovered from this research, being all the steps that involve this process evaluated with subsequent achievement of polymerase chain reactions in real time (qPCRs) for gene expression of IGF-I and IGF-II in the blastocysts produced in the experiment. No difference was observed on quantity and quality of aspirated oocytes in vivo, embryo production and gene expression of IGF-I and IGF-II in vitro produced embryos of bovine females of Nelore breed under the influence of rbST. / A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos constitui-se em uma ferramenta que serve para aumentar o potencial reprodutivo de fêmeas consideradas excepcionais, principalmente, como instrumento para acelerar o progresso dos programas de seleção animal. Com o intuito de melhorar taxas e índices, sintéticos exógenos vêm sendo utilizados corriqueiramente na área da reprodução animal. Pesquisa-se atualmente a utilização da somatotropina recombinante bovina (rbST), tida como substância que acarreta o aumento de receptores para o fator de crescimento semelhante à insulina (IGF). Tanto os IGFs tipos I e II como seus receptores (IGF-IR e IGF-IIR) são expressos em oócitos e embriões bovinos e ovinos produzidos in vitro - o que pode comprovar a relação do sistema IGF com a PIVE. Estudos tem comprovado tendência em melhora da qualidade oocitária nos animais tratados com rbST, bem como aumento da taxa de fecundação e melhoria na qualidade de embriões. Este experimento objetivou estudar a influência da rbST sobre a quantidade e qualidade de oócitos aspirados in vivo, produção embrionária e expressão gênica de IGF-I e IGF-II em embriões produzidos in vitro de fêmeas bovinas da raça Nelore. Cinco vacas foram tratadas com duas administrações de 2mL de solução salina como placebo, com intervalo de catorze dias entre elas, sendo a primeira administração realizada dezenove e a segunda cinco dias antes das aspirações foliculares; decorridos trintas dias após estas aspirações, em sistema crossover, o mesmo protocolo foi utilizado nesses cinco animais sendo, neste caso, a solução salina substituída por 500mg de rbST, com o intuito de efetuar-se comparações entre os tratamentos. Realizou-se a PIVE a partir dos oócitos recuperados nesta pesquisa, sendo todas as etapas que envolvem este processo analisadas e com posterior realização de reações em cadeia da polimerase em tempo real (qPCRs) para expressões gênicas de IGF-I e IGF-II nos blastocistos produzidos. Observou-se que a rbST não exerceu influência significativa sobre a quantidade e qualidade de oócitos aspirados in vivo, produção embrionária e expressão gênica de IGF-I e IGF-II em embriões produzidos in vitro de fêmeas bovinas da raça Nelore.