Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-25T15:39:54Z No. of bitstreams: 1 Valdir Morais de Almeida.pdf: 1173733 bytes, checksum: 8f3536403d730fefb261f209b8f6dd39 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T15:39:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valdir Morais de Almeida.pdf: 1173733 bytes, checksum: 8f3536403d730fefb261f209b8f6dd39 (MD5) Previous issue date: 2013-04-29 / The unpredictability of results in addition with a variable efficiency on embryo transfer (ET) in sheep can be related to the absence of timing definition on artificial insemination (AI) in ET programs by an asynchrony between ovulations and AI procedures in superovulted animals. The aim of this work, was to identify by laparoscopy the ovarian dynamics of ewes subjected to multiple ovulation embryo transfer program (MOET) and, based upon this knowledge, evaluate two ideal moments of laparoscopic AI, with cooled and frozen semen. In experiment 1, ten females, sheep were used, synchronized with intravaginal progesterone device (CIDR ®) (D0) and Superovulation induction by FSH-p (Folltropin ®), in eight decreasing administration doses every twelve hours, starting at D12. In D15 intravaginal devices have been removed and administered 200IU of equine chorionic gonadrotophin - eCG (Novormon ®, Intervet). The next day, 4μg of buserelin acetate – GnRH - was administered (Conceptal ®, Intervet). After estrous detection, observations of ovarian status laparoscopically were performed at 36, 40, 48, 52 and 56 hours after CIDR removal or until ovulations occurred. In experiment 2, twenty sheep females were used, synchronized and induced with identical protocol of experiment 1 and, after estrous detection, they were divided into four treatments defined as at the time of the Laparoscopic AI based upon removal of intravaginal device and on the type of semen used: T1-36 h/cooled semen; T2-48 h/cooled semen; T3-36 h/frozen semen and; T4-48 h/frozen semen. Five days after laparoscopic AI, collection of the embryos was performed by laparotomy and the recovered structures were evaluated and classified according to IETS (International Embryo Transfer Society) and transferred to recipients that had synchronized estrus by applying intravaginal device impregnated with 60 mg medroxiprogeterona-MAP (Progespon ®), for a period of 15 days, when the device was removed and 400UI of eCG (Folligon ®) was administered subcutaneously and embryos were transferred by semi-laparoscopy. Pregnancy diagnosis was performed by ultrasonography days after ET. There was a higher concentration (90%) of the time of ovulation at 48 hours after the device removal. At Fifty-two hours after device removal, all females from the experiment had ovulated. In the second experiment, no differences were seen in number of structures recovered among treatments with a mean of 11.15 ± 6.35. The number of viable embryos differed statistically between the T2 (8.4 ± 5.5) and T3 (4.0 ± 4.4), showing that cryopreserved sperm cell was not able to accomplishing fertilization when the laparoscopic AI was held at 36 h. It was concluded that females subjected to MOET show a fast follicular growth and ovulations occurred mostly 48 hours after Progesterone device removal. It is possible to suggest a single laparoscopic AI in commercial MOET programs in sheep. It was showed also a numerical superiority, when using cooled semen. / Os resultados pouco previsíveis e a eficiência variável da transferência de embriões (TE) em ovinos podem estar relacionados à ausência da definição do melhor momento da IA em programas de TE por assincronia entre as ovulações e os procedimentos da inseminação artificial (IA) em animais superovulados. Desta feita, buscou-se identificar o momento da ovulação, por meio da laparoscopia, de fêmeas ovinas submetidas a programa de múltipla ovulação e transferência de embriões-MOTE e, a partir destes conhecimentos, avaliar dois momentos da IA laparoscópica, com uso de sêmen resfriado e criopreservado. No experimento 1, dez fêmeas ovinas foram utilizadas, sincronizadas com uso de dispositivo vaginal de Progesterona (CIDR®) (D0) e indução da superovulação por administrações de FSH-p (Folltropin®), em oito doses decrescentes a cada doze horas, iniciando-se no D12. No D15 foram removidos os dispositivos intravaginais e administradas 200UI de gonadrotofina coriônica eqüina - eCG (Novormon®, Intervet). No dia seguinte, administrou-se 4μg de acetato de buserelina - GnRH (Conceptal®, Intervet). Após detecção do cio e jejum de 12 horas, foram realizadas as observações do status ovariano via laparoscópica, nos momentos 36, 40, 48, 52 e 56 horas pós-remoção do CIDR® ou até observação das ovulações. No experimento 2, vinte fêmeas ovinas foram utilizadas, sincronizadas e induzidas com protocolo idêntico ao do experimento 1 e, após detecção do cio e jejum de 12 horas, foram divididas em quatro tratamentos definidos quanto ao horário da IAL com base na remoção do dispositivo intravaginal e quanto ao tipo de sêmen utilizados: T1 – 36 h / sêmen resfriado; T2 – 48 h / sêmen resfriado; T3 – 36 h / sêmen criopreservado e; T4 – 48 h / sêmen criopreservado. Passados cinco dias da IAL, foi realizada a colheita dos embriões pela técnica de laparotomia e, as estruturas recuperadas foram avaliadas e classificadas segundo normas preconizadas pela IETS (International Embryo Transfer Society) e, transferidos para receptoras que tiveram estro sincronizado por meio da aplicação de dispositivo intravaginal impregnado com 60 mg de medroxiprogeterona – MAP (Progespon®), por um período de 15 dias, quando se deu a sua retirada e aplicação de 400UI de eCG (Folligon®) por via intramuscular e, receberam embriões pela técnica de semi-laparoscópia. O diagnóstico gestacional foi realizado por meio de ultrassonografia aos 35 dias após a TE. Observou-se maior concentração (90%) do momento das ovulações às 48 horas pós-retirada do dispositivo intravaginal. Cinquenta e duas horas pós-remoção do dispositivo intravaginal, todas as fêmeas do programa haviam ovulado. No segundo experimento, O número de estruturas viáveis, do T1 e T2, não variou significativamente, entretanto, aumento significativo (P 0,05), foi observado no percentual de confirmações de prenhezes entre os tratamentos, T3 = 9,1 ± 13,3 % e T4 = 49,2 ± 30,1 %, demonstrando que o uso da IAL com sêmen criopreservado, na condição de préovulação (36 h), não foi eficaz na fertilização das estruturas oócitarias. Observou-se que uma única IAL, foi suficiente para produção embrionária, com exceção do T3, alcançando-se melhores índices no T4, com fertilização de 62,5 ± 39,3 %, e confirmação ultrassonográfica de 49,2 ± 30,1 %, das estruturas produzidas. Conclui-se que fêmeas submetidas a programa de múltipla ovulação e transferência de embriões apresentam rápido crescimento folicular e maior concentração de ovulação às 48 horas pós-remoção dos dispositivos intravaginais, sendo possível indicar a utilização de uma única IAL com uso sêmen resfriado e, criopreservado em programas comerciais de MOTE em ovinos, evidenciando considerável ganho tecnológico e econômico.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-11T13:34:44Z No. of bitstreams: 1 Barbara Loureiro.pdf: 705738 bytes, checksum: 42e26d1f40114410bbde6b147c9d19bd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T13:34:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbara Loureiro.pdf: 705738 bytes, checksum: 42e26d1f40114410bbde6b147c9d19bd (MD5) Previous issue date: 2006-04-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / We tested the hypothesis that heat shock and tumor necrosis factor-α (TNF-α) induce apoptosis in bovine embryos through a caspase-9 dependent mechanism.Experiment 1 determined whether the caspase-9 inhibitor, z-LEHD-fmk, blocks the apoptotic effects of heat shock and TNF-α. Embryos were collected on day 4, 5, and 6 after in vitro insemination and cultured for 24 h in the presence of either 100 μM z-LEHD-fmk reconstituted in 0.5% (v/v) DMSO or vehicle (DMSO) at either 1) 38.5°C for 24 h (control), 2) 41°C for 15 h followed by 38.5°C for 9 h (heat shock), or 3) 38.5°C for 24h with 10 ng/mL murine TNF-α. The proportion of blastomeres undergoing apoptosis was determined using TUNEL labeling. The experiment was replicated 4-5 times/day using 172-248 embryos/day. In control embryos, heat shock and TNF-α increased the proportion of cells that were TUNEL-positive as compared to embryos cultured at 38.5°C for 24 h (P<0.001). For embryos incubated with z-LEHD-fmk, in contrast, neither heat shock nor TNF-α caused an increase in TUNEL labeling (treatment x inhibitor; P<0.05). Experiment 2 tested effects of different concentrations of z-LEHDfmk on apoptotic responses of embryos to TNF-α. Embryos ³16 cells were collected on Day 6 and cultured in the presence of different concentrations of z-LEHD-fmk (0, 1 10, and 100 μM ) ± 10 ng/mL TNF-α.. After 24 h at 38.5°C, embryos were washed, fixed, and analyzed by TUNEL. The experiment was replicated 4 times (176 embryos). Addition of 10 ng/mL TNF-α increased the percentage of cells that were TUNELpositive and this increase was blocked by all concentrations of z-LEHD-fmk (TNF-α x inhibitor; P<0.05). For Exp. 3, we analyzed whether heat shock increases caspase-9 activity and whether z-LEHD-fmk blocks this increase. Embryos at the morula or early blastocyst stage were collected on day 6 and transferred to a new drop with 100 μM z- LEHD-fmk or DMSO vehicle. Embryos were then cultured at either 38.5°C for 24 h or 41°C for 15 h followed by 38.5°C for 9 h. At the end of heat shock, embryos were washed and then incubated in a caspase-9 substrate (5 μM CaspaLux 9-M1D2) at room temperature for 1 h. Caspase-9 activity was then determined by evaluation of fluorescent intensity. Embryos were classified as having low, medium or high caspase activity. The experiment was replicated 5 times using 22-26 embryos/treatment. Heat shock increased the percent of embryos classified as having medium and high caspase-9 activity and z-LEHD-fmk blocked this effect (treatment P<0.05; inhibitor P<0.001). For Exp. 4, effects of TNF-α on caspase-9 activity were evaluated. Embryos at day 6 were cultured at 38.5°C for 3, 6, 9, 12, and 15 h with 10 ng/mL TNF-α or vehicle and then caspase-9 activity was measured as described before. The experiment was replicated 8 times using 37-39 embryos/treatment. The proportion of embryos classified as having medium or high caspase activity was increased by TNF-α at all time points except 3 h (treatment P< 0.05; inhibitor P<0.01). Exp. 5 was performed to analyze the effects of heat shock and TNF-α on mitochondrial membrane integrity. Embryos at Day 3.5 were incubated at 38.5°C for 24 h + TNF-α or were incubated at 41°C for 15 h followed by 9 h at 38.5°C (heat shock). After treatment, embryos were washed and incubated in 20 nM of DiOC6 at 38.5°C for 20 min in the dark. Mitochondrial depolarization was measured by quantifying the fluorescence units/area of each embryo. Heat shock caused loss in mitochondria membrane potential (P< 0.01). However, TNF- α did not show a significant decrease on membrane polarization. The experiment was replicated 5 times (71-78 embryos/treatment). In conclusion, activation of caspase-9 dependent pathways is involved in the induction of apoptosis by heat shock and TNF-α. / Cinco experimentos foram realizados para testar a hipótese de que o estresse térmico e o fator de necrose tumoral-α (TNF-α) induzem apoptose em embriões bovinos através de um mecanismo dependente da caspase-9. O experimento 1 determinou se o inibidor de caspase-9, z-LEHD-fmk, bloqueia os efeitos apoptóticos do estresse térmico e do TNF- α. Embriões foram selecionados nos dia 4, 5 e 6 após a fertilização in vitro e incubados por 24 h ± 100 μM z-LEHD-fmk reconstituído em 0.5% (v/v) DMSO ou veículo (DMSO) à 1) 38.5°C por 24 h (controle), 2) 41°C por 15 h seguido de 38.5°C por 9 h (estresse térmico), ou 3) 38.5°C por 24 h com 10 ng/mL de TNF-α. A proporção de blastômeros apoptóticos foi analisada utilizando-se a técnica de TUNEL. O experimento foi repetido 4-5 vezes utilizando 172-248 embriões por dia. Nos grupos controle o estresse térmico e o TNF-α aumentaram a proporção de células TUNEL-positivas quando comparados aos embriões incubados a 38.5°C for 24 h (P<0.001). Em contraste, embriões incubados com z-LEHD-fmk e submetidos ao estresse térmico e ao TNF-α não apresentaram aumento nas células TUNEL-positivas (tratamento x inibitor; P<0.05). O experimento 2 testou os efeitos de diferentes concentrações de z-LEHD-fmk nas respostas apoptóticas dos embriões ao TNF-α. Embiões ³16 células foram selecionados no dia 6 e incubados na presença de z-LEHD-fmk em 0, 1 10, and 100 μM ± 10 ng/mL TNF-α.. Após 24 h a 38.5°C, os embriões foram lavados, fixados e analisados por TUNEL. O experimento foi repetido 4 vezes (176 embriões). A adição de 10 ng/mL TNF-α aumentou a porcentagem de células TUNEL-positivas e este aumento foi bloqueado por todas as concentrações de z-LEHD-fmk (TNF-α x inibidor; P<0.05). No experimento 3, analisamos se o estresse térmico aumenta a atividade da caspase-9 e se o z-LEHD-fmk bloqueia este efeito. Embriões em estágio de mórula ou blastocisto inicial foram selecionados no dia 6 e transferidos para novas gotas contendo 100 μM z-LEHD-fmk ou DMSO veículo. Os embriões foram incubados a 38.5°C por 24 h ou 41°C por 15 h seguido de 38.5°C por 9 h. Ao final do estresse térmico os embriões eram lavados e incubados no substrato para caspase-9 (5 μM CaspaLux 9- M1D2) a temperatura ambiente por 1 h. A atividade da caspase-9 foi determinada avaliando-se a intensidade da fluorescência. Os embriões foram classificados apresentando baixa, média e alta atividade de caspase. O experimento foi repetido 5 vezes utilizando 22-26 embriões/tratamento. O estresse térmico aumentou a porcentagem de embriões classificados como tendo média e alta atividade de caspase-9 e z-LEHD-fmk bloqueou este efeito (tratamento P<0.05; inibidor P<0.001). Para o experimento 4 foram medidos os efeitos do TNF-α na atividade da caspase-9. Embriões no dia 6 foram incubados a 38.5°C por 3, 6, 9, 12, e 15 h com 10 ng/mL TNF-α ou veículo, analisando-se a atividade da caspase-9 foi como descirto anteriormente. O experimento foi repetido 8 vezes utilizando 37-39 embriões/tratamento. A proporção de embriões classificados como média e alta atividade de caspase aumentaram quando expostos ao TNF-α em todos os períodos de exposição, exceto 3 h (tratamento P<0.05; inibidor P<0.01). O experimento 5 foi realizado para analisar os efeitos do estresse térmico e TNF-α na integridade da membrana mitocondrial. Embriões no dia 3.5 foram incubados com + TNF-α a 38.5°C for 24 h ou a 41°C por 15 h seguido por 9 h a 38.5°C. Após os tratamemtos os embriões foram lavados e incubados em 20 nM de DiOC6 a 38.5°C por 20 min no escuro. A despolarização da mitocôndria foi mensurada por quantificação da fluorescência por unidade/área em cada embrião. O estresse térmico causou uma significativa perda no potencial da membrana mitocondrial (P<0.01). Entretanto, TNF-α não apresentou diminuição significativa. O experimento foi repetido 5 vezes (71-78 embriões/tratamento). Concluindo, o mecanismo de ativação da caspase-9 está envolvido na indução da apoptose pelo estresse térrmico e TNF-α.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-24T15:24:25Z No. of bitstreams: 1 Edivaldo Rosas Santos Junior.pdf: 600124 bytes, checksum: b586f72fa1aa6d9040b988d57db4cab4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T15:24:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edivaldo Rosas Santos Junior.pdf: 600124 bytes, checksum: b586f72fa1aa6d9040b988d57db4cab4 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / This study aimed to determine the Effect of heat stress during maturation of oocytes and in vitro production of embryos in goats and sheep. Ovaries were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphological classification and placed on the basic stages. In 10 replicates the COCs were submitted to the caloric heat stress at 41 ° C for 0 (the thermoneutral 39° C), 3, 6, 12, 18 and 24 hours of maturation in vitro. The percentage of oocytes was determined in the maturation, fertilization, cleaved (D-3), stage of 8-16 cells (D-4), morale (D-5), blastocyst(D-8) after fertilization and blastocyst positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P < 0.05) in all time periods of heat stress in ripening. In sheeps the fertilization, D-3,D-4, D-5 and D-8 was not significantly different (P > 0.05) between the times of 18 vs 24 hours in blastocyst TUNEL positive at 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 and 18 vs 24 h of heat stress. The results in goats showed on maturation, fertilization, D-3, D-4, D-5. The D-8 was not significantly different (P > 0.05) between the periods of 3 vs 6 to 18 vs 24 h and the blastocyst TUNEL positive at 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 and 18 vs 24 h of heat stress. Under the conditions observed in this study, the results indicate that the time in which the oocyte is exposed to heat stress during maturation in vitro is essential to define the embryonic development and their level of apoptotic cells. / Esse estudo teve como objetivo determinar o efeito do estresse térmico durante a maturação de oócitos e seu reflexo na produção in vitro de embriões nas espécies caprina e ovina. Os ovários foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram coletados pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro, selecionados com base na morfologia e colocados em meio básico de maturação. Nas 10 repetições, os CCOs foram submetidos aos tratamentos de estresse térmico calórico a 41°C por 0 (termoneutralidade a 39°C), 3, 6, 12, 18 e 24 horas de maturação in vitro. Os dados foram avaliados na maturação, fecundação, clivagem (D-3), estádio de 8-16 células (D-4), mórula (D-5), blastocisto (D-8) após fecundação e blastocistos positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi observada diferença significativa (P < 0,05) em todos os tempos estudados de estresse térmico na maturação em ambas espécies. Em caprinos, houve diferença significativa (P < 0,05) também na fecundação, D-3, D-4, D-5. No D-8 não foi observada diferença significativa (P > 0,05) entre os tempos de 3 vs 6 e 18 vs 24 h e nos blastocistos TUNEL positivos nos tempos de 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 e 18 vs 24 h de estresse térmico. Em ovinos, não foi observada diferença significativa (P > 0,05) na fecundação, D-3, D-4, D-5 e D-8 entre os tempos de 18 vs 24h e nos blastocistos TUNEL positivos nos tempos de 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 e 18 vs 24h de estresse térmico. Nas condições observadas neste estudo, os resultados permitem concluir que o tempo em que o oócito é exposto ao estresse térmico durante a maturação in vitro é fundamental para definir o desenvolvimento embrionário e o nível apoptótico de suas células.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-06T13:30:06Z No. of bitstreams: 1 Erica Paes Barreto Xavier Moraes.pdf: 1264843 bytes, checksum: d90047f80f8b0ca76e8fc19d53fbfa13 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T13:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Erica Paes Barreto Xavier Moraes.pdf: 1264843 bytes, checksum: d90047f80f8b0ca76e8fc19d53fbfa13 (MD5) Previous issue date: 2006-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Four experiments have been performed to evaluate the efficiency of ultrasound to detect precocious uterine alterations, pregnancy and sex of the fetus in goat and sheep. The first study determined the incidence of hydrometra and mucometra in Saanen, Alpine American, Boer and Anglo-Nubiana breeds submitted to ultrasound examination to detected early pregnancy using linear (6.0 and 8,0 MHz) and micronconvex (5.0 and 7,5 MHz) transducers. The females that showed uterine liquid or mucus were examined 15 days later to confirm the pathological state and treated with 0.5 mg prostaglandin that did not present estrus. Out of the 143 females examined, 63 (41.9%) were pregnant, 67 (51.6%) were non-pregnant, 11 (6.4%) had hydrometra and 2 (1.6%) had mucometra, corresponding to an incidence of 11%. Moreover, out of the 13 treated females 100% were pregnant. It was concluded that ultrasound is an important tool to detect uterine alterations and that prostaglandin is an efficient treatment for hydrometra and mucometra. The second study tested the viability transrectal linear (6.0 and 8.0 MHz) versus transvaginal micro-convex (5.0 and 7.5 MHz) ultrasound transducers for pregnancy diagnosis in Saint Ines sheep (n = 145). In Group (G) I females (n = 30) were between 15th to 29th days of gestation, in Group II (n = 28) were between 30th to 59th days, in Group III (n = 35) were between 60th to 89th days, in Group IV (n = 32) were between 90th to 139th days and Group V (n = 20) was formed by non-pregnant females. The average time, in seconds, to accomplish the pregnancy diagnosis using either transrectal or transvaginal method was 9.02±5.57 and 11.74±7.06 in GI, 13.90±16.49 and 11.37±12.19 in GII, 56.07±41.21 and 128.33±66.23 in GIII, 5.37±3.40 and 2.69±1.90 in GIV and 14.27±17.60 and 20.35±18.17 in GV, respectively. The transrectal examination was faster (P<0.05) in GI, GIII and GV and slower in GIV and equal (P> 0.05) in GII. It was concluded that pregnancy diagnosis in sheep can be carried out through both methods considering the accessibility, however, the transrectal method was suggested to be faster. In the third study Saint Ines sheep was used to determine the efficiency of ultrasound to evaluate embryonic-fetal development, especially to determine the date of first sign of pregnancy. Sixty pregnant sheep 15th to 45th days of gestation were subjected to ultrasound using a linear transrectal transducer with double frequency (6 and 8 MHz). The identification of earliest and the latest parameters of evaluation were performed between days 15th to 19th (16.7±1.3), day for intra-uterine fluid. The presence of embryonic vesicle was determined between days 16th to 22th (18.6±1.4), day of embryo between 18th to 26th (22.8±1.9), placentoms between days 20th to 29th (25.1±2.0), heartbeat between days 24th to 29th (25.9±1.4), amniotic membrane between days 24th to 32th (27.4±1.8), head and upper body differentiation between days 30th to 37th (33.4±2.2), fetus movement between days 30th to 38th (34.2±2.0), umbilical cord between days 32th to 39th (35.1±1.5), button of the anterior and posterior members between days 34th to 39th (36.7±1.5), ocular globe between days 39th to 43th (40.9±1.2). These results allowed to conclude that the first signs of gestation can be identified as soon as day 15 days of gestation. However, it is wise diagnose pregnancy after day 24 when it is possible to visualize the fetus and the heart beat. In the fourth study the objective was ultrasound during the initial phase of pregnancy to determine embryonic and fetal losses and to identify the sex of the conceptus of Saint Ines sheep. The females (n = 132) were examined in the 30th day to confirm pregnancy and determine embryo viability or loss. The sex or loss of the fetus was determined on days 40th, 50th and 60th using a linear transrectal transducer (6.0 and 8.0 MHz). The sex was identified through the localization of the genital tubercle or the visualization of the external genital. Out of the 160 conceptus examined there was 10.0% (16/160) of losses, being 5.6% (9/160) during embryonic phase and 4.4% (7/160) during the fetal phase, showing no difference (P> 0.05) between both phases. In single gestation there was less conceptus losses 3.9% (73/76) (P< 0.05) which occurred between days 40th and 50th day as well 50th and 60th. One concludes that the ultrasound is an efficient tool to diagnosis early gestation, to monitor embryonic and fetal loss and to identify to the sex Saint Ines of embryos from 50th day of gestation. / Foram conduzidos quatro experimentos para avaliar a eficiência da ultra-sonografia na detecção precoce de alterações uterinas, gestação e constatação do sexo fetal de caprinos e ovinos. No primeiro estudo determinou-se a incidência de hidrometra e mucometra em fêmeas das raças Saanen, Alpina Americana, Boer e Anglo-Nubiana submetidas a exame ultra-sonográfico para diagnosticar precocemente a gestação utilizando-se transdutores linear (6,0 e 8,0 MHz) e micro-convexo (5,0 e 7,5 MHz). As fêmeas com útero contendo líquido ou muco foram novamente examinadas 15 dias depois e, confirmando-se o estado patológico, receberam 0,5 mg de prostaglandina (Dinoprost) que foi repetida 11 dias após naquelas que não mostraram estro. Das 143 fêmeas examinadas, 63 (41,9%) estavam prenhes, 67 (51,6%) não prenhe, 11 (6,4%) com hidrometra e 2 (1,6%) com mucometra, correspondendo a uma incidência de 11% dessas patologias e das 13 fêmeas tratadas 100% apresentaram-se gestantes. Conclui-se que a ultra-sonografia é uma importante ferramenta para detectar alterações uterinas e que a prostaglandina é eficiente no tratamento da hidrometra e mucometra. No segundo testou-se a viabilidade do diagnóstico de gestação em ovelhas Santa Inês (n = 145) pelas vias transretal e transvaginal utilizando, respectivamente, os transdutores linear (6,0 e 8,0 MHz) e micro-convexo (5,0 e 7,5 MHz). No Grupo I, as fêmeas (n = 30) encontravam-se entre o 15º e o 29º dia de gestação, no Grupo II (n = 28) entre o 30º e o 59º dia, no GIII (n = 35) entre o 60º e o 89º dia, no GIV (n = 32) entre o 90º e o 139º e o GV (n = 20) foi formado por fêmeas vazias. O tempo médio, em segundos, para a realização do diagnóstico de gestação, respectivamente, pelas vias transretal e transvaginal foi de 9,02±5,57 e 11,74±7,06 no GI, 13,90±16,49 e 11,37±12,19 no GII, 56,07±41,21 e 128,33±66,23 no GIII, 5,37±3,40 e 2,69±1,90 no GIV e 14,27±17,60 e 20,35±18,17 no GV. O exame transretal foi mais rápido (P < 0,05) no GI, no GIII e no GV, mais lento no GIV e igual (P > 0,05) no GII. Conclui-se que o diagnóstico de gestação em ovelhas pode ser realizado por ambas as vias considerando a acessibilidade, todavia, é sugerida a via transretal quando é considera a rapidez do exame. No terceiro estudo teve-se o objetivo de avaliar ultra-sonograficamente o desenvolvimento embrionário-fetal de ovinos da raça Santa Inês, com o intuito de identificar a data da primeira visualização dos principais parâmetros da gestação. As avaliações ultra-sonográficas foram realizadas com transdutor linear de dupla freqüência (6 e 8 MHz) por via transretal, utilizando-se 60 ovelhas gestantes, entre o 15° e o 45° dia de gestação. A identificação mais precoce e mais tardia dos parâmetros avaliados ocorreu entre o 15º e o 19º (16,7±1,3) dia de gestação para líquido intra-uterino, entre o 16º e o 22º (18,6 ± 1,4) dia para vesícula embrionária, entre o 18° e o 26º (22,8±1,9) dia para embrião, entre o 20º e o 29º (25,1±2,0) dia para placentomas, entre o 24º e o 29º (25,9±1,4) dia para batimento cardíaco, entre o 24º e o 32º (27,4 ± 1,8) dia para membrana amniótica, entre o 30º e o 37º dia (33,4±2,2) para diferenciação entre cabeça e tronco, entre o 30º e o 38º (34,2±2,0) dia para movimento do feto, entre o 32º e o 39º (35,1±1,5) dia para cordão umbilical, entre o 34º e o 39º (36,7±1,5) dia para botão dos membros anteriores e posteriores e entre o 39º e o 43º (40,9±1,2) dia para globo ocular. Os resultados permitem concluir que é possível identificar os primeiros sinais de gestação já no 15º dia, todavia, é prudente que o diagnóstico de gestação somente seja emitido a partir do 24º dia, quando é possível visualizar o embrião e seus batimentos cardíacos No quarto estudo objetivou-se monitorar, ultra-sonograficamente, a fase inicial da gestação para determinar as perdas embrionária e fetal e identificar o sexo dos conceptos de ovelhas Santa Inês. As fêmeas (n = 132) foram examinadas no 30º dia após a cobertura para diagnosticar a gestação, no 35º para confirmar a gestação e observar a viabilidade ou a perda embrionária e no 40º, 50º e 60º dias para avaliar a perda e identificar o sexo dos fetos, utilizando-se um transdutor linear (6,0 e 8,0 MHz) por via transretal. O sexo foi identificado através da localização do tubérculo genital ou da visualização da genitália externa. Dos 160 conceptos monitorados foram registradas 10,0% (16/160) de perdas, sendo 5,6% (9/160) durante a fase embrionária e 4,4% (7/160) na fase fetal, não havendo diferença (P > 0,05) entre ambas as fases. Nas gestações simples, a perda de conceptos, 3,9% (3/76), foi menor (P < 0,05) do que nas múltiplas, 15,5% (13/84). A acurácia da sexagem fetal no 40º dia da gestação foi inferior (P < 0,05) ao do 60º dia, não havendo diferença (P > 0,05) entre o 40º e o 50º dia, bem como entre o 50º e o 60º dia. Conclui-se que a ultra-sonografia é eficaz para diagnosticar precocemente a gestação, monitorar as perdas embrionária e fetal e identificar o sexo de fetos da raça Santa Inês a partir do 50º dia de gestação.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-11T15:07:57Z No. of bitstreams: 1 Humberto Fernandes Veloso Neto.pdf: 1107273 bytes, checksum: 67f2862b222caf4332afe8d16b522184 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T15:07:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Humberto Fernandes Veloso Neto.pdf: 1107273 bytes, checksum: 67f2862b222caf4332afe8d16b522184 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / The variability of successful transfers of embryos produced in vitro is still one of the obstacle to its expansion, where some of the problems are related to early embryonic mortality. The aim of this work was to evaluate the application of flunixin meglumine and recombinant bovine somatotropin and observe the effect of variables such as embryonic development, embryo synchrony with the recipient, corpus luteum size at the time of transfer and pregnancy rate. In the first experiment 55 recipient heifers were randomly in the three different groups: G1 control group (n=15 animals); G2 group receiving 500mg of recombinant bovine somatotropin (bST)/animal/subcutaneous (n=20 animals) and G3 group receiving 500mg flunixin meglumine/animal/intramuscular (n=20 animals). Pregnancy rates for G1 53,33% (8/15), G2 60% (12/20), G3 55% (11/20) with no statistically significant difference between groups (P> 0,05). In experiment II 134 heifers were used as recipients of embryos produced in vitro. The pregnancy rate was evaluated according to the degree of development of the structure transferred embryo synchrony with the receiver, and corpus luteum size. Embryos (blastocyst, expanded blastocyst, ecloded blastocyst) showed better pregnancy rates than less development younger embryos (morula, early blastocyst), 57,14% and 25% respectively (P<0,05). Synchrony with the recipient embryo -1 (68,42%), 0 (88,88%), +1 (41,5%) for P<0,05 and size of the corpus luteum large 46,83% CL1, CL2 average 55,88%, 42,85% CL3 small (P> 0,05). In conclusion, under experiment conditions described, the application of flunixin meglumine, recombinant bovine somatotropin and was not efficient to increase the pregnancy rate, but it is note that the pregnancy rate varied in the degree of development of the embryo and the embryo synchrony with the recipient. / A variabilidade do sucesso das transferências de embriões produzidos in vitro ainda é um dos entraves para sua expansão, onde alguns dos problemas são relacionados à mortalidade embrionária precoce. O objetivo com estes trabalhos foi avaliar a aplicação da flunixina meglumina e da somatotropina recombinante bovina e observar o efeito de algumas variáveis como grau de desenvolvimento do embrião, sincronia do embrião com a receptora e classificação do corpo lúteo da receptora no momento da transferência sobre a taxa de prenhez. No experimento I foram utilizadas 55 novilhas receptoras de embrião agrupadas aleatoriamente: G1 grupo controle (n=15animais); G2 grupo que recebeu 500mg de somatotropina recombinante bovina/animal/por via subcutâneo (n=20 animais) e G3 grupo 500mg de flunixina meglumina/animal/via intramuscular (n=20 animais). As taxas de prenhez para os grupos foram G1 53,33% (8/15), G2 60% (12/20), G3 55% (11/20) não havendo diferença significativa entre os grupos (P>0,05). No experimento II foram utilizadas 134 novilhas como receptoras de embriões produzidos in vitro. A taxa de prenhez foi avaliada segundo grau de desenvolvimento da estrutura transferida, sincronia do embrião com a receptora e a classificação corpo lúteo. Embriões desenvolvidos (Blastocisto, Blastocisto expandido) apresentaram melhores índices de prenhez que embriões jovens (Mórula, Blastocisto inicial), 57,14% e 25% respectivamente (P<0,05). Sincronia do embrião com a receptora que apresentou melhores taxas de prenhez foram: sincronia 0 (88,88%) e sincronia - 1 (68,42 %) em relação a sincronia + 1 (41,5 % ) para P<0,05 e classificação do corpo lúteo não houve diferença com CL1 grande 46,83%, CL2 médio 55,88%, CL3 pequeno 42,85% (P>0,05). Nas condições deste experimento a aplicação da flunixina meglumina e da somatotropina recombinantes bovina não foi eficiente para aumentar a taxa de prenhez, porém deve-se atentar que a taxa de prenhez foi dependente do grau de desenvolvimento do embrião e sincronia da receptora com o embrião.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T15:22:44Z No. of bitstreams: 1 Marcelo Cavalcanti Rabelo.pdf: 277173 bytes, checksum: 5276a72e240ec3a42ed27b422a515762 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T15:22:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Cavalcanti Rabelo.pdf: 277173 bytes, checksum: 5276a72e240ec3a42ed27b422a515762 (MD5) Previous issue date: 2009-02-09 / Two studies were performed to evaluate in Mangalarga Marchador mares, the factors that influence the concepts loss after artificial insemination (AI), considering the group age, the reproductive status and the gestational period and the rates of pregnancy and embryonic loss of mares in different reproductive condition used as recipients in programs for embryo transfer (ET). In the first study, was performed between the years 2003 and 2006 were monitored the pregnancies of 320 mares, including nulliparous female (n = 52), not lactating pluriparous (n = 112) and pluriparous in lactation (n = 156) aged between 4 and 16 years. The diagnosis of pregnancy by ultrasound was conducted by the 15th day after ovulation, repeating the tests on the 20th, 30th and 45th day of pregnancy. The total of conceptus loss was 9.06% (29/320). Concerning the age group, losses of 8.06% (5/62), 6.58% (10/152) and 13.21% (14/106) for females under the age of 5, 5 to 10 years and 11 to 16 years respectively showed no significant differences (P > 0.05). Concerning the reproductive status, loss of 5.77% (3/52), 9.82% (11/112) and 9.61% (15/156) for females nulliparous, pluriparous non lactants and pluriparous in lactation, respectively, also showed no significant differences (P > 0.05). Considering the gestational period, the concept loss was more significant (P < 0.05) in the period from 15 to 20 days of gestation. Were not observed significant differences (P > 0.05)between the pregnancy rates loss of the mares inseminated in the foal heat 8.97% (7/78) and those inseminated in subsequent estrus 10.25% (8/78). Based on data from this study were unable to conclude that the reproductive status and age group did not influence the rates of theconcept loss, but, in the period between 2nd and 3rd week of gestation, the mares are more susceptible to these losses. In the second study, between the years 2004 and 2005 have been used pluriparous 10 mares as donors of embryos and recipients, 21 nulliparous females, 20 pluriparous in lactation and 20 not lactating pluriparous. On The 8th day after ovulation were performed the embryos recovered of the donors and immediate transfer to the recipients. The diagnosis of pregnancy by ultrasound was conducted by the 7th day after the ET, repeating the tests on days 20, 25 and 30 of pregnancy. The total pregnancy diagnosed in the 7th day afterET and embryo loss in the 30th day of gestation was 67.21% (41/61) and 39.02% (16/41), respectively. With regard to the reproductive status, the rates of pregnancy and embryonic loss, did not show significant differences (P > 0.05). As for the age group, females with more than 11 years showed lower pregnancy rate (P < 0.05) than on the groups between 6 and 8 years and between 9 and 11 years old and embryo loss had significantly higher (P < 0.05) than those in the lower range. With regard to gestational periods in which the embryonic losses occurred were not found significant differences (P > 0.05). Data obtained in this study suggests that Mangalarga Marchador mares regardless of reproductive status can be used successfully as recipients in programs for ET, but, is not recommended that females aged over 11 years are used for this function. / Foram realizados dois estudos para avaliar em éguas da raça Mangalarga Marchador, os fatores que influenciam a perda do concepto após a inseminação artificial (IA), considerando a faixa etária, o status reprodutivo e o período de gestação, bem como, as taxas de prenhez e perda embrionária de éguas em diferentes status reprodutivos utilizadas como receptoras em programas de transferência de embriões (TE). No primeiro estudo, foram monitoradas 320 gestações entre os anos de 2003 e 2006 compreendendo fêmeas nulíparas (n = 52), pluríparas não lactantes (n = 112) e pluríparas lactantes (n = 156). Os animais possuíam idade entre 4 e 16 anos. O diagnóstico de gestação por ultra-sonografia foi realizado no 15o dia pós-ovulação, repetindo os exames no 20o, 30o e 45o dia de prenhez. O índice total de perda do concepto foi de 9,06% (29/320). Com relação à faixa etária, as perdas de 8,06% (5/62), 6,58% (10/152) e 13,21% (14/106) para fêmeas com menos de 5 anos, de 5 a 10 anos e de 11 a 16 anos, respectivamente, não evidenciaram diferenças significativas (P > 0,05). Quanto ao status reprodutivo, perdas de 5,77% (3/52), 9,82% (11/112) e 9,61% (15/156) para fêmeas nulíparas, pluríparas não lactantes e pluríparas lactantes, respectivamente, também não mostraram diferenças significativas (P > 0,05). No que se refere ao período gestacional, o índice de perda do concepto foi mais significativo (P < 0,05) no período de 15 a 20 dias de gestação. Não foi evidenciada diferença significativa (P > 0,05) entre os índices de perdas do concepto das éguas inseminadas no cio do potro 8,97% (7/78) e daqueles inseminadas no cio subseqüente 10,26% (8/78). Com base nos dados deste estudo foi possível concluir que o status reprodutivo e a faixa etária não influenciam as taxas de perdas do concepto, porém, noperíodo entre a 2ª e 3ª semana de gestação, as éguas estão mais susceptíveis a essas perdas. No segundo estudo, entre os anos de 2004 e 2005, foram utilizadas 10 éguas pluríparas como doadoras de embriões e como receptoras, 21 fêmeas nulíparas, 20 pluríparas lactantes e 20 pluríparas não lactantes. As colheitas embrionárias foram realizadas no 8o dia após a ovulação das doadoras e os embriões imediatamente transferidos para as receptoras. Os diagnósticos de gestação por ultra-sonografia foram realizados no 7o dia após as TE, repetindo os exames nosdias 20, 25 e 30 da gestação. O total de prenhez diagnosticada no 7o dia após a TE e de perda embrionária no 30o dia de gestação foram 67,21% (41/61) e 39,02% (16/41), respectivamente. Com relação ao status reprodutivo, as taxas de prenhez e de perda embrionária, não evidenciaram diferenças significativas (P > 0,05). Quanto à faixa etária, as fêmeas com mais de 11 anos exibiram taxa de prenhez menor (P < 0,05) do que às de faixas entre 6 e 8 anos e entre 9 e 11 anos e apresentaram perda embrionária significativamente maior (P < 0,05) do que as de faixa inferior. Com relação aos períodos gestacionais em que ocorreram a perdas embrionárias, não foram constatadas diferenças significativas (P > 0,05). Os dados obtidos neste estudo permitem concluir que éguas da raça Mangalarga Marchador independente do status reprodutivo podem ser utilizadas com êxito como receptoras em programas de TE, porém, não é recomendável, que fêmeas com idade acima de 11 anos sejam utilizadas para essa função.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T12:32:37Z No. of bitstreams: 1 Ricardo de Macedo Chaves.pdf: 847836 bytes, checksum: d3823ad319704f7a05a04fb624401ca9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T12:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo de Macedo Chaves.pdf: 847836 bytes, checksum: d3823ad319704f7a05a04fb624401ca9 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study was divided in three stages and aimed to determine the cellular changes induced by heat stress on nuclear maturation in vitro and induction of cell death by apoptosis in goat oocytes and embryos. The ovaries of goats in the dry season and rainy season were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The first stage, the cumulus oophorus complexes in goat of 12 repetitions were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphology. Divided into Group-1 (recovered) and Group-2 (in vitro matured), 25 oocytes per drop were placed in basic medium maturity (MBM). After collection of oocytes, it was determined the quality of oocytes, the enzyme activity of group II caspases with reagent PhiPhiLux-G1D2 and DNA fragmentation (TUNEL). Group-2, after maturation, were determined the stage of nuclear maturation, enzymes caspases and DNA fragmentation. In the stages of nuclear maturation stages of germinal vesicle, disruption of the germinal vesicle, metaphase I and II showed no significant difference (P > 0.05). There was no significant difference (P > 0.05) in the activity ofenzymes and caspases in DNA fragmentation of oocytes recovered and matured in vitro. The second stage, the cumulus oophorus complexes in goat were submitted to maturation, fertilization and in vitro. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that developed to the stages of 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. The quality of blastocysts was assessed with the pigment DAPI and the determination of blastomeric positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P < 0.05) stages of fertilization, cultivation in D-3 and morulae. No significant difference (P > 0.05) phases of maturation, growing on D-4, blastocyst and the TUNEL test. Based on these results, we concluded that the dry and rainy seasons will notinfluence the nuclear maturation in vitro apoptosis of oocytes and embryos and in vitro production of embryos in goats. / Este estudo foi dividido em duas etapas e teve como objetivo determinar as alterações celulares induzidas pelo estresse térmico na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos e embriões caprinos. Os ovários de cabras nas estações seca e chuvosa, foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Na primeira etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos de 12 repetições foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Divididos em Grupo-1 (recuperado) e Grupo-2 (maturados in vitro), 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos, foi determinado a qualidade dos oócitos, atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). O Grupo-2, após maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear, enzimas Caspases e fragmentação de DNA. Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Rompimento da Vesícula Germinativa, MetáfaseI e II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas Caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos recuperados e maturados in vitro. Na segunda etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fertilização. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação de blastômeros positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases de fertilização, cultivo no D-3 e mórula. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação, cultivono D-4, blastocisto e no teste de TUNEL. Com base nos dados obtidos, podemos concluir que as estações seca e chuvosa não exercem influência na maturação nuclear in vitro, na apoptose de oócitos e embriões e na produção in vitro de embriões da espécie caprina..

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao final CORRIGIDA POS DEFESA bruno.pdf: 1600495 bytes, checksum: cbb62e60517748529f04ae54537c61a1 (MD5) Previous issue date: 2009-03-30 / Considering the in vitro method of embryo production, field results have shown a lower resistance to cryopreservation for B. indicus, when compared to B. taurus embryos. A possible explanation for this is a great concentration of lipid droplets in the cytoplasm of cells from B. indicus embryos. The objective of this study was to compare two cryoprotectants (Propanediol and DMSO) to vitrification and evaluate the effect of adding 10&#956;M Forskolin to the SOF medium for embryo culture prior to cryopreservation. For all the experiments, ovaries from slaughtered Nelore Bos indicus donors were recovered and maintained at 30-35°C in NaCl solution until recovery of the cumulus-oocyte complexes. Embryos submmited to vitrification were expanded blastocysts at day seven of in vitro culture. In the first experiment embryos were first incubated in 10% Ethylene Glycol (EG) plus 10% DMSO dissolved in holding medium (TCM-Hepes with 20% calf serum) for 1 min and then transferred to droplet of 20% EG plus 20% DMSO in holding medium and 0.5M sucrose for 20 seconds before immersing in liquid nitrogen (n = 107; group EG+DMSO). For the group EG+Propanediol (EG+PRO; n = 96) blastocysts were placed in 10% EG plus 10% PRO in holding medium for 1 min, and then transferred to a droplet of 20% EG plus 20% PRO in holding medium and 0.5M sucrose for 20 seconds before immersing in liquid nitrogen. Both treatments were performed using the Cryotop system. Results were compared with embryos (n = 118) not submitted to cryopreservation. The evaluation was done by the hatching rate of blastocysts at Day 9, being higher (86.4%) for embryos not cryopreserved, when comparing to 77.1% for group EG+PRO and 72.9% for group EG+DMSO (P<0.05). In the second experiment, day 5 embryos obtained in vitro from Nelore donors were cultured using SOF medium with 10&#956;M Forskolin (n = 112) or not (control; n = 101), being all submitted to cryopreservation using Cryotop and the same vitrification method for group EG+DMSO. Results were compared with embryos cultured with SOF medium and not submitted to cryopreservation (n = 96). The evaluation was performed by considering hatching rate at Day 9, being higher - 85.4% - for not cryopreserved, when compared with 63.3% for control and 70.5% for Forskolin group (P<0.05). Considering embryos submitted to cryopreservation, the hatching rate was higher (P<0.05) for Forskolin group. / Os embriões bovinos de raças zebuínas produzidos in vitro (PIV) são mais sensíveis ao congelamento, devido, em parte, ao acúmulo de gotas lipídicas no citoplasma das células embrionárias. A criopreservação de embriões é um passo fundamental para a aplicação prática de outras técnicas de embriologia nos animais domésticos. Além disso, o sucesso da criopreservação de embriões Nelore PIV é fundamental para o desenvolvimento da comercialização de material genético nos mercados interno e externo. Neste trabalho, foram conduzidos dois experimentos: no primeiro, o objetivo foi avaliar a taxa de eclosão de embriões bovinos da raça Nelore PIV vitrificados no estágio de blastocisto expandido (Bx) empregando a metodologia CRYOTOP com o uso das soluções Etileno Glicol (EG) + Dimetil Sulfóxido (DMSO) e EG + 1,2 Propanediol (PRO). No segundo experimento, objetivou-se determinar a taxa de eclosão de embriões bovinos da raça Nelore PIV cultivados ou não em meio contendo 10 &#956;M do agente lipolítico forskolin, vitrificados no estágio de BX. No experimento 1, a taxa de eclosão dos embriões do grupo não vitrificado (G3) foi de 86,4%, superior (P<0,05) aos grupos vitrificados, os quais apresentaram taxas de eclosão de 77,1% e 72,9% nos grupos G1 (EG+PRO) e G2 (EG+DMSO), respectivamente. No experimento 2 observou-se maior viabilidade (P<0,05) do G3-F (grupo não vitrificado; 85,4%) em relação ao G1-F (cultivo com SOF controle; 63,3%) e ao G2-F (cultivo com forskolin; 70,5%). Entre os grupos vitrificados, os embriões cultivados com forskolin obtiveram taxa de eclosão superior ao grupo não tratado (P<0,05). Sendo assim, conclui-se que as soluções de EG+PRO e EG+DMSO apresentaram resultados semelhantes na vitrificação de embriões PIV de bovinos e o uso do agente lipolítico forskolin no cultivo de embriões PIV de bovinos da raça Nelore pode melhorar a criotolerância dos embriões.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Klayto Jose Goncalves dos Santos.pdf: 661017 bytes, checksum: 02f9686f6a0ec71d996c292c1817d5b9 (MD5) Previous issue date: 2010-08-27 / The reproductive and productive index of dairy cattle in Brazil are below the desirable rates, and, in recent decades, the increase in milk production occurred, partly, more because of the expansion of explored areas and the increase of herds than due to an effective productive increment. The development and application of reproductive biotechnologies are essential conditions for improving reproductive efficiency, especially for domestic ruminants, and techniques such as artificial insemination and embryo transfer have been successfully used. Other biotechnologies such as in vitro embryo production, cloning and genetic modification help to accelerate genetic improvement, because they include animals with superior desirable traits, although the results in terms of production are not so good. The main goal of an embryo transfer program is to obtain a high number of viable embryos per donor, after exogenous hormones administration, by increasing the number of oocytes released, enabling the embryo transfer to recipient cows in order to complete the gestation. Cows are born with more than 100,000 oocytes in ovarian follicles, but by natural via, only 0.01% of viable products can be generated, or a number close to 10 calves throughout their reproductive life. One of the proposed solutions to this problem was the development of in vitro production (IVP) of bovine embryos, a major biotech assisted reproduction, which allows the interaction of sperm with oocyte outside the female reproductive tract. Although these biotechnologies are used in many dairy and beef herds, efficiency of an IVP program is limited, among other factors, because of the oocyte recovery rates and the individual variation of ovarian response to FSH treatment, requiring more studies to evaluate the association between follicular waves and superstimulatory treatments, mainly in dairy animals. / Os índices reprodutivos e produtivos da pecuária bovina leiteira brasileira estão abaixo do desejável, e a elevação na produção de leite nas últimas décadas ocorreu, em parte, mais pela expansão das áreas exploradas e o aumento do efetivo de rebanho que pelo real incremento na produtividade. O desenvolvimento e a aplicação de biotécnicas reprodutivas são condições indispensáveis para a melhoria na eficiência reprodutiva, e especialmente para os ruminantes domésticos, técnicas como a Inseminação Artificial e Transferência de Embriões vêm sendo utilizadas com sucesso. Outras biotécnicas como a produção in vitro de embriões, clonagem e transgenia, contribuem para acelerar o melhoramento genético, pois incluem a utilização de animais provados e com características desejáveis superiores, mas apresentam resultados inferiores em termos de produção. A principal meta do programa de TE é a superovulação, cujo objetivo é obter, após administração de hormônios exógenos, elevado número de embriões viáveis por doadora pelo aumento do número de oócitos liberados, possibilitando a transferência dos embriões obtidos após a inseminação artificial para o trato reprodutivo de receptoras para completarem a gestação. As fêmeas bovinas nascem com mais de 100.000 oócitos nos folículos ovarianos, mas pelas vias naturais, apenas 0,01% de produtos viáveis podem ser gerados, ou seja, um número próximo a dez descendentes em toda sua vida reprodutiva. Uma das soluções propostas para esse problema foi o desenvolvimento da produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, uma importante biotécnica de reprodução assistida, a qual permite a interação do espermatozóide com o oócito fora do trato reprodutivo feminino, com a formação de um novo indivíduo. Embora essas biotécnicas sejam utilizadas em muitos rebanhos tanto de leite quanto de corte, a eficiência de um programa de PIV está limitada, entre outros fatores, pela taxa de recuperação de oócitos, pela variação individual na resposta ovariana aos tratamentos para estimular o amadurecimento e ovulação de um número grande de folículos, requerendo estudos para avaliar o efeito da associação entre início da onda folicular e o início do tratamento superestimulatório principalmente em animais de origem leiteira.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavio Freires.pdf: 2001581 bytes, checksum: 9175dab7eab2065c034ec514e2244675 (MD5) Previous issue date: 2012-04-27 / Astrocaryum aculeatum Meyer (Arecaceae), popularly known by tucumã, is a palm tree that occurs in the Amazon and presents a potential market of food and crafts. Has great economic importance, mainly the different products that it can be extracted and used. The specie is characterized by delay in germination, a fact that discourages their cultivation. Thus, information that enable methods and techniques that accelerate the seedlings production is important as a stimulus to the specie cultivation. The aimed of this study was to establish protocols for tucumã in vitro germination and development of zygotic embryos through tissue culture techniques. The tests were performed at the Centro de Biotecnologia da Amazônia. We evaluated the effects of different antioxidants (activated charcoal, ascorbic acid and polyvinylpyrrolidone), the means were tested semi solid MS and Y3 with 0.0 mg L-1 and 2.0 mg L-1 indolylacetic acid (IAA) in the elongation phase, while in the rooting phase, the treatments consisted of four concentrations of naphthalene acetic acid (NAA) (0, 2.5, 5, 10 mg L-1). The cultures remained in a growth chamber with temperature set at 25 ± 1 ° C, light intensity of 30.0 μmols.m-2.s-1 and 16-hour photoperiod. During the acclimatization plants were kept in a greenhouse with intermittent misting system for 60 days. The substrates used were sand, coconut fiber, Vivato®, coconut fiber x sand, coconut fiber x Vivato®, sand and Vivato®, sand x coconut fiber x Vivato®, all in the same proportions. The antioxidant assay results showed that there is no need for the use of antioxidants as MS medium (control) showed 86% germination and absence of oxidation. In stretching phase, MS medium supplemented with 2.0 mg L-1 IAA, was superior to other treatments, developing plants with an average height of 6.18 cm. For rooting, the treatment with 10.0 mg L-1 NAA was higher, with an average production of 9.0 roots per plant, with a rooting percentage of 75.0%. During the acclimatization phase, the substrate Vivato® showed superior results to the other, with an average increase in height of 10.25 cm and launch of five new leaves / Astrocaryum aculeatum Meyer (Arecaceae), popularmente conhecido por tucumã, é uma palmeira que ocorre na Amazônia e apresenta potencial para o mercado de alimento e artesanato. Tem grande importância econômica, principalmente, pelos diferentes produtos que dela podem ser extraídos e usados. A espécie tem como característica a demora na germinação, fato que desestimula o seu cultivo. Deste modo, informações que viabilizem métodos e técnicas que acelerem a produção de mudas são importantes como estímulo para o cultivo da espécie. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer protocolos de germinação e desenvolvimento in vitro de embriões zigóticos de tucumã através da técnica de cultura de tecidos. Os ensaios foram realizados no Centro de Biotecnologia da Amazônia. Foi avaliada os efeitos de diferentes antioxidantes (carvão ativado, ácido ascórbico e polivinilpirrolidona); foram testados os meios semi sólidos MS e Y3 com 0,0 mg.L-1 e 2,0 mg.L-1 de ácido indolilacético (AIA), na fase de alongamento; já em fase de enraizamento, os tratamentos consistiram de quatro concentrações de ácido naftaleno acético (ANA) (0, 2,5, 5, 10 mg.L-1). As culturas permaneceram em sala de crescimento com temperatura ajustada em 25 ± 1ºC, intensidade luminosa de 30,0 μmols.m-2.s-1 e fotoperíodo de 16 horas. Na fase de aclimatização as plantas foram mantidas em casa de vegetação com sistema de nebulização intermitente por 60 dias. Os substratos utilizados foram areia, fibra de coco, Vivato®, fibra de coco x areia, fibra de coco x Vivato®, areia x Vivato® e areia x fibra de coco x Vivato®, todos nas mesmas proporções. O ensaio com antioxidantes os resultados demonstraram que não há a necessidade de utilização de antioxidantes, pois o meio MS (controle) apresentou 86% de germinação e ausência de oxidação. Já na fase de alongamento o meio MS suplementado com 2,0 mg.L-1 de AIA apresentou superioridade aos demais tratamentos, desenvolvendo plantas com altura média de 6,18 cm. Para o enraizamento, o tratamento com 10,0 mg.L-1 de ANA, foi superior, com uma produção média de 9,0 raízes por planta, com um percentual de enraizamento de 75,0%. Na fase de aclimatização, o substrato Vivato® apresentou resultados superiores aos demais, com incremento médio em altura de 10,25 cm e lançamento de cinco novas folhas