O cristalino se origina de um epitélio simples e cuboidal que recobre a vesícula óptica. Neste estádio, os filamentos de actina são distribuídos ao longo do eixo apicobasal. As células do ectoderma pré- placodal, em contato com a vesícula óptica, formam um epitélio pseudoestratificado, chamado de placóide do cristalino, com acúmulo de actina no domínio apical. Nós propusemos estudar o papel da proteína PAR3 e sua fosforilação no estabelecimento de actina apical. A superexpressão de PAR3 no placóide forma pontos ectópicos de PAR3 na membrana baso-lateral e induz o recrutamento de actina ectópica para esses pontos. O recrutamento de actina e aPKC ectópicos é independente do estado de fosforilação da treonina 833, resíduo localizado no domínio de ligação do PAR3 ao aPKC. Além disso, no ectoderma peri-placoidal, onde a actina localiza-se baso-lateralmente, PAR3 induz o recrutamento ectópico de actina apical e esse recrutamento é independente da fosforilação da treonina 833. Esses dados nos sugerem que PAR3 é suficiente para recrutar actina no placóide do cristalino. / The lens originates from a simple cuboidal epithelium that overlies the optic vesicle. At this stage, the actin filaments are distributed along its apical-basal sides. The pre-placodal ectoderm, in contact with the optic vesicle, forms a pseudostratified tissue, the lens placode, with accumulation of actin network at the apical domain. Here, we focused on the role of the polarity protein PAR3 and its phosphorylation in the establishment of this apical actin network. Overexpression of PAR3 in the lens placode, induced formation of ectopic actin clusters in the basolateral membrane of the lens placode. The formation of these actin clusters, as well as recruitment of aPKC was independent of Threonine 833 phosphorylation at the PAR3 aPKC-binding site. In addition, PAR3 induced ectopic actin networks in the apical membrane of the periplacodal ectoderm independent of the Threonine 833 phosphorylation. Taken together, these data suggest that PAR3 is sufficient for actin recruitment in the lens placode.

Níveis elevados de proteína bruta (PB) na dieta de ruminantes têm sido associado com comprometimento na fertilidade devido, principalmente, a elevação da concentração do nitrogênio uréico plasmático (NUP). Objetivou-se no presente estudo avaliar o efeito do fornecimento de dietas contendo nitrogênio não-protéico (NNP) sem prévia adaptação, durante curto espaço de tempo e em diferentes fases do ciclo estral, a fêmeas bovinas superovuladas quanto à produção, qualidade e ao grau de desenvolvimento de embriões recuperados. Sessenta e oito vacas da raça Nelore com escore corporal de 7,56 e peso médio de 557,6 kg foram distribuídas em três tratamentos: controle (C), uréia antes do dia 0 (UA; fornecimento de dieta com uréia do dia -5 ao dia 0) e uréia depois do dia 0 (UD; fornecimento de dieta com uréia do dia 0 ao dia 5). As vacas foram mantidas em piquetes com pastagem de Brachiaria brizantha cv. Marandu e receberam diariamente, 3,0 kg/animal de concentrado durante 16 dias. Foram formulados dois concentrados, sendo que as dietas totais (concentrado + consumo estimado de pastagem) continham 12,0% (dieta controle) e 14,6% de PB (dieta com NNP). A diferença na PB entre as dietas foi o acréscimo de 100g/vaca/dia de uréia. Os animais foram sincronizados, superovulados e inseminados. Sete dias (dia 7) após a inseminação (dia 0), realizou-se a colheita e análise dos embriões quanto à qualidade a ao grau de desenvolvimento. Amostras de sangue foram coletadas nos dias -5, 0 e 5 para mensurações das concentrações de NUP, glicose, insulina e progesterona. Houve efeito significativo dos tratamentos sobre a concentração médias de NUP no dia -5 (C = 16,18ab, UA = 17,72a e UD = 14,47b mg/dL; P = 0,0007), no dia 0 (C = 18,95b, UA = 22,71a e UD = 21,15 ab mg/dL; P = 0,0010) e no dia 5 (C = 20,93a, UA = 19,08b e UD = 21,51a mg/dL; P = 0,0022). Quanto às concentrações de glicose, insulina e progesterona não houve efeito dos tratamentos. Não houve efeito significativo nem da inclusão da uréia e nem do momento da inclusão da uréia sobre o total de estruturas recuperadas, total de estruturas fecundadas e de embriões viáveis. Porém, houve efeito do momento de inclusão da uréia sobre a porcentagem de estruturas fecundadas em relação ao total de estruturas recuperadas (UA = 75,3 vs. UD = 50,7%) e sobre a porcentagem de embriões viáveis em relação ao total de estruturas recuperadas (UA = 73,2 vs. UD = 39,4%). O tratamento UD acarretou em menor capacidade de fecundação do oócito em relação ao tratamento UA, havendo redução de aproximadamente 32,7% na proporção de oócitos fecundados sobre o total de estruturas recuperadas deste tratamento. / High levels of crude protein (CP) in ruminant diets were associated with detrimental effect on fertility, mainly, due to the rise of plasmatic urea nitrogen (PUN) concentration. The aim of this study was to verify the effects of short term non-protein nitrogen feeding at different periods of the oestrus cycle in superovulated cows without previous adaptation on yield, quality and development degree of recovered embryos. Sixty eight Nelore cows with body condition score of 7.56 and body weight of 557.6 kg were divided in three different groups: control (C), urea before day 0 (UB; urea supply from day -5 to day 0) and urea after day 0 (UA; urea supply from day 0 to day 5). Animals were grazing in Brachiaria brizantha cv. Marandu pasture and received 3.0 kg/animal/day of concentrate during 16 days. Two concentrates were formulated and the total diets (concentrate + estimate forage intake) had 12.0% (control diet) and 14.6% of CP (NPN diet). The difference in CP between diets was the addition of 100g/cow/day of urea. Animals were synchronized, superovulated and inseminated. The embryos were collected seven days (day 7) after insemination (day 0) and quality and development degree were also evaluated. Blood samples were collected on day -5, 0 and 5 for measurement of PUN, glucose, insulin and progesterone. There was significant effect of treatments on average PUN concentration at day -5 (C = 16.18ab, UB = 17.72a and UA = 14.47b mg/dL; P = 0.0007), at day 0 (C = 18.95b, UB = 22.71a and UA = 21.15ab mg/dL; P = 0.0010) and at day 5 (C = 20.93a, UB = 19.08b and UA = 21.51a mg/dL; P = 0.0022). For glucose, insulin and progesterone there was no effect of treatments. It was observed neither effect of urea inclusion nor the moment of urea inclusion in diet on the total number of recovered structures, total number of fertilized structures and total number of viable embryos. However, it was observed effect of the moment of urea inclusion on the rate of fertilized structures in relation to the total number of recovered structures (UB = 75.3 vs. UA = 50.7%) and on the rate of viable embryos in relation to the total number of recovered structures (UB = 73.2 vs. UA = 39.4%). The UA treatment lead to lowest fertilizing oocyte capacity in relation to UB treatment with an approximate reduction of 32.7% on oocytes fertilized proportion over the total recovered structures in this treatment.

Alterações morfogênicas do aparelho cardiorespiratório de bovinos provenientes de fecundação in vitro e transferência nuclear são um dos principais fatores responsáveis pela alta incidência de mortalidade embrionária, fetal e pós-natal. Utilizamos técnicas empregadas em microscopia de luz para estudar o desenvolvimento do coração e pulmão nestes animais. Verificamos que em embriões provenientes de fecundação in vitro, aos 28 dias de gestação, aparece o tubo laringotraqueal e sua septação através da prega traqueoesofágica. Neste mesmo período os embriões apresentaram cavidade pericárdica, átrio dividido em direito e esquerdo, cone cardíaco, seio venoso, camada de miocárdio e epicárdio. O brônquio traqueal foi observado em embriões com idade gestacional de 36 dias a partir de um brotamento na porção lateral direita da traquéia, cranial a sua bifurcação. Aos 44 dias de gestação os brotos pulmonares dos embriões apresentaram brônquios principais originando brotamentos de brônquios segmentares. O mesênquima de sustentação em diferenciação continha vasos sangüíneos dispersos, diferentemente de embriões provenientes de TN, que com 68 dias de gestação apresentou pulmão em fase pseudoglandular contendo brotos de bronquíolos e poucos vasos sangüíneos nos cortes obtidos e analisados. Com 70 dias, o coração do feto apresentava ventrículo significativamente grande, pequeno átrio e pulmão não desenvolvido. A partir dos nossos resultados, concluímos que alterações genéticas, incompletas informações e comunicações celulares e modificação no metabolismo celular são os prováveis responsáveis pelas anomalias presentes nas técnicas de manipulação de embrião, causando um desenvolvimento mais lento e falho quando comparados com embriões in vivo, explicando o alto índice de perda gestacional / Morphogenetic changes of cardio-respiratory system of bovine from in vitro fertilization and nuclear transfer is a major factor responsible for high incidence of both periods embryonic, fetal and postnatal mortality. We used techniques of light microscopy to study the development of heart and lung in these animals. We found that in embryos derived from in vitro fertilization, at 28 days of gestation, appears the laryngotracheal tube and its fold through tracheoesophageal septation. In the same period the embryos showed pericardial cavity, atrium divided into left and right, cardiac cone, venous sinus, layer of myocardium and epicardium. In embryos with 36 days of gestational age was observed the tracheal bronchus from a bud in the right lateral portion of the trachea, cranial to its bifurcation. At 44 days of gestation, the lung buds of the embryos showed main bronchi giving rise to budding of segmental bronchi. The sustentation mesenchyme in differentiation contained scattered blood vessels, unlike embryos from TN, which with 68 days of gestation showed lung in pseudoglandular stage, containing bronchioles buds and few blood vessels in histological sections obtained and analyzed. With 70 days, the fetal heart ventricle had significantly large, small atrium and lungs not developed. From our results we conclude that genetic alterations, incomplete information in cellular communications and change in cellular metabolism are likely responsible for the anomalies in the techniques of embryo manipulation, causing a slower and flawed development when compared to embryos in vivo, explaining the high rate of pregnancy loss

O saco vitelino desempenha um importante papel no desenvolvimento embrionário de todos os mamíferos. Sua função está sendo estudada, demonstrando ser um dos lugares iniciais da hematopoiese. No período em que a placenta verdadeira ainda não esta formada, durante o desenvolvimento embrionário, o saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião, constituindo um sitio de transferência e síntese de proteínas. As proteínas são moléculas que governam praticamente todas as funções celulares e são do ponto de vista químico as moléculas biológicas estruturalmente mais complexas. A proteômica é o estudo em grande escala de proteínas de uma amostra biológica complexa. O objetivo deste trabalho foi realizar a analise estrutural e bioquímica inicial das proteínas presentes no saco vitelino de embriões bovinos por eletroforese bidimensional 2D-PAGE. A partir dos géis obtidos em 2D-PAGE as amostras de proteínas contidas no saco vitelino de 37 dias de gestação apresentaram cerca de 1230 proteínas, e os géis das amostras de 23 dias de gestação apresentaram cerca de 970 proteínas. O saco vitelino de 23 dias apresentou proteínas essenciais diferencialmente expressas nos estágios de desenvolvimento, como Hemogen, proteína expressa neste estagio, responsável pelo controle da proliferação e diferenciação de células hematopoiéticas; a proteína Glicoproteína-N-acetilgalactosamina 3-beta-galactosiltransferase-1, envolvida nos processos de angiogênese, trombopoiese e no desenvolvimento da homeostase nos rins; a proteína fator de transcrição Corion-especifico (GCMa) fator de transcrição necessário para o desenvolvimento da placenta. Enqueanto que o saco vitelino de 37 dias apresentou proteinas essenciais deste estágio como a apolipoproteína E (APOE) que medeia à ligação, inter-sinalização e catabolismo das partículas de lipoproteína, podendo servir como uma ligação para o receptor de LDL (apo B/E) e para receptores específicos de apo-E dos tecidos hepáticos durante a embriogênese. Estas proteinas serão de vital importância para o desenvolvimento do embrião até a formação da placenta. / The yolk sac plays an important role in embryonic development of all mammals. Its function is being studied, proving to be one of the initials of haematopoiesis. In the period when the placenta is not real yet formed during embryonic development, the yolk sac is the main source of nutrition of the embryo, providing a place for the transfer and synthesis of proteins. Proteins are molecules that govern all cellular functions and are from a chemical structurally the most complex biological molecules. The proteomics is the large-scale study of proteins in a complex biological sample. The aim of this work was make the analisys of present proteins in the yolk sac of bovine embryos by 2D-PAGE two-dimensional electrophoresis. The gels obtained from 2D-PAGE of protein samples contained in the yolk sac of 37 days of pregnancy had about 1230 proteins, and gels of samples from 23 days of pregnancy had about 970 proteins. The yolk sac of 23 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development, as Hemogen, protein expressed in stage, responsible for controlling the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, the protein acetylgalactosamine glycoprotein-N-3-beta-galactosyltransferase-1, involved in the process of angiogenesis, trombopoiese homeostasis and development of the kidney, the protein factor chorion-specific transcription (GCMa) transcription factor necessary for the development of the placenta. The yolk sac of 37 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development , as apolipoprotein E (APOE), which mediates the binding, intersignaling and catabolism of lipoprotein particles, and can serve as a link to the receptor to LDL (apo B/E) and specific receptors for apo E in the liver tissue embryogenesisThese proteins are of vital importance to the development of the embryo until the formation of the placenta.

Esse estudo está apresentado em Capítulo 1 (Protocolo de Superovulação com IATF em Bos taurus) e Capítulo 2 [Protocolos de superovulação com IATF em Bos indicus, com 3 experimentos; 1- Momento da administração de LH em vacas Nelore (Bos indicus) superovuladas e inseminadas em tempo fixo; 2- Efeito da administração de progesterona injetável no início do protocolo de sincronização para superovulação com IATF em vacas Nelore; 3- Efeito do número de inseminações em vacas Nelore superovuladas e inseminadas em tempo fixo]. No Capítulo 1 objetivou-se avaliar o momento da retirada do dispositivo de P4 (DIB®) e da administração de LH em vacas Holandesas. Dezesseis vacas receberam DIB (D-1) e 2mg de BE (D0). Superovulou-se com 200mg de FSHp em 8 doses decrescentes a partir do D4. No D6, administrou-se PGF e estabeleceram-se quatro grupos: P24LH48 (retirada do DIB 24h e LH 48h pós PGF); P24LH60 (retirada 24h e LH 60h); P36LH48 (retirada 36h e LH 48h) e P36LH60 (retirada 36h e LH 60h; fatorial 2x2; cross-over). Realizou-se a IATF 12 e 24h pós LH. Os efeitos principais para P24vsP36 e LH48vsLH60 foram: taxa de ovulação (TO; 49,9 &plusmn; 5,7 vs 60,9&plusmn; 4,8% e 53,1&plusmn;5,3 vs 57,5&plusmn;5,4%; P>0,05), estruturas totais (ETot; 4,4&plusmn;0,9 vs 5,0&plusmn;0,9 e 3,8&plusmn;0,7 vs 5,7&plusmn;1,0; P>0,05), embriões transferíveis (ET; 3,0&plusmn;0,7 vs 4,1&plusmn;0,9 e 2,3&plusmn;0,5a vs 4,9&plusmn;0,9b; P<0,05) e embriões congeláveis (EC; 2,9&plusmn;0,7 vs 3,8&plusmn;0,8 e 2,1&plusmn;0,5a vs 4,7&plusmn;0,9b; P<0,05). O LH 60h pós PGF aumentou o número de ET e EC em Holandesas. No Capítulo 2, estudaram-se diferentes protocolos de superovulação com IATF em Nelore. No Experimento 1, vinte vacas foram superovuladas (P24) e tratadas com LH 48h (G-LH48) ou 60h (G-LH60) pós PGF (cross-over). Não houve diferença (P>0,05) para: número de folículos >8mm no LH (FolLH; 12,5±1,5 vs 9,4±1,0) e TO (71,0±4,2 vs 64,6±4,0%). No entanto, verificou-se diferença (P<0,05) para: intervalo primeira/última ovulação (IntOV; 15,0±2,1a vs 21,0±1,7bh), ETot (7,5±1,0a vs 5,1±0,5b), ET (6,2±1,0a vs 3,1±0,5b) e EC (5,9±0,9a vs 2,5±0,5b). O LH 48h pós PGF apresentou maior eficiência em Nelore. No Experimento 2, dez vacas receberam o protocolo P36LH48 e foram divididas em dois grupos no D0: Grupo BE (2mg) + P4 (50mg; G-BE+P4) ou Grupo BE (2mg; G-BE; cross-over). Os resultados para o G-BE+P4 e G-BE foram: emergência da onda folicular (EM; 3,6&plusmn;0,2 e 4,0&plusmn;0,1 d; P>0,05), variação da EM (2,5 a 4,5 vs 3,5 a 4,5d; P=0,06), FolLH (16,2&plusmn;1,4 vs 18,5&plusmn;1,1; P>0,05), IntOV (32,4&plusmn;1,8 vs 33,6&plusmn;1,6h; P>0,05), ETot (7,7&plusmn;0,8 vs 9,2&plusmn;1,2; P>0,05), ET (6,2±0.6 vs 7,2±1,1; P>0,05), EC (5,1&plusmn;0,7 vs 6,3&plusmn;1,0; P>0,05) e ED (0,6&plusmn;0,2 vs 0,8&plusmn;0,2; P>0,05). Não houve efeito da P4 i.m no D0. No Experimento 3, dez vacas foram divididas em: G-1IATF (16h pós LH) e G-2IATF (12 e 24h pós LH; cross-over). Os efeitos dos tratamentos G-1IATF e G-2IATF foram: FolLH (16,2&plusmn;1,4 vs 14,8&plusmn;1,2; P>0,05), ETot (8,2±0,9 vs 7,2±0,8; P>0,05), ET (4,3±0,7 vs 4,2±0,6; P>0,05), EC (2,9±0,6 vs 2,8±0,4; P>0,05) e estruturas não fertilizadas (0,6±0,2 vs 0,8±0,2; P>0,05). Não houve diferença na produção de embriões quando do emprego de uma ou duas IATFs. / This study is presented in Chapter 1 (Superovulations protocols with FTAI for Bos taurus) and Chapter 2 (Superovulation protocols with FTAI for Bos indicus), in this Chapter are included three experiments [1 - Moment of the application of LH in cows Nelore (Bos indicus); 2 - Effect of the injectable progesterone administration in the day 0 in Nelore cows; 3 - Effect of the number of inseminations in superstimulated and fixed-time inseminated Nelore cows]. On Chapter 1, it went to evaluate the time of intravaginal P4 device (DIBTM) withdrawal and the application of LH in Holstein cows superstimulated with FTAI. Sixteen cows, treated with DIB (D-1) and 2mg of EB (D0) were assigned in four groups (superstimulation with 200mg of FSHp in 8 decreasing doses starting on D4). On D6, PGF was administered and the cows were accomplished in four groups: P24LH48; P24LH60; P36LH48 and P36LH60 (cross-over). The FTAIs were performed 12 and 24h after LH. The main effects for treatments P24 vs P36 and LH48vsLH60 were: ovulation rate (OR; 49.9&plusmn;5.7 vs 60.9&plusmn;4.8% and 53.1&plusmn;5.3 vs 57.5&plusmn;5.4%; P>0.05), total of structures (TS; 4.4&plusmn;0.9 vs 5.0&plusmn;0.9 and 3.8&plusmn;0.7 vs 5.7&plusmn;1.0; P>0.05), transferable embryos (TE; 3.0&plusmn;0.7 vs 4.1&plusmn;0.9 and 2.3&plusmn;0.5a vs 4.9&plusmn;0.9b; P<0.05) and suitable to freezing embryos (FE; 2.9&plusmn;0.7 vs 3.8&plusmn;0.8 and 2.1&plusmn;0.5a vs 4.7&plusmn;0.9b; P<0.05). The LH 60h after prostaglandin increased the TE and FE in Holstein cows. In the Chapter 2, it was studied different superstimulation with FTAI protocols in Nelore. In the first Experiment cows (n=20) were superovulated and treated with LH 48h (G-LH48) or 60h (G-LH60) after prostaglandin. There were no significant (P>0.05) differences in the variables between LH48 and LH60: number of follicles >8mm at the time of LH (FolLH12.5±1.5 and 9.4±1.0), OR [169/249 (71.0±4.2 %) and 120/187 (64.6±4.0%)]. However, there were differences (P<0.05) between G-LH48 and G-LH60 in the variables: interval first/last ovulation (IntOV15.0±2.1a and 21.0±1.7b), TS (7.5±1.0a and 5.1±0.5b), TE (6.2±1.0a and 3.1±0.5b), and FE (5.9±0.9a and 2.5±0.5b). The LH 48h after prostaglandin was more efficient in Nelore cows. In second experiment, ten Nelore cows were divided in two groups (D0): EB plus injectable progesterone group (G-BE+P4); or EB group (G-BE). The results for G-BE+P4 and G-BE were: follicular wave emergency in days (FE; 3.6&plusmn;0.2 and 4.0&plusmn;0.1; P>0.05), variation in FE [(2.5 to 4.5) and (3.5 to 4.5)], IntOV (32.4&plusmn;1.8 and 33.6&plusmn;1.6; P>0.05), TS (7.7&plusmn;0.8 and 9.2&plusmn;1.2; P>0.05), degenerated embryos (0.6&plusmn;0.2 and 0.8&plusmn;0.2; P>0.05), TE (6.2±0.6 e 7.2±1.1; P>0.05), and FE (5.1&plusmn;0.7 and 6.3&plusmn;1.0; P>0.05). The third Experiment, ten Nelore cows were divided in two groups: G-1IATF (16h after LH) or G-2IATF (12 and 24h after LH). The results for G-1IATF and G-2IATF were: FolLH (16.2&plusmn;1.4 and 14.8&plusmn;1.2; P>0.05), TS (8.2±0.9 and 7.2±0.8; P>0.05), TE (4.3±0.7 and 4.2±0.6; P>0.05), FE (2.9±0.6 and 2.8±0.4; P>0.05) and unfertilized structures (0.6&plusmn;0.2 and 0.8&plusmn;0.2; P>0.05). There was no difference on embryo production when the cows were inseminated one (16h) or two (12 and 24h) inseminations.

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In the experiments, the incubation period (hours), the fertile eggs hatchability, the embryo mortality, the weight, length and quality of the newborn chicks were evaluated. Newborn chicks were allotted in the experimental facilities of the UFG to measure performance variables. Data were analysed using the R statistical package, version 2.14.2 at 5% probability level. In Experiment 1, no significant difference was observed in hatchability and embryo mortality between treatments. Chick quality and weight at seven days of age were worst for the group inoculated with 25(OH)D3. In Experiment 2, fertile egg hatchability and livability until 21 days of age were increased (p<0,05) for broilers obtained from 25(OH)D3 inoculated eggs. But, chick weight, weight gain, feed-intake and feed conversion until 21 days of age. In Experiment 3, no difference (p>0,05) was observed between treatments for fertile egg hatchability, embryo mortality, newly-hatched chick quality, average hatch weight, weight gain, feed intake, mortality and feed conversion from one to 35 days of age. No difference (p>0,05) occurred for leg problems evaluations like gait score, vagus-varus deformities, tibial discondroplasia, bone resistance and mineral density. Then, the use of 25(OH)D3 in ovo at 19 days of embryo development was not effective to increase performance and bone quality in broilers. / Foram desenvolvidos três experimentos com objetivos de avaliar os efeitos na eclodibilidade dos ovos férteis, mortalidade embrionária, qualidade do neonato, desempenho e a qualidade do esqueleto de frangos originados de embriões aos 18-19 dias de desenvolvimento embrionário, suplementados in ovo com 25-D-hidroxi-colecalciferol, 25(OH)D3. As incubações foram conduzidas no incubatório São Salvador Alimentos S/A. Na transferência e vacinação, para os três experimentos, os ovos com embriões viáveis foram inoculados com a solução controle e com 25(OH)D3 incorporados na vacina. A compatibilidade do produto foi avaliada anteriormente e as dosagens utilizadas foram zero e 1,250g de 25(OH)D3 equivalentes a 50 UI de vitamina D3. Os ovos foram acondicionados em sacos de filó, ar-permeável, para discriminar cada neonato. Nos experimentos, avaliou-se o período de incubação (horas), a eclodibilidade dos ovos férteis (%), a mortalidade embrionária (%), os pesos (g) e comprimentos dos neonatos (mm) e a qualidade do pintainho (escore). Os pintainhos foram enviados para o aviário experimental da Universidade Federal de Goiás para avaliação do desempenho. Os dados foram analisados pelo programa estatístico do software R (R DEVELOPMENT CORE TEAM, 2012). O nível de significância adotado foi de 5%. Experimento 1: Não houve diferença significativa na eclodibilidade e na mortalidade embrionária entre os tratamentos. A qualidade dos pintainhos e o peso aos sete dias foram piores para o grupo inoculado com 25(OH)D3. Conclui-se que o metabólito 25(OH)D3 não foi efetivo na melhoria da qualidade dos pintainhos incubados em máquina de estágio múltiplo. Experimento 2: Os resultados de eclodibilidade dos ovos férteis entre os tratamentos apresentaram diferença (p<0,05), obtendo-se maior eclodibilidade as aves inoculadas com 25(OH)D3. A utilização do aditivo 25(OH)D3 in ovo foi efetiva (p<0,05) na melhoria da eclodibilidade dos ovos férteis. O metabólico 25(OH)D3 melhorou a viabilidade dos frangos de corte até 21 dias de idade. Entretanto, não houve influencia (p>0,05) para peso médio, ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar de um aos 21 dias de idade. Conclui-se que o metabólito 25(OH)D3 foi efetivo na melhoria da eclodibilidade e qualidade dos pintainhos incubados em máquina de estágio único. Experimento 3: Não houve diferença (p>0,05) entre os tratamentos para os resultados de eclodibilidade dos ovos férteis, mortalidade embrionária e qualidade do neonato, peso médio, ganho de peso, consumo de ração, mortalidade e conversão alimentar de um a 35 dias de idade. Também, não houve diferença (p>0,05) entre os tratamentos para as avaliações de gait score, deformidade vagus-varus, discondroplasia tibial, resistência e densidade mineral óssea. Portanto, a utilização do aditivo 25(OH)D3 in ovo aos 19 dias de desenvolvimento embrionário não foi efetivo na melhoria do desempenho e do esqueleto de frangos de corte.

OBJETIVO: avaliar a histomorfometria do endométrio na fase lútea de mulheres férteis e inférteis. MÉTODOS: foram triadas 40 pacientes, 30 inférteis e 10 férteis, em seguimento na Clínica Ginecológica do HC-FMUSP, que concordaram em participar deste estudo. Foi realizada avaliação ultrassonográfica seriada a partir da menstruação, para determinação da ovulação. Na fase lútea as pacientes eram submetidas à histeroscopia. Foram excluídas 14 pacientes sendo 12 por falta durante a avaliação ultrassonográfica e 2 pela presença de pólipos. A casuística foi composta por 6 controles férteis, que foram comparadas a 20 casos inférteis (endometriose-8, causa tubo-peritoneal-5, causa masculina-5, sem causa aparente-2). Na histeroscopia foram coletadas duas biópsias dirigidas (sistema de Bettocchi) da parede posterior (terço distal), e da parede anterior (terço médio), e uma biópsia aspirativa com Pipelle. Foram avaliados parâmetros histomorfométricos endometriais. RESULTADOS: as duas formas de biópsia foram apropriadas para análise endometrial; a dirigida coletou menor área tecidual, porém sem sangue. Nenhum paciente fértil apresentou heterogeneidade endometrial (atraso de fase em algum sítio); isto ocorreu em 7 (35%) das inférteis (p=0,11). Foi diagnosticada endometrite em 2 (10%) casos. CONCLUSÃO: não foram observadas diferenças histomorfométricas entre o endométrio de mulheres férteis e inférteis na fase lútea. Parte das pacientes inférteis mostrou heterogeneidade endometrial e endometrite. A biópsia dirigida, assim como a aspirativa, foi adequada ao estudo endometrial na fase lútea / Objective: to evaluate the endometrial histomorphometry of fertile and infertile women during their luteal period. Methods: 40 female patients- 30 infertile and 10 fertile- who were being followed-up at the Gynecological Clinic at the Hospital das Clinicas (HC),-Faculdade de Medicina da Universidade de Sao Paulo (FMUSP), agreed to participate in the study. Serial ultra sonograms, starting from their menstrual period, were performed to identify their ovulation. In the luteal phase the patients underwent hysteroscopy. From the initial sample, 14 patients were excluded from the study, 12 of whom for being absent during scheduled ultra sonograms and 2 for presenting polyps. The final sample thus consisted of 6 fertile females (control subjects) who were compared to 20 patients with infertility, categorized as follows: 8 due to endometriosis, 5 due to peritoneal tube conditions, 5 due to male infertility, and 2 with no apparent cause. During the hysteroscopy 2 directed biopsies (Bettocchis System) of the posterior wall (distal third section) and of the anterior wall (medial third) were performed, as well as Pipelle sampling. Endometrial histomorpholometric parameters were evaluated. Results: the two forms of endometrial sampling performed were appropriate for the endometrial analysis. The directed biopsy collected tissue from a smaller area, but it had no blood. None of the fertile patients presented endometrial heterogeneity, i.e., phase delay in any site. In contrast, this occurred in 7(35%) of the infertile females (p=0.11). Endometritis was diagnosed in 2 (10%) of the cases. Conclusions: no histomorphometric differences were observed in the endometrium of the fertile and infertile female patients during their luteal phase. About a third of infertile cases (35%) displayed endometrial heterogeneity and a small percentage of which (10%) had endometritis. Both the directed biopsy and Pipelle sampling were found satisfactory for studies of endometrium during the luteal phase

Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Álan Maia Borges / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Luiz Sérgio de Almeida Camargo / Banca: Moysés dos Santos Miranda / Resumo: Esta pesquisa pretendeu estabelecer estratégias para aumentar a eficiência da produção in vitro de embriões (PIVE) bubalinos. Neste contexto, avaliou a eficiência de protocolos de sincronização de doadoras de oócitos bubalinas visando aumentar a disponibilidade e qualidade dos oócitos obtidos pela aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU) e o efeito da fonte de obtenção dos oócitos sobre a quantidade e qualidade dos mesmos. Além disso, analisou-se o efeito do fotoperíodo sobre a quantidade e qualidade do oócitos disponíveis, além da competência destes expressos pelas taxas de PIVE. Por fim, avaliou-se o efeito da adição do óleo essencial de Lippia origanoides (OELO) nas concentrações de 2,5; 5,0 e 10μg/mL, no meio de maturação in vitro (MIV) sobre as taxas de maturação oocitária, qualidade embrionária e PIVE em bovinos e bubalinos. Ovários e oócitos de animais não protocolados, protocolados por aspiração prévia dos folículos e protocolados com uso de hormônios esteróides e gonadotróficos, foram avaliados ultrassonograficamente e de acordo com a qualidade dos oócitos recolhidos por OPU. Demonstrou-se não haver variação na população folicular, no número e na qualidade dos oócitos recuperados por sessão, exceto uma redução dos folículos e oócitos Grau A foi notada quando o ciclo estral foi sincronizado por aspiração prévia dos folículos(p<0,05). Em relação a fonte de obtenção, para todos parâmetros avaliados, foi notada superioridade quando oócitos são recuperados de ovários de frigorífico(p<0,05). A qualidade dos oócitos recolhidos por OPU e a PIVE bubalinos foi influenciada pelo fotoperíodo na região estudada, elevando-se durante os meses de baixa luminosidade(p<0,05), fato não observado em bovinos. Por fim, a partir de avaliações da cromatina com DAPI, encontrou-se uma elevação da taxa de maturação nuclear em bovinos quando utilizou-se concentrações de... / Abstract: This study aimed to develop strategies to increase the efficiency of buffalo in vitro embryo production (IVEP). In this context, we evaluated the efficiency of synchronization protocols on buffalo oocyte donor aimed at increasing the availability and quality of oocytes obtained by ovum pick-up (OPU) and the effect of the source of obtaining oocytes on the quantity and quality. In addition, we analyzed the effect of photoperiod on the quantity and quality of oocytes available on ovary, beyond the competence of those expressed by the blastocyst rate. Finally, we evaluate the effect of essential oil of Lippia origanoides (EOLO) added at concentrations of 2.5, 5.0 and 10μg/ml, on in vitro maturation (IVM) media over oocyte maturation rate, embryo quality and IVEP on cattle and buffalo. Ovaries and oocytes of animals without protocol, protocol by prior aspiration of follicles and protocol with use of steroids and gonadotropic hormones were evaluated by ultrasonography and according to the of oocyte quality. It was demonstrated not vary the follicular population, number and quality of oocytes retrieved per session between the protocols but a reduction of follicles and Grade A oocytes was noted when the follicles were aspirated previously OPU. Regarding the oocyte source (live animals and abattoir ovaries), all evaluated parameters showed superiority when oocytes were derived from abattoir ovaries. The quality of oocytes collected by OPU and IVEP buffaloes was influenced by photoperiod in the region studied, increased when daylight decreases, which was not observed in cattle. Finally, from evaluations of chromatin stained with DAPI, it was found that bovine nuclear maturation rate increased when used concentrations of 2,5μg/ml EOLO. The quality of oocytes, expressed by cell number, increased when used concentrations of 2.5 and 5μg/ml of EOLO in buffaloes. Although it has not changed the blastocyst rate of PIVE in both species, the EOLO has ... / Doutor

SCRATCH2 é um fator de transcrição envolvido no desenvolvimento neural expresso em células pós-mitóticas. Identificamos que a retenção nuclear de SCRATCH2 é dada pelo domínio zinc-finger. A atividade repressora é modulada pelo domínio SCRATCH e não depende do domínio SNAG. O alinhamento de ortólogos de SCRATCH2 identificou uma sequência conservada na região N-terminal contendo os resíduos de fosforiláveis Y77 e S78. Mutação em Y77 ou S78 reduz a capacidade repressora de SCRATCH2, enquanto mutações em ambos resíduos resgatam sua função. Nossos dados sugerem que o domínio zinc-finger é responsável pela localização nuclear enquanto a atividade repressora é mediada pelo domínio SCRATCH. Já a identidade de Y77 e S78 é importante para a conformação correta proteína. O nocaute de SCRATCH2 aumenta a expressão de marcadores de progenitores intermediários (IP) e reduz o a expressão de marcadores de neurônios pós-mitóticos durante a neurodiferenciação de células-tronco. Esses dados sugerem que SCRATCH2 atua na manutenção de IP, e participa do início da diferenciação neural. / SCRATCH2 is a transcription factor involved in neural development expressed in postmitotic neural cells. Here, we identify that the nuclear retention of SCRATCH2 is controlled by the zinc-finger domain. The repressor activity is modulated by the SCRATCH domain and is independent of the SNAG domain. An analysis of SCRATCH2 through homology comparison identified a N-terminal conserved sequence containing two phosphorylatable residues, Y77 and S78. Single mutation in Y77 or S78 reduces SCRATCH2 repression ability while concomitant mutation in both rescue SCRATCH2 function. Our data suggest that the zinc-finger domain is responsible for nuclear retention of SCRATCH2 while residues Y77 and S78 are relevant for the protein correct conformation. In mouse embryonic stem cells neural induced towards corticogenesis, SCRATCH2 KO increases the levels of intermediate progenitors (IP) markers and reduces the level of early born neurons markers. This data suggests that SCRATCH2 plays a role in the maintenance of IP pool, thereby regulating the onset of neural differentiation.

OBJETIVO: avaliar a histomorfometria do endométrio na fase lútea de mulheres férteis e inférteis. MÉTODOS: foram triadas 40 pacientes, 30 inférteis e 10 férteis, em seguimento na Clínica Ginecológica do HC-FMUSP, que concordaram em participar deste estudo. Foi realizada avaliação ultrassonográfica seriada a partir da menstruação, para determinação da ovulação. Na fase lútea as pacientes eram submetidas à histeroscopia. Foram excluídas 14 pacientes sendo 12 por falta durante a avaliação ultrassonográfica e 2 pela presença de pólipos. A casuística foi composta por 6 controles férteis, que foram comparadas a 20 casos inférteis (endometriose-8, causa tubo-peritoneal-5, causa masculina-5, sem causa aparente-2). Na histeroscopia foram coletadas duas biópsias dirigidas (sistema de Bettocchi) da parede posterior (terço distal), e da parede anterior (terço médio), e uma biópsia aspirativa com Pipelle. Foram avaliados parâmetros histomorfométricos endometriais. RESULTADOS: as duas formas de biópsia foram apropriadas para análise endometrial; a dirigida coletou menor área tecidual, porém sem sangue. Nenhum paciente fértil apresentou heterogeneidade endometrial (atraso de fase em algum sítio); isto ocorreu em 7 (35%) das inférteis (p=0,11). Foi diagnosticada endometrite em 2 (10%) casos. CONCLUSÃO: não foram observadas diferenças histomorfométricas entre o endométrio de mulheres férteis e inférteis na fase lútea. Parte das pacientes inférteis mostrou heterogeneidade endometrial e endometrite. A biópsia dirigida, assim como a aspirativa, foi adequada ao estudo endometrial na fase lútea / Objective: to evaluate the endometrial histomorphometry of fertile and infertile women during their luteal period. Methods: 40 female patients- 30 infertile and 10 fertile- who were being followed-up at the Gynecological Clinic at the Hospital das Clinicas (HC),-Faculdade de Medicina da Universidade de Sao Paulo (FMUSP), agreed to participate in the study. Serial ultra sonograms, starting from their menstrual period, were performed to identify their ovulation. In the luteal phase the patients underwent hysteroscopy. From the initial sample, 14 patients were excluded from the study, 12 of whom for being absent during scheduled ultra sonograms and 2 for presenting polyps. The final sample thus consisted of 6 fertile females (control subjects) who were compared to 20 patients with infertility, categorized as follows: 8 due to endometriosis, 5 due to peritoneal tube conditions, 5 due to male infertility, and 2 with no apparent cause. During the hysteroscopy 2 directed biopsies (Bettocchis System) of the posterior wall (distal third section) and of the anterior wall (medial third) were performed, as well as Pipelle sampling. Endometrial histomorpholometric parameters were evaluated. Results: the two forms of endometrial sampling performed were appropriate for the endometrial analysis. The directed biopsy collected tissue from a smaller area, but it had no blood. None of the fertile patients presented endometrial heterogeneity, i.e., phase delay in any site. In contrast, this occurred in 7(35%) of the infertile females (p=0.11). Endometritis was diagnosed in 2 (10%) of the cases. Conclusions: no histomorphometric differences were observed in the endometrium of the fertile and infertile female patients during their luteal phase. About a third of infertile cases (35%) displayed endometrial heterogeneity and a small percentage of which (10%) had endometritis. Both the directed biopsy and Pipelle sampling were found satisfactory for studies of endometrium during the luteal phase