Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T23:40:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Scorisa_JulianaMilani_M.pdf: 9066155 bytes, checksum: eeedb401f741bc20f84fb7bef0f7b21d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória, desmielinizante do sistema nervoso central (SNC). Sua etiologia é desconhecida, porém, sua progressão se deve a ocorrência de uma importante resposta auto-imune. O acetato de glatirâmer (AG) é um medicamento utilizado em pacientes com esclerose múltipla e é constituído por um copolímero de 4 peptídeos homólogos à proteína básica da mielina (MBP), capaz de diminuir a exacerbação e o número lesões da doença. Pouco se sabe sobre o impacto do tratamento com AG sobre o SNC, principalmente, se este medicamento influencia na estabilidade das sinapses medulares durante o curso da doença. Uma molécula importante para a manutenção do SNC é o complexo de histocompatibilidade principal de classe (MHC I), que participa na regulação homeostática e função sináptica. Para este estudo, utilizamos o modelo animal da EM, a Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) e a avulsão de raízes motoras da medula espinhal para investigar a plasticidade sináptica e reatividade glial sobre o efeito do AG no SNC. A doença (EAE) foi induzida em camundongos C57BL/06 que foram dividivos em 4 grupos. Trinta animais foram submetidos à EAE e tratados com AG, sendo 15 tratados até o surto da doença e 15 tratados até a fase de remissão dos sinais clínicos. Para o grupo placebo, 30 animais foram tratados com solução salina e foram divididos também em 2 sub-grupos, com 15 animais tratados até o surto e 15 tratados até a remissão. Já a avulsão (AV) foi realizada em 20 ratos Lewis que foram divididos em 2 grupos com 10 animais cada, um grupo tratado com AG e um grupo tratado com placebo (salina) por 14 dias. Os resultados dos camundongos submetidos a EAE foram analisados por imunoistoquímica (n=5) e Western blotting (n=5). Uma análise qualitativa dos motoneurônios medulares e suas aferências também foi realizada através de microscopia eletrônica de transmissão (n=5). Os ratos avulsionados (n=20) foram divididos em grupos de 10 animais para o estudo imunoistoquímico e 10 para avaliação neuronal. Os resultados mostram que o AG tem a capacidade de diminuir a expressão de MHC classe I nos camundongos com EAE e nos ratos submetidos AV; também influencia a manutenção de sinapses e regula parte do processo inflamatório desenvolvido pela doença ou pela lesão mecânica. Houve uma diminuição, em ambos os experimentos (EAE e avulsão), da expressão da proteína astrocitária, GFAP- glial fibrillary acidic protein, assim como uma diminuição da reatividade microglial observada por Iba-1. Através da imunomarcação das sinapses na coluna anterior da medula espinhal, pode-se observara maior preservação desses inputs nos animais tratados. A avaliação da sobrevivência neuronal realizada nos ratos submetidos à AV também mostrou maior preservação de motoneurônios nos animais tratados. Portanto, o AG parece exercer um papel relevante no SNC diminuindo a expressão de MHC I e proporcionando melhor estabilidade sináptica e preservação neuronal, tanto em uma situação de lesão autoimmune quanto após traumas mecânicos no SNC / Abstract: Multiple sclerosis (MS) is an inflammatory and demyelinating disease, which etiology is unknown. Although it is the result of a major autoimmune response. The Glatiramer acetate (GA) is a drug used to treat MS and is composed by four peptides homologous to the myelin basic protein (MBP), that is able to reduce the exacerbation and injuries to the CNS. Nevertheless it is possible that GA develops a direct effect on the CNS by modulating the expression of the major histocompatibility complex of class I (MHC I), which has recently been involved in the synaptic plasticity process. For this study an animal model for MS was used, namely the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as well as the spinal motor root avulsion (AV) was used to investigate the synaptic plasticity and glial react in the CNS after GA treatment. EAE was induced in C57BL/6 mice which were divided into 4 groups. Thirty animals were induced to EAE and treated with GA, 15 animals were treated until the placebo group reached the exacerbation of the disease and other 15 animals were treated until the remission phase. The placebo treated group, treated up to the followed same procedures of the GA treated groups. However the animals were given only saline solution. In this way, 15 animals were treated up to the exacerbation phase and 15 animals were treated until the remission phase. The AV it was performed in 20 Lewis adult rats that were divided into 2 groups with 10 animals each. The first group was treated with GA (n=10) and second group was treated with saline (n=10) for 14 days. The treatment was initiated soon after the lesion. The EAE results were analyzed by immunohistochemistry (n = 5), Western Blotting (n = 5) and a qualitative analysis of spinal motoneurons and their afferents was also performed by transmission electron microscopy (n = 5). Avulsed animals (n=20) were divided into groups for the immunohistochemichal study (n=10) and for neuronal survival counting (n=10). The results showed that GA has the ability to decrease MHC class I expression in mice with EAE and in rats after AV. In this way, influences the synaptic plasticity and inflammatory processes regulation during the disease and after a mechanical injury. There was a decrease in astrocyte reactivity (GFAP-glial fibrillary acidic protein expression) and a decrease in microglial reactivity observed by Iba-1. Expression analyses immunolabeling was more preserved after GA administration and the neuronal count performed in the AV rats also showed increased motoneurons survival. Taken together, the present results indicate that GA plays a role in the CNS by reducing the MHC class I expression in the spinal cord and environmental. Thus providing better synaptic stability and neuronal preservation during the course of EAE and CNS lesion / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BarbizanPetinari_Roberta_M.pdf: 3388045 bytes, checksum: 36c57768eef8605e519d96d0a068487a (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A avulsão das raízes nervosas ventrais (ARV) promove a axotomia dos motoneurônios na interface entre o sistema nervoso central e periférico. Sabe-se que apesar da intensa reação inflamatória, esta lesão, quando realizada durante o curso da encefalomielite autoimune experimental (EAE), resgata um significativo número de motoneurônios. A interpretação para tal evento seria a produção de fatores neurotróficos produzidos pelas células T. O presente trabalho teve por objetivo estudar a sobrevivência neuronal, bem como o processo de eliminação sináptica e a reatividade dos astrócitos e da microglia em relação aos motoneurônios axotomizados através de ARV, durante as fases de surto e remissão da EAE. Ratos Lewis fêmeas (n=30) com 7 semanas de idade foram submetidos à avulsão das raízes ventrais L4-L6. Esses animais foram divididos em 3 grupos: o GRUPO1 - não sofreu indução da doença. Dois grupos foram imunizados com proteína básica de mielina (MBP) associada à Mycobacterium tuberculosis (MT) para a indução da EAE, trinta minutos após a lesão nervosa, sendo o GRUPO2 - investigado na fase de surto e o GRUPO3 - na fase de remissão. As intumescências lombares foram dissecadas para a realização de imunoistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão. Adicionalmente, a sobrevivência dos motoneurônios foi avaliada pela contagem dos motoneurônios presentes no núcleo motor dorsolateral da medula lombar na região da lesão corados com Nissl. Os resultados do presente estudo indicam que os animais axotomizados com EAE apresentaram menor reatividade da glia, tanto de astrócitos, quanto da microglia, maior cobertura sináptica e sobrevivência neuronal, em comparação aos animais somente avulsionados. Apesar da visão tradicional de que a resposta imune no SNC possa atuar negativamente na delicada rede neuronal, os presentes resultados apontam para um papel neuroprotetor do processo inflamatório durante o surto EAE. / Abstract: Ventral root avulsion is a proximal lesion of motoneurons in which the motor rootlets are torn out at the surface of the spinal cord resulting in extensive neuronal death. It has been previously shown that, if such lesion is performed during the course of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), a significant number of motoneurons can be rescued in spite of the intense inflammatory reaction. The interpretation for that is that the influx of T cells results in the production of a number of neurotrophic factors. Synaptological changes may be involved in neuronal degeneration and the better understanding of its role may be of importance for developing new strategies leading to neuronal survival. In this sense, the objective of the present work was to evaluate neuronal survival, astroglial reaction and synaptic inputs changes within the motor nucleus after ventral root avulsion during peak disease and after EAE remission. Lewis rats were subjected to unilateral avulsion of lumbar ventral roots (VRA) which were divided into tree groups: only VRA, VRA at peak of EAE and VRA during EAE remission. The animals were sacrificed and their lumbar spinal cords processed for immunohistochemistry, transmission electron microscopy (TEM) and motoneuron counting. The results indicated a reduction in glial reaction, increase in the synaptic covering of the motoneurons and neuronal survival in VRA+EAE compared to VRA alone. The present findings indicate that CNS inflammation may influence positivelly the synaptic plasticity as well as the stability of neuronal networks. This may in turn positively influence the survival of lesioned neurons. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-05T10:18:50Z No. of bitstreams: 1 larasoaresaleixodecarvalho.pdf: 1977890 bytes, checksum: 4b904155d536789131ed158997fa2884 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T10:33:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 larasoaresaleixodecarvalho.pdf: 1977890 bytes, checksum: 4b904155d536789131ed158997fa2884 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T10:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 larasoaresaleixodecarvalho.pdf: 1977890 bytes, checksum: 4b904155d536789131ed158997fa2884 (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune, crônica, progressiva, inflamatória e desmielinizante do sistema nervoso central (SNC) que afeta 2,5 milhões de pessoas em todo o mundo. A encefalomielite autoimune experimental (EAE) é o modelo mais aceito para o estudo da patogênese da EM, devido à sua similaridade clínica e histopatológica a esta doença. Ambas apresentam processos fisiopatológicos mediados por células Th1 e Th17, com produção de citocinas próinflamatórias, como Interferon-gama (IFN-), Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α) e Interleucina 17 (IL-17) e pelo óxido nítrico (NO), produzido principalmente por macrófagos. Atualmente, os medicamentos utilizados para a EM atuam sobre alguns desses mediadores inflamatórios, porém devido ao alto custo e efeitos adversos apresentados torna-se necessária a busca por novas terapias que sejam capazes de modular a produção destes mediadores inflamatórios. Assim, no presente trabalho, investigou-se o efeito imunomodulatório in vitro do ácido caurenoico e do partenolido sobre a produção de NO, TNF-α, IFN-, IL-17 e Interleucina 6 (IL-6) em culturas de esplenócitos de camundongos induzidos com EAE. Para isso, a EAE foi induzida em fêmeas de camundongos C57Bl/6 com MOG35-55 e após 22 dias da indução elas foram eutanasiadas para obtenção dos esplenócitos. Estas células, reestimuladas com MOG35-55 e lipopolissacarídeo (LPS), receberam as substâncias testadas em três concentrações diferentes (25, 50 e 100 µM para o ácido caurenoico, e 1, 5 e 20 µM para o partenolido). O ácido caurenoico reduziu os níveis de NO, TNF-α, IFN-, IL-6 e IL-17 nas duas maiores concentrações avaliadas. O partenolido diminuiu a produção de IL-6 nas três concentrações, de NO e IL-17 nas duas maiores concentrações e de TNF-α, IFN- somente na maior concentração avaliada. Os resultados obtidos neste trabalho sugerem que o ácido caurenoico e o partenolido podem modular a produção dos mediadores químicos em questão, demonstrando o grande potencial destas substâncias para o desenvolvimento de novas abordagens na EAE, modelo animal da EM. / Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease, chronic, progressive, inflammatory and demyelinating disease of the central nervous system (CNS) that affects 2.5 million people worldwide. The experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most accepted model for studying the pathogenesis of MS due to its clinical and histopathologic similarity to this disease. Both have pathophysiological processes mediated by Th1 and Th17 cells, with production of pro-inflammatory cytokines such as interferon-gamma (IFN-), Tumor Necrosis Factor-alpha (TNF-α) and interleukin 17 (IL-17) and mediated nitric oxide (NO), mainly produced by macrophages. Currently used medications for MS act on some of these inflammatory mediators, but due to the high cost and adverse effects displayed becomes necessary to search for new substances which are capable of modulating the production of these inflammatory mediators. Thus, in the present study investigated the in vitro effect immunomodulatory of the kaurenoic acid and parthenolide on the production of NO, TNF-α, IFN-, IL-17 and Interleukin 6 (IL-6) in splenocyte cultures of mice induced with EAE. For this, EAE was induced in female C57Bl/6 with MOG35-55 and animals were euthanized on the 22th day post induction for obtaining splenocytes. These cells restimulated with MOG35-55 and lipopolysaccharide (LPS) were given the substances tested at three different concentrations (25, 50 and 100 µM for kaurenoic acid and 1, 5 and 20 µM for the parthenolide). The kaurenoic acid reduced the levels of NO, TNF-α, IFN-, IL-6 and IL-17 at the two highest concentrations tested. Parthenolide was able decrease the production of IL-6 in all tested concentrations, although the NO and IL-17, was only decreased by the two highest concentration and TNF-α, IFN was decreased only the highest concentration analyzed. The results obtained in this study suggest that kaurenoic acid and parthenolide may modulate the production of inflammatory mediators, demonstrate the great potential of these substances as prototypes for the development of new approaches in EAE, an animal model of MS.

Foram estudados os efeitos da suplementação de vitamina E (VE) e selênio (Se) sobre a imunidade de galinhas vacinadas contra Escherichia coli (EC) patogênica para suínos e com o vírus da encefalomielite aviária (VEA). Foram avaliados peso corporal (PC), peso de ovos (PO) e produção de anticorpos (AcP) em noventa poedeiras (H&N nick chick) com 49 semanas de idade alimentadas à vontade com dietas suplementadas com 0, 50, 150, 250 e 250 UI VE/kg + 0,3 ppm de Se. Às 51 semanas de idade, metade das galinhas foram vacinadas contra EC e todas as aves foram vacinadas contra VEA. Duas semanas após, receberam uma segunda dose da vacina contra EC. Amostras de sangue foram coletadas semanalmente e a quantidade de IgY foi determinada por ELISA, como densidade ótica (DO). As aves vacinadas apresentaram maior DO do que as aves não vacinadas (P≤0,05). As DO foram significativamente aumentadas (P≤0,05) quando as aves vacinadas foram alimentadas com 50 e 150 UI de VE/kg e comparadas com as DO das aves que receberam a dieta de 250 UI de VE + Se. Se não afetou AcP, PC e PO. A vacinação e a VE suplementada não afetaram PC. O PO não foi afetado pela vacinação, mas foi maior (P≤0,05) nas semanas 3, 5 e 7, quando as poedeiras receberam 250 UI VE/kg e comparados com aquelas que receberam 50, 150 e 0. A AcP contra VEA foi influenciada pela VE (P≤0,13). Cento e cinqüenta UI VE e 0 UI VE aumentaram IgY produzida, quando comparados a 250 UI. Também o Se aumentou AcP. Os resultados deste estudo sugerem que níveis médios de VE aumentam a produção de IgY por poedeiras vacinadas e Se adicionado ao mais alto nível de VE também possui efeito imunomodulador.

Orientador: Liana Maria Cardoso Verinaud / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T08:18:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanucoli_FabiodosSantosMachado_M.pdf: 3072241 bytes, checksum: 66a7959825671f33da79f21f4dbeda55 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica de origem autoimune que afeta o sistema nervoso central (SNC), provocando disfunções neurológicas em decorrência de desmielinização axonal, principalmente na substância branca dos órgãos do SNC. A doença acomete mais de 2 milhões de pessoas no mundo todo e não tem cura. As abordagens terapêuticas utilizadas com sucesso consistem na aplicação de anticorpos monoclonais, citocinas imunomoduladoras e fármacos antiinflamatórios. Ainda assim, tais estratégias são dependentes de produtos de alto custo e toxicidade. A utilização de fármacos antimaláricos no tratamento da Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE, modelo experimental de EM), como cloroquina e diidroartemisinina, tem apresentado resultados promissores na atenuação do quadro clínico dos camundongos; entretanto, os efeitos tóxicos dessas substâncias constituem um importante fator limitante para a utilização clínica. Neste sentido, o presente trabalho teve por objetivo caracterizar os efeitos terapêuticos da primaquina (PQ), um fármaco antimalárico análogo à cloroquina mas com toxicidade reduzida, na EAE emvcamundongos C57BL/6. Para tanto, camundongos foram tratados com PQ por via intraperitoneal (i.p.) por cinco dias consecutivos e os efeitos da administração direta foram avaliados sobre as subpopulações de linfócitos T esplênicos. Semelhantemente, camundongos portadores de EAE foram tratados com PQ como acima e o desenvolvimento da doença foi avaliado. Os resultados obtidos mostraram uma redução significativa na severidade da EAE em camundongos tratados com primaquina em comparação com animais pertencentes ao grupo controle. A melhora no quadro clínico se correlacionou com (i) aumento na expressão de genes de citocinas anti-inflamatórias e decréscimo na expressão de genes de citocinas inflamatórias, (ii) redução na ativação de micróglia e (iii) diminuição da reatividade glial no SNC de camundongos tratados com PQ em relação aos não tratados. Também se verificou um aumento na frequência de células T reguladoras em baços de camundongos tratados com PQ. Posteriormente, células T reguladoras (Treg, CD4+CD25+) e células T efetoras (CD4+CD25- ) foram isoladas de baços de camundongos tratados com PQ e transferidas adotivamente a camundongos portadores de EAE. Foi observada uma redução na severidade da EAE em camundongos recipientes de células Treg em comparação com camundongos recipientes de células T efetoras. De forma semelhante ao observado em camundongos tratados diretamente com PQ, a menor severidade da EAE se correlacionou com redução na expressão de mediadores inflamatórios e de reatividade glial no SNC. A capacidade imunossupressora de PQ foi avaliada também. Neste sentido, células dendríticas (DCs) diferenciadas a partir de precursores de medula óssea foram tratadas com PQ e avaliadas quanto ao seu perfil fenotípico e funcional. Observou-se uma redução na expressão de marcadores de maturação de DCs tratadas com PQ (DC-PQ) em comparação às células não tratadas (DC-PBS). A transferência adotiva de DC-PQ resultou na redução do quadro clínico de EAE. Os resultados obtidos nesse trabalho permitem concluir que a primaquina é um fármaco eficaz na atenuação dos sintomas da EAE por meio da modulação de componentes celulares e moleculares do sistema imune / Abstract: Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune chronic inflammatory disease that affects the central nervous system (CNS) causing neurological disorders arised from axonal demyelination, particularly in the white matter of the CNS organs. The disease affects more than 2 million people worldwide and still has no cure. The successfully used therapeutic approaches consist in the application of monoclonal antibodies, immunomodulatory cytokines and anti-inflammatory drugs. Still, such strategies are dependent on expensive and toxic drugs. The use of antimalarial drugs in the treatment of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, experimental model of MS), such as chloroquine and dihydroartemisinin, has shown promising results in attenuation of the clinical signs of mice; however, the toxic effects of these substances are an important limiting factor for clinical use. In this sense, this study aimed to characterize the therapeutic effects of primaquine (PQ), an antimalarial drug analog to chloroquine but with reduced toxicity, in EAE in C57BL / 6 mice. To this end, mice were treated with PQ intraperitoneally (i.p.) for five consecutive days, and the effects of direct administration were evaluated on spleen T lymphocyte subpopulations. Similarly, mice bearing EAE were treated with PQ as above, and disease development was evaluated. The results showed a significant reduction in the severity of EAE in mice treated with primaquine compared to animals in the control group. Amelioration of the clinical signs was correlated with (i) an increase in gene expression of anti-inflammatory cytokines and decrease in gene expression of inflammatory cytokines, (ii) reduction in microglia activation and (iii) the decreased CNS glial reactivity in mice treated with PQ compared to untreated group. There was also an increase in the frequency of regulatory T cells in the spleens of mice treated with PQ. Subsequently, regulatory T cells (Tregs, CD4+CD25+ ) and effector T cells (CD4+CD25-) were isolated from spleens of mice treated with PQ, and adoptively transferred to mice with EAE. It was observed a reduction in the severity of EAE in mice recipients of Treg cells compared to mice recipients of effector T cells. Similarly to what was observed in mice directly treated with PQ, the lower severity of EAE was correlated with a reduction in the expression of inflammatory mediators and glial reactivity in the CNS. The immunosuppressive capacity of PQ was evaluated as well. In this regard, dendritic cells (DCs) differentiated from bone marrow precursors were treated with PQ and assessed for phenotypic and functional profile. It was observed a reduction in the expression of DC maturation markers treated with PQ (DC-PQ) compared to untreated cells (DC-PBS). The adoptive transfer of DC-PQ resulted in the reduction of the clinical signs of EAE. The results of this work have shown that primaquine is an effective drug in ameliorating the symptoms of EAE through modulation of cellular and molecular components of the immune system / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T11:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_GleidyAnaAraujo_M.pdf: 28585855 bytes, checksum: aaac289d72ca956b0b61eb90ac8c228e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A esclerose múltipla se caracteriza por gerar uma inflamação esmielinizantecrônica e de caráter autoimune no sistema nervoso central, gerando uma série desinais e sintomas clínicos. Um modelo experimental para estudo da esclerosemúltipla é a encefalomielite autoimune experimental (EAE). Durante o curso da EAE, observa-se no SNC, perda de contatos sinápticos, bem como aumento da gliose reativa, envolvendo tanto astrócitos quanto células microgliais. Assim, a amenização dessas alterações, por tratamentos farmacológicos, pode ser útil no tratamento dos sintomas da EM. Neste sentido, o emprego da pregabalina, um ligante da proteína ?2-? associada a canais de cálcio voltagem-dependentes em neurônios, pode se constituir numa estratégia para o controle dos sintomas da doença. Assim, o presente estudo investigou o efeito da pregabalina sobre o curso da EAE, através da análise clínica de ratos Lewis imunizados com MBP e avaliação imunoistoquímica da medula espinal, utilizando marcadores para sinapses, astrogliose e reação microglial. Adicionalmente, através de RT-PCR, avaliou-se a expressão gênica de interleucinas pró e anti-inflamatórias, bem como a recuperação motora nos grupos placebo e tratado, foi avaliada pelo walking track test (CatWalk System). Os resultados demonstraram que o tratamento com pregabalina foi capaz de atrasar e amenizar os sinais clínicos e morfológicos da EAE, bem como reduzir a perda sináptica e a reação astroglial na medula espinal. Ainda, o tratamento resultou numa regulação positiva de genes anti-inflamatórios. De forma similar, a administração desse fármaco permitiu um mais rápido restabelecimento de parâmetros de marcha. Os resultados do presente estudo indicam que a pregabalina apresenta características neuroprotetoras e antiinflamatórias que refletem positivamente na amenização da doença, mostrando potencial para o uso clínico, em associação aos imunomoduladores atualmente empregados / Abstract: The multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease and neurodegenerative that affects young adults. It is characterized by generating a chronic demyelinating autoimmune inflammation in the central nervous system. An experimental model for the study of multiple sclerosis is the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), induced by immunization with antigenic proteins of myelin of the central nervous system, dissolved in adjuvants. The present study investigated the evolution of the disease in pregabalin treated animals up to the remission phase. The results demonstrated a delay on the onset of the disease with statistical differences at the 10th and the 16th day after immunization For the gait evaluation, the walking track test (CatWalk) was used to evaluate different parameters related to motor function. Although no difference between groups was obtained for the foot print pressure, the regularity index was improved post treatment, indicating a better motor coordination. The immunohistochemical analysis of synapse preservation and glial reactivity revealed that pregabalin treatment improved the overall morphology of the spinal cord. A preservation of circuits was depicted and astroglial reaction was downregulated during the course of the disease. RT-PCR data were in line with the immunolabeling observations and indicated a shift of the immune response towards an anti-inflammatory response. Overall, the present data indicate that pregabalin is efficient for reducing the seriousness of EAE, delaying its course as well as reducing synaptic loss and astroglial reaction / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Resultados obtidos pelo nosso grupo demonstraram, in vitro, que a PGE2 é capaz de modular a sobrevivência de linfócitos TCD4+ protegendo essas células da morte. Dentro do modelo de EAE, nossa hipótese é que a PGE2 liberada pelas APCs, durante a fase de indução, module a sobrevivência de linfócitos autorreativos específicos induzindo a doença. Realizamos o tratamento de camundongos submetidos à EAE com indometacina durante 5 dias e notamos que houve redução da EAE associada à redução de linfócitos produtores de IFN-γ, IL-17 e GM-CSF, e macrófagos infiltrantes e microglias ativadas, no SNC. O tratamento alterou a freqüência de células em proliferação e a frequência de células produtoras de IFN-γ e IL-17 na periferia e a concentração dessas citocinas. Esses resultados sugerem que a indometacina reduz o desenvolvimento da EAE e sua resposta antígeno-específica demonstrando a sua importância na modulação das respostas de linfócitos T na autoimunidade. / Results obtained by our group demonstrated in vitro that PGE2 is able to modulate CD4+ T cells survival protecting these cells from death. Within the EAE model, we hypothesized that PGE2 released by APCs during the induction phase, modulate survival of autoreactive specific lymphocytes by induction the disease. We carried out the treatment of EAE in mice subjected to indomethacin for 5 days and noticed that there is reduction of EAE associated with decreased IFN-γ, IL-17 and GM-CSF producing T cells, and infiltrating macrophages and activated microglia in the CNS. The results suggest that indomethacin reduces EAE and its antigen-specif response demonstrating their importance in the modulation of T lymphocyte responses in autoimmunity.

O estudo dos efeitos do estresse em modelos animais contribui para investigar os mecanismos de sinalização envolvidos nas enfermidades humanas. O projeto foi dividido em duas partes. Primeiramente investigou-se o efeito do estresse crônico imprevisível (ECI) na evolução clínica da encefalomielite autoimune experimental (EAE) e as concentrações circulantes de corticosterona (CORT). O ECI agravou os sinais clínicos da EAE em ratos, mas as concentrações plasmáticas de CORT durante o desenvolvimento da doença pareceram depender unicamente do desafio imunológico. Posteriormente investigaram-se os mediadores inflamatórios e o estresse oxidativo em diversas áreas do SNC de ratos submetidos à isquemia e reperfusão mesentérica. Foram observadas alterações distintas, conforme o tecido analisado, na expressão gênica de NOS e COX, atividade da NOS Ca2+-dep e da arginase e no conteúdo de TBARS. Conclui-se que, nas primeiras horas de reperfusão intestinal, as estruturas analisadas reagem diferentemente ao estresse oxidativo. / The study of stress effects in different animal models help to clarify signalization mechanisms involved in human diseases. The present project was divided in two parts. Firstly, we investigated the effects of chronic unpredictable stress (CUS) on the course of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and circulating corticosterone (CORT) concentrations. CUS aggravated the clinical signs of the disease in Lewis rats. However, plasma CORT during the development of clinical signs seemed to be solely dependent on the immunological challenge. Secondly, we investigated the oxidative and defense mechanisms in several CNS regions of rats submitted to an intestinal ischemia-reperfusion model. There were distinct results, as tissue analysis, in genic expression of NOS and COX, calcium-dependent nitric oxide synthase and arginase activities and TBARs content. Based on these results, we concluded that, at least during the first two hours of intestinal reperfusion, CNS lesions may be efficiently prevented by defense mechanisms able to modulate the oxidative injury.

Os macrófagos são células fagocíticas derivadas dos monócitos sanguíneos produzidos pela medula óssea e estão diretamente envolvidos em um conjunto de processos biológicos vitais. Durante o repasto sanguíneo, fêmeas do mosquito Aedes aegypti inoculam saliva na pele de seu hospedeiro vertebrado e, devido sua localização estratégica nos tecidos, os macrófagos estão dentre as primeiras células residentes a ser exposta a saliva. Apesar dessa evidência fisiológica, pouco se sabe sobre os efeitos imunomoduladores da saliva desse mosquito sobre os macrófagos. Assim, o objetivo deste projeto foi avaliar o papel dos componentes salivares de A. aegypti em macrófagos murinos ativados por LPS+IFN-γ e o potencial efeito de uma proteína salivar no desenvolvimento da encefalomielite autoimune experimental (EAE), um modelo experimental para estudo da esclerose múltipla. Em conclusão, o EGS de A. aegypti apresenta efeito imunomodulatório sobre macrófagos peritoneais ativados com LPS e IFN-γ. Além disso, nossos resultados sugerem que a proteína identificada com possível inibidor da IL-6 produzida por macrófagos ativados pode ser capaz de diminuir a polarização de respostas Th1 e Th17, afetando assim o desenvolvimento da EAE. / Macrophages are phagocytic cells derived from blood monocytes produced by the bone marrow and are directly engaged in a set of vital biological processes. During blood feeding, Aedes aegypti female mosquitoes inoculate saliva into the skin of their vertebrate hosts and, due to its strategic location in the tissues, macrophages are possibly among the first resident cells to be exposed to saliva. Despite this physiological evidence, little is known about the immunomodulatory effects of this mosquitos saliva on macrophages. Thus, the aim of this study was to evaluate the role of A. aegypti salivary components in LPS/IFN-γ-activated murine macrophages and the potential effect of a salivary protein on the development of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), an experimental model for multiple sclerosis studies. In conclusion, A. aegypti SGE presents immunomodulatory effect on peritoneal macrophages activated by LPS/IFN-γ. Furthermore, our results suggest that the protein identified as a putative inhibitor of IL-6 produced by activated macrophages may be able to down modulate the polarization of Th1 and Th17 responses, thus affecting the development of EAE.

A esclerose múltipla (EM) é doença desmielinizante do sistema nervoso central com vários sinais e sintomas, dentre eles a paralisia muscular. Essa paralisia foi estudada neste trabalho utilizando um modelo animal (camundongo) de EM, a Encefalomielite Autoimune Eperimental (EAE). Comparando a controles, os animais EAE, além da paralisia muscular, apresentaram diminuição da massa corporal e do músculo extensor longo dos dedos (ELD). Isolado com ou sem o nervo isquiático, o ELD mostrou decréscimo das contrações indiretas e diretas, tanto isoladas como tetânicas, e maior resistência à fadiga muscular. No ELD, o bloqueador neuromuscular pancurônio mostrou potência semelhante sobre contrações indiretas isoladas, em animais EAE e controles, enquanto as contrações indiretas tetânicas foram mais resistentes ao pancurônio, em animais EAE. A área de secção transversa das fibras musculares foi menor e houve troca (shift) de tipos de fibras de IIB para IIA, em animais EAE. Concluiu-se que as alterações nos animais EAE são tanto da transmissão neuromuscular como do músculo. / Multiple sclerosis (MS) is a demielinating disease of the Central Nervous System with a number of signs and symptoms, among them muscle paralysis. In this work this paralysis was studied using an animal (mouse) model of MS: the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Compared to controls, the EAE animals, besides muscle paralysis, had a lower body and extensor digitorum longus (EDL) muscle mass. Isolated with or without the sciatic nerve, the indirect and the direct isolated contractions of the EDL were smaller and the muscle fatigue was lower, in EAE animals. The neuromuscular blocker pancuronium was equally potent on indirect isolated contractions, in control and EAE animals, while the tetanic contractions were more resistant to pancuronium, in EAE animals. Compared to controls, the area of the transverse section of the muscle fibers was smaller and there was a shift from the IIB to the IIA type of fiber in EAE animals. It is concluded that the alterations in EAE animals result from changes in the process of neuromuscular transmission and in the muscle.