Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-24T02:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teles_JulianaAndrade_D.pdf: 1120177 bytes, checksum: 722ff9118011c8e9f019532ed08cc69b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A enrofloxacina (ENR) é um antimicrobiano de exclusiva aplicação veterinária e possui como metabólito a ciprofloxacina (CIP), exclusiva de uso humano. No Brasil, a ENR não é permitida na aquicultura, porém, há evidências do seu uso nesse sistema de produção de alimentos. Por este motivo, em 2010, o MAPA (Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento) através do Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em produtos de origem animal (PNCRC/Animal), a incluiu na lista dos antimicrobianos a serem monitorados em peixes de cultivo. Diante da intensificação na produção de tilápias no Brasil, da possível utilização indevida da ENR na piscicultura brasileira, da falta de informações terapêuticas com ENR para esta espécie e dos danos à saúde pública que isto pode gerar através do uso indiscriminado desse antimicrobiano, o presente trabalho teve o objetivo de realizar estudo farmacocinético de dose única ENR (10 mg kg-1 p.v) através de ração medicada (0.1% de ENR) em tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus). A ENR (padrão analítico = 98%) foi dissolvida em solução alcoólica acidificada e adicionada a uma solução contendo o polímero, polivinilpirrolidona (PVP), e incorporada à ração comercial. O teor de ENR na ração foi quantificado (1.047 mg g-1) utilizando cromatografia líquida de alta eficiência, com detector de fluorescência (HPLC-FLD). Os peixes foram medicados através dessa ração e amostras de plasma e músculo foram coletadas nos seguintes tempos: 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 e 120h após a administração. Foram desenvolvidos e validados métodos analíticos em HPLC-FLD para quantificação da ENR e CIP nas matrizes plasma e músculo. Os métodos analíticos apresentaram desempenho satisfatório na matriz plasma com limites de quantificação (LOQ) de 3 ng mL-1 obtidos para ambos analitos e 10.0 e 7.0 ng g-1, no músculo, para CIP e ENR, respectivamente. Em todos os métodos foram utilizadas para quantificação dos analitos, curvas analíticas construídas pela fortificação das matrizes. Quanto aos parâmetros farmacocinéticos obtidos da ENR, para plasma e músculo, a concentração máxima obtida foi de 1.241 ± 0.423 µg mL-1 e 2.166 ± 0.742 µg g-1, respectivamente, no tempo de 8h demonstrando absorção lenta. O alto volume de distribuição (Vd) no plasma (7.03L kg-1), os valores da relação entre concentração músculo/plasma (1.12 a 3.82) indicaram boa distribuição no tecido muscular. Foi possível detectar e quantificar o metabólito (CIP), porém a taxa de conversão foi baixa (1.3%). Por último, o T1/2Ke de 2.08 dias no músculo, indica eliminação lenta e longo período de carência para que o produto cárneo possa ser consumido. O uso de antimicrobianos sem dados toxicológicos e farmacológicos para a espécie a qual se destinam tem dentre várias consequências, o aumento do risco à exposição de resíduos com valores acima daqueles permitidos (LMRs) e aumento na incidência/prevalência de resistência bacteriana no animal e no ser humano / Abstract: Enrofloxacin (ENR) is an exclusive antimicrobial veterinary application and has as metabolite ciprofloxacin (CIP), exclusive for human use. In Brazil, the ENR is not permitted in aquaculture, however, there is evidence of its use in this system of food production. For this reason, in 2010, MAPA (Ministry of Agriculture, Livestock and Supply) through the National Plan for Control of Residues and Contaminants in animal products (PNCRC/Animal), included in the list of antimicrobials to be monitored in fish cultivation. Given the intensification of tilapia production in Brazil, the possible improper use of ENR in Brazilian farming, the lack of information with therapeutic ENR for this species and harm to public health this could generate through the indiscriminate use of this antimicrobial, the aim of this work was to realize a single-dose pharmacokinetic study with ENR (10 mg k-1 bw) through medicated feed (0.1% ENR) in the Nile tilapia (Oreochromis niloticus). ENR (analytical standard = 98 %) was dissolved in acidified alcohol solution and added to a solution containing the polymer, polyvinylpyrrolidone (PVP ) and incorporated into commercial feed. The content of ENR in feed medicated was quantified (1.047 mg g-1) using high performance liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FLD). The fish were medicated and its plasma and muscle samples were collected at the following times: 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96 and 120h after administration. Analytical methods were developed and validated for HPLC-FLD for quantification of ENR and CIP in plasma and muscle. Analytical methods showed satisfactory performance in plasma with limits of quantification (LOQ ) of 3 ng mL-1obtained for both analytes, and in muscle,7.0 and 10.0 ng g-1 for CIP and ENR, respectively. In all methods were used for quantification of analytes, standard curves constructed by fortification of matrices. About the pharmacokinetic parameters obtained from the ENR for plasma and muscle, the maximal concentration of ENR was 1.241 ± 0.423 mg ml-1 for plasma and 2.166 ± 0.742 mg g- 1 for muscle, after 8h showing slow absorption. The high volume of distribution (Vd) in plasma (7.03 L kg- 1), the values of the ratios between muscle concentration/plasma (1.12 to 3.82 ) indicated good distribution in muscle tissue. It was possible to detect and quantify the metabolites (CIP), but the conversion rate was low (1.3%). Finally, the T1/2Ke 2.08 days in muscle indicates slow elimination and suggested long period of time for the meat product to be consumed. The use of antimicrobial agents without pharmacological and toxicological data for the species which it is applied have several consequences, like increasing the risk of exposure of residues above those permitted ( MRLs) and increased incidence/prevalence of bacterial resistance in animals and humans / Doutorado / Ciência de Alimentos / Doutora em Ciência de Alimentos

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T10:37:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rezende_RenataAntunesEstaianode_M.pdf: 1522270 bytes, checksum: a0ea23b47147c504a5e5f70c7a0d1fbd (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A piscicultura no Brasil tem crescido de maneira significativa ao longo dos últimos 20 anos, refletido pelo aumento da produção com elevadas densidades de estocagem. Com a intensificação da atividade aquícola, o surgimento de surtos causados por vários agentes etiológicos tornam-se cada vez mais freqüentes, dentre eles as bacterioses. Para combater o agente responsável por essas enfermidades, muitos antibióticos são utilizados de maneira ilícita, podendo, além de não apresentar efetividade durante o tratamento, causar letalidade aos animais e danos ambientais. Atualmente, o Brasil possui apenas dois antimicrobianos aprovados para uso na aquicultura: florfenicol e oxitetraciclina. A enrofloxacina (ENR) é um antibiótico largamente utilizado na medicina veterinária por apresentar elevado potencial de eficácia no tratamento de bacterioses. Porém, apesar de no Brasil ainda não ter uso regulamentado na piscicultura, muitos produtores acabam utilizando-a de forma ilícita, sendo adicionada à ração ou em banhos de imersão. Esses procedimentos de administração favorecem a perda do fármaco por meio da lixiviação, promovem a mudança do ecossistema aquático, além de prejudicar a saúde animal e do consumidor. Possíveis alternativas para facilitar a administração da ENR, minimizando os problemas causados no meio ambiente, são os revestimentos na ração, um dos mais antigos processos farmacêuticos ainda existentes e com grande aplicabilidade em diversos segmentos. Para a formação desses revestimentos, os polímeros utilizados precisam ser compatíveis com as características químicas e físico-químicas do fármaco, garantindo homogeneidade ao produto final e redução de perda do medicamento ao longo do tempo de administração da ração. Para tanto, faz-se necessário o revestimento da ração medicada seguida da avaliação das taxas de lixiviação, a fim de avaliar as perdas do fármaco para o ambiente. Para alcançar este objetivo, é necessária a disponibilidade de um método analítico devidamente validado que garanta a determinação do teor, antes e depois do processo de lixiviação da ração medicada. O método desenvolvido para quantificação da ENR na ração foi baseado na técnica de cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD). O método foi validado considerando os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão intradia e interdias, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação. Os resultados obtidos apresentaram conformidade com as recomendações dos guias de validação da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA, 2003) e do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA, 2010), indicando que o método é apropriado para a determinação de ENR na ração medicada. O revestimento da ração medicada tanto com 0,5 % quanto com 2,0 % de polivinilpirrolidona (PVP-K30) reduziu a taxa de lixiviação da ENR na ração para a água, porém essa taxa de redução depende significativamente (p<0,05) da temperatura e do tempo de permanência da ração na água / Abstract: Fish farming in Brazil has grown significantly over the past 20 years, reflected by increased production at high stocking densities. With the intensification of aquaculture, the emergence of outbreaks caused by various etiological agents becomes increasingly frequent, including the bacterial diseases. To combat the agents responsible for those diseases, many antibiotics are used illicitly. Nonetheless, in addition to the possibility of no effectiveness during treatment, they can induce lethality to the animals and cause environmental damage. Currently, Brazil has only two antimicrobials approved for use in aquaculture: florfenicol and oxytetracycline. Enrofloxacin (ENR) is an antibiotic widely used in veterinary medicine for presenting a high potential for efficacy in treating bacterial diseases. However, although in Brazil it is not yet regulated for use in fish farming, many farmers use it unlawfully, being added to the feed or by immersion baths. These procedures favor the drug loss through leaching from the feed, induce changes at the aquatic ecosystem, and endanger consumer and animal health. Possible alternatives to facilitate the administration of ENR, minimizing the problems caused in the environment are the feed coating, one of the oldest processes still exist with great applicability in several pharmaceutical segments. For the coating, polymers must be compatible with the chemical end physic-chemical characteristics of the drug, ensuring homogeneity of the final product and reduction of drug loss over time of feed administration. For this purpose, after coating the medicated feed becomes necessary to evaluate the leaching rate of the drug from the feed. To accomplish this it is required to develop and validate an analytical method that guarantees the determination of the drug content, before and after the leaching process of the medicated feed. The method for quantification of ENR in the feed was based on the technique of high performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD). The method was validated considering the following parameters: linearity, sensitivity, selectivity, intra-day and inter-day precision, accuracy, detection and quantification limits. The results showed compliance with the recommendations from the validation guide of the National Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA, 2003) and the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA, 2010), indicating that the method is suitable for the ENR determination on the medicated feed. The coating of the medicated feed with both: 0.5% and 2.0% polivinilpirrolydone (PVP-K30) reduced the leaching rate of the ENR from the feed to the water. However, the leaching rate reduction depends significantly (p<0.05) on the water temperature, as well as on the time residence of the feed in the water / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Le travail de thèse a eu pour but de contribuer à une meilleure connaissance de la dangerosité pour l’homme des souches STEC d’origine bovine, en explorant la corrélation pouvant exister entre la présence du gène stx chez de telles souches et la réalité de son expression. La quantification de l’expression du gène stx2 présent chez 46 souches STEC bovines a été réalisée à l’aide d’un test ELISA commercial détectant spécifiquement les shiga toxines, le test ProSpecT® Shiga toxin (OXOID). L’ensemble des résultats de validation préalable obtenus pour ce test a permis de considérer qu’il pouvait être valablement appliqué à l’étude du panel de souches d’E. coli O157 :H7 bovines collectées au laboratoire, tout en déterminant les limites méthodologiques, et donc d’interprétation. Utilisé comme outil de quantification de la production de Stx2 par les souches du panel choisi, et dans deux conditions expérimentales différentes (présence ou absence d’induction par l’enrofloxacine), ce test a permis de mettre en évidence que seulement 15,2% des souches d’E.coli O157:H7/H- étudiés produisent des quantités significatives de Stx2 détectables sans induction, et ce à des niveaux variables. En revanche, la majorité de ces isolats, bien que n'exprimant pas la protéine Stx2 de manière constitutive, produit des quantités significatives de Stx2 en présence de concentrations subinhibitrices d'enrofloxacine, antibiotique de la famille des fluoroquinolones et utilisé en médecine vétérinaire. Enfin, des mutants résistants à l'enrofloxacine sélectionnés à partir de certaines souches d’E. coli O157:H7, produisent, après induction par l'enrofloxacine, 3 fois plus de toxine Stx2 que les souches sauvages. Les mutants sont également inductibles en utilisant des doses d'enrofloxacine 100 fois supérieures à celles utilisables pour les souches sauvages. L’ensemble de ces résultats montre (i) la corrélation, ou non, qui peut exister entre la présence du gène stx2 et son expression, (ii) que la proportion inductible des souches STEC bovines est potentiellement importante, (iii) que l’enrofloxacine induit fortement l’expression du gène stx2 chez les souches STEC bovines et que (iv) l’induction par l’enrofloxacine conduit à des taux d’expression du gène stx2 supérieurs chez des souches résistantes aux fluoroquinolones que chez les souches sensibles. Au final, cette étude contribue à documenter la variabilité des niveaux d’expression des gènes stx et illustre le risque que des STEC issus de bovins puissent devenir plus fréquemment pathogènes pour l'homme suite à l'usage croissant des fluoroquinolones vétérinaires. / The present study contributed to a better knowledge of the pathogenicity of STEC for humans by quantifying the expression of the stx2 gene from a panel of 46 cattle STEC isolates by ELISA. Succesful validation experiments of the ProSpecT® Shiga toxin ELISA (OXOID) first concluded to its capability to be used for a valuable quantification of the Stx2 protein. Stx2 expression was tested in presence and absence of subtherapeutic concentrations of enrofloxacin, an antibiotic of the fluoroquinolones family used in veterinary medicine. Whereas only 15.2% of the strains displayed significant amounts of detectable Stx2 in absence of induction, most of them were shown to be inducible, and at various levels, in presence of subtherapeutic concentrations of enrofloxacin. Also, enrofloxacin-resistant mutants of Stx2-producing E. coli O157:H7 were selected and produced 3-fold higher Stx2 levels than native strains after induction with enrofloxacin. Mutants were also inducible using hundred-fold higher enrofloxacin concentrations than the useful ones for native strains. At the end, these results show (i) the inconstant and variable expression of the stx2 gene from cattle STEC isolates in native conditions, (ii) the potentially high number of inducible STEC isolates in cattle, (iii) that enrofloxacin is a strong inducer of the stx2 expression in cattle STEC isolates and (iv) that the stx2 gene is stronger induced in isolates resistant to fluoroquinolones compared to susceptible ones. Finally, this all study documents the variable expression of the stx2 gene and also suggests that E. coli O157:H7 from cattle may become more frequently pathogenic to humans as a side-effect of the increasing use of veterinary fluoroquinolones.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-07T12:41:36Z No. of bitstreams: 1 Ismaela Maria Ferreira de Melo.pdf: 1484897 bytes, checksum: 412f7fc7d3537d1d040e74378ac1ef3c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T12:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ismaela Maria Ferreira de Melo.pdf: 1484897 bytes, checksum: 412f7fc7d3537d1d040e74378ac1ef3c (MD5) Previous issue date: 2012-02-07 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fluoroquinolones are frequently used in human and veterinary medicine for treatment and prevention of disease respiratory tract, digestive and urinary. Within this group we can highlight the enrofloxacin, a drug that presents a wide spectrum of activity against Gram positive and Gram negative. It is known that fluoroquinolones are the property of crossing the placenta and may have adverse effects on the developing fetus, especially when you consider that more than half of pregnancies are unplanned, and thus a large number of women may be exposed to potentially these drugs during the first trimester of pregnancy. However, the mechanisms of these adverse effects are still unknown. Thus, the present study was to evaluate the effect of enrofloxacin in pregnant rats on placental development and offspring. Enrofloxacin (Baytril ®) was administered at a dose of 5 mg / kg daily intramuscular throughout pregnancy. The placentas were analyzed morphologically, morphometrically and immunohistochemical tests for seven, fourteen and twenty days of pregnancy. The results showed that the treated group there was significant reduction in the number of implantation sites, weight and placental total area of the disk at fourteen and twenty days of development, and quantitative changes in the constituents of the layers of the labyrinth, trophoblastic giant cells and trofospongio of the placenta. There were observed no evidence of malformation in the head, trunk and limbs of neonates. However, there was a significant reduction in the number and weight of neonates in enrofloxacin-treated group compared to control, but without affecting its length. There was no change in the histochemical analysis, however, the TUNEL test showed stronger apoptotic activity in the placentas with only 14 days of development in the treated group compared to control. With this we conclude that enrofloxacin when administered at a dose of 5 mg/kg in rats during pregnancy interferes with placental development by altering the constituents of the placenta and increase apoptosis in the middle third of pregnancy, and reflecting the reduction in the number and weight of neonates. / As fluoroquinolonas são freqüentemente usadas na medicina humana e veterinária para tratamento e prevenção de doenças do trato respiratório, digestivo e urinário. Dentro deste grupo podemos destacar a enrofloxacina, um fármaco que apresenta um elevado espectro de atividade frente bactérias Gram positivo e Gram negativo. Sabe-se que as fluoroquinolonas têm a propriedade de atravessar a placenta podendo ter efeitos adversos no feto em desenvolvimento, principalmente se levarmos em consideração que mais da metade das gestações não são planejadas, e assim, um grande número de mulheres pode ser potencialmente expostas a estes fármacos durante o primeiro trimestre de gravidez. No entanto, os mecanismos desses efeitos adversos ainda são desconhecidos. Assim, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito da enrofloxacina em ratas prenhas no desenvolvimento da placenta e da prole. A enrofloxacina (Baytril®) foi administrada na dose de 5 mg/kg, diariamente, via intramuscular, durante toda a gestação. As placentas foram analisadas morfologicamente, morfometricamente e imunohistoquimicamente aos sete, quatorze e vinte dias de prenhez. Os resultados mostraram que no grupo tratado houve redução significativa do número de sítios de implantação, do peso e área total do disco placentário aos quatorze e vinte dias de desenvolvimento, e alterações quantitativas nos elementos constituintes das camadas do labirinto, trofospongio e células trofoblasticas gigantes da placenta. Não foram observados nenhum indício de malformação na cabeça, tronco e membros dos neonatos. No entanto, houve uma redução significativa no número e peso dos neonatos no grupo tratado com a enrofloxacina em relação ao controle, porém sem afetar o seu comprimento. Não houve alteração na análise histoquímica, porém, o teste de TUNEL mostrou atividade apoptótica mais intensa apenas nas placentas com 14 dias de desenvolvimento do grupo tratado em relação ao controle. Com isso concluímos que a enrofloxacina quando administrada na dosagem de 5 mg/kg durante prenhez em ratas interfere no desenvolvimento placentário, por alterar os elementos constituintes da placenta e aumentar a apoptose no terço médio da gestação, tendo como reflexo a redução no número e peso dos neonatos.

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Marili Villa Nova Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-19T20:15:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Branco_LucianadaConceicaoCastello_M.pdf: 696133 bytes, checksum: 0c1ae932e7cdd4cd2fea5388f7a0bb5a (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os antimicrobianos são aplicados mundialmente na tilapicultura para o tratamento de bacterioses, principais doenças que acometem esta espécie. Entre os antibióticos, a enrofloxacina (ENR), pertencente à família das quinolonas, é utilizada internacionalmente e tem demonstrado ser eficaz no tratamento de infecções bacterianas. No Brasil, seu uso na criação de peixes ainda não foi aprovado, mas o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) incluiu, em 2010, este fármaco no Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em Peixes (PNCRC). A ENR é biotransformada pelos animais à ciprofloxacina (CIP), composto este que apresenta atividade antimicrobiana e é utilizado na medicina humana. O processamento de alimentos tem mostrado ser um fator positivo para a segurança dos alimentos, devido à possível degradação de resíduos de antimicrobianos que poderiam causar o desenvolvimento de resistência em micro-organismos ou induzir efeitos adversos na saúde de seres humanos. Assim, é de grande importância, do ponto de vista da saúde pública e de conhecimento científico, conhecer o comportamento de resíduos de medicamentos veterinários nos alimentos quando submetidos ao processamento. O fishbúrguer, preparado com carne de tilápia, têm demonstrado elevada aceitação pelos consumidores. Isto reflete o novo estilo da vida em que os requisitos para a compra de um alimento incluem os benefícios nutricionais e também a conveniência de preparação. Para avaliar a diminuição dos níveis de resíduo de ENR e CIP presentes em filé de tilápia, durante processo de produção e fritura dos mesmos, torna-se necessário o desenvolvimento e validação de metodologia analítica que apresentem precisão, exatidão e sensibilidade para determinar este composto e seu metabólito. Portanto, os objetivos deste trabalho foram em filé de tilápia, bem como em um produto derivado, fishbúrguer, para avaliar a estabilidade dessas substâncias durante o processo de produção e fritura. Para este fim, um método simples, rápido e de baixo custo, utilizando LC-MS, foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de ENF e CIP. O preparo de amostra foi baseado na precipitação de proteínas com ácido tricloroacético, extração com acetonitrila e limpeza do extrato com hexano. A separação cromatográfica foi realizada em uma coluna C18. Para ambos os compostos, as curvas de calibração na matriz demonstraram linearidade superior a 0,99. O método foi seletivo, exato (91-100% de recuperação) e preciso (coeficientes de variação abaixo de 5%). Limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 3,5 e 10,4 µg/kg para ambos os compostos. Os valores calculados CCa e CCß foram, respectivamente, 107 e 114 µg/kg para ENR e 105 e 110 µg/kg para CIP (LMR estabelecido pela Comissão da UE é de 100 µg/kg para a soma de ENR e CIP). O método foi empregado para a determinação de resíduos de ENR e CIP em amostras de filés de tilápia obtidos a partir de peixes expostos a ENR (dose única de 40 mg/kg de peso corpóreo - administrado via ração). Os animais foram sacrificados após 4, 8 e 12 h de exposição. Resíduos acima do LMR foram encontrados mesmo após 12 h de administração do fármaco. A fim de avaliar a influência do processo de produção e fritura sobre os níveis residuais de ENR e CIP, fishbúrgueres foram preparados com filé de tilápias expostas a ENR. O método analítico para determinação da ENR e CIP no filé de tilápia foi adaptado e validado para a análise de fishbúrgueres antes e após fritura. Os métodos adaptados foram validados e mostraram-se linear, com coeficiente de correlação maior que 0,99, precisos (coeficiente de variação abaixo de 6%) e exatos (recuperação média de 90 a 106%). Foram analisadas amostras de fishbúrgueres (antes e após fritura) utilizando os métodos validados. Não foi verificada redução significativa dos níveis residuais da soma de ENR e CIP durante o preparo dos fishbúrgueres. No entanto, redução (p<0,05) de, aproximadamente, 10% foi verificada como consequência da fritura. Porém, essa redução pode ser considerada baixa em termos de segurança dos consumidores / Abstract: Antimicrobials are used worldwide for the treatment of tilapicultura bacteriosis, main diseases that affect this species. Among the antibiotics, enrofloxacin (ENR), belonging to the quinolone family, is used internationally and has been shown to be effective in treating bacterial infections in fish. In Brazil, its use in fish farm is not yet approved, but the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) included, in 2010, this drug in the National Plan for Control of Residues and Contaminants in Fish (PNCRC). ENR is biotransformed in the body of animals being converted to ciprofloxacin (CIP), an active compound used in human medicine. Food processing has shown to be a positive factor for the food safety, due to the possible degradation of antimicrobial agents that could potentially cause development of resistance in microorganisms or induce adverse health effects in humans. Thus, it is of great importance, from the standpoint of public health and scientific knowledge, to know the behavior of veterinary drugs in foods when subjected to processing for consumption. The fishburger, prepared with meat from tilapia, have shown high acceptance by the consumers. This follows the new style of life in which the requirements for the purchase of a food include the nutritional benefits and the convenience of preparation. To evaluate the degradation of ENR present in meat processed as tilapia fishburger, it becomes necessary to develop and validate analytical methods that present precision, accuracy and sensitivity to determine this compound and CIP as well. Therefore, the objectives of this study were to develop and validate analytical method for the determination of ENR and CIP in tilapia fillet, as well as in a product derived from tilapia meat (fishburger) and to evaluate the stability of these substances during the frying of fishburgers prepared from tilapias exposed to ENR. For this purpose, a simple, fast and low cost LC-MS method for the simultaneous determination of ENR and CIP residues in tilapia fillet and fishburgers was developed and validated. Sample preparation was done by protein precipitation with trichloroacetic acid, acetonitrile extraction and extract clean up with hexane. The chromatographic separation was performed on a C18 column. For both compounds, matrix matched calibration curves showed linearity higher than 0.99. The method was selective, accurate (91-100% recovery) and precise (coefficients of variation below 5%). Limits of detection and quantification were, respectively, 3.5 and 10.4 µg/kg for both compounds. The calculated CCa and CCß values were, respectively, 107 and 114 µg/kg for ENR and 105 and 110 µg/kg for CIP (MRL established by the EU Commission is 100 µg/kg for the sum of ENR and CIP). The method was employed for the determination of ENR and CIP residues in samples of tilapia fillets obtained from fishes exposed to ENR (single dose of 40 mg/kg b.w incorporated in the feed). The animals were killed after 4, 8 and 12 h of exposure. Sum of residues of ENR and CIP above the MRL were found, even after 12 h of ENR administration. In order to evaluate the influence of cooking (frying) on the residual levels of ENR and CIP, fishburgers were formulated with fillet of tilapias exposed to ENR. The analytical method for the determination of ENR and CIP in tilapia fillet was adapted and validated for the analysis of the fishburgers before and after frying. Adapted and validated methods showed linearity with a correlation coefficient greater than 0.99, selectivity, precision (coefficient of variation below 6%) and accuracy (average recovery of 90 to 106%). Samples of fishburgers (before and after frying) were analyzed using the validated methods. A small reduction (approximately 10%) in the residual levels of ENR and CIP as a consequence of frying was verified, indicating that both compounds are stable to cooking conditions / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

La utilización de algunas sustancias antimicrobianas y algunos corticosteroides como promotores del crecimiento es una práctica ilegal en la UE. Una nueva aproximación para la detección y el control del suministro de estos compuestos puede ser el análisis del pelo. Esta matriz presenta ciertas ventajas frente a otras matrices de análisis, pero los métodos analíticos así como los principales mecanismos por los cuales estas sustancia se acumulan, no están del todo claros ni bien definidos. En este trabajo se desarrollan protocolos de análisis rápidos y específicos para detectar residuos de sulfametacina (SMZ), enrofloxacino (ENR) y dexametasona (DEX) en pelo, músculo e hígado de animales de producción (vacuno y porcino). Asimismo, se confirma la deposición de estos compuestos en el pelo de animales tratados y se evalúa el pelo como matriz analítica y de control de la administración de estos compuestos en producción animal. / The use of antimicrobial substances and some corticosteroids as growth promoters is an illegal practice in the EU countries. A new approximation to detect and control these practices could be hair analysis. This matrix offers certain advantages if compared to other tissues, but the analytical protocols as well as the mechanisms of drugs incorporation into hair are not well known and defined. The objectives of this work are to develop rapid and specific analytical protocols to detect residues of sulphamethazine (SMZ), enrofloxacin (ENR) and dexamethasone (DEX) in hair, muscle and liver of treated animals (cattle and pigs). The accumulation of these compounds in the hair of treated animals as well as the evaluation of the hair as a tool to control the administration of these compounds is studied and evaluated in this work.