Orientador: Regina Maria Barretto Cicareli / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Banca: Maurício Bacci Junior / Resumo: Alterações súbitas ou prolongadas no meio ambiente podem ter influências deletérias na composição do código da vida, o (DNA). A epigenética é a visão moderna da nossa interação com o meio em que vivemos. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, "morte súbita" é aquela que acontece até 24 horas desde o início da sintomatologia. A morte súbita de causa cardíaca, definida como uma morte natural inesperada em pessoas sem antecedentes cardiovasculares pré-conhecidos (com carácter fatal) revela-se, em todos os estudos efetuados até o momento, como a principal causa de morte na atividade física, podendo acometer tanto recém-nascidos como adultos. Diversos genes foram identificados em associação a SQTL (síndrome do QT longo - doenças genéticas que causam arritmias cardíacas potencialmente fatais), onde 90% dos casos estão relacionados a mutações no gene responsável pelo canal de sódio SCN5A (locus LQT3) e no gene MTR. A metilação do DNA é uma alteração epigenética que atua na regulação da expressão gênica, e pode estar relacionada com a morte súbita de origem cardíaca. Na metilação do DNA ocorre a adição de um radical metil (CH3) no carbono 5 de citosina geralmente seguida por guanina (dinucleotídeo CpG), catalisada por enzimas DNA metiltransferases (DNMTs). Metodologias relativamente simples permitem o conhecimento da existência de metilação no DNA. O tratamento do DNA genômico com bissulfito de sódio converte as citosinas (C) não metiladas em uracilas (U), mas não afeta as citosinas (C) metiladas, procedendo a seguir à amplificação por PCR específica para metilação e sequenciamento dos produtos selecionados a partir do DNA tratado com bissulfito. Este estudo teve como objetivos investigar diferenças nos padrões de metilação que pudessem estar associados ao desenvolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prolonged or sudden changes in the environment may have deleterious influences on the content of the code of life, the (DNA). Epigenetics is the modern view of our interaction with the environment in which we live. According to the World Health Organization, "sudden death" is that which happens within 24 hours from the onset of symptoms. Sudden death from cardiac causes, defined as an unexpected natural death in people without cardiovascular history foreknown (with fatal character) shows up in all studies performed to date, as the leading cause of death in physical activity can affect both newborns and adults. Several genes have been identified in association with LQTS (long QT syndrome - genetic diseases that cause potentially fatal cardiac arrhythmias), where 90% of cases are related to mutations in the gene responsible for the sodium channel SCN5A (LQT3 locus) and the MTR gene. DNA methylation is an epigenetic modification that acts in the regulation of gene expression, and may be related to sudden cardiac death. DNA methylation occurs on the addition of a methyl group (CH3) carbon-5 of cytosine generally followed by guanine (CpG dinucleotide), enzyme catalyzed DNA methyltransferases (DNMTs). Methodologies allow relatively simple knowledge of the existence of DNA methylation. The treatment of genomic DNA with sodium bisulfite converts cytosine (C) at uracilas unmethylated (U), but does not affect cytosines (C) methylated by making Following amplification by methylation specific PCR and sequencing of the products selected from DNA treated with bisulfite. This study aimed to investigate differences in methylation patterns that could be associated with the development and / or recurrence of cardiovascular diseases. Therefore we assessed the pattern of methylation in the promoter region of genes... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luciana Rossini Pinto / Resumo: A busca por fontes de energia renováveis desperta o interesse em uma das principais culturas exploradas no Brasil, a cana-de-açúcar. As cultivares modernas derivaram de cruzamentos interespecíficos principalmente entre Saccharum officinarum e S. spontaneum nos quais poucos acessos destas espécies foram utilizados, proporcionando uma base genética estreita. Porém, existe uma vasta variabilidade genética e epigenética dentre os acessos que compõem o “complexo Saccharum” que ainda não foi explorada nos programas de melhoramento. A metilação do DNA, uma das principais modificações epigenéticas ocorrentes em plantas, pode ser quantificada pela técnica de MSAP (Methylation sensitive amplification polymorphism). Neste contexto, este trabalho teve como objetivo estimar a diversidade epigenética das espécies S. officinarum, S. spontaneum, S. robustum, S. barberi, Erianthus sp. e cultivares comerciais via marcadores MSAP. Para isso, duas amostras de cada acesso foram digeridas com as enzimas de restrição EcoRI-MspI e EcoRI-HpaII, ligadas aos respectivos adaptadores e submetidas as amplificações pré-seletivas e seletivas. Os padrões de metilação foram estimados, classificando os marcadores quanto ao número de loci suscetíveis (MSL) e não suscetíveis a metilação (NML). As relações de dissimilaridade entre os acessos assim como a distribuição da variabilidade epigenética dentre e entre os grupos das espécies foram analisadas. No total, foram obtidos 1341 loci, sendo que a diversidade foi ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The search for renewable energy sources has promoted the interest in one of the main crops explored in Brazil, the sugarcane. Modern sugarcane cultivars derived from interspecific crosses, mainly between Saccharum officinarum and S. spontaneum in which few assessions of these species were involved leading to a narrow genetic base. However, there is a huge genetic and epigenetic variability among the accessions of the “Saccharum complex” that has not yet been explored in the breeding programs. The DNA methylation, one of the main epigenetic modifications that occur in plants, can be quantified by using the MSAP (Methylation sensitive amplification polymorphism) technique. In this context, this study aimed to estimate the epigenetic diversity of S. officinarum, S. spontaneum, S. robustum, S. barberi, Erianthus sp. species and commercial cultivars by using MSAP derived markers. Two DNA samples of each accession were separetly digested with the restriction enzymes EcoRI-MspI and EcoRI-HpaII, ligated to adapters followed by pre-selective and selective amplification. The methylation patterns were estimated by classifying the markers based on the number of MethylationSusceptible Loci (MSL) and Non-Methylated Loci (NML). The dissimilarity relations and variability distribution within and between the accessions was evaluated. A total of 1341 loci were obtained and the diversity was significantly higher in MSL, resulting in a higher variability in the epigenome. Most of the polymorphis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by ALESSANDRA ALVES MARTINS null (alessandraamartins49@gmail.com) on 2018-08-20T20:31:56Z No. of bitstreams: 1 Cópia 2 - com certificado escaneado anexo.pdf: 1123502 bytes, checksum: 9c8376453b1381b7d4f8860acfc0d7b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-08-21T14:04:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 martins_aa_me_jabo.pdf: 1123502 bytes, checksum: 9c8376453b1381b7d4f8860acfc0d7b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 martins_aa_me_jabo.pdf: 1123502 bytes, checksum: 9c8376453b1381b7d4f8860acfc0d7b0 (MD5) Previous issue date: 2018-06-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A busca por fontes de energia renováveis desperta o interesse em uma das principais culturas exploradas no Brasil, a cana-de-açúcar. As cultivares modernas derivaram de cruzamentos interespecíficos principalmente entre Saccharum officinarum e S. spontaneum nos quais poucos acessos destas espécies foram utilizados, proporcionando uma base genética estreita. Porém, existe uma vasta variabilidade genética e epigenética dentre os acessos que compõem o “complexo Saccharum” que ainda não foi explorada nos programas de melhoramento. A metilação do DNA, uma das principais modificações epigenéticas ocorrentes em plantas, pode ser quantificada pela técnica de MSAP (Methylation sensitive amplification polymorphism). Neste contexto, este trabalho teve como objetivo estimar a diversidade epigenética das espécies S. officinarum, S. spontaneum, S. robustum, S. barberi, Erianthus sp. e cultivares comerciais via marcadores MSAP. Para isso, duas amostras de cada acesso foram digeridas com as enzimas de restrição EcoRI-MspI e EcoRI-HpaII, ligadas aos respectivos adaptadores e submetidas as amplificações pré-seletivas e seletivas. Os padrões de metilação foram estimados, classificando os marcadores quanto ao número de loci suscetíveis (MSL) e não suscetíveis a metilação (NML). As relações de dissimilaridade entre os acessos assim como a distribuição da variabilidade epigenética dentre e entre os grupos das espécies foram analisadas. No total, foram obtidos 1341 loci, sendo que a diversidade foi significativamente maior nos MSL, resultando em uma maior variabilidade no epigenoma. A maioria dos polimorfismos identificados nos seis grupos analisados derivaram da metilação da citosina externa. A frequência de loci metilados variou significativamente entre os grupos de acordo com a combinação seletiva de primers utilizada. Os acessos foram divididos em duas subpopulações, com maior variabilidade epigenética dentro dos grupos investigados. Os marcadores MSAP avaliados indicaram uma diferença epigenética moderada entre as espécies. Os resultados obtidos sinalizaram que existem diferenças nos padrões de metilação entre as espécies que constituem o germoplasma básico da cana-de-açúcar e as cultivares comerciais, podendo esta modificação epigenética ser explorada nos programas de melhoramento da cultura. / The search for renewable energy sources has promoted the interest in one of the main crops explored in Brazil, the sugarcane. Modern sugarcane cultivars derived from interspecific crosses, mainly between Saccharum officinarum and S. spontaneum in which few assessions of these species were involved leading to a narrow genetic base. However, there is a huge genetic and epigenetic variability among the accessions of the “Saccharum complex” that has not yet been explored in the breeding programs. The DNA methylation, one of the main epigenetic modifications that occur in plants, can be quantified by using the MSAP (Methylation sensitive amplification polymorphism) technique. In this context, this study aimed to estimate the epigenetic diversity of S. officinarum, S. spontaneum, S. robustum, S. barberi, Erianthus sp. species and commercial cultivars by using MSAP derived markers. Two DNA samples of each accession were separetly digested with the restriction enzymes EcoRI-MspI and EcoRI-HpaII, ligated to adapters followed by pre-selective and selective amplification. The methylation patterns were estimated by classifying the markers based on the number of MethylationSusceptible Loci (MSL) and Non-Methylated Loci (NML). The dissimilarity relations and variability distribution within and between the accessions was evaluated. A total of 1341 loci were obtained and the diversity was significantly higher in MSL, resulting in a higher variability in the epigenome. Most of the polymorphisms observed in the group of accessions was due to external cytosine methylation.The frequency of methylated loci significantly varied among the groups according to the selective primer combination. The accessions were divided in two subpopulations, with a higher epigenetic variability within the investigated groups. Moderate epigenetic difference among the species was observed. Our results signals differences in methylation patterns among the species that constitute the sugarcane basic germplasm and commercial cultivars, being that this epigenetic modification can be exploited by the sugarcane breeding programs.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-02-22T14:27:22Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Joyce Moura Oliveira.pdf: 8050921 bytes, checksum: bf7fdf7ed918ea4d6412bc2167f0ab1d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T14:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Joyce Moura Oliveira.pdf: 8050921 bytes, checksum: bf7fdf7ed918ea4d6412bc2167f0ab1d (MD5) / CAPES /INCT – DT / A hanseníase é uma doença negligenciada que permanece como um importante problema de saúde pública, mantendo índices de detecção acima do preconizado pela OMS para o controle da doença. Com o objetivo de entender melhor os mecanismos moleculares de patogênese e contribuir para o controle futuro da doença, este estudo buscou avaliar o papel de genes do locus do MHC de classe III: TNFA, LTA e BAT1 e nos genes de IL10 e FLI1 na hanseníase em uma população da Bahia. Foi utilizado o modelo caso-controle com casuística de 362 pacientes com hanseníase e 368 indivíduos controles sem a doença. Nessa amostra, foram genotipados nove marcadores genéticos (SNPs) e avaliada a expressão gênica das principais citocinas, TNF-α e IL-10. Mecanismos de regulação epigenética do gene de FLI1 na hanseníase per se foram avaliados pelo padrão de metilação do gene em células de pacientes, cultivadas sem estímulo e estimuladas com antígeno sonicado de M. leprae em diferentes tempos. Não foram encontradas associações significantes entre a doença e os polimorfismos do MHC de classe III avaliados em TNFA, LTA e BAT1, e o mesmo ocorreu com os marcadores avaliados no gene de IL10 (p>0,05). A expressão do gene de TNFA ex vivo foi significativamente maior em pacientes quando comparados a controles sem a doença (p=0,002). Na análise deste gene considerando o SNP rs1800629 (-308 A/G), um marcador previamente associado à hanseníase em diferentes populações, observamos que indivíduos homozigotos para o alelo G expressam mais o gene do que indivíduos carreadores do alelo A (GA+AA) (p=0,002). Estes resultados reforçam que, mesmo não diretamente associado a hanseníase nesta população, este marcador pode ter um papel indireto na regulação da produção de TNF-α na infecção pelo M. leprae. A expressão do gene de IL10 ex vivo foi maior em indivíduos com o fenótipo de reação hansênica tipo I (Reação reversa – RR), do que pacientes sem manifestações agudas da doença e significante em relação a controles (p=0,01). Análise do marcador no gene de FLI1 (rs7930515 G\C) revelou um maior risco para o desenvolvimento de reações hansênicas entre carreadores do alelo C (OR=1,53; 1.09 - 2.15 p=0,001) em comparação com alelo G. Nas análises subsequentes observamos que essa associação ocorre na presença de reação do tipo II (ENH) com risco de 1,89 vezes maior para o seu desenvolvimento entre carreadores do alelo C (OR=1,89; IC: 1.25-2.85; p=0,001) e associação negativa para a reação do tipo I (P>0,05). O polimorfismo avaliado no gene de FLI1, que impacta no caminho de cura de lesões na Leishmaniose em humanos, aparece reforçado como potencial marcador de doença na hanseníase e para o desenvolvimento de reação hansênica do tipo II. Sendo a hanseníase uma doença complexa este resultado pode contribuir para um melhor entendimento sobre a patogênese, e inspirar a investigação de novas vias importantes no processo de dano tecidual observado nessa doença.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-09-01T15:54:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 971512 bytes, checksum: 51401d3c0419a33f5ebb5bf12a7124b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-01T15:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 971512 bytes, checksum: 51401d3c0419a33f5ebb5bf12a7124b2 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A epigenética se revelou como uma área promissora, uma vez que contempla modificações nos padrões de herança que não envolve mudanças na sequência do DNA. A possibilidade de efeitos herdáveis não genéticos sobre a expressão do fenótipo fornece um mecanismo adicional de variabilidade herdável a ser explorado no melhoramento animal. Objetivou-se estimar a variância epigenética transgeracional para as características peso corporal e qualidade do ovo utilizando informações genealógicas e fenotípicas em uma linhagem de codornas de corte. Foram realizadas análises genéticas uni-características, utilizando um modelo com o efeito aleatório epigenético e um outro apenas com o efeito aleatório genético aditivo. Os efeitos fixos foram ano ao nascimento, eclosão, geração e sexo. Os componentes de variância e os valores genéticos foram estimados via método da máxima verossimilhança restrita, utilizando o pacote regress do software R. Para comparação dos modelos foi aplicado o teste da razão de verossimilhança. Utilizou-se valores de λ variando de 0 a 0,5 para estimação dos componentes de variância no modelo com efeito epigenético, o qual consiste de um parâmetro autorecursivo que está diretamente relacionado com o coeficiente de reversão (v) e o coeficiente de transmissibilidade epigenética (1 – v). Com base no critério de informação de Akaike foi definido o valor de λ que melhor se ajusta aos dados. O modelo com efeito epigenético se mostrou de melhor ajuste para o peso ao nascimento e peso aos 7 dias, enquanto para as demais características não se observou diferença significativa com o modelo reduzido. Os valores genéticos preditos nos dois modelos apresentaram uma alta correlação. As estimativas de herdabilidade direta para peso corporal variaram em magnitude (0,15-0,87), tendo o peso ao nascimento a maior estimativa, e para as características de qualidade do ovo variaram de 0,10 a 0,46. A proporção de variância fenotípica explicada pelos efeitos epigenéticos mostraram uma diferença entre os pesos corporais avaliados, embora tenha sido de pequena magnitude para a maioria deles. O peso ao nascimento e o peso aos 7 dias apresentaram herdabilidades epigenéticas similares, 0,12 e 0,10, respectivamente, enquanto que o peso ao abate foi 0,05. Para os demais pesos corporais e características de qualidade do ovo estas herdabilidades foram próximas de zero. A inclusão do efeito epigenético no modelo ajudou a explicar a variabilidade residual e não- mendeliana de características de produção em codornas de corte. / Epigenetics has proved to be a promising area, since it contemplates modifications in inheritance patterns that do not involve changes in the DNA sequence. The possibility of inheritable non- genetic effects on phenotype expression provides an additional mechanism of heritable variability to be explored in animal breeding. The objective was to estimate transgenerational epigenetic variance for body weight and egg quality traits using genealogical and phenotypic information in a line of meat-type quails. Single-trait genetic analyses were performed using one model considering epigenetic random effect and other considering only additive genetic random effect. Fixed effects were composed by year at birth, hatching, generation and sex. Variance components and the breeding values were estimated by the restricted maximum likelihood method, using the regress package of the software R. For the comparison of the models, the likelihood ratio test was applied. Values of λ ranging from 0 to 0.5 were used for the variance components estimation in the epigenetic model, which consists in an autorecursive parameter that is directly related to the reset coefficient (v) and the epigenetic coefficient of transmissibility (1 – v). The model with epigenetic effect was shown to be better adjusted for birth weight and weight at 7 days, while for the other traitss no significant difference was observed with the reduced model. Predicted breeding values in both models presented a high correlation. Direct heritability estimates for body weight ranged in magnitude (0.15-0.87), with birth weight showing the highest estimate, and for egg quality traits ranged from 0.10 to 0.46. The proportion of phenotypic variance explained by epigenetic effects showed a difference between body weights evaluated, although it was of small magnitude for most of them. Birth weight and weight at 7 days presented similar epigenetic heritabilities, 0.12 and 0.10, respectively, while weight at slaughter was 0.05. For the other body weights and egg quality traits, these heritabilities were close to zero. The inclusion of the epigenetic effect in the model helped to explain the residual and non-Mendelian variability of production traits in meat-type quails.

No transtorno bipolar (TB) diversas evidências apontam que a doença apresenta um curso progressivo, com os pacientes apresentando maiores anormalidades comportamentais, sensibilidade ao estresse e propensão a recaídas com o passar do tempo. A progressão pode ser refletida como uma sensibilização a diversos fatores, entre eles os episódios agudos de humor. Pesquisas indicam que esses episódios são “tóxicos” a múltiplos elementos do organismo humano. O presente estudo tem como objetivo avaliar, através de um estudo pré-clínico (modelo animal de mania induzido por danfetamina – AMPH) e um estudo clínico (estudo longitudinal aberto de 16 semanas), os mecanismos subjacentes ao episódio agudo de humor e à remissão clínica no TB, focando em vias de epigenética, morte celular, inflamação e toxicidade sistêmica. Nós observamos que a AMPH, um potente psicoestimulante, aumentou significativamente a atividade da enzima histona desacetilase (HDAC) no córtex pré-frontal (CPF) de ratos wistar, sem aumentar os níveis de expressão gênica e proteica da neurotrofina BDNF. Mais ainda, lítio, valproato e butirato de sódio atenuaram esse aumento, indicando que a inibição da HDAC é importante no manejamento das estereotipias comumente vistas em modelos animais de mania. Ainda, nós observamos que pacientes com TB não-medicados e durante o episódio agudo de humor apresentam maiores níveis séricos de moléculas associadas ao dano (DAMPs). Após o tratamento farmacológico, apenas pacientes assintomáticos apresentam a normalização dos níveis séricos de DAMPs, além de apresentarem diminuição dos níveis de TNF-α e aumento nos níveis de ácido úrico. Em conclusão, este estudo ressalta que no TB os pacientes podem apresentar diferenças individuais nas respostas ao tratamento em virtude de particularidades a níveis epigenéticos (inibição da HDAC) e bioquímicos (morte celular, DAMPs e inflamação), aumentando assim, a necessidade de farmacoterapias cada vez mais individualizadas. / In bipolar disorder (BD) several lines of evidence indicate that the illness has a progressive course, with patients showing greater behavioral abnormalities, sensitization to stress and propensity to relapse over time. This progression may be reflected as a sensitization to several factors, including acute mood episodes. In general, studies support the idea that these episodes are ' toxic ' to multiple parts of the human body. The present study aimed to evaluate, through a pre-clinical study (animal model of mania induced by d-amphetamine (AMPH)) and a clinical trial (longitudinal-open study of 16 weeks), the mechanisms underlying the acute mood episode and the clinical remission in BD, focusing in pathways of epigenetic, cell death, inflammation and systemic toxicity. We observed that the AMPH significantly increased the activity of the enzyme histone deacetylase (HDAC) in the prefrontal cortex (PFC) of Wistar rats, without increasing the levels of the neurotrophic factor BDNF (gene and protein expression). Further, lithium, valproate and sodium butyrate attenuated the effects induced by AMPH, indicating that HDAC inhibition is important in the management of the stereotypies commonly seen in animal models of mania. In addition, we demonstraded that drug-free patients with BD, during acute mood episodes, have higher serum levels of molecules associated with damage (DAMPs). After the initial pharmacological treatment, only asymptomatic patients presented the normalization of serum levels of DAMPs over time, in addition to present reducing in the levels of TNF-α and increasing in the levels of uric acid. In conclusion, our study supports that in BD, patients may exhibit different treatment responses due to particularities in epigenetic pathways (inhibition of HDAC) and biochemical mechanisms (cell death, inflammation and DAMPs), thus increasing the need for more individualized pharmacotherapies.

O objetivo do estudo foi avaliar, in vitro, a influência da fotobiomodulação (PBM) na, viabilidade e migração, relacionados à acetilação das histonas, e na diferenciação de células-tronco da polpa de dentes permanentes humanos (hDPSCs); e, in vivo, sua influência no reparo radicular de molares de ratos com necrose pulpar e rizogênese incompleta. hDPSCs foram caracterizadas e utilizadas nos experimentos de três artigos científicos. A PBM foi empregada utilizando-se laser diodo InGaAlP (100mW, 660nm, 3J/cm2, energia total por aplicação 1J em 10s). Em todos os experimentos in vitro os grupos foram divididos de acordo com o uso da PBM e os intervalos de irradiação foram de 6 horas. A viabilidade destas células foi avaliada pelo ensaio de MTT e a migração pelo scratch. A acetilação das histonas das hDPSCs foi avaliada por imunofluorescência. Para avaliar o potencial de diferenciação e a deposição de tecido mineralizado, foram utilizados os meios adipogênico, condrogênico e osteogênico, complementado pelo ensaio de atividade ALP, em modelo 3D, em gel de agarose 0,3%. Nos ensaios de diferenciação também foi avaliada a condição nutricional (regular: 10% SFB; ou déficit: 5%SFB). Os resultados do MTT, scratch e da acetilação das histonas foram obtidos em até 24 horas e nos ensaios de diferenciação foram analisados em 7 e 14 dias. Para o experimento in vivo, molares inferiores de ratos Wistar foram expostos ao meio bucal por 3 semanas e, após, tratados com pasta antibiótica por uma semana. A seguir, os canais foram irrigados e divididos em 6 grupos (n=6): MTA; coágulo sanguíneo (CS); hDPSC; MTA+PBM; CS+PBM; hDPSC+PBM. Dois grupos não foram expostos ao meio bucal: Dente hígido+PBM (n=6), Dente hígido (controle positivo, n=3); e um grupo foi mantido exposto durante todo o período experimental: Dente necrótico (controle negativo, n=3). Durante 30 dias as irradiações foram feitas com intervalos de 24 horas. Após, os ratos foram eutanasiados e realizou-se avaliação histológica e imunohistoquímica. Os dados obtidos foram tabulados e analisados estatisticamente. A PBM aumentou a viabilidade das células (P<0.001). No ensaio de scratch o grupo PBM acelerou o fechamento do ferida até 12 horas (P<0.001) e esta fechou em 18 horas, sendo mais rápido que o controle (P<0.05). A PBM aumentou a acetilação das histonas (P<0.001); Após 14 dias, a PBM intensificou a diferenciação nos três meios empregados e na atividade ALP, comparado com os controles (P<0.05). No estudo in vivo, o controle negativo apresentou infiltrado de neutrófilos maior do que os demais grupos (P<0.05). Os grupos Controle negativo, Dente hígido e Dente hígido+PBM apresentaram menos condensação fibrosa (P<0.05). Todos os grupos formaram mais tecido mineralizado que o controle negativo (P<0.05). PBM+MTA, +CS ou +hDPSC formaram mais tecido mineralizado que os grupos não irradiados (P<0.05). MTA+PBM induziu apicificação (P<0.05). A marcação para BSP confirmou os achados histológicos relacionados a formação de tecido mineralizado e as hDPSCs, com e sem PBM, exibiram maior porcentagem de células positivas para BSP. Conclui-se que a PBM desempenhou papel importante, in vitro, aumentando a diferenciação, viabilidade e migração celular que estão relacionados a acetilação das histonas. Além disso, a PBM pode ser uma alternativa de tratamento adjuvante para dentes permanentes com necrose pulpar e rizogênese incompleta favorecendo o reparo radicular. / The aim of this study was to evaluate, in vitro, the influence of photobiomodulation (PBM) on viability and migration, related to histone acetylation, and differentiation of human dental pulp stem cells (hDPSCs); and, in vivo, its influence on the root repair of rat molars with pulp necrosis and open apex. The hDPSCs were characterized and used in the experiments of three scientific papers. The PBM was applied using InGaAlP diode laser (100mW, 660nm, 3J / cm2, total energy per application 1J in 10s). In all in vitro experiments, the groups were divided according to the use of PBM, with 6-hour irradiation intervals. The viability of these cells was assessed by MTT assay and migration by scratch. The histone acetylationof hDPSCs was evaluated by immunofluorescence. To evaluate the potential for differentiation and deposition of mineralized tissue, adipogenic, chondrogenic and osteogenic mediums were used, complemented by the ALP activity assay in 3D model, in 0.3% agarose gel. In differentiation assays, the nutritional status was also evaluated (regular: 10% FBS; or deficit: 5% FBS). The MTT, scratch and histone acetylation results were obtained until 24 hours, and the differentiation assays were analyzed at 7 and 14 days. For the in vivo experiment, lower molars of Wistar rats were exposed to oral environment for 3 weeks and then treated with antibiotic paste for one week. Next the root canals were irrigated and divided into 6 groups (n=6): MTA; BC (blood clot); hDPSC; healthy tooth+PBM; MTA+PBM; BC+PBM; hDPSC+PBM. In hDSPC groups, 1% agarose gel scaffold was used for cell support. Two groups were not exposed to the oral environment: healthy tooth+PBM (n=6), healthy tooth (positive control, n=3); and one stayed exposed during the role experimental period: necrotic tooth (negative control, n=3). For 30 days the irradiations were done at 24-hour intervals. Thereafter, the rats were euthanized and histological and immunohistochemical evaluations were performed. Data were tabulated and statistically analyzed. PBM increased cell viability (P<0.001). In the scratch assay, the PBM group accelerated wound closure up to 12 hours (P<0.001) and closed at 18 hours, being faster than the control (P<0.05). PBM increased histone acetylation (P<0.001). After 14 days, PBM improved the differentiation in the three mediums employed and the ALP activity, compared to the controls (P<0.05). In the in vivo study, the negative control had greater neutrophil infiltrate than the other groups (P<0.05). Negative Control, Healthy tooth and Healthy tooth+PBM groups presented less fibrous condensation (P<0.05). All groups formed more mineralized tissue than the negative control (P<0.05). PBM+MTA, +BC or +hDPSC formed more mineralized tissue than non-irradiated groups (P<0.05). MTA+PBM induced inoculation (P<0.05). BSP labeling confirmed the histological findings related to mineralized tissue formation and hDPSCs, with and without PBM, exhibited a higher percentage of BSP-positive cells. It is concluded that PBM played an important role, in vitro, increasing differentiation, viability and cell migration that are related to histone acetylation. Moreover, the PBM may be an adjutant treatment alternative for permanent teeth with pulp necrosis and open apex, favoring root repair.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-09T13:02:39Z No. of bitstreams: 1 2016_LuisAugustoMunizTelles.pdf: 1997639 bytes, checksum: 223339f23582f5f901c01296f18f5dac (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-06T14:24:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LuisAugustoMunizTelles.pdf: 1997639 bytes, checksum: 223339f23582f5f901c01296f18f5dac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T14:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LuisAugustoMunizTelles.pdf: 1997639 bytes, checksum: 223339f23582f5f901c01296f18f5dac (MD5) / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é a neoplasia com maior prevalência na infância. Melhorias muito expressivas no prognóstico da doença têm sido apresentadas nas últimas décadas, alcançando-se taxas de cura em torno de 90% em alguns casos. No entanto, a doença ainda apresenta mau prognóstico em pacientes adultos ou menores de um ano. A compreensão das neoplasias tem sido reinterpretada à luz do advento da epigenética como uma nova área do conhecimento. Constituindo um padrão de herança informacional que não depende de alterações na cadeia primária de DNA, a epigenética tem aberto o caminho para novas possibilidades de tratamento do câncer. As metiltransferases de lisina, em particular, têm estado em foco devido aos crescentes relatos de envolvimento na regulação da expressão de oncogenes ou genes supressores de tumor, bem como devido ao desenvolvimento de fármacos cujos alvos são estas mesmas enzimas. A família de metiltransferases SETD possui alguns membros que já foram descritos como tendo relacionamento com o câncer. No entanto, SETD4 ainda carece de mais profunda caracterização. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo descrever o perfil de transcrição de SETD4 em amostras clínicas de aspirado de medula óssea por meio de qPCR e verificar a sua relação com a leucemogênese por meio de análise de correlação com fatores clínicos e com a transcrição de outros genes. Também foi realizada uma análise exploratória de dados de expressão e transcrição disponíveis em bancos de bioinformática on-line. Foi verificado que SETD4 encontra-se com transcrição aumentada no grupo de amostras clínicas neoplásicas em relação às amostras não-neoplásicas de nossa coorte, exibindo aumento transcricional de cerca de 5.4 vezes. Durante o tratamento quimioterápico, os pacientes exibiram redução da transcrição da metiltransferase, revelando correlação com a queda no número de linfoblastos na medula óssea no 29° dia de indução quimioterápica. SETD4 teve sua transcrição fortemente correlacionada com a de duas outras metiltransferases: SETMAR e SMYD2. Foi detectada transcrição aumentada de SETD4 em dados obtidos por microarranjo e RNA-seq de outras neoplasias em plataformas disponíveis de dados públicos. Além disso, amplificações e deleções de número de cópias do gene parecem influenciar negativamente a sobrevida dos pacientes de leucemia mieloide aguda, e câncer de estômago, enquanto o nível aumentado de transcrição parece ter o mesmo efeito em LLA. Também verificamos que SETD4 apresenta mutações no domínio SET e Rubs-subs-bind que têm o potencial de impactar sua função enzimática. Juntos, estes resultados apontam para essa metiltransferase como uma enzima que pode ter um papel importante na leucemogênese e demais processos de carcinogênese, constituindo um atraente alvo terapêutico e farmacológico. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is the most prevalent cancer in childhood. Very significant improvements in the prognosis of the disease have been made in recent decades, with cure rates being achieved around 90% in some cases. However, the disease still has poor prognosis in adult patients or children with less than one year. The understanding of cancer has been reinterpreted in the light of the advent of epigenetics as a new area of knowledge. Constituting a pattern of informational inheritance that does not depend on changes on primary chain of DNA, epigenetics has opened the way to new possibilities of cancer treatment. Lysine methyltransferases, in particular, have been in focus due to the increasing reports of its involvement in the regulation of oncogene or tumor suppressor gene expression, as well as to the development of drugs targeting those same proteins. The SETD methyltransferase family has some members who have been described as being related to cancer. Despite all these efforts, SETD4 still lacks deeper characterization. Therefore, this study aimed to describe SETD4 transcription profile in clinical samples of bone marrow aspirate by qPCR and to assess its relationship with leukemogenesis by means of correlation analysis with clinical factors and transcription of other genes during chemotherapy. An exploratory analysis of data available at online bioinformatics platforms was also performed. It was found that SETD4 transcription is upregulated in the neoplastic group of clinical samples relative to non-neoplastic samples, exhibiting an increase of approximately 5.4 times. During chemotherapy, patients exhibited reduced methyltransferase transcription, showing correlation with the decrease in the number of lymphoblasts in the bone marrow. SETD4 was highly correlated with the transcription of two other methyltransferases: SETMAR and SMYD2. Upregulated transcription of SETD4 was detected in data obtained by microarray and RNA-seq of other neoplasias in public data platforms. Moreover, gene copy number amplifications and deletions seems to have a negative influence on survival of acute myeloid leukemia and gastric cancer patients while upregulation of transcription in ALL seems to have the same effect. We also verified that SETD4 presents mutations in SET and Rubs-subs-bind domains that may have an impact on its enzymatic function. Together, these results point to this methyltransferase as an enzyme that may play a role in leukemogenesis and other carcinogenesis processes, constituting an attractive therapeutic and pharmacological target.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / As hiperfenilalaninemias (HPA) são distúrbios hereditários do metabolismo do aminoácido L-fenilalanina (Phe), sendo causados pela deficiência da atividade da fenilalanina hidroxilase ou de enzimas envolvidas no metabolismo de sua coenzima, a tetraidrobiopterina. A HPA denominada fenilcetonúria clássica (PKU) afeta 1:10.000 recém-nascidos e é caracterizada por grave deficiência intelectual, atraso no desenvolvimento neuropsicomotor e transtornos psiquiátricos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da Phe sobre parâmetros epigenéticos e de reparo do ácido desoxirribonucleico (DNA) em modelos murinos de HPA, a principal alteração bioquímica em pacientes fenilcetonúricos. Ratos Wistar machos com 5 e 30 dias de vida foram submetidos a modelos de HPA crônica (duas administrações subcutâneas diárias de Phe 5,2 μmol/g de peso corporal e uma administração diária de p-clorofenilalanina 0,9 μmol/g, até o 28º dia de vida) e aguda (uma administração subcutânea de Phe 5,2 μmol/g e p-clorofenilalanina 0,9 μmol/g), respectivamente. Os ratos do grupo controle foram submetidos a condições experimentais similares, exceto por receberem apenas solução de cloreto de sódio 0,9 % (peso/volume). Uma hora após a administração (HPA aguda) ou 24 horas após a última administração (HPA crônica), os animais sofreram eutanásia por decapitação e o córtex cerebral, o corpo estriado e o hipocampo foram rapidamente dissecados e limpos. Posteriormente, o DNA nuclear de cada tecido foi obtido para as avaliações epigenéticas (determinação das atividades de DNA metiltransferases, histonas acetiltransferases e histonas desacetilases). Avaliou-se também a expressão gênica das sirtuínas 1 e 6 e da enzima de reparo do DNA poli(difosfato de adenosina [ADP]-ribose) polimerase 1 (PARP1). A atividade das DNA metiltransferases apresentou-se significativamente inibida no hipocampo dos animais submetidos à HPA aguda, quando comparados aos animais do grupo controle. Por outro lado, em animais recebendo Phe cronicamente, a atividade destas enzimas apresentou-se aumentada em todas as estruturas cerebrais analisadas, quando comparada àquela detectada no grupo controle. A atividade das histonas desacetilases apresentou-se aumentada em todos os tecidos cerebrais em animais submetidos à HPA aguda e crônica, quando comparados com o grupo controle. Já a atividade das histonas acetiltransferases, bem como a expressão das sirtuínas e da PARP1 não diferiram entre os grupos experimentais, independentemente da estrutura cerebral analisada e do modelo de HPA. Coletivamente, os achados do presente estudo sugerem que os animais submetidos à HPA são sujeitos ao remodelamento da cromatina e diminuição global da expressão gênica em tecido cerebral, contribuindo para o entendimento da disfunção neurológica observada em pacientes fenilcetonúricos. Adicionalmente, este estudo propõe as histonas desacetilases e DNA metiltransferases como possíveis alvos terapêuticos para a minimização dos danos cerebrais atribuídos à PKU e parcialmente mediados por modificações epigenéticas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-06Bitstream added on 2014-06-13T20:50:01Z : No. of bitstreams: 1 paulino_cg_me_araiq_parcial.pdf: 377640 bytes, checksum: 4179fe3f31573884cda8bcaeb0a9769b (MD5) / Alterações súbitas ou prolongadas no meio ambiente podem ter influências deletérias na composição do código da vida, o (DNA). A epigenética é a visão moderna da nossa interação com o meio em que vivemos. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, “morte súbita” é aquela que acontece até 24 horas desde o início da sintomatologia. A morte súbita de causa cardíaca, definida como uma morte natural inesperada em pessoas sem antecedentes cardiovasculares pré-conhecidos (com carácter fatal) revela-se, em todos os estudos efetuados até o momento, como a principal causa de morte na atividade física, podendo acometer tanto recém-nascidos como adultos. Diversos genes foram identificados em associação a SQTL (síndrome do QT longo – doenças genéticas que causam arritmias cardíacas potencialmente fatais), onde 90% dos casos estão relacionados a mutações no gene responsável pelo canal de sódio SCN5A (locus LQT3) e no gene MTR. A metilação do DNA é uma alteração epigenética que atua na regulação da expressão gênica, e pode estar relacionada com a morte súbita de origem cardíaca. Na metilação do DNA ocorre a adição de um radical metil (CH3) no carbono 5 de citosina geralmente seguida por guanina (dinucleotídeo CpG), catalisada por enzimas DNA metiltransferases (DNMTs). Metodologias relativamente simples permitem o conhecimento da existência de metilação no DNA. O tratamento do DNA genômico com bissulfito de sódio converte as citosinas (C) não metiladas em uracilas (U), mas não afeta as citosinas (C) metiladas, procedendo a seguir à amplificação por PCR específica para metilação e sequenciamento dos produtos selecionados a partir do DNA tratado com bissulfito. Este estudo teve como objetivos investigar diferenças nos padrões de metilação que pudessem estar associados ao desenvolvimento... / Prolonged or sudden changes in the environment may have deleterious influences on the content of the code of life, the (DNA). Epigenetics is the modern view of our interaction with the environment in which we live. According to the World Health Organization, sudden death is that which happens within 24 hours from the onset of symptoms. Sudden death from cardiac causes, defined as an unexpected natural death in people without cardiovascular history foreknown (with fatal character) shows up in all studies performed to date, as the leading cause of death in physical activity can affect both newborns and adults. Several genes have been identified in association with LQTS (long QT syndrome - genetic diseases that cause potentially fatal cardiac arrhythmias), where 90% of cases are related to mutations in the gene responsible for the sodium channel SCN5A (LQT3 locus) and the MTR gene. DNA methylation is an epigenetic modification that acts in the regulation of gene expression, and may be related to sudden cardiac death. DNA methylation occurs on the addition of a methyl group (CH3) carbon-5 of cytosine generally followed by guanine (CpG dinucleotide), enzyme catalyzed DNA methyltransferases (DNMTs). Methodologies allow relatively simple knowledge of the existence of DNA methylation. The treatment of genomic DNA with sodium bisulfite converts cytosine (C) at uracilas unmethylated (U), but does not affect cytosines (C) methylated by making Following amplification by methylation specific PCR and sequencing of the products selected from DNA treated with bisulfite. This study aimed to investigate differences in methylation patterns that could be associated with the development and / or recurrence of cardiovascular diseases. Therefore we assessed the pattern of methylation in the promoter region of genes... (Complete abstract click electronic access below)