Entre os temas de Anatomia Animal, a neuroanatomia apresenta-se como um dos conteúdos mais complexos, no qual os métodos tradicionais de ensino não fornecem aos estudantes sua efetiva compreensão, o que implica na necessidade de abordagens complementares para otimizar sua aprendizagem. Este trabalho objetivou a elaboração de uma ferramenta de ensino-aprendizagem para o estudo da neuroanatomia, utilizando uma coleção de lâminas seccionais transversais do Sistema Nervoso Central (SNC) da espécie Equina. Foram utilizadas lâminas seccionais transversais já preparadas, coradas pela técnica de coloração de Pal-Weigert modificada, de modo a realizar a identificação das estruturas neuroanatômicas, e associar a neuroanatomia às síndromes neurológicas desta espécie. Ainda, foram realizadas ilustrações esquemáticas para indicar os locais acometidos por afecções neurológicas e para representação dos cortes seccionais transversais do equino. Foi elaborado, também, um protótipo de website afim de exemplificar a utilização de tecnologias educacionais, como o uso de softwares e computadores como facilitadores para a compreensão das estruturas neuroanatômicas e suas relações clínicas. A utilização das lâminas seccionais transversais do SNC da espécie Equina permitiu a identificação das estruturas anatômicas, a divisão de sua totalidade em intervalos sequenciais para demonstrar a abrangência e topografia das estruturas do SNC, assim como possibilitou embasar a relação entre a neuroanatomia e as síndromes neurológicas. Além disso, foi possível manter e preservar o acervo de lâminas seccionais de SNC do Laboratório de Neuroanatomia Comparada do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Por meio deste estudo buscamos ampliar as discussões acerca da utilização de técnicas tradicionais de estudo em anatomia animal, aliadas às novas tecnologias educacionais e métodos complementares de ensino, uma vez que podem ser desenvolvidas ferramentas de ensino-aprendizagem visando o ensino de graduação, a distância ou presencial, ou ainda por meio da educação continuada. / Among the topics of Animal Anatomy, neuroanatomy is presented as one of the most complex contents, in which traditional teaching methods dont allow students to have effective comprehension, and implies the need for complementary approaches to optimize their learning. This work aimed at the development of a teaching & learning tool for the study of neuroanatomy, using a collection of cross-sectional slides of the Central Nervous System (CNS) of the horse. Cross-sectional slides already prepared, stained with the modified Pal-Weigert staining technique, were used to identify neuroanatomic structures and to associate neuroanatomy with neurological syndromes of this species. In addition to this, schematic illustrations were performed to indicate the sites affected by neurological disorders and to represent the cross-sectional sections of the horse. A website prototype was also developed to exemplify the use of educational technologies, such as the use of softwares and computers as facilitators for the understanding of neuroanatomic structures and their clinical relationships. The use of the cross sectional slides of the CNS of the horse allowed the identification of anatomical structures, dividing their totality into sequential intervals to demonstrate the comprehensiveness and topography of CNS structures, as well as supporting the relationship between neuroanatomy and neurological syndromes. Furthermore, it was possible to maintain and preserve the collection of CNS sectional slides from the Laboratory of Comparative Neuroanatomy of the Department of Surgery of the Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science of the University of São Paulo. Through this study we seek to broaden the discussions about the use of traditional techniques of study in animal anatomy, allied to new educational technologies and complementary teaching methods, once teaching and learning tools can be developed aiming at undergraduate teaching, at a distance or face- to-face, or even through continuing education.

Com o objetivo de avaliar os equinos alojados no Jóquei Clube de São Paulo, Brasil, quanto a presença de anticorpos contra Theileria equi e Babesia caballi, foram testadas 180 amostras de soro sanguíneo por meio da técnica de C-ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), metodologia atualmente recomendada pela OIE (Organização Internacional de Epizootíases) por ter alta sensibilidade e especificidade. A frequência de animais com sorologia positiva para Theileria equi foi de 6,66% (12/180), para Babesia caballi foi de 22,3% (40/180) e para infecção concomitante foi de 6,66% (12/180). Os resultados sorológicos obtidos por este estudo revelam que 35,5% (64/180) dos animais possuem anticorpos contra a babesiose equina sendo que a maioria dos animais acometidos tem dois e três anos de idade e portanto estão há menos tempo no hipódromo. Fatores como a ausência de carrapatos vetores, o uso de terapias babesicidas repetidas e o longo tempo de permanência dos animais no Jóquei após o tratamento, favorecem a diminuição dos títulos de anticorpos sem que ocorra reinfecção. Esses fatores podem justificar o menor número de animais com sorologia positiva para a doença nos cavalos com idade acima de quatro anos. Considerando-se esses resultados sugere-se que os animais sejam avaliados sorologicamente ao ingressarem no Jóquei Clube de São Paulo para que o uso de medicamentos contra a doença seja feito de forma adequada e para que os sinais clínicos compatíveis com babesiose equina em animais sorologicamente negativos sejam melhor avaliados e considerados em diagnósticos diferenciais. / In order to evaluate the presence of antibodies against Theileria equi and Babesia caballi in horses kept at the Jockey Club in São Paulo city, Brazil, a total of 180 samples of blood serum was tested using the Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (C-ELISA test). This methodology has been recommended by the International Organization of Epizooties (IOE) due to its high sensitivity and specificity. The frequency of seropositive animals for Theileria equi, Babesia caballi and for both was 6.66% (12/180), 22.3% (40/180) and 6.66% (12/180), respectively. Serological results showed that 35.5% of the animals (64/180) had antibodies against equine piroplasmosis; they were from two to three years old and were at the Jockey Club for a shorter period of time. Factors such as absence of thick vectors, repeated therapy using babesicidal drugs and the long period of time that the animals stayed in the Jockey Club after treatment favoured the lowering of antibody titers with no reinfection. These factors might be responsible for the fewer number of animals with positive serology for the disease in horses over four years of age. Based on these findings, animals should be serologically evaluated at the time of entrance into the Jockey Club so that the use of drugs against the disease be performed properly and clinical signs suggestive of equine babesiosis in serologically negative animals be better evaluated and considered for differential diagnosis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_carina_moraes.pdf: 479524 bytes, checksum: 9bdbed7287bcee59185e68ac89b72108 (MD5) Previous issue date: 2008-10-13 / Strangles is a contagious disease of the upper respiratory tract of horses caused by Streptococcus equi subsp. equi. Asymptomatic carriers responsible for maintaining the infection in the herd can only be detected by serological or microbiological methods and vaccines used for the control of the disease induce levels of protection generally not exceeding 50%. Considering that S. equi SeM protein is considered the most promising antigen to protect against the disease, this research aimed to produce and evaluate as antigen for vaccines and for ELISA, a recombinant S. equi SeM protein (rSeM). rSeM was produced by cloning and expression in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. To test its immunogenicity isogenic female Balb-c mice 4-6 weeks-old were randomly divided and inoculated with 1 / 20th of the estimated dose of the vaccine for horses by the SC route, on days 0 and 21 of the experiment. One group was vaccinated with 250mL (12 mg mL-1) of rSeM without adjuvant, another with 300mL of vaccine containing 12 mg mL-1 of rSeM plus 20% of aluminiun hydroxide, two other groups were vaccinated with two commercial bacterins against Strangles, other two groups were vaccinated with the same commercial vaccines containing 12 mg mL-1 of rSeM and the remaining group was inoculated with a bacterin produced with a field strain. The control group was inoculated the same dose of sterile saline. Blood samples were collected from the retro-orbital venous plexus on days 0, 21, 42. The antibodies were titrated by ELISA using rSeM as antigen. rSeM was immunogenic for mice with a protection index of 100%. For the standardization of an ELISA, groups of 20 negative, vaccinated and positive animals were used. Using as Cut-off the mean plus two SD of the Optical Densities of the negatives, the test showed 100% sensitivity and specificity. / A Adenite Eqüina é uma enfermidade contagiosa do trato respiratório superior dos eqüídeos causada por Streptococcus equi subesp. equi. Animais portadores assintomáticos responsáveis pela permanência da infecção nos rebanhos só podem ser detectados por métodos microbiológicos ou sorológicos e as vacinas utilizadas no controle da doença induzem níveis de proteção geralmente não superiores a 50 %. Considerando que a proteína SeM de S. equi é o antígeno mais promissor na proteção contra a doença, este trabalho objetivou produzir a proteína SeM recombinante de S. equi, visando sua utilização como antígeno em vacinas e em ELISA. Proteína SeM recombinante (rSeM) foi produzida mediante a clonagem e expressão em Escherichia coli e purificada por cromatografia de afinidade. Para testar sua capacidade imunogênica, vacinas elaboradas com rSeM foram aplicadas a camundongos. Fêmeas Balb/c isogênicas com 4-6 semanas foram divididas aleatoriamente e inoculadas por via SC com 1/20 da dose vacinal estimada para cavalos, nos dias 0 e 21 do experimento. Um grupo foi vacinado com 250 mL (12 mg mL-1) de proteína recombinante sem adjuvante, outro com 300 mL de vacina contendo 12 mg mL-1 rSeM adicionada de 20% de hidróxido de alumínio, outros dois grupos com duas bacterinas comerciais contra Adenite Eqüina; dois grupos com as vacinas comerciais, acrescidas de 12 mg mL-1 de rSeM e o grupo restante com uma bacterina contendo cepas de campo. O grupo controle foi inoculado com o mesmo volume de solução salina estéril. Coletou-se sangue por punção do plexo venoso retro-ocular nos dias 0, 21 e 42. Os anticorpos foram titulados por ELISA utilizando a proteína rSeM como antígeno. A rSeM foi imunogênica em camundongos com índices de proteção de 100%. Para a padronização de um ELISA, utilizaram-se grupos de 20 soros equinos de animais negativos, vacinados e positivos. Utilizando um ponto de corte de média das densidades ópticas dos soros negativos acrescidos de dois desvios padrão, o teste teve 100% de sensibilidade e especificidade.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The equine protozoal mieloencefalite (EPM) is caused mainly by Sarcocystis neurona. It s definitive host is the opossum (Didelphis spp.), which becomes infected by ingesting sporocysts from tissues of intermediate hosts, that belong to different species. Clinical manifestations occur with neurologic signs, which vary according to the area of the nervous system affected. Clinical disease is not common, however cases of immunosuppression as senility, stress, use of corticosteroids may lead to development of clinical signs. From an epidemiological standpoint, it is interesting to determine the distribution of the protozoa in order to know the areas where animals were exposed to S. neurona through serological tests, in order to consider EPM in differential diagnosis of neurological diseases and guide the treatment. In the U.S. it is estimated that half of the horses are reagents for S. neurona, in Brazil there are not many reports about prevalence of seropositive horses. The transplacental infection has been described for other species of Sarcocystis, however there is no evidence of intrauterine infection by S. neurona, only some studies suggesting the vertical transmission as another way of agent maintenance, which could be confirmed by detecting antibodies in sera from neonates before colostrum ingestion. While S. neurona is the primary agent of equine mieloencefalite, S. cruzi is related to losses in cattle. Although parasites present similar life cycle, but with different definitive hosts, horses were exposed to both species of Sarcocystis, and these two species may infect horses and spread concurrently in herds. Therefore, this study aimed to detect the occurrence of transplacental transmission by S. neurona in horses and compare the prevalence of flocks against S. neurona and S. cruzi. Results were arranged in two chapters. In chapter one, we investigated the occurrence of transplacental infection of S. neurona in horses. For this, blood was collected from mares and their newborns for antibodies against S. neurona. In the second chapter, we compared, by indirect immunofluorescence, serum samples from 189 mares for the presence of antibodies against Sarcocystis spp. using as antigen S. neurona and S. cruzi. The analysis of the results revealed the majority of animals responding to antigens of S. cruzi and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species. / A mieloencefalite equina por protozoário (MEP) é causada principalmente por Sarcocystis neurona. O hospedeiro definitivo de S. neurona é o gambá (Didelphis spp.), que se infecta ingerindo esporocistos dos tecidos dos hospedeiros intermediários, que pertencem a diversas espécies. Os sinais clínicos cursam com sinais neurológicos, que variam conforme a área do sistema nervoso afetada. A doença clínica não é comum, porém casos de imunossupressão como senilidade, estresse, uso de corticoides podem levar ao desenvolvimento dos sinais clínicos. Do ponto de vista epidemiológico, é interessante determinar a distribuição geográfica do protozoário a fim de se conhecer as áreas onde os animais foram expostos a S. neurona por meio de testes sorológicos, a fim considerar a MEP no diagnóstico diferencial de doenças neurológicas e direcionar o tratamento. Nos EUA estima-se que metade dos equinos seja reagentes para S. neurona, no Brasil não há muitos relatos sobre prevalência de equinos soropositivos. A infecção transplacentária já foi descrita para outras espécies de Sarcocystis, porem ainda não há evidências da infecção intrauterina pelo S. neurona, somente alguns estudos que sugerem a transmissão vertical como outra forma de manutenção do agente, o que poderia ser confirmada pela detecção de anticorpos no soro do neonato antes da ingestão do colostro. Enquanto o S. neurona é o principal agente da mieloencefalite equina, a infecção por S. cruzi está relacionada a prejuízos em bovinos. Apesar dos parasitas apresentarem ciclo de vida distintos, com hospedeiros definitivos diferentes, equinos estão expostos a ambas espécies de Sarcocystis, sendo que as duas espécies podem infectar equinos e se disseminar concomitantemente nos planteis. Assim sendo, este trabalho teve por objetivo detectar a ocorrência da transmissão transplacentária por S. neurona em equinos e comparar a soroprevalência dos plantéis frente a S. neurona e S. cruzi. Os resultados encontrados foram dispostos em dois capítulos. No capítulo um, investigou-se a ocorrência de infecção transplacentária de S. neurona em éguas. Para tal foi coletado sangue desses animais e seus neonatos para a pesquisa de anticorpos contra S. neurona. No segundo capítulo, comparou-se, por imunofluorescência indireta, amostras sorológicas de 189 éguas quanto a presença de anticorpos contra Sarcocystis spp. utilizando como antígeno S. neurona e S. cruzi. Na análise dos resultados revelou a maioria dos animais reagindo a antígenos de S. cruzi e um terço dos animais soropositivos reagiu a antígenos das duas espécies.

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando avaliar a resposta inflamatória causada pelo EHV-1 por meio da análise das manifestações clínicas, alterações histopatológicas e resposta imune do hospedeiro no sistema nervoso central (SNC). Camundongos das linhagens BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) e C3H/HeJ (H2k) foram inoculados por via intranasal com as estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1. Nesse estudo, associou-se a histopatologia, a resposta de citocinas pró-inflamatórias no SNC de camundongos das diferentes linhagens e o método de transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR) para investigar a relação entre a infecção pelo EHV-1 e a resposta inflamatória com o desenvolvimento de lesões. As estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1 causaram infecção aguda e letal nas diferentes linhagens de camundongos isogênicos. Os sinais clínicos e neurológicos, tais como perda de peso, pelos arrepiados, postura arqueada, apatia, dispneia, desidratação e sialorreia apareceram entre o 2º e 3º dia pós-infecção (dpi). Essas manifestações foram acompanhadas pelo aumento da sensibilidade a estímulos externos, convulsões, recumbência e morte. As alterações histopatológicas consistiram em necrose neuronal, edema, necrose de liquefação, leptomeningite neutrofílica, manguito perivascular, hemorragia focal, inflamação não supurativa, gliose multifocal e infiltração perivascular de células polimorfonucleares e mononucleares. As características e a extensão das lesões variaram entre as linhagens de camundongos. Animais inoculados com a estirpe A4/72 apresentaram lesões histopatológicas de maior grau de severidade quando comparados com aqueles inoculados com a estirpe A9/92. Observou-se aumento da concentração plasmática de TNF-α, IL-6, CCL2 e IFN-γ nos camundongos infectados pelo EHV-1 no 2º dpi. Detectou-se aumento da concentração plasmática e da expressão de mRNA para TNF-α, IL-6 e CCL2 no SNC dos camundongos infectados pelo EHV-1 no 3º dpi; entretanto, não houve aumento da concentração plasmática nem da expressão de mRNA para IFN-γ no 3º dpi. Evidenciou-se que a estirpe A4/72 do EHV-1 induz uma resposta imune sistêmica mais efetiva, enquanto que o vírus A9/92 culmina em uma resposta imunológica mais efetiva no SNC. Os camundongos com o fundo genético C57BL/6 e BALB/c mostraram níveis mais altos de expressão de mRNA para TNF-α, IL-6 e CCL2, quando comparados com os C3H/HeJ. A gravidade dos sinais clínicos observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico dessas citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis à infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1; as diferenças no padrão de alterações histopatológicas mostram que elas dependem do hospedeiro infectado, da estirpe viral e da resposta imunológica; e a supressão do interferon (IFN) tipo 1 sugere ser um mecanismo de escape do EHV-1 frente ao sistema imune. A baixa expressão de IL-6, TNF-α e da quimiocina CCL2 em camundongos C3H/HeJ se explica pela mutação no gene toll-like receptor 4 (TLR-4) existente nessa linhagem de camundongo. Adicionalmente, os camundongos C3H/HeJ apresentaram lesões histopatológicas mais severas no SNC quando comparados com BALB/c e C57BL/6. Sugere-se que o IFN tipo I e o gene TLR-4 apresentam importante papel na patogênese do EHV-1 bem como proteínas do agente viral responsáveis pela supressão do IFN e partículas virais que sejam reconhecidas pelo TLR-4 podem ser alvos para o desenvolvimento de novas abordagens para o tratamento da doença viral e para a eficiência de imunógenos / The equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes respiratory disease, abortion and neurological disorders in horses. This study was conducted to evaluate the inflammatory response caused by EHV-1 by the analysis of clinical manifestations, histopathological changes and the host immune response in the central nervous system (CNS). BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) and C3H/HeJ (H2k) mice were inoculated intranasally with Brazilian EHV-1 strains A4/72 and A9/92. In this study, joined histopathology, the response of proinflammatory cytokines in the CNS of mice of different strains and reverse transcription method followed by quantitative polymerase chain reaction in real time (RT-qPCR) to investigate the relationship between infection by EHV-1 and inflammatory response in the development of lesions. Brazilian strains A4/72 and A9/92 EHV-1 caused acute lethal infection in different strains of inbred mice. Clinical and neurological signs such as weight loss, the bristly hair, hunched posture, apathy, dyspnoea, dehydration and salivary hypersecretion appeared between 2nd and 3rd day after infection (dpi). These events were accompanied by increase in the sensitivity to external stimuli, convulsions, recumbency and death. Histopathological changes were neuronal necrosis, edema, liquefaction necrosis, neutrophilic leptomeningitis, perivascular cuff, focal hemorrhage, non-suppurative inflammation, multifocal gliosis and perivascular infiltration of polymorphonuclear and mononuclear cells. The characteristics and the extent of the injuries varied between strains of mice. Animals inoculated with the A4/72 strain showed histopathological lesions of greater severity when compared with those inoculated with the A9/92 strain. There was an increase in plasma concentrations of TNF-α, IL-6, CCL2 and IFN-γ in mice infected by EHV-1 in 2nd dpi. Plasma concentrations and the expression of mRNA for TNF-α, IL-6 and CCL2 in the CNS of mice infected with EHV-1 at 3rd dpi were increased; however, there was no increase in plasma concentration or expression for the mRNA of IFN-γ at 3rd dpi. It was evident that the EHV-1 strain A4/72 induces a more effective systemic immune response, whereas the A9/92 virus culminates in a more effective immune response in the CNS. The C57BL/6 and BALB/c mice showed higher levels of mRNA expression for TNF-α, IL-6 and CCL2, compared to C3H/HeJ mice. The severity of clinical signs observed in infected mice can be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-6) and CCL2 chemokine, which are then produced after viral infection by resident glial cells and/or infiltrative cells in the CNS. These findings indicate that different strains of inbred mice are susceptible to infection neuropathogenic EHV-1 strains; the differences in the pattern of pathological changes show that they depend on the infected host, the EHV-1 strain and the immune response; and the suppression of interferon (IFN) type I suggested to be an escape mechanism for the EHV-1 against the immune system. The low expression of IL-6, TNF-α and chemokine CCL2 in C3H/HeJ mice can be explained by a mutation in toll-like receptor 4 (TLR-4) gene existing in this mouse strain. Additionally, C3H/HeJ mice exhibited more severe histopathological lesions in the CNS as compared to BALB/c and C57BL/6. It is suggested that type I IFN and TLR-4 gene have important role in the pathogenesis of EHV-1 and viral agent proteins responsible for the suppression of IFN and the viral particles that are recognized by TLR-4 can be targets for the development of new approaches for the treatment of viral disease and the efficiency of immunogens

Orientador: Rogerio Martins Amorim / Resumo: Estudos com células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) estão em crescente progresso devido às suas propriedades imunomoduladoras, antiinflamatórias, antiapoptóticas e de regeneração tecidual, tornando essa modalidade de terapia celular promissora no tratamento de diversas doenças. Devido à limitada capacidade regenerativa do sistema nervoso central (CNS), causando sequelas funcionais, as MSCs estão sendo investigadas como uma alternativa terapêutica para condições neurológicas inflamatórias, vasculares, traumáticas e degenerativas em diversas espécies animais. A Mieloencefalite protozoária equina (EPM) causada por ambos os protozoários do filo Apicomplexa, Sarcocystis neurona e Neospora hughesi, permanece como uma importante doença neurológica dos equinos nas Américas, embora a maioria dos casos seja devida à infecção por S. neurona. A aplicação da proteômica com sua gama de ferramentas na clínica de equinos pode contribuir significativamente para o entendimento de processos patológicos e facilitar a descoberta de novos alvos terapêuticos ou marcadores diagnósticos. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil proteômico do líquido cefalorraquidiano (CSF) antes e após múltiplos transplantes intratecal de MSCs em equinos hígidos e o perfil proteômico do CSF de equinos cronicamente afetados pela EPM. Doze cavalos adultos clinicamente saudáveis foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: grupo DPBS (DPBS ou control; n = 4) onde a sol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Multipotent mesenchymal stromal cell (MSCs) studies are under increasing progress because of their immunomodulatory, anti-inflammatory, antiapoptotic and tissue regeneration properties, making this modality of cell therapy promising in the treatment of various diseases. Due to the limited regenerative capacity of the central nervous system (CNS), causing functional sequelae, MSCs are being investigated as a therapeutic alternative for inflammatory, vascular, traumatic and degenerative neurological conditions in various animal species. Equine protozoal myeloencephalitis (EPM) caused by both protozoa of the Apicomplexa phylum, Sarcocystis neurona and Neospora hughesi, remains an important neurological disease in horses in the Americas, although most cases are due to S. neurona infection. The application of proteomics with its range of tools in the equine clinic can contribute significantly to the understanding of pathological processes and facilitate the discovery of new therapeutic targets or diagnostic markers. In this context, the objectives of this study were to evaluate the proteomic profiling of cerebrospinal fluid (CSF) before and after multiple intrathecal transplantations of MSCs in healthy horses and the CSF proteomic profiling of horses chronically affected by EPM. Twelve clinically healthy adult horses were randomly divided into three experimental groups: DPBS (DPBS or control; n = 4), in which intrathecal "transplants" with Dulbecco's phosphate buffered saline (DPB... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-07-03T16:29:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Luciana_Araujo.pdf: 888386 bytes, checksum: c72bfaa15763320c2a04fb09a09bfaf2 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-07-03T17:53:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Luciana_Araujo.pdf: 888386 bytes, checksum: c72bfaa15763320c2a04fb09a09bfaf2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-03T17:53:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Luciana_Araujo.pdf: 888386 bytes, checksum: c72bfaa15763320c2a04fb09a09bfaf2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O desenvolvimento de septicemia neonatal em potros é uma consequência comum da placentite ascendente. A presença de sepse tem sido associada com diversas desordens metabólicas, incluindo desregulação no metabolismo da glicose, do cálcio e do lactato. Entretanto as alterações bioquímicas demonstradas por estes potros logo após o nascimento e a sua relação com a sobrevivência não estão completamente esclarecidas. A utilização de parâmetros bioquímicos mais específicos durante as primeiras horas de vida pode ser útil para a realização de um diagnóstico precoce de sepse e pode auxiliar no estabelecimento de um prognóstico para estes potros. Este trabalho teve por objetivo avaliar os parâmetros bioquímicos de potros nascidos de éguas submetidas à indução experimental de placentite ascendente, durante as primeiras 48h de vida, relacionando estes parâmetros bioquímicos com a presença de sepse e com a sobrevivência destes animais. Foram utilizados 35 potros neste estudo. O grupo controle foi composto por sete potros saudáveis, nascidos de éguas sem alterações clínicas e gestacionais. Vinte e oito potros nascidos de éguas submetidas à indução experimental de placentite ascendente foram divididos em dois grupos de acordo com o escore de sepse em potros não sépticos (n=19) e potros sépticos (n=9). Os potros nascidos de éguas com placentite foram classificados ainda de acordo com a sobrevivência em sobreviventes e não sobreviventes. Foram coletadas amostras de sangue venoso no momento do nascimento (até 10 minutos após o parto), com 12, 24 e 48h de vida. Os níveis séricos de glicose, lactato, triglicerídeos, colesterol, ureia, creatinina, bilirrubina total, bilirrubina direta, bilirrubina indireta, proteínas plasmáticas totais (PPT), fibrinogênio e gama glutamiltransferase (GGT) foram mensurados. Os dados obtidos foram expressos em mediana e intervalo interquartil. Foi realizada análise de variância e comparação entre as médias pelo teste LDS. A comparação entre o índice de sobrevivência foi realizada através do Teste Exato de Fisher. Ao nascimento os valores de glicose e GGT foram menores nos grupo séptico [37 mg/dL (16,5-47,5); 23 UI (17,5-26,5)] e no grupo não sobrevivente [41 mg/dL (24-66); 23 UI (17,5-24,5)]. As concentrações de lactato, ureia, creatinina, triglicerídeos e colesterol foram maiores nos potros sépticos durante as primeiras 48 horas. Potros não sobreviventes apresentaram maiores concentrações de lactato, triglicerídeos e colesterol em relação a potros sobreviventes nas 48h. Potros sépticos nascidos de éguas com placentite ascendente demonstraram alterações no metabolismo energético, caracterizado por elevações nos níveis de triglicerídeos e colesterol e hipoglicemia ao nascimento, e redução na atividade da enzima hepática GGT, com elevação dos valores de lactato e ureia durante as primeiras 48h de vida. Com relação à sobrevivência observamos que potros não sobreviventes apresentaram menores valores de glicose e GGT durante as 48h de vida e elevadas concentrações de lactato, triglicerídeos e colesterol. Marcadores bioquímicos como glicose, triglicerídeos, colesterol e GGT podem ser utilizados como indicadores de comprometimento já ao nascimento e da presença de sepse, e podem ser utilizados como fatores prognósticos em potros doentes. / The development of neonatal sepsis in foals is a common consequence of ascending placentitis. Sepsis has been associated with various metabolic disorders including dysregulation of glucose, calcium and lactate metabolism. However the biochemical changes showed by these foals after birth and their relationship to survival are not completely understood. The use of more specific biochemical parameters during the first hours of life can be useful to perform an early diagnosis of sepsis and can assist in establishing a prognosis for these foals. The aim of this study was to evaluate the biochemical profile of foals born from mares with experimentally induced ascending placentitis during the first 48h of life, relating these biochemical parameters with the presence of sepsis and the survival of these animals. A total of 35 foals were included in the present study. The control group it was comprised by seven healthy foals; born from mares without clinical or gestational changes and. Twenty eight foals born from mares with experimentally induced ascending placentitis were assigned into two groups according to the sepsis score in nonseptic foals (n=19) and septic foals (n=9), and according to outcome in survivors and nonsurvivors. Blood samples were obtained on birth (10 minutes after birth) and 12, 24 and 48h after the birth. Blood concentration of glucose, lactate, triglycerides, cholesterol, urea, creatinine, total bilirubin, direct bilirubin, indirect bilirubin, total plasmatic protein (PPT), fibrinogen and gamma glutamyltransferase (GGT) were measured. Data were described using median and interquartile range. It was performed One-Way ANOVA and post-hoc LSD test. The comparison between survival rates was made using Fisher's exact test. At birth, the glucose and GGT was lower in septic foals [37 mg/dL (16.5-47.5); 23 UI (17.5-26.5)] and nonsurvivors [41 mg/dL (24-66); 23 UI (17.5-24.5)]. Lactate, urea, creatinine, triglycerides and cholesterol concentration were higher in septic foals during the first 48h of life. Nonsurvivors foals showed higher lactate, triglycerides and cholesterol concentrations than survivors foals. Septic and nonsurvivors foals demonstrated changes in lipid metabolism characterized by hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia and hypoglycemia at birth and reduction in the activity of GGT liver enzyme, with elevation in lactate and urea concentrations in nonsurvivors foals. Biochemical markers as glucose, triglycerides, cholesterol and GGT can be used as indicators of impairment at birth and the presence of sepsis, and can be used as prognostic factors in critically ill foals.

O herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) é um importante patógeno que causa doença respiratória, abortamento e desordens neurológicas em equinos. O presente estudo foi realizado visando avaliar a resposta inflamatória causada pelo EHV-1 por meio da análise das manifestações clínicas, alterações histopatológicas e resposta imune do hospedeiro no sistema nervoso central (SNC). Camundongos das linhagens BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) e C3H/HeJ (H2k) foram inoculados por via intranasal com as estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1. Nesse estudo, associou-se a histopatologia, a resposta de citocinas pró-inflamatórias no SNC de camundongos das diferentes linhagens e o método de transcrição reversa seguida pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR) para investigar a relação entre a infecção pelo EHV-1 e a resposta inflamatória com o desenvolvimento de lesões. As estirpes brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1 causaram infecção aguda e letal nas diferentes linhagens de camundongos isogênicos. Os sinais clínicos e neurológicos, tais como perda de peso, pelos arrepiados, postura arqueada, apatia, dispneia, desidratação e sialorreia apareceram entre o 2º e 3º dia pós-infecção (dpi). Essas manifestações foram acompanhadas pelo aumento da sensibilidade a estímulos externos, convulsões, recumbência e morte. As alterações histopatológicas consistiram em necrose neuronal, edema, necrose de liquefação, leptomeningite neutrofílica, manguito perivascular, hemorragia focal, inflamação não supurativa, gliose multifocal e infiltração perivascular de células polimorfonucleares e mononucleares. As características e a extensão das lesões variaram entre as linhagens de camundongos. Animais inoculados com a estirpe A4/72 apresentaram lesões histopatológicas de maior grau de severidade quando comparados com aqueles inoculados com a estirpe A9/92. Observou-se aumento da concentração plasmática de TNF-α, IL-6, CCL2 e IFN-γ nos camundongos infectados pelo EHV-1 no 2º dpi. Detectou-se aumento da concentração plasmática e da expressão de mRNA para TNF-α, IL-6 e CCL2 no SNC dos camundongos infectados pelo EHV-1 no 3º dpi; entretanto, não houve aumento da concentração plasmática nem da expressão de mRNA para IFN-γ no 3º dpi. Evidenciou-se que a estirpe A4/72 do EHV-1 induz uma resposta imune sistêmica mais efetiva, enquanto que o vírus A9/92 culmina em uma resposta imunológica mais efetiva no SNC. Os camundongos com o fundo genético C57BL/6 e BALB/c mostraram níveis mais altos de expressão de mRNA para TNF-α, IL-6 e CCL2, quando comparados com os C3H/HeJ. A gravidade dos sinais clínicos observados em camundongos infectados pode ser correlacionada com o pico dessas citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6) e da quimiocina CCL2, que são produzidas logo após a infecção viral por células residentes da glia e/ou infiltrativas no SNC. Esses achados indicam que as diferentes linhagens de camundongos isogênicos são susceptíveis à infecção por estirpes neuropatogênicas do EHV-1; as diferenças no padrão de alterações histopatológicas mostram que elas dependem do hospedeiro infectado, da estirpe viral e da resposta imunológica; e a supressão do interferon (IFN) tipo 1 sugere ser um mecanismo de escape do EHV-1 frente ao sistema imune. A baixa expressão de IL-6, TNF-α e da quimiocina CCL2 em camundongos C3H/HeJ se explica pela mutação no gene toll-like receptor 4 (TLR-4) existente nessa linhagem de camundongo. Adicionalmente, os camundongos C3H/HeJ apresentaram lesões histopatológicas mais severas no SNC quando comparados com BALB/c e C57BL/6. Sugere-se que o IFN tipo I e o gene TLR-4 apresentam importante papel na patogênese do EHV-1 bem como proteínas do agente viral responsáveis pela supressão do IFN e partículas virais que sejam reconhecidas pelo TLR-4 podem ser alvos para o desenvolvimento de novas abordagens para o tratamento da doença viral e para a eficiência de imunógenos / The equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes respiratory disease, abortion and neurological disorders in horses. This study was conducted to evaluate the inflammatory response caused by EHV-1 by the analysis of clinical manifestations, histopathological changes and the host immune response in the central nervous system (CNS). BALB/c (H2d), C57BL/6 (H2b) and C3H/HeJ (H2k) mice were inoculated intranasally with Brazilian EHV-1 strains A4/72 and A9/92. In this study, joined histopathology, the response of proinflammatory cytokines in the CNS of mice of different strains and reverse transcription method followed by quantitative polymerase chain reaction in real time (RT-qPCR) to investigate the relationship between infection by EHV-1 and inflammatory response in the development of lesions. Brazilian strains A4/72 and A9/92 EHV-1 caused acute lethal infection in different strains of inbred mice. Clinical and neurological signs such as weight loss, the bristly hair, hunched posture, apathy, dyspnoea, dehydration and salivary hypersecretion appeared between 2nd and 3rd day after infection (dpi). These events were accompanied by increase in the sensitivity to external stimuli, convulsions, recumbency and death. Histopathological changes were neuronal necrosis, edema, liquefaction necrosis, neutrophilic leptomeningitis, perivascular cuff, focal hemorrhage, non-suppurative inflammation, multifocal gliosis and perivascular infiltration of polymorphonuclear and mononuclear cells. The characteristics and the extent of the injuries varied between strains of mice. Animals inoculated with the A4/72 strain showed histopathological lesions of greater severity when compared with those inoculated with the A9/92 strain. There was an increase in plasma concentrations of TNF-α, IL-6, CCL2 and IFN-γ in mice infected by EHV-1 in 2nd dpi. Plasma concentrations and the expression of mRNA for TNF-α, IL-6 and CCL2 in the CNS of mice infected with EHV-1 at 3rd dpi were increased; however, there was no increase in plasma concentration or expression for the mRNA of IFN-γ at 3rd dpi. It was evident that the EHV-1 strain A4/72 induces a more effective systemic immune response, whereas the A9/92 virus culminates in a more effective immune response in the CNS. The C57BL/6 and BALB/c mice showed higher levels of mRNA expression for TNF-α, IL-6 and CCL2, compared to C3H/HeJ mice. The severity of clinical signs observed in infected mice can be correlated with the peak of these proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-6) and CCL2 chemokine, which are then produced after viral infection by resident glial cells and/or infiltrative cells in the CNS. These findings indicate that different strains of inbred mice are susceptible to infection neuropathogenic EHV-1 strains; the differences in the pattern of pathological changes show that they depend on the infected host, the EHV-1 strain and the immune response; and the suppression of interferon (IFN) type I suggested to be an escape mechanism for the EHV-1 against the immune system. The low expression of IL-6, TNF-α and chemokine CCL2 in C3H/HeJ mice can be explained by a mutation in toll-like receptor 4 (TLR-4) gene existing in this mouse strain. Additionally, C3H/HeJ mice exhibited more severe histopathological lesions in the CNS as compared to BALB/c and C57BL/6. It is suggested that type I IFN and TLR-4 gene have important role in the pathogenesis of EHV-1 and viral agent proteins responsible for the suppression of IFN and the viral particles that are recognized by TLR-4 can be targets for the development of new approaches for the treatment of viral disease and the efficiency of immunogens

Submitted by Kelson Anthony de Menezes (kelson@ucb.br) on 2016-12-19T19:37:39Z No. of bitstreams: 1 FabiodeBarrosAmaralDissertacao2014.pdf: 2938215 bytes, checksum: 3d899bf568eeae36d21979ba7aafab3c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T19:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FabiodeBarrosAmaralDissertacao2014.pdf: 2938215 bytes, checksum: 3d899bf568eeae36d21979ba7aafab3c (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / The equine chorionic gonadotropin (eCG) has been used as an important resource in the processes of reproduction in animals of economic interest, especially horses and cattle. The eCG molecule consists of a glycoprotein composed of two subunits called alpha and beta which together perform the function of both LH (luteinizing hormone) and FSH (follicle stimulating hormone) and due to this characteristic has great potential to induce ovulation in household species. Based on the aforementioned characteristics, the present work was was aimed at the study and characterization of the structure of eCG using molecular modeling techniques as well as testing its production in cells of the microorganism Pichia pastoris. Furthermore, chimeric models have been proposed linking the eCG and immunoglobulin G (IgG) molecule based on studies that reveal the great potential of it in raising the half-life of other molecules circulating in the organism. Four chimeric models were prepared so that the eCG alpha and beta chains are connected by a hinge, short and flexible regions, while the terminal region of the alpha chain was connected to the N-terminal portion of the CH2 domain of the IgG by another hinge region, thus resulting in a model in which two different molecules are linked. / A gonadotrofina cori??nica equina (eCG) tem sido um importante recurso usado nos processos de reprodu????o em animais de interesse econ??mico, principalmente equinos e bovinos. A mol??cula de eCG consiste em uma glicoprote??na composta de duas subunidades denominadas alfa e beta que juntas desempenham a fun????o tanto de LH (horm??nio luteinizante) como FSH (horm??nio fol??culo estimulante) e devido a essa caracter??stica possui um grande potencial para induzir a ovula????o em esp??cies dom??sticas. Baseando-se nas caracter??sticas citadas, o presente trabalho teve como objetivo estudar e caracterizar a estrutura do eCG utilizando-se t??cnicas de modelagem molecular assim como testar a sua produ????o em c??lulas do microrganismo Pichia pastoris. Al??m disso, foram propostos modelos quim??ricos ligando eCG ?? mol??cula de imunoglobulina G (IgG) tendo como base estudos que revelam o grande potencial da mesma em elevar a meia vida de outras mol??culas em circula????o no organismo. Quatro modelos quim??ricos foram apresentados de forma que as cadeias beta e alfa do eCG s??o conectadas por regi??es hinge que s??o sequ??ncias curtas e flex??veis da mol??cula enquanto que a regi??o terminal da cadeia alfa foi conectada por meio de outra regi??o hinge, ?? por????o N-terminal do dom??nio CH2 da IgG, portanto, resultando em um modelo em que est??o ligadas duas mol??culas diferentes.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T16:43:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EncefalomieliteEquinaIlha.PDF: 1366808 bytes, checksum: ba2d7733f0ff4fb35353b9c21dc7a614 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-19T12:26:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EncefalomieliteEquinaIlha.PDF: 1366808 bytes, checksum: ba2d7733f0ff4fb35353b9c21dc7a614 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-19T12:26:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EncefalomieliteEquinaIlha.PDF: 1366808 bytes, checksum: ba2d7733f0ff4fb35353b9c21dc7a614 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Nove casos de encefalomielite equina foram estudados na Ilha de Marajó, estado do Pará, Brasil. Os animais apresentavam dificuldade em se manter em estação, andar em círculo, acentuada depressão, pálpebras cerradas, paralisia da língua, tremores musculares, bruxismo, anorexia e desidratação. Alguns apresentavam diminuição dos reflexos auricular, palpebral, de ameaça, diminuição do tônus da língua e taquicardia. Posição de auto-auscultação foi observada com frequência. Os animais muitas vezes eram encontrados apoiados em troncos e cercas para se manterem em estação. À necropsia verificou-se hemorragia das leptomeninges e medula, alguns animais apresentaram ainda aderencia das leptomeninges. Na histopatologia verificou-se encefalite difusa afetando principalmente a substância cinzenta, com meningite e coroidite. Foi observada presença de manguitos perivasculares constituídos por células inflamatórias mononucleadas. Em dois animais identificou-se o Eastern equine encephalitis virus por semi nested transcrição reversa reação de polimerase em cadeia (Semi-Nested RT-PCR). / Nine cases of equine encephalomyelitis were studied in the Marajó Island, State of Pará, Brazil. The animals had difficulty in maintaining a station, walk in a circle, marked depression, eyelids closed, tongue paralysis, muscle tremors, bruxism, anorexia and dehydration. Some had their ear and eyelid reflexes diminished, decreased tongue tone and tachycardia. Position of self-hearing was observed frequently. The animals were often found leaning on tree trunks and fences to keep themselves on station. At necropsy, they showed hemorrhage of the meninges and spinal cord, and some animals also showed adhesion of the meninges. Histologically there was diffuse encephalitis affecting mainly the gray matter, with meningitis and choroiditis. It was observed the presence of perivascular cuffs consisting of mononuclear inflammatory cells. In two animals it was possible to identificate the Eastern equine encephalitis virus by semi-nested reverse transcription polymerase chain reaction (semi-nested RT-PCR).