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Diretrizes para especificação de serviços para governo eletrônico baseado em reuso. / Guidelines for the specification of e-government based on reuse.

Wannessa Rocha da Fonseca 23 April 2014 (has links)
A evolução dos processos de negócio para uma visão de serviços alavancou um novo modelo computacional, o modelo orientado a serviços. Nesse modelo, os processos de negócio são modelados e implementados sob a ótica de serviços. O governo mostra-se como um domínio potencial de implantação de soluções orientadas a serviços. Embora as organizações governamentais estejam adotando o uso de serviços a fim de alcançar a interoperabilidade de sistemas de informação de governo, os serviços são geralmente criados a partir dos princípios elementares, sem considerar o reuso de soluções orientadas a serviços concebidas por outras entidades públicas. Assim, esta pesquisa tem como propósito fornecer diretrizes para auxiliar a especificação de serviços de governo eletrônico baseadas em padrões de serviços, para subsidiar o desenvolvimento de sistemas de governo, alinhados aos benefícios de computação orientada a serviços e o reuso de soluções para o governo eletrônico. Esta tese apresenta o MESe-gov, um modelo para especificação de serviços de governo eletrônico e o DESe-gov, um conjunto de diretrizes para especificação de serviços de governo eletrônico. Também é proposto um ciclo de vida de serviço para a especificação de novos serviços a partir dos padrões de serviços. A concepção de serviços, aliada ao conceito de padrões de serviços, ajuda engenheiros de software identificar elementos funcionais recorrentes e reduzir a redundância de esforços para a concepção de serviços com propósitos similares. Nesta pesquisa, foram realizados estudos de casos em que foram aplicadas as diretrizes a partir dos serviços existentes na área financeira do governo. Como resultado, os estudos de casos mostram que as diretrizes auxiliam a especificação de padrões de serviços. / The evolution of business processes for an insight on services has boosted a new computational model, the service-oriented model. The business processes in the service-oriented computational model are modelled and implemented from the perspective of services. The government appears to be a high potential scenario for the deployment of service-oriented applications. Although government organizations are adopting the use of services in order to achieve interoperability of government systems, those services are usually created from basic principles, without considering the reuse of service-oriented solutions adopted by other public entities. Thus, this research aims to provide guidelines to assist the specification of e-government services based on service patterns, to support the development of government systems, aligned with the benefits of service-oriented computing and the reuse of solutions for e-government. This thesis presents the MESe-gov, a model for the services specification of electronic government and the DESe-gov, a set of guidelines for the services specification of electronic government. A service lifecycle is also proposed for the specification of new services from service patterns. The conception of services combined with the concept of service patterns can help software engineers to identify recurrent functional elements and reduce redundant efforts in the conception of services with the same purposes. In this research, case studies were conducted in which the guidelines from existing services in the governments financial area were implemented. As a result, the case studies show that the guidelines help to specify service patterns.
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Validação de especificações de sistemas reativos: Definição e análise de critérios de teste. / Validation of the reactive systems specifications: definition and analysis of the testing criteria.

Simone do Rocio Senger de Souza 14 December 2000 (has links)
Este trabalho investiga a aplicação de critérios de teste para o teste de especificações do aspecto comportamental de Sistemas Reativos, descritos em Estelle e em Statecharts. A utilização de Sistemas Reativos em várias atividades humanas, requer uma maior qualidade tanto do produto como do processo de desenvolvimento, pois falhas nesses sistemas podem ocasionar riscos para vidas humanas e perdas econômicas. Os critérios de teste propostos nesta tese visam a fornecer uma medida de cobertura dos testes, permitindo que a qualidade da atividade de teste possa ser mensurada e avaliada. Esta tese apresenta contribuições para as três atividades fundamentais no contexto de teste de software, que são: definição de critérios de teste, desenvolvimento de estudos teóricos/empíricos e desenvolvimento de ferramentas. Com relação à definição de critérios de teste, é proposta a aplicação do Teste de Mutação para Estelle e a aplicação de critérios de Fluxo de Controle para Estelle e Statecharts. Para o Teste de Mutação, são identificados os tipos de erros em especificações Estelle, definidos os operadores de mutação, estratégias de teste incrementais e critérios de mutação alternativa que visam a diminuir o custo de aplicação desse critério. Para os critérios de Fluxo de Controle, foram definidas duas famílias de critérios: FCCS - Família de Critérios de Cobertura para Statecharts e FCCE - Família de Critérios de Cobertura para Estelle. Estudos teóricos são realizados visando a analisar a complexidade do Teste de Mutação para Estelle e a relação de inclusão dos critérios FCCS e FCCE. Estudos empíricos são realizados visando a comparar os critérios de teste definidos e a analisar a sua aplicação durante a simulação de especificações Estelle e Statecharts. Com relação ao desenvolvimento de ferramentas, a família de ferramentas Proteum, que apóia a aplicação do teste de Mutação, e os ambientes para simulação de especificações Estelle (EDT) e Statecharts (StaSim) fornecem uma base essencial para o desenvolvimento das ferramentas. São apresentadas algumas ponderações que devem ser consideradas para a definição de ferramentas de apoio à aplicação dos critérios propostos. / Reactive Systems are applied to several human activities and as failures in these systems may cause human or economical losses, it is required the use of high-quality software development processes that would lead to the production of high-quality products. This thesis investigates criteria for testing of Reactive Systems\' behavior specifications, specified either in Estelle or in Statecharts. These criteria systematize the testing activity and provide mechanisms for the software tests quality assessment. This thesis presents contributions to the three fundamental activities in the context of software testing, which are: definition of testing criteria, theoretical studies and tool development. In relation to the definition of testing criteria, it is proposed the use of Mutation Testing for Estelle specifications and the use of Control Flow Testing for Estelle and Statecharts specifications. For Mutation Testing, the errors types in Estelle specifications are identified; mutation operators are defined and incremental testing strategies are established. In this context, it is explored the alternative mutation criteria, which aim at reducing the cost of application of the Mutation Testing. For Control Flow Testing, two families of criteria are defined: SCCF - Statechart Coverage Criteria Family and ECCF - Estelle Coverage Criteria Family. Theoretical studies are accomplished to analyze the complexity of the Mutation Testing to Estelle and the inclusion relation for the FCCS and FCCE criteria. Case studies are conducted to evaluate the testing criteria defined in this thesis. The application of these criteria during the simulation of Estelle and Statecharts specifications is analyzed. The Proteum family tools, that support the application of Mutation Testing, and the simulation environments to Estelle (EDT) and Statecharts (StatSim) supply an essential base for tools development. Considerations about the definition of supporting tools to the application of the proposed criteria are realized.
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Framework formal para composição automática de serviços em sistemas de internet das coisas. / Formal framework for automatic service composition in internet of things system.

André Luís Meneses Silva 01 March 2018 (has links)
É cada vez mais notável o desenvolvimento da indústria micro-eletrônica. A criação de dispositivos eletrônicos menores, que apresentam maior autonomia de energia, aliados ao aumento do poder de processamento, armazenamento e comunicação sem fio de alta velocidade favoreceram o surgimento e disseminação de novas tecnologias e paradigmas, dentre elas a Internet das Coisas (IoT). Do ponto de vista tecnológico, IoT é uma rede de objetos físicos que possuem tecnologia embarcada de sensoriamento e atuação. Agências de consultoria empresarial, tais como a McKinsey & Company, afirmam que IoT apresenta valor de mercado bilionário e poderá ultrapassar a casa dos trilhões antes de 2020. Dessa forma, o mercado de IoT vem se apresentando como um dos mercados mais promissores para os próximos anos. Alguns dos problemas que podem postergar este crescimento são os problemas decorrentes da dificuldade de integração e escalabilidade das aplicações de IoT. Em IoT, problemas de interoperabilidade são corriqueiros, seja pela alta diversidade de dispositivos empregados, seja pela incompatibilidade entre fabricantes. Em relação a escalabilidade, sistemas de IoT possuem uma demanda natural por alta escala, visto que buscam atender demandas comuns a vários setores, seja na indústria, transporte, domótica, segurança pública, comércio, entre outros. Este trabalho apresenta uma solução para esses problemas através do SWoTPAD, um framework formal que auxilia o projetista no desenvolvimento de soluções para IoT. SWoTPAD oferece uma linguagem para especificar dispositivos e serviços, descrever o ambiente e realizar requisições. Adicionalmente, ele gera o módulo de descoberta, composição automática de serviços e execução. Aplicações SWoTPAD são facilmente integráveis, pois usam e estendem um mesmo conjunto de ontologias, o que garante a compatibilidade nos dados gerados e consumidos por essas aplicações. A escalabilidade advém da associação de anotações semânticas a cada um dos elementos que compõem a aplicação de IoT. Essas anotações permitem ao SWoTPAD descobrir, classificar, selecionar e compor automaticamente serviços do ambiente. Dessa forma, SWoTPAD pode procurar por soluções alternativas, quando o serviço original apto a atender uma determinada demanda se encontra sobrecarregado ou indisponível. Para validação do framework, foram adotados dois estudos de caso. O primeiro deles, o problema de implantação de serviços em um ambiente de nuvem, e o segundo, uma aplicação de segurança residencial. O estudo de caso demonstrou que é possível desenvolver aplicações completas de IoT no framework proposto. Adicionalmente, o mecanismo de composição automática gerado pelo framework para essas aplicações apresenta uma piora média de 45% de desempenho quando comparado à composição manual. / The development of the micro-electronics industry is becoming more and more remarkable. The creation of smaller electronic devices, with higher degree of autonomy, processing, storage, and wireless communication favor the emergence and dissemination of new technologies and paradigms, such as the Internet of Things (IoT ). From the technological point of view, IoT is a network of physical objects that have embedded technology of sensing and actuation. McKinsey & Company says the IoT market is already reaching billionaire numbers and may exceed the trillions by 2020. Thus, the IoT market is proving to be one of the most promising markets in the next years. Problems that can delay this growth come from the difficulty of integration and scalability of IoT applications. In IoT, interoperability problems are common, either because of the high diversity of devices used, or because of the incompatibility between manufacturers. Regarding scalability, IoT systems have a natural demand for high scale, since they seek to meet common demands in various sectors, be it in industry, transportation, home automation, public safety, commerce, among others. This work solves these problems through SWoTPAD, a formal framework that assists the designer in developing solutions for IoT. SWoTPAD provides a language for specifying devices and services, describing the environment, and performing requests. Additionally, it generates the discovery, automatic service composition, and execution module. SWoTPAD applications are easily integrable, since they use and extend the same set of ontologies, which guarantees compatibility in the data generated and consumed by these applications. Scalability comes from the association of semantic annotations to each of the elements that compose the IoT application. These annotations allow SWoTPAD to discover, rank, select, and automatically compose services. In this way, SWoTPAD can search for alternative solutions, when the original service able to meet a particular demand is overloaded or unavailable. Two case studies were developed for validation of the framework. The first one, the problem of deploying services in a cloud environment, and the second, a home security system. The case study demonstrated that it is possible to develop complete IoT applications in the proposed framework. Also, the automatic service composition module generated by SWoTPAD for these applications has a mean worsening of 45 % of performance when compared to the manual composition.
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Engenharia de sistema em redes eusociais. / Systems engineering in eusociais networks.

Fábio Leandro Lazo Sanches 14 September 2010 (has links)
Este trabalho apresenta a abordagem sistêmica, a complexidade e as propriedades emergentes de um sistema de atividades humanas utilizando métodos da Engenharia de Sistemas utilizando como referência para a prova de conceito a metáfora das redes eusociais da Biologia. A análise do sistema foi feita por meio de uma comparação entre as redes eusociais, e as redes de cooperação entre universidades, após esta comparação, que levantou características relevantes para uma comunidade de sucesso, foram aplicados os 7 estágios da metodologia Soft System Methodology para a proposta de um protótipo de uma Rede Temática, aqui analisada como um sistema sociotécnico, abordando a interação entre pessoas e a tecnologia. Nesta prova de conceito foram utilizadas as informações coletadas durante reuniões das partes interessadas. Estas informações foram utilizadas para a criação de um protótipo que foi comparado com a situação real e depois modificado e melhorado pelas partes interessadas. / This work presents a systemic approach, the complexity and emergent properties of a human activities system using systems engineering methods using as reference for the proof of concept, the metaphor of networks eusocial Biology. The analysis system was made through a comparison between the eusocial networks and networks of cooperation between universities, after this comparison, which raised relevant features to a success community, were applied 7 stages of Soft System Methodology for a Thematic Network prototype proposed, here regarded as a sociotechnical system, addressing the interaction between people and technology. In this proof of concept we used the information gathered during meetings with stakeholders. This information was used to create a prototype that was compared with the actual situation and then modified and improved by stakeholders.
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Validação de especificações de sistemas reativos: Definição e análise de critérios de teste. / Validation of the reactive systems specifications: definition and analysis of the testing criteria.

Souza, Simone do Rocio Senger de 14 December 2000 (has links)
Este trabalho investiga a aplicação de critérios de teste para o teste de especificações do aspecto comportamental de Sistemas Reativos, descritos em Estelle e em Statecharts. A utilização de Sistemas Reativos em várias atividades humanas, requer uma maior qualidade tanto do produto como do processo de desenvolvimento, pois falhas nesses sistemas podem ocasionar riscos para vidas humanas e perdas econômicas. Os critérios de teste propostos nesta tese visam a fornecer uma medida de cobertura dos testes, permitindo que a qualidade da atividade de teste possa ser mensurada e avaliada. Esta tese apresenta contribuições para as três atividades fundamentais no contexto de teste de software, que são: definição de critérios de teste, desenvolvimento de estudos teóricos/empíricos e desenvolvimento de ferramentas. Com relação à definição de critérios de teste, é proposta a aplicação do Teste de Mutação para Estelle e a aplicação de critérios de Fluxo de Controle para Estelle e Statecharts. Para o Teste de Mutação, são identificados os tipos de erros em especificações Estelle, definidos os operadores de mutação, estratégias de teste incrementais e critérios de mutação alternativa que visam a diminuir o custo de aplicação desse critério. Para os critérios de Fluxo de Controle, foram definidas duas famílias de critérios: FCCS - Família de Critérios de Cobertura para Statecharts e FCCE - Família de Critérios de Cobertura para Estelle. Estudos teóricos são realizados visando a analisar a complexidade do Teste de Mutação para Estelle e a relação de inclusão dos critérios FCCS e FCCE. Estudos empíricos são realizados visando a comparar os critérios de teste definidos e a analisar a sua aplicação durante a simulação de especificações Estelle e Statecharts. Com relação ao desenvolvimento de ferramentas, a família de ferramentas Proteum, que apóia a aplicação do teste de Mutação, e os ambientes para simulação de especificações Estelle (EDT) e Statecharts (StaSim) fornecem uma base essencial para o desenvolvimento das ferramentas. São apresentadas algumas ponderações que devem ser consideradas para a definição de ferramentas de apoio à aplicação dos critérios propostos. / Reactive Systems are applied to several human activities and as failures in these systems may cause human or economical losses, it is required the use of high-quality software development processes that would lead to the production of high-quality products. This thesis investigates criteria for testing of Reactive Systems\' behavior specifications, specified either in Estelle or in Statecharts. These criteria systematize the testing activity and provide mechanisms for the software tests quality assessment. This thesis presents contributions to the three fundamental activities in the context of software testing, which are: definition of testing criteria, theoretical studies and tool development. In relation to the definition of testing criteria, it is proposed the use of Mutation Testing for Estelle specifications and the use of Control Flow Testing for Estelle and Statecharts specifications. For Mutation Testing, the errors types in Estelle specifications are identified; mutation operators are defined and incremental testing strategies are established. In this context, it is explored the alternative mutation criteria, which aim at reducing the cost of application of the Mutation Testing. For Control Flow Testing, two families of criteria are defined: SCCF - Statechart Coverage Criteria Family and ECCF - Estelle Coverage Criteria Family. Theoretical studies are accomplished to analyze the complexity of the Mutation Testing to Estelle and the inclusion relation for the FCCS and FCCE criteria. Case studies are conducted to evaluate the testing criteria defined in this thesis. The application of these criteria during the simulation of Estelle and Statecharts specifications is analyzed. The Proteum family tools, that support the application of Mutation Testing, and the simulation environments to Estelle (EDT) and Statecharts (StatSim) supply an essential base for tools development. Considerations about the definition of supporting tools to the application of the proposed criteria are realized.
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RECOMENDAÇÕES PARA ESPECIFICAÇÃO DE VIDROS EM EDIFICAÇÕES COMERCIAIS NA REGIÃO CLIMÁTICA DE PORTO ALEGRE-RS / RECOMMENDATIONS REGARDING THE SPECIFICATION OF GLASSES ON BUSINESS BUILDINGS ON THE CLIMATE ZONE OF PORTO ALEGRE - RS

Cornetet, Mariângela Conte 18 November 2009 (has links)
In business buildings, great part of the required power is spent on the air conditioning of internal settings. The transparent façades on such buildings are greatly significant on such matters, since a notable percentage of the thermal exchanges happen trough these elements. This paper structures an overview on the historical changes on the use of glasses on business buildings in the city of Porto Alegre, state of Rio Grande do Sul, highlighting the contemplation of the aspect of thermal and luminosity control on built environments. For each historical period, it s notable that the availability of different types of glasses on the market, chosen by architects, changes, resulting in diverse thermo-environmental and visual behaviors. The present paper was based on historical data, ranging from the period of 1992 to 2008, allowing analyses based on the performance of each alternative, taking into consideration the glasses spectrophotometric characteristics, solar factor values, visible transmission and thermal transmittance and the relation within the amount of energy required for cooling and heating the considered settings. 25 buildings were analyzed in the city and, from those, seven were selected for being considered to be representative of their period, with different solutions on their glass coverings. The data obtained was the basis for comparing their performances, on the various solar orientations, with that of a common glass. A trend of specifying lenses less reflective has been observed, with an increase in the amount of energy inflowing the rooms; and insulated glasses also, that hamper trade among environments. / Em edifícios comerciais, grande parte da energia necessária é gasta para o condicionamento térmico dos ambientes. Os fechamentos transparentes destes edifícios têm grande importância neste fato, pois significativo percentual das trocas térmicas ocorre através destes elementos. Este trabalho faz uma avaliação das mudanças históricas na utilização de vidros em prédios comerciais na cidade de Porto Alegre no estado do Rio Grande do Sul, evidenciando a consideração do aspecto do controle térmico e luminoso dos ambientes. Para cada período histórico, observa-se que as opções de vidros disponíveis no mercado, e especificados, são diferentes, resultando em comportamentos ambientais térmicos e visuais também diferentes. Este trabalho foi baseado em dados históricos do período de 1992 a 2009, permitindo uma análise dos desempenhos de cada solução, considerando-se as características espectrofotométricas dos vidros, valores de fator solar, transmissão no visível e transmitância térmica, e sua relação com a quantidade de energia necessária para refrigerar e aquecer suas salas. Foram analisados 25 edifícios comerciais na cidade, e destes, foram selecionadas sete considerados representativos para sua época, com soluções diferentes em seus envidraçamentos. Os dados obtidos serviram de base para comparar suas performances, nas devidas orientações solares, com as de um vidro comum. Observou-se que há uma tendência pela especificação de vidros menos refletivos, favorecendo o aumento da quantidade de energia que adentra as salas, e também de vidros insulados, que dificultam as trocas térmicas entre ambientes.
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Utilizando estimadores entrópicos generalizados na estimação de modelos de apreçamento de ativos

Brandão, Diego Gusmão 16 December 2013 (has links)
Submitted by Diego Brandão (digusmao@hotmail.com) on 2014-07-09T16:20:43Z No. of bitstreams: 1 mestrado.pdf: 514491 bytes, checksum: 85052d9356ad36406b3d733cdd4627f8 (MD5) / Approved for entry into archive by BRUNA BARROS (bruna.barros@fgv.br) on 2014-07-30T19:01:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mestrado.pdf: 514491 bytes, checksum: 85052d9356ad36406b3d733cdd4627f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcia Bacha (marcia.bacha@fgv.br) on 2014-08-01T12:33:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mestrado.pdf: 514491 bytes, checksum: 85052d9356ad36406b3d733cdd4627f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-01T12:33:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mestrado.pdf: 514491 bytes, checksum: 85052d9356ad36406b3d733cdd4627f8 (MD5) Previous issue date: 2013-12-16 / Este trabalho analisa as propriedades de uma nova medida de má especificação de modelos de apreçamento, que está relacionada com o tamanho do ajuste multiplicativo necessário para que o modelo seja corretamente especificado. A partir disso, caracterizamos o parâmetro que minimiza a medida a partir de um programa dual, de solução mais simples. Os estimadores naturais para esse parâmetro pertencem à classe de Generalized Empirical Likelihood. Derivamos as propriedades assintóticas deste estimador sob a hipótese de má especificação. A metodologia é empregada para estudar como se comportam em amostras finitas as estimativas de aversão relativa ao risco em uma economia de desastres quando os estimadores estão associados a nossa medida de má especificação. Nas simulações vemos que em média a aversão ao risco é superestimada, mesmo quando ocorre um número significativo de desastres.
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Um processo ágil para especificação de requisitos em programas interativos com foco em roteiros de TV

Lula., Mariana Meirelles de Mello 21 November 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2015-05-14T12:36:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5528255 bytes, checksum: a0288caf46be4569d85b7a218a0a4dc7 (MD5) Previous issue date: 2011-11-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The addition of software to TV programs through the implantation of the Brazilian Digital TV boosted the integration of these two major industries: software and TV. These two directions have different thoughts and ways of working, however, with the release of the Digital TV these two professional, communication and information technology need to work together. The software requirements specification follows some of the activities defined in accordance with the procedure being used. In digital television requirements elicitation, we find a different environment in which there are several professional profiles involved in this activity. This research present an agile process for requirements specification in interactive programs that integrate audiovisual content and interactive applications, in order to facilitate understanding and development of the interactive program by the team involved. The approach presented is based on a screenplay and interactive user stories. The interactive script will add the interactive application information to the communication team script and the storyboard will facilitate the understanding of the application. The process was used in a real project, where twelve interactive programs were developed. Finally, we discuss the results and perspectives. / A adição de software aos programas de TV através da implantação do Sistema Brasileiro de TV Digital impulsionou a integração dessas duas grandes indústrias: software e TV. Essas duas linhas de trabalho possuem diferentes pensamentos e formas de trabalhar, contudo, com a chegada da TV Digital estes dois perfis profissionais, comunicação e informática necessitam trabalhar juntos. A especificação de requisitos do software segue algumas atividades determinadas de acordo com o processo que está sendo utilizado. Na televisão digital a elicitação de requisitos encontra um ambiente diferente, no qual, temos perfis profissionais diversos que estão envolvidos nesta atividade. Neste trabalho apresentamos um processo ágil para a especificação de requisitos em programas interativos que integram conteúdo audiovisual e aplicações interativas, buscando facilitar o entendimento e desenvolvimento do programa interativo pela equipe envolvida. A abordagem apresentada é baseada em roteiro interativo e histórias de usuário. O roteiro interativo vai adicionar as informações da aplicação interativa ao roteiro da equipe de comunicação e, o storyboard irá facilitar o entendimento da aplicação. O processo foi utilizado em um projeto real, onde doze programas interativos foram desenvolvidos. Por fim, são discutidos os resultados obtidos e perspectivas.
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Detectando má especificação em regressão beta

Oliveira, José Sérgio Casé de 31 January 2013 (has links)
Submitted by Danielle Karla Martins Silva (danielle.martins@ufpe.br) on 2015-03-12T12:34:22Z No. of bitstreams: 2 José Sérgio Casé de Oliveira.pdf: 1717088 bytes, checksum: 91394789d8ecc6a45d75afc3abd4503c (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T12:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 José Sérgio Casé de Oliveira.pdf: 1717088 bytes, checksum: 91394789d8ecc6a45d75afc3abd4503c (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / Esta dissertação tem por objetivo avaliar o poder do teste de má especificação proposto por Cribari-Neto & Lima (2007) em vários cenários que configuram má especificação do modelo de regressão beta, em particular: função de ligação incorreta, presença de outlier na amostra, omissão de variável regressora importante, estimação com dispersão constante quando o modelo verdadeiro possui dispersão variável (e vice-versa) e má especificação da distribuição da variável resposta. O desempenho do teste foi avaliado em modelos de regressão beta com dispersão fixa e variável. Adicionalmente, introduzimos um outro teste de má especificação, o qual também teve seu poder avaliado em diversos cenários de má especificação. O poder do teste proposto foi comparado ao do teste proposto por Cribari-Neto & Lima (2007). Os desempenhos dos testes em amostras finitas foram avaliados numericamente por meio de simulações de Monte Carlo. Por fim, apresentamos algumas aplicações com dados reais.
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Anticorpos anti-intimina: análise da reatividade dos anticorpos policlonal e monoclonal, clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples (scFv) do anticorpo monoclonal / Anti-intimin antibodies: polyclonal and monoclonal reactivity analyzes, cloning and expression of single chain fragment variable (scFv) of monoclonal antibodies

Menezes, Márcio Anunciação 09 March 2010 (has links)
Intimina é o principal fator de virulência envolvido na patogênese de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). A detecção de EHEC e EPEC típica ou atípica é de fundamental importância na definição da conduta terapêutica das infecções promovidas por E. coli, que ainda são a principal causa de diarreia aguda em crianças e adultos em muitos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Anticorpos são ferramentas importantes na detecção de diversos patógenos. Neste trabalho avaliou-se a sensibilidade e especificidade dos anticorpos policlonal e monoclonal anti-intimina frente a isolados de EPEC e EHEC por immunoblotting. Os anticorpos apresentaram 100% de especificidade e a sensibilidade foi de 97%, 92% e 78%, quando se utilizou a fração enriquecida em IgG do soro de coelho, antissoro de rato e anticorpo monoclonal, respectivamente. Esse anticorpo monoclonal anti-intimina foi caracterizado como IgG2b e 1 µg desse anticorpo reconheceu 0,6 µg de intimina purificada com uma constante de dissociação de 1.3 x 10-8 M. A menor reatividade do anticorpo monoclonal em relação aos anticorpos policlonais levou-nos à clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples desse anticorpo (scFv). Para isso, o mRNA do hibridoma anti-intimina foi extraído, reversamente transcrito para cDNA e amplificadas as cadeias leve e pesada da fração variável do anticorpo, utilizando iniciadores aleatórios comerciais. As cadeias amplificadas foram ligadas ao vetor pGEM-T Easy e sequenciadas. Iniciadores específicos foram desenhados e utilizados em uma estratégia de amplificação e união das cadeias, formando o scFv, que por sua vez foi clonado no vetor de expressão pAE. Linhagem de E. coli BL21(DE3)pLys foi transformada com o plasmídeo pAE-scFv antiintimina e submetida à indução protéica. O scFv anti-intimina foi expresso de forma insolúvel, solubilizado, purificado e submetido ao ensaio de refolding. O rendimento obtido foi de 1 mg de proteína por 100 mL de cultivo bacteriano. Para testar a funcionalidade do scFv, foram realizados ensaios de ELISA de captura e imunofluorescência. Os resultados mostraram que 275 ng de scFv reagiram com 2 µg de intimina purificada a uma absorbância de aproximadamente 0,75 e por imunofluorescência mostrou uma forte reatividade ao isolado de EPEC típica E2348/69. Este estudo demonstrou que o anticorpo recombinante anti-intimina obtido foi capaz de reconhecer a região conservada de intimina (Int388-667) na forma purificada e a intimina α no isolado de EPEC típica, e se mostrou mais eficiente que o anticorpo monoclonal nativo. / Intimin is the major virulence factor involved in the pathogenesis of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). The detection of EHEC and typical or atypical EPEC has fundamental importance in defining the therapeutic management of infections caused by E. coli, which are still the leading cause of acute diarrhea in children and adults in many developed and developing countries. Antibodies are important tools in the detection of several pathogens. In this study it was evaluated the sensitivity and specificity of polyclonal and monoclonal antibodies against intimin in the detection of EPEC and EHEC by immunoblotting. All employed antibodies showed 100% specificity and the sensitivity was 97%, 92% and 78% for rabbit anti-intimin IgG-enriched fraction, rat antisera and monoclonal antibody, respectively. This anti-intimin monoclonal was characterized as IgG2b and 1 mg recognized 0.6 µg of purified intimin with a dissociation constant of 1.3 x 10-8 M. The less extent reactivity of monoclonal led us to clone and express the single chain fragment variable of this antibody (scFv). Thus, the anti-intimin hybridoma mRNA was extracted, reverse transcribed to cDNA and the light and heavy chains of variable fragment of the antibody were amplified using commercial random primers. The chains were amplified, ligated to the pGEM-T Easy vector and the insert was sequenced. Specific primers were designed and used in a strategy to amplify and link the chains, obtaining the scFv, which was cloned into the pAE expression vector. E. coli BL21(DE3)plys was transformed with the pAE-scFv anti-intimin plasmid and subjected to induction of protein expression. The scFv anti-intimin, expressed in the insoluble fraction, was purified and submitted to refolding. The yield was 1 mg of protein per 100 mL of bacterial culture. To test the functionality of the scFv, ELISA and immunofluorescence assays were performed. The results showed that 275 ng of scFv reacted with 2 µg of purified intimin resulting in an absorbance of 0.75. By immunofluorescence it was observed a strong reactivity to the typical EPEC isolate E2348/69. This study demonstrated that the recombinant anti-intimin antibody obtained was able to recognize the conserved region of intimin (Int388-667) in its purified form and α intimin in a typical EPEC isolate, and was more efficient than the native monoclonal antibody.

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