Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-23Bitstream added on 2014-06-13T18:46:23Z : No. of bitstreams: 1 pivatto_m_dr_araiq.pdf: 3895401 bytes, checksum: 8f00934510e296fa101a80060a9db12a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como objetivo o estudo das vias biossintéticas dos alcalóides piperidínicos presentes em Senna spectabilis, motivado pela potente atividade anticolinesterásica e baixa toxicidade observada no derivado (–)-3-O-acetil-espectalina (15), eleito como composto líder para o desenvolvimento de fármacos anti-Alzheimer que estão em fase de estudos pré-clínicos. Por outro lado, o interesse acadêmico no conhecimento das vias metabólicas, pode levar a estudos futuros de engenharia genética para potencializar a produção desses metabólitos uma vez que a síntese é extremamente complexa em função da presença de três centros estereogênicos. Tendo isso em vista, foram selecionadas seis espécies de Senna e Cassia para avaliar a presença dos alcalóides e selecionar aquela que os produz em maior quantidade. Foram estudadas as flores de S. spectabilis, S. multijuga, S. macranthera, S. velutina, C. fistula, C. leptophylla, sendo que só foram detectados alcalóides piperidínicos e piridínicos em S. spectabilis e S. multijuga, respectivamente, utilizando a espectrometria de massas tandem. Embora sejam de classes diferentes, esses metabólitos têm padrão de substituição similar, porém, apresentaram atividade anticolinesterásica diferenciada. De S. spectabilis foram isolados os alcalóides piperidínicos: (–)-cassina (1), (–)-espectalina (9), (–)-3-O-acetil-espectalina (15), (–)-3-O-acetil-cassina (16) e identificados 7-hidroxi-carnavalina (71), 7-hidroxi-cassina (18) e/ou espicigerina (42) utilizando a EM. De S. multijuga foram isolados os alcalóides piridínicos: 7'-multijuguinona (67) e 12'-hidroxi-7'-multijuguinona (69) e identificados 7'-multijuguinol (68) e 12'-hidroxi-7'- multijuguinol (70). Para os estudos biossintéticos dos alcalóides piperidínicos foi inicialmente proposta a biogênese onde lisina e acetato foram eleitos potenciais... / The following work encompass as main goal the study of biosynthetic pathways to produce piperidine alkaloids using Senna spectabilis as natural matrix. Such research was instigated due to the high acetylcholinesterase activity and low toxicity showed by the derivative (–)-3-O-acetyl-spectaline (15), selected as a lead compound against Alzheimer’s disease and currently under pre-clinical trials. Still yet, the academic interest on researching metabolic pathways that may lead to further genetic engineering studies to enhance the production of these metabolites is of extremely importance, due to the inability of producing any commercially viable synthetic strategy for their stereogenic centers. We selected six Senna and Cassia species to evaluate the presence of these metabolites aiming to select which matrix will produce them the most. We studied flowers from S. spectabilis, S. multijuga, S. macranthera, S. velutina, C. fistula and C. leptophylla. From those, we were able to detect piperidine and pyridine alkaloids only in S. spectabilis and S. multijuga, respectively, using tandem mass spectrometry. Regardless of the different structural nature towards 15, those metabolites have similar substitution patterns and showed differential acetylcholinesterase activity. From S. spectabilis were isolated the piperidine alkaloids: (–)-cassine (1), (–)-spectaline (9), (–)-3-O-acetyl-spectaline (15), (–)-3-O-acetyl-cassine (16), and identified 7-hidroxy- carnavaline (71), 7-hidroxy-cassine (18) and/or spicigerine (42) by tandem mass spectrometry and from S. multijuga were isolated the pyridine alkaloids: 7'-multijuguinone (67), 12'-hydroxy-7'-multijuguinone (69) and, identified by MS: 7'-multijuguinol (68) and 12'-hydroxy-7'-multijuguinol (70). We initially proposed the incorporation of lysine and acetate as main precursors of the piperidine alkaloids biosynthetic pathway and thus... (Complete abstract click electronic access below)

The goal of this study was to evaluate the efficiency of several adsorbents on fat removal from extracts of edible oil matrices (olive, soya and sunflower) during residue determination of 165 pesticides employing liquid chromatography coupled to mass spectrometry. The extraction procedure employed in this study was the citrate version of QuEChERS method and the first study carried out was evaluating the efficiency of low temperature precipitation step (freezing out) before clean-up step, both tested in olive oil. During clean-up evaluation, three different adsorbents were studied, where one of them was employed in two different ways, totalizing four different clean-up procedures: i) PSA in combination with magnesium sulfate (d-SPE); ii) Z-sep combined with magnesium sulfate (d-SPE); iii) Z-sep (cartridges SPE) and iv) EMR-Lipid (d-SPE). After evaluation of freezing out and clean-up procedures employing liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry (UHPLC-QTOF-MS), the freezing out combined with clean-up by dispersive solid phase extraction using EMR-Lipid showed important advantages when compared to the other evaluated techniques, such better recovery rates and RSD%. The method was validated for olive, soya and sunflower oils employing ultra-high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UHPLC-TQ-MS/MS) at 10, 20 and 50 μg kg-1. Mean recovery for all evaluated levels in the three matrices was about 70% with mean RSD% below 11%. Most of the pesticides that showed recovery below 70% presented RSD% values lower than 10. For this reason, linearity and matrix effect studies were carried out employing procedural standard calibration approach, an alternative type of calibration that compensates low recovery values and matrix effect, in the range from 10 to 500 μg kg-1. From all evaluated pesticides, 93% showed determination coefficient equal to or higher than 0.99. Matrix effect was similar when the three oils were compared. The method was successfully applied on pesticides determination in oil matrices purchased in Almería and Murcia cities, located at southeastern of Spain. / O objetivo desse estudo foi avaliar a eficiência de diferentes adsorventes na remoção de gordura de extratos provenientes de matrizes de óleos comestíveis (oliva, soja e girassol) durante a determinação de resíduos de 165 agrotóxicos empregando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas. O procedimento de extração empregado nesse estudo foi o método QuEChERS citrato e o primeiro estudo realizado foi avaliando a eficiência de uma etapa de precipitação em baixas temperaturas (freezing out) anterior a etapa de purificação, ambos realizados em azeite de oliva. Durante a avaliação da etapa de purificação, três diferentes adsorventes foram estudados, onde um deles foi empregando de duas maneiras distintas, totalizando quatro técnicas diferentes de purificação: i) PSA em combinação com sulfato de magnésio (d-SPE); ii) Z-sep combinado com sulfato de magnésio (d-SPE); iii) Z-sep (SPE em cartucho) e iv) EMR-Lipid (d-SPE). Após avaliação da etapa de freezing out e da etapa de purificação empregando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas de alta resolução (UHPLC-QTOF-MS) a técnica de precipitação em baixas temperaturas combinada com a purificação por dispersão em fase sólida empregando EMR-Lipid demonstrou importantes vantagens quando comparadas às outras técnicas avaliadas, como melhores resultados de recuperação dos analitos e RSD%. O método foi validado para azeite de oliva e óleos de soja e girassol empregando cromatografia líquida de ultra alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (UHPLC-TQ-MS/MS) nas concentrações de 10, 20 e 50 μg kg-1. O percentual de recuperação médio para os três níveis de fortificação nas três matrizes foi de cerca de 70% com RSD médio menor do que 11%. A maioria dos agrotóxicos com percentuais de recuperação inferiores a 70% demonstraram valores de RSD% menores do que 10. Por essa razão, os estudos de linearidade e efeito matriz foram realizados empregando a técnica de procedural standard calibration, uma técnica alternativa de calibração que compensa os baixos valores de recuperação e efeitos da matriz, na faixa de 10 a 500 μg kg-1. Dos agrotóxicos estudados, 93% apresentaram coeficientes de determinação maiores ou iguais a 0,99. O efeito matriz foi similar quando os três óleos foram comparados. O método foi aplicado com sucesso na determinação de agrotóxicos em matrizes de óleos adquiridas nas cidades de Almería e Murcia, localizadas na região sudeste da Espanha.

O presente trabalho teve como objetivo identificar, por meio da Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CG-MS), os produtos formados pelo contato do hipoclorito de sódio (NaOCl) com polpa e dentina bovina. Foram selecionados dentes incisivos superiores bovinos recém-extraídos. Os dentes bovinos tiveram suas coroas separadas das raízes, em seguida o tecido pulpar foi removido com o auxílio de limas Hedströem e armazenado, a porção radicular seccionada teve sua superfície externa preparada com pontas diamantadas para remoção da camada cementária, seccionada em pequenos fragmentos e em seguida foi triturada em um moinho de bola a fim de obter micropartículas de dentina. Foram preparadas três diferentes concentrações de NaOCl (0,5%, 2,5% e 5,25%). Para análise dos produtos formados na fase volátil, 11mg de polpa foi colocada em contato com as diferentes concentrações da solução halógena e mantida em contato sob agitação até que fosse observada a total dissolução da amostra, em seguida a fibra de microextração em fase sólida (SPME) era exposta dentro do recipiente através da membrana da tampa por 15 minutos para efetuar a adsorção dos produtos formados e imediatamente injetada no CG-MS para análise. Para dentina, 30mg da amostra foi mantida em contato com as três concentrações do NaOCl sob agitação por 15 minutos, em seguida a fibra de SPME era exposta dentro do recipiente para adsorção dos produtos formados e imediatamente injetada no CG-MS para análise. Foi utilizado o mesmo protocolo para análise da fase aquosa, deste modo, após a remoção das fibras para a análise dos compostos voláteis, foi feita a extração da solução final obtida por meio de éter etílico puro, padronizando-se a mistura de 2 ml da solução + 2 ml de éter e mantendo sob agitação durante 5 minutos. Seguida a agitação, a fase suspensa da mistura era aspirada separando o éter da fase aquosa da solução obtida. O éter contendo os produtos resultantes da interação química dos compostos orgânicos da dentina ou polpa com o NaOCl nas suas diferentes concentrações era filtrado e em seguida injetado no CG-MS para análise da fase aquosa das amostras. As análises da fase volátil e aquosa tanto da dentina quanto da polpa mostraram que houve formação de clorofórmio, hexacloroetano, diclorometilbenzeno e benzaldeído, tendo os três primeiros compostos estrutura química que os caracterizam como organoclorados. Conclui-se que houve formação de compostos organoclorados quando o NaOCl foi colocado em contato com substrato orgânico (polpa ou dentina bovina) em todas as concentrações estudadas e que esta formação foi diretamente proporcional à concentração do NaOCl utilizado. / The aim of this study was to identify, by means of gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), the products formed from the contact of sodium hypochlorite (NaOCl) with bovine pulp and dentin. Freshly extracted maxillary bovine incisors were selected for this purpose. The crowns were separated from the roots and the pulp tissue was removed with Hedströem files and stored. The root portion had its external surface prepared with diamond burs to remove the cementum layer and was sectioned into small fragments, which were ground in a ball windmill to obtain dentin microparticles. Three NaOCl concentrations were prepared (0.5%, 2.5% and 5.25%). For analysis of the products formed in the volatile phase, 11 mg of pulp tissue was placed in contact with the different halogen solution concentrations and kept in contact under constant agitation until complete tissue dissolution occurred. Next, the solid phase microextraction (SPME) fiber was exposed inside the container through the cover membrane for 15 minutes for adsorption of the formed products and immediately injected into the GC-MS equipment for analysis. For the dentin, 30 mg of sample was kept in contact with the three NaOCl concentrations under constant agitation for 15 minutes, and then the SPME fiber was exposed inside the container through the cover membrane for 15 minutes for adsorption of the products and immediately injected into the GC-MS equipment for analysis. The same protocol was used for analysis of the aqueous phase. In this way, after removal of the fibers for analysis of the volatile compounds, the final solution was extracted using pure ethyl ether, standardizing the mixture of 2 mL of solution plus 2 mL of ether, under constant agitation during 5 minutes. Next, the suspended phase of the mixture was aspirated, separating the ether from the aqueous phase of the obtained solution. The ether containing the products resulting from the chemical interaction between dentin/pulp organic compounds with the different NaCl concentrations was filtered and then injected into the GC-MS equipment for analysis of the aqueous phase of the samples. Analysis of the aqueous and volatile phases of both dentin and pulp showed formation of chloroform, hexachloroethane, dichloro-methyl-benzene and benzaldehyde, the first three compounds exhibiting chemical structure that characterize them as organochlorides. It may be concluded that there is formation of organochlorine compounds when NaOCl was placed in contact with an organic substrate (bovine pulp or dentin) at all tested concentrations and that it was directly proportional to the NaOCl concentration.

Os frutos de S. saponaria, espécie bastante abundante em São Carlos e outras regiões do Brasil são ricos em glicosídeos anfifílicos, ou seja, compostos por uma parte polar e outra apolar. Devido a esta peculiaridade tendem a formar espuma mostrando propriedades químicas semelhantes às dos tensoativos. Alguns destes glicosídeos pertencem à classe das saponinas e são constituídos por uma aglicona de estrutura carbônica a qual está ligada a uma ou duas cadeias de açúcar. O interesse pelas propriedades tensoativas deste glicosídeos motivou o estudo destas substâncias para uso em eletroforese capilar. Os frutos foram extraídos com metanol e fracionados em coluna cromatográfica preparativa utilizando sephadex LH-20 como fase estacionária. Após a eluição, as frações foram analisadas por espectrometria de massas e estudadas por eletroforese capilar. A eletroforese capilar de zona mostrou-se uma técnica viável para o estudo das frações obtidas. Embora um grau de pureza elevado não tenha sido alcançado, a fração B foi utilizada como aditivo para tampão em cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) e uma interação diferenciada foi observada do nitrobenzeno com o tampão aditivado em relação ao tampão com SDS puro. / Sapindus saponaria is a very abundant species in São Carlos and others regions of Brazil. Fruits of S. saponaria have a high content of glycosides which possess well-defined regions of hydrophobic and hydrophilic feature denominated amphiphilic molecule. Thus, this can form a foam showing chemical proprieties equals to surfactants. Some glycosides belong to class of saponins and are composed of carbonic structure designates aglycone, which is linked in one or two sugar chains. The purpose of the present study was the use of glycosides due to their surfactants properties in further applications of capillary electrophoresis. The extraction of crude fruits was carried out with methanol and this extract was fractionated in Sephadex LH-20. The fractions were analyzed for mass spectrometry and studied in capillary electrophoresis (CE). This is a feasible technique for the study of fractions obtained. Although a high degree of purity was not reached, the fraction B were used as additive for the electrolyte background in MEKC. The nitrobenzene showed different interaction with micellar system in the electrolyte background with fraction B.

Neste trabalho foi estabelecido um procedimento para determinação da razão isotópica 238U/235U em amostras de UF6, utilizando-se um espectrômetro de massas quadrupolar com ionização por impacto eletrônico e detecção de íons por copo de Faraday ou multiplicador de elétrons. Para tanto, o espectrômetro foi otimizado, determinando-se os parâmetros para a fonte de íons que proporcionassem a maior intensidade de corrente iônica, mantendo o pico de forma arredondada, para a massa correspondente ao isótopo mais abundante; a resolução que reduzisse os efeitos não lineares e o número de ciclos analíticos que reduzisse a incerteza nos resultados. O processo de medição foi caracterizado quanto: aos efeitos de discriminação de massa, linearidade e efeito memória. A discriminação de massas mostrou ser linearmente dependente da pressão da amostra no tanque de expansão nas faixas de 0,15 a 0,30 mbar e de 0,30 a 0,40 mbar. O espectrômetro mostrou-se linear na medição de razões isotópicas entre 0,005 e 0,045. Os fatores de memória para a fonte de íons e para o sistema de introdução são, respectivamente, 1,000 ± 0,001 e 1,003 ± 0,003; o primeiro pode ser desprezado e o segundo eliminado por procedimentos de lavagem do sistema de introdução. O trabalho apresenta, em sua parte final, um roteiro para as análises de amostras de UF6 e a determinação das incertezas nos resultados. / In the present work a procedure for determination of the isotopic ratio 238U/235U in UF6 samples was established using a quadrupole mass spectrometer with ionization by electron impact and ion detection by Faraday cup or electron multiplier. For this, the following items were optimized in the spectrometer: the parameters in the íon source that provided the most intense peak, with good shape, for the corresponding mass of the most abundant isotope; the resolution that reduced the non linear effects and the number of analytic cycles that reduced the uncertainty in the results. The measurement process was characterized with respect to the effects of mass discrimination, linearity and memory effect. The mass discrimination showed to be linearly dependent of the sample pressure in the batch volume, for the pressure ranges from 0.15 to 0.30 mbar and from 0.30 to 0.40 mbar. The spectrometer was shown linear in the measurement of isotopic ratios between 0.005 and 0.045. The memory factor for the íon source and for the introduction system were, respectively, 1.000 ± 0.001 and 1.003 ± 0.003; the first one can be ignored, the second one can be eliminated by washing the batch volume with the new sample. A methodology for routine analysis of UF6 samples and the determination of the uncertainties were set up in details as well.

Submitted by Victor Alexandre Zonaro (victor.zonaro@gmail.com) on 2017-01-10T14:22:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Victor Alexadre Zonaro.pdf: 4719611 bytes, checksum: 075493217f07f41d58c2e71196b60eea (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-13T17:16:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 zonaro_va_me_araiq.pdf: 4719611 bytes, checksum: 075493217f07f41d58c2e71196b60eea (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T17:16:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 zonaro_va_me_araiq.pdf: 4719611 bytes, checksum: 075493217f07f41d58c2e71196b60eea (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As 5,6-diidro-2-pironas 6-substituídas, também conhecidas como estirilpironas, são uma importante classe de metabólitos secundários presentes em plantas. São substâncias biologicamente ativas, apresentando como, por exemplo, atividade anticâncer, antioxidante, antifúngica e antiviral. O gênero Cryptocarya, pertence à família Lauraceae e apresenta diversas estirilpironas em suas mais diversas partes: folhas, cascas, sementes e raízes. Foram selecionadas para análise as espécies C. mandioccana, C. moschata e C. botelhensis. Foram utilizadas apenas as folhas, por apresentarem facilidade para coleta e abundância. Este trabalho tem como objetivo a identificação das estirilpironas presentes em três espécies brasileiras de Cryptocarya com o uso das técnicas HPLC-DAD-MS. Foi desenvolvido método cromatográfico para análise do extrato hidroalcoólico das folhas de espécies de Cryptocarya por HPLC-DAD-MS utilizando etanol como fase orgânica na fase móvel. Com os espectros no UV foi possível identificar que as classes de metabólitos presentes nas amostras eram alcaloides, flavonoides e estirilpironas. Utilizando os dados de MS e MS/MS, foi possível a caracterização de estirilpironas presentes nos extratos, assim como a sugestão de suas fragmentações por espectrometria de massas, além da identificação dos íons m/z 163 e m/z 189 característicos da fragmentação das estirilpironas. Foi detectado o íon m/z 423 no extrato de C. moschata, referente a um possível dímero da goniotalamina, sem relato anterior para as espécies de Cryptocarya. Com o auxilio de pironas purificadas obtidas pelo grupo, foi possível a comparação de seus tempos de retenção com os dados obtidos a partir dos extratos de folhas das espécies de Cryptocarya ajudando na identificação das substâncias presentes. Além das estirilpironas, foram identificados os alcalóides menisperina e xantoplanina nas três espécies estudadas. Nota-se uma grande diferença na quantidade de metabólitos entre as espécies analisadas, sendo que a C. mandioccana é a mais rica em estirilpironas. / The 6-substituted 5,6-dihydro-2-pyrones, also known as styrylpyrones, are an important class of secondary metabolites present in plants. They are biologically active substances, presenting, for example, anticancer, antioxidant, antifungal and antiviral activity. The genus Cryptocarya belongs to the family Lauraceae and presents several styrylpyrones in its most diverse parts: leaves, barks, seeds and roots. The species C. mandioccana, C. moschata and C. botelhensiswere selected for analysis. We chose to use only leaves, because they are easy to collect and abundant. The objective of this work is to identify the styrylpyrones present in three Brazilian Cryptocarya species using the HPLC-DAD-MS techniques. A chromatographic method was developed to analyze the hydroalcoholic extract from leavesCryptocarya species by HPLC-DAD-MS using ethanol as the organic solvent in the mobile phase. With the UV spectra were possible to identify the classes of metabolites present in the samples as alkaloids, flavonoids and styrylpyrones. Addtitionaly, with the MS and MS2 data, was possible to characterize the styrylpyrones present in the extracts, as well as the suggestion of their fragments by mass spectrometry, in addition to the identification of íons m/z 163 and m/z 189 characteristics of the fragmentation of styrylpirones. The m/z 423 ion detected in C. moschata extract was tentatively attributed to a goniotalamine dimer, with no previuous reports for Cryptocarya species. With the help of purified pirones obtained by the group, it was possible to compare their retention times with the data obtained from leaf extracts of the Cryptocarya species, helping to identify the substances present. Besides the styrylpyrones, the alkaloids menisperin and xantoplanin were also identified in the three species studied. There is a great difference in the amount of metabolites among the analyzed species, with C. mandioccana being the richest in styrylpyrones.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4361699 bytes, checksum: e5a69841109235b04a866e4c6017cf05 (MD5) Previous issue date: 2013-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The application of preparative high pressure liquid chromatography (PREP-HPLC) in the isolation of natural products is shown as a robust, versatile and fast technique that ensures the purification and isolation of substances in complex matrices, as natural products. This technique is a powerful tool in an area in which purification and obtainment of samples in large amount is somewhat laborious, and often, there is a need for re-isolation of samples; thus, its reproducibility is a great advantage. The combination of HPLC with mass spectrometry allows merging the advantages of chromatography, such as the high selectivity and separation efficiency, with the mass spectrometry advantages, as information related to molecular structure, the molar mass and enhancement of additional selectivity. Cissampelos sympodialis Eichl. is a Brazilian species and the infusion of this plant is traditionally used in the northeast of Brazil to treat asthma, bronchitis and rheumatism, between other inflammatory diseases. The objective of this work to develop a rapid and reproducible method for isolation of established chemical biomarkers of plant and other alkaloids from C. sympodialis Eichl., and use the standard of warifteine in quantification of it in biological fluids to determine the pharmacokinetic parameters of the alkaloid after administration of it in rats in vivo. The chromatographic method consisted of a gradient from 0-15 min (75 % B), 15-20 min (80 % B), 20-25 min (100 % B),  278 nm, and flow of 5.0 mL/min during 20 min, with mobile phase of methanol (B) and water (A) basified with ammonium to reach pH 8.0, and the amount of sample mass injected per experiment was 800 mg. The alkaloids isolated were warifteine (99.79 % of purity), methyl-warifteine (98.52 % of purity), the mixture of epimers of desmethyl-roraimine, and a new alkaloid not referred in literature that was elucidated and named as Sousine. Animals from Ratus novergicus species received an intravenous single dose of warifteine of 1.0 mg/Kg, and the blood samples were collected in 5, 15, 30, 60, 120 and 180 minutes. The blood samples were centrifuged to obtain the plasma and then were extracted by protein precipitation with acetonitrile. The pharmacokinetic parameters were calculated based on plasmatic concentrations versus time curves using non-compartmental model. The linearity range to chromatographic method was between 10 and 500 ng/mL e the kinetic parameters were Cmáx 16.08 μg/mL, Tmáx 12.5 min-1, Kel 0.01355 min-1. The method developed to isolation of alkaloids from C. sympodialis Eichl. is a practical, rapid and robust one. The HPLC-MS/MS method enabled to quantify warifteine in rat plasma with samples extraction by protein precipitation, yet, there was a great variability between animals in the kinetics experiment. / A aplicação da cromatografia a líquido de alta eficiência preparativa (CLAE-PREP) no isolamento de produtos naturais, mostra-se como uma técnica robusta, versátil e rápida, que garante a purificação e o isolamento de substâncias de matrizes complexas, como os produtos naturais. Essa técnica é uma ferramenta valiosa numa área em que a purificação e obtenção de amostras em quantidade é algo laborioso, e muitas vezes, há necessidade de reisolamento de amostras; assim, sua reprodutibilidade é uma grande vantagem. A combinação da CLAE com a espectrometria de massas permite unir as vantagens da cromatografia, como a alta seletividade e eficiência de separação, às vantagens da espectrometria de massas, como a obtenção de informação estrutural, massa molar e aumento adicional de seletividade. Cissampelos sympodialis Eichl. é uma espécie da flora brasileira, a infusão das raízes da planta é popularmente utilizada no nordeste do Brasil para tratamento de asma, bronquite e reumatismo, dentre outras enfermidades inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método rápido e reprodutível para o isolamento dos marcadores químicos estabelecidos e de outros alcaloides de C. sympodialis Eichl., e utilizar o padrão de warifteína para quantificação da mesma em fluidos biológicos com vistas à determinação de parâmetros farmacocinéticos do alcaloide após administração in vivo em ratos. O método cromatográfico utilizado consistiu em gradiente de 0-15 min (75 %), 15-20 min (80 %), 20-25 min (100 %),  de 278 nm, fluxo de 5,0 mL/min e tempo de corrida de 20 min, com fase móvel de metanol e água, ambos basificados com amônia para pH 8,0 e a massa de FATT-rz injetada por cada corrida cromatográfica na coluna foi 800 mg. Foram isolados os alcaloides warifteína (pureza 99,79%), metil-warifteína (pureza 98,52%), os epímeros de desmetil-roraimina, além de um alcaloide inédito na literatura que teve sua estrutura elucidada e foi denominado de Sousina. Animais da espécie Ratus wistar receberam dose única de 1,0 mg/Kg de warifteína intravenosa e as coletas de sangue foram realizadas nos tempos 5, 15, 30, 60, 120 e 180 min. As amostras sangue foram centrifugadas para obtenção do plasma e extraídas por precipitação de proteínas utilizando acetonitrila. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados com base nas curvas de concentração plasmática versus tempo pelo modelo não-compartimental. A faixa de linearidade para o método cromatográfico foi entre 10 e 500 ng/mL e os parâmetros cinéticos foram Cmáx 16,08 μg/mL, Tmáx 12,5 min-1, Kel 0,01355 min-1. O método de isolamento por CLAE-PREP é uma alternativa prática, rápida e robusta para obtenção dos alcaloides de C. sympodialis. O método proposto por CLAE-EM/EM permitiu quantificar a warifteína em fluido plasmático de rato com a extração das amostras por precipitação de proteínas, ainda, houve grande variabilidade interindividual entre os animais usados no experimento cinético.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2018-05-18T14:20:50Z No. of bitstreams: 1 PDF - Roberta Milena Moura Rodrigues.pdf: 36710948 bytes, checksum: 554ab863304bbf43e3ca861642fc5611 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-18T14:20:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Roberta Milena Moura Rodrigues.pdf: 36710948 bytes, checksum: 554ab863304bbf43e3ca861642fc5611 (MD5) Previous issue date: 2017-06-19 / onselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Secondary biological anaerobic processes used for wastewater treatment have developed rapidly since the mid-20th century and are currently used in most Sewage Treatment Plants (ETEs) around the world. Sludge produced throughout the treatment is the main byproduct and is a semi-solid material containing organic matter, pathogenic microorganisms, toxic substances and even heavy metals withdrawn from the liquid phase. However, by applying appropriate treatment, it can transform itself from a problem residue into a product with economic value: modern and low-cost technologies can be reused in the material (nutrients and heavy metals) and its energy potential (biogas production - 70% methane). Volatile fatty acids (AGVs) are important intermediates of anaerobic digestion and their rate of production largely determines the rate of methane production. The knowledge of the concentration of VFAs in the sludge under treatment allows monitoring the performance of the reactor. The gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC / MS), for the determination of VFAs, stands out from others for being efficient and selective, and allows structural information, molar mass, among other advantages. The validation of a method for its detection ensures the reliability of the results. In the present work, the Thermo Scientific gas chromatograph (TRACE 1300) was used and the detector was a Thermo Scientific mass spectrometer (ISQ QD - Single Quadrupole) with an SPB-624 intermediate polarity column. Recognized brand reagents And previous tests were done to define suitable conditions for the method (CG / MS). Validation was done following the recommendations of INMETRO and ANVISA. The results showed that the validation of the method (GC / MS) for determination of VFAs with the chosen column and the best chromatographic conditions obtained were adequate, taking into account the validation parameters: linearity (r ≥ 0,9843), precision Coefficients of variation <20%), sensitivity (angular coefficients ≥ 238218), limit of detection (0.030 mg.L-1 - 0.848 mg.L-1), limit of quantification (0.120 mg.L-1 - 2.827 mg.L -1), accuracy (100% - 110% - higher concentrations). Applied to real matrices, the method proved to be satisfactory because the retention times were very similar to the patterns used. / Processos biológicos secundários anaeróbios empregados para o tratamento de águas residuais têm se desenvolvidos de forma acelerada a partir da metade do século XX e são atualmente utilizados na maioria das Estações de Tratamento de Esgotos (ETEs) ao redor do mundo. Lodos produzidos ao longo do tratamento são o principal subproduto e constituem um material semisólido que contem matéria orgânica, microrganismos patogênicos, substâncias tóxicas e até metais pesados retirados da fase líquida. Entretanto, aplicando-se tratamento adequado, pode se transformar de um resíduo problema em um produto com valor econômico: tecnologias modernas e de baixo custo podem ser reaproveitados materiais nele contido (nutrientes e metais pesados) e pelo seu potencial energético (produção de biogás - 70% de metano). Os ácidos graxos voláteis (AGVs) são importantes intermediários da digestão anaeróbia e sua taxa de produção determina em grande parte a taxa de produção de metano. O conhecimento da concentração de AGVs no lodo em tratamento permite acompanhar o desempenho do reator. O método de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM), para determinação de AGVs, se destaca de outros por ser eficiente e seletivo, e permite obter informação estrutural, massa molar, entre outras vantagens. A validação de um método para sua detecção assegura a confiança dos resultados. No presente trabalho foi utilizado o cromatógrafo gasoso Thermo Scientific (TRACE 1300) e o detector foi um espectrômetro de massas Thermo Scientific (ISQ QD – Single Quadrupole) com uma coluna de polaridade intermediária SPB- 624. Foram utilizados reagentes (analitos) de marca reconhecida e testes prévios foram feitos para definir condições adequadas para o método (CG/EM). A validação do mesmo foi realizada seguindo as recomendações de INMETRO e ANVISA. Os resultados mostraram que a validação do método (CG/EM) para determinação de AGVs com a coluna escolhida e as melhores condições cromatográficas obtidas mostraram-se adequadas, atendendo aos parâmetros de validação: linearidade (r ≥ 0,9843), precisão (coeficientes de variação < 20%), sensibilidade (coeficientes angulares ≥ 238218), limite de detecção (0,030 mg.L-1 - 0.848 mg.L-1) , limite de quantificação (0.120 mg.L-1 - 2.827 mg.L -1), exatidão (100% - 110% - concentrações maiores). Aplicado em matrizes reais o método se mostrou satisfatório porque os tempos de retenção foram muito semelhantes aos dos padrões utilizados.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nas Ãltimas dÃcadas, as lectinas vegetais tÃm atraÃdo grande interesse devido Ãs suas diversas atividades biolÃgicas das quais se destaca a aÃÃo antitumoral in vivo e in vitro que, em geral, causa a inibiÃÃo do crescimento celular e a induÃÃo da morte celular por apoptose. No presente estudo, foi investigado o efeito da lectina de Dioclea altissima (DAL), uma lectina de leguminosa, alfa-D-manose ligante, sobre as linhagens tumorais A549 (carcinoma pulmonar), OVCAR-8 (carcinoma de ovÃrio) e PC3M (carcinoma de prÃstata) e linhagem normal CMSP (cÃlulas do tecido sanguÃneo). DAL foi isolada e purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex G-50 e sua citotoxicidade foi avaliada atravÃs do ensaio do MTT. DAL foi seletivamente citotÃxica para as cÃlulas cancerÃgenas A549, PC3M, apÃs 48 e 72 horas de incubaÃÃo, e para OVCAR-8, apÃs 72 horas de tratamento apresentando valores de CI50 entre 23,0 e 55,7 &#956;g/mL, promovendo aglutinaÃÃo celular a partir de 24 horas de incubaÃÃo. DAL nÃo se mostrou citotÃxica para cÃlulas normais. O teste do cometa revelou que DAL nÃo causa dano direto ao DNA. A linhagem PC3M foi selecionada para anÃlise proteÃmica por espectrometria de massas (nanoUPLC nanoESI-MSE) por apresentar maior sensibilidade à DAL. ApÃs tratamento das cÃlulas com diversas concentraÃÃes de DAL, por 24, 48 e 72 horas, foi identificado um total de 837 proteÃnas vÃlidas, 140 (24h), 321 (48h) e 376 (72h). O estudo das proteÃnas diferencialmente expressas das cÃlulas tratadas com a lectina em relaÃÃo ao controle definiu o efeito citotÃxico de DAL em PC3M como apoptÃtico gerado, principalmente, via estresse do retÃculo endoplasmÃtico. / Recently, plant lectins have attracted great interest due to their several biological activities of which stands out the antitumoral action in vivo and in vitro that in general result in inhibition of cell growth and induction of cell death by apoptosis. In the present study, it was investigated the effect of the Dioclea altissima (DAL) lectin, a legume alfa-D-mannose ligand lectin on A549 (lung cancer), OVCAR-8 (ovarian cancer) and PC3M (prostate cancer) and normal line PBMC (cell blood tissue). DAL was isolated and purified by affinity chromatography on a Sephadex G-50 column and its cytotoxicity was evaluated by MTT assay. DAL was selectively cytotoxic to cancer cells A549, PC3M after 48 and 72 hours of incubation, and OVCAR-8 after 72 hours of treatment with DAL (CI50 values between 23.0 e 55.7 &#956;g/mL). Moreover, it was observed cell agglutination from 24 hours of incubation. Comet assay revealed DAL does not cause direct DNA damage. The line PC3M was selected for proteomic analysis by mass spectrometry (nanoUPLC nanoESI-MSE) to present the best evidence of sensitivity to DAL. PC3M line was treated with various concentrations of DAL during 24, 48 e 72 hours, it was identified a total of 837 proteins, 140 (24h), 321 (48h) e 376 (72h). The study of differential protein expression of the DAL-treated PC3M cells compared to control demonstrated apoptotic effect generated, mainly, via ER stressed-dependent.

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Caso não tenha como arrumar me devolva que arrumo. on 2018-09-11T11:10:32Z (GMT) / Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-09-18T16:30:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Flávia Soares Vieira - 2018.pdf: 5162109 bytes, checksum: 753fa227b88042b5bfa2c68b011d6345 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-09-19T12:39:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Flávia Soares Vieira - 2018.pdf: 5162109 bytes, checksum: 753fa227b88042b5bfa2c68b011d6345 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-19T12:39:17Z (GMT). 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The objective of this work was to establish new analytical methodologies to identify and quantify compounds from bioconversion processes involving the production of organic acids and polyols. To guarantee the quantification of the target compounds, methods based on ultra-high- performance liquid chromatography (UHPLC) were developed and the photodiode array (PDA) and mass spectrometry (MS) detectors were evaluated as alternatives for the monitoring of these two classes of chemical compounds. The analytes investigated in this study were short chain organic acids: citric acid, fumaric acid, glyceric acid, kojic acid, lactic acid, muconic acid, oxalic acid, propionic acid, succinic acid, xylonic acid; and polyols with spatial isomers, including polyols with 4 carbons (C4: erythritol and threitol), 5 carbons (C5: arabitol, ribitol, xylitol), and 6 carbons (C6: dulcitol, iditol, mannitol, sorbitol) and 7 carbons (C7: volemitol). The UHPLC-PDA method developed for the analysis of organic acids was validated by parameters of linearity, limit of detection and quantification, precision and accuracy. The analytical curves showed good linearity with determination coefficients (R²) higher than 0.999 for all organic acids. Precision and accuracy were adequate with intra-day and inter-day variation coefficients below 4.06% and recovery ranged from 94.90% to 109.63%. The developed UHPLC- MS methods presented greater sensitivity and selectivity in the detection of organic acids and polyols, being able to monitor these analytes even in low quantity. The analytical methods developed in this work are crucial tools in the selection or screening of promising microorganisms for low added value substrates conversion and important to optimize biotechnological processes for production of these compounds of interest. / A produção de biodiesel tem aumentado a cada ano, o que vem gerando excedentes de glicerina, principal coproduto do processo de transesterificação. A biotecnologia se destaca como alternativa promissora para agregação de valor à glicerina. Em processos de fermentação, os microrganismos são utilizados para converter essa abundante fonte de carbono em compostos de maior interesse econômico, como ácidos orgânicos e polióis. No entanto, ainda há alguns desafios tecnológicos, como o baixo rendimento dos processos e a falta de métodos analíticos sensíveis e seletivos capazes de identificar e quantificar os compostos produzidos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer metodologias analíticas para identificar e quantificar compostos obtidos a partir de processos de bioconversão, tais como ácidos orgânicos e polióis. Para garantir a quantificação destas substâncias-alvo, métodos baseados em cromatografia líquida de ultra-alta eficiência (UHPLC) acoplada aos detectores de arranjo de fotodiodos (PDA) e de espectrometria de massas (MS) foram avaliados como alternativas para o monitoramento dessas duas classes de compostos químicos. Os analitos investigados nesse estudo foram ácidos orgânicos de cadeia curta, incluindo: ácido cítrico, ácido fumárico, ácido glicérico, ácido kójico, ácido lático, ácido mucônico, ácido oxálico, ácido propiônico, ácido succínico, ácido xilônico; e polióis, estereoisômeros contendo 4 carbonos (C4: eritritol e treitol), 5 carbonos (C5: arabitol, ribitol, xilitol), 6 carbonos (C6: dulcitol, iditol, manitol, sorbitol) e com 7 carbonos (C7: volemitol). O método UHPLC-PDA desenvolvido para análise de ácidos orgânicos foi validado pelos parâmetros de linearidade, limite de detecção e quantificação, precisão e exatidão. As curvas analíticas mostraram boa linearidade com coeficientes de determinação (R²) maiores que 0,999 para todos os ácidos orgânicos. A precisão e exatidão demonstraram ser adequadas com coeficientes de variação intra-dia e inter-dia inferiores a 4,06%, e a recuperação variou de 94,90% a 109,63%. Os métodos de UHPLC-MS desenvolvidos apresentaram maior sensibilidade e seletividade na detecção de ácidos orgânicos e polióis, sendo capaz de monitorar esses analitos mesmo eles estando em baixa quantidade. Os métodos analíticos desenvolvidos neste trabalho são ferramentas cruciais na seleção ou triagem dos microrganismos promissores para conversão de substratos de baixo valor agregado e importantes para a etapa de otimização dos processos biotecnológicos de produção desses compostos de interesse.