PEREIRA JÚNIOR, F. N. Caracterização estrutural parcial e biológica de uma lectina de sementes de Dioclea reflexa Hook F. 2014. 103 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-22T20:56:52Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_fnpereirajunior.pdf: 3977046 bytes, checksum: 1715360bf0e298000773e7aa5472e6a4 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-02-12T14:09:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_fnpereirajunior.pdf: 3977046 bytes, checksum: 1715360bf0e298000773e7aa5472e6a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-12T14:09:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_fnpereirajunior.pdf: 3977046 bytes, checksum: 1715360bf0e298000773e7aa5472e6a4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Lectins are proteins that have at least one non-catalytic domain capable of reversibly bind to specific mono-or oligosaccharides. Lectins are widely distributed in many plants as well as animals and other organisms. In general, lectins are very abundant in plant seeds, especially in the Leguminosae family. Hundreds of lectins have been isolated and characterized from plants belonging to different families of this division. The legume lectin family is the group of this protein class further studied, in particular highlighted the subtribe Diocleinae. Lectins Diocleinae have a high degree of structural similarity, but the same was not true about the biological activities. This variability lies in details that can be analyzed in studies based structures. In this context, this paper describes the partial structural and biological characterization of a lectin present in seeds Dioclea reflexa Hook F. belonging to the family Leguminosae, subfamily Papilionoideae, tribe Phaseoleae, subtribe Diocleinae. The seed lectin Dioclea reflexa (DrfL) was purified in a single step by affinity chromatography on Sephadex G-50 column. The lectin strongly agglutinated rabbit erythrocytes and was inhibited by D-mannose and methyl-α-D-manoside. The hemagglutinating activity of the DrfL is optimum pH 5.0, 6.0 and 7.0, stable at a temperature of 50 ° C. Similar to other lectins of the subtribe Diocleinae, analysis by mass spectrometry indicated that the lectin D. reflex has three chains (α, β and γ) with masses of 25,562; 12,874 and 12,706 Da, respectively, and has no disulfide bonds or glycosylation. The primary sequence of DrfL shows great similarity with other lectins from species of the same genus. The protein was crystallized by vapor diffusion bonding method in the presence of X-man and was determined to a resolution of 1.76 Å. DrfL presented relaxing effect on smooth muscle and endothelial aortas rat and showed inflammatory activity in the rat paw edema model. The lectin D. reflexa exhibited low cytotoxicity against Artemia sp. / Lectinas são proteínas que possuem no mínimo um domínio não catalítico capaz de se ligar reversivelmente a mono ou oligossacarídeos específicos. As lectinas são amplamente distribuídas em muitas plantas, bem como em animais e outros organismos. Geralmente, as lectinas são muito abundantes em sementes de plantas, especialmente na família Leguminosae. Centenas de lectinas já foram isoladas e caracterizadas de plantas pertencentes a diferentes famílias dessa divisão. A família das lectinas de leguminosas representa o grupo desta classe proteica mais bem estudada, em especial destaque a subtribo Diocleinae. As lectinas de Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade estrutural, porém o mesmo não se observa quanto às atividades biológicas. Esta variabilidade reside em detalhes que podem ser analisados em estudos baseados em estruturas. Neste contexto, o presente trabalho descreve a caracterização estrutural parcial e biológica de uma lectina presente em sementes de Dioclea reflexa Hook F., pertencente à família Leguminosae, subfamília Papilionoideae, tribo Phaseoleae, subtribo Diocleinae. A lectina de sementes de Dioclea reflexa (DrfL) foi purificada em uma única etapa através de cromatografia de afinidade em coluna Sephadex G-50. A lectina aglutinou fortemente eritrócitos de coelho e foi inibida por D-manose e α-metil-D-manosídeo. A atividade hemaglutinante da DrfL é ótima nos pH 5,0;6,0 e 7,0, e estável a uma temperatura de 50 °C. Semelhante a outras lectinas da subtribo Diocleinae, a análise por espectrometria de massas indicou que a lectina de D. reflexa possui possui três cadeias (α, β e γ) com massas de 25.562, 12.874 e 12.706 Da, respectivamente, e não possui ligações dissulfeto ou glicosilações. A sequência primária da DrfL apresenta grande similaridade com outras lectinas de espécies do mesmo gênero. A proteína foi cristalizada pelo método de difusão de vapor na presença do ligante X-man e foi resolvida a uma resolução de 1,76 Å. DrfL apresentou efeito relaxante em músculo liso de aortas endotelizadas de rato e apresentou atividade inflamatória no modelo de edema de pata de rato. A lectina de D. reflexa exibiu baixa citotoxicidade contra náuplios de Artemia sp.

Orientador: Mario Sergio Palma / Resumo: Atualmente, as abelhas têm sido utilizadas como modelos de aprendizagem e memória, destacando a sua utilidade para a neurociência, em particular para o melhor entendimento das bases da cognição. Para isso, o reflexo de extensão de probóscide (REP) é um estímulo incondicionado (US) amplamente utilizado para acessar a habilidade das abelhas para correlacioná-la com um estímulo condicionado (CS) durante a aprendizagem e aquisição de memória. No presente estudo REP foi utilizado para estudos proteômicos do cérebro de abelhas por meio de diversas estratégias inovadoras. Proteômica shotgun foi aplicada ao estudo de proteínas solúvel em sistema µLC-ESI-micrOToF-QIII e quantificação label-free em sistema LTQ-Orbitrap XL ETD, sendo o primeiro estudo de análise proteômica que chama atenção para o fato de que o comportamento reflexo (não-condicionado - US) por si só ativa diversas cascatas metabólicas, incluindo processos biológicos relacionados à memória. A análise comparativa dos perfis proteômicos para os cérebros de operárias do grupo controle e do grupo REP demonstraram uma ativação do metabolismo de compostos cíclicos/heterocíclicos/aromáticos em paralelo com o metabolismo de compostos nitrogenados. Este processo seguiu-se pela regulação negativa de proteínas envolvidas no metabolismo de metabólitos fosforilados e a regulação positiva das proteínas relacionadas com o metabolismo dos carboidratos. Isto provavelmente ocorreu para fornecer energia metabólica para os processos celular... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays, bees have been used as models in studies of learning and memory, highlighting their utility for neuroscience, in particular for a better understanding of the bases of cognition. For this, proboscis extension reflex (PER) is an unconditioned stimulus (US) widely used to access bees' ability to correlate it with a conditioned stimulus (CS) during learning and memory acquisition. In the present study, PER was used for proteomic studies of bees brain through several innovative strategies. Proteomic shotgun was applied to the study of soluble proteins in μLC-ESI-micrOToF-QIII system and label-free quantification in LTQ-Orbitrap XL ETD system, being the first proteomic analysis study that draws attention to the fact that reflex behavior (US) alone activates various metabolic cascades, including biological processes related to memory. The comparative analysis of the proteomic profiles for the workers' brains from control group and REP group demonstrated metabolism of cyclic / heterocyclic / aromatic compounds in parallel with the metabolism of nitrogen compounds. This process was followed by the negative regulation of proteins involved in metabolism of phosphorylated metabolites and the positive regulation of proteins related to the metabolism of carbohydrates. This has probably occurred to provide metabolic energy for the cellular processes needed to adapt the brain to PER. In addition, the transcriptome analysis of foraging bees brain was performed, which was used in the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientadora: Prof. Dra. Marcella Pecora Milazzotto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2015. / A morfologia e as taxas de clivagem e de blastocistos têm sido critérios utilizados para avaliação da competência embrionária. Entretanto, com o advento de novas biotecnologias tem-se tornado claro que a competência embrionária pode ser severamente comprometida sem alterações morfológicas perceptíveis. Estudos em embriões humanos propuseram avaliações morfológicas adicionais relacionadas ao momento das primeiras divisões celulares embrionárias (rápida e lenta) que parecem estar relacionadas com a viabilidade do embrião. No entanto, ainda não existem muitos dados dessa análise morfocinética em bovinos. A viabilidade embrionária também pode ser severamente comprometida pelo acúmulo de lipídeos nos embriões PIV, podendo inclusive prejudicar aplicações comerciais como a criopreservação. Com isso, o objetivo desse estudo foi caracterizar em embriões bovinos de cinéticas diferentes de desenvolvimento (rápido e lento) o padrão de metabolismo lipídico. Para tal, embriões produzidos in vitro foram analisados quanto a quantidade de lipídeos totais e caracterização de lipídeos de membrana nos estádios iniciais de clivagem (22hpi e 96hpi) e blastocisto. Para o estádio de blastocisto também foi incluído um grupo de embriões in vivo. Foi possível evidenciar menor quantidade de lipídeos totais pela coloração SUDAN BLACK B nos grupos lentos. As análises de MALDI-MS evidenciaram lipídeos de membrana com padrões distintos nos grupos rápidos e lentos nos estádios de clivagem e mórula. Já nos estádios de blastocistos os dados nos permitem inferir que o grupo de blastocisto lento parece estar mais próximo do grupo in vivo, pela semelhança na abundância/intensidade relativa no maior número de íons revelados pelas análises multivariadas. No entanto, o grupo lento ainda mostra alguma semelhança com o grupo rápido devido a exposição ao mesmo ambiente in vitro. / Embryo viability and competence have been evaluated by criteria such as morphology and cleavage and blastocyst rates. However, the advent and application of new biotechnologies have demonstrated that embryonic competence can be severely compromised without noticeable morphological changes. Human embryo studies proposed the use of additional morphological evaluations related to the moment of the first embryonic cell divisions and its kinetic (fast and slow), which appear to be relevant to the embryo viability. Nevertheless, there are still not enough data available related to the morphokinetic analysis of embryos in bovine cattle. Embryo viability can also be severely compromised by lipid accumulation in IVP (in vitro produced) embryos and can even harm commercial applications such as cryopreservation. Therefore, the aim of this study was to evaluate and characterize the pattern of lipid metabolism on bovine embryos with different developmental kinetics (fast and slow). For this goal, IVP embryos were analyzed considering the lipids total amount and membrane lipids characterization during the cleavage early stages (22hpi and 96hpi) and blastocyst stage. The study also included a group of in vivo embryos at the blastocyst stage. The results, using SUDAN BLACK B staining technique, showed a smaller amount of total lipids in the slow groups. The MALDI-MS analysis results showed different patterns of membrane lipids in the fast and slow groups in the cleavage and morulae stages. The data obtained at the blastocyst stage allow us to infer that the slow group is more similar to the in vivo group, since the results showed similarity in relative quantity/intensity in a greater number of ions revealed by multivariate analysis. However, the slow group still shows some similarity with the fast group due to the exposure to the same in vitro environment.

Submitted by MARCEL PRATAVIEIRA null (marcelprata93@hotmail.com) on 2016-03-07T15:52:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Marcel Pratavieira - 2016.pdf: 8130455 bytes, checksum: a459e73ed4ef0757431f12802bc7f15b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-07T19:51:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pratavieira_m_me_rcla.pdf: 8130455 bytes, checksum: a459e73ed4ef0757431f12802bc7f15b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-07T19:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pratavieira_m_me_rcla.pdf: 8130455 bytes, checksum: a459e73ed4ef0757431f12802bc7f15b (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As abelhas têm sido utilizadas como modelos robustos e influentes para o estudo de memória e aprendizagem, contribuindo para o melhor entendimento das bases da cognição. Nesse contexto, diferentes metabólitos foram caracterizados por desempenharem funções distintas no processo de aprendizagem e formação de memória em insetos. Considerando que pouco se sabe sobre os metabólitos em relação ao desenvolvimento das habilidades cognitivas em A. mellifera, ou mesmo em relação aos comportamentos reflexos (condicionados e/ou não condicionados), o presente estudo teve como objetivo a análise metabolômica do cérebro de abelhas submetidas ao ensaio comportamental de reflexo de extensão de probóscide (REP). Para isto, foi padronizada a técnica de análise metabolômica com o uso do sistema LC-ESI- MS e MSn, construindo-se inicialmente uma biblioteca de compostos característicos de cérebro de abelhas (neurotransmissores, aminoácidos livres, poliaminas, nucleotídeos, nucleosídeos, ácidos orgânicos, etc). Nesta primeira abordagem, dentre os 112 compostos da biblioteca, 48 foram identificados e quantificados; alguns destes compostos foram únicos para o grupo controle (cadaverina, espermina, glicose, uracila e n-acetil-L-glutamato 5-semialdeido), enquanto que outros foram únicos para o grupo REP (fenilalanina, betaína, espermidina, serina e creatina). Dentre os compostos identificados em ambos os grupos, apenas 5 compostos apresentaram diferenças quantitativas estatisticamente significantes (arginina, asparagina, guanosina monofosfato, putrescina e 4-guanitinobutanoato). Visando o estudo dos perfis metabólicos regionais (em cada região do cérebro), foi também padronizado o protocolo experimental utilizando-se a estratégia MALDI Spectral Imaging e o desenvolvimento de um método semi-quantitativo de metabólitos. Esta estratégia permitiu o mapeamento e o estudo da distribuição espacial dos metabólitos identificados em cortes de cérebro de abelhas, bem como uma melhor compreensão da distribuição dessas moléculas nas diferentes estruturas do cérebro e sua correlação com o comportamento ensaiado. As duas estratégias aplicadas mostraram-se complementares e fundamentais para a compreensão da cognição em abelhas. De modo geral, o ensaio de REP parece estimular intensa atividade cerebral, alto gasto energético, intensa sinalização química e a ativação de algumas cascatas metabólicas específicas, tais como a rota metabólica da prolina e arginina. Nos indivíduos do grupo REP a arginina provavelmente foi catabolizada nas sínteses de creatina, 4-guanidinobutanoato, putrescina e espermidina. Esses processos bioquímicos provavelmente foram importantes para coordenar o reconhecimento da molécula de sacarose, e associar esse odor com um comportamento reflexo para a extensão da probóscide (estímulo não condicionado). / The honeybee Apis mellifera has long served as an invertebrate model organism for learning and memory research, contributing to a better understanding of cognition bases. In this context, different metabolites (especially neurotransmitters) were characterized by play distinct roles in learning process and in memory formation in insects. Whereas little is known about the metabolites in relation to the development of cognitive skills in A. mellifera, the present study aims to perform a metabolomic analysis of the honeybee brains submitted to the behavioral test of proboscis extension reflex (PER). For this, has been standardized a metabolomic analysis technique through the use of LC-ESI-MS and MSn system. Initially a low molecular weight compounds library was created, containing characteristic compounds of bee brain (neurotransmitters, free amino acids, polyamines, nucleotides, nucleosides, organic acids, etc.). In this first approach, from the library of 112 compounds, 48 compounds were identified and quantified; some of these compounds were only identified in the control group (cadaverine, spermine, glucose, uracil and N-acetyl-L-glutamate 5- semialdehyde), while others were only identified in PER group (phenylalanine, betaine, spermidine, serine and creatine). Among the compounds identified in both groups, only five compounds showed statistically significant differences in quantitative results (arginine, asparagine, guanosine monophosphate, putrescine and 4-guanidinebutanoate). In order to study the metabolic profiles by regions (within each brain region) it was also standardized an experimental protocol using a novel semi-quantitative method of MALDI Spectral Imaging strategy. This strategy allowed the study and the mapping of the spatial distribution of metabolites identified in honeybee brain sections, as well as a better understanding of the distribution of molecules in the different brain structures and their correlation with the behavior tested. Both strategies applied proved to be complementary and essential to the understanding of cognition in bees. Overall, in this study the PER test seems to stimulate intense brain activity, high energy expenditure, intense chemical signaling and activation of some specific metabolic pathways, such the arginine and proline metabolic pathway. In individuals of PER group arginine was probably catabolized in the synthesis of creatine, 4-guanidinobutanoato, putrescine and spermidine. This biochemical process were probably important to coordinate the recognition of sucrose molecule and associate this odor with a reflex behavior for the proboscis extension (unconditioned stimulus). / FAPESP: 2014/05376-1

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-26Bitstream added on 2014-06-13T19:41:14Z : No. of bitstreams: 1 alvim_hh_dr_arafo.pdf: 694477 bytes, checksum: 944910958f33686fa33839611d4acf41 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar as características de diferentes fotoinciadores com potencial para serem utilizados em resinas compostas. Foram utilizadas as resinas compostas: Filtek Z250 A3 (FZA3); Filtek Z-250 Incisal (FZI); Pyramid Enamel A1 (PEA1); Piramyd Enamel Translucent (PET); Filtek Supreme A3E (FSA3) e Filtek Supreme GT (FSGT). Foram pesados 500mg de cada resina e dissolvidos em 1,0 ml de metanol. As amostras foram centrifugadas para acelerar a sedimentação das partículas inorgânicas. Foram pipetados 0,8 ml da solução sobrenadante e analisados por cromatografia gasosa acoplado ao espectrômetro de massa (GC-MS). Os resultados foram comparados a soluções de canforoquinona pura, utilizadas como padrão. O teste de T Student, (p=0,05), comparou os resultados entre as cores de cada marca comercial. Observou-se menor quantidade de canforoquinona na cor incisal da resina Filtek Z-250 (FZI) quando comparada à cor A3 (FZA3). Por outro lado, a resina Filtek Supreme apresentou quantidade de canforoquinona estatisticamente superior na cor Incisal. Na resina Pyramid Enamel foi encontrada canforoquinona apenas na cor A1, sendo que o fotoiniciador utilizado na cor Translucent não foi identificado. Baseado nos dados obtidos pode-se concluir que uma mesma marca comercial de resina composta pode apresentar diferenças na quantidade e no tipo de fotoiniciador utilizado. Em seguida investigamos a reação de polimerização de quatro compósitos experimentais por fotocalorimetria, utilizando diferentes fotoiniciadores. Esta técnica permite estimar o grau de conversão (GC) e parâmetros da cinética da reação como a aceleração da reação em tempo real. Foi elaborada uma resina composta experimental, a base de Bis-GMA (14,5% m/m), UDMA (6,5% m/m) e partículas de carga silanizadas (79% m/m). Este compósito foi dividido em quatro grupos, que receberam os seguintes fotoiniciadores:... / To identify and quantify the camphorquinone (CQ) used in different brands of composite resins as a function of the shade analyzed. Filtek Z250 A3 (FZA3), Filtek Z- 250 Incisal (FZI), Pyramid Enamel A1(PEA1), Pyramid Enamel Translucent (PET), Filtek Supreme A3E (FSA3) and Filtek Supreme GT (FSGT) were used. Five hundred milligrams of each resin were weighed and then dissolved in 1.0 ml of methanol. The samples were centrifuged to accelerate the sedimentation of the inorganic particles. 0.8 ml of the supernatant solution was collected with a pipette and assessed under gas chromatography coupled to the mass spectrometer (GC–MS). The results were compared to pure CQsolutions, used as a standard. Student’s t-test, (p = 0.05) significant at the level of 5%, compared the results of each brand shade. A smaller amount of camphorquinone was found in Filtek Z-250 (FZI) resin incisal shade when compared to (FZA3) A3 shade. On the other hand, Filtek Supreme resin featured a statistically larger camphorquinone amount in the incisal shade. In Pyramid Enamel resin camphorquinone was found only in shade A1, while the photoinitiator used in the Translucent shade was not identified. Then we investigate the reaction of polymerization of four experimental composites by fotocalorimetria, using different photoinitiators. This technique allows estimating the degree of conversion (GC) and kinetic parameters of the reaction as the acceleration of the reaction in real time. It was drawn up a composite resin experimental, the basis of Bis-GMA (14.5% m / m), UDMA (6.5% m / m) and particulate load silanizadas (79% m / m). This composite was divided into four groups, which received the following fotoiniciadores: camphorquinone (CQ), 1-phenyl-1 ,2-propanodione (PPD), MAPO (Lucirin TPO) and BAPO (Irgacure 819). The reaction of polymerization of these four experimental composite was analyzed...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2096.pdf: 2883888 bytes, checksum: 14ee3b8f3f2831e4e82bdcea414da0f8 (MD5) Previous issue date: 2007-08-10 / Universidade Federal de Sao Carlos / This present thesis describes the development of analytical methodologies involving the HPLC-PDA-MS/MS coupling to verify the production of both polar and non-polar metabolites in orange trees produced by grafting Citrus sinensis onto Citrus limonea. By the use of such kind of method, it was possible to verify the production of both polymethoxy and glycosyl flavonoids. This method was then applied to plants with symptoms of two different diseases, Citrus Sudden Death (MSC) and Greening. Regarding this last disease, the methodologies were focused on detection of some analogous of benzoic acid like gentisic acid, orbicularin, salicylic acid and glycosyl salicylic acid. Another part of this work was focused on isolation and characterization of Alternariol (AOL) and Alternariol Monomethyl Ether (AME), mycotoxins produced in vitro by a phytopathogenic strain of Alternaria alternata and the molecule tenuazoic acid. These mycotoxins were also monitored using HPLC-DAD for 30 days in an attempt to find out a possible profile of their production. In addition, an analytical method involving HPLC-MS/MS was developed, validated and applied to quantify the amounts of AOL and AME in different parts of tangerines (i.e., on flavedo and on albedo tissues) with and without symptoms of Alternaria Brown Spot disease. The levels of such substances were about 17.4 ± 1.0 μg/kg of AOH and 3.5 ± 0.2 μg/kg of AME on flavedo. Some inhibition tests against Guinardia citricarpa, related to Black Spot disease, were also done with some isolated compounds. Five of these compounds showed to have 100% of inhibition in this test at concentration of 500 μg/mL: benzoic acid, 3,4,5-trimethoxibenzoic acid, 3,4-dimethoxibenzoic acid, and the glycosyl flavonoids naringin and rutin. / Este trabalho descreve o desenvolvimento de metodologias de análise para metabólitos polares e de polaridade intermediária presentes em laranjeiras provenientes da enxertia de Citrus sinensis sobre Citrus limonea usando HPLC-DAD-MS/MS. Através deste método, foram detectados flavonóides glicosilados e polimetoxilados. O método também foi aplicado na análise de plantas com sintomas da doença Morte Súbita dos Citros (MSC). Neste mesmo contexto foram analisadas plantas sadias e com sintomas da doença Greening com o objetivo de monitorar moléculas derivadas do ácido benzóico como o ácido gentísico, orbicularina, ácido salicílico e ácido salicílico glicosilado (ácido β-O-D glucosilsalicilico). Um outro estudo realizado neste trabalho tratou do isolamento e identificação das micotoxinas alternariol (AOH) e alternariol monometil éter (AME), além do ácido tenuazônio, produzidas in vitro pelo microrganismo fitopatogênico de citros Alternaria alternata. A produção destas micotoxinas foi monitorada através de HPLC-DAD ao longo de trinta dias de cultivo do microrganismo com a finalidade de construir uma curva de produção destas moléculas. Validou-se também um método usando HPLC-MS/MS para quantificar as micotoxinas AOH e AME nas cascas de tangerina (albedo e flavedo) com sintomas de mancha marrom de alternaria (MMA), onde encontrou-se 17.4 ± 1.0 μg/kg de AOH e 3.5 ± 0.2 μg/kg de AME no flavedo de tangerina. Por fim, foram realizados ensaios de inibição do fungo fitopatogênico de citros Guignardia citricarpa, causador da doença pinta preta, através do método de germinação de esporos em placa de poliestireno. As substâncias que apresentaram praticamente 100% de inibição foram dois derivados do ácido benzóico, o ácido 3,4,5-trimetoxibenzóico e o ácido 3,4-dimetoxibenzóico, e os flavonóides glicosilados naringina e rutina. Essas quatro substâncias, na concentração de 500 μg/mL, foram capazes de inibir por completo a germinação dos esporos de G. citricarpa.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2236.pdf: 4508455 bytes, checksum: da224f07c31e180bc11a5171a3f168f6 (MD5) Previous issue date: 2009-02-12 / Universidade Federal de Minas Gerais / In the present work it was developed analytical methodologies for investigation of biosynthesis of bis-phenylpropanoyl amides, using labeled precursors in the culture medium. The effect of different nitrogen sources on the bis-phenylpropanoyl amides production was also evaluated. These amides are reported as antiparasitary compounds and they also showed activity against gram-positive Bacillus subtilis in bioassays conducted at LaBioMMi (DQ/UFSCar). The analytical methodologies developed were based on High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Mass Spectrometry techniques, mainly electrospray ionization (ESI) and MS/MS. Using the methodologies developed for preparative liquid chromatography it were isolated the bis-phenylpropanoyl amides, brasiliamide A and B and other secondary metabolites co-produced. Liquid chromatography coupled with mass spectrometry techniques allowed fragmentation studies which lead to selective detection experiments of brasiliamides in mediums enhanced with different nitrogen sources. The quantitative analysis (HPLC/UV-MS/MS) indicated great influence of the amino acid L-phenylalanine on the bis-phenylpropanoyl amides production. From these results, the biosynthesis of the phenylapropanoids was investigated using [2-13CPhe]. The RMN 13C and HPLC/UV-MS analysis showed the incorporation of two amino acid units on brasiliamides structure formed by the phenylpropanoids pathway, which is uncommon in fungi. The first phenylpropanoid pathway step was evaluated throw using enzymatic extract with Phenylalanine ammoniolyase (PAL). The HPLC/UV analysis indicates the formation of cinnamic acid from Lphenylalanine. / ESTUDOS BIOSSINTÉTICOS DE AMIDAS BIS-FENILPROPANOÍDICAS PRODUZIDAS PELO FUNGO Penicillium brasilianum, UM ENDOFÍTICO DE Melia azedarach. Foi o título do trabalho no qual foram desenvolvidas metodologias de análise para a investigação da biossíntese de amidas bisfenilpropanoídicas, pela adição de precursores isotopicamente marcados ao meio de cultura e otimização da produção destas amidas pelo micro-organismo quando submetido à variadas fontes nitrogenadas. As amidas, substâncias relatadas como bons antiparasitários, apresentaram também atividade contra a bactéria gram-positiva Bacillus subtilis. As metodologias de análise desenvolvidas foram baseadas em cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e técnicas de espectrometria de massas com ionização por Electrospray (ESI). A utilização da técnica de cromatografia líquida em escala preparativa permitiu o isolamento das amidas bis-fenilpropanoidicas, brasiliamida A e B e ainda, metabólitos secundários co-produzidos com estes compostos. A utilização do acoplamento entre as metodologias de análise LC/MS permitiu, através de estudos de fragmentação MS/MS, determinar condições otimizadas para a detecção seletiva das amidas nos meios de cultura, enriquecidos com diferentes fontes nitrogenadas. As análises quantitativas por HPLC/UV-MS/MS indicaram que o aminoácido L-fenilalanina intensifica a produção das brasiliamidas no extrato fúngico, e, a partir destes resultados, a rota biossintética dos fenilpropanóides produzidos pelo fungo P. brasilianum foi avaliada com a adição de [2-13C-Phe]. As análises dos extratos enriquecidos com aminoácido isotopicamente marcado via RMN 13C e HPLC/UV-MS, indicaram a incorporação de duas unidades do aminoácido L-fenilalanina na estrutura das brasiliamidas e a rota biossintética foi estabelecida a partir do caminho geral dos fenilpropanóides, metabólitos pouco reportados em fungos. A primeira etapa da rota biossintética foi avaliada usando extratos de ensaios enzimáticos com a enzima Fenilalanina Amônioliase (PAL), onde se visualizou a formação do ácido cinâmico a partir do aminoácido Phe através de monitoramento por HPLC/UV.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3297.pdf: 4903073 bytes, checksum: cbdd29ac2b2d99c76de709a3b4226f39 (MD5) Previous issue date: 2010-10-08 / Universidade Federal de Sao Carlos / Was conducted the study of chemical constituents volatiles and fixed of endophytes fungi. For this, we used the Penicillium griseoroseum, Penicillium brasilianum, Xylaria (NICL3) and different species of the genus Trichoderma, was also carried out a study of host plants, such as Cupressus lusitanica and Melia azedarach. Through analysis by GC-MS and methodologies for calculations of retention indices were identified monoterpenes, sesquiterpenes and diterpenes in the oils of plant and fungus. Compounds similar to essential oils of plants and associated microorganisms led to believe in the existence of biochemical interactions. Transesterification acid reactions was used for extraction of lipid compounds that were identified, characterized and quantified by techniques GC-MS, ¹H NMR and GC-FID. Profiles of methyl esters of fatty acids were found varied according to the species used, leading to mounting a chemo-taxonomic classification. Data quantification according to EN 14 103 showed that two endophytic fungi can be considered a promising source of biofuels. Antifungal assays of essential oil of Cupressus lusitanica were performed against endophytes be showing the importance of volatile compounds in the plant-endophytic microorganism. / Foi realizado o estudo dos constituintes quimicos voláteis e fixos de fungos endofíticos. Para isto, foram utilizados os fungos Penicillium griseoroseum, Penicillium brasilianum, Xylaria (NICL3) e conservas de diferentes espécies do gênero Trichoderma, além de ser realizado também o estudo de plantas hospedeiras, como Cupressus lusitanica e Melia azedarach. Através de análises por GC-MS e metodologias de cálculos de índices de retenção, foram identificados monoterpenos, sesquiterpenos e diterpenos nos óleos essenciais tanto da planta como dos fungo endofíticos. Compostos semelhantes ao óleos essencial da planta e microorganismo associados levaram a crer na existência de interações bioquímicas. Reações de transesterificação ácida foi utilizada para extração de compostos lipídicos, que foram identificados, caracterizados e quantificados pela técnicas de GC-MS, GC-FID e RMN ¹H. Perfis de ésteres metílicos de ácidos graxos diversificados foram encontrados de acordo com a espécie utilizada, levando a montar uma classificação quimio-taxonômica. Dados de quantificação de acordo com a norma EN 14 103 mostraram que dois fungos endofíticos podem ser considerados uma fonte promissora de biocombustíveis. Ensaio anti-fúngicos do óleo essencial de Cupressus lusitanica foram realizados contra fungos endofíticos associados mostrando haver importância dos compostos voláteis na relação plantamicroorganismo endofítico.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3601.pdf: 23843273 bytes, checksum: 9749b85bea7922b896f2c98d31db0fc3 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Universidade Federal de Minas Gerais / Alternanthera brasiliana is widely used by Brazilian people as a folk medicine for the treatment of numerous diseases. However, little is known about its chemical composition and the microorganisms that live in association with it. This work proposed the use of dereplication strategies to establish a correlation between chemical compounds present in the plant and the antibiotic activity associated with it. These strategies were also used for study endophytic micro-organisms associated with this plant, since the metabolites present in plant tissues are often result of interaction between plants and different factors present in their habitat, such as micro-organisms. 50 strains of endophytic micro-organisms associated to Alternanthera brasiliana were isolated. High-Throughput Screening strategies, which envolved analytical techniques as LC-PDA-MS, LC-PDA-MS/MS, LC-SPE-NMR and antibiosis assays allowed identification of antibiotic compounds present in the A. brasiliana stems. These compounds are member of oxylipins group, among which we highlight the 13-Z,E-KODE, 13-E,E-KODE, 9-E,Z-KODE and 9-E,EKODE. Furthermore, were identified some depsipeptides compounds produced by a strain of Fusarium fungus, isolated as endophyte of A. brasiliana. Beauvericin, which is one of these compounds , is known for its antibiotic and insecticide activities. This compound was also found in the plant extracts, suggesting that endophyte microorganism could play a role in producing antibiotic compounds inside plant tissues. / A planta Alternanthera brasiliana é popularmente conhecida por suas diversas atividades biológicas. Assim, o presente trabalho pretende contribuir com o uso de estratégias de desreplicação a fim de estabelecer uma correlação entre os compostos químicos presentes nesta planta e a atividade antibiótica associada a ela. Além disso, essas estratégias de desreplicação foram utilizadas para o estudo dos micro-organismos endofiticos associados a esta planta, uma vez que os metabólitos secundários presentes nos tecidos das plantas muitas vezes são resultado da interação desta planta com diversos fatores presentes em seu habitat, e dentre eles a interação com microorganismos merece destaque. Foram isoladas 50 cepas de micro-organismos endofiticos associados à planta Alternanthera brasiliana. O uso de abordagens de High Throughput Screening aliadas a técnicas analíticas como LC-PDA-MS, LC-PDA-MS/MS, LC-SPE-NMR e ensaios de antibiose permitiram a identificação dos compostos antibióticos presentes no caule de A. brasiliana. Esses compostos pertencem a classe das oxilipinas, dentre os quais se destacam o 13-Z,E-KODE, 13-E,E-KODE, 9-E,Z-KODE e 9-E,E-KODE. Tambem foram identificados compostos da classe dos depsipeptídeos nos extratos de uma cepa do gênero Fusarium, isolada como endofítico de A. brasiliana. Dentre os depsipeptídeos encontrados, a beauvericina estava presente em grande quantidade no extrato deste micro-organismo. Este composto, conhecido por suas atividades antibiótica e inseticida, foi encontrado também no extrato da planta, sugerindo que o micro-organismo endofítico poderia estar produzindo compostos desta classe no interior dos tecidos da planta, onde ele está alojado.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5703.pdf: 9636340 bytes, checksum: f0c2d44d2cef3dc3b41ae4d5b56d8d1c (MD5) Previous issue date: 2011-08-05 / Universidade Federal de Sao Carlos / In the present work, the lanostane triterpenes Lanosta-8,24-diene-3β,23-diol and Lanosta-8,23-diene-3β,25-diol were isolated from the basidiomycete Scleroderma sp., an extremely rich source of triterpenes and not yet reported as having it. The molecular structures were completely determined by 1D and 2D NMR and mass spectrometry (MS) analyses with fragmentation mechanisms being also suggested. These and other substrates were considered for terpenoids metabolism study in Xylaria sp., a micro-organism known from previous projects, at the research group LaBioMMi, by living in mutuality with Sapindus saponaria, a saponins producer plant, known for its antifungal metabolites. Different substrates were considered for fungal experiments, including oleanolic acid, isolated from clove and identified by 1H NMR, stevioside, obtained from commercial source, avenacosides A and B from oats, used in its natural way (known for being rich in these glycosides) and the previously isolated lanosterols from Scleroderma sp. As in their habitat, Xylaria fungus has proved to have great glycosides affinity, promoting deglycosylations reactions or even combining them with different sugar patterns. Oleanolic acid was completely consumed by the micro-organism, while lanosterol were fully incorporated into the fungus mycelium. Using high-resolution LC/MS analysis with Q-TOF hybrid analyzer, the metabolites were accurately identified so as some biotransformation products. / No presente trabalho foram isolados os triterpenos lanostanos Lanosta-8,24-diene-3ß,23-diol e Lanosta-8,23-diene-3ß,25-diol do basidiomiceto Scleroderma sp., uma fonte rica em triterpenos e ainda não reportada como produtora destes metabólitos. As estruturas moleculares foram completamente determinadas por RMN 1D e 2D e análises de espectrometria de massas, tendo ainda as fragmentações propostas. Esses e outros substratos foram considerados para o estudo do metabolismo de terpenóides em Xylaria sp., um micro-organismo conhecido de pesquisas anteriores do grupo LaBioMMi por viver em mutualismo com Sapindus saponaria, uma planta rica em saponinas, que são metabólitos conhecidos pelo potencial antifúngico. Diferentes substratos foram utilizados nos experimentos com o fungo, dentre eles o ácido oleanólico isolado do cravo da Índia (com sua estrutura determinada por RMN 1H), steviosídeo, proveniente de fonte comercial, avenacosídeos A e B, utilizados sem isolamento prévio a partir da aveia (a qual é uma fonte rica nesses glicosídeos) e os lanosteróis isolados de Scleroderma sp. Assim como em seu habitat, a Xylaria mostrou grande afinidade pelos glicosídeos, promovendo reações de desglicosilações ou mesmo acumulando-os com diferentes padrões de glicosilação. O ácido oleanólico foi completamente consumido pelo micro-organismo, enquanto que os lanosteróis foram totalmente incorporados ao micélio do fungo. Através de análise em LC/MS de alta resolução com analisador híbrido Q-TOF foi possível determinar com precisão a identidade dos metabólitos utilizados, assim como alguns produtos de biotransformação.