Identifica las bacterias celulolíticas productoras de celulasas extracelulares aisladas de ambientes salinos de Perú. Para ello, se utilizaron 140 aislados, 25 de Maras (Cusco), 28 de Chilca (Lima), 42 de Pilluana (San Martín), 25 de San Blas (Junín) y 20 de la bahía de Paracas (Ica), todos fueron sembrados en agar carboximeti lcelulosa 1 % (p/v) suplementado con extracto de levadura 0,5 % y agua de sales 5%, se incubaron a 37 °C durante 48 h, luego se añadió a las placas solución rojo de congo 1 % (p/v) como agente revelador. Se seleccionaron 20 bacterias con actividad celulolítica, que se caracterizaron en base a pruebas morfológicas, bioquímicas y nutricionales. El análisis de restricción de los genes ribosómicos 16S amplificados por la reacción en cadena de la polimerasa se empleó para analizar la diversidad genética de los aislados productores de celulasas, del cual se obtuvieron 8 genotipos diferentes. Se secuenciaron los genes ribosómicos 16S de las cepas CHR3, CH48, CONT1 y PAR6R01A, las cuales presentaron la mayor actividad celulolítica. Del análisis de las secuencias nucleotídicas se determinó que estas cepas están relacionadas con Staphylococcus cohnii, Bacillus saferensis, Halomonas elongata y Halomonas sp, respectivamente. / Tesis

Se determina la actividad antibacteriana in vitro de los extractos etanólicos y metanólicos de hojas y tallos de Hyptis eriocephala Benth y de hojas de Piper umbellatum L. recolectadas en el Departamento de Amazonas (Perú), frente a cepas planctónicas y biopelículas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Inhibitoria de Biopelículas (CMIB) se empleó el método de microdilución en placa de 96 pocillos de poliestireno con resazurina. Para el caso de las biopelículas primero se seleccionaron a las Cepas Formadoras de Biopelículas (CFB) mediante el método de Agar Rojo de Congo (ARC). Concluye que todos los extractos de Hyptis eriocephala Benth y Piper umbellatum L. demostraron actividad antibacteriana frente a las cepas planctónicas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Staphylococcus epidermidis ATCC 12228; La actividad antibacteriana moderada fue evidenciada frente a Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 para el extracto etanólico de tallos de Hyptis eriocephala Benth con un valor de CMI de 250 µg/mL y para los extractos de Piper umbellatum L con valores de CMI de 250 µg/mL y 125 µg/mL. Solo el extracto etanólico de Piper umbellatum L. presentó actividad antibiopelícula débil frente a biopelículas de Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 con un valor de CMIB de 1000 µg/mL, mientras que los demás extractos no presentaron actividad antibiopelícula frente a los microorganismos estudiados. / Tesis

Linezolida foi o primeiro fármaco da classe das oxazolidinonas a ser aprovado para o uso clínico. Esta nova oxazolidinona inibe a síntese protéica impedindo a formação do complexo de iniciação formado pelo mRNA, tRNA f-Met e a subunidade 50S do ribossomo bacteriano. Embora a resistência à linezolida possa ser mediada pelo produto do gene cfr ou por mutações nas proteínas ribossômicas L3, L4 e L22, o mecanismo de resistência mais comum envolve mutações no domínio V do gene rRNA 23S. Entre março de 2008 a dezembro de 2011, 38 cepas de estafilococos coagulase-negativos (SCNs) resistentes à linezolida (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) isoladas de hemoculturas e pontas de cateter de pacientes internados em dois hospitais terciários do Estado de São Paulo foram incluídas neste estudo para a determinação dos mecanismos de resistência e análise da estabilidade do fenótipo resistente. As cepas de SCNs apresentaram altos níveis de resistência à linezolida (CIMs de 16-128 µg/ml) e foram multi-resistentes, permanecendo sensíveis à vancomicina e teicoplanina. A mutação G2576T foi identificada no domínio V do gene rRNA 23S em todas as cepas de SCNs, exceto em uma cepa de S. haemolyticus. O gene cfr e mutações nas proteínas L4 e L22 não foram detectados. Em relação à proteína L3, todas as cepas de S. epidermidis do hospital A, incluindo a cepa controle sensível à linezolida, apresentaram a substituição Leu101Val, sugerindo que essa mutação seja um marcador clonal dessa população sem envolvimento com a resistência à linezolida. A única cepa proveniente do hospital B (S. epidermidis) foi selvagem para essa proteína ribossômica. Somente uma cepa de S. haemoyticus teve uma mutação no gene rplC, resultando na alteração Val154Leu. Em S. hominis, a mutação Phe147Ile foi identificada em uma cepa, enquanto a associação de Gly139Arg e Met156Thr foi observada nas outras duas cepas dessa espécie. A identificação dessas mutações na proteína L3 de cepas de S. haemoyticus e S. hominis resistentes à linezolida reforça o papel desses sítios na aquisição da resistência ao fármaco em Staphylococcus spp. No entanto, a presença de G2576T no rRNA 23S torna difícil determinar exatamente qual o envolvimento das mutações na L3 com os elevados níveis de resistência à linezolida apresentados por essas cepas. Na ausência da pressão seletiva do antimicrobiano, após 130 passagens, a resistência à linezolida mediada pela mutação G2576T permaneceu estável nas cepas de SCNs deste estudo, as quais, de acordo com os perfis de restrição do domínio V gerados por NheI, tinham tanto alelos rRNA 23S selvagens como mutados. O sequenciamento individual do domínio V das diferentes cópias do gene rRNA 23S mostrou G2576T em todas as cópias amplificadas por PCR: 4/4 e 5/5 em S. epidermidis e 3/3 em S. haemolyticus (CIMs de 16-32 µg/ml). A estabilidade da cópia rRNA 23S mutada foi observada mesmo em uma cepa S. epidermidis sensível à linezolida, a qual apresentou uma redução da CIM de 4 para 1 µg/ml mantendo seu único alelo mutado ao longo do processo de reversão ao fenótipo sensível. A similaridade genética foi determinada por PFGE e mostrou uma disseminação clonal das diferentes espécies de SCNs resistentes à linezolida. A análise das cepas de S. epidermidis por MLST mostrou a ocorrência do clone ST-2 (CC2) nos dois hospitais. O aumento da pressão seletiva devido a exposições cada vez mais frequentes à linezolida, provavelmente, favoreceu a seleção e a disseminação de clones endêmicos de SCNs com a mutação G2576T na instituição A desde 2008. De forma diferente, o uso mais restrito do fármaco na instituição B poderia explicar a ocorrência isolada de uma única cepa resistente desde 2005. / Linezolid was the first agent of the oxazolidinone class to be introduced clinically. This oxazolidinone inhibits protein biosynthesis by preventing the formation of the initiation complex that consists of the mRNA, the f-Met tRNA and the 50S subunit of the ribosome. Although linezolid resistance has been mediated by the cfr-encoded product or by ribosomal proteins (L3, L4 and L22), the most common mechanism of resistance involves mutations in the central loop of domain V of the 23S rRNA gene. From March 2008 to December 2011, 38 coagulase-negative staphylococci (CNS) strains (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) exhibiting resistance to linezolid were isolated from blood and catheter cultures from patients in two tertiary care hospitals in the State of São Paulo and were included in this study for the ascertainment of the resistance mechanisms to this antimicrobial agent and for the analysis of the stability of this resistance. The strains exhibited high-level resistance to linezolid (MICs 16-128 µg/ml) and all were multidrug resistant, remaining susceptible to vancomycin and teicoplanin. The G2576T mutation in domain V region of 23S rRNA was identified in all isolates, except in a linezolid-resistant S. haemolyticus strain. The cfr gene and mutations in ribosomal proteins L4 and L22 were not detected. Regarding L3 protein analysis, all S. epidermidis strains of hospital A, including the linezolid-susceptible control strain, showed the L3 Leu101Val mutation, suggesting that this alteration is probably not involved in linezolid resistance. The one strain from hospital B (S. epidermidis) was wild-type for this ribosomal protein. Only one S. haemolyticus strain had a mutation in the L3 protein, Val154Leu. Two S. hominis strains showed Gly139Arg/Met156Thr mutations whereas one strain had Phe147Ile in L3 protein. The identification of these mutations in L3 protein of the linezolid-resistant S. haemolyticus and S. hominis strains strengthens the role of these sites in the acquisition of linezolid resistance in Staphylococcus spp. However, the presence of G2576T in the 23S rRNA gene makes difficult to determine exactly the role of L3 mutations in conferring elevated linezolid MIC values showed by these clinical strains. In the absence of antibiotic pressure, after 130 passages, linezolid resistance was stable in the clinical strains of this study, which did not have all copies of the 23S rRNA gene mutated, according to the restriction of the domain V fragment with NheI enzyme. Sequencing of the individual copies of the 23S rRNA gene in the serially passaged strains showed G2576T in all amplified copies by PCR: 4/4 and 5/5 in S. epidermidis and 3/3 in S. haemolyticus strains (MIC of 16-32 µg/ml). The stability of the mutant rRNA copy was also observed in the linezolid-susceptible S. epidermidis strain (MIC of 4 µg/ml). After the passages in antibiotic-free medium, the linezolid MIC of this strain fell to 1 µg/ml and the G2576T mutation persisted in one 23S rRNA gene copy. The clonal relatedness of the strains was determined by PFGE and revealed a clonal dissemination of different CNS species. Regarding MLST analysis, all S. epidermidis strains belonged to the sequence type ST2 (CC2). Most likely, the increased selective pressure has contributed to the selection of endemic linezolid-resistant CNS clones showing the G2576T mutation that have been disseminated in the institution A since 2008. Differently, the restricted use of linezolid in the institution B could explain the occurrence of a single resistant strain since 2005.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 406669.pdf: 310441 bytes, checksum: d1c730c8194f34c27f407777f4296a87 (MD5) Previous issue date: 2008-08-28 / Os Staphylococcus aureus resistentes ? meticilina (MRSA) encontram-se entre os principais agentes de infec??o hospitalar, para os quais h? grande dificuldade em se obter antimicrobianos para o seu controle. A resist?ncia ? meticilina ? codificada pelo gene mecA, que est? localizado em um elemento gen?tico m?vel denominado staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec). O SCCmec tamb?m possui o complexo g?nico ccr (ccrA e ccrB ou ccrC) e a regi?o J, que cont?m genes que conferem resist?ncia a drogas n?o beta-lact?micas. S?o conhecidos cinco tipos de SCCmec, os tipos I, II e III predominantes em infec??es nosocomiais, enquanto os tipos IV e V s?o, mais comumente, associados a infec??es adquiridas na comunidade. Neste contexto, este estudo se prop?s a realizar a caracteriza??o fenot?pica e genot?pica da resist?ncia ? meticilina de isolados de S. aureus e fenot?pica da resist?ncia ? vancomicina, bem como a determina??o dos subtipos de ccr associados. Para tanto, foram avaliadas 40 amostras de S. aureus obtidas no Servi?o de Microbiologia do Laborat?rio de An?lises Cl?nicas (LABIMED/Hospital de Caridade Astrogildo de Azevedo Santa Maria/RS). A concentra??o inibit?ria m?nima ?s drogas oxacilina e vancomicina foi determinada pelo m?todo de dilui??o em agar. A detec??o de mecA e dos al?tipos de ccr foi realizada atrav?s da rea??o em cadeia da polimerase (PCR). Todos os isolados testados foram considerados resistentes ? oxacilina. Nenhum dos isolados foi classificado como resistente ? vancomicina; no entanto, 25% (10/40) dos isolados apresentaram resist?ncia intermedi?ria ? vancomicina. O gene mecA foi detectado em todos os isolados. O ccrAB1 foi detectado em nove isolados (22,5%) e o ccrAB3 em 23 (57,5%). Oito isolados foram caracterizados como n?o ccrAB1 e n?o ccrAB3. A propor??o de al?tipos ccrAB3, associado a SCCmec tipo III, sugere que o clone epid?mico brasileiro (BEC) tamb?m possa estar presente nos hospitais do Estado do Rio Grande do Sul (Brasil). Considerando que a caracteriza??o do ccr nunca havia sido relatada a partir de isolados desta regi?o do Brasil, este trabalho pode contribuir para o estudo da din?mica do MRSA na Am?rica do Sul.

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Elisabeth Loschagin Pizzolitto / Banca: Eduardo Bagagli / Resumo: Os estafilococos coagulase-negativa (ECN) estão entre os microrganismos mais envolvidos em infecções nosocomiais, principalmente em recém-nascidos (RN) prematuros e de baixo peso. Entre os fatores de risco para infecções por esses agentes, a produção de um polissacarídeo extracelular e a conseqüente formação do biofilme, permitindo aderência às superfícies plásticas e lisas de cateteres e outros dispositivos médicos desempenham um papel importante. Uma coleção de 100 amostras de ECN, sendo 50 isoladas de pontas de cateteres e 30 de hemoculturas obtidas de RN da Unidade Neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP e 20 obtidas de fossas nasais de portadores saudáveis foi analisada quanto à produção de biofilme pelos métodos do tubo (TM), ágar vermelho congo (CRA) e através do método quantitativo de aderência a placa de poliestireno (TCP). Esses métodos foram comparados com a pesquisa dos genes icaA, icaD e icaC envolvidos na produção de biofilme em ECN. Das 100 amostras de ECN estudadas, 82% foram positivas pela técnica de PCR, 82% pelo método do tubo, 81% pelo método da placa de poliestireno e 76% pelo CRA. O método de aderência ao tubo (TM) foi o teste que mostrou resultados mais confiáveis, com uma sensibilidade e especificidade de 100% e boa concordância quando comparado a técnica de PCR. Com o objetivo de determinar o papel do biofilme como fator de risco na ocorrência de infecções em RN, 130 amostras de estafilococos coagulasenegativa (ECN) isoladas de recém-nascidos (RN) internados na Unidade Neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu foram identificadas e classificadas em significativas e contaminantes, baseado em dados clínicos e laboratoriais obtidos dos prontuários dos RN. Foram pesquisados fatores perinatais de risco para infecção, evolução clínica dos RN e antibiotico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Coagulase-negative staphylococci (CNS) are most often associated with nosocomial infections, especially in premature and under weight newborns. The most important pathogenic factor of these microorganisms is the production of extracellular polysaccharide and the consequent formation of biofilm which facilitates their adherence to the surfaces of catheters and other medical devices. A total of 100 clinical isolates of coagulase-negative staphylococci (CNS) isolated from infected medical devices received from the Neonatal Unit, University Hospital, Botucatu Medical Schooll, including 50 isolated from catheter tips, 30 from blood cultures, and 20 collected from the nasal cavity of healthy subjects were investigated in order to evaluate the efficiency of three phenotypic methods of detection of biofilm formation, and also analyze the icaA, icaD and icaC genes, using the PCR method. The clinical isolates were screened by tissue culture plate (TCP), Tube method (TM), and Congo Red Agar (CRA) method. Of the 100 tested isolates, 82% were positive in the PCR method; in the TM, 82%; in the TCP assay, 81%; and 76% in CRA method. The method of adherence to the test tube was shown that more reliable results, with a sensitivity and specificity of 100% and good agreement when compared with the PCR technique. In order to determine the role of biofilm as a risk factor in the occurrence of infections in newborns 130 clinical isolates of CNS were identified and classified as significant and contaminant, based on clinical data obtained from the patients' reports. Perinatal risk factors for infection, clinical evolution and antibiotic therapy for the newborns were studied, as well as the detection of the genes responsible for the production of biofilm in CNS.Of the 130 clinical isolates of CNS, 66 (50.8%) were classified as clinically significant and 64 (49.2%) as contaminant... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-27Bitstream added on 2014-06-13T19:07:48Z : No. of bitstreams: 1 honda_sn_me_jabo.pdf: 403807 bytes, checksum: 950b92aa2bbff78a4822b22028a73cd6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A carcinicultura é uma atividade que vem se expandindo, assim como o consumo do camarão, considerado um alimento saudável por sua qualidade nutricional. Nesse contexto é importante garantir a oferta de um produto de qualidade microbiológica, que atenda às exigências do mercado alimentício e não ofereça riscos à saúde do consumidor. Assim, objetivou-se verificar a relação entre a contaminação do camarão Macrobrachium amazonicum e o ambiente de criação, além de comparar os resultados obtidos com a legislação vigente. Para tanto, foi verificada a qualidade microbiológica do camarão, sedimento e água do viveiro onde estes foram cultivados, enumerando coliformes totais e termotolerantes e Staphylococcus coagulase positiva, e verificando a presença de Escherichia coli patogênica e Salmonella spp. Os resultados evidenciaram que as amostras de água encontraram-se em conformidade com os limites estabelecidos pela legislação, enquanto que para camarão uma amostra estava fora do limite exigido para Staphylococcus coagulase positiva e para Salmonella spp. as demais apresentavam-se de acordo com a legislação. As amostras de camarão apresentaram correlação com a água e sedimento do viveiro, demonstrando que a contaminação microbiológica do viveiro reflete na qualidade do camarão. O monitoramento da qualidade da água e a adoção do manejo correto na carcinicultura assumem grande importância para garantir a produção de camarões de boa qualidade, atendendo às exigências do mercado para comercialização e a segurança na saúde do consumidor / Shrimp farming is an activity that is expanding, as well as the consumption of shrimp, considered a healthy food due to your nutritional quality. In this context, it is important to ensure the supply of a product of microbiological quality, which meets the requirements of the food market and does not offer risks to consumer health. Thus, this study aim to verify the relationship between contamination of shrimp Macrobrachium amazonicum and culture environment and to compare the results obtained with the Brazilian legislation for water and shrimp. Thereunto, we investigated the microbiological quality of the shrimp, sediment and water of the pond where they were grown, enumerating total and thermotolerant coliforms and Staphylococcus coagulase positive, and investigating the presence of pathogenic Escherichia coli and Salmonella. The water samples were obeying the limits established by legislation, while a sample of shrimp was out of range required for Staphylococcus coagulase positive and for Salmonella all samples were in accordance with the law. Samples of shrimp were correlated with the water and sediment of the pond, showing that the microbiological contamination of the pond reflects the quality of shrimp. The monitoring of water quality and the adoption of the correct management in shrimp farming are very important to ensure that shrimp production of good quality, acordding the market requirements and consumer health safety

Orientador: Alexandrina Sartori / Coorientador: Gustavo Pompermaier Garlet / Banca: Maria Terezinha Serão Peraçoli / Banca: Carlos Eduardo Palanch Repeke / Resumo: Staphylococcus aureus é considerado o agente etiológico mais importante da artrite séptica. Neste contexto, o objetivo geral deste trabalho foi investigar o potencial artritogênico de cepas padrão de S. aureus produtoras de superantígenos (SAgs) e testar a eficácia terapêutica da associação entre antibiótico e imunomodulador neste modelo. Camundongos C57BL/6 machos foram inicialmente infectados pelo plexo retro-orbital com as diferentes cepas. O desenvolvimento de artrite e sua gravidade foram acompanhados por 14 dias, através das seguintes determinações: peso corporal, escore clínico e incidência de artrite, alterações histopatológicas, número de unidades formadoras de colônias, expressão local de citocinas e subpopulação células por PCR em tempo real e produção de citocinas por células esplênicas. Os resultados foram organizados em 3 manuscritos. No primeiro, comparamos a capacidade artritogênica de 5 cepas produtoras de SAgs. Constatamos que as cepas ATCC 19095 SEC+, N315 ST5 TSST-1+ e S-70 TSST-1+ determinaram artrite grave, intermediária e discreta, respectivamente. No segundo trabalho caracterizamos a artrite causada pela cepa ATCC 19095 SEC+. Este tipo de artrite se caracterizou por elevado escore clínico associado à proliferação sinovial, inflamação intensa, formação de "pannus", destruição da cartilagem e erosão óssea. A análise da expressão local de fatores de transcrição indicou expansão acentuada de células Th1 e Th17 nas lesões. No último manuscrito, avaliamos o efeito terapêutico da combinação do antibiótico bactericida cloxacilina com o imunomodulador tacrolimus. A administração destas duas drogas foi nemos eficaz no controle da doença do que o antibiótico administrado isoladamente / Abstract: Staphylococcus aureus is considered the more important etiological agent of septic arthritis. In this context, the main objective of this work was to investigate the arthritogenic capacity of standard S. aureus strains, producer of superantigens (SAgs). We also tested the therapeutic effectiveness of an association antibiotic and an immunomodulatory drug in this model. C57BL/6 male mice were initially infected by retro-orbital plexus with different strains. Development and severity of arthritis were followed during 14 days, through determination of body weight, clinical score and incidence of arthritis, histopathological changes, determination of colony forming units, evaluation of local infiltration of Th subsets by real time PCR and cytokine production by spleen cells. The results were organized in three manuscripts. In the first one we compared the arthritogenic ability of 5 S. aureus strains. We found that the strains ATCC 19095 SEC+, N315 ST5 TSST-1+ and S-70 TSST-1+ determined severe, intermediate and discrete arthritis, respectively. In the second study we characterized the arthritis caused by the ATCC 19095 SEC+ strain. This type of arthritis was characterized by high clinical scores associated with synovial proliferation, intense inflammation, "pannus" formation, cartilage destruction and bone erosion. In the final manuscript we evaluated the therapeutic potential of the combination bewteen cloxacilin (bactericidal antibiotic) with tacrolimus (immunomodulator). The administration of these two drugs was less effective in controlling the disease than the antibiotic alone / Mestre

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007- Lidiane de Castro Soares.pdf: 1336181 bytes, checksum: 47680a74331a705e5ecd649c1639aa3f (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Funda??o Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Coagulasenegative staphylococci (SCN) take part of normal microbiota. Although it has been considered saprophytic, nowadays there is a concern about its pathogenic potential.Nevertheless, all advance in SCN identification assays, these microorganisms are continually neglected in laboratorial routine of infectious diseases, because of the wide range of species. In spite of the difficulties, it is necessary to make an appropriated species identification in order to differentiate the potential pathogenic agents and to determine its antimicrobial susceptibility pattern. Resistance in SCN is related to the presence of mecA gene, which expresses a heterogeneous pattern that can be detected through diverse phenotypics tests. In this study, 72 SCN isolates obtained from external ear conducts of dogs, bovine mastitis and human nosocomial infections were evaluated. Staphylococcus xylosus was the most prevalent microorganism in animal and S. cohnii subsp.urealyticus in human sample. The antimicrobial resistance patterns were evaluated through disc diffusion test, and a high level of resistance to penicillin and ampicillin were detected. The most efficient antibiotics evaluated were gentamicin, vancomicin and the association ampicillin+sulbactam. Oxacillin resistance was phenotypically detected by modified disc diffusion test, agar screen, broth microdilution and agar dilution. Presence of mecA gene where detected in 5,55% of the isolates by Polimerase Chain Reaction (PCR). Correlation with the detection of mecA gene was used as gold standard for evaluation of sensitivity and specificity of phenotypical assays. The low number of mecA positives isolates did not allowed the association between cefoxitin and oxacillin resistance as a test to detect the presence this gene. The broth microdilution and agar dilution tests presented the best accuracy in phenotypic detection of the oxacillin resistance. / Os estafilococos coagulasenegativos (ECN) fazem parte da microbiota normal da pele e apesar de terem sido considerados sapr?fitas por muito tempo, o seu significado cl?nico como agente etiol?gico tem aumentado com o passar dos anos. No entanto, apesar de todo avan?o nas t?cnicas de identifica??o dos ECN e do conhecimento destes como agentes etiol?gicos em diversos processos infecciosos, estes microrganismos muitas vezes s?o negligenciados na rotina laboratorial, devido a enorme diversidade de esp?cies encontradas. A identifica??o das esp?cies de ECN, embora de dif?cil realiza??o para a maioria dos laborat?rios cl?nicos, ? necess?ria para diferenciar o potencial patog?nico e o perfil de resist?ncia de cada isolado. A resist?ncia ? oxacilina em ECN ? mediada pelo gene mecA e usualmente heterog?nea, sendo detectada por v?rios m?todos fenot?picos. Neste estudo, foram avaliados 72 isolados de ECN provenientes de amostras do conduto auditivo de c?es da ra?a Beagles, de mastite bovina e de infec??es humanas. Staphylococcus xylosus foi o microrganismo mais isolado, nas amostras animais, e S. cohnii subsp.urealyticus em humanos, dentro de uma ampla gama de esp?cies identificadas. O perfil de resist?ncia aos antimicrobianos em isolados de animais e humanas foi avaliado atrav?s da t?cnica de difus?o em disco, na qual detectouse um elevado n?vel de resist?ncia ? penicilina e ampicilina. A gentamicina, vancomicina e associa??o ampicilina+sulbactam foram eficientes frente aos isolados testados. A avalia??o da resist?ncia ? oxacilina foi realizada atrav?s da difus?o em disco modificada, ?gar screen, microdilui??o em caldo e em ?gar. A presen?a do gene mecA foi determinada pelo m?todo da Rea??o em Cadeia de Polimerase (PCR), sendo 5,55% dos isolados mecA positivos. Os resultados fenot?picos de resist?ncia a cefoxitina e a oxacilina foram correlacionados com a detec??o do gene mecA, que foi utilizado como padr?o ouro para avalia??o da sensibilidade e especificidade das t?cnicas utilizadas. O reduzido n?mero de isolados mecA + n?o permitiu estabelecer o grau de correla??o entre a cefoxitina e a oxacilina como m?todo de predi??o do gene, embora ambas tenha apresentado o mesmo percentual de resist?ncia. O teste fenot?pico que apresentou melhor acur?cia na detec??o da resist?ncia ? oxacilina foi a microdilui??o em caldo.

Orientador: Jacqueline Teixeira Caramori / Coorientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Pasqual Barretti / Banca: Alessandro Mondelli / Banca: Ronaldo D'Ávila / Banca: Carlos Henrique Camargo / Resumo: Peritonites e infecções do orifício de saída do cateter de diálise representam as principais complicações infecciosas relacionadas à diálise peritoneal, frequentemente respondem pela falência deste método dialítico, portanto com importante impacto na morbidade e mortalidade dos pacientes. Existem associações entre o portador de S. aureus e aumento no risco de infecções nos pacientes tratados por diálise peritoneal. Entretanto, desconhecemos estudos que avaliaram a virulência de Staphylococcus spp. carreados. Fatores de virulência são descritos como responsáveis pelos sintomas e gravidade de diversas infecções causadas por S. aureus. Esses fatores incluem as hemolisinas α, β, γ e δ, lipases, lecitinases, proteases, toxina 1 da Síndrome do Choque tóxico (TSST-1) e as enterotoxinas estafilocócicas (EEs), desoxirribonuclease (DNAse) e de desoxirribonuclease termoestável (TNAse). Este estudo teve como objetivo avaliar se fatores de virulência produzidos por Staphylococcus spp. e as características clinicas e epidemiológicas dos pacientes podem influenciar na ocorrência de infecções relacionadas ao tratamento. Para tal, foram incluídos 32 pacientes tratados por diálise peritoneal na Unidade de Diálise do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu- UNESP, avaliados primariamente quanto à colonização (culturas de coletas nasais e pele pericateter, em três momentos distintos no período de 12 meses) e subsequentemente foram observados quanto ao risco para a ocorrência de infecções, acompanhados por até 36 meses confirmados com culturas do efluente peritoneal na ocorrência de peritonites e secreção da pele pericateter na vigência de infecção de orifício de saída do cateter. As amostras de Staphylococcus spp. carreadas depois de devidamente identificadas, foram reavaliadas usando como critério de similaridade o método de susceptibilidade com ... / Abstract: Peritonitis and infections in the exit orifice of the dialysis catheter represent the main infectious complications related to peritoneal dialysis, and are often responsible for the failure in this dialysis method, therefore with a significant impact on morbidity and mortality of patients. There are associations between the carrier of S. aureus and increased risk of infection in peritoneal dialysis patients. However, studies that evaluated the virulence of Staphylococcus spp. carried are not aware. Virulence factors are described as responsible for the symptoms and severity of different infections caused by S. aureus. These factors include hemolysins α, β, and δ, lipases lecithinases, proteases, toxin 1 in Toxic Shock Syndrome (TSST-1) and staphylococcal enterotoxins (SEs), deoxyribonuclease (DNase) and thermostable deoxyribonuclease (TNAse). This study aimed to evaluate whether virulence factors produced by Staphylococcus spp. and the clinical and epidemiological characteristics of patients may influence the occurrence of infections related to the treatment. In order to do this, 32 patients treated by peritoneal dialysis at the Dialysis Unit of the University Hospital, Botucatu School of Medicine, UNESP, Brazil were included, evaluated primarily by the colonization (cultures collected from the nose and pericatheter skin, at three different times during 12 months) and subsequently were observed regarding the risk for the occurrence of infections, followed by at least 36 months confirmed with cultures from peritoneal effluent in the occurrence of peritonitis and secretion of the pericatheter skin in the occurrence of infection in the outlet orifice of the catheter. Samples of Staphylococcus spp. carriers after being properly identified, were reevaluated using similarity criteria from the method of susceptibility agar drug diffusion technique (Kirby-Bauer method), thus allowing strains selection of ... / Doutor

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Coorientador: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Ary Fernandes Júnior / Banca: Elizabeth Oliveira da Costa Freitas Guimarães / Resumo: A mastite é uma enfermidade que causa inflamação na glândula mamária e geralmente tem origem infecciosa. É uma das principais doenças que acomete os rebanhos de ovinos causando prejuízos econômicos aos produtores. Na mastite infecciosa, as bactérias do gênero Staphylococcus são os principais causadores de mastite em rebanhos de ovinos. Esses micro-organismos se caracterizam pela capacidade de produzir uma ampla variedade de toxinas extracelulares e outros fatores de virulência como a formação de biofilme, além de apresentarem resistência aos agentes antimicrobianos empregados no tratamento dos animais. Esse estudo teve como objetivos caracterizar o perfil clonal e os fatores de virulência e de resistência aos antimicrobianos em Staphylococcus spp. isolados do leite de ovinos de três rebanhos. Após a realização do California Mastitis Test (CMT) as amostras de leite foram colhidas para contagem de Células Somáticas (CCS) e identificação das espécies de estafilococos isoladas, detecção de genes codificadores de enterotoxinas (sea, seb, sec e sed), da toxina TSST-1, da leucocidina PVL e de biofilme (icaA, icaC, icaD, bap, aap e bhp), além da determinação da resistência a oxacilina pela pesquisa do gene mecA e perfil de sensibilidade a doze antimicrobianos. Os isolados com a presença de genes para toxinas e biofilme foram testados para detecção do RNA mensageiro para avaliação da capacidade de expressão dos fatores de virulência. Foram coletadas 473 amostras de leite de 242 animais, sendo encontrados micro-organismos em 169 (35,7%) amostras. Das 169 amostras em que foram isolados micro-organismos, 132 (78,1%) foram identificados como pertencendo ao gênero Staphylococcus, sendo 20 (15,1%) amostras identificadas como Staphylococcus aureus e as demais 112 (84,9%) como estafilococos coagulase-negativa (ECN). Das 20 amostras de S. aureus isoladas, nenhuma apresentou o gene ... / Abstract: Mastitis is a disease that causes inflammation in the mammary gland and is usually infectious. It is a major disease that affects sheep herds causing economic losses for producers. In infectious mastitis, Staphylococcus bacteria are the major cause of mastitis in sheep flocks. These micro-organisms are characterized by the ability to produce a wide variety of extracellular toxins and other virulence factors such as biofilm formation, besides presenting resistance to antimicrobial agents used in the treatment of animals. This study aimed to characterize the profile and clonal virulence factors and antimicrobial resistance in Staphylococcus spp. isolated from milk of sheep from three flocks. After the completion of the California Mastitis Test (CMT) milk samples were collected for Somatic Cell Count (SCC) and species identification of staphylococci isolated detection of genes encoding enterotoxins (sea, seb, sec and sed), the toxin TSST-1, PVL and Leucocidin of biofilm (icaA, icaC, icaD, bap, aap and bhp), besides the determination of resistance to oxacillin by research mecA and sensitivity profile to twelve antimicrobials. Isolates with the presence of toxin genes and biofilm were tested for the detection of messenger RNA for assessing the ability of expression of virulence factors. We collected 473 milk samples from 242 animals, micro-organisms found in 169 (35.7%) samples. Of the 169 samples that were isolated micro-organisms, 132 (78.1%) were identified as belonging to the genus Staphylococcus, 20 (15.1%) samples identified as Staphylococcus aureus and the remaining 112 (84.9%) as coagulase-negative staphylococci (CNS). Of the 20 samples of S. aureus isolates, none had the mecA and most were sensitive to all drugs tested except one sample that was resistant to tetracycline. Seven samples showed a toxin gene, the gene being the most seb found, present in five samples, followed by sea on three, two ... / Mestre