Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 1997-06-03Bitstream added on 2014-06-13T20:09:15Z : No. of bitstreams: 1 bertalot_mja_me_botfca.pdf: 1668174 bytes, checksum: d6b88fbeafee4ef448a844a6eec65022 (MD5) / Com o objetivo de avaliar a competição de quatro leguminosas arbóreas fixadoras de nitrogênio, sendo três exóticas (Leucaena leucocephala [Lam.] de Wit, Leucaena diversifolia (Schlecht.) Bentham e Acacia melanoxylon R. Brown) e uma nativa (Mimosa scabrella Bentham), foi instalado um experimento em um latossolo vermelho amarelo, distrófico, de textura média, derivado de arenito do Grupo Bauru, na Região de Botucatu-SP. O experimento seguiu um delineamento estatístico de blocos casualizados, contendo quatro tratamentos (espécies) e quatro repetições. Estabeleceu-se um sistema de 16 parcelas de 10 X 7,5 m cada uma (75 m2), constituída de 20 plantas, com espaçamento de plantio de 2,5 X 2,5 m. Os parâmetros avaliados foram altura, diâmetro do caule, teor de clorofila nas folhas, produção de serapilheira, produção de sementes, produção de matéria seca, concentração e quantidade de nutrientes. Além disso, foram realizadas análises químicas de amostras do solo e foi calculado o Índice de Eficiência de Utilização de Nutrientes. Aos 24 meses, a Acacia melanoxylon e a Leucaena diversifolia foram as espécies que alcançaram as maiores alturas (5,25 e 4,97 m, respectivamente), seguidas por M. scabrella (4,42 m) e L. leucocephala (1,72 m). A A. melanoxylon e a M. scabrella apresentaram os maiores diâmetros a 20 cm da base (7,12 e 7,00 cm, respectivamente). A L. leucocephala não se desenvolveu bem, refletindo sua falta de adaptabilidade às condições locais. Em relação ao teor de clorofila nas folhas, a A. melanoxylon apresentou os maiores valores em todas as ocasiões. Até os 24 meses, os resultados das análises químicas do solo indicaram que as espécies estudadas não alteraram nenhum dos parâmetros do solo avaliados. A formação de vagens de L. leucocephala iniciou-se aos sete meses após o plantio, sendo a espécie mais precoce entre as estudadas, seguida... / To evaluate the performance of four nitrogen fixing tree species, being three of them exotic (Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit, Leucaena diversifolia (Schlecht.) Bentham, Acacia melanoxylon R. Brown) and one indigenous species (Mimosa scabrella Bentham), a trial was undertaken during two years in a red yellow oxisol following a randomized block experimental design with four treatments (species) and four replications. The seedlings were planted at 2.5 X 2.5 m apart, giving 20 plants per plot. Survival, height, diameter at 20 cm and diameter at breast height (DBH), leaf chlorophyll content, seed, litter and dry matter production as well as nutrients concentration were evaluated. Chemical analyses of soil samples were carried out and the Nutrients Utilization Efficiency Index was estimated. All the species tried had high survival rate and two of them had closed canopy at the age of two years, A. melanoxylon and L. diversifolia, being both of them the fastest growing species, reaching 5.25 and 4.97 m, respectively, followed by M. scabrella (4.42 m) and L. leucocephala (1,72 m). A. melanoxylon and M. scabrella had the greatest 20 cm-height stem diameters, 7.12 and 7.00 cm, respectively. L. leucocephala had an insatisfactory development and showed a lack of adaptability to local conditions. The highest chlorophyll levels were registered in A. melanoxylon. At the age of two years the chemical analyses did not show any influence of the tree species on the soil properties. L. leucocephala pod formation began seven months after plantation of the seedlings, suggesting this fact that it is a precocious species. In the remaining species the order of pod formation was L. diversifolia, M. scabrella and A. melanoxylon. M. scabrella had the highest litter production (460 kg/ha), followed by A. melanoxylon (235.20 kg/ha) and L. diversifolia (138 kg/ha), while L. leucocephala had no litter production... (Complete abstract click electronic access below)

A longevidade e a fertilidade são características alvo de vários estudos na comunidade científica. Além dos efeitos de condições ambientais como alimentação e condições de vida na qual os organismos estão inseridos, existe o potencial genético inerente a cada indivíduo. Esse estudo teve como objetivo ajudar a trilhar o caminho no sentido de elucidar o impacto de alguns polimorfismos de determinados genes na longevidade e na fertilidade de seres humanos. Foi avaliada a freqüência dos polimorfismos c.215G>C (P72R, rs1042522) do gene TP53, c.325-4742T>G (rs1706395) do gene TP63, 4c.- 30G>A e 14c.-20C>T (rs2273953, rs1801173) do gene TP73, c.753+572C>T (rs1563828) do gene MDM4, c.2719-234G>A (rs1529916) do gene USP7 e c.*1414A>C (rs929271) do gene LIF em um grupo composto por indivíduos da região norte do Brasil. Por meio da técnica TaqMan SNP genotyping assay, e subseqüente análise estatística, encontrou-se significância (P = 0,044) para a freqüência (82,4%) do alelo T do polimorfismo de LIF no grupo com o maior número de gestações, apontando para uma influência positiva desse alelo no número de gestações e para a frequência (67,7%) do genótipo GC do polimorfismo de TP53 (P = 0,033) com o início da menopausa antes dos 51 anos de idade, o que pode ser uma manifestação fenotípica do processo de envelhecimento. Notadamente, os polimorfismos do TP53 e da sua rota de sinalização são importantes para processos relacionados à fertilidade e a longevidade, bem como de outros aspectos fisiológicos e na etiologia de várias patologias. Este trabalho contribui com um melhor esclarecimento quanto ao impacto de alguns polimorfismos especificamente no processo reprodutivo humano e em sua longevidade. Os resultados obtidos apontam para um possível papel desses genes e de seus polimorfismos nos aspecto supracitados ajudando na sua compreensão. / The longevity and fertility are targeted characteristics of various studies in the scientific community. In addition to the effects of environmental conditions such as food and living conditions in which the organisms are inserted, there is the genetic potential inherent in each individual. This study aimed to help pave the way towards elucidating the impact of some polymorphisms of certain genes in longevity and fertility of humans. Was evaluated the frequency of the polymorphisms c.215G>C (P72R, rs1042522) of the TP53 gene, c.325-4742T>G (rs1706395) of the TP63 gene, 4c.-30G>A and 14c.-20C>T (rs2273953, rs1801173) of the TP73 gene, c.753+572C>T (rs1563828 ) of MDM4 gene, c.2719-234G>A (rs1529916) of USP7 gene and c.*1414A>C (rs929271) of LIF gene in a group composed by individuals from the northern region of Brazil. By TaqMan SNP genotyping assay technique, and subsequent statistical analysis, significance was found (P = 0.044) for the frequency (82.4%) of LIF allele polymorphism T in the group with the highest number of pregnancies, pointing to a positive influence of this allele on the number of pregnancies and the frequency (67.7%) of the CG genotype of the polymorphism TP53 (P = 0.033) with the onset of menopause before 51 years old, which may be a phenotypic expression of aging process. Notably, the polymorphisms of TP53 and its signaling pathway are important for processes related to fertility and longevity, as well as other physiological aspects and etiology of various diseases. This work contributes to a better understanding about the impact of some polymorphisms specifically in the human reproductive process and its longevity. The results point to a possible role of these genes and their polymorphisms in the above aspects in helping your understanding.

Orientador: Luis Alberto Magna / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-11-07T17:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bottcher-Luiz_Fatima_D.pdf: 2915887 bytes, checksum: bd2b1488cc71b0228fa4e739ef95db4d (MD5) Previous issue date: 1996 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Jose Guilherme Cecatti, Maria Jose Duarte Osis / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-11-09T15:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_LuizEduardoCamposde_M.pdf: 882802 bytes, checksum: 80472e326185436ad9b7b8812824bd6d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Nos últimos quarenta anos observou-se no Brasil uma queda significativa na taxa de fecundidade total. Dentre muitos fatores, a introdução e disponibilidade de métodos anticoncepcionais exerceram e continuam exercendo papel fundamental neste processo, sobretudo a prática da esterilização definitiva que representa o método anticoncepcional mais prevalente neste país. O presente estudo tem como objetivo avaliar a associação entre o número ideal de filhos, em relação ao número de nascidos vivos, e a prática da laqueadura, bem como sua relação com o arrependimento após a cirurgia. Realizou-se uma análise secundária de dados da pesquisa "O impacto das altas taxas de cesariana sobre a fecundidade de uma população. Um estudo de coorte retrospectiva em Campinas, Brasil". Nesse estudo foram entrevistadas 3.878 mulheres, das quais 1.012 eram laqueadas e 109 referiram estar arrependidas. Utilizando-se os dados das mulheres laqueadas, realizaram-se dois estudos de caso-controle aninhado a uma coorte, o primeiro abordando a laqueadura e o segundo o arrependimento. As diferenças entre os grupos foram medidas através do teste ?2. Também se calcularam os odds ratios e seus respectivos IC 95%, para as variáveis preditoras. Realizaram-se modelos de regressão logística múltipla para se identificar os fatores que se associaram independentemente à esterilização definitiva e ao arrependimento posterior. Os resultados sugerem que as mulheres com NIF = NV tinham maior risco de estarem laqueadas. Além disso, foi maior a chance de arrependimento no grupo de mulheres com NIF > NV. As variáveis que se associaram independentemente como fatores de risco para a laqueadura foram: maior idade, maior renda familiar, ter companheiro, mais de duas gestações, maior número de partos, menor número de abortos e não ter trabalho remunerado. Por outro lado, as variáveis que se associaram independentemente com o arrependimento pós-laqueadura foram ter mais de dois filhos e a intenção de esperar para ter mais filhos quando fizeram a laqueadura / Abstract: In the last forty years, there was a significant decline in Brazilian¿s total fertility rate (TFR). Among many factors, the diffusion of modern contraceptive methods played and is still playing a major role in this process, specially tubal ligation which is the most prevalent contraceptive method in Brazil today. The current study has the purpose of evaluating the association between ideal number of children (INC) in relation to live birth (LB) and the practice of female sterilization as well as its relationship with regret. It was carried out a secondary data analysis of the study "The impact of high cesarean section rates on the fertility of a population. A retrospective cohort study in Campinas, Brazil." In that study 3878 women were interviewed, 1012 were sterilized and 109 referred regret. Two nested case-control studies were performed: the first one focused on the sterilization and the second one on the regret. The differences between the groups were calculated by ?2 test. The relative risks were estimated through the Odds Ratios with their respective 95% confidence intervals and the predictor variables were included in multiple logistic regression models in order to identify the factors independently associated with female sterilization and regret after tubal ligation. The results suggest that women with INC = LB had a higher risk to be sterilized, and those with INC > LB had a higher risk to regret. The variables independently associated with tubal ligation were: higher age, higher family income, to have a partner, more than two previous pregnancies, higher number of deliveries, lower number of abortions, and having no paid job. On the other hand, the variables independently associated with regretting female sterilization were: to have two or more children and to say that they would like to wait more before to perform the tubal ligation / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-28Bitstream added on 2014-06-13T20:01:26Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_vlp_dr_jabo.pdf: 10518029 bytes, checksum: e1f14beaf992321e1c7b000a8d539166 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As práticas de manejo do solo, aliadas ao manejo das culturas, têm como preocupação básica criar condições favoráveis para que a produção tenha resultados máximos a custo satisfatório, com o mínimo possível de danos ao meio ambiente. Este trabalho teve como objetivo mapear a dependência espacial da variabilidade de atributos químicos do solo sob o pasto de tifton 85 e de atributos relacionados com a produtividade e qualidade desta forrageira, em sistemas de sequeiro e irrigado, buscando, pela interpretação e comparação dos mapas de krigagem, encontrar padrões de relação em suas heterogeneidades. Ao investigar estas variabilidades, buscou-se contribuir com o aperfeiçoamento do manejo empregado em sistemas de exploração de área de pastagem irrigada e de sequeiro, com manejo em lotação rotacionada e adubação na saída dos animais dos piquetes. Para entender a distribuição espacial dos atributos químicos do solo e de atributos relacionados à produtividade e qualidade do capim tifton 85, este trabalho, utilizou ferramentas da geoestatística. As amostras do solo foram colhidas em rede de 48 pontos georreferenciados em cada sistema e as amostras do capim, no entorno desses pontos. Nos seus mapas, foram encontrados padrões que evidenciaram estruturas relacionadas, podendo-se verificar, pelo ajuste ao modelo esférico e a relação entre o efeito pepita e o patamar, que os atributos apresentaram dependência espacial forte ou moderada e que, portanto, não variaram de forma aleatória. Pela análise dos mapas, nas profundidades pesquisadas, foi evidenciada a manutenção das estruturas de distribuição dos... / The practices of soil management, allied to crop management have basic concern to create favorable conditions for the production, has cost satisfying the maximum results with the least possible harm to the environment. This study had the goal to map the spatial dependence of the variability of soil chemical properties under grazing Tifton 85 and the attributes related to productivity and quality of this forage systems in irrigated and dry land, searching for the interpretation and comparison of kriging maps, find patterns in their relationship heterogeneities. By investigating these variabilities, we sought to contribute to the improvement of management systems employed in exploration area of irrigated pasture and dryland, with management in rotational stocking and fertilization in animals left in the pickets. To understand the spatial distribution of soil chemical properties and attributes related to productivity and quality of Tifton 85, it was used geostatistical tools. Soil samples at depths of 0 to 20 cm and 20 to 40 cm were collected from the network of 48 georeferenced points in each system. Samples of grass were obtained in the surroundings of points. On generated maps were found patterns that characterize related structures and can be verified by setting the spherical model and the ratio of nugget effect and landing, strong or moderate... (Complete abstract click electronic access below)

Este trabalho teve o objetivo de propor uma metodologia adequada ao diagnostico nutricional e à avaliação da fertilidade do solo, dentro do contexto do balanço nutricional da cultura do plátano (Musa AAB subgrupo plátano cv. Hárton) no Sul do Lago do Maracaibo, Venezuela. O procedimento inicial foi, estratificar a área de amostragem por series semelhantes de solos da região. Desta maneira, selecionaram-se quatro lavouras com um histórico de melhor rendimento, na serie de solos de texturas francas. Em seguida fez-se a amostragem completamente ao acaso, entre os meses de julho a dezembro dos anos 2000 e 2001. O tamanho da amostra tirada por lavoura, foi de 30 unidades experimentais. Entretanto, por segurança acrescentaram-se cerca de 25%, dadas as possibilidades de perdas por rajadas de vento e chuva e outros infortúnios. A unidade experimental foi formada pela planta "mãe" e seu broto lateral "filho" em pleno desenvolvimento. Em cada unidade coletou-se a amostra foliar, na planta "mãe" de acordo a norma estabelecida pelo Método de Amostragem Internacional de Referencia (MEIR). Concomitantemente, tomou-se a amostra de solo, na faixa de adubação, em frente do "filho" em duas profundidades 0 – 20 cm e 21 – 40 cm. As amostras de folhas foram analisadas para N, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu, Fe, Mn, Mo e Zn. Nas amostras de solo se determinou-se pH, condutividade elétrica, matéria orgânica, areia, silte, argila, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu, Fe, Mn e Zn. Os dados foram avaliados por analises de regressão com as combinações lineares dos componentes principais, regressão múltipla e obtenção da media aritmética das plantas com maior rendimento. Os resultados demonstraram que o modelo de regressão das combinações lineares com o rendimento deu uma melhor avaliação e predição do rendimento do plátano Hárton, dentro do contexto do balanço nutricional. Com esse modelo, posteriormente estimou-se o rendimento e se separou a população em classes desde o menor até o maior rendimento. Observaram-se nos dados dos analises de solos e folhas, incrementos, decréscimos ou ausência da variação nas concentrações de nutrientes em relação com o rendimento. Isto permitiu realizar interpretações simultâneas das análises de solos e folhas sem a necessidade de valores de referência. Por conseguinte vê-se que o modelo de regressão do rendimento com as combinações lineares vai além do uso de valores de referência isolados, pois permitiu determinar e utilizar o balanço nutricional entre todas as variáveis estudadas. Os resultados assim obtidos, permitem que a metodologia utilizada, seja indicada como una proposta de interpretação dos resultados de análises de solos e folhas. / The aim of this work is to suggest an adequate methodology for the evaluation of the nutritional status and of the fertility of soil for plantain grown in the South of Lake Maracaibo, Venezuela. Initially the area to sample was split into similar soil series. Four high yielding plantations were selected within a soil series of intermediate texture. Afterwards a random sampling was carried out from July to December 2000 and 2001. The sample per plantation had 30 experimental units, plus 25 % for safety reasons, since losses could occur due to weather conditions and other adverse factors. The experimental unit consisted of the "mother" plant and its fully developed "daughter". In each unit leaf sampling was done according to the "Method of International Sampling for Reference"(MEIR). Soil Samples were colleted in front of he daughter in the fertilization band at the depths of 0-20 and 21-40 cm. Leaf samples were analysed for N, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu, Fe, Mn, Mo and Zn. pH, conductivity, organic matter, sand, silt, clay, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu, Fe, Mn, and Zn were determined in the soil samples. Data were evaluated by regression analysis with the lineal combinations of the main components, and by multiple regression. Results have shown that the regression model of the lineal combination with yield gave a better evaluation and prediction of the plantain crop, within the context of nutritional balance. This, on its turn allowed for the assessment of yield and for the separation of the population in yield classes. It was possible to observe both in the soils and leaves concentrations of nutrients related and not related to yield. It was possible, therefore, to conduct simultaneous interpretation of soil and leaf analyses obviating the need for reference values. The model of regression of yield against lineal combinations goes farther the than the isolated reference values since it allowed for the determination and utilization of nutritional balance among all variables. This methodology could be proposed for the interpretation of the results of soil and plant analyses.

Em mulheres com epilepsia, sabe-se que a síndrome epiléptica, a freqüência de crises e as drogas antiepilépticas podem ter influência na função sexual, comportamento sexual e na capacidade reprodutora. Muitos fatores têm sido relacionados a estas alterações, tais como: duração e gravidade da epilepsia, tipo de droga antiepiléptica e localização da lesão epileptogênica. Baseado no conhecimento adquirido com as mulheres assume-se que as adolescentes sofram influência semelhante. Este estudo teve como objetivo avaliar aspectos relacionados à função e ao comportamento sexual, à educação sexual e à função gonadal em adolescentes do sexo feminino com epilepsia. Para isso, foram estudadas prospectivamente 35 pacientes do sexo feminino, com epilepsia parcial e generalizada, com idades entre 10 a 20 anos, com epilepsia ativa, sendo o diagnóstico da síndrome epiléptica realizado segundo os critérios da Liga Internacional Contra a Epilepsia (1989). Os critérios de exclusão foram: ausência de menarca; uso de contraceptivo hormonal ou dispositivo intra-uterino, no momento da avaliação ou nos últimos três meses; antecedente de cirurgia ginecológica ou distúrbio endocrinológico; presença de doença crônica associada, ou deficiência mental moderada a grave que impossibilitassem o seguimento do protocolo a ser instituído. As informações sobre a função sexual, comportamento sexual e a educação sexual das adolescentes com epilepsia foram avaliadas através de um questionário padrão. O protocolo de estudo da função gonadal incluiu a análise dos seguintes critérios: ciclo menstrual regular, presença de dismenorréia, dosagem dos níveis hormonais (FSH, LH, estradiol, progesterona, prolactina, testosterona, T3, T4 livre, TSH), ultra-sonografia pélvica, gestação em curso ou recente. A função gonadal foi considerada normal se pelo menos um ou mais parâmetros acima foi adequado. Não foi observada diferença entre a idade da primeira relação sexual (p=0,54), atividade sexual (p=0,23), libido (p=1,00) e orgasmo (p=0,23) entre as adolescentes com epilepsia, em relação ao grupo controle. Todas as adolescentes sexualmente ativas relataram o uso de métodos contraceptivos, porém apenas 20,1% com orientação de algum profissional de saúde. A idade da menarca nos dois grupos foi similar. No entanto, o uso de valproato próximo à menarca e crises freqüentes foram fatores antecipadores da menarca. As adolescentes com epilepsia apresentaram uma freqüência de ciclos menstruais irregulares superior à do grupo controle. A irregularidade menstrual relacionou-se com a presença de crises tônico-clônicas generalizadas (p=0,02), sem relação com a síndrome epiléptica. Houve uma tendência a irregularidades menstruais em adolescentes que apresentavam duração da doença mais prolongada (p=0,06), independente da freqüência de crises epilépticas. Observaram-se índices de gravidez superiores entre as adolescentes com epilepsia em comparação às controles (p<.0001). Não houve diferença na freqüência de aborto entre as adolescentes com epilepsia. Neste estudo, as adolescentes com epilepsia apresentaram comportamento e função sexual similares às adolescentes sem doenças crônicas. Embora a função gonadal destas pacientes estivesse preservada, os distúrbios menstruais foram significantes, sugerindo que estas adolescentes possam estar em um processo em evolução com ciclos anovulatórios e disfunção reprodutora na vida adulta. Portanto, os aspectos relacionados à função e comportamento sexual, contracepção e função gonadal, em adolescentes com epilepsia, requerem atenção especial por parte dos profissionais de saúde. / It is known that in women with epilepsy, the epileptic syndrome, seizure frequency and antiepileptic drugs may act on sexual function, sexual behavior and reproductive function. Several factors have been associated with these changes such as: duration and severity of the epilepsy, kind of antiepileptic drug and locality of the epileptogenic lesion. Based on knowledge acquired with studies in women, it is assumed that female adolescents suffer similar influences. This study aimed to evaluate several aspects related to sexual function, to sexual behavior, to sexual education and to gonadal function in female adolescents with epilepsy. We prospectively studied 35 females, with ages between 10 and 20 years, with active partial and generalized epilepsies and epileptic syndromes classified according to ILAE criteria (1989). Criteria of exclusion were: patients that had not yet had their menarche, those in use of hormonal contraceptives or intrauterine devices, either at the moment of the evaluation or in the last three months; patients with previous gynecological surgery or endocrine disorders; patients with associated chronic disease or moderate to severe mental deficiency that might hinder completion of the study protocol. Information on sexual function and education were obtained with a standard questionnaire. Our study protocol for gonadal function included analysis of the following criteria: regular menstrual cycles, dysmenorrhea, hormonal levels (FSH, LH, stradiol, progesterone, prolactin, testosterone, T3, free T4, TSH), pelvic ultrasound study, and recent or ongoing pregnancy. Gonadal function was considered normal when at least one of the above parameters was found to be adequate. No significant differences were observed between age at first sexual intercourse (p=0.54), sexual activity (p=0.23), libido (p=1,00) and orgasm (p=0.23) among patients with epilepsy, when compared to controls. Sexually active adolescents reported the use of contraceptives, although only 20.1% with orientation done by a health professional. Age of menarche was similar in both groups, but the use of valproate close to menarche and frequent seizures were factors that anticipated this event. Moreover, adolescents with epilepsy presented irregular menstrual cycles more frequently than controls. Menstrual irregularity was correlated to the presence of tonic-clonic generalized seizures (p=0.02), regardless the epilepsy type or syndrome, and with longer disease duration (p=0.06), despite of seizure frequency. Higher rates of pregnancy were observed in adolescents with epilepsy compared to controls (p<.0001). Abortion rates were similar in both groups. In this study, adolescents with epilepsy presented sexual function and behavior similar to their peers without chronic diseases. Although the gonadal function of these patients was spared, menstrual disorders were significant, suggesting that these adolescents may be in an ongoing process with anovulatory cycles and reproductive dysfunction in later adulthood. Therefore, aspects related to sexual behavior and function, contraception and gonadal function in adolescents with epilepsy require special attention by health professionals.

A predição do desempenho de touros na produção in vitro de embriões (PIVE), pela avaliação seminal, não está plenamente estabelecida. Com este estudo, objetivou-se caracterizar as diferenças nos atributos espermáticos de touros com baixo e alto desempenho, baseado nas taxas de clivagem e de blastocisto, visando estabelecer métodos preditivos de maior eficiência na PIVE. A partir do histórico de três anos da empresa In Vitro Brasil&reg;, foram selecionados touros que haviam resultado nas menores e maiores taxas de clivagem e de blastocisto, estabelecendo-se 4 grupos experimentais: baixa taxa de clivagem (BC, n=5), alta taxa de clivagem (AC, n=5), baixa taxa de blastocisto (BB, n=5) e alta taxa de blastocisto (AB, n=5). Foram adquiridas palhetas de sêmen congelado dos touros de cada grupo, nas quais foram avaliados, antes (Pré-Percoll&reg;) e após centrifugação em gradiente de Percoll&reg; (Pós-Percoll&reg;), os atributos espermáticos: cinética, em sistema CASA; integridade de membranas plasmática e acrossomal (FITC-PSA/PI), potencial de membrana mitocondrial (JC-1), status oxidativo (DHE, CellROXTM green/PI, MitoSox red), apoptose (FITC-FMK-VAD/PI) e DNA (SCSA), por citometria de fluxo; morfologia; atividade mitocondrial (DAB); capacitação (CTC); teste funcional e TBARS induzido. Diferenças entre grupos (BC vs. AC e BB vs. AB) foram estimadas pelo teste t. Para todas as análises estatísticas foi considerado nível de significância de 5%. Na ausência de interações significativas, o efeito dos grupos foi analisado ao fundir os momentos Pré e Pós-Percoll&reg;. Os grupos AC e AB apresentaram valores superiores de VAP, VCL, ALH e DNC e valores inferiores de BCF, STR, LIN e WOB, cinética indicativa de hiperativação. Adicionalmente, estes grupos apresentaram indícios de menor ocorrência de estresse oxidativo, evidenciados pelo percentual de espermatozoides com membrana lesada e estresse oxidativo (CellROXTM green/PI) no grupo AC e nível de DHE no grupo AB. Para os demais atributos estudados, não se obteve diferença entre os grupos. Por meio de análise de regressão logística multivariada, constatou-se que a taxa de clivagem sofre efeito de: VCL, BCF e percentual de espermatozoides com integridade de membrana e sem estresse oxidativo; já a taxa de blastocisto, sofre efeito de: defeitos menores, VSL, DABIII e DHE, os quais foram inclusos nos respectivos modelos preditivos. As taxas obtidas com o modelo preditivo foram comparadas às taxas reais por análise de correlação de Pearson, que resultaram em intensidade moderada tanto para clivagem (r=0,56) quanto para blastocisto (r=0,44). Subpopulações espermáticas com diferentes perfis de cinética em CASA, foram determinadas em três etapas estatísticas segundo Núñez-Martínez et al. (2006). Foram detectadas 4 subpopulações: 1-Rápidos e progressivos; 2- Hiperativados; 3- Lentos e sinuosos; 4- Lentos e progressivos. Touros com alto desempenho (AC e AB) apresentaram maior percentual de subpopulação 2, Pré-Percoll&reg;, e das subpopulações 1 e 2, Pós-Percoll&reg;. Com isto, demonstra-se ser possível diferenciar touros de baixo e alto desempenho na PIVE, pela avaliação dos atributos espermáticos, com o estabelecimento de modelos preditivos para as taxas de clivagem e de blastocisto. Ademais, o estudo das subpopulações espermáticas constitui-se no método mais efetivo para a predição do desempenho in vitro. / The prediction of bull performance on the in vitro production (IVP) of bovine embryos, by the seminal evaluation, is not fully established. Thus, the aim of this study was to characterize the differences in the sperm features of bulls with low and high performance, based on cleavage and blastocyst rates, in order to establish predictive methods for a greater efficiency in the IVP. Based on the results obtained in three years from the company In Vitro Brasil&reg;, bulls were selected by the lowest and highest cleavage and blastocyst rates, establishing 4 experimental groups: low cleavage rate (BC, n=5), high cleavage rate (AC, n=5), low blastocyst rate (BB, n=5) and high blastocyst rate (AB, n=5). Frozen semen were obtained from the bulls of each group, in which were evaluated, before (Pre-Percoll&reg;) and after Percoll&reg; gradient centrifugation (Post-Percoll&reg;), the sperm features: kinetics, in CASA; integrity of plasma and acrosomal membranes (FITC-PSA/PI), mitochondrial membrane potential (JC-1), oxidative status (DHE, CellROXTM green/PI, MitoSox red), apoptosis (FITC-FMK-VAD/PI) and DNA (SCSA), by flow cytometry; morphology; mitochondrial activity (DAB); capacitation (CTC); functional test and induced TBARS. Differences between groups (BC vs. AC and BB vs. AB) were estimated by t test. A significance level of 5% was considered for all statistical analysis. In the absence of significant interactions, the effect of the groups was analyzed by merging the moments Pre and Post-Percoll&reg;. The AC and AB groups presented higher values of VAP, VCL, ALH and DNC and lower values of BCF, STR, LIN and WOB, kinetics indicative of hyperactivation. In addition, these groups showed less evidence of oxidative stress, observed by the percentage of spermatozoa with damaged membrane and oxidative stress (CellROXTM green/PI) in the AC group and level of DHE in the AB group. For the others sperm features, there was no difference between groups. By multivariate logistic regression analysis, it was verified that the cleavage rate is affected by: VSL, BCF and percentage of spermatozoa with membrane integrity and without oxidative stress; and the blastocyst rate, is affected by: minor defects, VSL, DABIII and DHE, which were included in the respective predictive models. The rates obtained with the predictive model were compared to the real rates by Pearson correlation analysis, which resulted in moderate intensity for both cleavage (r=0.56) and blastocyst (r=0.44). Spermatic subpopulations with different kinetic profiles at CASA were determined in three statistical steps according to Núñez-Martínez et al. (2006). Four subpopulations were detected: 1-Fast and progressive; 2- Hyperactivated; 3- Slow and sinuous; 4- Slow and progressive. Bulls with high performance (AC and AB) presented higher percentage of subpopulation 2, Pre-Percoll&reg;, and subpopulations 1 and 2, Post-Percoll&reg;. In summary, it is possible to differentiate low and high-performance bulls at IVP by evaluating the sperm features, with the establishment of predictive models for the cleavage and blastocyst rates. Furthermore, the study of sperm subpopulations is the most effective method for predicting in vitro performance.

A produção in vitro de embriões (PIVE) vem se destacado como biotecnologia reprodutiva nos rebanhos bovinos, porém ainda com algumas limitações. A diferença de fertilidade entre touros é uma delas e dentre os atributos espermáticos que podem impactar na PIVE, pouco se sabe sobre a composição do núcleo espermático. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo principal identificar quais aspectos nucleares do espermatozoide caracterizam a diferença nos índices de PIVE. Para tanto, o estudo foi dividido em 3 experimentos nos quais foi utilizado o banco de dados da empresa In Vitro Brasil para seleção de touros de alta (AF) e baixa (BF) taxa de desenvolvimento embrionário (taxa de blastocisto/taxa de clivados; n=5 touros/grupo). No primeiro experimento, foi realizado a avaliação da cromatina para susceptibilidade ao desafio ácido (SCSA modificado), deficiência de protaminação (CMA3) e fragmentação do DNA (COMETA). Apenas a deficiência de protaminação apresentou diferença entre os grupos, entretanto a porcentagem de células positivas para o CMA3 foi baixa, não sendo possível atribuir a esta alteração as diferenças de fertilidade encontradas. No segundo experimento, foi realizada a avaliação de proteômica do núcleo espermático destes touros. Para tanto, as amostras foram incubadas com detergente CTAB para remoção de parte da membrana e cauda, extração das proteínas, digestão com tripsina e análise por espectrometria de massas. A quantificação das proteínas foi avaliada pelo índice iBAQ obtido após a identificação dos peptídeos e a média deste índice comparado entre os grupos para identificação das proteínas diferencialmente expressas. Foram identificadas 196 proteínas, 21 diferencialmente expressas, sendo 17 hiperexpressas no grupo AF e 4 hiperexpressas no grupo BF. Dentre elas, proteínas relacionadas ao processo de espermatogênese, fecundação e motilidade. No terceiro experimento, com objetivo de identificar as marcações epigenéticas relacionadas com a diferença de fertilidade in vitro, foi realizado a avaliação das estruturas de nucleossomos utilizando a enzima MNase para posteriormente utilização na técnica de imunoprecipitação das marcações de histona. Entretanto, não foi identificado a presença de nucleossomos no DNA espermático bovino, inviabilizando análises posteriores. Sendo assim, a avalição da metilação de DNA foi escolhida como marcação epigenética para ser estudada. Neste caso, foi utilizada a técnica de RRBS (reduced representation of bisulfite sequencing) para identificar as citosinas diferencialmente metiladas (CDM) entre os grupos AF e BF. Foram identificadas 440 CDM, sendo 327 hipometiladas e 113 hipermetiladas no grupo AF. Além disto, 184 genes contendo estas CDM foram identificados, entretanto nenhum processo biológico foi enriquecido por estes genes. Foi possível concluir com este trabalho que a fertilidade in vitro pode ser considerada de caráter multifatorial, sendo que alterações pequenas de integridade de cromatina não afetam diretamente, já proteínas relacionadas a espermatogênese, motilidade e fecundação podem ter relação com o fenótipo fertilidade estudado. Dentre as marcações epigenética estudadas, as estruturas de nucleossomo pareceram estar ausentes no espermatozoide bovino, e a metilação de DNA não apresenta impacto significativo no perfil de fertilidade. / In vitro embryo production (IVP) has been highlighted as reproductive biotechnique in bovine herds, but still with some limitations. The fertility difference between bulls is one of them and among the sperm attributes that can impact on IVP, little is known about the composition of the bovine sperm nucleus. Therefore, this work had as main goal to identify which sperm nuclear aspects characterize the difference in the IVP index. Then, the study was divided in 3 experiments in which the database of the company In Vitro Brasil was used for selection of bulls with high (HF) and low (LF) embryo development rate (blastocyst rate/cleavage rate; n=5 bulls/group). In the first experiment, chromatin analysis of susceptibility to acid denaturation (modified SCSA), protamine deficiency (CMA3) and DNA fragmentation (COMET assay) were performed. Only protamine deficiency presented difference between groups, however the percentage of CMA3 positive cells was low and it was not possible to attribute to this alteration the fertility difference between groups. In the second experiment, proteomic analysis of the sperm nucleus of these bulls was performed. For that, samples were incubated with CTAB detergent to remove part of the membrane and tail, submitted to protein extraction, trypsin digestion and mass spectrometry analysis. The amount of the proteins was evaluated by the iBAQ index obtained after the identification of peptides and the average of this index compared to identify the differentially expressed proteins. In this experiment, 196 proteins were identified, 21 differentially expressed, being 17 overexpressed in the HF and 4 overexpressed in LF group. Among them, proteins related to the spermatogenesis, fertilization and motility. In the third experiment, in order to identify the epigenetic marks related to in vitro fertility differences it was performed the evaluation of the nucleosome structures using the MNase enzyme to later utilization of immunoprecipitation of the histone marks technique. However, the presence of nucleosomes in bovine sperm DNA was not identified, unfeasible further analysis. Thus, the evaluation of DNA methylation was chosen as epigenetic mark to be studied. In this case, the RRBS (reduced representation of bisulfite sequencing) technique was used to identify the differentially methylated cytosines (DMC) between the two groups. In this experiment, it was identified 440 DMC, being 327 hypomethylated and 113 hypermethylated in HF group. In addition, 184 genes containing these DMCs were identified, however no biological process enrichment was identified with these genes. In conclusion, this study indicated that in vitro fertility characterization can be multifactorial; small changes in chromatin integrity do not directly affect, but proteins related to spermatogenesis, motility and fertilization may be related to the fertility phenotype studied. Among the epigenetic marks studied, nucleosome structures were absent in bovine spermatozoa, and DNA methylation did not have a significant impact on the fertility profile.

Doutor -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 2002. / SAUDE PUBLICA.