Orientadores: Ricardo Barini, Isabela Nelly Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-11-27T10:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Klimesch_Yvonne_M.pdf: 1424571 bytes, checksum: a70b152ae87de0a973c2d34af4320957 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: As altas taxas de falha de implantação embrionária vêm sendo uma das principais causas no insucesso dos ciclos de fertilização in vitro. A incompatibilidade imunológica entre o embrião e a decídua materna gera uma ineficiência na produção de anticorpos bloqueadores com um aumento no predomínio de citocinas do tipo Th1 que são prejudiciais ao processo da gestação. A imunoterapia com linfócitos paternos surge como tratamento adjuvante com a função de reverter essa alteração imunológica para um predomínio do tipo Th2 favorecendo assim a tolerância imunológica permitindo a implantação embrionária e posterior desenvolvimento gestacional aumentando as taxas nos ciclos de fertilização assistida. Objetivos: Avaliar o tratamento de imunização com linfócitos paternos, os resultados maternos fetais e perinatais dos casais que tiveram falhas de implantação em ciclos de fertilização in vitro (FIV/ICSI). Materiais e métodos: Através de busca ativa pelos prontuários médicos foram incluídos no estudo 52 casais que apresentavam pelo menos duas falhas nos ciclos de fertilização previamente a imunoterapia. A imunização com linfócitos paternos foi administrada via intradérmica a cada 21 dias, totalizando 3 doses. Após 3 semanas da última dose realizou-se o teste de crossmatch, cujo percentual aceito é superior a 75% para ser considerado positivo e assim indicando a sensibilização da paciente com antígenos de histocompatibilidade do esposo. Resultados: Dos 52 casais incluídos no estudo, 20 casais não conseguiram uma gestação e 32 casais conseguiram uma gestação. No grupo que engravidou, a taxa de gravidez clínica foi de 61,5% (32/52) e a taxa de gravidez viável foi de 57,7% (30/52). Das 32 gestações, 30 evoluíram para parto e duas evoluíram para aborto de primeiro trimestre. A taxa de prematuridade foi de 53%. Conclusão: A imunoterapia com linfócitos paternos pode aumentar as taxas de gestação em mulheres que tiveram falhas prévias nos ciclos de fertilização assistida / Abstract: Introduction: High rates of embryo implantation failures have been a major cause of failure in IVF cycles. The immunological incompatibility between the embryo and the maternal decidua produces inefficiency in the production of blocking antibodies with an increase in the predominance of Th1-type cytokines that are detrimental to the process of gestation. Immunotherapy with paternal lymphocytes appears as adjuvant treatment with immune function reverse this change to a predominance of Th2 thus promoting immune tolerance allowing embryonic development and subsequent gestational increasing implantation rates in assisted fertilization cycles.Objective: To evaluate the treatment of immunization with paternal lymphocytes, fetal and perinatal maternal outcomes of couples who had implantation failure in in vitro fertilization cycles (IVF / ICSI). Material and Methods: Through active search for medical records were included in the study 52 couples with at least two flaws in fertilization cycles prior to immunotherapy. The immunization with paternal lymphocytes was administered intradermic every 21 days, totaling 3 doses. 3 weeks after the last dose was held for the crossmatch test, which is accepted percentage above 75% to be considered positive, thus indicating awareness of patient histocompatibility antigens husband.Results: Of the 52 couples in the study, 20 couples failed gestation and 32 couples achieved a pregnancy. In the group who became pregnant, the clinical pregnancy rate was 61.5% (32/52) and the viable pregnancy rate was 57.7% (30/52). Of the 32 pregnancies, 30 evolved into childbirth and two progressed to first trimester abortion. The prematurity rate was 53%.Conclusions: Immunotherapy with paternal lymphocytes can increase pregnancy rates in women who had previous failures in assisted fertilization cycles / Mestrado / Saúde Materna e Perinatal / Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: José Antônio Visintin / Banca: Marcelo Fábio Gouvia Nogueira / Resumo: As alterações no microambiente do trato reprodutivo comprometem a competência oocitária e o desenvolvimento embrionário pré-implantacional em bovinos. Vacas Bos indicus apresentam adaptações fenotípicas e genotípicas conferindo maior resistência e tolerância à temperatura elevada quando comparadas as vacas Bos taurus, que sofrem redução nos índices de prenhez durante os meses quentes do ano. Esta infertilidade causada pelo estresse térmico é um problema de ordem multifatorial, entretanto já foi demonstrado que o oócito e embrião são extremamente susceptíveis aos efeitos deletérios da temperatura elevada. Os danos celulares desencadeados pela temperatura elevada podem ser manipulados pelo fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I), que além de minimizar a morte celular espontânea, resgata células que já iniciaram apoptose induzida por diferentes agentes ou estresses. A primeira etapa deste projeto visou avaliar o efeito dose resposta do IGF-I durante a maturação in vitro (MIV) em meio quimicamente não definido (pré-experimento 1: meio MIV - 10% de soro fetal bovino) e semidefinido (pré-experimento 2: meio MIV - 6 mg/mL de albumina sérica bovina) na competência de desenvolvimento de oócitos bovinos. Para tanto, complexos cumulus-oócito (CCOs) de vacas (mestiças Bos indicus) oriundas de abatedouro foram maturados in vitro em meio MIV não definido ou semidefinido suplementado com 0 (controle veículo), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 ou 200 ng/mL de IGF-I por 22-24 h. Em seguida os oócitos foram fecundados (FIV) e cultivados in vitro (CIV). A adição de 25 ng/mL de IGF-I no meio MIV semidefinido ou não definido aumentou a porcentagem de oócitos clivados no dia 3 e a taxa de blastocisto no dia 8 após a fecundação. Dessa forma, a dose de 25 ng/mL de IGF-I foi utilizada na segunda etapa deste projeto, cujo objetivo foi avaliar o papel do IGF-I na competência de desenvolvimento de ... / Abstract: Microenvironmental alterations on reproductive tract compromise oocyte competence and pre-implicational embryo development in bovine. This fact is well characterized in animals exposed to heat stress. Bos indicus have fenotypic and genotypic adaptations which confers a higher tolerance to high temperatures compared with Bos taurus, suffering a reduction in the pregnancy rates during the hot months. This infertility caused by heat stress is a multifactorial problem, however it has been shown that oocyte and embryo are very susceptible to deleterious effects of high temperature. The cellular damage induced by high temperature could be manipulated by insulin-like growth factor I (IGF-I), which besides minimizing the spontaneous cell death, IGF-I rescue cells which have already initiated the apoptosis induced by different agents or stresses. The first step of this project aimed to evaluate dose-response effect of IGF-I during the maturation in vitro (MIV) in a non-defined medium (pre-experiment 1: MIV - 10% of bovine fetal serum) and semi-defined (preexperiment 2: MIV - 6 mg/mL of bovine albumin serum) in competence of bovine oocytes. Therefore, cumulus-oocyte complexes (CCOs) obtained of cows (Bos indicus crossbreed) from a slaughterhouse were matured in vitro in non-defined and semidefined MIV medium supplemented with 0 (vehicle control), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 or 200 ng/mL of IGF-I for 22-24 h. After, oocytes were fertilized (FIV) and cultured in vitro (CIV). The adition of 25 ng/ml of IGF-I on non-defined and semi-defined MIV medium increased porcentage of cleavage on day 3 and blastocysts rate in day 8 after fertilization. In this way, 25 ng/ml IGF-I was used on second step of this experiment, which objective was to evaluate the role of IGF-I on oocyte competence of oocytes collected from Bos indicus - Nelore (NEL; n= 6) and Bos taurus-Holstein (HPB; n= 6) exposed to heat stress. Therefore, cows adapted ... / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: César Roberto Esper / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: Este estudo objetivou avaliar a influência do fluido folicular (FF) e da proteína recombinante humana GDF9 adicionados ao meio de maturação sobre a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados três experimentos utilizando o meio TCM199 como meio básico de maturação. No primeiro experimento, os oócitos foram maturados em cinco diferentes meios (0%, 25%, 50%, 75% ou 100% de FF) em quatro tempos de maturação (22, 24, 26 ou 28 h). No segundo experimento, os oócitos foram maturados nos mesmos meios utilizados no primeiro experimento e fecundados em três diferentes tempos (24, 26 ou 28 h). No terceiro experimento, foram utilizados dois meios: controle (sem FF) ou com 25% de FF e quatro níveis de suplementação (0, 25, 100 ou 200 ng/mL) com GDF9. O FF promoveu retardo da progressão meiótica, afetando a maturação nuclear e a migração de grânulos corticais para a periferia dos oócitos. O FF em altas concentrações influenciou negativamente as taxas de clivagem e de blastocisto. O GDF9, com (25%) ou sem FF, não influenciou as taxas de clivagem e de blastocisto, no entanto, interferiu positivamente sobre o percentual de embriões considerados superiores. O percentual mais elevado (82,22%) de embriões classificados como superiores foi obtido com o uso de 200 ng de GDF9 em meio de maturação acrescido de 25% de FF. Em conclusão, a adição do fluido folicular (75% e 100%) ao meio de maturação in vitro retarda a progressão meiótica, sincronizando a maturação nuclear com a citoplasmática e a suplementação do meio de maturação com proteína recombinante humana GDF9 melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro, baseando-se na avaliação da proporção do número de células da massa celular interna (MCI) em relação ao número total de células / Abstract: This study aimed to evaluate the effects of follicular fluid (FF) and recombinant human GDF9 added to the maturation media on the quality of in vitro produced bovine embryos. Three experiments using TCM199 medium as basic maturation media were performed. In the first experiment oocytes were matured in five different media (0%, 25%, 50%, 75% or 100% of FF) during four maturation times (22, 24, 26 or 28 h). In the second experiment, the oocytes were matured in the same five media used in the first experiment and fertilized at three different times (24, 26 or 28 h). In the third experiment were used two media: control (without FF) or with 25% FF combined with four levels of supplementation (0, 25, 100 or 200ng/mL) with GDF9. The FF promoted delay of the meiotic progression, affecting nuclear maturation and cortical granules migration to the oocyte periphery. In addition FF influenced the cleavage and blastocyst rates. GDF9, without or added to FF did not affect the cleavage and blastocyst rates, however, a positive influence on the percentage of embryos considered superior was observed. The highest percentage (82.22%) of embryos considered superior was obtained with maturation media added with 25% of FF and supplemented with 200 ng of GDF9. In conclusion, addition follicular fluid (75% and 100%) to the in vitro maturation media delays meiotic progression, synchronizing nuclear to cytoplasmic maturation, and supplementation of maturation media with recombinant human GDF9 improves the quality of bovine embryos in vitro produced, based on inner cell mass cells (ICM) proportion, relative to the total cell number / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o benefício da substituição do soro fetal bovino (SFB) pelo fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-1) durante a maturação in vitro (MIV) ou cultivo in vitro (CIV), sobre qualidade embrionária e expressão de genes em embriões pré- e pós-compactação. Delineamento experimental foi fatorial 3 x 3 (três suplementos de MIV e três de CIV), com 9 grupos experimentais. Foram realizadas 20 réplicas (oócitos ≈ 400/grupo). Complexos cúmulus-oócito (COCs) graus I e II foram maturados in vitro com a adição de 10% de SFB (SFB), ou 3 mg/mL polivinil-álcool (PVA), ou PVA + 100 ng/mL de IGF-1 (IGF) a 38,5 ºC em 5% de CO2 em ar por 22 a 24 horas. Foram fertilizados e incubados durante 18 horas. Os zigotos foram cultivados com a adição de: 2,5% de SFB (SFB), ou 3 mg/mL de PVA (PVA), ou PVA + 100 ng/mL de IGF-1 (IGF) por sete dias a 38,5ºC em 5% de CO2 em ar. As taxas de clivagem e blastocisto foram avaliadas após 48 e 168 horas de cultivo, respectivamente. A técnica simplificada de coloração diferencial de células da massa celular interna (MCI) e trofoectoderma (TE) foi utilizada para avaliar a distribuição celular de blastocistos (n = 155) e a técnica de TUNEL para avaliação do índice de apoptose (n = 207). Concentrações de glicose e lactato obtidas do meio MIV utilizaram-se para analisar o metabolismo de glicose. mRNA foi extraído de embriões de 6 – 8 células colhidos após 66 horas post-inseminação (4 pools de 15 embriões por grupo) e d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-08-13T18:00:52Z : No. of bitstreams: 1 000753005.pdf: 2398846 bytes, checksum: 88a9bdc09aaab4eb0166b0e572c83bb7 (MD5) / As alterações no microambiente do trato reprodutivo comprometem a competência oocitária e o desenvolvimento embrionário pré-implantacional em bovinos. Vacas Bos indicus apresentam adaptações fenotípicas e genotípicas conferindo maior resistência e tolerância à temperatura elevada quando comparadas as vacas Bos taurus, que sofrem redução nos índices de prenhez durante os meses quentes do ano. Esta infertilidade causada pelo estresse térmico é um problema de ordem multifatorial, entretanto já foi demonstrado que o oócito e embrião são extremamente susceptíveis aos efeitos deletérios da temperatura elevada. Os danos celulares desencadeados pela temperatura elevada podem ser manipulados pelo fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I), que além de minimizar a morte celular espontânea, resgata células que já iniciaram apoptose induzida por diferentes agentes ou estresses. A primeira etapa deste projeto visou avaliar o efeito dose resposta do IGF-I durante a maturação in vitro (MIV) em meio quimicamente não definido (pré-experimento 1: meio MIV - 10% de soro fetal bovino) e semidefinido (pré-experimento 2: meio MIV - 6 mg/mL de albumina sérica bovina) na competência de desenvolvimento de oócitos bovinos. Para tanto, complexos cumulus-oócito (CCOs) de vacas (mestiças Bos indicus) oriundas de abatedouro foram maturados in vitro em meio MIV não definido ou semidefinido suplementado com 0 (controle veículo), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 ou 200 ng/mL de IGF-I por 22-24 h. Em seguida os oócitos foram fecundados (FIV) e cultivados in vitro (CIV). A adição de 25 ng/mL de IGF-I no meio MIV semidefinido ou não definido aumentou a porcentagem de oócitos clivados no dia 3 e a taxa de blastocisto no dia 8 após a fecundação. Dessa forma, a dose de 25 ng/mL de IGF-I foi utilizada na segunda etapa deste projeto, cujo objetivo foi avaliar o papel do IGF-I na competência de desenvolvimento de ... / Microenvironmental alterations on reproductive tract compromise oocyte competence and pre-implicational embryo development in bovine. This fact is well characterized in animals exposed to heat stress. Bos indicus have fenotypic and genotypic adaptations which confers a higher tolerance to high temperatures compared with Bos taurus, suffering a reduction in the pregnancy rates during the hot months. This infertility caused by heat stress is a multifactorial problem, however it has been shown that oocyte and embryo are very susceptible to deleterious effects of high temperature. The cellular damage induced by high temperature could be manipulated by insulin-like growth factor I (IGF-I), which besides minimizing the spontaneous cell death, IGF-I rescue cells which have already initiated the apoptosis induced by different agents or stresses. The first step of this project aimed to evaluate dose-response effect of IGF-I during the maturation in vitro (MIV) in a non-defined medium (pre-experiment 1: MIV - 10% of bovine fetal serum) and semi-defined (preexperiment 2: MIV - 6 mg/mL of bovine albumin serum) in competence of bovine oocytes. Therefore, cumulus-oocyte complexes (CCOs) obtained of cows (Bos indicus crossbreed) from a slaughterhouse were matured in vitro in non-defined and semidefined MIV medium supplemented with 0 (vehicle control), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 or 200 ng/mL of IGF-I for 22-24 h. After, oocytes were fertilized (FIV) and cultured in vitro (CIV). The adition of 25 ng/ml of IGF-I on non-defined and semi-defined MIV medium increased porcentage of cleavage on day 3 and blastocysts rate in day 8 after fertilization. In this way, 25 ng/ml IGF-I was used on second step of this experiment, which objective was to evaluate the role of IGF-I on oocyte competence of oocytes collected from Bos indicus – Nelore (NEL; n= 6) and Bos taurus-Holstein (HPB; n= 6) exposed to heat stress. Therefore, cows adapted ...

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000444693-Texto+Completo-0.pdf: 339452 bytes, checksum: ef9dfaf2d55534b68964afd3bb92e166 (MD5) Previous issue date: 2012 / The aim of this study was to check if there is a predictive relationship of measured serum levels of anti-Mullerian hormone (AMH), antral follicle count (AFC) and ovarian volume with the results of IVF. We conducted a prospective study between January 2010 and March 2012 with women aged 35 or more who underwent IVF. The levels of AMH, AFC and ovarian volume were correlated with response to ovarian hyperstimulation, with rates of fertilization, with embryo quality and pregnancy rates. We evaluated 40 patients with a median age of 39 years old. There was a significant direct correlation between the levels of AMH and the number of follicles larger than 14 mm (rS = 0. 81 and P < 0. 001). The same happened to the AFC (rS = 0. 69 and P < 0. 001). This correlation was not significant when evaluated the ovarian volume. AMH, AFC and ovarian volume did not show a statistically significant correlation with rates of fertilization, with embryo quality or with pregnancy rates. In predicting good or poor response, AMH and AFC showed a high positive predictive value (100% for the AMH and 87% for AFC, using a cutoff of 0. 9 ng/ml and 7 follicles respectively, values established by ROC curve). We conclude from this study that AMH and AFC can be used as predictors of response to ovarian hyperstimulation in IVF, but they are not related to embryo quality, fertilization rates or pregnancy. / O objetivo deste estudo foi verificar se existe relação preditiva da medida do nível sérico do hormônio antimülleriano (HAM), da contagem de folículos antrais (CFA) e do volume ovariano com os resultados de FIV. Realizou-se um estudo prospectivo no período de janeiro de 2010 a março de 2012 com mulheres de 35 anos ou mais que realizaram FIV. Os níveis do HAM, CFA e volume ovariano foram correlacionados com resposta à hiperestimulação ovariana, com as taxas de fertilização, com a qualidade dos embriões e com os índices de gestação. Foram avaliadas 40 pacientes com uma mediana de idade de 39 anos. Observou-se uma correlação direta significativa entre os níveis do HAM e o número de folículos maiores de 14 mm (rS = 0,81 e P < 0,001), ocorrendo o mesmo com a CFA (rS = 0,69 e P < 0,001). Tal correlação não foi significativa quando avaliado o volume ovariano. HAM, CFA e volume ovariano não apresentaram uma correlação estatisticamente significativa com as taxas de fertilização, com a qualidade embrionária, nem com os índices gestação. Na predição de boa ou má resposta, HAM e CFA apresentaram um alto valor preditivo positivo (100% para o HAM e 87% para a CFA, usando um ponto de corte de 0,9 ng/ml e 7 folículos respectivamente, valores estabelecidos pela curva ROC). Concluímos, com o estudo, que HAM e CFA podem ser utilizados como preditores da resposta à hiperestimulação ovariana em FIV; porém, não estão relacionados à qualidade embrionária, taxas de fertilização ou gestação.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-04Bitstream added on 2015-04-09T12:48:24Z : No. of bitstreams: 1 000815814.pdf: 419662 bytes, checksum: b03fc09d9d326c880d6e914d837b278f (MD5) / Animais da raça Holandesa, criados nas regiões de clima temperado a quente apresentam baixa eficiência quanto ao número, qualidade e competência oocitária para a produção in vitro de embriões, em comparação às raças Zebuínas. Por outro lado o controle da onda folicular e a estimulação com FSH exógeno pode incrementar o número e melhorar a qualidade e competência oocitária para a produção embrionária. Com o objetivo comparativo sete novilhas, sete vacas não lactantes e sete vacas em lactação foram utilizadas em um delineamento em “crossover” foram submetidas a quatro tratamentos: T1 – Aspiração folicular ao acaso em dia aleatório do ciclo estral; T2 – Aspiração folicular dois dias após a remoção do folículo dominante; T3 - Aspiração folicular 24 horas após remoção do folículo dominante e estimulação com dose única de FSH (100 UI para novilhas e 200 UI para vacas não lactantes ou em lactação) vinte quatro horas antes da aspiração folicular; T4 – Aspiração folicular após estimulação e indução do pico de LH (inserção de implante de progestágeno, aspiração do folículo dominante e estimulação com FSH na dose de 250 UI para novilhas, 500 UI para vacas não lactantes e lactantes, subdividas em 8 doses decrescentes, indução de luteólise e retirada do implante 36 horas antes do GnRH e aspiração folicular 24 horas após a administração de GnRH). Não foi observada diferença estatística entre os tratamentos (P>0,05) quando foi avaliada a recuperação de oócitos, no entanto a categoria de novilhas obteve melhores resultados e apresentou diferença estatística (P<0,05) quando comparada com vacas lactantes e não lactantes, porém não foi observada diferença estatística entre as categorias vacas não lactantes ou vacas lactantes. Quando os oócitos viáveis foram avaliados, a categoria de novilhas apresentou melhor resultado e diferença significativa ... / Holstein cows, bred in temperate to hot climate have low efficiency on the number, quality and oocyte competence for in vitro production of embryos, compared to Zebu breeds. On the other hand the control of follicular wave and stimulation with exogenous FSH can increase the number and improve the quality and oocyte competence for embryo production. With the comparative goal seven heifers, seven non-lactating cows and seven lactating cows were used in a complete crossover were subjected to four treatments: T1 - Follicular Aspiration randomly at any time of the estrous cycle; T2 - Follicular Aspiration two days after removal of the dominant follicle; T3 - Follicular Aspiration 24 hours after removal of the dominant follicle and stimulation with single dose of FSH (100 IU to 200 IU for heifers and non-lactating cows or lactating) twenty four hours before follicular aspiration; T4 - Follicular Aspiration after stimulation and induction of the LH surge (progestagen implant insertion, aspiration of the dominant follicle and FSH stimulation at a dose of 250 IU to 500 IU for heifers and non-lactating and lactating cows, subdivided in 8 decreasing doses, induce luteolysis and removal of the implant 36 hours before of the GnRH and follicular aspiration 24 hours after GnRH administration). No statistical difference between treatments (P>0.05) was evaluated oocyte retrieval was observed, however category heifers achieved better results and statistical differences (P<0.05) compared with lactating cows and non-lactating, although no statistical difference between the categories of non-lactating cows and lactating cows was observed. When the viable oocytes were evaluated, the grade of heifers showed better results and significant difference (P <0.05) compared with lactating and non-lactating cows, and no significant difference was observed between non-lactating cows and lactating cows (P>0.05). In relation to treatments, treatment 1 (T1) differed ...

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma biotecnologia de grande impacto econômico por maximizar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores resultando em maior eficiência reprodutiva. Apesar dos avanços da PIVE, a porcentagem de embriões que se desenvolvem ainda são inferiores aos produzidos in vivo. Epigenética é a regulação da expressão gênica sem alteração na sequência do DNA. Mecanismos epigenéticos, como o remodelamento das histonas, controlam expressão gênica e são fundamentais para o correto desenvolvimento embrionário. Dessa forma, modificações específicas nas histonas podem reprimir ou estimular a transcrição gênica. Os mecanismos epigenéticos são vulneráveis aos fatores ambientais, assim, os sistemas de cultivo in vitro podem ter um impacto no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Dada a importância e a aplicabilidade da PIVE como biotecnologia reprodutiva, o papel vital dos mecanismos epigenéticos durante o desenvolvimento embrionário, e a importante correlação entre as condições de cultivo embrionário e o perfil epigenético, o presente estudo investigou a influência de diferentes condições de cultivo durante o desenvolvimento embrionário por meio da utilização de diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB) (0% ou 2,5%) e diferentes tensões de oxigênio (O2) (5% ou 20%) durante o cultivo embrionário in vitro (CIV) na regulação epigenética, especificamente no remodelamento das histonas H3K9me2 (repressiva) e H3K4me2 (permissiva) de embriões bovinos produzido in vitro. Para este fim, foram delineados quatro tratamentos durante o cultivo embrionário. T1: embriões foram cultivados em meio de cultivo "Synthetic Oviduct Fluid" (SOF) com 0% SFB sob tensão de 5% de O2; T2: embriões foram cultivados em meio SOF com 2,5% SFB sob ... / Abstract: In vitro production (IVP) of bovine embryos is a biotechnology of great economic impact, as it maximizes the reproductive potential of genetically superior animals, resulting in greater reproductive efficiency. Despite advances in technology in IVP, the percentage of embryos that develop to the transfer stage is still inferior to those seen in vivo. Epigenetics is the regulation of gene expression without altering DNA sequence. Epigenetic processes, such as histone remodeling, control gene expression and are essential for proper embryo development. Specific histone modifications can repress or stimulate gene transcription. Epigenetic mechanisms are under intense environmental control, therefore in vitro culturing systems can impact the expression patterns of genes that support pre-implantation embryo development. Given the importance of IVP as a reproductive biotechnology, the role of epigenetic processes during embryo development, as well the important correlation between culture conditions and epigenetic patterns, the present study was designed to investigate the influence of different culture conditions on embryo development, through the use of different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (0% and 2,5%) and different oxygen tensions (O2) (5% and 20%) during in vitro culture, in epigenetic regulation, specifically in the histone remodeling H3K9me2 (repressive) and H3K4me2 (permissive) marks, in bovine embryos produced in vitro. Four treatments were designed and utilized during embryo culture: T1: embryos were cultured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) media with 0% FBS, under 5% O2 tension; T2: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 5% O2 tension; T3: embryos were cultured in SOF media with 0% FBS, under 20% O2 tension and T4: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 20% O2 tension. Cleavage and expanded blastocyst development rates were evaluated, as ... / Mestre

Introdução: Apesar do grande avanço das técnicas de reprodução humana na área da infertilidade a avaliação do homem ainda carece de maiores conhecimentos. Estima-se que a prevalência de infertilidade seja de 10 a 15% de casais em idade reprodutiva (20-40 anos), com cerca de metade dos casos com algum grau de problema de ordem masculina. Até o momento a avaliação do homem quanto à fertilidade é, em grande parte, restrita a avaliação das características do sêmen. No entanto, a avaliação seminal não consegue determinar de maneira clara e eficaz a fertilidade masculina. Entretanto até agora nenhum autor havia correlacionado os parâmetros seminais com o escore embrionário (GES) que avalia todo o desenvolvimento embrionário. Nosso estudo avaliou a relação entre os parâmetros seminais (motilidade, motilidade progressiva e concentração) como fator prognóstico para o desenvolvimento embrionário em mulheres submetidas à fertilização in vitro (FIV convencional ou ICSI) com estimulação ovariana. Todos os casais foram avaliados no Centro De Reprodução Humana insemine. Material e métodos: Foi realizado um estudo prospectivo (coorte) no Período de janeiro de 2009 até agosto de 2010 com casais inférteis (n=290) que foram submetidos ao primeiro ciclo de Reprodução Assistida. Realizada estimulação ovariana, punção para retirada dos oócitos, FIV convencional ou ICSI conforme o caso, cultura dos embriões. Avaliado os parâmetros seminais (concentração, motilidade e motilidade A+B) pós preparo do sêmen. Avaliado o desenvolvimento embrionário com uso de escore embrionário (GES) proposto por Fisch 2001. Foram avaliados clivagem precoce, escore embrionário total e escore embrionário médio. Resultados: Foi demonstrado, após avaliar 290 casais, que sessenta e oito por cento realizaram FIV convencional e 32% ICSI. A média de oócitos recuperados após punção folicular foi de 6,2±4,6 com taxa de fertilização de 55% e clivagem de 97%. Analisando os parâmetros seminais após preparo e sua associação com clivagem precoce houve correlação com motilidade (P=0,006) e concentração (P=0,002). Entretanto não houve correlação com porcentagem de espermatozóides classificados como A+B (P=0,075). Em relação aos parâmetros seminais e clivagem precoce no grupo da FIV convencional existe correlação para motilidade (P=0,028) e concentração (P=0,001) e no grupo da ICSI não foi significativo para nenhum parâmetro. Com relação aos parâmetros seminais e escore embrionário médio, no grupo da FIV convencional existe correlação com a motilidade (P=0,0001) e motilidade A+B (P=0,0001), no grupo da ICSI apenas com a concentração (P=0,022). Conclusão: Existe correlação dos parâmetros seminais com a clivagem precoce no grupo da FIV convencional e nenhuma correlação destes parâmetros no grupo da ICSI. Em relação ao escore embrionário médio apresenta correlações tanto na FIV convencional quanto na ICSI.

Resumo não disponível