A maturação in vitro de oócitos (MIV) é uma importante tecnologia reprodutiva a qual gera oócitos maduros capazes de suportar o desenvolvimento embrionário pré-implantacional e sua completa evolução à termo. Muitos fatores levam ao processo de maturação do oócito, e o AMH (hormônio anti-Mülleriano) tem demonstrado possuir um importante efeito nesta etapa. Neste trabalho nós demonstramos a influência da suplementação de AMH na maturação de complexos cumulus-oócito (COCs). Nossos resultados demonstram que não houve efeito na produção de embriões para COCS grau I. Entretanto, pudemos encontrar diferenças significativas entre os COCs graus II e III maturados na presença de 150ng/ml de AMH. Aqui também demonstramos que não houve diferença significativa na expressão relativa de mRNA para os genes AMHRII e FSHR no oócito, e na expressão relativa de mRNA para os genes AMH, AMHRII e FSHR nas células da granulosa. Nossos resultados corroboram com as importantes funções do AMH na produção de embriões, sugerem que a suplementação do meio de maturação de oócitos com AMH pode ajudar a melhorar a produção de blastocistos. / The in vitro oocyte maturation (MIV) is an important reproductive technology that generates mature oocytes able to support the preimplantation embryonic development and their fully evolution to term. Many factors lead to oocyte maturation process, and the AMH (AntiMüllerian hormone) have demonstrated important effects in the oocyte development. Here, we report the influence of AMH supplementation in the cumulus-oocyte complex (COCs) maturation. We found that AMH had no effect on embryo production of COCs grade I. On the other hand, significant differences between the COCs grade II and COCs grade III matured in AMH 150ng/ml were verified. We have also demonstrated that there were no significant difference in mRNA expression of the genes AMHRII and FSHR in the oocyte, and in mRNA of the genes AMH, AMHRII and FSHR in the granulosa cells. Taken together, the results corroborate the important roles for AMH on embryo production, and suggest that AMH supplementation could achieve successful outcome in the production of blastocysts.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LIDIA REGINA ZANATTA DE OLIVEIRA.pdf: 1693227 bytes, checksum: f00e9b58928447010ab2a434092d210d (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / This study had as objective to analyze the alimentary habits, the body mass index (BMI) and some varied of the women's treatment submitted to in vitro fertilization by the technique of ICSI and to stand out the presence of actions of promotion of alimentary habits in Agenda 21 of Goiânia. The present idea is reinforced in the Agenda 21 that the health promotion and the nutritional surveillance are of extreme importance for the quality of life of the population in Goiânia. The research was accomplished in a clinic specialized in human reproduction located in Goiânia in the period of September of 2006 to April of 2007. The alimentary ingestion was evaluated by the reminding of 24 hours through which was possible to observe the macro and micronutrients ingestion, as well as the presence of the fat acid, glutamic acid and caffeine. BMI was calculated through the measures of height and weight. The program DietPRO was used to convert homemade amounts in measures in ingestion levels. The variables of the treatment were obtained from the medical handbook after the procedures. For the statistical analysis of the data the program was used MATLAB version 6.0, the statistical method used to correlate the nutritional variable with the one of the treatment the coefficient of Pearson s correlation. The correlations were classified as: positive or negative light, acceptable, moderate, substantial and almost perfect. The results showed that BMI, proteins, caffeine, copper, vitamin E, zinc and carbohydrates had a moderate correlation with the gonadotropins levels used in the induction of the ovulation. BMI, copper, vitamin E and zinc had moderate correlation with the days of induction of the ovulation. The number of follicles, observed in the last analysis had a moderate correlation with the potassium and with the folic acid. The folic acid still presented a correlation moderated with the oocyte number, identified after the collection. The correlation among the nutrients and the oocyte number classified as immature (Vg and M1) it was mainly negative except for the sodium, manganese and of the proteins, however these correlations just presented acceptable values. The mature oocyte (M2) had a moderate correlation with the calcium and folic acid. As the results found in this research are not conclusive, is suggested some study to confirm the relationship between human reproduction and alimentary habits. / Este estudo teve como objetivo analisar os hábitos alimentares, o índice de massa corporal (IMC) e algumas variáveis do tratamento de mulheres submetidas à fertilização in vitro pela técnica de ICSI e ressaltar a presença de ações de promoção de hábitos alimentares na agenda 21 de Goiânia. Reforça-se a idéia presente na agenda 21 de que a promoção da saúde e a vigilância nutricional é de extrema importância para a qualidade de vida da população de Goiânia. A pesquisa foi realizada em uma clínica especializada em reprodução humana assistida localizada em Goiânia no período de Setembro de 2006 a Abril de 2007. Avaliou-se a ingestão alimentar através de um recordatório de 24 horas onde se pode observar a ingestão de macro e micronutrientes, bem como a presença dos ácidos graxos, ácido glutâmico e cafeína. O IMC pode ser calculado através da aferição das medidas antropométricas (altura e peso). O programa DietPRO foi utilizado para converter quantidades caseiras em medidas em níveis de ingestão. As variáveis do tratamento foram obtidas diretamente do prontuário das pacientes no final do tratamento. Para a análise estatística dos dados foi utilizado o programa MATLAB versão 6.0, sendo o método estatístico empregado para correlacionar as variáveis nutricionais com as do tratamento o coeficiente de correlação de Pearson com nível de significância de 5%. As correlações foram classificadas como positivas ou negativas leve, aceitável, moderada, substancial e quase perfeita. Os resultados mostraram que o IMC, proteínas, cafeína, cobre, vitamina E, zinco e carboidratos tem uma correlação moderada com os níveis de gonadotrofinas utilizados na indução da ovulação. O IMC, cobre, vitamina E e zinco apresentaram correlação moderada com os dias de indução da ovulação. O número de folículos, observados na última análise ecográfica, apresentou uma correlação moderada com o potássio e com o ácido fólico. O ácido fólico ainda apresentou uma correlação moderada com o número de oócitos identificados após a coleta. A correlação entre os nutrientes e o número de oócitos classificados como imaturos (Vg e M1) foi predominantemente negativa com exceção do sódio, manganês e das proteínas, no entanto estas correlações apresentaram apenas valores aceitáveis. Os oócitos maduros (M2) apresentaram uma correlação moderada com o cálcio e com o ácido fólico. Este trabalho abre caminho para novas pesquisas na área da reprodução humana assistida que aprofundam a importância dos hábitos alimentares de pacientes que irão se submeter ao tratamento de fertilização in vitro.

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Carlos Roberto Teixeira / Banca: Lílian Rigatto Martins / Banca: Nei Moreira / Resumo: O acetato de deslorelina promove uma contracepção de longa duração segura e eficaz, porém a reversibilidade espontânea é progressiva e assincrônica. O objetivo geral foi avaliar os efeitos do acetato de deslorelina sobre a produção in vivo e in vitro de embriões de gatas domésticas. Para tanto foram realizados 2 experimentos. Experimento 1: Objetivou-se avaliar a taxa de produção de embriões in vitro em gatas tratadas com acetato de deslorelina. Foram utilizadas 21 fêmeas (Tratado n=11 e Controle n=10). Onze gatas receberam um implante de deslorelina (4,7mg/animal) e o tratamento durou 6 meses. Após o tratamento, todas as fêmeas (Tratado e Controle) foram submetidas à OSH para que seus ovários fossem incluídos em rotinas de produção de embriões in vitro (PIV). A taxa de recuperação de COC foi submetida ao teste t de Student. As taxas de clivagem e blastocisto foram expressas em porcentagem e submetidas ao teste exato de Fisher. Todas as análises foram realizadas no programa GraphPad v5.0, P<0.05. Uma gata apresentou galactorréia e foi retirada do grupo experimental. Foram obtidos 184 COC grau I, a taxa de clivagem foi em média de 55,97% (total de 103 mórulas) e de blastocisto de 33,99% (total de 33 blastocistos) no grupo Controle. Já no grupo Tratado foram obtidos 83 COC grau I e a taxa de clivagem foi em média 60,24% (total de 50 mórulas) e de blastocisto foi de 36% (total de 18 blastocistos). Só houve diferença estatística entre os grupos na taxa de recuperação de COC grau I. A taxa de recuperação de COC foi menor em gatas tratadas, porém a PIV apresentou taxas similares à de fêmeas não tratadas. Devem-se considerar as variações individuais no grupo tratado. Experimento 2: Objetivou-se avaliar a produção de embriões in vivo, a taxa de concepção, bem como a presença de receptores de estrógeno e progesterona no útero, e receptores de LH e FSH em ovários de gatas submetidas ao tratamento com... / Abstract: Deslorelin acetate promotes a long, safe and efficient contraception; however reversibility is consider progressive and asynchronous. We aim to evaluate the effects of deslorelin acetate on in vitro and in vivo embryo production in domestic cats. For that 2 experiments were performed. Experiment 1: The objective was to investigate the effect of contraceptive treatment with deslorelin acetate in in vitro embryo production and oocyte recovery in domestic queens. Twenty one queens (Treated n=11 and Control n=10) and one tom were used. Eleven queens were treated with deslorelin acetate (4.7mg/animal) during 6 months. Thereafter all females (treated and control) were spayed and the ovaries were included in in vitro embryo production routines (PIV). Rate of COC recovery was submitted to t test. Cleavage and blastocyst rate were expressed in percentage and submitted to Fisher's exact test. All analyses were performed in GraphPad Pisma v5.0 program, P < 0.05. One female developed galactorrhoea and was removed from experimental group. In Control group we recovered 18.4±3.21 of COC I, cleavage rate was 55.97% and blastocyst rate was 33.99%.In Treated group we recovered 8.3±1.15 of COC I, cleavage rate was 60.24% and blastocyst rate was 36%. Statistical difference was only observed in COC recovery, were treated cats had fewer than control group. Although we didn't found differences on embryo production, individual variation must be considered. Experiment 2: We aimed to evaluate in vivo embryo production, trough pregnancies, and also identify estrogen (ER-α) and progesterone (PgR) receptors in uterus and FSH (FSH-R) and LH (LH-R) receptors in ovaries from queen treated with deslorelin acetate. We used 25 queens and one tom, 15 queens were treated with deslorelin acetate (4.7mg/animal) for 3 months. After that, all implants were removed and estrous and ovulation was induced. After 24hs five queens were maintained with one tom and mating was ... / Doutor

Com o aumento do número de casais com infertilidade e com o surgimento de novas constelações familiares, como no caso de relações homoafetivas, é crescente a demanda por técnicas de reprodução assistida. Diante disso, faz-se extremamente necessária a ampliação do conhecimento acerca da potencial associação entre os transtornos psiquiátricos e a infertilidade, bem como do possível aumento de prevalência de transtornos dessa natureza nesta população. Embora muitos estudos sugiram um aumento de sintomas depressivos e de ansiedade em pessoas que sofrem com a infertilidade, poucos avaliam o impacto emocional relacionado a esse problema de forma mais objetiva. Dessa forma, este estudo se propõe a descrever a população de mulheres que procuram tratamento com técnicas de reprodução assistida, averiguando a presença prévia de patologias psiquiátricas e o uso de psicotrópicos, bem como identificando a presença de transtornos ansiosos e depressivos, ao longo do tratamento, por meio de entrevista psiquiátrica estruturada – Mini International Neuropsychiatric Interview (MINI) – e aplicação de escalas validadas. Do total de 90 pacientes entrevistadas, 40% tiveram um ou mais diagnósticos psiquiátricos detectados. Transtornos do humor estavam presentes em 21% das pacientes (10% depressão maior, 7,7% distimia e 3,3% transtorno do humor bipolar). O diagnóstico mais comum foi agorafobia (13,6%). Transtornos de ansiedade também foram altamente prevalentes, chegando a atingir 30% das pacientes. Notou-se, ainda, que mulheres com transtornos psiquiátricos reportaram mais história psiquiátrica prévia e tiveram maiores taxas de uso de medicamentos psicoativos (P<0,005). No momento do estudo, 13,3% estavam usando medicamentos psiquiátricos, 44%, antidepressivos inibidores seletivos da recaptação de serotonina, e 31%, benzodiazepínicos. Tais dados indicam que mulheres com infertilidade em busca por reprodução assistida estão em alto risco de síndromes depressivas e ansiosas. Elas têm altas taxas de história psiquiátrica prévia, bem como índices altos de uso de medicamentos psicotrópicos, muito embora essas questões habitualmente não sejam abordadas em clínicas de tratamento para infertilidade. / As the number of couples suffering from infertility rises and new family constelations emerge, such as homoafective relationships, there is an on growing demand for assisted reproductive techniques. Greater knowledge regarding the potential role of psychiatric aspects in the development of infertility and determination of the prevalence of psychiatric disorders in this population are extremely needed. Many studies suggest a higher prevalence of depressive symptons and anxiety, but only a handful evaluate the emocional impact of infertility more objectively. This study aims to describe the population of infertile women that seek assisted reproduction technology treatment, looking for the presence of prior psychiatric disorders and for the use of psychotropic medication, and mainly evaluating depressive and anxiety disorder during treatment through structured psychiatric interview and application validaded scales. All consecutive infertile women visiting the assisted reproductive technique clinic seeking to iniciate treatment that agreed to participate were included. Patients were submitted to an structured interview, the Mini- International Neuropsychiatric Interview (M.I.N.I.). The fertility history was colleted from subjects´ medical reports after all subjects had participated in the study and demografic data were collected by researchers during the interview along with the psychiatric examination. Of a total of 90 patients, 40% had one or more a psychiatric disorder. Mood disorders were detected in 21% of the patients (10% major depression, 7,7% dystimia, 3,3% bipolar disorder). The most commom diagnosis was agoraphobia (13,6%). Anxiety disorders as a group was also highly prevalent, reaching 30% of the patients. Women with psychiatric disorders were more likely to have reported psychiatric history and to be on psychiatric medication (P<0.005). A total of 13,3% were on current use of psychiatric medication, 44% taking SSRIS and 31% taken benzodiazepines. Women suffering from infertility seeking ART treatment are at high risk for depression syndromes and anxiety disorders. They also had high prevalence of previous psychiatric history and high prevalence of psychiatric medication use, nonetheless these issues are frequently not addressed in fertility clinics.

Uma das maiores dificuldades das terapias de reprodução assistida é a seleção de células germinativas de boa qualidade para posterior fertilização e implantação. Atualmente, a seleção de oócitos se dá basicamente por avaliação morfológica, que não reflete satisfatoriamente a competência oocitária. Assim, a busca por bioindicadores da qualidade oocitária é necessária. O cumulus oophorus forma um conjunto de células somáticas que circundam o oócito no folículo antral,mantendo uma relação íntima com a célula germinativa, com comunicação direta via junções tipo GAP. As células do cumulus oophorus são descartadas após técnicas de fertilização in vitro, o que as torna um material de fácil acesso, livre de conflitos éticos. Uma série de metodologias de análise das células do cumulus foram propostas para identificação de anormalidades no oócito. Porém, nenhuma delas é rotineiramente utilizada na clínica. Os processos celulares das células do cumulus refletem as condições do microambiente folicular, e podem, assim, trazer evidências das condições oocitárias. Nosso grupo analisou as células do cumulus primeiramente por meio de abordagens de bioinformática, que revelaram processos celulares relacionados ao desenvolvimento de embriões até o estágio de blastocisto. Com base nestes resultados, análises de parâmetros bioquímicos e expressão gênica das células do cumulus foram realizadas e permitiram a identificação de possíveis biomarcadores da qualidade do oócito que levam em consideração as características clínicas das pacientes. Estas análises indicaram que expressão do gene PTGS2 e a atividade da enzima Glutationa-S-Transferase como indicadores da formação de blastocistos em pacientes com diferentes variáveis clínicas (backgrounds) analisados. Se confirmados, estes parâmetros poderão ser utilizados como biomarcadores no ambiente clínico, elevando as taxas de sucesso em técnicas de reprodução assistida. / One of the great challenges in assisted reproduction techniques is the selection of appropriate germ cells for fertilization and implantation. Nowadays, oocyte selection occurs basically through morphological evaluation, which does not reflect satisfactorily the oocyte competence. Therefore, the search for bioindicators of oocyte quality is necessary. The cumulus oophorus forms a set of somatic cells that surround the oocyte in the antral follicle, participating in the processes of oocyte maturation and folliculogenesis. These cells maintain an intimate relationship with the germ cell, with direct communication via GAP junctions. Cumulus oophorus cells are discarded in in vitro fertilization techniques, which makes them an easy-access material that can be collected in a free-of-ethicalissues way. A series of cumulus cell analysis methodologies were proposed to identify abnormalities in the oocyte. However, none of them is routinely used in clinical environment. The cellular processes of cumulus cells reflect the conditions of the follicular microenvironment, and may thus bring evidences of oocyte conditions. Our group analyzed cumulus cells in search of predictors of oocyte quality primarily through bioinformatics approaches, which revealed cellular processes related to the development of embryos up to the blastocyst stage. Based on these results, analyzes of biochemical parameters and gene expression of cumulus cells were performed and allowed the identification of possible biomarkers of oocyte quality that takes into consideration patients clinical variables. These analysis indicated PTGS2 expression and Glutathione-S-Transferase activity as indicators of blastocyst formation in all patient profiles (backgrounds) analyzed. If confirmed, these parameters may be used as biomarkers in clinical environment, improving assisted reproduction success rates.

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: César Roberto Esper / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos da substituição do SFB e do BSA pela OVA na PIV, por estudos nas etapas de maturação, fecundação e cultivo in vitro. Observamos que durante a etapa de maturação, a concentração 4mg/mL de OVA não afetou a maturação nuclear (82,66%) e a migração de grânulos corticais (GC) para a periferia dos oócitos (54,21%), sendo, portanto, utilizada nos experimentos subseqüentes. Foi observado que as fontes protéicas SFB, BSA, OVA, e BSA com OVA (BO) não afetaram (p>0,05) as taxas de maturação nuclear e migração de GC. Para a sigla dos tratamentos, as fontes protéicas foram identificadas pelas iniciais (SFB=S, BSA=B e OVA=O). Cada tratamento foi abreviado com a primeira letra referente à etapa de maturação, a segunda à fecundação, e a terceira ao cultivo. Quanto às taxas de formação de pronúcleo (PN) observamos que o grupo SO (76,67% de 2 PN) foi semelhante (p>0,05) ao grupo controle (82,95% de 2 PN). A etapa de CIV permitiu avaliar que os diferentes tratamentos foram semelhantes (p>0,05) quanto à taxa de clivagem. Entretanto, quanto à taxa de produção de blastocistos, o grupo OOO (26,0%) foi semelhante (p>0.05) aos grupos SOS (33,8%), BBB (35,8%), BOB (32%), e OBO (33%), mas foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (45%) e SBS (42,8%). Quanto à taxa de eclosão, o grupo OOO (20,4%), foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (46,2%), SBS (43,4%), SOS (38,4%), BBB (41,6%), e semelhante aos grupos BOB (28,2%) e OBO (25,4%). Concluímos que é possível produzir embriões bovinos na ausência de SFB e/ou BSA, com a fonte protéica OVA, embora tanto a quantidade como a qualidade dos blastocistos tenham se apresentado inferiores em relação àqueles produzidos na presença de SFB e/ou BSA. / Abstract: The present work aimed to evaluate the effects of FCS and BSA substitution for OVA on in vitro production of bovine embryos, studying in vitro maturation, fertilization, and development. For maturation, we observed that the concentration 4mg/mL of OVA didn't affect nuclear maturation (82.66%), and cortical granule (CG) migration (54.21%), which indicated its use in the subsequent experiments. It was observed that the protein sources FBS, BSA, OVA and BO didn't significantly affect (p>0.05) the rates of nuclear maturation and CG migration. For evaluation of pronucleus (PN) formation rates, we observed that the SO group (the first letter means the protein source for the maturation stage, the second for the fertilization, and the third for the development), (76.67% of 2 PN) was similar (p>0.05) to the control group (82.95% of 2 PN). However, two pronucleus formation rates in BB (56.98%), BO (39.02%), OB (37.36%) and OO (39.24%) were different (p<0.05) from the control group (82.95% of 2 PN). Different treatments (CONT, SBS, SOS, BBB, BOB, OOO, OBO) were similar (p>0.05) in cleavage rates. However, regarding to blastocyst production rates, the OOO group (26.0%) was similar (p>0.05) to the SOS group (33.8%), BBB (35.8%), BOB (32%), and OBO (33%) groups, but it was inferior (p <0.05) compared to the CONT (45%) and SBS (42.8%) groups. In relation to blastocyst hatching rate, the OOO group (20.4%) was inferior (p<0.05) when compared to the CONT (46.2%), SBS (43.4%), SOS (38.4%), BBB (41.6%) groups, and it was to BOB (28.2%) and OBO (25.4%) groups. We concluded that it’s possible to produce bovine embryos in the absence of FBS and/or BSA using ovalbumin (OVA) as the protein source, even though decreased quantity and quality rates of bovine blastocysts were observed. / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cesar Roberto Esper / Banca: Marcos Brandão Dias Ferreira / Resumo: As biotecnologias da reprodução são utilizadas como uma alternativa para melhorar a eficiência reprodutiva e acelerar a produção de animais de alto valor zootécnico. Este estudo teve por objetivo avaliar a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças inseminadas com sêmen sexado e convencional (Experimento 1) e a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças submetidas a transferência de embriões produzidos in vivo (TE) e in vitro (PIVE) com sêmen sexado (Experimento 2). No experimento 1, sêmen sexado e convencional foram utilizados na inseminação de vacas (n=50) e novilhas (n=50) após 18-24 horas de observação de cio; no experimento 2 embriões produzidos in vitro (n=50) e in vivo (n=40) foram transferidos para vacas (n=45) e novilhas (n=45). Animais inseminados com sêmen sexado apresentaram taxa de concepção de 44% (11/25) para vacas e 52% (13/25) para novilhas e com sêmen convencional, a taxa de concepção foi de 72% (18/25) para vacas e 68% (17/25) para novilhas. A taxa de concepção obtida pela técnica de produção in vitro de embriões foi de 24% (6/25) para vacas e 28% (7/25) para novilhas e para os embriões produzidos in vivo foi de 45% (9/20) tanto para vacas como para novilhas. A técnica de IA com sêmen sexado apresentou diferença estatística (p<0,05) quando comparada com sêmen convencional, porém a categoria animal não teve diferença estatística (p>0,05) (Experimento 1). Não foi observada diferença estatística (p>0,05) entre a as técnicas de produção in vivo e in vitro de embriões nem entre a categoria animal. Os resultados indicam que o intervalo entre a observação de cio e inseminação de 18-24 horas mostrou-se eficaz na concepção tanto de vacas como de novilhas utilizando sêmen sexado ou convencional, no entanto para se aproximar aos resultados obtidos pelo sêmen convencional há necessidade de mais pesquisas para melhorar a taxa de concepção com sêmen sexado ... / Abstract: The reproduction biotechnologies are used as an alternative to improve reproductive efficiency and accelerate the production of animals of high performance zootechnical. This study aimed to evaluate the conception rate of heifers and cows crossbred inseminated with sexed semen and conventional (Experiment 1) and conception rate of heifers and cows crossbred receiving the transfer of embryos produced in vivo (TE) and in vitro (PIVE) with sexed semen (Experiment 2). In experiment 1, sexed and conventional semen were used for the insemination of cows (n = 50) and heifers (n = 50) after 18-24 hours of estrous observation; in experiment 2 embryos produced in vivo (n = 40) and in vitro (n = 50) were transferred to cows (n = 45) and heifers (n = 45). Animals inseminated with sexed semen showed conception rate from 44% (11/25) for cows and 52% (13/25) for heifers and with conventional semen, the conception rate was 72% (18/25) for cows and 68% (17/25) for heifers. The conception rate obtained by the technique of in vitro production of embryos was 24% (6/25) for cows and 28% (7/25) for heifers and for embryos produced in vivo was 45% (9/20) both for cows as for heifers. The technique of AI with sexed semen presented statistical difference (p <0.05) when compared with conventional semen, but animal category was not statistically different (p> 0.05) (Experiment 1). No statistical difference (p> 0.05) between the production techniques in vivo and in vitro embryo or between animal category was observed. The results indicate that the interval between estrous observation and insemination 18-24 hours was effective on conception of both cows and heifers using conventional and sexed sêmen, however to approximate of the results obtained by the conventional semen is no need to most research to improve conception rates with sexed semen (Experiment 1). Conception rates with embryos PIVE in heifers and cows recipients were lower than those produced in ... / Mestre

Made available in DSpace on 2011-03-23T21:19:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Item created via OAI harvest from source: http://www.bdtd.ufpa.br/tde_oai/oai2.php on 2011-03-23T21:19:18Z (GMT). Item's OAI Record identifier: oai:bdtd.ufpa.br:111 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this experiment was evaluate the possibility of the use of zebu cattle females with raised genetic quality presenting problems of fertility, acquired after a program of conventional transference of embryos, as oocyte donors in a program of Ovum Pick Up and In Vitro embryo production. Sixteen females of Nelore breed (Bos taurus indicus) with average age of 11 years and 7 months, had been submitted to the same conditions of enviroment, feeding and management. These animals were removed of the program of embryo transfer due fertility problems (ovarian cysts, genital infections and some cases of repeat breedings). The animals had been divided in two groups in agreement the type of pathology: Group I (n=08) formed by animals that had presented ovarians patologies (cysts) and GROUP II (n=08) formed by animals with extra-ovarians patologies, both groups had been submitted to aspiration follicular (OPU) using two types of needles (21G ; 19G ) and pressures (55 e 70mmHg). The two groups were divided in four treatments (T1 =55/21G; T2 = 55/19G; T3 = 70/21G e T4 = 70/19G) and after oocites collection they were submitted to IVP. In this work, 149 aspirations were realised and 879 oocytes were collected (5,9 4,88) GRADE I = 16%; GRADE II = 43%; GRADE III = 21% e GRADE IV = 20%. The averages of oocytes collected in Group I were (T1 = 7,06 5,10; T2= 7,00 3,64; T3 = 10,60 6,51 and T4 = 2,78 2,59) and the second group (GROUP II) (T1 = 4,90 4,47; T2= 2,93 3,05; T3 = 6,11 4,11 and T4 = 2,70 2,00). For the averages of viable oocytes, the results had been the following ones (T1 = 4,35 3,01; T2 = 4,88 2,96; T3 = 6,87 3,91 and T4 = 1,89 1,90) for GROUP I and (T1 = 2,70 2,22; T2 = 1,92 1,98; T3 = 3,47 2,27 and T4 = 2,00 1,05) for GROUP II. In this experiment, 538 oocytes had been taken to the IVP, 161 (32,85%) of these oocytes had clived and 65 (13,26%) had resulted in Morula or Blastocysts. The statistcs analysis of the results did not demonstrate significant difference in the oocyte number of the diferent groups, caused for the suction pressure. It was observed that the type of needle is related of pressure of the vacuum bomb, the best results were finding with T3 treatment, moreover It can be observed through these findings that the best averages of oocytes collected had been gotten in the group of animals that had presented ovarians cysts (GROUP I), We concluded in this experiment that the use of OPU/IVF technique is an great option in the prolongation of the reproductive life in problems zebu cattle. / Este experimento teve como objetivo avaliar a possibilidade da utilização de fêmeas zebuínas de elevada qualidade genética, com problemas de fertilidade, adquiridos após um programa de transferência convencional de embriões, como doadoras de ovócitos em um programa de Ovum Pick Up e Produção In Vitro de embriões. Fêmeas da raça Nelore (n=16) (Bos taurus indicus), com idade média de 11 anos e 7 meses, foram submetidas às mesmas condições de ambiente, alimentação e manejo. Estes animais foram retirados do programa de T.E. por apresentarem problemas de fertilidade (cistos ovarianos, infecções genitais, mucometra e alguns casos de repetições de cio sem causa aparente). Os animais foram divididos em dois grupos conforme o tipo de patologia: GRUPO I (n=08) composto por animais que apresentaram patologias ovarianas (cistos) e GRUPO II (n=08) formado por animais com patologias extra ovarianas, ambos os grupos foram submetidos à aspiração folicular (OPU) utilizando dois tipos de agulhas (21G ; 19G ) e pressões (55 e 70mmHg) divididos em quatro tratamentos (T1 = 55/21G; T2 = 55/19G; T3 = 70/21G e T4 = 70/19G), posteriormente os ovócitos submeteramse a PIV. Foram realizadas 149 aspirações e colhidos 879 ovócitos (5,9 4,88) onde GRAU I = 16%; GRAU II = 43%; GRAU III = 21% e GRAU IV = 20%. As médias de ovócitos colhidos no GRUPO I foram (T1 = 7,06 5,10; T2= 7,00 3,64; T3 = 10,60 6,51 e T4 = 2,78 2,59) para os animais pertencentes ao GRUPO II obteve-se (T1= 4,90 4,47; T2= 2,93 3,05; T3 = 6,11 4,11 e T4 = 2,70 2,00). Para as médiasde ovócitos viáveis os resultados foram os seguintes: (T1 = 4,35 3,01; T2 = 4,88 2,96; T3 = 6,87 3,91 e T4 = 1,89 1,90) para o GRUPO I e (T1 = 2,70 2,22; T2 =1,92 1,98; T3 = 3,47 2,27 e T4 = 2,00 1,05) para o GRUPO II. Neste experimento foram levados à PIV 538 ovócitos dos quais 161 (32,85%) clivaram e 65 (13,26%) resultaram em Mórula ou Blastocistos. A análise estatística dos resultados não demonstrou diferença significativa entre os grupos quanto a colheita ovocitária. Quando analisada somente a pressão de sucção, foi observado que o tipo de agulha está diretamente relacionado a pressão da bomba de vácuo. Os melhores resultados foram obtidos com o tratamento T3 = 70/21G, além disso pode-se observar que as melhores médias de ovócitos colhidos foram as obtidas no grupo de animais que apresentaram cistos ovarianos (GRUPO I). Desta forma, concluímos neste experimento que a utilização da técnica de OPU/PIV é uma alternativa de grande utilidade no prolongamento da vida reprodutiva de animais zebuínos com alterações na fertilidade.

Orientador: Anaglória Pontes / Coorientador: Mário Cavagna / Banca: Claudia Guilhermino Petersen Rodrigues da Costa / Banca: Tamara Beres Lederer Goldberg / Resumo: Para saber quais casais de fato poderiam se beneficiar com a IIU, desenhamos esse estudo com o objetivo de avaliar se a motilidade espermática pós-capacitação em gradiente descontínuo de diferentes densidades e incubação em CO2 em indivíduos normospérmicos é capaz de predizer gravidez. Participaram do estudo 175 casais que foram submetidos à IIU. Os critérios de inclusão foram mulheres com idade inferior ou igual a 35 anos; com trompas sem alterações; endometriose Grau I e II; infertilidade sem causa aparente ou inexplicada; disfunção ovulatória não hiperandrogênica, e homens que apresentaram parâmetros seminais normais. Todas as pacientes foram submetidas à estimulação ovariana com Citrato de Clomifeno na dose de 50mg/dia, do 3° ao 7° dia do ciclo menstrual, associado à Gonadrotofina menopausal humana ou Hormônio Folículo Estimulante recombinante (FSH-r) no 3°, 5° e 7° dias do ciclo. O desenvolvimento folicular foi acompanhado pela ultrassonografia transvaginal e, quando um ou até três folículos medindo entre 18 e 20mm foram observados, foi administrado hCG ou hCG-r 250mg, e a IIU foi realizada 36-40h após hCG. Os parâmetros seminais foram analisados e classificados segundo os critérios da OMS de 2010. A capacitação espermática foi realizada utilizando a técnica de gradiente descontínuo de diferentes densidades. Uma alíquota de 20μl foi incubada por 24h a 37ºC em 5% de CO2. Após 24h de incubação, foi feita análise da motilidade total (progressão A+B) dos espermatozóides. Dos 175 casais, 52 obtiveram gravidez clínica e 123 não obtiveram êxito. A taxa de gravidez clínica foi de 29,7%. Houve também 4 abortos espontâneos (7,6%) e 1 gravidez múltipla (3,8%). Análises realizadas quanto a idade, duração e etiologia da infertilidade não mostraram diferenças estatísticas significantes entre os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To assess what couples actually could benefit from IUI, we designed this study to evaluate the sperm motility through discontinuous gradient of different densities and incubation in CO2 in normospermic individuals is able to predict pregnancy. A total of 175 couples underwent IUI and inclusion criteria were women with age 35 years or younger, with normal tube; endometriosis grades I-II; unexplained infertility; ovulatory dysfunction not hyperandrogenic and men with normal seminal parameters. All patients underwent ovarian stimulation used 50mg/day clomiphene citrate on days 3-7 of menstrual cycle, associated to human menopausal gonadotropin (hMG) or follicle stimulating hormone recombinant (FSH-r). The follicular development was monitored by transvaginal ultrasound. When one or two follicles measuring 18 and 20mm were observed, hCG or hCG-r 250mg was administered and IUI was performed 36-40h after hCG. Seminal parameters were analyzed and classified according to 2010 WHO criteria. Spermatic capacitation was performed using discontinuous concentration gradient. A 20μl aliquote was incubated for 24 hours at 37ºC in 5% CO2. The sperm concentration was adjusted to a total of 10x106 motile sperm per milliliter of medium. After 24h incubation, it was performed total motility analysis (A+B). Of the 175 couples, 52 achieved clinical pregnancies and 123 did not have success. Pregnancy rate per cycle was 29.7%, there were 4 spontaneous abortions (7.6%) and multiple pregnancies (3.8%). Analysis of age, infertility duration and causes of infertility did not show statistic significance between pregnant and nonpregnant groups, as to results of seminal volume, total sperm concentration, total motile sperm and morphology, except sperm motility (p<0.00001). The comparison of motility A+B after processed and 24h after... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Este trabalho foi conduzido com a finalidade de se verificar a influência da receptora e do embrião sobre o índice de prenhez (IP) e proporção de sexo. Um total de 431 embriões produzidos in vitro foram transferidos não cirurgicamente para o corno uterino de receptoras mestiças, previamente sincronizadas, de acordo com o desenvolvimento embrionário e grau de qualidade do embriâo. O primeiro exame de diagnóstico de prenhez (DP) foi realizado aos 26-28 dias da transferência e o segundo, aos 50-52 dias, quando foram também realizadas as avaliações das receptoras e a determinação do sexo dos fetos através da ultra-sonografia. O índice de prenhez foi de 38,0% (164/431) para o primeiro DP e 92,1% (151/164) das receptoras permaneceram prenhes aos 50-52 dias, evidenciando 7,9% (13/164) de perdas embrionárias e/ou fetais entre os exames. Maiores índices de prenhez (P<0,05) foram obtidos para embriões classificados como de grau 1 (86,5%) e desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto expandido (Bx; 40,1%). A avaliação das receptoras revelou maior ocorrência de corpos lúteos (CL) no ovário direito (65,1% vs. 34,9%), contudo, sem influenciar no IP, com 92,8% e 88,5% de prenhez, respectivamente, para CL no ovário direito e esquerdo. O tipo de CL (grau 1, 2 ou 3) afetou o IP, com o Cl de grau 1 (53,8%) produzindo mais animais prenhes (P<0,05) do que os demais. A presença de folículo em um ou ambos ovários, não influenciou (P>0,05) o IP, a despeito de sua ocorrência no lado direito (90,6%) ou esquerdo (92,0%). Mais (P<0,05) fetos macho (66,67%) do que fêmea (33,33%) foram obtidos a partir de embriões transferidos ao estágio de blastocisto inicial. Contudo, considerando os estágios de mórula, blastocisto inicial, blastocisto e blastocisto expandido, não houve diferença significativa (P>0,05) entre a proporção de fetos diagnosticados como sendo macho ou fêmea. Os diâmetros dos corpos lúteos, respectivamente, de 1,83, 1,88, 1,81 e 1,85cm, para receptoras com pelagem clara, malhada, marrom e preta, não influenciaram (P>0,05) os índices de prenhez, o mesmo acontecendo com relação ao tamanho do folículo, o qual variou de 0,50 a 1,6 cm de diâmetro. Baseado nos resultados obtidos, podemos concluir que tanto a receptora quanto o embrião influenciaram os índices de prenhez, sendo que o estágio do embrião também afetou a proporção de sexo dos fetos. / This study was carried out to verify the influence of the recipient and embryo on pregnancy rate (PR) and proportion of sex. A total of 431 in vitro- produced embryos were non-surgically transferred to the uterine horns from crossbred recipients previously synchronized, according to the embryo development stage and quality grade. The first exam for pregnancy was performed between 26th-28th day of embryo transfer following a second exam between 50th-52th day, when recipient evaluation and fetal sex determination were performed by ultrasonography. The pregnancy rate was 38,0% (164/431) for the first exam and 92,1% (151/164) of the recipients were kept pregnants on day 50-52, leading a 7,9% (12/164) of embryonic and/or fetal loss between the exams. Higher pregnancy rate (P<0,05) were obtained for embryo graded as 1 (86,5%) and embryo development at expanded blastocyst stage (EB;40,1%). The recipients evaluation showed more corpora lutea (CL) in the right ovary (65,1% vs.34,9%); however, it did not influence PR, with 92,8% and 88,5% of pregnancies, respectively, to CL in the right or left ovary. The type of CL affected the PR, with CL graded as 1 (53,8%) producing more pregnancies (P<0,05) than the others. The presence of a follicle in one or both ovaries did not influence (P>0,05) the PR, in despite of its presence in the right side (90,6%) or in the left side (92,0%). More (P< 0,05) male fetus (66,67%) than female ones (33,33%) were obtained from transferred embryos to the early blastocyst stage. However, considering the early blastocyst, blastocyst and expanded blastocyst stages, no difference (P>0,05) between the proportion of sex fetus was found. The CL diameters, respectively, from 1,83, 1,88, 1,81 and 1,85 cm for light-hair, threshed, brown and black recipients, did not affect (P>0,05) the PR, and the same happend in relation to the size of the follicle, which varied from 0,50 to 1,6 cm in diameter. These results suggest that the recipient and the embryo can influence the pregnancy rate and embryo development stage also affect the proportion of sex.