Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: Recentemente, tem-se dado atenção crescente aos efeitos deletérios dos radicais livres sobre os oócitos e embriões cultivados in vitro em mamíferos. No entanto, poucos estudos foram conduzidos sobre a ação desses agentes sobre a interação entre o espermatozóide-oócito durante a fertilização in vitro (FIV). Com o intuito de melhorar os resultados da produção in vitro de embriões bovinos, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da suplementação do meio de fecundação in vitro com antioxidantes cisteamina (Cist) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) sobre a capacitação espermática, fecundação, qualidade dos zigotos e competência no desenvolvimento embrionário. Os espermatozóides apresentaram o DNA íntegro quase na totalidade entre os diferentes tratamentos e durante o tempo no processo da FIV. / Abstract: Recently, deleterious effects of free radicals over oocytes and embryos cultivated in vitro in mammals have received increasing attention. Nonetheless, few studies were conducted about the action of those agents over the interaction between the sperm-oocyte during in vitro fertilization (IVF). Aimed at improving results of in vitro production of bovine embryos, this work had as objective to evaluate the effects of supplementation of the in vitro fertilization environment with antioxidants cisteamine (Cist) and 2-Mercaptoethanol (2-ME) over the spermatic capacitation, fertilization, quality of zygotes and competency in the embryonic development. Spermatozoas exhibited an integral DNA almost in the totality of the different treatments and along the time in the IVF process. / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Banca: Yeda Watanabe / Banca: Mayra D'Avila Assumpção / Banca: Fernanda Landim Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: Uma variedade de fatores extrinsecos como ions organicos, tampoes, composicao atmosferica gasosa, aminoacidos, fatores de crescimento, vitaminas, a acao de proteinas e macromoleculas desconhecidas podem afetar a viabilidade embrionaria. A implantacao de um sistema artificial de manutencao e desenvolvimento embrionario que simule um ambiente compativel com o fisiologico ainda e o objetivo de diversos grupos de pesquisa. O tamponamento dos meios e dependente da composicao gasosa da atmosfera de cultivo e o desenvolvimento embrionario, principalmente na fase de cultivo, sofre com as variacoes de pH verificadas durante as manipulacoes realizadas fora da estufa. Os experimentos desenvolvidos tiveram como objetivo avaliar diferentes sistemas de tamponamento para os meios de cultivo, comparando-os entre si quanto a capacidade de proporcionarem maior estabilidade de pH aos embrioes produzidos in vitro. As modificacoes propostas na composicao dos meios de cultivo foram avaliadas em duas atmosferas gasosas. Um total de 3200 ovocitos foram maturados em gotas de 100 ÊL cobertas com oleo mineral por periodo de 24 horas, agrupados em numero de 20 ovocitos por gota de meio TCM-199 com sais de Hankfs (Sigma Aldrich.), acrescido de 0,5 Êg/mL de FSH e 0,03 UI/mL de LH, 10% SFB, 20mM HEPES e antibioticos. Apos a fertilizacao, os possiveis zigotos foram submetidos ao cultivo e distribuidos de acordo com os seguintes tratamentos (T): T1: grupo controle com sistema tampao de bicarbonato de sodio do meio HTF Irvine Scientific. acrescido de aminoacidos; T2: meio SOFaa com sistema tampao composto de 25 mM de bicarbonato de sodio; T3: meio SOFaa modificado pela associacao do sistema tampao com 9 mM de bicarbonato de sodio e 4 mM de HEPES e T4: meio SOFaa modificado pela associacao do sistema tampao com 9 mM de bicarbonato de sodio e 12 mM de fosfato de sodio. Os embrioes dispostos nos (Resumo completo, clicar acesso eletronico abaixo) / Abstract: A variable interation of intrinsic and extrinsic factors such as organics ions, buffers, atmosphere composition, aminoacids, growth factors, vitamins, proteins and other unknown components may play an important role increasing the developmental potential of in vitro produced bovine embryos. The importance of the development of an artificial system to maintain embryo viability, similar and comparable with physiologic environment, has been the objective of several studies. Therefore, the majority of those studies that focus on culture media formulations were based on the physiology of in vivo produced embryo. However, the development of commercial protocols that ensure embryo quality after in vitro production (IVP) demands some adaptations while considering the differences between in vivo and in vitro produced embryos. Media buffering depends on the gaseous atmosphere utilized during culture and embryo development is sensitive to pH variation during culture, especially in manipulations in the bench. The aim of the present study was to investigate the effect of different buffer systems in the pH stability of culture medium and in the developmental capacity of IVP embryos. 3200 COCs were cultured for 24h, using 20 oocytes per 100£gL droplet in TCM 199 (with HanksLOEsalts: Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA), containing 10% fetal bovine serum, 20mM HEPES and antibiotics under sterile paraffin oil. After fertilization, the zygotes were cultivated according with treatments (T): T1- control group with NaHCO3 (sodium bicarbonate) in medium HTF Irvine ScientificãÊ; T2- group with 25 mM NaHCO3 in medium SOFaa; T3 LV group with 9mM NaHCO3 and 4 mM HEPES in medium SOFaa and T4 LV group with 9mM NaHCO3 and 12 mM sodium phosphate in medium SOFaa. The embryos were exposed in two ambient: atmosphere with 5% CO2 + 5% O2 + 90% N2 at 39ØX C ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Marcelo Rezende Luz / Banca: Maricy Apparício Ferreira / Resumo: Objetivou-se com este estudo comparar os efeitos da congelação lenta vs vitrificação sobre a viabilidade, ultraestrutura e expressão gênica de blastocistos caninos produzidos in vivo. A coleta dos embriões foi realizada por lavagem uterina 12 dias após a primeira IA. A congelação lenta foi realizada em máquina programável e a vitrificação pela técnica do cryotop. O cultivo in vitro (CIV) foi realizado por 24 horas, em meio SOFaa acrescido de 20% de soro fetal bovino. A reexpansão embrionária foi avaliada 24 horas após a CIV e a viabilidade embrionária avaliada com o uso das sondas Hoscht 33342 e Iodeto de propídeo. A extração e amplificação do RNA foram realizadas segundo recomendações do fabricante. Foram utilizados 70 blastocistos separados nos grupos Co, Co24, Cg, Cg24, Vi e Vi24. No experimento I foram utilizados 34 embriões. Não foi evidenciada reexpansão da blastocele após 24 horas de CIV nos grupos Cg24 e Vi24, já no grupo Co24, 100% dos embriões reexpandiram. Não foi verificada diferença na intensidade da fluorescência do Hoescht entre os grupos Co, Cg e Vi, em ambos os momentos de avaliação, 0 e 24 horas. Quando comparada a intensidade do iodeto de propídeo (IP) foi observada diferença significativa entre o grupo Co em relação aos grupos Cg e Vi, independente da metodologia de criopreservação. Observou-se uma redução na quantidade de gotas lipídicas após 24 horas de CIV comparando-se os grupos Co e Co24. No grupo Vi foram observadas mitocôndrias alongadas, integridade da membrana dos blastômeros e nuclear, reticulo endoplasmático liso, vesículas de digestão, microvilosidades, junções do tipo tight e desmossomas. No Experimento II, foram utilizados 36 embriões para a avaliação da expressão gênica. Todos os genes estudados, com excessão do LIF, foram expressos. Entretanto, não houve diferença na expressão dos genes BAX, Bcl2, AQP3, Na+/K+-ATPases α1, Na+/K+-ATPases β1 e ... / Abstract: The purpose of this study was to compare the effects of slow freezing versus vitrification in canine embryo produced in vitro: viability, ultra structure and gene expression. Embryos collection was performed using uterus flush technique 12 days after the first AI. For slow freezing protocol we used a programmed machine and vitrification was performed using cryotop. In vitro culture (IVC) was conducted for 24 hours using SOFaa added with 20% of fetal bovine serum. Embryo expansion was evaluated 24 hours after in vitro culture (IVC) and embryo viability was evaluated using Hoscht 33342 and iodine propidium (PI). Extraction and amplification of the RNA was performed according to manufacturer recommendations. We used 70 blastocysts divided in groups: Co, Co24, Cg24, Vi and Vi24. In experiment I 34 embryos were used. No blastocoele expansion was observed after 24 hr of IVC in groups Cg24 and Vi24, however 100% of embryos expanded in Co24. No difference was observed in Hoescht staining intensity between Co, Cg and Vi groups, which were observed at the 0 and 24 hr periods. The iodine propidium (PI) intensity in Co was different when compared to Cg and Vi, independent of the cryopreservation method used. A reduction in the quantity of lipid drops was observed after 24 hr of IVC when comparing groups Co and Co24. In group Vi, elongated mitochondria, membrane and nuclear integrity of blastomere, smooth endoplasmic reticulum, vesicle digestion, microvilli, tight junctions and types of desmosomes were observed. In experiment II, 36 dog embryos were used for gene expression evaluation. All studied genes, except LIF were expressed. However no difference between gene expression of BAX, Bcl2, AQP3, Na+/K+-ATPases α1, Na+/K+-ATPases β1 and LIFr were observed at 0 and 24h in all groups. We concluded that the vitrification technique was the best method to cryopreserve canine embryo when we observe ultrastructure. However, it was not possible ... / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:57:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423931-Texto+Completo-0.pdf: 848269 bytes, checksum: ca6876f67dfa1a1743de1e9a8d88abe1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Introduction: Even though vasectomy is intended to be a definitive contraceptive method, at least 6% of vasectomized men may request restoration of their fertility. Until a few years ago it was possible only with reversal surgery. Currently, different techniques are performed to recover sperm through aspiration from the epididymis or testis. Objectives: This study aimed to evaluate the profile of a group of vasectomized men who seek to achieve pregnancy with their partners through in vitro fertilization (IVF) with intracytoplasmic injection (ICSI) obtained from the epididymis or testis. Some rates and relations between parameters involved in the fertilization cycle were also assessed. Methods: This cross-sectional and retrospective study was conducted at Fertilitat Clinic in Porto Alegre, Brazil and consists of reviewing the medical records of patients treated between 1998 and 2009. The sample consisted of couples whose partners had 40 years old or more, vasectomized and who sought to achieve pregnancy by ICSI with sperm retrieved from the epididymis and / or testis, using PESA, TESA or TESE techniques. Results: The study shows that factor such as tobacco, alcohol, and diseases like diabetes mellitus, orchitis, hypertension presented no significant differences in relation to age of men. The time of vasectomy showed a significant difference in the groups studied (p <0. 001).Analysis of rates of cleavage, implantation, clinical pregnancy and fertilization showed no significant differences in the type of technique to obtain sperm, even when combined, p> 0. 05. Conclusion: The data analyzed showed that prior conditions related to chronic diseases and other lifestyle habits, did not influence the success of the cycles, nor did the time of vasectomy. In this study the type of technique did not ensure better outcomes when the PESA, TESA, TESE or associations were used, and the choice of technique is limited to clinical, surgical and prognostic criteria. / Introdução: Apesar de a vasectomia ser destinada a ser um método definitivo de contracepção, pelo menos 6% dos homens vasectomizados poderão requerer a restauração de sua fertilidade. Até alguns anos atrás isto era possível apenas com cirurgia de reversão. Atualmente são realizadas diferentes técnicas para recuperação de espermatozoides, através de aspiração no epidídimo ou testículo. Objetivos: O objetivo principal deste estudo foi avaliar o perfil de um grupo de homens vasectomizados que buscam a obtenção de gravidez de suas parceiras através de Fertilização in vitro (FIV) com injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI), obtidos a partir do epidídimo ou testículo. Também foram avaliadas algumas taxas e relações entre parâmetros relativos ao ciclo de fertilização. Métodos: Este estudo é de tipo transversal e retrospectivo e foi realizado na Clínica Fertilitat, em Porto Alegre, RS e consiste na revisão de prontuários de pacientes atendidos entre os anos de 1998 e 2009. A amostra foi constituída por casais cujos parceiros tinham 40 anos ou mais com vasectomia prévia, que procuraram a obtenção de gravidez pela técnica de ICSI a partir de espermatozoides obtidos do epidídimo e/ou testículo, por técnicas de PESA, TESA ou TESE. Resultados: O estudo mostrou que fatores como fumo, álcool, bem como doenças do tipo diabetes mellitus, orquite e hipertensão arterial sistêmica, não evidenciaram diferenças significativas em relação à faixa etária dos homens. O tempo de vasectomia mostrou diferença significativa nas faixas etárias estudadas (p< 0,001).A análise das taxas de clivagem embrionária, implantação, gravidez clínica e fertilização também não mostraram diferenças significativas em relação ao tipo de técnica de obtenção de espermatozoides, mesmo quando associadas (p> 0,05). Conclusões: Os dados mostraram que as condições prévias relacionadas a doenças crônicas e a alguns hábitos de vida, bem como o tempo de vasectomia não influenciou nos sucessos dos ciclos. Neste estudo, o tipo de técnica para obtenção de espermatozoides não mostrou que houve um melhor desfecho quando utilizada a técnica de PESA ou associações, ficando a escolha desta restrita a critérios clínicos, cirúrgicos e de prognóstico.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-28Bitstream added on 2014-06-13T20:27:13Z : No. of bitstreams: 1 araujo_lfp_me_botfm.pdf: 262924 bytes, checksum: f66d3aff3afec9b6471184734dc1a5cd (MD5) / Para saber quais casais de fato poderiam se beneficiar com a IIU, desenhamos esse estudo com o objetivo de avaliar se a motilidade espermática pós-capacitação em gradiente descontínuo de diferentes densidades e incubação em CO2 em indivíduos normospérmicos é capaz de predizer gravidez. Participaram do estudo 175 casais que foram submetidos à IIU. Os critérios de inclusão foram mulheres com idade inferior ou igual a 35 anos; com trompas sem alterações; endometriose Grau I e II; infertilidade sem causa aparente ou inexplicada; disfunção ovulatória não hiperandrogênica, e homens que apresentaram parâmetros seminais normais. Todas as pacientes foram submetidas à estimulação ovariana com Citrato de Clomifeno na dose de 50mg/dia, do 3° ao 7° dia do ciclo menstrual, associado à Gonadrotofina menopausal humana ou Hormônio Folículo Estimulante recombinante (FSH-r) no 3°, 5° e 7° dias do ciclo. O desenvolvimento folicular foi acompanhado pela ultrassonografia transvaginal e, quando um ou até três folículos medindo entre 18 e 20mm foram observados, foi administrado hCG ou hCG-r 250mg, e a IIU foi realizada 36-40h após hCG. Os parâmetros seminais foram analisados e classificados segundo os critérios da OMS de 2010. A capacitação espermática foi realizada utilizando a técnica de gradiente descontínuo de diferentes densidades. Uma alíquota de 20μl foi incubada por 24h a 37ºC em 5% de CO2. Após 24h de incubação, foi feita análise da motilidade total (progressão A+B) dos espermatozóides. Dos 175 casais, 52 obtiveram gravidez clínica e 123 não obtiveram êxito. A taxa de gravidez clínica foi de 29,7%. Houve também 4 abortos espontâneos (7,6%) e 1 gravidez múltipla (3,8%). Análises realizadas quanto a idade, duração e etiologia da infertilidade não mostraram diferenças estatísticas significantes entre os... / To assess what couples actually could benefit from IUI, we designed this study to evaluate the sperm motility through discontinuous gradient of different densities and incubation in CO2 in normospermic individuals is able to predict pregnancy. A total of 175 couples underwent IUI and inclusion criteria were women with age 35 years or younger, with normal tube; endometriosis grades I-II; unexplained infertility; ovulatory dysfunction not hyperandrogenic and men with normal seminal parameters. All patients underwent ovarian stimulation used 50mg/day clomiphene citrate on days 3-7 of menstrual cycle, associated to human menopausal gonadotropin (hMG) or follicle stimulating hormone recombinant (FSH-r). The follicular development was monitored by transvaginal ultrasound. When one or two follicles measuring 18 and 20mm were observed, hCG or hCG-r 250mg was administered and IUI was performed 36-40h after hCG. Seminal parameters were analyzed and classified according to 2010 WHO criteria. Spermatic capacitation was performed using discontinuous concentration gradient. A 20μl aliquote was incubated for 24 hours at 37ºC in 5% CO2. The sperm concentration was adjusted to a total of 10x106 motile sperm per milliliter of medium. After 24h incubation, it was performed total motility analysis (A+B). Of the 175 couples, 52 achieved clinical pregnancies and 123 did not have success. Pregnancy rate per cycle was 29.7%, there were 4 spontaneous abortions (7.6%) and multiple pregnancies (3.8%). Analysis of age, infertility duration and causes of infertility did not show statistic significance between pregnant and nonpregnant groups, as to results of seminal volume, total sperm concentration, total motile sperm and morphology, except sperm motility (p<0.00001). The comparison of motility A+B after processed and 24h after... (Complete abstract click electronic access below)

Uma das maiores dificuldades das terapias de reprodução assistida é a seleção de células germinativas de boa qualidade para posterior fertilização e implantação. Atualmente, a seleção de oócitos se dá basicamente por avaliação morfológica, que não reflete satisfatoriamente a competência oocitária. Assim, a busca por bioindicadores da qualidade oocitária é necessária. O cumulus oophorus forma um conjunto de células somáticas que circundam o oócito no folículo antral,mantendo uma relação íntima com a célula germinativa, com comunicação direta via junções tipo GAP. As células do cumulus oophorus são descartadas após técnicas de fertilização in vitro, o que as torna um material de fácil acesso, livre de conflitos éticos. Uma série de metodologias de análise das células do cumulus foram propostas para identificação de anormalidades no oócito. Porém, nenhuma delas é rotineiramente utilizada na clínica. Os processos celulares das células do cumulus refletem as condições do microambiente folicular, e podem, assim, trazer evidências das condições oocitárias. Nosso grupo analisou as células do cumulus primeiramente por meio de abordagens de bioinformática, que revelaram processos celulares relacionados ao desenvolvimento de embriões até o estágio de blastocisto. Com base nestes resultados, análises de parâmetros bioquímicos e expressão gênica das células do cumulus foram realizadas e permitiram a identificação de possíveis biomarcadores da qualidade do oócito que levam em consideração as características clínicas das pacientes. Estas análises indicaram que expressão do gene PTGS2 e a atividade da enzima Glutationa-S-Transferase como indicadores da formação de blastocistos em pacientes com diferentes variáveis clínicas (backgrounds) analisados. Se confirmados, estes parâmetros poderão ser utilizados como biomarcadores no ambiente clínico, elevando as taxas de sucesso em técnicas de reprodução assistida. / One of the great challenges in assisted reproduction techniques is the selection of appropriate germ cells for fertilization and implantation. Nowadays, oocyte selection occurs basically through morphological evaluation, which does not reflect satisfactorily the oocyte competence. Therefore, the search for bioindicators of oocyte quality is necessary. The cumulus oophorus forms a set of somatic cells that surround the oocyte in the antral follicle, participating in the processes of oocyte maturation and folliculogenesis. These cells maintain an intimate relationship with the germ cell, with direct communication via GAP junctions. Cumulus oophorus cells are discarded in in vitro fertilization techniques, which makes them an easy-access material that can be collected in a free-of-ethicalissues way. A series of cumulus cell analysis methodologies were proposed to identify abnormalities in the oocyte. However, none of them is routinely used in clinical environment. The cellular processes of cumulus cells reflect the conditions of the follicular microenvironment, and may thus bring evidences of oocyte conditions. Our group analyzed cumulus cells in search of predictors of oocyte quality primarily through bioinformatics approaches, which revealed cellular processes related to the development of embryos up to the blastocyst stage. Based on these results, analyzes of biochemical parameters and gene expression of cumulus cells were performed and allowed the identification of possible biomarkers of oocyte quality that takes into consideration patients clinical variables. These analysis indicated PTGS2 expression and Glutathione-S-Transferase activity as indicators of blastocyst formation in all patient profiles (backgrounds) analyzed. If confirmed, these parameters may be used as biomarkers in clinical environment, improving assisted reproduction success rates.

Introdução. A fertilização in vitro (FIV) é uma opção de tratamento para pacientes inférteis com endometriose (EDT), e a escolha dos embriões a serem transferidos é um passo fundamental para o sucesso do processo. A endometriose é capaz de interferir em todas as etapas do processo de FIV, a qual pode estar associada à foliculogênese anormal, a defeitos de implantação e à qualidade oocitária inferior, bem como a alterações na receptividade endometrial. Em estágios mais severos da doença, pode-se observar um importante substrato anatômico associado. O Escore de Graduação Embrionário (GES) é uma classificação baseada numa combinação da morfologia pronuclear, clivagem precoce e morfologia no terceiro dia após a fertilização que permite avaliar quais embriões terão maiores chances de implantação/gestação. Ainda não há, na literatura, relatos de comparação do GES com pacientes portadoras de endometriose. Objetivo. Determinar o escore de graduação embrionário médio entre as pacientes inférteis com endometriose submetidas à fertilização in vitro e comparar com pacientes inférteis sem endometriose. Métodos. Foram comparados, através de uma coorte prospectiva, 706 embriões (162 pacientes), sendo 472 embriões pertencentes às pacientes do grupo controle sem endometriose (n=109; infertilidade tubária ou por fator masculino) e 234 embriões de pacientes com endometriose (n=53). Todas as pacientes foram submetidas à fertilização in vitro, utilizando o protocolo de indução da ovulação com antagonista do GnRH. Todos os embriões foram transferidos no dia 3 após fertilização. O escore de graduação embrionário (GES) foi realizado através de avaliação de todos os embriões por 3 vezes, nos tempos: 16 – 18 horas, 25 – 27 horas e 64 – 67 horas, sempre pelo mesmo embriologista. Para pontuação do GES, avaliaram-se: citoplasma, morfologia pronuclear, fragmentação, alinhamento nucleolar, posição do corpo polar, número de blastômeros/morfologia e simetria. Consideramos escore médio a soma dos escores embrionários dividida pelo número de embriões obtidos; e o escore embrionário médio transferido como a soma dos GES dividido pelo número de embriões transferidos. Foi considerado estatisticamente significativo quando P < 0,05 utilizando-se os testes t Student e qui-quadrado. Resultados. Os grupos foram comparados quanto à idade, índice de massa corporal, perfil obstétrico (infertilidade primária, secundária, paridade, abortamentos) e perfil hormonal, não sendo encontrada diferença estatisticamente significativa. Apesar de o número de embriões transferidos ser maior em pacientes com endometriose quando comparadas ao grupo controle (2,38 ± 0,66 versus 2,15 ± 0,54, respectivamente; P=0,001), não se observou diferença no escore de graduação embrionário médio entre os grupos de estudo e controle (71 ± 19,8 versus 71,9 ± 23,5, respectivamente; P=0,881). Quanto às taxas de fertilização, houve semelhança entre os grupos, correspondendo a 61% nas pacientes com endometriose e 59% naquelas do grupo controle (P=0,511). Também não houve diferença estatisticamente significativa quando os grupos foram comparados quanto às taxas de implantação (21% versus 22%, respectivamente; P=0,989) e gestação (26,4% versus 28,4%, respectivamente; P=0,989). Para estes parâmetros de avaliação, os diferentes graus de severidade da endometriose não interferiram significativamente nos resultados. Conclusão. A presença de endometriose não impactou significativamente na qualidade embrionária. Da mesma forma, não foram observadas diferenças nos desfechos reprodutivos avaliados entre pacientes inférteis com e sem endometriose. / Objective. To determine embryo quality (Mean Graduated Embryo Score, MGES) in infertile patients with endometriosis submitted to in vitro fertilization (IVF-ET). Design. Prospective cohort. Setting. Private Human Reproduction Center. Patients. We compared 706 embryos (162 patients) divided in two groups: 472 embryos derived from patients without endometriosis (n=109, infertile patients with tubal or male infertility) and 234 embryos from patients in study group (n=53, infertile patients with endometriosis). Interventions. All patients were submitted to IVF using an estradiol-antagonist-recombinant FSH protocol for ovarian stimulation. MGES was performed evaluating all embryos three times: 16 – 18 hours, 25 – 27 hours and 64 – 67 hours, by the same embryologist. Embryo evaluation was performed according to the following parameters: fragmentation, nucleolar alignment, polar body apposition, blastomere number/morphology and symmetry. Main Outcome Measures. MGES scores, fertilization, implantation and pregnancy rates. Results. Groups were compared for age, body mass index (BMI), past ob/gyn characteristics (primary or secondary infertility, parity, abortions) and hormonal profile. Although the number of embryos transferred was greater in patients with endometriosis than in the control group (2.38 ± 0.66 versus 2.15 ± 0.54, respectively; P = 0.001), the MGES was similar in both groups (71 ± 19.8 versus 71.9 ± 23.5, respectively; P = 0.881). Likewise, fertilization rate was similar in groups, 61% in patients with endometriosis and 59% in control group (P=0,511). Moreover, no significant differences were found in implantation rates (21% versus 22%, respectively [P=0,989]) and in pregnancy rates (26,4% versus 28,4%, respectively [P=0,989]). The severity of endometriosis did not influence the results. Conclusions. Embryo quality measured by MGES was not influenced by endometriosis. Likewise, the reproductive outcomes evaluated were similar between infertile patients with and without endometriosis.

Com o aumento do número de casais com infertilidade e com o surgimento de novas constelações familiares, como no caso de relações homoafetivas, é crescente a demanda por técnicas de reprodução assistida. Diante disso, faz-se extremamente necessária a ampliação do conhecimento acerca da potencial associação entre os transtornos psiquiátricos e a infertilidade, bem como do possível aumento de prevalência de transtornos dessa natureza nesta população. Embora muitos estudos sugiram um aumento de sintomas depressivos e de ansiedade em pessoas que sofrem com a infertilidade, poucos avaliam o impacto emocional relacionado a esse problema de forma mais objetiva. Dessa forma, este estudo se propõe a descrever a população de mulheres que procuram tratamento com técnicas de reprodução assistida, averiguando a presença prévia de patologias psiquiátricas e o uso de psicotrópicos, bem como identificando a presença de transtornos ansiosos e depressivos, ao longo do tratamento, por meio de entrevista psiquiátrica estruturada – Mini International Neuropsychiatric Interview (MINI) – e aplicação de escalas validadas. Do total de 90 pacientes entrevistadas, 40% tiveram um ou mais diagnósticos psiquiátricos detectados. Transtornos do humor estavam presentes em 21% das pacientes (10% depressão maior, 7,7% distimia e 3,3% transtorno do humor bipolar). O diagnóstico mais comum foi agorafobia (13,6%). Transtornos de ansiedade também foram altamente prevalentes, chegando a atingir 30% das pacientes. Notou-se, ainda, que mulheres com transtornos psiquiátricos reportaram mais história psiquiátrica prévia e tiveram maiores taxas de uso de medicamentos psicoativos (P<0,005). No momento do estudo, 13,3% estavam usando medicamentos psiquiátricos, 44%, antidepressivos inibidores seletivos da recaptação de serotonina, e 31%, benzodiazepínicos. Tais dados indicam que mulheres com infertilidade em busca por reprodução assistida estão em alto risco de síndromes depressivas e ansiosas. Elas têm altas taxas de história psiquiátrica prévia, bem como índices altos de uso de medicamentos psicotrópicos, muito embora essas questões habitualmente não sejam abordadas em clínicas de tratamento para infertilidade. / As the number of couples suffering from infertility rises and new family constelations emerge, such as homoafective relationships, there is an on growing demand for assisted reproductive techniques. Greater knowledge regarding the potential role of psychiatric aspects in the development of infertility and determination of the prevalence of psychiatric disorders in this population are extremely needed. Many studies suggest a higher prevalence of depressive symptons and anxiety, but only a handful evaluate the emocional impact of infertility more objectively. This study aims to describe the population of infertile women that seek assisted reproduction technology treatment, looking for the presence of prior psychiatric disorders and for the use of psychotropic medication, and mainly evaluating depressive and anxiety disorder during treatment through structured psychiatric interview and application validaded scales. All consecutive infertile women visiting the assisted reproductive technique clinic seeking to iniciate treatment that agreed to participate were included. Patients were submitted to an structured interview, the Mini- International Neuropsychiatric Interview (M.I.N.I.). The fertility history was colleted from subjects´ medical reports after all subjects had participated in the study and demografic data were collected by researchers during the interview along with the psychiatric examination. Of a total of 90 patients, 40% had one or more a psychiatric disorder. Mood disorders were detected in 21% of the patients (10% major depression, 7,7% dystimia, 3,3% bipolar disorder). The most commom diagnosis was agoraphobia (13,6%). Anxiety disorders as a group was also highly prevalent, reaching 30% of the patients. Women with psychiatric disorders were more likely to have reported psychiatric history and to be on psychiatric medication (P<0.005). A total of 13,3% were on current use of psychiatric medication, 44% taking SSRIS and 31% taken benzodiazepines. Women suffering from infertility seeking ART treatment are at high risk for depression syndromes and anxiety disorders. They also had high prevalence of previous psychiatric history and high prevalence of psychiatric medication use, nonetheless these issues are frequently not addressed in fertility clinics.

Introdução: O gene p63 é o mais ancentral membro dos integrantes da família p53 e é descrito como o responsável pela manutenção da integridade gênica e regulação do ciclo celular em células germinativas imaturas. Porém, ainda não há relatos na literatura que avaliem sua expressão em células da granulosa luteinizadas. A endometriose é uma doença crônica que está associada à infertilidade. Vários mecanismos foram propostos para explicar esta associação, mas, até o momento, nenhum deles é considerado definitivo. Objetivos: O objetivo desse estudo é avaliar a expressão do gene e da proteína p63 em células da granulosa luteinizadas de pacientes inférteis submetidas à fertilização in vitro (IVF). Além disso, verificar se pacientes com endometriose apresentam função anormal da p63. Métodos: Realizamos um estudo transversal e prospectivo. Nós coletamos células da granulosa de 28 pacientes submetidas a IVF para avaliar a expressão de p63. Depois, para estudar o efeito na endometriose dividimos em dois grupos: (1) grupo estudo (n=9): pacientes com diagnóstico videolaparoscópico de endometriose e (2) grupo controle (n=19): pacientes inférteis por outros motivos, sem endometriose. As células coletadas foram preparadas e analisadas para expressão gênica (PCR em tempo real) e expressão proteica (imunofluorescência). Os resultados foram comparados entre os grupos. Resultados: Não observamos diferença significativa de expressão do gene p63 entre os grupos estudados. A mediana do 2-ΔΔCT no grupo controle foi 0,93 (IC 95%, 0,55- 2,83) e 0,88 no grupo em estudo (IC 95%, 0,24-2,84). O resultado também mostrou que o gene p63 não é expresso nos dois grupos. Quanto à expressão da proteína p63, a imunofluorescência não demonstrou expressão em nenhum dos dois grupos. Conclusão: O gene e a proteína p63 podem ser muito importantes na manutenção da integridade gênica de folículos imaturos de reserva, não dependentes de FSH. Porém, após o recrutamento e crescimento folicular, não se observa mais sua expressão, ou seja, ele não faz parte da maturação e desenvolvimento oocitário. / Introduction: The p63 gene is the most ancient member of the components of p53 family and is described as the responsible for maintaining of genic integrity and cell cycle regulation in immature germ cells. However, there are no reports in the literature evaluating its expression in granulosa cells luteinized. Endometriosis is a chronic disease that is associated with infertility. Several mechanisms have been proposed to explain this association, but so far, none of them is considered definitive. Objectives: The purpose of this study is to evaluate the expression of the p63 gene and protein in granulosa luteinized cells of infertile patients undergoing in vitro fertilization (IVF). Also, we checked whether patients with endometriosis have abnormal function of p63. Methods: We performed a prospective cross-sectional study. We collected granulosa cells of 28 patients undergoing IVF to evaluate p63 expression. Then, to study the effect on endometriosis, they were divided into two groups: (1) study group (n = 9): patients with laparoscopic diagnosis of endometriosis and (2) control group (n = 19): infertile patients for other reasons, without endometriosis . The collected cells were prepared and analyzed for gene expression (real time PCR) and protein expression (immunofluorescence). The results were compared between the groups. Results: There was no significant difference in expression of the p63 gene between the groups. The median of 2-ΔΔCT in the the control group was 0.93 (95% CI, 0.55 to 2.83) and 0.88 in the study group (95% CI, 0.24 to 2.84). The results also showed that the p63 gene is not expressed in granulosa cells in both groups. About to the p63 protein expression, immunofluorescence showed no expression in either group. Conclusion: The p63 gene and protein can be very important in maintaining the genic integrity of immature reserve follicles, not dependent of FSH. However, after the recruitment and follicular growth is not more observed its expression, suggesting that p63 is not part of control of oocyte maturation and development.

Introdução: A taxa da prevalência da infertilidade em casais com idade reprodutiva atinge 8-10%. A fim de tentar contornar esse problema, esses casais optam pela reprodução assistida. Em muitos dos casos, os resultados das técnicas de reprodução assistida (TRA) são bem sucedidos ao realizarem a fertilização in vitro (FIV), em outros não são satisfatórios ou ocorrem gestações múltiplas que aumenta o risco de morbidade a essas gestantes. Diante deste quadro, estudam-se formas de aperfeiçoar as TRA no que se refere à seleção do embrião. O hormônio anti-Mülleriano (AMH) já desempenha este papel ao refletir a reserva ovariana na rotina das clínicas de FIV. Os antígenos leucocitários humanos-G solúveis (sHLA-G) vêm sendo investigado no seu papel em refletir a qualidade embrionária. A existência da associação entre as concentrações de HLA-G mensuradas em fluido folicular e a qualidade embrionária avaliada pelo critério de pontuação Graduated Embryo Score (GES) poderia caracterizar o sHLA-G como um possível biomarcador de qualidade embrionária. Objetivos: Investigar a associação entre as concentrações do sHLA-G no fluido folicular (FF) e a pontuação dos embriões gerados avaliados pelo critério GES em ciclos de mulheres submetidas à fertilização in vitro (FIV). Métodos: Um estudo transversal foi realizado. Avaliaram-se setenta e três mulheres com idade ≤ 39 anos, submetidas à FIV pelas seguintes causas: fator tubário, fator masculino e/ou endometriose, com ambos os ovários e níveis hormonais de TSH, FSH e PRL dentro dos valores de referência. Não foram elegíveis ao estudo mulheres com síndrome de hiperestimulação ovariana no ciclo avaliado, com doença auto-imune, com síndrome dos ovários policísticos, com luteinização precoce e/ou endometrioma. Realizou-se a mensuração de sHLA-G por ELISA no FF de um pool de folículos puncionados das mulheres submetidas à indução de ovulação para a FIV. Os embriões obtidos após fertilização foram classificados segundo o critério GES. As outras variáveis necessárias foram transcritas dos prontuários das pacientes participantes no estudo. Resultados: A associação entre as concentrações de sHLA-G e o escore médio dos embriões gerados não foi observada. Observou-se uma sensibilidade aumentada do teste ELISA, quando comprada aos estudos da literatura, com detecção em mais de 98% das amostras analisadas. Foi encontrada uma associação significativa entre o AMH e a idade (r=-0,38; p=0,003), entre AMH e total de oócitos ( r=0,53; p<0,05) e idade e total de oócitos (r= -0,31, p=0,009). A mensuração de sHLA-G em mulheres com endometriose e sem endometriose (fator tubário e masculino) não mostrou diferença significativa (p=0,57). Conclusão: Não houve associação entre a qualidade embrionária e dosagens de sHLA-G. Diante destes resultados, ainda está controverso o uso de sHLA-G mensurado em FF como marcador prognóstico de qualidade de embrião embrionária avaliada pelo critério GES. Os resultados encontrados referentes ao AMH corroboram com a literatura. / Background: The prevalence of infertility rate in the couples in reproductive age reaches 8-10%. In order to solve this problem, these couples opt for assisted reproduction. In many cases, the results of assisted reproduction techniques (ART) are successful in performing the in vitro fertilization (IVF), while in others they are not satisfactory or occur multiple pregnancy that increase morbidity risk to these pregnant women. In this context, several studies attempt new forms for to improve the ART in the selection the embryo. The anti-Müllerian hormone (AMH) already plays this role to reflect the ovarian reserve in IVF clinics routine. Soluble human leukocyte antigen-G (sHLA-G) has been investigated its role to reflect the embryo quality. The existence of the association between the sHLA-G concentrations measured in follicular fluid and embryo quality based on Graduated Embryo Score (GES) criteria could characterize the sHLA-G as a possible biomarker of embryo quality. Objectives: Our study investigated the association between the sHLA-G concentrations in follicular fluid (FF) and the score of embryo evaluated by Graduated Embryo Score (GES) criteria in women cycles treated by in vitro fertilization (IVF). Methods: A cross-sectional study was conducted. Evaluated a total of seventy-three women aged ≤ 39 years, undergoing IVF because of tubal factor, male factor and / or endometriosis, with both ovaries and hormone levels of TSH, FSH and PRL within the range of reference. It was not eligible to study women with ovarian hyperstimulation syndrome in the evaluated cycle, autoimmune disease, polycystic ovary syndrome, with early luteinization and / or endometrioma. In this study was measured the sHLA-G by ELISA in FF from a pool of follicles punctured of women undergoing ovulation induction for IVF. The embryos after fertilization were classified by GES criteria. The other study variables were transcribed from medical records of patients. Results: The association between concentrations of sHLA-G and the average score of the generated embryos was not observed. Sensitivity of the ELISA was observed with detection by more than 98% of the samples. Significant association was found between AMH and age (r = -0.38; p = 0.003), between AMH and total oocytes (r = 0.53; p <0.05) and age and total oocytes (r = -0.31, p = 0.009). The results of sHLA-G in women with endometriosis and without endometriosis (tubal and male factor) showed no significant difference (p = 0.57). Conclusion: There was no association between embryo quality and the dosages of sHLA-G. Considering these results, the use of sHLA-G measured in FF as a prognostic marker of quality embryo based on GES criteria is still controversial. The results for the AMH corroborate with the literature.